RU2073863C1 - Способ проявления в тонкослойной хроматографии, устройство для осуществления способа и установка для его осуществления - Google Patents
Способ проявления в тонкослойной хроматографии, устройство для осуществления способа и установка для его осуществления Download PDFInfo
- Publication number
- RU2073863C1 RU2073863C1 SU904895004A SU4895004A RU2073863C1 RU 2073863 C1 RU2073863 C1 RU 2073863C1 SU 904895004 A SU904895004 A SU 904895004A SU 4895004 A SU4895004 A SU 4895004A RU 2073863 C1 RU2073863 C1 RU 2073863C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- developing
- reagent
- roller
- zone
- installation
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
- G01N30/94—Development
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Использование: при анализе методом тонкослойной хроматографии. Сущность изобретения: способ включает контактирование хроматографической пластины, подлежащей проявлению с материалом, пропитанным проявляющим реактивом. Контактирование осуществляют с давлением 10-100 г/см2, а в качестве упомянутого материала используют пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру. Реагент полностью пропитывают хроматографическую пластину в ходе контактирования. Избыток реагента реабсорбируется. В качестве пористого полимера может быть использован пенополиуретан с открытыми порами. Устройство для осуществления способа содержит основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реактивом. Основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10-100 г/см2 и инертного к проявляющим реагентам. Основание может иметь цилиндрическую или прямоугольную форму, или полуцилиндрическую поверхность. Установка для осуществления способа содержит корпус, имеющий зону нанесения проявляющего реагента, зону проявления, средство для перемещения хроматографической пластины из одной зоны корпуса в другую и проявляющее устройство в виде ролика. Проявляющее устройство содержит основание, на котором закреплен материал, пропитанный проявляющим реагентом. В качестве этого материала использован пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру. Основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10-100 г/см2 и инертного к проявляющим реагентам, в виде цилиндрического ролика, установленного с возможностью вращения вокруг оси, на цилиндрической поверхности которого закреплен пористый полимерный материал. Установка может дополнительно содержать средство для перемещения проявляющего устройства из зоны проявления в дополнительно введенную зону осушения. Зона проявления расположена ниже в вертикальной плоскости зоны нанесения проявляющего реагента. 3 с. и 12 з.п. ф-лы, 5 табл. , 12 ил.
Description
Изобретение относится к способу проявления в тонкослойной хроматографии (ТСХ).
Тонкослойная хроматография (ТСХ) это способ разделения посредством переноса вещества с разной скоростью между стационарной фазой и мобильной фазой.
Качественное применение ТСХ возможно во многих случаях в фармацевтической сфере, а также в области производства продуктов питания. При этом следует отметить, что анализ при помощи ТСХ дает погрешность от 5 до более чем 10 процентов в некоторых случаях.
ТСХ включает пять стадий: 1 нанесение веществ, которые следует распознать и/или определить, на соответствующую основу, 2 перенос вещества, 3 осушение, 4 проявление, 5 считывание.
Число этих операций было оптимизировано, чтобы сократить вероятность ошибок, неизбежно возникающих при различных манипуляциях, в частности специально были автоматизированы процессы нанесения вещества, переноса вещества, осушения и считывания, что позволило существенно сократить вероятность ошибок. В настоящее время проявление, если оно необходимо, осуществляется либо посредством аэрозольного распыления проявляющих реагентов, которые вызывают появление цветных или флуоресцирующих пятен, либо посредством полного погружения в раствор хроматографической пластинки.
Известен способ проявления в тонкослойной хроматографии, заключающийся в контактировании хроматографической пластины, подлежащей проявлению, с материалом, пропитанным проявляющим реактивом [1]
Известно устройство для осуществления способа проявления в тонкослойной хроматографии, содержащее основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реактивом.
Известно устройство для осуществления способа проявления в тонкослойной хроматографии, содержащее основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реактивом.
А также известна установка для осуществления способа в ТСХ, содержащая корпус, имеющий зону нанесения проявляющего реагента, зону проявления, средство для перемещения хроматографической пластины из одной зоны корпуса в другую и проявляющее устройство в виде ролика [2]
Однако известные способы проявления имеют целый ряд недостатков.
Однако известные способы проявления имеют целый ряд недостатков.
В частности, аэрозольное распыление дает различные результаты, которые зависят от умения оператора, дает неоднородную основу, может потребовать использования сжатого воздуха и, вследствие этого, специальной аппаратуры, может привести к появлению пятен, полос или подтеков, которые при считывании затруднят идентификацию.
Проявление посредством погружения в раствор может вызвать рассеяние и разжижение пятен, дают слишком окрашенную основу, требует большого количества проявителя.
Задачей изобретения является создание улучшенного способа проявления в тонкослойной хроматографии, который бы позволил улучшить качество процесса на этапе проявления.
Техническим результатом является увеличение воспроизводимости и точности при использовании способов ТСХ.
А также техническим результатом изобретения является создание устройства и установки для проявления, благодаря которому осуществлялось бы указанное повышение качества, а также создание установки, включающей в себя указанное устройство.
Указанный технический результат достигается согласно способу проявления в ТСХ за счет того, что контактирование осуществляют с давлением 10-100 г/см2, а в качестве упомянутого материала используют пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру, причем материал полностью пропитывает хроматографическую пластину в ходе контактирования, а затем реабсорбирует избыток реагента.
Преимущественно в качестве пористого полимера используют пенополиуретан с открытыми порами.
Кроме того, указанный технический результат для устройства согласно изобретению достигается за счет того, что в качестве материала использован пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру, а основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10-100 г/см2 и инертного к проявляющим реагентам.
Преимущественно устройство в его основании имеет цилиндрическую или прямоугольную, или полуцилиндрическую поверхность.
Согласно изобретению установка для осуществления способа проявления в ТСХ содержит основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реагентом, причем в качестве этого материала использован пористый материал, имеющий пенообразную или губкообразную структуру, а основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10-100 г/кв.см и инертного к проявляющим реагентам, в виде цилиндрического ролика, установленного с возможностью вращения вокруг неподвижной оси, на цилиндрической поверхности которого закреплен пористый материал.
Установка может содержать дополнительно средство для перемещения проявляющего устройства из зоны проявления в дополнительно введенную зону осушения, а также то, что зона проявления в указанной установке расположена ниже в вертикальной плоскости зоны нанесения проявляющего реагента.
При этом основание представляет собой цилиндрический ролик, имеющий осевой вал, концы которого расположены в направляющих каналах, проходящих по обеим сторонам зон.
Установка может быть выполнена в виде ящика с крышкой, шарнирно прикрепленной к ящику и обеспечивающей доступ к зонам нанесения реагента, проявления и осушения.
Установка может дополнительно содержать средства для направления хроматографической пластины, состоящее из второго ролика, вращающегося вокруг неподвижной оси, параллельной первому ролику и находящемуся на некотором расстоянии в вертикальном направлении от последнего.
Установка может дополнительно содержать зону нанесения проявляющего реагента, расположенную под первым роликом.
При этом цилиндрическая поверхность первого ролика разделена на множество смежных кольцевых секторов.
В соответствии с другой формой выполнения средства для направления хроматографической пластины содержат каналы, ориентированные в плоскости, касательной к первому ролику, перпендикулярно оси устройства.
При этом каналы выполнены в виде канавок или рельсов (реек), закрепленных на опорном кожухе первого ролика.
Изобретение более подробно поясняется в нижеследующем описании, которое ссылается на примеры для осуществления способа согласно изобретению и на примеры выполнения устройства для проявления и установки в соответствии с изобретением со ссылкой на чертежи.
На фиг. 1 показана калибровочная кривая для иллюстрации заявленного способа в сравнении с известным; на фиг. 2, 3 и 4 выполнения устройства согласно изобретению в аксонометрической проекции; на фиг. 5, 6, 7 - выполнение установки согласно изобретению: на фиг. 5 и 6 поперечный разрез установки, а на фиг. 7 ее аксонометрическое изображение; на фиг. 8 одно из выполнений установки согласно изобретению, которое включает цилиндрическое устройство для проявления и на котором направляющие средства для перемещения хроматографической пластинки, подлежащей проявлению, представлены вторым роликом (аксонометрическое изображение); на фиг. 9 и 10 поперечные разрезы установки, изображенной на фиг. 8; на фиг. 11 аксонометрическое изображение еще одного примера выполнения установки согласно изобретению, который включает цилиндрическое устройство для проявления и на котором средства для направления хроматографической пластинки, подлежащей проявлению, включают второй ролик, на фиг. 12 пример выполнения установки согласно изобретению, включающей устройство для проявления, на котором средства для направления хроматографической пластинки, подлежащей проявлению, состоят из рельсов (реек), на которые опираются края опоры указанной пластинки, подлежащей проявлению, и которые соединены со средствами для перемещения указанной пластинки по указанным рельсам (аксонометрическое изображение).
Чертежи и относящиеся к ним описания, а также примеры даны только в качестве иллюстрации объекта изобретения, не представляющие собой каких-либо ограничений для его реализации.
На фиг. 1 показана калибровочная кривая, иллюстрирующая заявленный способ в сравнении с известным.
Способ согласно изобретению может быть осуществлен при использовании одного из нижеследующих устройств, как например, устройство согласно фиг. 2 включает жесткую опору 2, снабженную ручкой (захватом) 4, на опоре закреплен полимерный материал 3, пропитываемый растворителем. В этом исполнении и без каких-либо ограничений указанное устройство имеет квадратную форму со сторонами длиной 200 мм, другими словами, имеет такие же размеры, как и хроматографические пластинки, толщина полимерного материала 4,5 мм, тогда как толщина жесткой опоры 20 мм.
На фиг. 2 представлен поперечный разрез указанного устройства в виде перевернутого "Т", оно предпочтительно используется для наложения проявляющего средства к хроматографической пластинке, как это было описано в нижеприведенных примерах.
После использования указанное устройство хранится в пригодных для этого герметических бачках.
На фиг. 3 показан другой пример выполнения устройства согласно изобретению, в котором жесткая опорная секция 2, соединенная с полимерной основой 3, пропитанной реагентом, имеет слегка выпуклую форму.
Устройство согласно изобретению, показанное на фиг. 4, включает жесткую опору 2 в форме ролика, оснащенную осью вращения 5, на ролике закреплен, как это было описано в вышеприведенных примерах, пористый полимерный материал 3, пропитанный проявителем.
Указанное устройство используется, в частности, в установке согласно изобретению, как показано на фиг. 5, 6 и 7, для наложения проявляющего средства при прокатывании устройства по хроматографической пластинке 7.
На фиг. 5 представлен пример выполнения установки согласно изобретению в виде ящика 6, который включает:
зону пропитки А для устройства 1, представленную в этой установке в виде бачка 16, в который налит проявитель, как это описано в примере 1;
зону проявления С, в которую помещена подлежащая проявлению хроматографическая пластинка 7, и которая, кроме того, включает опорную базу пластинки 7а и 7б, а также упорные штифты 8а и 8б, блокирующие указанную пластинку;
средства 9 для направления и перемещения устройства 1 между позицией Ia, в которой оно находится в зоне пропитки, и позицией Id, называемой позицией покоя (зона D), концы оси 5 указанного устройства вследствие этого закреплены в пазах (каналах) 10 средств 9, находящихся над хроматографической пластинкой 7;
в зону В для сушки устройства 1 (позиция Ib указанного устройства), расположенную между зоной пропитки А и зоной проявления С.
зону пропитки А для устройства 1, представленную в этой установке в виде бачка 16, в который налит проявитель, как это описано в примере 1;
зону проявления С, в которую помещена подлежащая проявлению хроматографическая пластинка 7, и которая, кроме того, включает опорную базу пластинки 7а и 7б, а также упорные штифты 8а и 8б, блокирующие указанную пластинку;
средства 9 для направления и перемещения устройства 1 между позицией Ia, в которой оно находится в зоне пропитки, и позицией Id, называемой позицией покоя (зона D), концы оси 5 указанного устройства вследствие этого закреплены в пазах (каналах) 10 средств 9, находящихся над хроматографической пластинкой 7;
в зону В для сушки устройства 1 (позиция Ib указанного устройства), расположенную между зоной пропитки А и зоной проявления С.
Такая установка позволяет прилагать постоянное и равномерное давление к указанной пластине 7 и таким образом позволяет добиваться значительного улучшения качества проявления, как показано в вышеприведенных примерах 1 и 2.
Устройство 1 согласно изобретению сначала помещается в зону пропитки А, в положении Ia, и вследствие этого пропитывается проявителем, затем указанное устройство перемещается в позицию Ib в зоне сушки В, в которой удаляется реагент, могущий оказаться излишним, до того как устройство 1 перемещается в зону проявления С, в которой указанный реагент стекает с устройства и равномерно пропитывает пластинку, подлежащую проявлению.
На фиг. 6 представлена указанная установка с отделяемой секцией 11а крышки 11, поворачивающейся на шкворне 12, которая когда крышка 11 открыта, позволяет иметь доступ в зону пропитки и проявления. Указанная крышка имеет два боковых канта, исполненных ступенеобразно, и указанные канты крышки ограничивают каналы 10 средство 9 с боковыми стенками 13 ящика 2, выполненными таким образом, чтобы соответствовать указанным кантам.
На фиг. 7 представлено аксонометрическое изображение установки, изображенной на фиг. 5 и 6 в поперечном разрезе.
Та секция установки, которая представлена на фиг. 8, включает:
устройство для проявления в форме ролика R, который включает жесткую опору 2 цилиндрической формы, вращающуюся вокруг закрепленной оси вращения 5, на поверхности которой уложена полоска 3 из пористого полимерного материала, пропитанного проявителем, как описано в вышеприведенном примере,
ролик R1 включает средства для закрепления пористого полимерного материала, образуемые, например, зажимами 14, расположенными вдоль образующей поверхности ролика, и монтированные в ролике таким образом, что они не выступают над цилиндрической поверхностью ролика, причем эти зажимы позволяют закреплять указанный пористый материал с одного конца, тогда как другой его конец остается свободным. Ролик R1 вращается вокруг закрепленной оси 15 по часовой стрелке на фиг. 1, будучи приводимым во вращение посредством любого подходящего для этого средства, в частности посредством такого механического средства, как коленчатый рычаг, или посредством мотора,
бачок 16 для реагента, который может быть съемным и который расположен под роликом R1,
ролик R2 вращающийся вокруг закрепленной оси 17, параллельной оси ролика R1 и вертикально отделенный от нее, этот ролик R2 приводится во вращение подходящими для этого средствами, и в частности - неограниченным образом шестеренками, во время вращения ролика R1 в направлении, противоположном ему, и с такой же скоростью,
подлежащую проявлению хроматографическую пластинку, как показано на фиг. 2 и 3, которая находится между роликами R1 и R2, оба ролика захватывают пластинку 7 и перемещают ее, приводя в соприкосновение с пористым материалом, под определенным давлением, зависящим от толщины Р пластинки 7, толщины пористого материала и расстояния, разделяющего оба ролика.
устройство для проявления в форме ролика R, который включает жесткую опору 2 цилиндрической формы, вращающуюся вокруг закрепленной оси вращения 5, на поверхности которой уложена полоска 3 из пористого полимерного материала, пропитанного проявителем, как описано в вышеприведенном примере,
ролик R1 включает средства для закрепления пористого полимерного материала, образуемые, например, зажимами 14, расположенными вдоль образующей поверхности ролика, и монтированные в ролике таким образом, что они не выступают над цилиндрической поверхностью ролика, причем эти зажимы позволяют закреплять указанный пористый материал с одного конца, тогда как другой его конец остается свободным. Ролик R1 вращается вокруг закрепленной оси 15 по часовой стрелке на фиг. 1, будучи приводимым во вращение посредством любого подходящего для этого средства, в частности посредством такого механического средства, как коленчатый рычаг, или посредством мотора,
бачок 16 для реагента, который может быть съемным и который расположен под роликом R1,
ролик R2 вращающийся вокруг закрепленной оси 17, параллельной оси ролика R1 и вертикально отделенный от нее, этот ролик R2 приводится во вращение подходящими для этого средствами, и в частности - неограниченным образом шестеренками, во время вращения ролика R1 в направлении, противоположном ему, и с такой же скоростью,
подлежащую проявлению хроматографическую пластинку, как показано на фиг. 2 и 3, которая находится между роликами R1 и R2, оба ролика захватывают пластинку 7 и перемещают ее, приводя в соприкосновение с пористым материалом, под определенным давлением, зависящим от толщины Р пластинки 7, толщины пористого материала и расстояния, разделяющего оба ролика.
На фиг. 9 и 10 показан поперечный разрез установки, изображенной на фиг. 8. Бачок для реагента 16, выполненный соответствующим реагентом, установлен под роликом R1, полоска 3 из пористого полимера закреплена в зажимах ролика R1. При первом вращении ролика R1 пористый материал принимает форму ролика. Оказавшись в бачке 16, он постоянно при каждом обороте пропитывается реагентом. Один оборот может быть совершен для предварительной пропитки пористого материала, чтобы насытить его реагентом до того, как он будет наложен на пластинку 7.
Подлежащая проявлению пластинка 7 помещается таким образом, чтобы ее закрепленная на основе часть находилась в соприкосновении с указанным пористым полимером. Процесс проявления осуществляется постепенно во время вращения ролика, и излишний реагент, находящийся выше зоны проявления, стекает в бачок 16. Остающийся после проявления излишний реагент со своей стороны реабсорбируется пористым полимерным материалом 3.
На фиг. 10 показаны с большей наглядностью свободный конец полосы 3 пористого материала и корпус 18, в котором содержится ролик R1 и который предохраняет его.
На фиг. 11 изображен ролик R1, включающий в предлагаемом примере 5 полосок (от n1 до n5) пористого полимерного материала 3, отделенных друг от друга канавками r1-r4, причем эти полоски пропитываются раствором проявителя в отделениях, или секторах бачка 16 для реагента, разделенного на эти отделения. Таким образом, эта установка позволяет проявлять различные хроматограммы на одной и той же хроматографический пластинке, используя пять различных проявителей, как это делается в представленном выполнении (фиг. 11).
На фиг. 12 показано такое выполнение установки, в котором пластинка 7, помещенная на основу, направляемую по рельсам (рейкам) или каналам 9, пропускается под роликом R1, вращающимся вокруг закрепленной оси 15. Расстояние между пористым материалом, покрывающим указанный ролик, и пластинкой 7 определяется таким образом, чтобы было обеспечено достаточное давление для процедуры проявления. Движение перемещающейся опоры, несущей на себе пластинку 7, может вызываться посредством подтягивания или толкания. С этой целью могут быть использованы любые подходящие средства, вызывающие перемещение опоры, или ленточный транспортер, образующий эту опору. Соприкосновение между пластинкой 7 и роликом R1 позволяет ролику вращаться и пористому материалу 72 сжиматься, тогда как ролик R1 остается неподвижным при перемещении пластинки Р благодаря закрытию колпака С.
Приведенные ниже примеры также иллюстрируют выполнение данного изобретения, не ограничивая его объем.
Пример 1. Процесс тонкослойной хроматографии для определения триптофана осуществляется следующим образом: используют пластинки, выполненные из нефлуоресцирующей целлюлозы 20х20 см с мобильной фазой, содержащей 1-бутанол: 80 частей уксусная кислота 20 частей вода 100 частей.
Анализируемые раствор триптофана выбирается из расчета 2 миллиграмма на миллилитр растворителя, из которых выбираются 10 проб по 2 микролитра, который с использованием аппаратуры LINOMAT IV (CAMAG) наносят на пластинки.
В качестве проявителя используют нингидрин/медь, представляющую собой 2 раствора:
раствор А: нингидрин 1,6 г, этанол 800 мл, уксусная кислота 160 мл, 2,4,6-кооидайн 32 мол;
раствор В: 2%-ный раствор азотнокислой двухвалентной меди в этаноле.
раствор А: нингидрин 1,6 г, этанол 800 мл, уксусная кислота 160 мл, 2,4,6-кооидайн 32 мол;
раствор В: 2%-ный раствор азотнокислой двухвалентной меди в этаноле.
Для получения проявителя смешиваются 100 миллилитров раствора А и 6 миллилитров раствора В.
Устройство для проявления согласно изобретению пропитывается вышеуказанным проявителем.
Устройство пропитывается под давлением, накладывается на хроматографическую пластинку во время проявления.
Фотоденситометрическое считывание осуществляют с использованием установки CD60 (DESAQA). Пластинки считываются до и после проявления с использованием устройства в соответствии с изобретением.
При считывании непроявленной хроматограммы на длине волны 254 нанометра (прямой ультрафиолет) получено следующее (см. табл.1)
Повторяемость определяется посредством вариативного коэффициента (CV), чем меньше будет вариативный коэффициент, тем лучше будет повторяемость.
Повторяемость определяется посредством вариативного коэффициента (CV), чем меньше будет вариативный коэффициент, тем лучше будет повторяемость.
При считывании проявленной хроматограммы в нингидрине с использованием устройства для проявления под давлением на длине волны 51 О нанометров получено следующее (см. табл. 2)
Заявленное устройство для проявления позволяет получить более высокую точность по сравнению с упомянутым методом (ультрафиолетовый метод).
Заявленное устройство для проявления позволяет получить более высокую точность по сравнению с упомянутым методом (ультрафиолетовый метод).
Пример 2. Результаты, полученные в примере 1, сравниваются с результатами, которые были получены при одинаковых условиях, но когда проявление осуществляется посредством аэрозольного распыления.
При считывании непроявленной хроматограммы на длине волны 254 нанометра (прямой ультрафиолет) получено следующее (см. табл. 3).
При считывании проявленной хроматограммы в нингидрине посредством обычного аэрозольного распыления на длине волны 510 нанометров получено следующее (см. табл.4).
Если используется обычный метод проявления посредством аэрозольного распыления, результаты получаются хуже, чем при прямом ультрафиолетовом методе.
Пример 3. Исследование соотношения между обнаруженным сигналом и нанесенным количеством вещества.
10 проб объемом каждая по 4 микролитра растворов триптофана, приготовленных из расчета 0,1 миллиграмма на миллилитр, 0,2 миллиграмма на миллилитр, 0,5 миллиграмма на миллилитр, 1 миллиграмм на миллилитр и 2 миллиграмма на миллилитр были нанесены на тонкослойную хроматографическую пластинку из целлюлозы 20х20 (нефлуоресцентной) (г. Дармштадт, ФРГ).
Считывание было произведено до проявления на длине волны 275 нанометров и после проявления в нингидрине на 288 нанометрах. Проявление осуществлялось, с одной стороны, посредством аэрозольного распыления, а с другой с применением ДПД ("деривация под давлением" согласно изобретению).
Как показано на калибровочных кривых (см. фиг. 1), имеется сходство между прямым ультрафиолетовым считыванием (кривая 2) и деривацией под давлением (кривая 1) в отличие от проявления посредством аэрозольного распыления (кривая 3), которое становится линейным.
Уравнения указанных кривых представлены следующим образом: прямой ультрафиолет на 275 нанометрах (кривая 2):
Y=0,041x100,0118X
r=0,9958
ДПД на 288 нанометрах (кривая 1):
Y=0,047x100,0021X
r=0,9972
Аэрозольное распыление на 288 нанометрах (кривая 3):
Y=0,0095X-8,5226
r=0,9946.
Y=0,041x100,0118X
r=0,9958
ДПД на 288 нанометрах (кривая 1):
Y=0,047x100,0021X
r=0,9972
Аэрозольное распыление на 288 нанометрах (кривая 3):
Y=0,0095X-8,5226
r=0,9946.
Пример 4. Обнаружение и определение количества витаминов, растворяющихся в воде.
Были подготовлены тестовые растворы, содержащие 9 растворяющихся в воде витаминов, причем в каждом следующем тестовом растворе концентрация витаминов возрастала.
Первый раствор был подготовлен со следующим содержанием ингредиентов:
витамин С 2,4 г
витамин В2 32,6 мг
витамин В12 0,4 мг
фолиевая кислота 4,88 мг
пантотенат кальция 121,2 мг
витамин В1 24,6 мг
витамин В6 24,2 мг
биотин 2,42 мг
ниацинамид 160,6 мг
вода до 100мл.
витамин С 2,4 г
витамин В2 32,6 мг
витамин В12 0,4 мг
фолиевая кислота 4,88 мг
пантотенат кальция 121,2 мг
витамин В1 24,6 мг
витамин В6 24,2 мг
биотин 2,42 мг
ниацинамид 160,6 мг
вода до 100мл.
В других растворах содержание вещества разбавлено на половину и на четверть по сравнению с вышеприведенным раствором.
10 проб по 10 микролитров этих растворов были нанесены на силикатные пластинки НРТ1 С-60-Т 254-20х20 (Merek г. Дармштадт ФРГ) на 2 см от края пластинки.
Перенос осуществляется посредством OPL в соответствии со следующими условиями:
скорость течения: 0,2 миллилитра в минуту
проявление: 16 см
давление водяного насоса: 25 бар
давление элюирующего насоса: 4 бара.
скорость течения: 0,2 миллилитра в минуту
проявление: 16 см
давление водяного насоса: 25 бар
давление элюирующего насоса: 4 бара.
До начала процесса используется гексан.
Пластинка высушивается на воздухе, считывание осуществляется при прямом ультрафиолете на 254 нанометрах для витаминов В1, В2, С и ниасинамида, затем на 290 нанометрах для фолиевой кислоты и витамина В6.
Витамин В12 и биотин регистрируются на 530 нанометрах после ДПД с использованием 0,1-процентного (процентное соотношение веса и объема) раствора 4-диметиламиносиннамальдегида и 1-процентного (процентное соотношение объемов) раствора серной кислоты в этаноле.
Пантотенат кальция считывается на 375 нанометрах после ДПД с использованием нингидрида.
Определение количества осуществляется посредством отражения денситометрического считывания с использованием полученных максимальных положительных значений поверхностей, как это показано в таблице 5.
Пример 5. Исследование с целью определения давления, которое следует приложить во время осуществления способа согласно изобретению.
Тонкослойные хроматографические пластинки из целлюлозы размером 10х10 (нефлуоресцентная) (Merck г. Дармштадт ФРГ) проявлялись реагентом Драгедорфа с использованием деривации под давлением согласно изобретению на площади 5х10см. Полимер толщиной 4,5 мм подвергался сжатию в течение 5 секунд с использованием грузов весом 500 г, 1000 г, 2000 г и 5000 г, а также осуществлялось проявление без давления, которое соответствует простому прижатию полимера к пластинке.
Производилось денситометрическое считывание полученного фонового шума, длина использованной волны была равна 250 нанометрам, максимальная абсорбция реагента Драгендорфа. Нуль был получен с непроявляющейся части пластинки.
Были считаны показатели абсорбции:
наложение без давления
0 г на 50 см2 1810±18,7%
наложение с давлением
500 г на 50 см2 2175±3,4%
1000 г на 50 см2 1625±32,3%
2000 г на 50 см2 1275±21,5%
5000 г на 50 см2 2075±3,6%
Сопутствующим наложению давления на полимер является всасывание реагента после устранения давления. Это очень важно в процессе наложения грузов весом 1000 г и 2000 г на 50 см2 и это вызывает возврат проявителя в полимер. Количество возвращающегося проявителя незначительно при давлении 5000 г на 50 см2 или более и равно нулю при давлении 500 г на 50 см2.
наложение без давления
0 г на 50 см2 1810±18,7%
наложение с давлением
500 г на 50 см2 2175±3,4%
1000 г на 50 см2 1625±32,3%
2000 г на 50 см2 1275±21,5%
5000 г на 50 см2 2075±3,6%
Сопутствующим наложению давления на полимер является всасывание реагента после устранения давления. Это очень важно в процессе наложения грузов весом 1000 г и 2000 г на 50 см2 и это вызывает возврат проявителя в полимер. Количество возвращающегося проявителя незначительно при давлении 5000 г на 50 см2 или более и равно нулю при давлении 500 г на 50 см2.
Отсутствие давления приводит к простой диффузии реагента на пластине, которая проявляется весьма неоднородно.
Оптимальные результаты проявления достигаются при давлении 5000 г на 50 см2, то есть при грузе весом 40 кг, наложенном на стандартную пластинку размером 20х20 см, и при толщине полимера равной 4,5 мм.
Claims (15)
1. Способ проявления в тонкослойной хроматографии (ТСХ), заключающийся в контактировании хроматографической пластины, подлежащей проявлению, с материалом, пропитанным проявляющим реагентом, отличающийся тем, что контактирование осуществляют с давлением 10 100 г/см2, а в качестве упомянутого материала используют пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру, причем реагент полностью пропитывает хроматографическую пластину в ходе контактирования, а затем реабсорбирующий избыток.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве пористого полимера используют пенополиуретаны с открытыми порами.
3. Устройство для проявления в ТСХ, содержащее основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реактивом, отличающееся тем, что в качестве материала использован пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразую структуру, а основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10 100 г/см2 и инертного к проявляющим реагентам.
4. Устройство по п.3, отличающееся тем, что в качестве пористого полимера использован пенополиуретан с открытыми порами.
5. Устройство по п.3, отличающееся тем, что основание имеет цилиндрическую или прямоугольную форму или полуцилиндрическую поверхность.
6. Установка для проявления в ТСХ, содержащая корпус, имеющий зону нанесения проявляющего реагента, зону проявления, средство для перемещения хроматографической пластины из одной зоны корпуса в другую и проявляющее устройство в виде ролика, отличающаяся тем, что проявляющее устройство содержит основание, на котором закреплен материал, пропитываемый проявляющим реагентом, причем в качестве этого материала использован пористый полимер, имеющий пенообразную или губкообразную структуру, а основание выполнено из жесткого материала, устойчивого к давлению 10 100 г/см2 и инертного к проявляющим реагентам, в виде цилиндрического ролика, установленного с возможностью вращения вокруг неподвижной оси, на цилиндрической поверхности которого закреплен пористый полимерный материал.
7. Установка по п.6, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит средство для перемещения проявляющего устройства из зоны проявления в дополнительно введенную зону осушения.
8. Установка по пп.6 и 7, отличающаяся тем, что зона проявления расположена ниже в вертикальной плоскости зоны нанесения проявляющего реагента.
9. Установка по пп. 6 8, отличающаяся тем, что основание представляет собой цилиндрический ролик, имеющий осевой вал, концы которого расположены в направляющих каналах, проходящих по обеим сторонам зон нанесения проявляющего реагента, проявления и осушения.
10. Установка по пп. 6 9, отличающаяся тем, что она выполнена в форме ящика с крышкой, шарнирно прикрепленной к ящику и обеспечивающей доступ к зонам нанесения реагента, проявления и осушения.
11. Установка по п. 6, отличающаяся тем, что средство для направления хроматографической пластины состоит из второго ролика, вращающегося вокруг неподвижной оси, параллельно первому ролику и находящегося на некотором расстоянии в вертикальном направлении от последнего.
12. Установка по п.11, отличающаяся тем, что зона нанесения проявляющего реагента расположена под первым роликом.
13. Установка по п.1 или 12, отличающаяся тем, цилиндрическая поверхность первого ролика разделена на множество смежных кольцевых секторов.
14. Установка по п. 6, отличающаяся тем, что средство для направления хроматографической пластины содержит каналы, ориентированные в плоскости, касательной к первому ролику, перпендикулярно оси устройства.
15. Установка по п.14, отличающаяся тем, что каналы выполнены в виде канавок или рельсов, закрепленных на опорном кожухе первого ролика.
Приоритет по пунктам:
13.07.89 по пп.1 10;
14.02.90 по пп.11 15.
13.07.89 по пп.1 10;
14.02.90 по пп.11 15.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR8909527 | 1989-07-13 | ||
FR8909527A FR2649796B1 (fr) | 1989-07-13 | 1989-07-13 | Perfectionnement apporte a l'etape de revelation de la chromatographie en couche mince, dispositif de revelation et installation comportant ledit dispositif |
FR9001735 | 1990-02-14 | ||
FR9001735A FR2658299B2 (fr) | 1989-07-13 | 1990-02-14 | Installation comportant un dispositif de revelation pour chromatographie en couche mince. |
PCT/FR1990/000520 WO1991001000A1 (fr) | 1989-07-13 | 1990-07-11 | Dispositif et installation de chromatographie en couche mince avec perfectionnement de la revelation |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2073863C1 true RU2073863C1 (ru) | 1997-02-20 |
Family
ID=26227477
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904895004A RU2073863C1 (ru) | 1989-07-13 | 1990-07-11 | Способ проявления в тонкослойной хроматографии, устройство для осуществления способа и установка для его осуществления |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0435990B1 (ru) |
JP (1) | JP2921980B2 (ru) |
CA (1) | CA2035025C (ru) |
DE (1) | DE69008328T2 (ru) |
ES (1) | ES2055916T3 (ru) |
FR (1) | FR2658299B2 (ru) |
RU (1) | RU2073863C1 (ru) |
WO (1) | WO1991001000A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ305107B6 (cs) * | 2010-11-24 | 2015-05-06 | Technická univerzita v Liberci | Chromatografický substrát pro tenkovrstvou chromatografii nebo pro kolonovou chromatografii |
CN103932679B (zh) * | 2014-04-09 | 2017-01-25 | 天津大学 | 一种针对薄层层析成像***的图像校正方法 |
CN104792919B (zh) * | 2015-05-19 | 2016-06-15 | 齐齐哈尔医学院 | 恒流薄层色谱仪 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3667917A (en) * | 1970-11-27 | 1972-06-06 | Baker Chem Co J T | Chromatography apparatus and method |
-
1990
- 1990-02-14 FR FR9001735A patent/FR2658299B2/fr not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-11 DE DE69008328T patent/DE69008328T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-11 WO PCT/FR1990/000520 patent/WO1991001000A1/fr active IP Right Grant
- 1990-07-11 CA CA002035025A patent/CA2035025C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-11 ES ES90910753T patent/ES2055916T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-07-11 JP JP2510312A patent/JP2921980B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-07-11 RU SU904895004A patent/RU2073863C1/ru active
- 1990-07-11 EP EP90910753A patent/EP0435990B1/fr not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. N. De Kruijf. Journal of Chromatograpgy, v. 410, 1987, рр. 395-411. 2. Авторское свидетельство СССР N 240317, кл. G 01N 30/94, 1969. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2035025C (en) | 2002-06-25 |
DE69008328D1 (de) | 1994-05-26 |
EP0435990B1 (fr) | 1994-04-20 |
FR2658299B2 (fr) | 1993-05-21 |
FR2658299A2 (fr) | 1991-08-16 |
CA2035025A1 (en) | 1991-01-14 |
DE69008328T2 (de) | 1994-10-27 |
JPH04501917A (ja) | 1992-04-02 |
EP0435990A1 (fr) | 1991-07-10 |
JP2921980B2 (ja) | 1999-07-19 |
WO1991001000A1 (fr) | 1991-01-24 |
ES2055916T3 (es) | 1994-09-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
BR8807644A (pt) | Processo dispositivo e "kit", para a determinacao das concentracoes ambientes de uma pluralidade de analitos em uma amostra de liquido | |
Sherma et al. | Paper chromatography | |
CA1118327A (en) | Whole blood analyses in porous media | |
FI74151C (fi) | Testanordning, i vilken reagensomraodena ej reagerar i kors med varandra och foerfarande foer framstaellning av denna. | |
Steinberg et al. | Ultracentrifugation studies with absorption optics. V. Analysis of interacting systems involving macromolecules and small molecules | |
RU2073863C1 (ru) | Способ проявления в тонкослойной хроматографии, устройство для осуществления способа и установка для его осуществления | |
CA2285219A1 (en) | Detection of low level analytes in samples | |
CN109232813B (zh) | 一种hrp印迹水凝胶的制备方法 | |
BE879888A (fr) | Composition a base d'un polyelectrolyte, dispositif analytique et methode de determination de la force ionique ou de la densite d'un echantillon liquide | |
CN208076459U (zh) | 用于药品检验的薄层层析实验装置 | |
JPS6291859A (ja) | 平面系において分離分析調査を行うための方法及び装置 | |
Katmeh et al. | Enzyme immunoaffinity chromatography—a rapid semi-quantitative immunoassay technique for screening the presence of isoproturon in water samples | |
Seiler et al. | Chromatography of Dns derivatives on pre-coated high-performance thin-layer chromatographic plates | |
CA2285282A1 (en) | Detection of low level hydrophobic analytes in environmental samples | |
CA2231305A1 (en) | Improved analyzer throughput featuring through-the-tip analysis | |
FI73529C (fi) | Foerfarande foer utfoerande av vaetskeanalys och analyselement som anvaends i foerfarandet. | |
JPH045566A (ja) | 薄層クロマトプレートの水平展開方法及び転写方法 | |
Shibukawa | Surface-bubble-modulated liquid chromatography: an experimental strategy for identification of molecular processes of solute retention in reversed-phase separation systems | |
CN211453650U (zh) | 一种层析用卡壳及层析检测卡 | |
Mourão et al. | Application of polyurethane-based devices as sorption-desorption phases for microextraction analysis–The all-in-one microextraction concept | |
Kuroiwa et al. | DETERMINATION OF HUMULONES AND LUPULONES IN HOPS BY THE CHROMATOSTRIP METHOD | |
RU2105304C1 (ru) | Способ и устройство для хроматографии | |
Kovács-Hadady | A systematic study of the desorption of different ion-pairing reagents on reversed phase thin-layers | |
GB1570760A (en) | Closed layer chromatography process | |
US4430217A (en) | Anti-radial chromatography device |