RU2073719C1 - Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с - Google Patents
Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с Download PDFInfo
- Publication number
- RU2073719C1 RU2073719C1 RU93029441A RU93029441A RU2073719C1 RU 2073719 C1 RU2073719 C1 RU 2073719C1 RU 93029441 A RU93029441 A RU 93029441A RU 93029441 A RU93029441 A RU 93029441A RU 2073719 C1 RU2073719 C1 RU 2073719C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hepatitis
- virus
- strain
- gene
- escherichia coli
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: иммунобиотехнологическая диагностика вируса гепатита С человека. Сущность: получение фрагмента ДНК НС 250, определяющего синтез полипептида, который обладает свойствами белка NS3 вируса гепатита С человека. Полипептид получают с помощью штамма бактерий Escherichia coli, трансформированного плазмидой, содержащей фрагмент ДНК НС 250. Данный полипептид способен связывать антитела к продукту гена белка NS3 вируса гепатита С. 3 с.п.ф-лы.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии и иммунологии и может быть использовано для проведения серодиагностики гепатита С.
Гепатит С возникает в результате заражения вирусом гепатита С и отличается от других форм вирусассоциированных заболеваний печени, включая уже известные гепатит А, гепатит В, гепатит Д, а также гепатитов, вызванных вирусом Эпштейн-Барра или цитомегаловирусом. Заражение вирусом гепатита с, как правило, осуществляется при переливании крови. Вирус гепатита С при попадании в организм поражает клетки печени. Клинически гепатит С протекает более легко, чем гепатит В. Однако показано, что почти у пятидесяти процентов пациентов болезнь принимает хроническое течение с периодическим обострением процесса и у двадцати процентов хронических больных гепатитом С заболевание приводит к циррозу печени. Кроме того, имеются данные о том, что заражение вирусом гепатита С имеет прямое отношение к возникновению первичного рака печени. Поэтому для проведения противоэпидемических и профилактических мероприятий крайне актуальна разработка диагностических препаратов, позволяющих выявлять людей, инфицированных вирусом гепатита С.
Многочисленные исследования вируса гепатита С позволили определить его структуру, организацию генома, выяснить механизм экспрессии и функции отдельных вирусных белков. Вирус гепатита С имеет позитивный РНК-геном, состоящий примерно из 9400 нуклеотидов, и содержит единственную открытую рамку считывания, которая перекрывает большую часть вирусного генома и может кодировать большой вирусспецифический полипептид, состоящий из 3010 3011 аминокислотных остатков, являющийся предшественником индивидуальных структурных и неструктурных вирусных белков. К структурным белкам вируса гепатита С относятся Cor (ядерный)-антиген (молекулярная масса 19 кДа) и два гликопротеина с молекулярными массами 32 кДа и 72 кДа. Все они процессируются с N-концевого участка вирусспецифического полипротеина. Cor-антиген обладает способностью связывать РНК и образует нуклеокапсид вируса гепатита С. Белок размером 32 кДа предположительно является матриксным или поверхностным белком вириона вируса гепатита С, а белок размером 72 кДа является либо поверхностным белком вириона, либо первым неструктурным белком вируса гепатита С (NS1). Белок NS2 вируса гепатита С размером 23 кДа ассоциирован с мембранами зараженных вирусом клеток, однако его функциональная роль неизвестна. Белок NS3 размером 60 кДа обладает нуклеотид трифосфатсвязывающей геликазной активностью и участвует в репликации генома вируса гепатита С. Кроме того, он обладает ферментативной активностью сериновой протеазы и участвует в процессировании неструктурных белков. Продукты экспрессии генов NS4 и NS5 еще не охарактеризованы, однако они могут кодировать белки размером 52 и 116 кДа соответственно. Как и белок NS2, белок NS4 гидрофобен и, вероятно, является мембраносвязывающим белком с неизвестной функцией. Продукт экспрессии гена NS5, по-видимому, многофункционален, обладает РНК-зависимой РНК-полимеразной активностью и участвует в репликации вирусного генома.
Большинство методов диагностики инфицированности вирусом гепатита С основано на определении антител к белкам вируса гепатита С в сыворотках крови (серодиагностика). Для этих целей используются различные подходы, в которых применяются принципы иммуноферментного анализа (ИФА), реакции агглютинации (латекса, эритроцитов), иммунофлуоресценции, иммуноблотинга и радиоиммунопреципитации. Одним из наиболее перспективных путей совершенствования всех этих диагностических тест-систем является использование в качестве антителосвязывающего субстрата рекомбинантных белков вируса гепатита С, синтезированных в различных экспрессирующих системах. Использование таких рекомбинантных белков, сохраняющих антигенные детерминанты вируса гепатита С, вместо вирусных антигенов не только увеличивает специфичность и чувствительность тест-систем, но и делает их безопасными в работе. Существует значительное число разработок, направленных на создание рекомбинантных белков-продуктов генов вируса гепатита С, и в частности, белка NS3 вируса гепатита С (патенты ЕР NO 445423 A2, G 01 N 33/576, 1990; EP NO 419182 A1, C 12 N 15/51, 1990; EP NO 388232 A1, C 12 N 15/51, 1990; EP NO 406511 A1, C 12 N 15/51, 1990; EP NO 416 725 A2, C 12 N 15/51, 1990 и др.).
В настоящее время ведется поиск полипептидов, наиболее перспективных для диагностики, лечения и профилактики гепатита С. Исследования ведутся как в направлении выбора клеток продуцентов (ЕР NO 388232), так и в направлении выбора наиболее антигеноактивных детерминант (ЕР NO 445423) и создания рекомбинантных полипептидов, продуктов генов вируса гепатита С (ЕР NO 377303 A1, C 12 N 15/51, 1989).
Сущность данного технического решения состоит в том, что предложен оригинальный, искусственно созданный полипептид, состоящий из продукта экспрессии фрагмента генома вируса гепатита С, слитого с бета-галактозидазой E. coli, связывающий антитела к продукту гена белка NS3 вируса гепатита С, фрагмент ДНК НС250, штамм E.coli НС250 ВКПМ N В-6596, трансформированный рекомбинантной плазмидой рНС250, содержащей фрагмент ДНК НС250.
Штамм-продуцент характеризуется следующими признаками: клетки прямые, палочковидной формы, подвижные с перитрихиальными жгутиками, грамотрицательные, неспороносные. Клетки растут на среде LB и других питательных средах, используемых для культивирования Escherichia coli, и простых питательных средах, содержащих 10 мкг/мл тетрациклина и 50 мкг/мл ампициллина. При выращивании на питательных агаризованных средах при 37oС колонии клеток гладкие, круглые, блестящие, бледно-желтые, прозрачные, края ровные. При росте на тех же средах, но при 30 32oС, колонии клеток имеют "слизистый" фенотип, характерный для колоний клеток с lon мутациями, растущими при пониженной температуре. При росте на жидких средах клетки образуют ровную интенсивную муть. Клетки хорошо растут при температуре 4 37oC при оптимуме рН от 6,8 до 7,5. В качестве источника азота клетки используют как минеральные соли в аммонийной и нитратной форме, так и органические формы в виде пептона и аминокислот. Нитраты восстанавливают до нитридов. Желатину не разжижают. Мальтозу не сбраживают. Уреазная активность не образуется. Трансформацию клеток плазмидами с промоторами бактериофага проводят по стандартным методикам. Полученные клоны клеток с плазмидами выращивают на среде LB при 30 32oС. Препаративную ферментацию для наработки рекомбинантного белка проводят при 39 42oС. Продуктивность штамма при использовании плазмидных векторов экспрессии с промоторами бактериофага составляет около 500 мкг рекомбинантного белка на 1 мл клеточной суспензии при плотности культуры 1х10 кл/мл. Белок стабилен при температуре 4oС в течение 5 6 месяцев.
Полипептид выделенный и очищенный из штамма-продуцента, иммобилизованный на твердом носителе (полихлорвиниловые или полистироловые планшеты, нитроцеллюлоза, найлон, латексы, эритроциты и др.), связывает антитела к продуктам гена NS3 белка вируса гепатита С в сыворотках крови и др. биологических жидкостях. Штамм депонирован в коллекции промышленных микроорганизмов НИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов под N В-6596.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
П р и м е р 1. Получение фрагмента ДНК НС250.
Для получения фрагмента ДНК были использованы олигонуклеотиды:
cr1 5' GGGGATCCTGCCCCTCCGGGCACGCTGTGGGCATCTTCCGGGCTGCCGTAT 3'
cr2 5' GCACCCGGGGGGTTGCGAAGGCGGTGGACTTTCTGCCCGTAGAGTCCTTGGAAACTAC 3'
cr3 5' TATGCGGTCTCCGGTCTTCACGGACAACTCATCCCCCCCGGCCGTAC 3'
cr4 5' CGCAGACATTTCAAGTGGCCCACCTACACGCTCCCACTGGCAGC 3'
cr5 5' GGCAAGAGTACTAAAAGTGCCGGCTGCATATGCAGCCCAAGGGTACAAGCTGCAGGG 3'
rc1 5' ATGCCCACAGCGTGCCCGGAGGGGCAGGATCCCC 3'
rc2 5' - CCGTGAAGACCGGAAGACCGCATAGTAGTTTCCAAGGACTCTACGGGCAGAAAGTCCACCGCCTTCGCA- ACCCCCGGGYGCATACGGCAGCCCGGAAG 3'
rc3 5' TGGGCCACTTGAAATGTCTGCGGTACGGCCGGGGGGGATGAGTTGT 3'
rc4 5' - CCCTGCAGCTTGTACCCTTGGGCTGCATATGCAGCCGGCACTTTAGTACTCTTTGCCGCTGCCAGTGGG- AGCGTGTAGG 3'
Олигонуклеотиды cr 1, 2, 3, 4, 5 и rc 1, 2, 3, 4 смешивают и кинируют с помощью полинуклеотидкиназы фага Т4. Для этого в эппендорфовскую пробирку на 1,5 мл вносят по 50 пмолей каждого из олигонуклеотидов, 50 мкл десятикратного буфера для киназы (0,5М трис HCl, рН 7,6, 0,1 М MgCl, 50 мМ дитиотреитол, 1 мМ спермидина и 1 мМ ЭДТА), 250 пмолей (150 мкКИ) [гамма-Р] АТФ (удельная активность 3000 Ки/ммоль), 150 единиц активности полинуклеотидкиназы фага Т4, бидистиллированную воду до объема 500 мкл и инкубируют 30-60 минут при 37 град.С. Затем реакционную смесь нагревают до температуры 98 град.С, охлаждают до 16 град.С и обрабатывают ДНК-лигазой. Для этого 100 мкл смеси обработанных киназой олигонуклеотидов смешивают с 12 мкл десятикратного буфера для лигирования (0,66М трис-HCl, рН 7,6, 50 мМ MgCl, 50 мМ дитиотрейтол и 10 мМ АТФ), добавляют 8 мкл (50 единиц активности) ДНК-лигазы фага Т4 и инкубируют при 4 град.С в течение 5 часов. Затем реакционную смесь нагревают до температуры 65 град. С в течение 15 минут для инактивирования фермента.
cr1 5' GGGGATCCTGCCCCTCCGGGCACGCTGTGGGCATCTTCCGGGCTGCCGTAT 3'
cr2 5' GCACCCGGGGGGTTGCGAAGGCGGTGGACTTTCTGCCCGTAGAGTCCTTGGAAACTAC 3'
cr3 5' TATGCGGTCTCCGGTCTTCACGGACAACTCATCCCCCCCGGCCGTAC 3'
cr4 5' CGCAGACATTTCAAGTGGCCCACCTACACGCTCCCACTGGCAGC 3'
cr5 5' GGCAAGAGTACTAAAAGTGCCGGCTGCATATGCAGCCCAAGGGTACAAGCTGCAGGG 3'
rc1 5' ATGCCCACAGCGTGCCCGGAGGGGCAGGATCCCC 3'
rc2 5' - CCGTGAAGACCGGAAGACCGCATAGTAGTTTCCAAGGACTCTACGGGCAGAAAGTCCACCGCCTTCGCA- ACCCCCGGGYGCATACGGCAGCCCGGAAG 3'
rc3 5' TGGGCCACTTGAAATGTCTGCGGTACGGCCGGGGGGGATGAGTTGT 3'
rc4 5' - CCCTGCAGCTTGTACCCTTGGGCTGCATATGCAGCCGGCACTTTAGTACTCTTTGCCGCTGCCAGTGGG- AGCGTGTAGG 3'
Олигонуклеотиды cr 1, 2, 3, 4, 5 и rc 1, 2, 3, 4 смешивают и кинируют с помощью полинуклеотидкиназы фага Т4. Для этого в эппендорфовскую пробирку на 1,5 мл вносят по 50 пмолей каждого из олигонуклеотидов, 50 мкл десятикратного буфера для киназы (0,5М трис HCl, рН 7,6, 0,1 М MgCl, 50 мМ дитиотреитол, 1 мМ спермидина и 1 мМ ЭДТА), 250 пмолей (150 мкКИ) [гамма-Р] АТФ (удельная активность 3000 Ки/ммоль), 150 единиц активности полинуклеотидкиназы фага Т4, бидистиллированную воду до объема 500 мкл и инкубируют 30-60 минут при 37 град.С. Затем реакционную смесь нагревают до температуры 98 град.С, охлаждают до 16 град.С и обрабатывают ДНК-лигазой. Для этого 100 мкл смеси обработанных киназой олигонуклеотидов смешивают с 12 мкл десятикратного буфера для лигирования (0,66М трис-HCl, рН 7,6, 50 мМ MgCl, 50 мМ дитиотрейтол и 10 мМ АТФ), добавляют 8 мкл (50 единиц активности) ДНК-лигазы фага Т4 и инкубируют при 4 град.С в течение 5 часов. Затем реакционную смесь нагревают до температуры 65 град. С в течение 15 минут для инактивирования фермента.
10 мкл раствора обработанных киназой и лигазой олигонуклеотидов используют для анализа ДНК в 12%-ном полиакриламидном геле (после авторадиографии виден фрагмент размером около 250 п.н.).
100 мкл раствора полученного фрагмента ДНК гидролизуют рестриктазами BamHI и PstI в буферном растворе для рестрикции (конечная концентрация 20 мМ Трис-HCl рН 7,5, 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl, 1 мМ дитиотреитол) в течение 5 часов при температуре 37 град. С. Ферменты инактивируют нагреванием при 70 град. С.
10 мкл раствора фрагментов ДНК, гидролизованных рестрикционными эндонуклеазами, используют для анализа ДНК в 12%-ном полиакриламидном геле (после авторадиографии виден фрагмент размером около 250 п.н.).
ДНК осаждают этиловым спиртом и растворяют в 20 мкл дистиллированной воды. 10 мкл обработанного рестрикционным эндонуклеазами фрагмента ДНК смешивают с ДНК векторной плазмиды pUCl8, обработанной рестриктазами BamHI и PstI, обрабатывают ДНК-лигазой Т4 в течение 5 часов при 4 град. С. Полученный лигазной смесью трансформируют клетки E. coli штамма DH5 альфа по обычной методике (Molecular cloning, New York, CSHL, 1982). Трансформированные клетки высевают на чашки с 1,2% LB-агаром, содержащим 50 мкг/мл ампициллина. Выросшие колонии проверяют на наличие рекомбинантных плазмид. Для этого бактериальные клетки лизируют и выделяют плазмидную ДНК, как описано (Nature, 1981, 145, 1365). Выделенную плазмидную ДНК обрабатывают рестриктазами BamHI и PstI и гидролизат исследуют электрофорезом в 12%-ном полиакриламидном геле. Гидролизат плазмидной ДНК из отобранного рекомбинантного штамма HCNS3 имеет на электрофореграмме 2 полосы ДНК размерами 2686 и 256 п. н. что соответствует размерам вектора и синтезированного нами фрагмента ДНК НС250.
Методом Сэнгера (PNAS, 1977, 74, 5463) определяется нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК НС250:
GGGGATCCTGCCCCTCCGGGCACGCTGTGGGCATCTTCCGGGCTGCCGTATGCACC
CGGGGGGTTGCGAAGGCGGTGGACTTTCTGCCCGTAGAGTCCTTGGAAACTACTAT
GCGGTCTCCGGTCTTCACGGACAACTCATCCCCCCCGGCCGTACCGCAGACATTTC
AAGTGGCCCACCTACACGCTCCCACTGGCAGCGGCAAGAGTACTAAAGTGCCGGCT
GCATATGCAGCCCAAGGGTACAAGCTGCAGGG
Фрагмент ДНК, аналогичный НС250, был получен также путем известного метода цепной реакции полимеризации с использованием олигонуклеотидов cr1 и rc4.
GGGGATCCTGCCCCTCCGGGCACGCTGTGGGCATCTTCCGGGCTGCCGTATGCACC
CGGGGGGTTGCGAAGGCGGTGGACTTTCTGCCCGTAGAGTCCTTGGAAACTACTAT
GCGGTCTCCGGTCTTCACGGACAACTCATCCCCCCCGGCCGTACCGCAGACATTTC
AAGTGGCCCACCTACACGCTCCCACTGGCAGCGGCAAGAGTACTAAAGTGCCGGCT
GCATATGCAGCCCAAGGGTACAAGCTGCAGGG
Фрагмент ДНК, аналогичный НС250, был получен также путем известного метода цепной реакции полимеризации с использованием олигонуклеотидов cr1 и rc4.
Пример
2. Получение плазмид.
2. Получение плазмид.
Синтезированный фрагмент ДНК НС250 гидролизуют рестриктазами PstI и BamHI, ДНК осаждают этиловым спиртом и растворяют в 50 мкл дистиллированной воды. 10 мкл обработанного рестриктазами фрагмента ДНК лигируют с ДНК векторной плазмиды pEL5A, обработанной рестриктазами PstI и BamHI.
Полученной лигазной смесью трансформируют клетки E.coli штамм PL T90. Трансформированные клетки высевают на чашки с 1,2%-ным LB-агаром, содержащим 50 мкг/мл ампициллина. Выросшие колонии проверяют на наличие рекомбинантных плазмид. Для этого бактериальные клетки лизируют, выделяют плазмидную ДНК, которую гидролизуют рестриктазами PstI и BamHI.
Гидролизат плазмидной ДНК из отобранного рекомбинантного штамма E.coli HC250 имеет на электрофореграмме 2 полосы ДНК размерами 6400 и около 250 нуклеотидов, что соответствует размерам вектора и синтезированного фрагмента ДНК НС250. При определении нуклеотидной последовательности плазмидной ДНК установлено, что синтезированный фрагмент ДНК в плазмиде рНС250 через BamHI сайт присоединен к С-концевому участку бета-галактозидазы E.coli. Таким образом, плазмида рНС250 кодирует рекомбинантный белок, содержащий аминокислотные последовательности NS3 белка вируса гепатита С, слитые с последовательностью бета-галактозидазы E.coli.
При мер 3.
Выделение полипептида.
Штамм E. coli, содержащий плазмиду рНС250, выращивают в 100 мл среды LB при 30 град. С до плотности 8х10 кл/мл. После этого температуру повышают до 39oС и растят клетки еще в течение 2-х часов. Клетки собирают центрифугированием при 4000 об/мин в течение 15 мин, лизируют ультразвуком и выделяют белки по одному из известных методов.
Выделенные белки анализируют в 10% ПААГ по стандартному методу Лэммли. В качестве маркеров молекулярных масс белков используют набор фирмы "Pharmacia", содержащий маркеры молекулярных масс от 10 до 160 кД. В качестве контроля используют полученный аналогичным образом лизат клеток штамма E. coli PL T90, содержащий векторную плазмиду pEL5A и не содержащий полученную нами плазмиду рНС250. Сравнительный анализ белкового состава показывает, что штамм E.coli, содержащий плазмиду рНС250, экспрессирует гибридный полипептид с молекулярной массой 120 130 кД. Аминокислотная последовательность полипептида, определенная на основании нуклеотидной последовательности клонированного фрагмента ДНК, кодирующего участок гена NS3, представлена ниже:
X- Gly Ser Cys Pro Ser Gly His Ala Val Gly Ile Phe Arg
Ala Ala Val Cys Thr Arg Gly Val Ala Lys Ala Val - Asp
Phe Leu Pro Val Glu Ser Leu Glu Thr Thr Met Arg - Ser
Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro Pro Ala Val - Pro
Gln Thr Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro Thr - Gly
Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Ala Ala Tyr Ala - Ala
Gln Gly Tyr Lys, где X последовательность бета галактозидазы E. coli.
X- Gly Ser Cys Pro Ser Gly His Ala Val Gly Ile Phe Arg
Ala Ala Val Cys Thr Arg Gly Val Ala Lys Ala Val - Asp
Phe Leu Pro Val Glu Ser Leu Glu Thr Thr Met Arg - Ser
Pro Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro Pro Ala Val - Pro
Gln Thr Phe Gln Val Ala His Leu His Ala Pro Thr - Gly
Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val Pro Ala Ala Tyr Ala - Ala
Gln Gly Tyr Lys, где X последовательность бета галактозидазы E. coli.
Контроль антигенной активности.
Контроль антигенной активности полипептида осуществляют методом иммуноблотинга. Для этого проводят процедуру электрофореза (как описано в примере 3), затем осуществляют перенос электрофоретически разделенных белков на нитроцеллюлозные мембраны ВН85 с помощью аппарата для электроблотинга в режиме 24В, 400 мА в течение 1 часа. Качество переноса проверяют окрашиванием мембран раствором 0,2% Понсо S в 3%-ной ТХУ в течение 5 мин при комнатной температуре. Краску дважды отмывают в течение 30 мин буфером TBS (0,15М Nacl, 20mM трис-HCl, рН 7,4) с 0,05% Твина-20 при комнатной температуре. На следующем этапе проводят блокирование нитроцеллюлозных мембран с иммобилизованными белками раствором 5%-ного обезжиренного сухого молока, приготовленным на 0,1 М Na-фосфатном буфере, рН 7,4, в течение 30 минут при комнатной температуре. После блокирования мембраны в течение 1 час при 37 град. С обрабатывают сыворотками, содержащими антитела к NS3 белку вируса гепатита С, в разведении 1:100. Затем проводят трехкратную отмывку мембран TBS с 0,05%-ным Твином-20 в течение 30 мин при комнатной температуре. Выявление специфических антител осуществляют инкубацией фильтра с антивидовым пероксидазным конюъгатом при 37 град. С в течение часа. Далее повторяют процедуру трехкратной отмывки. Реакцию проверяют добавлением 100 мкл 30%-ной перекиси водорода и 50 мл раствора 4-хлор-1-нафтола (20мг в 0,1М трис-HCl, рН 8,0). Анализ показывает, что полученный полипептид связывается с антителами к NS3 белку вируса гепатита С.
Таким образом, данное изобретение представляет собой полипептид, обладающий свойствами белка NS3 вируса гепатита С, взаимодействующий с антителами к белку NS3 вируса гепатита С, позволяющий определять антитела к вирусу гепатита С.
Claims (3)
2. Рекомбинантный полипептид НС 250 мол. м. 120 130 КДа, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка NS3 вируса гепатита С, полученный при культивировании штамма бактерий Escherichia coli ВКПМ В-6596 и имеющий следующую структуру:
где X последовательность бета-галактозидазы Е. coli.
где X последовательность бета-галактозидазы Е. coli.
3. Штамм бактерий Escherichia coli ВКПМ NB-6596 продуцент рекомбинантного полипептида НС 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка NS3 вируса гепатита С.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93029441A RU2073719C1 (ru) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93029441A RU2073719C1 (ru) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU93029441A RU93029441A (ru) | 1996-06-10 |
RU2073719C1 true RU2073719C1 (ru) | 1997-02-20 |
Family
ID=20142671
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93029441A RU2073719C1 (ru) | 1993-06-03 | 1993-06-03 | Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2073719C1 (ru) |
-
1993
- 1993-06-03 RU RU93029441A patent/RU2073719C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Патент ЕПВ N 0377303, кл. C 12 N 15/51, 1989. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111499765B (zh) | 一种冠状病毒融合蛋白及其制备方法与应用 | |
Young et al. | Efficient expression of influenza virus NS1 nonstructural proteins in Escherichia coli. | |
JP2647072B2 (ja) | ポリオウイルスcDNA | |
KR0181517B1 (ko) | 비-에이 비-비형 간염-특이 항원 및 간염 진단에서 그의 용도 | |
US20210301000A1 (en) | NS1-Binding Protein and Uses Thereof | |
KR100245318B1 (ko) | 헤르페스 프로테아제 억제제의 동정방법 | |
CN111848750B (zh) | 一种快速富集和检测2019-nCoV的方法及试剂盒 | |
CN110845624B (zh) | 一种sumo-cp融合蛋白及其制备方法以及其多克隆抗体的制备方法 | |
CN109134647B (zh) | Ns1蛋白的结合蛋白 | |
KR20210056362A (ko) | Ns1-결합 단백질 | |
KR100317509B1 (ko) | C형간염바이러스를분류하기위한항원성펩티드,이펩티드를포함하는키트및이펩티드를사용하는c형간염바이러스를분류하는방법 | |
JP4641695B2 (ja) | 新規なhev抗原性ペプチド及び方法 | |
RU2073719C1 (ru) | Фрагмент днк нс 250, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 250 молекулярной массы 120 - 130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli и штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 250, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns3 вируса гепатита с | |
RU2073718C1 (ru) | Фрагмент днк нс 280, полученный с помощью химического синтеза, рекомбинантный полипептид нс 280 молекулярной массы 120-130 кда, обладающий способностью связывать антитела к продукту гена белка ns4 вируса гепатита с, полученный при культивировании штамма бактерий escherichia coli - штамм бактерий escherichia coli - продуцент рекомбинантного полипептида нс 280, обладающего способностью связывать антитела к продукту гена белка ns4 вируса гепатита с | |
RU2058391C1 (ru) | ПОЛИПЕПТИД, ФРАГМЕНТ ДНК НС270, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА НС86, СЛИТОГО С β ГАЛАКТОЗИДАЗОЙ ESCHERICHIA COLI | |
RU2041949C1 (ru) | Фрагмент днк нс365, полипептид, штамм бактерий escherichia coli - продуцент полипептида, обладающего способностью связывать антитела к вирусу гепатита c | |
RU2052503C1 (ru) | Полипептид, фрагмент днк нс 360, штамм бактерий escherichia coli - продуцент полипептида, слитого с бета-галактозидазой e.coli | |
RU2052504C1 (ru) | Полипептид, фрагмент днк hc 256 и штамм бактерий escherichia coli - продуцент полипептида нс 80, слитого с бета-галактозизадой e.coli | |
JPH08196282A (ja) | サイトメガロウイルスの読み枠UL57およびテグメント蛋白質pp150のC端領域に由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質、これらを含む診断検査キット、サイトメガロウイルスおよびDNAオリゴヌクレオチドに対する抗体の検出法 | |
CN117843768A (zh) | 高亲和力的抗鸡传染性法氏囊病毒的scFv抗体的制备及其应用 | |
JPH09504685A (ja) | Hardsウイルスの組換えdna抗原を製造する分子クローン | |
RU2085586C1 (ru) | Полипептид 1106, предназначенный для определения антител к вирусу иммунодефицита человека первого типа, фрагмент днк н 1106, кодирующий полипептид 1106, рекомбинантная плазмидная днк рн 1106, кодирующая полипептид 1106, штамм бактерий escherichia coli - продуцент полипептида 1106 | |
CN113493494B (zh) | Eb病毒balf3蛋白的抗原表位 | |
CN115850523B (zh) | 一种单纯疱疹病毒ⅰ型特异性融合蛋白抗原及其制备方法和检测试剂盒 | |
WO1993007487A1 (fr) | Procede de detection de staphylococcus aureus resistant au mesitylene, nouveau peptide, et adn le codant |