RU2071339C1 - Agent for disbacteriosis treatment and prophylaxis - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: agent containing bifidobacteria has additionally lysozyme at amount 5-20 mg per one preparation dose and bifidobacteria amount is $$$ colony-forming units (CFU). Use of the proposed preparation ensures to decrease recovery by 1.5-2-fold and provides the enhancement of different clinical indices. Preparation can be used orally, locally and intravaginally (2.5-15 doses for 1-3 weeks) in children in adult. EFFECT: enhanced effectiveness of agent.

Description

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в педиатрии, гастроэнтерологии, акушерстве и гинекологии, а также в ветеринарии. The invention relates to medicine and can be used in pediatrics, gastroenterology, obstetrics and gynecology, as well as in veterinary medicine.

Известно применение бактериальных и иммунных биопрепаратов для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника. The use of bacterial and immune biological products for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunctions is known.

Принцип действия бактерийных препаратов, например лактобактерина, бификола, колибактерина и др. состоит в регуляции эубиотиками микроэкологии слизистых оболочек и включает прямое воздействие на микрофлору путем восполненная дефицита соответствующих представителей нормобиоценоза и вытеснения условно-патогенных и патогенных микроорганизмов благодаря высокой антагонистической активности производственных штаммов эубистиков, что создает условия для мобилизации обменных процессов, улучшения местного иммунитета и иммунобиологической реактивности. Например, применение лактобактерина сухого или кисломолочного из живых культур лактобацилл эффективно в лечении и профилактике дисбактериоза кишечника и гениталий, в комплексном лечении кишечных инфекций, дисфункций печени и пищеварительной системы, инфекционно-воспалительных заболеваний (Грачева Н. М. Гончарова Г. И. Аваков А. А. и др. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника. Методические рекомендации, М. 1986). The principle of action of bacterial preparations, for example, lactobacterin, bificol, colibacterin, etc. consists in the regulation of the microecology of the mucous membranes by eubiotics and includes a direct effect on the microflora by compensating for the deficiency of the corresponding representatives of normobiocenosis and crowding out conditionally pathogenic and pathogenic microorganisms due to the high antagonistic activity of production strains that creates conditions for mobilization of metabolic processes, improvement of local immunity and immunobiological th reactivity. For example, the use of dry or sour milk from live cultures of lactobacilli is effective in the treatment and prevention of intestinal and genital dysbiosis, in the complex treatment of intestinal infections, liver and digestive system dysfunctions, infectious and inflammatory diseases (Gracheva N.M. Goncharova G.I. Avakov A A. and others. The use of bacterial biological preparations in the practice of treating patients with intestinal infections. Diagnosis and treatment of intestinal dysbiosis. Methodical recommendations, M. 1986).

Применение бактерийных препаратов в большинстве случав приводят к улучшению состава микрофлоры и клиническому выздоровлению. Недостатками существующих бактерийных препаратов является то, что их нужно применять длительно, поскольку коррекция микрофлоры наступает значительное медленнее, чем клиническое улучшение (Дорофейчук В. Г. Бейер Л. В. Сазонова Н. Е. и др. Лечение и профилактика дисбактериоза у детей. Методические рекомендации. М. - 1986). Имеются сведения о том, что лантобациллы при определенных условиях (например, у иммунокомпроментированных больных) способны вызывать местные и системные инфекционные осложнения (Тюрин М. В. Молочно-кислые бактерии как потенциальные возбудители инфекционных заболеваний человека // Антибиотики и микроэкология человека и животных. М. 1988. С. 175-178), угнетать нормальную микрофлору кишечника, что ограничивает возможности их применения в профилактических целях (Лесняк С. В. Евтухова Л. М. Шимчук Л. Ф. О свойствах препаратов из нормальной микрофлоры человека // Антибиотики и микроэкология человека и животных. М. 1988. С. 136-140). The use of bacterial preparations in most cases leads to an improvement in the composition of microflora and clinical recovery. The disadvantages of existing bacterial preparations is that they need to be used for a long time, since the correction of microflora occurs much slower than clinical improvement (Dorofeychuk V.G. Beyer L.V. Sazonova N.E. et al. Treatment and prevention of dysbiosis in children. Methodical recommendations. M. - 1986). There is evidence that lantobacilli under certain conditions (for example, in immunocompromised patients) can cause local and systemic infectious complications (M. Tyurin. Lactic acid bacteria as potential causative agents of human infectious diseases // Antibiotics and Microecology of humans and animals. M 1988. P. 175-178), inhibit the normal intestinal microflora, which limits the possibility of their use for preventive purposes (Lesnyak S.V. Evtukhova L.M. Shimchuk L.F. On the properties of preparations from normal microflora person // Antibiotics and microecology of humans and animals. M. 1988. S. 136-140).

К биопрепаратам, применяемым для лечения и профилактики дисбактериоза и кишечных инфекций, относятся также иммунные препараты, как например комплексный иммуноглобулиновый препарат (КИП), иммунный противоколипротейный лактоглобулин и др. Принцип их действия заключается в специфической антибактериальной активности содержащихся в них антител (иммуноглобулинов классов G и М) в отношении соответствующих микроорганизмов и стимуляции неспецифической резистентности организма (Соболева С. В. Лактоглобулины направленного действия. Микробиологические аспекты разработки и клинического применения препаратов. Дис. док. мед. наук. Ростов-на-Дону, 1991). К их недостаткам можно отнести высокую стоимость, сложности получения экологически чистого сырья, ограниченность промышленного выпуска, необходимость в ряде случаев дополнительного применения эубиотиков. Кроме того, имеются единичные данные о возможности неблагоприятного влияния избытка иммуноглобулинов класса G в содержимом кишечнике на состояние слизистой оболочки пищеварительного тракта. Biological products used to treat and prevent dysbacteriosis and intestinal infections also include immune preparations, such as complex immunoglobulin (CIP), immune anti-lipoprotein lactoglobulin, etc. The principle of their action is the specific antibacterial activity of the antibodies contained therein (immunoglobulins of classes G and M) in relation to the corresponding microorganisms and stimulation of nonspecific resistance of the organism (Sobolev S.V. Lactoglobulins directed action. Microbiol Logical Aspects of the Development and Clinical Use of Preparations (Diss.Doc. Medical Sciences. Rostov-on-Don, 1991) Their disadvantages include the high cost, the difficulty of obtaining environmentally friendly raw materials, the limited industrial output, the need in some cases for the additional use of eubiotics. In addition, there is isolated evidence of the possibility of an adverse effect of an excess of class G immunoglobulins in the contents of the intestine on the condition of the mucous membrane of the digestive tract.

В качестве прототипа принято средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника у детей и взрослых Бифидумбактерин сухой, который применяется также в акушерстве и гинекологии для лечения неспецифических бактериальных вагинозов, коррекции микрофлоры родовых путей, профилактики мастита. Препарат обеспечивает высокий количественный уровень бифидофлоры, способствует нормализации функций пищеварительного тракта, препятствует формированию затяжных форм кишечных заболеваний, повышает неспецифическую резистентность организма. Применение бифидумбактерина у детей с длительными кишечными дисфункциями при дисбактериозе приводит к улучшению общего состояния, нормализации стула, улучшению показателей прибавки массы тела, благоприятно влияет на течение и исход инфекционно-воспалительных заболеваний, способствует снижению летальности новорожденных детей, больных сепсисом и пневмонией (Гончарова Г. И. Семенова Л. П. Козлова Ж. П. и др. Применение сухого бифидумбактерина в комплексном лечении недоношенных и доношенных новорожденных детей и детей раннего возраста. Методические рекомендации. М. 1988). As a prototype, a tool has been taken for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunctions in children and adults. Bifidumbacterin is dry, which is also used in obstetrics and gynecology for the treatment of non-specific bacterial vaginosis, correction of the microflora of the birth canal, and prevention of mastitis. The drug provides a high quantitative level of bifidoflora, helps to normalize the functions of the digestive tract, prevents the formation of protracted forms of intestinal diseases, and increases the nonspecific resistance of the body. The use of bifidumbacterin in children with long-term intestinal dysfunctions with dysbiosis improves the general condition, normalizes stool, improves body weight gain, favorably affects the course and outcome of infectious and inflammatory diseases, and helps to reduce the mortality of newborns with sepsis and pneumonia (Goncharova G. I. Semenova L. P. Kozlova Zh. P. et al. Use of dry bifidumbacterin in the complex treatment of premature and full-term newborns and young children. methodical recommendations. M. 1988).

4. К недостаткам бифидумбактерина относят следующие:
необходимость длительного применения (3-4 недели, иногда до 3 месяцев) для полного и стойкого восстановления нормобиоценоза. Например, при упорных кишечных инфекциях, сопровождающихся бисбактериозом, применение бифидумбактерина и др. бактериальных препаратов в течение 1 месяца обеспечило полную нормализацию кишечной микрофлоры лишь в 9,3% случаев (Иванов Н. С. Столярова Е. И. Зрячкин Н. И. Патогенетическое обоснование использования биопрепаратов при кишечной инфекции у детей // Колонизационная резистентность и химиотерапевтические антибактериальные препараты. М. 1988. ч.II. С. 280-281);
недостаточная эффективность у ряда категорий больных, например при нарушениях иммунобиологической реактивности, таких как пищевая аллергия, дефицит эндогенного лизоцима и др. защитных факторов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Так, при использовании бифидумбактерина в лечении кишечных инфекций и дисфункций кишечника у детей с аллергодерматозами значительное улучшение или нормализацию кишечной микрофлоры к моменту клинической ремиссии отмечали лишь в 25,7% случаев без существенной коррекции иммунологических показателей (Куваева И. В. Кузнецова Г. Г. Беселова О. Л. Орлова И. Г. Функциональные нарушения микроэкологической и имунной системы у детей с пищевой аллергией и их коррекция бифидумбактерином. // Бифидобактерии и их использование в клинике, медиинской промышленности и сельском хозяйстве. М. 1986. С. 132-138);
низкая эффективность при использовании на фоне антибиотикотерапии, при наличии др. эндогенных или экзогенных агрессивных факторов, угнетающих нормальную микрофлору и местный иммунитет. Например, медленная коррекция бифидумбактерином микробиогеноза и общего состояния детей наблюдалась у новорожденных недоношенных детей со смещенной патологией и дисбактериозом 2-3 степени при вскармливании материнским молоком, содержащим неоктоыре лизоформы холиновых фосфолипидов, в частности лизофосфатидилхолин, которые угнетают адгезию бифидобактерий и имеют патогенетическое значение для развития повреждений слизистой оболочки пищеварительного тракта (Кушнарева М. В. Лизоформы холиновых фосфолипидов грудного молока и их значение в формировании микробиоценоза кишечника недоношенных новорожденных детей. Дис. канд. мед. наук. М. 1990);
отсутствие влияния на восстановление морфологической структуры слизистой оболочки ЖКТ и показатели местного иммунитета при воспалительных заболеваниях ЖКТ и кишечных инфекциях;
действие бифидумбактерина направлено в основном на восполнении дефицита анаэробного компонента эубиоза и лишь опосредованно (а потому значительно медленнее) способствует улучшению аэробного компонента нормальной микрофлоры кишечника.4. The disadvantages of bifidumbacterin include the following:
the need for long-term use (3-4 weeks, sometimes up to 3 months) for a complete and lasting restoration of normobiocenosis. For example, with persistent intestinal infections accompanied by bisbacteriosis, the use of bifidumbacterin and other bacterial preparations for 1 month ensured the complete normalization of intestinal microflora in only 9.3% of cases (Ivanov N. S. Stolyarova E. I. Zryachkin N. I. Pathogenetic the rationale for the use of biological products for intestinal infections in children // Colonization resistance and chemotherapeutic antibacterial drugs. M. 1988. Part II. S. 280-281);
lack of effectiveness in a number of categories of patients, for example, with impaired immunobiological reactivity, such as food allergies, deficiency of endogenous lysozyme and other protective factors of the gastrointestinal tract (GIT). So, when using bifidumbacterin in the treatment of intestinal infections and intestinal dysfunctions in children with allergic dermatoses, significant improvement or normalization of the intestinal microflora at the time of clinical remission was noted only in 25.7% of cases without significant correction of immunological parameters (Kuvaeva I.V. Kuznetsova G.G. Beselova O. L. Orlova I. G. Functional disorders of the microecological and immune systems in children with food allergies and their correction with bifidumbacterin // Bifidobacteria and their use in the clinic, median industry laziness and agriculture M. 1986, pp 132-138).;
low efficiency when used against antibiotic therapy, in the presence of other endogenous or exogenous aggressive factors that inhibit normal microflora and local immunity. For example, slow correction by bifidumbacterin of microbiogenesis and the general condition of children was observed in newborns of premature babies with displaced pathology and dysbacteriosis of the 2nd to 3rd degree when breast milk is fed with a single lyso form of choline phospholipids, in particular lysophosphatidylcholine, which inhibits developmental adhesion and bifidia adhesion mucous membrane of the digestive tract (Kushnareva M.V. Lysoforms of choline phospholipids of breast milk and their significance Ie in the formation of intestinal microbiocenosis of premature newborn babies. Dis. Cand. Medical Sciences. M. 1990);
the lack of influence on the restoration of the morphological structure of the gastrointestinal mucosa and indices of local immunity in inflammatory diseases of the gastrointestinal tract and intestinal infections;
the action of bifidumbacterin is mainly aimed at filling the deficiency of the anaerobic component of eubiosis and only indirectly (and therefore much slower) helps to improve the aerobic component of the normal intestinal microflora.

Задачей изобретения является создание высокоэффективного средства для лечения и профилактики дисбактериоза и кишечных дисфункций, позволяющего сократить сроки лечения, получить более стойкий и выраженный лечебно-профилактический эффект. The objective of the invention is the creation of a highly effective agent for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunctions, which allows to reduce treatment time, to obtain a more persistent and pronounced therapeutic and prophylactic effect.

Сущность изобретения состоит в том, что средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника, содержащее бифидобактерии, дополнительно содержит лизоцим в количестве 5-20 мг на одну дозу препарата, при этом количество бифидобактерий составляет 10³-10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) на одну дозу.The essence of the invention lies in the fact that the tool for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunction, containing bifidobacteria, additionally contains lysozyme in the amount of 5-20 mg per dose of the drug, while the number of bifidobacteria is 10 ³ -10 ⁸ colony forming units (CFU) per one dose.

Использование изобретения позволит получить следующий технический результат:
а) сократить в 1,5-2 раза сроки лечения дисбактериоза и дисфункций кишечника по сравнению с применением бифидумбактерина за счет ускорения формирования как анаэробного, так и аэробного компонентов нормобиоценоза, уменьшение сроков нормализации частоты и характера стула, повышение эффективности усвоения пищи, например коэффициента эффективности белков (КЭБ) у недоношенных новорожденных детей, находящихся на искусственном вскармливании;
б) обеспечить стойкую нормализацию показателей гомеостаза, например коррекцию активности альфа-1-протеиназного ингибитора ((α₁-ПИ)), который принимает участие в регуляции ряда протеолитических систем, контроле механизмов адаптации, реализации воспалительного процесса; а также коррекцию иммунобиологической реактивности, например улучшить соотношение разных классов иммуноглобулинов в содержимом кишечника, снизить уровень сенсибилизации и улучшить выраженность проявлений эксудативного диатеза и пищевой аллергии;
в) ускорить сроки нормализации морфологической структуры и клеточного состава слизистой оболочки ЖКТ после кишечных инфекций, неспецифических деструктивных воспалительных заболеваний кишечника; не менее чем вдвое снизить частоту локальных и системных инфекционно-воспалительных осложнений; уменьшить частоту и тяжесть течения, а также летальность при язвенно-некротических колитах у новорожденных детей со смешанной патологией, находящихся на искусственном вскармливании, благодаря улучшению клеточного метаболизма, стимуляции лизоцимом регенерации, антибактериальному действию лизоцима, коррекции протеолитических систем, например активности α₁-ПИ в сыворотке крови;
г) обеспечить улучшение переносимости и повышение эффективности медикаментозной и цитостатической терапии за счет повышения общей и антитоксической резистентности клеток и тканей;
д) при профилактическом применении не менее чем вдвое снизить частоту дисбактериоза, кишечных инфекций и дисфункций в группах риска, особенно у новорожденных и детей первого года жизни, находящихся на искусственном и смешанном вскармливании, а также у детей всех возрастных групп и взрослых; в 1,5-2 раза снизить заболеваемость острыми респираторными заболеваниями в организационных детских коллективах;
а) в акушерско-гинекологической практике местное и интравагинальное применение препарата позволит: обеспечить быструю и стойкую санацию родовых путей у беременных групп риска и при неблагоприятной микроэкологической обстановке в родильном отделении; ускорить заживление трещин сосков, уменьшить частоту и выраженность лактационных маститов у кормящих матерей и ускорять формирование нормобиоценоза у новорожденных; обеспечить более быстрое и стойкое выздоровление при бактериальных и гормональных кольпитах;
ж) снизить потребление антибиотиков при лечении и профилактике ряда кишечных инфекций за сет повышения лизоцимом эффективности антибиотиков, усиления адгезивных свойств антагонистически активного шлама бифидобактерий, сокращения длительности лечения больных.Using the invention will allow to obtain the following technical result:
a) reduce the treatment time for dysbacteriosis and intestinal dysfunctions by 1.5–2 times compared with the use of bifidumbacterin by accelerating the formation of both anaerobic and aerobic components of normobiocenosis, reducing the time needed to normalize the frequency and nature of stool, increasing the efficiency of food absorption, for example, efficiency proteins (CEB) in premature newborn babies who are breast-fed;
b) ensure stable normalization of indicators of homeostasis, for example, correction of the activity of the alpha-1-proteinase inhibitor ((α ₁ -PI)), which takes part in the regulation of a number of proteolytic systems, control of adaptation mechanisms, and the implementation of the inflammatory process; as well as correction of immunobiological reactivity, for example, to improve the ratio of different classes of immunoglobulins in the intestinal contents, reduce the level of sensitization and improve the severity of manifestations of exudative diathesis and food allergies;
c) accelerate the normalization of the morphological structure and cellular composition of the gastrointestinal mucosa after intestinal infections, non-specific destructive inflammatory bowel diseases; at least halve the frequency of local and systemic infectious and inflammatory complications; to reduce the frequency and severity of the course, as well as mortality in ulcerative necrotic colitis in newborns with mixed pathology, who are being artificially fed, due to improved cellular metabolism, stimulation of lysozyme regeneration, antibacterial action of lysozyme, correction of proteolytic systems, for example, α ₁ -PI activity in blood serum;
d) to provide improved tolerance and increase the effectiveness of drug and cytostatic therapy by increasing the general and antitoxic resistance of cells and tissues;
e) with prophylactic use, at least halve the frequency of dysbiosis, intestinal infections and dysfunctions in risk groups, especially in newborns and children of the first year of life who are on artificial and mixed feeding, as well as in children of all age groups and adults; 1.5-2 times to reduce the incidence of acute respiratory diseases in organizational children's groups;
a) in obstetric and gynecological practice, local and intravaginal use of the drug will allow: to provide quick and stable rehabilitation of the birth canal in pregnant risk groups and in adverse microecological conditions in the maternity ward; accelerate the healing of nipple cracks, reduce the frequency and severity of lactational mastitis in nursing mothers and accelerate the formation of normobiocenosis in newborns; provide faster and more stable recovery with bacterial and hormonal colpitis;
g) reduce the consumption of antibiotics in the treatment and prevention of a number of intestinal infections over a set of lysozyme-enhancing antibiotic efficiencies, enhance the adhesive properties of antagonistically active sludge of bifidobacteria, reduce the duration of treatment of patients.

Полученный технический результат достигается, таким образом, за счет более быстрого и стойкого восстановления нормобиоценоза, морфологической структуры слизистых оболочек ЖКТ и клеточных факторов местного иммунитета, коррекции антипротеиназной активности сыворотки крови и иммунобиологической реактивности организма. The technical result obtained is thus achieved due to a faster and more stable restoration of normobiocenosis, morphological structure of the gastrointestinal mucous membranes and cellular factors of local immunity, correction of antiproteinase activity of blood serum and immunobiological reactivity of the body.

Авторами впервые установлен новый механизм действия сочетания лизоцима и бифидобактерий в составе единого препарата: коррекция антипротеиназной активности сыворотки крови, стимуляция клеточных факторов местного иммунитета ЖКТ. The authors for the first time established a new mechanism of action of a combination of lysozyme and bifidobacteria in a single drug: correction of antiproteinase activity of blood serum, stimulation of cellular factors of local gastrointestinal immunity.

Известно, что лизоцим обладает способностью оказывать антибактериальное, иммуномодулирующее, противовоспалительное действие, стимулировать регенерацию, клеточный метаболизм, противоинфекционную и антитоксическую резистентность, улучшать за счет ферментного действия процесс пищеварения и усвоения пищевых белков, повышать адгезивную способность бифидобактерий, в том числе штаммов, входящих в состав бифидумбактерина. It is known that lysozyme has the ability to exert an antibacterial, immunomodulating, anti-inflammatory effect, stimulate regeneration, cell metabolism, anti-infection and antitoxic resistance, improve the digestion and absorption of food proteins due to enzymatic action, increase the adhesive ability of bifidobacteria, including strains, including strains bifidumbacterin.

Однако при совместном применении лизопима с бифидобактериями образуется единая сбалансированная система естественных защитных факторов, взаимно дополняющих друг друга, которая обеспечивает более быстрое восполнение дефицита лизоцима и бифидофлоры, улучшение и нормализацию всех представителей нормобиоценоза, коррекцию антипротеиназной активности сыворотки крови, что способствует быстрой коррекции гомеостаза, создает условия для уменьшения повреждающего действия антибиотиков и др. агрессивных факторов на клетки слизистых оболочек, включая клеточные факторы местного иммунитета ЖКТ, а также для восстановления поврежденных морфологических структур, повышения антибактериальной, противовирусной, антитоксической резистентности к неблагоприятным воздействиям (медикаментозным, алиментарным, экологическим и др.)
Средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника представляет собой сухую микробную массу живых, антагонистически активных бифидобактерий (Bifidobacterium bifidum N 1), лиофилизированную в среде культивирования с добавлением лизоцима и сахарозо-желатиново-молочной среды. Препарат выпускается в виде кристаллической или пористой массы разных оттенков бежевого или серого цвета, в стеклянных флаконах емкостью 12 мл, содержащих по 5 доз препарата. Одна доза препарата содержит от 10⁶ до 10⁸ КОЕ/мл бифидобактерий 5-20 мг лизоцима. Препарат хорошо растворяется в воде, водных растворах и молоке; при растворении сухого препарата в воде из расчета 1 мл на 1 дозу препарата после 3-4-кратного взбалтывания образуется гомогенная мутная взвесь с характерным вкусом и запахом.However, with the combined use of lysozyme with bifidobacteria, a single balanced system of natural protective factors is formed that complement each other, which provides faster filling of lysozyme and bifidoflora deficiency, improvement and normalization of all representatives of normobiocenosis, and correction of antiproteinase activity of blood serum, which contributes to a quick correction of homeostasis, which creates conditions for reducing the damaging effect of antibiotics and other aggressive factors on mucosal cells to, including cellular factors of local immunity of the gastrointestinal tract, as well as to restore damaged morphological structures, increase antibacterial, antiviral, antitoxic resistance to adverse effects (drug, nutritional, environmental, etc.)
The agent for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunction is a dry microbial mass of live, antagonistically active bifidobacteria (Bifidobacterium bifidum N 1), lyophilized in a culture medium supplemented with lysozyme and sucrose-gelatin-milk medium. The drug is available in the form of crystalline or porous masses of different shades of beige or gray in glass bottles with a capacity of 12 ml, containing 5 doses of the drug. One dose of the drug contains from 10 ⁶ to 10 ⁸ CFU / ml of bifidobacteria 5-20 mg of lysozyme. The drug is highly soluble in water, aqueous solutions and milk; when a dry preparation is dissolved in water at the rate of 1 ml per 1 dose of the drug, a homogeneous cloudy suspension with a characteristic taste and smell is formed after 3-4-fold agitation.

Средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисбактериоза с дисфункций кишечника изготовляют следующим образом. Вначале выращивают маточную культур бифидобактерий, которую после специальной обработки или без нее используют для выращивания основной микробной биомассы. Для этого маточную культуру бифидобактерий засевают в стерильную реакторную емкость, содержащую модифицированную среду Блаурока или аминопептидную среду культивирования из расчета 5-10% от объема питательной среды. Культивирование проводят глубинным способом при (37,5±0,5)^oС в течение 16-24 ч, затем биомассу охлаждают, переносят в стерильные емкости, добавляют вначале лизоцим, а затем среду высушивания (сахарозо-желатино-молочную среду) из расчета, чтобы в конечной суспензии было 0,05-0,2% лизоцима, 5-10% сахарозы, 1-1,5% желатина и 20-25% обезжиренного молока. Суспензию разливают в стеклянные флаконы емкостью 12 мл, замораживают при температуре 40-45^oС на срок не менее 48 часов, после чего лиофилизируют в вакуум-сушильных аппаратах. Флаконы с высушенным препаратом закрывают герметично в атмосфере воздуха стерильными резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Весь технологический процесс осуществляется в асептических условиях, с поэтапным контролем за отсутствием посторонней микрофлоры и количества живых бифидобактерий.An agent for the treatment and prevention of dysbiosis and dysbiosis with intestinal dysfunctions is made as follows. First, the uterine culture of bifidobacteria is grown, which, after special treatment or without it, is used to grow the main microbial biomass. For this, the uterine culture of bifidobacteria is seeded in a sterile reactor vessel containing a modified Blaurock medium or aminopeptide culture medium at the rate of 5-10% of the volume of the nutrient medium. Cultivation is carried out by a deep method at (37.5 ± 0.5) ^o C for 16-24 hours, then the biomass is cooled, transferred to sterile containers, lysozyme is added first, and then the drying medium (sucrose-gelatin-milk medium) is calculated so that in the final suspension was 0.05-0.2% lysozyme, 5-10% sucrose, 1-1.5% gelatin and 20-25% skim milk. The suspension is poured into glass bottles with a capacity of 12 ml, frozen at a temperature of 40-45 ^o C for a period of not less than 48 hours, and then lyophilized in a vacuum dryer. Vials with the dried preparation are closed hermetically in an atmosphere of air with sterile rubber stoppers and wrapped in metal caps. The whole process is carried out under aseptic conditions, with phased control over the absence of extraneous microflora and the number of living bifidobacteria.

Пример 1. Для приготовления препарата ампулу с лиофилизированной культурой производственного штамма бифидобактерий растворяли в 5 мл стерильной дистиллированной воды и вносили в бутыль, содержащую 100 мл модифицированной полужидкой среды Калурока. Инкубировали в анаэростате при 38^oС в течение 24 часов и после контроля микробной чистоты и количества живых бифидобактерий полученную маточную культуру с титром 10^-9 КОЕ/мл засевали в лабораторный реактор, куда предварительно была внесена модифицированная аминопептидная среда в объеме 1000 мл. Культивирование проводили при 38^oС в течение 20 ч, затем биомассу вновь отбирали на контроль и переносили в отдельную бутыль, в которую добавляли лизоцим и среду высушивания из расчета конечных концентраций 0,05% лизоцима, 5% сахарозы, 1% желатина, 20% обезжиренного молока. После тщательного перемешивания взвесь разливали автоматически в стерильные стеклянные "пенициллиновые" флаконы, помещенные в кассеты. Кассеты загружали в низкотемпературный ларь с температурной около 45^oС на 48 часов, затем переносили в вакуум-сушильный аппарат ПГ-50 и лиофилизировали. Флаконы закрывали стерильными резиновыми пробками и обкатывали металлическими колпачками.Example 1. To prepare the drug, an ampoule with a lyophilized culture of a production strain of bifidobacteria was dissolved in 5 ml of sterile distilled water and introduced into a bottle containing 100 ml of Kalurok’s modified semi-liquid medium. Incubated in an anaerostat at 38 ^o C for 24 hours and after controlling the microbial purity and the number of live bifidobacteria, the resulting uterine culture with a titer of 10 ^-9 CFU / ml was seeded in a laboratory reactor, where a modified amine peptide medium was previously introduced in a volume of 1000 ml. The cultivation was carried out at 38 ^o C for 20 h, then the biomass was again selected for control and transferred to a separate bottle into which lysozyme and drying medium were added based on final concentrations of 0.05% lysozyme, 5% sucrose, 1% gelatin, 20% skim milk. After thorough mixing, the suspension was automatically poured into sterile glass "penicillin" vials placed in cassettes. Cassettes were loaded into a low-temperature chest with a temperature of about 45 ^o C for 48 hours, then transferred to a PG-50 vacuum dryer and lyophilized. The vials were closed with sterile rubber stoppers and circled in metal caps.

В полученной серии препарата содержание лизоцима и бифидобактерий соответствовало расчетному и составило соответственно 5 мг и 10⁸ КОЕ на одну дозу.In the obtained series of the drug, the content of lysozyme and bifidobacteria corresponded to the calculated one and amounted to 5 mg and 10 ⁸ CFU per dose, respectively.

Новый препарат предназначен к применению у детей всех возрастных групп, включая новорожденных, и взрослых для лечения и профилактики дисбактериозов разного генеза и локализации, дисфункций кишечника, кишечных инфекций, кольпитов бактериальной и гормональной этиологии. The new drug is intended for use in children of all age groups, including newborns, and adults for the treatment and prevention of dysbiosis of various origins and localizations, intestinal dysfunctions, intestinal infections, colpitis of bacterial and hormonal etiology.

Ориентировочная схема применения. Рекомендуется для приема внутрь по 0,5-3 флакона (2,5-15 доз) в сутки за 1-3 приема в течение 1-3 недель в зависимости от возраста пациента, характера, стадии, тяжести течения заболевания и применяемой терапии, состояния иммунобиологической реактивности организма. При необходимости можно применять на фоне антибактериальной и цитостатической терапии
Способ применения. Содержимое 1 флакона растворить перед употреблением в 2 чайных ложках свежепрокипяченой и охлажденной до комнатной температуры воды, перемешать встряхиванием. Полученную взвесь, содержащую в 1 чайной ложке около 2,5 доз препарата, следует принимать за 20-30 минут до еды непосредственно перед приемом пищи. При необходимости применять препарат в меньшей дозе, например по 1,25 дозы 2 раза в день (2,5 дозы в сутки), содержимое флакона следует разделить на 4 части и 1/4 часть развести в отдельной посуде для разового приема.Approximate application scheme. It is recommended for oral administration of 0.5-3 bottles (2.5-15 doses) per day for 1-3 doses for 1-3 weeks, depending on the age of the patient, the nature, stage, severity of the disease and the therapy used, condition immunobiological reactivity of the body. If necessary, it can be used on the background of antibacterial and cytostatic therapy
Mode of application. Dissolve the contents of 1 bottle before use in 2 teaspoons of freshly boiled and cooled to room temperature water, mix with shaking. The resulting suspension containing about 2.5 doses of the drug in 1 teaspoon should be taken 20-30 minutes before meals immediately before meals. If necessary, use the drug in a lower dose, for example, 1.25 doses 2 times a day (2.5 doses per day), the contents of the vial should be divided into 4 parts and 1/4 part diluted in a separate bowl for a single dose.

При местном применении препарат разводят аналогичным образом, смачивают полученной суспензией тампон из расчета 2-2,5 дозы на 1 манипуляцию и обрабатывают этим тампоном область соска и ареолы за 20-30 минут до прикладывания ребенка к груди. When applied topically, the drug is diluted in the same way, the swab obtained is moistened with a tampon at the rate of 2-2.5 doses per 1 manipulation, and the nipple and areola are treated with this swab 20-30 minutes before the baby is applied to the breast.

Для нитравагинального применения препарат растворяют в воде из расчета содержания в двух чайных ложках взвеси 2,5-10 доз, пропитывают тампон и вводят его глубоко во влагалище, оставляя на 2-3 часа 1 раз в сутки в течение 5-7 дней. For nitravaginal use, the drug is dissolved in water based on the content in two teaspoons of a suspension of 2.5-10 doses, impregnated with a tampon and injected deep into the vagina, leaving it for 2-3 hours 1 time per day for 5-7 days.

Эффективность предлагаемого препарата подтверждена в экспериментах на здоровых мышах и на модели экспериментального дисбактериоза, индуцированного тетрациклином. The effectiveness of the proposed drug is confirmed in experiments on healthy mice and on a model of experimental dysbiosis induced by tetracycline.

Пример 1. В экспериментах на белых беспородных мышах с исходной массой тела 14-16 г предлагаемый препарат (препарат I) и бифидумбактерин (препарат II) вводили интрагастрально, по 0,25 дозы на мышь ежедневно в течение 1-3 недель. Сравнительное морфометрическое изучение показало, что препарат I сильнее, чем препарат II стимулирует клеточные факторы местного иммунитета ЖКТ, что наиболее выражено после 2-недельного применения препарата. В таблице 2 показано, что после 14 дн. применения 1 объемная доля лимфо-плазмоцитарной инфильтрации (ЛПИ) собственной пластинки слизистой оболочки тонкой и толстой кишки возросла по сравнению с контролем в 2,39 и 2,34 раза соответственно, причем в тонкой кишке это происходило за счет преимущественного возрастания числа плазмоцитов (в 2,6 раза), а в толстой лимфоцитов (в 4,15 раза). В тот же срок под влиянием препарата II доля ЛПИ в тонкой и толстой кишке увеличилась всего в 1,6 и 1,34 раза соответственно, а количество лимфоцитов в толстой кишке в 2,23 раза. При этом степень выраженности стимулирующего эффекта препарата II на клетки толстой кишки практически не зависела от длительности применения: объемная доля ЛПИ превышала контрольный уровень в 1,23-1,34 раза, а составляющих ЛПИ лимфоцитов в 2,1-2,23 раза. В двенадцатиперстной кишке различия в эффекте препарата I и II были менее выражены: через 7 суток применения препаратов ЛПИ возрастала в 1,5-1,52 раза, после 14 суток соответственно в 1,68 и 1,5 раза преимущественно за счет плазмоцитов; после 3 недель применения обоих препаратов численность ЛПИ и составляющих ее клеток имела тенденцию к снижению по сравнению с предшествующим сроком. Example 1. In experiments on white outbred mice with an initial body weight of 14-16 g, the proposed drug (preparation I) and bifidumbacterin (preparation II) were administered intragastrally, at a dose of 0.25 per mouse daily for 1-3 weeks. A comparative morphometric study showed that drug I is stronger than drug II stimulates cellular factors of local immunity of the gastrointestinal tract, which is most pronounced after a 2-week use of the drug. Table 2 shows that after 14 days. 1 volume fraction of lymphoplasmocytic infiltration (LPI) of the own plate of the mucous membrane of the small and large intestine increased 2.39 and 2.34 times, respectively, compared to the control, and this happened in the small intestine due to a predominant increase in the number of plasmocytes (2 , 6 times), and in the colon lymphocytes (4.15 times). At the same time, under the influence of drug II, the proportion of LPI in the small and large intestine increased only 1.6 and 1.34 times, respectively, and the number of lymphocytes in the colon 2.23 times. At the same time, the degree of severity of the stimulating effect of drug II on colon cells was practically independent of the duration of use: the volume fraction of LPI exceeded the control level by 1.23-1.34 times, and the constituent LPI of lymphocytes by 2.1-2.23 times. In the duodenum, differences in the effect of the drug I and II were less pronounced: after 7 days of administration of the drugs, LPI increased 1.5-1.52 times, after 14 days, respectively, 1.68 and 1.5 times mainly due to plasmocytes; after 3 weeks of using both drugs, the number of LPI and its constituent cells tended to decrease compared to the previous period.

Под влиянием препарата I отмечено возрастание объемной доли межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) в двенадцатиперстной и тонкой кишке, причем их количество было максимальным через 7 дн. от начала эксперимента, в 1,73 раза превышая уровень контроля, а после 3 недель применения препарата 1 этот показатель в указанных отделах кишечника несколько снижался (в 1,4 раза выше уровня контроля). После применения препарата сравнения (II) объемная доля МЭЛ не изменялась. Таким образом, у здоровых животных препарат I, в отличие от II, эффективнее стимулирует клеточные факторы местного иммунитета ЖКТ за счет увеличения числа иммунокомпетентных клеток. Оптимальным сроком применения препарата I можно считать 2 недели, поскольку нарастания стимулирующего эффекта не происходит при более длительном применении препарата в указанной дозе. Under the influence of drug I, an increase in the volume fraction of interepithelial lymphocytes (MEL) in the duodenum and small intestine was noted, and their number was maximum after 7 days. from the beginning of the experiment, 1.73 times higher than the control level, and after 3 weeks of using drug 1, this indicator in the indicated sections of the intestine slightly decreased (1.4 times higher than the control level). After using the preparation of comparison (II), the volume fraction of MEL did not change. Thus, in healthy animals, drug I, in contrast to II, more efficiently stimulates cellular factors of local gastrointestinal immunity by increasing the number of immunocompetent cells. The optimal period of use of drug I can be considered 2 weeks, since the increase in the stimulating effect does not occur with a longer use of the drug in the specified dose.

Пример 2. На модели развивающегося тетрациклин-индуцированного дисбактериоза выявлена выраженная эффективность предлагаемого препарата. Белым беспородным мышам массой тела 16-18 г вводили интрагастрально ежедневно тетрациклин в дозе 750 мг/кг, которая, как известно, вызывает у мышей глубокий дисбактериоз. Одновременно с антибиотиком по той же схеме вводили предлагаемый препарат (препарат I) или бифидумбактерин (препарата II) по 0,25 дозы на мышь. Тетрациклин вызывал выраженное повреждающее действие на слизистую оболочку всех отделов кишечника, что характеризовалось резким отеком собственной пластинки слизистой оболочки и ее подслизистого слоя, особенно в толстой кишке, деструкцией большого числа энтероцитов, бокаловидных клеток, колоноцитов, деформацией и нарушением структуры железистой ткани. Морфометрически выявлено достоверное снижение объемной доли ЛПИ и ее лимфоидных элементов, особенно плазмоцитов в двенадцатиперстной и тонкой кишке (соответственно 4,5% и 9% от уровня контроля). Применение препарата I одновременно с тетрациклином в значительной степени снизило повреждающее действие антибиотика на слизистую оболочку ЖКТ. Главные и обкладочные клетки желудка имели обычное строение и форму, отсутствовали признаки раздражения и повреждения слизистой. Уменьшилась отечность тканей стенки всех отделов кишечника, степень и частота повреждения энтероцитов, колоноцитов и бокаловидных клеток, железистой ткани, хотя объемная доля бокаловидных клеток была ниже контроля. В составе ЛПИ приближалась к уровню контроля объемная доля лимфоцитов, возрастало, хотя и медленнее, количество плазмоцитов и МЭЛ. В двенадцатиперстной кишке соотношение плазмоцитов и лимфоцитов оставалось на уровне физиологической нормы. Под влиянием препарата II (бифидумбактерин) также уменьшалась отечность тканей и степень повреждения клеточных элементов слизистой оболочки ЖКТ, отмечалась лучшая сохранность лимфоидных клеток и меньшие нарушения их соотношения, чем при использовании одного тетрациклина, однако положительные изменения были выражены слабее, чем при применении препарата I. Деструктивные изменения слизистой оболочки ЖКТ под влиянием тетрациклина сопровождались двукратным повышением активности α₁-ПИ, который относят к белкам острой фазы воспаления. Применение препарата I предотвращало это повышение антипротеиназной активности, тогда как при аналогичном применении бифидумбактерина активность α₁-ПИ оставалась высокой.Example 2. On a model of developing tetracycline-induced dysbiosis, the expressed effectiveness of the proposed drug is revealed. Outbred white mice weighing 16-18 g were injected intragastrally daily with a dose of 750 mg / kg tetracycline, which is known to cause deep dysbacteriosis in mice. At the same time as the antibiotic, the proposed drug (drug I) or bifidumbacterin (drug II) was administered at the 0.25 dose per mouse. Tetracycline caused a pronounced damaging effect on the mucous membrane of all parts of the intestine, which was characterized by a sharp swelling of the lamina propria mucosa and its submucosal layer, especially in the colon, destruction of a large number of enterocytes, goblet cells, colonocytes, deformation and violation of the structure of glandular tissue. Morphometrically revealed a significant decrease in the volume fraction of LPI and its lymphoid elements, especially plasmocytes in the duodenum and small intestine (respectively 4.5% and 9% of the control level). The use of drug I simultaneously with tetracycline significantly reduced the damaging effect of the antibiotic on the gastrointestinal mucosa. The main and lining cells of the stomach had the usual structure and shape, there were no signs of irritation and damage to the mucosa. Swelling of the tissues of the wall of all sections of the intestine, the degree and frequency of damage to enterocytes, colonocytes and goblet cells, glandular tissue decreased, although the volume fraction of goblet cells was lower than the control. In the LPI, the volume fraction of lymphocytes approached the control level, and the number of plasmocytes and MEL increased, although more slowly. In the duodenum, the ratio of plasmocytes to lymphocytes remained at the physiological norm. Under the influence of drug II (bifidumbacterin), swelling of tissues and the degree of damage to the cellular elements of the gastrointestinal mucosa also decreased, better preservation of lymphoid cells and less disturbance of their ratio than when using tetracycline alone, but positive changes were less pronounced than when using drug I. Destructive changes in the gastrointestinal mucosa under the influence of tetracycline were accompanied by a twofold increase in the activity of α ₁ -PI, which is attributed to the proteins of the acute phase of inflammation. The use of drug I prevented this increase in antiproteinase activity, while with a similar use of bifidumbacterin, the activity of α ₁ -PI remained high.

Таким образом, применение предлагаемого препарата одновременно с антибиотиком широкого спектра тетрациклином позволяет снизить токсическое действие антибиотика не только на слизистую оболочку ЖКТ, обеспечить сохранность морфологических структур, уменьшение клеточных факторов местного иммунитета кишечника, но и предотвратить индуцированное токсической дозой антибиотика нарушение факторов обеспечения гомеостаза, в частности, изменение активности одного из ингибиторов протеиназ-α₁-протеиназного ингибитора сыворотки крови.Thus, the use of the proposed drug simultaneously with a broad-spectrum antibiotic tetracycline can reduce the toxic effect of the antibiotic not only on the gastrointestinal mucosa, ensure the preservation of morphological structures, decrease cellular factors of local intestinal immunity, but also prevent the toxic factors induced by the antibiotic from violating homeostasis, in particular , a change in the activity of one of the inhibitors of proteinases-α ₁ -proteinase inhibitor of blood serum.

Предлагаемый препарат обладает комплексным биологическим действием, направленным на ускорение нормализации микробиоценоза, ускорение восстановления морфологической структуры слизистой оболочки и клеточных факторов местного иммунитета, коррекцию иммунобиологической реактивности и ряд показателей гомеостаза, повышение неспецифической резистентности к неблагоприятным медикаментозным, алиментарным, экологическим, инфекционным и прочим воздействиям. The proposed drug has a complex biological effect aimed at accelerating the normalization of microbiocenosis, accelerating the restoration of the morphological structure of the mucous membrane and cellular factors of local immunity, correction of immunobiological reactivity and a number of indicators of homeostasis, increasing nonspecific resistance to adverse drug, alimentary, environmental, infectious and other influences.

Claims (1)

Средство для лечения и профилактики дисбактериоза и дисфункций кишечника, включающее лиофилизированную биомассу бифидобактерий, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит лизоцим в количестве 5 20 мг в одной дозе при содержании бифидобактерий 10⁶ 10⁸ КОЕ.An agent for the treatment and prevention of dysbiosis and intestinal dysfunction, including lyophilized biomass of bifidobacteria, characterized in that it additionally contains lysozyme in an amount of 5 to 20 mg per dose with a content of bifidobacteria of 10 ⁶ 10 ⁸ CFU.