RU2041944C1 - Strain of bacteria paracoccusdenitrificans being destructor of aniline, 3-chloraniline,4-chloraniline and 3,4-dichloraniline - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: is prepared strain Paracoccus denitrificans. Said strain is destructor of aniline, 3-chloraniline, 4-chloraniline and 3,4-dichloraniline. EFFECT: improves quality of desired product.

Description

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма деструктора 3,4-дихлоранилина (ДХА), 3-хлоранилина (ЗХА), 4-хлоранилина (4ХА), перспективного в работе по очистке сточных вод от загрязнений. The invention relates to the microbiological industry and relates to a new strain of the destructor 3,4-dichloroaniline (DCA), 3-chloraniline (ZXA), 4-chloraniline (4XA), promising in the work on wastewater treatment from pollution.

Известен штамм Pseudomonas putida, который в присутствии анилина минерализует ДХА/5 мг/л за 40 ч [1]
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм Pseudomonas diminuta ИНМИ КС-7ВКМ-148g, использующий ДХА в качестве единственного источника углерода, азота и энергии. Предельная концентрация, при которой наблюдается рост 50 мг/л. Это количество ДХА в условиях аэрации исчезает за 96 ч. Характерным признаком штамма является абсолютная потребность в метеонине как в факторе роста [2]
Недостатки известных штаммов сравнительно низкий уровень деструктивной активности, торможение микроорганизмов при увеличении концентрации ДХА в среде для культивирования выше 50 мг/л.A known strain of Pseudomonas putida, which in the presence of aniline mineralizes DHA / 5 mg / l for 40 hours [1]
The closest in technical essence and the achieved positive effect is the strain Pseudomonas diminuta INMI KS-7VKM-148g, using DCA as the sole source of carbon, nitrogen and energy. The maximum concentration at which there is an increase of 50 mg / l. This amount of DCA under aeration disappears in 96 hours. A characteristic feature of the strain is the absolute need for meteonin as a growth factor [2]
The disadvantages of the known strains are a relatively low level of destructive activity, inhibition of microorganisms with an increase in the concentration of DCA in the culture medium above 50 mg / L.

Недостатком штамма P. diminuta ИНМИ КС-7 ВКМ-148g, помимо указанных качеств, является необходимость внесения в среду для культивирования метионина, что в производственных условиях приводит к увеличению стоимости процесса очистки. The disadvantage of the strain P. diminuta INMI KS-7 VKM-148g, in addition to these qualities, is the need to introduce methionine into the culture medium, which under industrial conditions leads to an increase in the cost of the cleaning process.

Цель изобретения получение штамма-деструктора анилина и хлоранилинов с высокой активностью и простыми питательными потребностями. The purpose of the invention to obtain a strain of the destructor of aniline and chloralin with high activity and simple nutritional needs.

Штамм бактерии получен путем выделения наиболее быстро растущей колонии на агаризованной синтетической среде с ДХА после длительного выдерживания почвы, взятой с рисовников Кубани, в среде, содержащей ДХА. The bacterial strain was obtained by isolating the fastest growing colony on an agarized synthetic medium with DCA after prolonged exposure to soil taken from Kuban draftsmen in a medium containing DCA.

Полученный штамм бактерий депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером S-1193. The resulting bacterial strain was deposited in the All-Union Collection of Industrial Microorganisms (VKPM) under the number S-1193.

Штамм P.denitrificans ВКПМ-S-1193 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками. The strain P.denitrificans VKPM-S-1193 is characterized by the following cultural-morphological and physiological-biochemical characteristics.

Клетки сферической формы 0,5-1 мкм в диаметре встречаются в парах и поодиночке. Неподвижные, грамотрицательные. Мясопептонный агар (28, 48 ч). Образует блестящие, слизистые, круглые, белые колонии диаметром 2-4 мм. При хранении в холодильнике на твердых агаризованных средах ослизнение колоний увеличивается. Минеральная среда с ДХА. Колонии круглые с ровными краями, блестящие, слизистые диаметром 1-2 мм. Жидкая минеральная среда с ДХА. Образует муть, плотный осадок, который при взбалтывании легко взмучивается. Пигмент в среду не выделяет. Spherical cells of 0.5-1 μm in diameter are found in pairs and individually. Fixed, gram-negative. Meat peptone agar (28, 48 h). It forms shiny, mucous, round, white colonies with a diameter of 2-4 mm. When stored in a refrigerator on solid agarized media, mucosal colony increases. Mineral environment with DHA. The colonies are round with smooth edges, shiny, mucous with a diameter of 1-2 mm. Liquid mineral medium with DHA. Forms turbidity, a dense precipitate that easily agitates when shaken. The pigment does not emit on Wednesday.

Аэроб, дает положительную катализную и оксидазную реакции, в клетках накапливает полиоксимасляную кислоту. Растет при 36^оС, не растет при 4^оС. Оптимальная температура для роста 28-30^оС. Оптимум рН 6,7-7,2. Крахмал и желатин не гидролизует. Нитраты восстанавливает до N. Расчет анаэробно с нитритом в качестве акцептора электронов.Aerob, gives a positive catalysis and oxidase reaction, accumulates polyoxybutyric acid in the cells. It grows at 36 ^{° C,} does not grow at 4 ° ^C. The optimum temperature for growth 28-30 ° ^C Optimum pH 6.7-7.2. Starch and gelatin do not hydrolyze. The nitrate is reduced to N. Calculation anaerobically with nitrite as an electron acceptor.

Хорошо усваивает и растет на D-глюкозе, D-фруктозе, сахарозе, трегалозе, ацетате, пропионате, лактате, пирувате, цитрате, сукцинате, n-оксибензойной кислоте, бензойной кислоте. It is well absorbed and grows on D-glucose, D-fructose, sucrose, trehalose, acetate, propionate, lactate, pyruvate, citrate, succinate, n-hydroxybenzoic acid, benzoic acid.

Хорошо хранится в водопроводной воде в течение года. It is well stored in tap water throughout the year.

Штамм идентифицирован по Определителю Берги (19) как штамм вида Paracoccus denitrificans. The strain was identified by the Bergi Identifier (19) as a strain of the species Paracoccus denitrificans.

П р и м е р 1. Посевной материал получают выращиванием штамма, взятого с агаризованной синтетической среды с 4ХА. Состав среды, г/л: KHPO 7,0; KHPO 3,0; MgSO₄ 0,1; ДХА 0,1-0,12; дистиллированная вода.PRI me R 1. Inoculum is obtained by growing a strain taken from agarized synthetic medium with 4XA. The composition of the medium, g / l: KHPO 7.0; KHPO 3.0; MgSO ₄ 0.1; DHA 0.1-0.12; distilled water.

Культивирование производят при 30^оС в течение 48 ч.Cultivation is carried out at 30 ^about C for 48 hours

Приготовленный посевной материал в количестве 10 клеток/мл вносят в 750 мл колбы, содержащие 100 мл среды того же состава. В этих условиях ДХА исчезает за 96 ч, высвобождение иона хлора составляет 100%
П р и м е р 2. Посевной материал, полученный способом, описанным в примере 1, вносят в 750 мл колбы, содержащие 100 мл синтетической среды, где ДХА заменен на 4ХА 0,5-0,7 г/л. В этих условиях 4ХА исчезает за 24 ч, высвобождение иона хлора составляет 100%
П р и м е р 3. Посевной материал, полученный способом, описанным в примере 1, вносят в 750 мл колбы, содержащие 100 мл синтетической среды, где в качестве субстрата роста взят анилин 5 г/л. В этих условиях анилин исчезает за 48-60 ч.The prepared seed in the amount of 10 cells / ml is added to 750 ml flasks containing 100 ml of medium of the same composition. Under these conditions, DHA disappears in 96 hours; the release of chlorine ion is 100%
PRI me R 2. Inoculum obtained by the method described in example 1, contribute to 750 ml flasks containing 100 ml of synthetic medium, where DCA is replaced by 4XA 0.5-0.7 g / L. Under these conditions, 4XA disappears in 24 hours, the release of chlorine ion is 100%
PRI me R 3. Inoculum obtained by the method described in example 1, contribute to 750 ml flasks containing 100 ml of synthetic medium, where aniline 5 g / l was taken as a growth substrate. Under these conditions, aniline disappears in 48-60 hours.

Преимущества штамма P. denitrificans КРЗ по сравнению со штаммом P. diminuta ИНМИ КС-7: способность разрушать более высокие концентрации ДХА (до 130 мг/л), 4ХА и 3ХА (600 мг/л), использование в качестве источника углерода и азота анилина в высоких концентрациях (до 5 г/л), что позволит использовать предлагаемый штамм и для очистки промышленных стоков, содержащих анилин, отсутствие зависимости от факторов роста, что позволяет в условиях производства экономить затраты на процесс очистки. Advantages of P. denitrificans HRH strain compared to P. diminuta INMI KS-7 strain: ability to destroy higher concentrations of DCA (up to 130 mg / l), 4XA and 3XA (600 mg / l), use of aniline as a carbon and nitrogen source in high concentrations (up to 5 g / l), which will allow the proposed strain to be used for the treatment of industrial effluents containing aniline, the absence of dependence on growth factors, which allows saving costs for the cleaning process under production conditions.

Таким образом, штамм P. denitrificans КРЗ не только превосходит по способности разрушать известные штаммы, но является более технологичным по своим свойствам. Формула изобретения штамм Paracoccus denitrificans деструктор анилина, 3-хлоранилина, 4-хлоранилина и 3,4-анилина. Thus, the strain P. denitrificans KRZ not only surpasses the ability to destroy known strains, but is more technologically advanced in its properties. The claims of the strain Paracoccus denitrificans aniline, 3-chloraniline, 4-chloraniline and 3,4-aniline destructor.

Claims (1)

Штамм Paracoccus denitrificans ВКПМs-1993 деструктор анилина, 3-хлоранилина, 4-хлоранилина и 3,4-дихлоранилина. The strain of Paracoccus denitrificans VKPMs-1993 is aniline, 3-chloraniline, 4-chloraniline and 3,4-dichloroaniline destructor.