RU2020123264A - Мультспецифические антитела, мультспецифические активируемые антитела и способы их применения - Google Patents
Мультспецифические антитела, мультспецифические активируемые антитела и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020123264A RU2020123264A RU2020123264A RU2020123264A RU2020123264A RU 2020123264 A RU2020123264 A RU 2020123264A RU 2020123264 A RU2020123264 A RU 2020123264A RU 2020123264 A RU2020123264 A RU 2020123264A RU 2020123264 A RU2020123264 A RU 2020123264A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cathepsin
- caspase
- bispecific
- protease
- activatable antibody
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Epidemiology (AREA)
Claims (40)
1. Биспецифическое активируемое антитело, которое в активированном состоянии специфически связывается с EGFR и со второй мишенью, где биспецифическое активируемое антитело содержит
антитело (AB1), которое специфически связывается с EGFR, где AB1 содержит антитело IgG, содержащее VH CDR1 тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13; и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14; и VL CDR1 легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15; VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17;
scFv (АВ2), который специфично связывается со второй мишенью, где АВ2 слит с амино-концом каждой тяжелой цепи АВ1;
первую маскирующую группу (MM1), соединенную с АВ1, которая ингибирует связывание АВ1 с EGFR, если биспецифическое активированное антитело находится в нерасщепленном состоянии;
первую расщепляемую группу (CM1), связанную с AB1, где CM1 представляет собой полипептид, который служит в качестве субстрата для первой протеазы, и где СМ1 связан с ММ1;
вторую маскирующую группу (MM2), соединенную с АВ2, которая ингибирует связывание АВ2 с мишенью, если биспецифическое активированное антитело находится в нерасщепленном состоянии; и
вторую расщепляемую группу (CM2), связанную с AB2, где CM2 представляет собой полипептид, который служит в качестве субстрата для второй протеазы, и где CM2 связан с MM2.
2. Биспецифическое активируемое антитело по п.1, где MM1 при связывании с AB1 имеет константу равновесной диссоциации, превышающую константу равновесной диссоциации при связывании AB1 с EGFR, где СМ1 расположена в активируемом антителе таким образом, что в нерасщепленном состоянии MM1 препятствует специфическому связыванию AB1 с мишенью или эпитопом злокачественной опухоли, где MM1 не влияет на специфическое связывание AB1 c EGFR, где MM1 не влияет и не конкурирует c AB1 за связывание с EGFR если биспецифическое активируемое антитело находится в расщепленном состоянии, где полипептидная последовательность ММ1 отличается от EGFR, где полипептидная последовательность ММ1 не более чем на 50% идентична любому природному партнеру связывания АВ1, и/или где ММ1 представляет собой полипептид, длина которого составляет не более 40 аминокислот.
3. Биспецифическое активируемое антитело по п.1 или 2, где MM2 при связывании с AB2 имеет константу равновесной диссоциации, превышающую константу равновесной диссоциации при связывании AB2 с его мишенью, где СМ2 расположена в активируемом антителе таким образом, что в нерасщепленном состоянии MM2 препятствует специфическому связыванию AB2 с мишенью, где MM2 не влияет на связывание или не конкурирует с AB2 за связывание со второй мишенью, если биспецифическое активируемое антитело находится в расщепленном состоянии, где полипептидная последовательность ММ2 отличается от второй мишени, где полипептидная последовательность ММ2 не более чем на 50% идентична любому природному партнеру связывания АВ2, и/или где ММ2 представляет собой полипептид, длина которого составляет не более 40 аминокислот.
4. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-3, где протеаза, которая расщепляет СМ1 расположена рядом с EGFR в ткани, и где протеаза расщепляет СМ1 в биспецифическом активируемом антителе, если биспецифическое активированное антитело подвергается воздействию протеазы.
5. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-4, где биспецифическое активируемое антитело содержит
связывающий пептид между ММ1 и СМ1; или
связывающий пептид между СМ1 и АВ1; или
первый связывающий пептид (LP1) и второй связывающий пептид (LP2), где биспецифическое активируемое антитело в нерасщепленном состоянии имеет следующее расположение структурных элементов в направлении от N-конца к C-концу: MM1-LP1-CM1-LP2-AB1 или AB1-LP2-CM1-LP1-MM1, необязательно, где два связывающих пептида не должны быть идентичны друг другу, необязательно, где каждый LP1 и LP2 представляет собой пептид длиной примерно от 1 до 20 аминокислот.
6. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-5, где СМ1 представляет собой субстрат для протеазы, выбранной из протеаз ADAMS, ADAMTS, ADAM8, ADAM9, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMDEC1, ADAMTS1, ADAMTS4, ADAMTS5, Аспартат-протеаз, BACE, Ренина, Аспарагиновая кислота – катепсинов, Катепсина D, Катепсина E, Каспаз, Каспазы 1, Каспазы 2, Каспазы 3, Каспазы 4, Каспазы 5, Каспазы 6, Каспазы 7, Каспазы 8, Каспазы 9, Каспазы 10, Каспазы 14, Цистеин-катепсинов, Катепсина B, Катепсина C, Катепсина K, Катепсина L, Катепсина S, Катепсина V/L2, Катепсина X/Z/P, Цистеиновых протеиназ, Крузипаина, Легумаина, Отубаина-2, KLKs, KLK4, KLK5, KLK6, KLK7, KLK8, KLK10, KLK11, KLK13, KLK14, Металлопротеиназ, Меприна, Неприлизина, PSMA, BMP-1, MMP, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP11, MMP12, MMP13, MMP14, MMP15, MMP16, MMP17, MMP19, MMP20, MMP23, MMP24, MMP26, MMP27, Сериновых протеаз, активированного белка C, Катепсина A, Катепсина G, Химазы, протеаз фактора свертывания крови, FVIIa, FIXa, FXa, FXIa, FXIIa, Эластазы, Гранзима В, Гуанидинобензоатазы, HtrA1, Эластазы человеческих нейтрофилов, Лактоферрина, Марапсина, NS3/4A, PACE4, Плазмина, PSA, tPA, Тромбина, Триптазы, uPA, Трансмембранных сериновых протеаз типа II (TTSP), DESC1, DPP-4, FAP, Гепсина, Матриптаза-2, MT-SP1/Матриптазы, TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4, и/или где СМ1 представляет собой пептид длиной до 15 аминокислот.
7. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-6, где СМ2 представляет собой субстрат для протеазы, выбранной из протеаз ADAMS, ADAMTS, ADAM8, ADAM9, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMDEC1, ADAMTS1, ADAMTS4, ADAMTS5, Аспартат-протеаз, BACE, Ренина, Аспарагиновая кислота – катепсинов, Катепсина D, Катепсина E, Каспаз, Каспазы 1, Каспазы 2, Каспазы 3, Каспазы 4, Каспазы 5, Каспазы 6, Каспазы 7, Каспазы 8, Каспазы 9, Каспазы 10, Каспазы 14, Цистеин-катепсинов, Катепсина B, Катепсина C, Катепсина K, Катепсина L, Катепсина S, Катепсина V/L2, Катепсина X/Z/P, Цистеиновых протеиназ, Крузипаина, Легумаина, Отубаина-2, KLKs, KLK4, KLK5, KLK6, KLK7, KLK8, KLK10, KLK11, KLK13, KLK14, Металлопротеиназ, Меприна, Неприлизина, PSMA, BMP-1, MMP, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP11, MMP12, MMP13, MMP14, MMP15, MMP16, MMP17, MMP19, MMP20, MMP23, MMP24, MMP26, MMP27, Сериновых протеаз, активированного белка C, Катепсина A, Катепсина G, Химазы, протеаз фактора свертывания крови, FVIIa, FIXa, FXa, FXIa, FXIIa, Эластазы, Гранзима В, Гуанидинобензоатазы, HtrA1, Эластазы человеческих нейтрофилов, Лактоферрина, Марапсина, NS3/4A, PACE4, Плазмина, PSA, tPA, Тромбина, Триптазы, uPA, Трансмембранных сериновых протеаз типа II (TTSP), DESC1, DPP-4, FAP, Гепсина, Матриптаза-2, MT-SP1/Матриптазы, TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4, и/или где СМ2 представляет собой пептид длиной не более 15 аминокислот.
8. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-7, где вторая протеаза расположена рядом со второй мишенью в ткани, и где вторая протеаза расщепляет СМ2 в биспецифическом активируемом антителе, если биспецифическое активированное антитело подвергается воздействию второй протеазы.
9. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-8, где первая протеаза и вторая протеаза расположены рядом с EGFR и второй мишенью в ткани; и/или
где первая протеаза и вторая протеаза являются разными протеазами; или
где первая протеаза и вторая протеаза являются одной и той же протеазой; или
где первая протеаза и вторая протеаза являются одной и той же протеазой, необязательно, где СМ1 и СМ2 являются разными субстратами одной протеазы.
10. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-9, где АВ2 представляет собой
scFv, связывающийся с иммунной эффекторной клеткой;
scFv, связывающийся с лейкоцитом;
scFv, связывающийся с Т-клеткой;
scFv, связывающийся с NK-клеткой;
scFv, связывающийся с макрофагом; или
scFv, связывающийся с мононуклеарной клеткой.
11. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-10, где AB2 представляет собой scFv антитела против CD3 эпсилон или scFv антитела против CTLA-4, необязательно, где scFv антитела против CD3 эпсилон получен из OKT3.
12. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-11, где AB1 содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности SEQ ID NO:254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268, 270, или АВ2 представляет собой анти-CD3 эпсилон scFc или анти-CTLA-4 scFv, или биспецифическое активируемое антитело содержит по меньшей мере часть аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 292, 294, 300, 304, 306, 308, 310, 314, 336 или любое их сочетание.
13. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-8, где AB1 специфически связывается с EGFR и AB2 связывается со второй мишенью, и где EGFR и вторая мишень являются разными, или где AB1 связывается с первым эпитопом и AB2 связывается со вторым эпитопом, необязательно, где первый эпитоп и второй эпитоп находятся на одной и той же мишени или на разных мишенях.
14. Биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-10, где АВ2 специфически связывается с СD3.
15. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая биспецифическое активируемое антитело по п.1.
16. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.15.
17. Способ получения биспецифического активируемого антитела путем культивирования клетки в условиях, приводящих к экспрессии биспецифического активируемого антитела, где клетка содержит молекулу нуклеиновой кислоты по п.15.
18. Конъюгат, содержащий биспецифическое активируемое антитело по любому из пп.1-14 и средство, которое представляет собой терапевтическое средство, противоопухолевое средство, токсин или его фрагмент, детектируемую группу или диагностический агент, необязательно, средство конъюгировано с антителом посредством линкера, необязательно, линкер представляет собой расщепляющийся линкер или нерасщепляющийся линкер.
19. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественной опухоли, содержащая биспецифическое активируемое антитело любого из пп.1-14 или конъюгат по п.18.
20. Способ получения биспецифического активируемого антитела по п.1, где способ включает
(а) культивирование клетки, содержащей вектор экспрессии, который кодирует биспецифическое активируемое антитело по п.1, в условиях, которые приводят к экспрессии биспецифического активируемого антитела по п.1, и (b) выделение биспецифического активируемого антитела.
21. Применение биспецифического активируемого антитела по любому из пп.1-4 или конъюгата по п.18 или фармацевтической композиции по п.19 или биспецифического активируемого антитела, полученного способом по п.20, для облегчения симптома клинического заболевания больного, где антитело вводят больному в количестве, достаточном для облегчения симптома клинического заболевания, связанного со злокачественной опухолью у пациента, где антитело вводят пациенту в количестве, достаточном для облегчения симптома клинического симптома, связанного со злокачественной опухолью, где указанный пациент является человеком.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361858402P | 2013-07-25 | 2013-07-25 | |
| US61/858,402 | 2013-07-25 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016106115A Division RU2727836C2 (ru) | 2013-07-25 | 2014-07-25 | Мультспецифические антитела, мультспецифические активируемые антитела и способы их применения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020123264A true RU2020123264A (ru) | 2020-10-14 |
| RU2815683C2 RU2815683C2 (ru) | 2024-03-20 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2021087429A5 (ru) | ||
| JP2019513014A5 (ru) | ||
| US20210355219A1 (en) | Conditionally activated target-binding molecules | |
| CN101340928B (zh) | 抑制补体激活的修饰的蛋白酶 | |
| Beaufort et al. | Interdependence of kallikrein-related peptidases in proteolytic networks | |
| CA2807269A1 (en) | Activatable bispecific antibodies | |
| US20200385469A1 (en) | Release segments and binding compositions comprising same | |
| JP2023521384A (ja) | 活性化可能抗体を含む組成物 | |
| KR20180038560A (ko) | 키메라 폴리펩티드 조립체와 이의 제조 및 사용 방법 | |
| JP2009521926A5 (ru) | ||
| JP2024026296A (ja) | 組換えヒトシアリダーゼ、シアリダーゼ融合タンパク質およびそれらの使用方法 | |
| US20240043488A1 (en) | Activatable il-12 polypeptides and methods of use thereof | |
| JP2022538894A (ja) | 組換えヒトシアリダーゼ、シアリダーゼ融合タンパク質およびその使用方法 | |
| WO2021146455A1 (en) | Cytokine il-2 prodrugs comprising a cleavable linker | |
| CN105001336A (zh) | Pcsk9拮抗剂 | |
| RU2020123264A (ru) | Мультспецифические антитела, мультспецифические активируемые антитела и способы их применения | |
| RIPPMANN et al. | Fusion of the tissue factor extracellular domain to a tumour stroma specific single-chain fragment variable antibody results in an antigen-specific coagulation-promoting molecule | |
| ES2264938T3 (es) | Adn que codifica la serina proteasa eos humana. | |
| JP2023532021A (ja) | プロテアーゼ感受性が低減された組換えシアリダーゼ、シアリダーゼ融合タンパク質、及びその使用方法 | |
| JPWO2021236676A5 (ru) | ||
| US20240076378A1 (en) | Her-2 targeted bispecific compositions and methods for making and using the same | |
| WO2023183888A1 (en) | Activatable antigen-binding protein constructs and uses of the same | |
| AU2022314797A1 (en) | Linker polypeptides | |
| KR20240070507A (ko) | 링커 폴리펩타이드 | |
| WO2024030847A1 (en) | Protease-cleavable moieties and methods of use thereof |