Claims (42)
1. Эмбриональная стволовая (ES) клетка мыши, которая была генетически модифицирована таким образом, чтобы она содержала в своем геноме:1. An embryonic stem (ES) cell of a mouse that has been genetically modified to contain in its genome:
(a) единственную перегруппированную последовательность Vκ/Jκ человека, функционально связанную с мышиной константной областью κ, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека заменяет эндогенные генные сегменты вариабельной области легкой цепи κ иммуноглобулина мыши в эндогенном локусе легкой цепи κ иммуноглобулина, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека или единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека; и(a) a single rearranged human Vκ / Jκ sequence operably linked to a murine κ constant region, where a single rearranged human Vκ / Jκ sequence replaces endogenous mouse immunoglobulin κ light chain variable region gene segments at an endogenous immunoglobulin κ light chain locus, where the only rearranged sequence Human Vκ / Jκ is a single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence or a single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence; and
(b) множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанных с эндогенной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека заменяет эндогенные генные сегменты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.(b) a plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments operably linked to an endogenous mouse immunoglobulin heavy chain constant region, wherein multiple human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments replace endogenous mouse immunoglobulin heavy chain variable region gene segments at an endogenous immunoglobulin heavy chain locus mice.
2. ES клетка по п. 1, где геном ES клетки содержит интронный энхансер κ мыши, расположенный выше мышиной константной области κ.2. The ES cell of claim 1, wherein the ES cell genome comprises a murine intronic κ enhancer located upstream of the murine κ constant region.
3. ES клетка по любому из пп. 1, 2, где геном ES клетки содержит 3'-энхансер κ мыши, расположенный ниже мышиной константной области κ.3. ES cell according to any one of paragraphs. 1, 2, where the ES cell genome contains a mouse κ 3'-enhancer located downstream of the mouse κ constant region.
4. ES клетка по любому из пп. 1-3, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH1-2, VH1-8, VH1-18, VH1-24, VH2-5, VH3-7, VH3-9, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-20, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-43, VH3-48, VH4-31, VH4-34, VH4-59 или VH6-1 человека или их сочетание.4. ES cell according to any one of paragraphs. 1-3, where many gene segments of the variable region of the heavy chain of human immunoglobulin contains the gene segment V H 1-2, V H 1-8, V H 1-18, V H 1-24, V H 2-5, V H 3 -7, V H 3-9, V H 3-11, V H 3-13, V H 3-15, V H 3-20, V H 3-23, V H 3-30, V H 3-33 , V H 3-43, V H 3-48, V H 4-31, V H 4-34, V H 4-59, or V H 6-1 human, or a combination thereof.
5. ES клетка по любому из пп. 1-4, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент D1-7, D1-26, D3-3, D3-10, D3-16, D3-22, D5-5, D5-12, D6-6, D6-13 или D7-27 человека или их сочетание.5. ES cell according to any one of paragraphs. 1-4, where the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments contains the gene segment D1-7, D1-26, D3-3, D3-10, D3-16, D3-22, D5-5, D5-12, D6 -6, D6-13, or D7-27 human, or a combination thereof.
6. ES клетка по любому из пп. 1-5, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент JH1, JH3, JH4, JH5 или JH6 человека или их сочетание.6. ES cell according to any one of paragraphs. 1-5, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprise a human J H 1, J H 3, J H 4, J H 5, or J H 6 gene segment, or a combination thereof.
7. ES клетка по любому из пп. 1-6, где мышиная константная область κ представляет собой константную область κ мыши или крысы.7. ES cell according to any one of paragraphs. 1-6, wherein the murine κ constant region is a mouse or rat κ constant region.
8. ES клетка по любому из пп. 1-7, где мышиная константная область κ представляет собой эндогенную константную область κ мыши.8. ES cell according to any one of paragraphs. 1-7, wherein the murine κ constant region is the endogenous murine κ constant region.
9. ES клетка по любому из пп. 1-8, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека.9. ES cell according to any one of paragraphs. 1-8, where the single rearranged human Vκ / Jκ sequence is the only rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence.
10. ES клетка по любому из пп. 1-9, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека, содержащую единственный сегмент Vκ1-39 зародышевой линии человека и единственный сегмент Jκ зародышевой линии человека.10. ES cell according to any one of paragraphs. 1-9, where the single rearranged human Vκ / Jκ sequence is a single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence containing a single human germline Vκ1-39 segment and a single human germline Jκ segment.
11. ES клетка по п. 9 или 10, где единственная перегруппированная последовательность Vκ1-39/Jκ человека содержит генный сегмент Jκ5 человека.11. The ES cell of claim 9 or 10, wherein the single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence comprises a human Jκ5 gene segment.
12. ES клетка по п. 11, где единственная перегруппированная последовательность Vκ1-39/Jκ5 человека содержит последовательность, представленную нуклеотидами 2362-2686 в SEQ ID NO: 1.12. The ES cell of claim 11, wherein the single rearranged human Vκ1-39 / Jκ5 sequence comprises the sequence represented by nucleotides 2362-2686 in SEQ ID NO: 1.
13. ES клетка по п. 11 или 12, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH2-5, VH3-23, VH3-30, VH4-59 и VH5-51.13. ES cell according to claim 11 or 12, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprises a V H 2-5, V H 3-23, V H 3-30, V H 4-59 and V H gene segment 5-51.
14. ES клетка по любому из пп. 1-8, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека.14. ES cell according to any one of paragraphs. 1-8, where the single rearranged human Vκ / Jκ sequence is the only rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence.
15. ES клетка по любому из пп. 1-8 и 14, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека, содержащую единственный сегмент Vκ3-20 зародышевой линии человека и единственный сегмент Jκ зародышевой линии человека.15. ES cell according to any one of paragraphs. 1-8 and 14, where the single rearranged human Vκ / Jκ sequence is a single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence containing a single human germline Vκ3-20 segment and a single human germline Jκ segment.
16. ES клетка по п. 14 или 15, где единственная перегруппированная последовательность Vκ3-20/Jκ человека содержит генный сегмент Jκ1 человека.16. The ES cell of claim 14 or 15, wherein the single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence comprises a human Jκ1 gene segment.
17. ES клетка по п. 16, где единственная перегруппированная последовательность Vκ3-20/Jκ1 человека содержит последовательность, представленную нуклеотидами 2373-2697 в SEQ ID NO: 11.17. The ES cell of claim 16, wherein the single rearranged human Vκ3-20 / Jκ1 sequence comprises the sequence represented by nucleotides 2373-2697 in SEQ ID NO: 11.
18. ES клетка по п. 16 или 17, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH4-39 и VH5-51.18. The ES cell of claim 16 or 17, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprise a V H 4-39 and V H 5-51 gene segment.
19. Эмбрион мыши, полученный из ES клетки по п. 1.19. A mouse embryo obtained from an ES cell according to claim 1.
20. Способ получения мыши, включающий вынашивание эмбриона мыши по п. 19 в суррогатной матери и предоставление суррогатной матери возможности родить потомство, полученное полностью или частично из эмбриональной стволовой клетки.20. A method of obtaining a mouse, comprising carrying a mouse embryo according to claim 19 in a surrogate mother and allowing the surrogate mother to give birth to offspring obtained in whole or in part from an embryonic stem cell.
21. Способ получения генетически модифицированной ES клетки, при этом способ включает генетическую модификацию ES клетки таким образом, чтобы она содержала в своем геноме:21. A method for producing a genetically modified ES cell, the method comprising genetically modifying an ES cell so that it contains in its genome:
(a) единственную перегруппированную последовательность Vκ/Jκ человека, функционально связанную с мышиной константной областью κ, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека заменяет эндогенные генные сегменты вариабельной области легкой цепи κ иммуноглобулина мыши в эндогенном локусе легкой цепи κ иммуноглобулина, и где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека или единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека; и(a) a single rearranged human Vκ / Jκ sequence operably linked to a murine κ constant region, where a single rearranged human Vκ / Jκ sequence replaces endogenous mouse immunoglobulin κ light chain variable region gene segments at an endogenous immunoglobulin κ light chain locus, and where the only rearranged the human Vκ / Jκ sequence is a single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence or a single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence; and
(b) множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека, функционально связанных с эндогенной константной областью тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека заменяет эндогенные генные сегменты вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина мыши в эндогенном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина мыши.(b) a plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments operably linked to an endogenous mouse immunoglobulin heavy chain constant region, wherein multiple human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments replace endogenous mouse immunoglobulin heavy chain variable region gene segments at an endogenous immunoglobulin heavy chain locus mice.
22. Способ по п. 21, где геном ES клетки содержит интронный энхансер κ мыши, расположенный выше мышиной константной области κ.22. The method of claim 21, wherein the ES cell genome comprises a murine intronic κ enhancer located upstream of the murine κ constant region.
23. Способ по п. 21 или 22, где геном ES клетки содержит 3'-энхансер κ мыши, расположенный ниже мышиной константной области κ.23. The method of claim 21 or 22, wherein the ES cell genome comprises a murine κ 3'-enhancer located downstream of the murine κ constant region.
24. Способ по любому из пп. 21-23, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH1-2, VH1-8, VH1-18, VH1-24, VH2-5, VH3-7, VH3-9, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-20, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-43, VH3-48, VH4-31, VH4-34, VH4-59 или VH6-1 человека или их сочетание.24. The method according to any one of paragraphs. 21-23, where a plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprises a V H 1-2, V H 1-8, V H 1-18, V H 1-24, V H 2-5, V H 3 gene segment -7, V H 3-9, V H 3-11, V H 3-13, V H 3-15, V H 3-20, V H 3-23, V H 3-30, V H 3-33 , V H 3-43, V H 3-48, V H 4-31, V H 4-34, V H 4-59, or V H 6-1 human, or a combination thereof.
25. Способ по любому из пп. 21-24, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент D1-7, D1-26, D3-3, D3-10, D3-16, D3-22, D5-5, D5-12, D6-6, D6-13 или D7-27 человека или их сочетание.25. The method according to any one of paragraphs. 21-24, where a plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments contains the gene segment D1-7, D1-26, D3-3, D3-10, D3-16, D3-22, D5-5, D5-12, D6 -6, D6-13, or D7-27 human, or a combination thereof.
26. Способ по любому из пп. 21-25, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент JH1, JH3, JH4, JH5 или JH6 человека или их сочетание.26. The method according to any of paragraphs. 21-25, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprises a human J H 1, J H 3, J H 4, J H 5, or J H 6 gene segment, or a combination thereof.
27. Способ по любому из пп. 21-26, где мышиная константная область κ представляет собой константную область κ мыши или крысы.27. The method according to any of paragraphs. 21-26, wherein the murine κ constant region is a mouse or rat κ constant region.
28. Способ по любому из пп. 21-27, где мышиная константная область κ представляет собой эндогенную константную область κ мыши.28. The method according to any one of paragraphs. 21-27, where the mouse κ constant region is an endogenous mouse κ constant region.
29. Способ по любому из пп. 21-28, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека.29. The method according to any one of paragraphs. 21-28, where the only rearranged human Vκ / Jκ sequence is the only rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence.
30. Способ по любому из пп. 21-29, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека, содержащую единственный сегмент Vκ1-39 зародышевой линии человека и единственный сегмент Jκ зародышевой линии человека.30. The method according to any one of paragraphs. 21-29, where the only rearranged human Vκ / Jκ sequence is a single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence containing a single human germline Vκ1-39 segment and a single human germline Jκ segment.
31. Способ по п. 29 или 30, где единственная перегруппированная последовательность Vκ1-39/Jκ человека содержит генный сегмент Jκ5 человека.31. The method of claim 29 or 30, wherein the single rearranged human Vκ1-39 / Jκ sequence comprises a human Jκ5 gene segment.
32. Способ по п. 31, где единственная перегруппированная последовательность Vκ1-39/Jκ5 человека содержит последовательность, представленную нуклеотидами 2362-2686 в SEQ ID NO: 1.32. The method of claim 31, wherein the single rearranged human Vκ1-39 / Jκ5 sequence comprises the sequence represented by nucleotides 2362-2686 of SEQ ID NO: 1.
33. Способ по п. 31 или 32, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH2-5, VH3-23, VH3-30, VH4-59 и VH5-51.33. The method of claim 31 or 32, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprises a V H 2-5, V H 3-23, V H 3-30, V H 4-59 and V H 5 gene segment -51.
34. Способ по любому из пп. 21-28, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека.34. The method according to any one of paragraphs. 21-28, where the only rearranged human Vκ / Jκ sequence is the only rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence.
35. Способ по любому из пп. 21-28 и 34, где единственная перегруппированная последовательность Vκ/Jκ человека представляет собой единственную перегруппированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека, содержащую единственный сегмент Vκ3-20 зародышевой линии человека и единственный сегмент Jκ зародышевой линии человека.35. The method according to any one of paragraphs. 21-28 and 34, where the single rearranged human Vκ / Jκ sequence is a single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence containing a single human germline Vκ3-20 segment and a single human germline Jκ segment.
36. Способ по п. 34 или 35, где единственная перегруппированная последовательность Vκ3-20/Jκ человека содержит генный сегмент Jκ1 человека.36. The method of claim 34 or 35, wherein the single rearranged human Vκ3-20 / Jκ sequence comprises a human Jκ1 gene segment.
37. Способ по п. 36, где единственная перегруппированная последовательность Vκ3-20/Jκ1 человека содержит последовательность, представленную нуклеотидами 2373-2697 в SEQ ID NO: 11.37. The method of claim 36, wherein the single rearranged human Vκ3-20 / Jκ1 sequence comprises the sequence represented by nucleotides 2373-2697 in SEQ ID NO: 11.
38. Способ по п. 36 или 37, где множество генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина человека содержит генный сегмент VH4-39 и VH5-51.38. The method of claim 36 or 37, wherein the plurality of human immunoglobulin heavy chain variable region gene segments comprises a V H 4-39 and V H 5-51 gene segment.