RU2019120393A - Оптимизация изготовления gl-2045, мультимеризующегося страдомера - Google Patents

Оптимизация изготовления gl-2045, мультимеризующегося страдомера Download PDF

Info

Publication number
RU2019120393A
RU2019120393A RU2019120393A RU2019120393A RU2019120393A RU 2019120393 A RU2019120393 A RU 2019120393A RU 2019120393 A RU2019120393 A RU 2019120393A RU 2019120393 A RU2019120393 A RU 2019120393A RU 2019120393 A RU2019120393 A RU 2019120393A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
homodimer
total composition
fraction
composition
paragraphs
Prior art date
Application number
RU2019120393A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2790232C2 (ru
RU2019120393A3 (ru
Inventor
Дэвид С. БЛОК
Эммануэль Й. МЕРИЖЕОН
Хенрик ОЛСЕН
Original Assignee
Гликник Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Гликник Инк. filed Critical Гликник Инк.
Publication of RU2019120393A publication Critical patent/RU2019120393A/ru
Publication of RU2019120393A3 publication Critical patent/RU2019120393A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2790232C2 publication Critical patent/RU2790232C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
    • C12N5/0686—Kidney cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)

Claims (98)

1. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, в которой фракция гомодимера указанной композиции GL-2045 составляет менее 20% от всей композиции.
2. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, в которой фракция мультимеров высшего порядка указанной композиции GL-2045 составляет по меньшей мере приблизительно 30% от всей композиции.
3. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой димер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 7% до приблизительно 12% от всей композиции.
4. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой тример гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 11% от всей композиции.
5. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой тетрамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 15% от всей композиции.
6. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой пентамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 10% от всей композиции.
7. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой гексамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 14% от всей композиции.
8. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, по п. 1 или 2, в которой фракции от димера гомодимера до 6-членных мультимеров составляют в общей сложности приблизительно 40-60% от всей композиции.
9. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, в которой:
a) гомодимерная фракция составляет менее приблизительно 20% от всей композиции;
b) фракции мультимеров высшего порядка составляют по меньшей мере приблизительно 30% от всей композиции;
c) димер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 7% до приблизительно 11% от всей композиции;
d) тример гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 11% от всей композиции;
е) тетрамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 15% от всей композиции;
f) пентамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 10% от всей композиции;
g) гексамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 14% от всей фракции;
h) фракция от димера гомодимера до гексамера гомодимера составляет от приблизительно 40% до приблизительно 60% от всей композиции;
i) фракции от тримера гомодимера до гексамера гомодимера составляют от приблизительно 32% до приблизительно 50% от всей композиции;
j) фракции от тетрамера гомодимера до гексамера гомодимера составляют от приблизительно 26% до приблизительно 39%;
k) фракции от пентамера гомодимера до гексамера гомодимера составляют от приблизительно 18% до приблизительно 23% от всей композиции; или
l) присутствует любая комбинация (a)-(k).
10. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, в которой:
a) гомодимерная фракция составляет менее приблизительно 20% от всей композиции;
b) фракции мультимеров высшего порядка составляют по меньшей мере приблизительно 30% от всей композиции;
c) димер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 7% до приблизительно 11% от всей композиции;
d) тример гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 11% от всей композиции;
e) тетрамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 15% от всей композиции;
f) пентамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 6% до приблизительно 10% от всей композиции; и
g) гексамер гомодимерной фракции составляет от приблизительно 10% до приблизительно 14% от всей фракции.
11. Композиция GL-2045, полученная рекомбинантным способом, в которой:
a) гомодимерная фракция составляет менее приблизительно 20% от всей композиции;
b) фракции мультимеров высшего порядка составляют по меньшей мере приблизительно 30% от всей композиции;
h) фракция от димера гомодимера до гексамера гомодимера составляет от приблизительно 40% до приблизительно 60% от всей композиции;
i) фракции от тримера гомодимера до гексамера гомодимера составляют от приблизительно 32% до приблизительно 50% от всей композиции;
j) фракции от тетрамера гомодимера до гексамера гомодимера составляют от приблизительно 26% до приблизительно 39% от всей композиции; и
k) фракция от пентамера гомодимера до гексамера гомодимера составляет от приблизительно 18% до приблизительно 23% от всей композиции.
12. Способ лечения или предотвращения воспалительного, аутоиммунного или инфекционного заболевания или нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, с применением полученного рекомбинантным способом очищенного GL-2045 по любому из пп. 1-11.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанное заболевание или нарушение выбрано из идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, хронической воспалительной полинейропатии, мультифокальной моторной нейропатии, миастении гравис, трансплантации органов и ревматоидного артрита.
14. Способ по любому из пп. 11 или 12, отличающийся тем, что указанный GL-2045 вводят внутривенно, подкожно, перорально, внутрибрюшинно, сублингвально, буккально, трансдермально, с помощью субдермального имплантата или внутримышечно.
15. Способ получения GL-2045, включающий:
(a) культивирование клеток яичника китайского хомяка (СНО), которые были стабильно трансфицированы вектором экспрессии, кодирующим GL-2045, при 37°C±1°C до тех пор, пока клетки СНО не достигнут плотности клеток от приблизительно 5 до приблизительно 30 миллионов клеток/мл;
(b) изменение температуры выращивания с 37ºC±1ºC до 32,5ºC±1ºC; и
(c) сбор GL-2045 из культуральных сред.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанные клетки выращивают до плотности от приблизительно 10 до приблизительно 25 миллионов клеток/мл перед изменением температуры выращивания.
17. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанные клетки выращивают до плотности от приблизительно 10 до приблизительно 15 миллионов клеток/мл перед изменением температуры выращивания.
18. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанные клетки выращивают до плотности от приблизительно 15 до приблизительно 20 миллионов клеток/мл перед изменением температуры выращивания.
19. Способ по любому из пп. 15-18, отличающийся тем, что указанное культивирование проводят в основных культуральных средах ActiCHO P.
20. Способ по любому из пп. 15-19, отличающийся тем, что во время культивирования указанных клеток СНО вносят ActiCHO Feed A и ActiCHO Feed B.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что указанные клетки СНО обеспечивают добавкой к питательной среде через день.
22. Способ по любому из пп. 15-21, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии, кодирующий GL-2045, содержит лидерный пептид, имеющий последовательность SEQ ID NO: 1.
23. Способ по любому из пп. 15-22, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии, кодирующий GL-2045, дополнительно содержит последовательность распознавания транспозазы piggyBac и трансфицируется с вектором, кодирующим транспозазу piggyBac.
24. Способ по любому из пп. 15-23, отличающийся тем, что указанный вектор экспрессии, кодирующий GL-2045, приводит менее чем к 20 геномным вставкам.
25. Полученный рекомбинантным способом GL-2045, изготовленный способом по любому из пп. 15-24.
26. Вектор экспрессии, кодирующий GL-2045, содержащий кассету экспрессии GL-2045, причем указанная кассета экспрессии GL-2045 фланкирована минимальными инвертированными повторяющимися элементами piggyBac.
27. Способ получения GL-2045, включающий:
(a) трансфекцию клеток яичника китайского хомяка (СНО) вектором экспрессии по п. 26;
(b) культивирование указанных клеток СНО согласно стадии (a) в биореакторе со средами ActiCHO P при температуре выращивания 37°C±1°C;
(c) ежедневную подачу Acti CHO Feed A и Acti CHO Feed B к культурам согласно стадии (b) при температуре выращивания 37°C±1ºC до тех пор, пока культуры не достигнут плотности клеток от приблизительно 10 миллионов до приблизительно 15 миллионов клеток/мл;
(d) изменение температуры выращивания с 37°C±1°C до 32,5ºC±1°C; и
(e) сбор GL-2045 из культуральных сред, причем указанные способы приводят к жизнеспособности клеток >80% на 21 день и к конечному титру белка >9000 мг/мл, из которых >70% GL-2045 присутствует в виде мультимера, при этом >30% мультимеров представляют собой мультимеры GL-2045 более высокого порядка.
28. Способ по п. 27, отличающийся тем, что указанная жизнеспособность клеток превышает 95% на 18 день культивирования.
29. Способ по любому из пп. 27 или 28, отличающийся тем, что указанное процентное содержание мультимеров превышает 80%.
30. Способ очистки GL-2045, полученного с помощью способов по любому из предыдущих пунктов, включающий:
(a) очистку GL-2045 из культурального супернатанта с помощью аффинной хроматографии; и
(b) заключительную очистку GL-2045 с помощью одной или более из катионообменной хроматографии, анионообменной хроматографии и хроматографии гидрофобного взаимодействия.
31. Способ по п. 30, отличающейся тем, что для проведения аффинной хроматографии применяют колонку с белком A.
32. Способ по любому из пп. 30 или 31, отличающийся тем, что указанная колонка с белком A представляет собой устойчивую к NaOH колонку.
33. Способ по любому из пп. 30-32, отличающийся тем, что указанная колонка с белком A содержит смолу MabSelect SuRue.
34. Способ по любому из пп. 30-33, отличающийся тем, что указанная очистка с помощью аффинной хроматографии включает применение одного из трех различных промывочных буферов для оптимизации условий очистки.
35. Способ по любому из пп. 30-34, отличающийся тем, что указанная очистка с помощью аффинной хроматографии включает элюирование GL-2045 из колонки для аффинной хроматографии.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что элюирование GL-2045 включает элюирование с градиентом рН.
37. Способ по п. 35, отличающийся тем, что элюирование GL-2045 включает элюирование без градиента рН.
38. Способ по любому из пп. 30-35, отличающийся тем, что указанную колонку для аффинной хроматографии регенерируют для удаления связанного GL-2045.
39. Способ по п. 38, отличающийся тем, что указанную колонку для аффинной хроматографии регенерируют чаще, чем предложено производителем.
40. Способ по п. 38, отличающийся тем, что указанную колонку для аффинной хроматографии регенерируют перед каждым циклом очистки.
41. Способ по п. 38, отличающийся тем, что указанную колонку для аффинной хроматографии регенерируют 0,5 М NaOH-буфером.
42. Способ по любому из пп. 30-41, отличающийся тем, что заключительная очистка GL-2045 включает анионообменную хроматографию в проточном режиме.
43. Способ по п. 42, отличающийся тем, что анионообменная хроматография в проточном режиме включает применение колонки Q Sepharose Fast Flow.
44. Способ по любому из пп. 30-43, отличающийся тем, что заключительная очистка GL-2045 включает катионообменную хроматографию.
45. Способ по п. 44, отличающийся тем, что катионообменная хроматография включает применение колонки POROS XS.
46. Способ по любому из пп. 44 или 45, отличающийся тем, что катионообменная хроматография включает применение элюирующего буфера с ацетатом натрия.
47. Способ по п. 46, отличающийся тем, что указанный элюирующий буфер дополнительно содержит 36,5-38,5% 1 М NaCl-буфера.
48. Способ по любому из пп. 30-41, отличающийся тем, что заключительная очистка GL-2045 включает хроматографию гидрофобного взаимодействия.
49. Способ по п. 48, отличающийся тем, что хроматография гидрофобного взаимодействия включает применение смолы бутил-FF.
50. Способ по п. 48, отличающийся тем, что хроматография гидрофобного взаимодействия включает применение смолы фенил-HP.
51. Способ по п. 49 или 50, отличающийся тем, что указанная колонка позволяет выделять гомодимер GL-2045.
52. Способ по п. 48, отличающийся тем, что хроматография гидрофобного взаимодействия включает применение смолы октил-FF.
53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что указанная колонка приводит к удалению неупорядоченных агрегатов GL-2045.
54. Способ очистки GL-2045, включающий:
(a) очистку GL-2045 от культурального супернатанта с помощью аффинной хроматографии с белком A, причем в колонке с белком A применяют устойчивую к щелочи среду, такую как среда MabSelect SuRe, при этом очистку выполняют с по меньшей мере двумя циклами промывки и при этом процедуры очистки на месте (CIP) выполняют после каждого цикла очистки с этапом регенерации высокой концентрацией NaOH, например, 0,5 М NaOH-буфером.
55. Способ заключительной очистки GL-2045, включающий:
(a) заключительную очистку GL-2045 с помощью катионообменной хроматографии, причем катионообменная колонка содержит смолу с высокой емкостью и высоким разрешением, такую как POROS XS, и при этом элюирующий буфер представляет собой буфер на основе ацетата натрия, содержащий 36,5-38,5% 1 М NaCl-буфера;
(b) заключительную очистку GL-2045 с помощью анионообменной хроматографии, причем анионообменная колонка содержит сильную анионообменную среду, которая обладает высокой химической стабильностью, позволяет осуществлять протоколы очистки на месте и обеззараживания, например, среду Q Sepharose Fast Flow; и
(c) заключительную очистку GL-2045 с помощью хроматографии гидрофобного взаимодействия, причем среда для гидрофобного взаимодействия представляет собой смолу бутил-FF, фенил-HP или октил-FF и выбрана так, чтобы обеспечивать выделение или удаление конкретной фракции GL-2045 в дополнение к заключительной очистке.
56. Способ по любому из пп. 54 или 55, отличающийся тем, что указанный конечный титр белка GL-2045 составляет >4 г/л.
57. Способ по любому из пп. 54-56, отличающийся тем, что указанная готовая белковая композиция GL-2045 содержит >70% мультимеров.
58. Способ по п. 57, отличающийся тем, что указанные мультимеры представляют собой мультимеры более высокого порядка.
59. Полученный рекомбинантным способом очищенный GL-2045, изготовленный с помощью способа по п. 27.
RU2019120393A 2016-12-09 2017-12-08 Оптимизация изготовления gl-2045 - мультимеризующегося страдомера RU2790232C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662432402P 2016-12-09 2016-12-09
US62/432,402 2016-12-09
PCT/US2017/065397 WO2018107079A1 (en) 2016-12-09 2017-12-08 Manufacturing optimization of gl-2045, a multimerizing stradomer

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019120393A true RU2019120393A (ru) 2021-01-12
RU2019120393A3 RU2019120393A3 (ru) 2021-05-31
RU2790232C2 RU2790232C2 (ru) 2023-02-15

Family

ID=

Also Published As

Publication number Publication date
AU2022252699A1 (en) 2022-11-03
PH12019501133A1 (en) 2019-08-19
EP3551647A1 (en) 2019-10-16
US20220204552A1 (en) 2022-06-30
WO2018107079A1 (en) 2018-06-14
JP2023052137A (ja) 2023-04-11
PE20191354A1 (es) 2019-10-01
AU2017371179B2 (en) 2022-07-14
KR20190095929A (ko) 2019-08-16
MX2019006573A (es) 2019-11-18
CN110177802A (zh) 2019-08-27
US20200239518A1 (en) 2020-07-30
JP2020503855A (ja) 2020-02-06
US11795193B2 (en) 2023-10-24
AU2022252699B2 (en) 2024-02-22
RU2019120393A3 (ru) 2021-05-31
ZA201903157B (en) 2022-12-21
TW201835098A (zh) 2018-10-01
EP3551647A4 (en) 2021-01-13
US11155574B2 (en) 2021-10-26
IL266936A (en) 2019-08-29
AU2017371179A1 (en) 2019-05-23
CA3043261A1 (en) 2018-06-14
CO2019005851A2 (es) 2019-06-19
BR112019009484A2 (pt) 2019-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9708400B2 (en) Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) Protein purification using displacement chromatography
US20220177516A1 (en) Cation exchange chromatography methods
JP6783767B2 (ja) 組換えタンパク質を精製する方法
US20160264617A1 (en) Integrated Approach to the Isolation and Purification of Antibodies
US11919925B2 (en) Virus filtration
JP7382383B2 (ja) 産生細胞株エンハンサー
WO2013176754A1 (en) Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
JP6480906B2 (ja) 洗浄用組成物、タンパク質精製方法、及びタンパク質
US20160272674A1 (en) Isolation and purification of antibodies
TW201348246A (zh) 利用蛋白質ａ親和性層析之人類、人類化或嵌合抗體之新穎純化
JP2023145727A (ja) プロテインａクロマトグラフィー中の不純物の除去を促進する方法
RU2019120393A (ru) Оптимизация изготовления gl-2045, мультимеризующегося страдомера
JP2020503855A5 (ru)
JP6906497B2 (ja) 変異型ヒトエリスロポエチンの製造方法
US20220281914A1 (en) Protein compositions and methods for producing and using the same
Wan et al. Biopharmaceutical Applications
WO2014142882A1 (en) Protein purification using displacement chromatography

Legal Events

Date Code Title Description
FZ9A Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal)

Effective date: 20220318