RU2012107634A - Способы и продукты для увеличенной экспрессии и процессинга трансгена - Google Patents
Способы и продукты для увеличенной экспрессии и процессинга трансгена Download PDFInfo
- Publication number
- RU2012107634A RU2012107634A RU2012107634/10A RU2012107634A RU2012107634A RU 2012107634 A RU2012107634 A RU 2012107634A RU 2012107634/10 A RU2012107634/10 A RU 2012107634/10A RU 2012107634 A RU2012107634 A RU 2012107634A RU 2012107634 A RU2012107634 A RU 2012107634A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- transfection
- cell
- transgene
- specified
- gene
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
- C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/46—Vector systems having a special element relevant for transcription elements influencing chromatin structure, e.g. scaffold/matrix attachment region, methylation free island
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Способ экспрессии трансгена, включающий:(а) обеспечение эукариотической клетки хозяина, предпочтительно клетки млекопитающего, причем указанную клетку-хозяина модифицируют и/или обрабатывают для увеличения гомологичной рекомбинации (HR), уменьшения негомологичного соединения концов (NHEJ) и/или увеличения соотношения HR/NHEJ в указанной клетке, и(б) трансфекцию указанной клетки, по меньшей мере одним вектором, содержащим указанный трансген, и элементом участка прикрепления к матриксу (MAR), при этом указанный элемент MAR обеспечивают в цис- или трансположении по отношению к указанному трансгену.2. Способ по п.1, согласно которому трансфекция на стадии (б) представляет собой последующую трансфекцию, которой предшествует начальная трансфекция нуклеиновой кислотой, такой как вектор или фрагменты нуклеиновой кислоты.3. Способ по п.2, согласно которому указанные начальная и последующая трансфекции происходят в то время, когда более 30% клеток популяции находится в фазе G1.4. Способ по п.2, согласно которому нуклеиновая кислота для проведения указанной начальной трансфекции представляет собой по меньшей мере один вектор, содержащий трансген, и согласно которому по меньшей мере один из указанных векторов для начальной трансфекции и по меньшей мере один вектор для указанной по меньшей мере одной последующей трансфекции образуют одну или более конкатемерных структур перед и/или после интеграции в геном указанной клетки.5. Способ по п.1, согласно которому соотношение HR/NHEJ в указанной клетке в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30 раз больше соотношения; присутствующего в клетке, которая не содержит указанную трансгенную последовательность �
Claims (19)
1. Способ экспрессии трансгена, включающий:
(а) обеспечение эукариотической клетки хозяина, предпочтительно клетки млекопитающего, причем указанную клетку-хозяина модифицируют и/или обрабатывают для увеличения гомологичной рекомбинации (HR), уменьшения негомологичного соединения концов (NHEJ) и/или увеличения соотношения HR/NHEJ в указанной клетке, и
(б) трансфекцию указанной клетки, по меньшей мере одним вектором, содержащим указанный трансген, и элементом участка прикрепления к матриксу (MAR), при этом указанный элемент MAR обеспечивают в цис- или трансположении по отношению к указанному трансгену.
2. Способ по п.1, согласно которому трансфекция на стадии (б) представляет собой последующую трансфекцию, которой предшествует начальная трансфекция нуклеиновой кислотой, такой как вектор или фрагменты нуклеиновой кислоты.
3. Способ по п.2, согласно которому указанные начальная и последующая трансфекции происходят в то время, когда более 30% клеток популяции находится в фазе G1.
4. Способ по п.2, согласно которому нуклеиновая кислота для проведения указанной начальной трансфекции представляет собой по меньшей мере один вектор, содержащий трансген, и согласно которому по меньшей мере один из указанных векторов для начальной трансфекции и по меньшей мере один вектор для указанной по меньшей мере одной последующей трансфекции образуют одну или более конкатемерных структур перед и/или после интеграции в геном указанной клетки.
5. Способ по п.1, согласно которому соотношение HR/NHEJ в указанной клетке в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30 раз больше соотношения; присутствующего в клетке, которая не содержит указанную трансгенную последовательность и не имеет мутацию, соответственно, или согласно которому активность NHEJ равна 0.
6. Способ по п.2, согласно которому указанная по меньшей мере одна начальная трансфекция представляет собой одиночную трансфекцию.
7. Способ по п.2, согласно которому указанная по меньшей мере одна последующая трансфекция представляет собой одиночную трансфекцию.
8. Способ по п.1, согласно которому указанный трансген встраивается в геном указанной клетки в виде конкатемерной структуры в единственный локус.
9. Способ по п.2, согласно которому последовательность указанного вектора для указанной по меньшей мере одной начальной трансфекции на 100% или по меньшей мере на 95%, 90%, 85% или 80% идентична последовательности по меньшей мере вектора первой из последующих трансфекции.
10. Способ по п.2, согласно которому вектор для указанной начальной трансфекции содержит MAR элемент, и последовательность указанного MAR элемента на 100% или по меньшей мере на 95%, 90%, 85% или 80% идентична последовательности MAR элемента по меньшей мере указанного вектора для первой из указанных последующих трансфекций.
11. Способ по п.2, согласно которому вектор для указанной начальной трансфекции содержит трансген, и последовательность указанного трансгена на 100% или по меньшей мере на 95%, 90%, 85% или 80% идентична последовательности трансгена по меньшей мере указанного вектора для первой из последующих трансфекций.
12. Способ по п.1, согласно которому MAR элемент расположен выше по направлению транскрипции относительно последовательности промотора/энхансера указанного трансгена.
13. Способ по п.1, последовательность MAR элемента по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 1-3 или представляет собой их вариант.
14. Рекомбинантная эукариотическая клетка-хозяин, предпочтительно, клетка млекопитающего, содержащая
(а) трансгенную последовательность, экспрессирующую супрессор NHEJ, например, NU7026 и/или вортманнин,
(б) трансгенную последовательность, экспрессирующую один или более ферментов HR, например, Rad 51, Rad 52, RecA, Rad 54, RuvC или BRCA2, или активаторы HR, например, RS-1,
(в) мутацию, инактивирующую или подавляющую ген NHEJ, например, мутацию в гене xrcc4, гене трансферазы цепи RAD51, ген ДНК-зависимой протеинкиназы, гене Rad 52, гене RecA, гене Rad 54, гене RuvC и/или гене BRCA2, и/или
(г) мутацию, повышающую экспрессию или активность фермента HR, активатора HR или супрессора NHEJ, например, мутацию в гене xrcc4, гене трансферазы цепи RAD51, ген ДНК-зависимой протеинкиназы, гене Rad 52, гене RecA, гене Rad 54, гене RuvC и/или гене BRCA2, и трансген, интегрированный в геном указанной клетки,
причем указанная рекомбинантная эукариотическая клетка-хозяин имеет соотношение HR/NHEJ более чем в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30 раз выше, чем соотношение в клетке, которая не содержит указанную трансгенную последовательность (а) и/или (б), и
содержит элемент участка прикрепления к матриксу (MAR)
15. Клетка по п.14, отличающаяся тем, что указанный трансген интегрирован в локус генома клетки и образует конкатемерную структуру, предпочтительно конкатемерную структуру, которая содержит по меньшей мере 200, 300, 400, 500 или 600 копий трансгена.
16. Клетка по п.14, отличающаяся тем, что последовательность указанного по меньшей мере одного MAR элемента по меньшей мере на идентична 90% SEQ ID NO: 1-3, или представляет собой вариант SEQ ID NO: 1-3.
17. Клетка по п.14, отличающаяся тем, что указанный MAR элемент расположен выше по направлению транскрипции относительно последовательности промотора/энхансера указанного трансгена.
18. Применение рекомбинантной эукариотической клетки-хозяина по любому из п.п.14-17 для экспрессии указанного трансгена.
19. Набор, содержащий
(а) в первом контейнере вектор, возможно содержащий MAR элемент и сайты рестрикции для интеграции трансгена в указанный вектор,
(б) во втором контейнере рекомбинантную эукариотическую клетку-хозяина по любому из п.п.15-17, и
(в) инструкции по применению указанного вектора при трансфекции указанной клетки для экспрессии трансгена.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24395009P | 2009-09-18 | 2009-09-18 | |
| US61/243,950 | 2009-09-18 | ||
| PCT/IB2010/002337 WO2011033375A2 (en) | 2009-09-18 | 2010-09-20 | Products and methods for enhanced transgene expression and processing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012107634A true RU2012107634A (ru) | 2013-10-27 |
Family
ID=43430910
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012107634/10A RU2012107634A (ru) | 2009-09-18 | 2010-09-20 | Способы и продукты для увеличенной экспрессии и процессинга трансгена |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20120231449A1 (ru) |
| EP (1) | EP2478108A2 (ru) |
| JP (1) | JP2013505013A (ru) |
| KR (1) | KR20120099376A (ru) |
| CN (1) | CN102575264A (ru) |
| AU (1) | AU2010297011A1 (ru) |
| CA (1) | CA2774470A1 (ru) |
| IL (1) | IL218383A0 (ru) |
| RU (1) | RU2012107634A (ru) |
| SG (1) | SG178940A1 (ru) |
| WO (1) | WO2011033375A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA201201504B (ru) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8586330B2 (en) * | 2006-07-14 | 2013-11-19 | Novozymes A/S | Methods for producing secreted polypeptides having biological activity |
| US20140304847A1 (en) * | 2011-06-07 | 2014-10-09 | Ralf Kühn | Recombination efficiency by inhibition of nhej dna repair |
| KR102080356B1 (ko) * | 2011-12-22 | 2020-02-24 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 발현 벡터 구성, 신규한 생산 세포 생성 방법 및 폴리펩티드의 재조합 생산을 위한 그의 용도 |
| SG11201405721VA (en) * | 2012-03-19 | 2014-10-30 | Madeleine Pharmaceuticals Ρτy Ltd | Method of producing a recombinant peptide |
| CA2898878C (en) * | 2013-02-01 | 2020-04-28 | Selexis S.A. | Enhanced transgene expression and processing |
| US9982027B2 (en) | 2013-10-22 | 2018-05-29 | Lubris Llc | Control of rheological properties of mixed hyaluronate/lubricin solutions |
| CN109576265B (zh) * | 2014-04-01 | 2020-08-28 | 三生国健药业（上海）股份有限公司 | 一种含mar核心片段的动物细胞表达载体 |
| AU2015310976B2 (en) | 2014-09-07 | 2020-09-24 | Selexis S.A. | Microfluidic methods and cartridges for cell separation |
| CA3003538A1 (en) | 2015-12-24 | 2017-06-29 | Selexis S.A. | Improved eukaryotic cells for protein manufacturing and methods of making them |
| DK3420080T3 (da) * | 2016-02-22 | 2019-11-25 | Caribou Biosciences Inc | Fremgangsmåde til modulering af dna-repair-resultater |
| JP7096770B2 (ja) * | 2016-04-20 | 2022-07-06 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 発現強化座位の使用に基づいた抗体を作製するための組成物および方法 |
| US11834670B2 (en) * | 2017-04-19 | 2023-12-05 | Global Life Sciences Solutions Usa Llc | Site-specific DNA modification using a donor DNA repair template having tandem repeat sequences |
| US20200299729A1 (en) * | 2017-09-08 | 2020-09-24 | Life Technologies Corporation | Methods for improved homologous recombination and compositions thereof |
| EP3502259A1 (en) * | 2017-12-19 | 2019-06-26 | Universiteit Leiden | A combinational strategy for reducing random integration events when transfecting plants |
| WO2019148166A1 (en) * | 2018-01-29 | 2019-08-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods of enhancing chromosomal homologous recombination |
| WO2020034097A1 (en) * | 2018-08-14 | 2020-02-20 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Transcriptional regulatory element and its use in enhancing the expression of exogenous protein |
| US20240093259A1 (en) * | 2019-10-10 | 2024-03-21 | The Regents Of The University Of California | Methods to stabilize mammalian cells |
| CN110863008B (zh) * | 2019-11-22 | 2020-10-16 | 昆明学院 | Mar序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法 |
| MX2022010334A (es) | 2020-02-24 | 2022-09-19 | Novartis Ag | Purificacion de polipeptidos producidos recombinantemente. |
| CN115960733B (zh) * | 2022-09-19 | 2023-11-24 | 苏州泓迅生物科技股份有限公司 | 一种用于大片段dna组装的基因工程酵母菌、构建方法及其应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100408844B1 (ko) * | 2000-07-29 | 2003-12-06 | 한국산업기술평가원 | 동물세포 발현벡터 |
| DK1395669T3 (da) | 2001-01-26 | 2009-11-16 | Selexis Sa | Matriks bindingsregioner og fremgangsmåder til anvendelse af disse |
| CA2488668C (en) * | 2002-06-06 | 2013-02-26 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Modifying the dna recombination potential in eukaryotes |
| AU2004284220B2 (en) * | 2003-10-24 | 2010-10-14 | Selexis S.A. | High efficiency gene transfer and expression in mammalian cells by a multiple transfection procedure of matrix attachment region sequences |
| US20070155014A1 (en) * | 2005-07-20 | 2007-07-05 | Invitrogen Corporation | Methods for increasing efficiency of homologous recombination |
| US20090247609A1 (en) | 2007-12-20 | 2009-10-01 | Hitto Kaufmann | Sm-protein based secretion engineering |
-
2010
- 2010-09-20 US US13/496,817 patent/US20120231449A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-20 KR KR1020127006308A patent/KR20120099376A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-09-20 AU AU2010297011A patent/AU2010297011A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-20 EP EP10773969A patent/EP2478108A2/en not_active Withdrawn
- 2010-09-20 SG SG2012014593A patent/SG178940A1/en unknown
- 2010-09-20 WO PCT/IB2010/002337 patent/WO2011033375A2/en active Application Filing
- 2010-09-20 JP JP2012529354A patent/JP2013505013A/ja active Pending
- 2010-09-20 RU RU2012107634/10A patent/RU2012107634A/ru not_active Application Discontinuation
- 2010-09-20 CA CA2774470A patent/CA2774470A1/en not_active Abandoned
- 2010-09-20 CN CN2010800410646A patent/CN102575264A/zh active Pending
-
2012
- 2012-02-28 IL IL218383A patent/IL218383A0/en unknown
- 2012-02-29 ZA ZA2012/01504A patent/ZA201201504B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA201201504B (en) | 2013-04-24 |
| CN102575264A (zh) | 2012-07-11 |
| JP2013505013A (ja) | 2013-02-14 |
| SG178940A1 (en) | 2012-04-27 |
| US20120231449A1 (en) | 2012-09-13 |
| WO2011033375A2 (en) | 2011-03-24 |
| WO2011033375A3 (en) | 2011-05-12 |
| KR20120099376A (ko) | 2012-09-10 |
| AU2010297011A1 (en) | 2012-04-12 |
| CA2774470A1 (en) | 2011-03-24 |
| IL218383A0 (en) | 2012-04-30 |
| EP2478108A2 (en) | 2012-07-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2012107634A (ru) | Способы и продукты для увеличенной экспрессии и процессинга трансгена | |
| US20220162647A1 (en) | Method for inducing targeted meiotic recombinations | |
| Song et al. | CRISPR/Cas9 genome editing technology in filamentous fungi: progress and perspective | |
| CN107937432B (zh) | 一种基于crispr***的基因组编辑方法及其应用 | |
| JP2013505013A5 (ru) | ||
| Rajkumar et al. | Biological parts for Kluyveromyces marxianus synthetic biology | |
| CA3111432A1 (en) | Novel crispr enzymes and systems | |
| US20200291395A1 (en) | Novel crispr-associated transposon systems and components | |
| Zeng et al. | Expansion of CRISPR targeting sites in Bombyx mori | |
| Yang et al. | High efficiency CRISPR/Cas9 genome editing system with an eliminable episomal sgRNA plasmid in Pichia pastoris | |
| CN107164375B (zh) | 一种新型向导RNA表达盒及在CRISPR/Cas***中的应用 | |
| CN109072257B (zh) | 增强的睡美人转座子、试剂盒和转座方法 | |
| Villanueva et al. | A new member of a family of site-specific retrotransposons is present in the spliced leader RNA genes of Trypanosoma cruzi | |
| WO2020160150A1 (en) | Rna-targeting cas enzymes | |
| Ohzeki et al. | Genetic and epigenetic regulation of centromeres: a look at HAC formation | |
| Gennequin et al. | CRISPR/Cas-induced double-strand breaks boost the frequency of gene replacements for humanizing the mouse Cnr2 gene | |
| Wefelmeier et al. | Mix and match: promoters and terminators for tuning gene expression in the methylotrophic yeast Ogataea polymorpha | |
| RU2012130149A (ru) | Векторная система на основе aslv | |
| US20240110163A1 (en) | Crispr-associated based-editing of the complementary strand | |
| CA3147863A1 (en) | Materials and methods for creating strains of saccharomyces cerevisiae that exhibit an increased ability to ferment oligosaccharides | |
| Hoeksema et al. | Placing the RPL32 promoter upstream of a second promoter results in a strongly increased number of stably transfected mammalian cell lines that display high protein expression levels | |
| CN111088256B (zh) | 食蟹猴u6启动子高效表达小rna及多个小rna表达的载体构建方法 | |
| Lee et al. | Characterization of mouse peroxiredoxin I genomic DNA and its expression | |
| CA2487290A1 (en) | Ehd1 gene promoting plant flowering and utilization thereof | |
| Kravchuk et al. | Transvection in Drosophila: trans-interaction between yellow enhancers and promoter is strongly suppressed by a cis-promoter only in certain genomic regions |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20150205 |