RU2007396C1 - Способ получения n-карбоксиангидридов или n-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот - Google Patents

Способ получения n-карбоксиангидридов или n-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот Download PDF

Info

Publication number
RU2007396C1
RU2007396C1 SU894742483A SU4742483A RU2007396C1 RU 2007396 C1 RU2007396 C1 RU 2007396C1 SU 894742483 A SU894742483 A SU 894742483A SU 4742483 A SU4742483 A SU 4742483A RU 2007396 C1 RU2007396 C1 RU 2007396C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
carboxyanhydride
mmol
solution
alanyl
alanine
Prior art date
Application number
SU894742483A
Other languages
English (en)
Inventor
Д.Фуллер Вилльям
Филип Коухен Майкл
Р.Нэйдер Фред
Гудмен Меррей
Original Assignee
Биорисерч Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Биорисерч Инк. filed Critical Биорисерч Инк.
Application granted granted Critical
Publication of RU2007396C1 publication Critical patent/RU2007396C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D263/16—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D263/18—Oxygen atoms
    • C07D263/20—Oxygen atoms attached in position 2
    • C07D263/26—Oxygen atoms attached in position 2 with hetero atoms or acyl radicals directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/30—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D263/34—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D263/44—Two oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/34—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/36—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
    • C07K1/023—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution using racemisation inhibiting agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

Назначение: в пептидной химии в синтезе пептидных и белковых цепей благодаря высокой реакционной способности, отсутствия нежелательных побочных продуктов. Сущность изобретения: способ получения N-карбоксиангидридов или N-тиокарбоксиангидридов уретанзамещенных аминокислот общей ф-лы
Figure 00000001
где R - Н, R′-низший алкил, незамещенный или замещенный аминогруппой, гидроксигруппой, группой NH-C(=NH)NH2 или
Figure 00000002
, бензил или циклоалкил, Z = O, S низший алкил, незамещенный или замещенный арилом. Реагент 1: N-карбоксиангидрид или N-тиокарбоксиангидрид ф-лы

Description

Изобретение относится к способам получения N-карбоксиангидридов или N-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот, которые могут найти применение в синтезе пептидных и белковых цепей.
Известно использование N-карбоксиангидридов и их производных в качестве ацилирующих агентов при образовании пептицидных связей (1). Эти производные позволяют получать ди- и трипептиды в системах органических и водных растворителей путем тщательного регулирования температуры, рН и т. п. Однако при этом могут быть получены лишь пептиды с короткой цепью, причем получаемые продукты требуют тщательной очистки.
Цель изобретения - способ получения новых N-карбоксиангидридов или N-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот, использование которых позволяет получать пептиды с различной длиной цепи по упрощенной схеме за счет устранения необходимости в активации, фильтровании и сочетании до реакции образования пептидной связи, а также исключает рацемизацию.
Поставленная цель достигается описыввемым способом получения N-карбоксиангидридов или N-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот общей формулы I
Figure 00000007
где R = Н; R1 - низший алкил, незамещенный или замещенный аминогруппой, гидроксигруппой, группой -NHC
Figure 00000008
или R1 -
Figure 00000009
CH2- , бензил или циклоалкил Z = О, S
R11 - низший алкил, незамещенный или замещенный арилом, заключающийся в том, что N-карбоксиангидрид или N-тиокарбоксиангидрид аминокислот общей формулы II:
Figure 00000010
где значения R, R1 и Z - указаны выше, вводят во взаимодействие с галоидформиатом R11-O-
Figure 00000011
-X где Х = галоид, значения R11 указаны выше, в инертном разбавителе, в безводных условиях в присутствии третичного аминового основания. Предпочтительными условиями осуществления способа являются использование в качестве третичного амина N-метилморфолина, выделение продукта реакции - N-карбоксиангидрид уретанзащищенной аминокислоты, с помощью кристаллизации.
П р и м е р 1. Разложение N-карбоксиангидрида в зависимости от основания.
А. N-Карбоксиангидрид валина (12 мг) растворяют в сухом дистиллированном тетрагидрофуране (12 мл) и добавляют триэтиламин (30 мкл). После исчезновения N-карбоксиангидрида проводят инфракрасную спектроскопию.
В. N-Карбоксиангидрида валина (72 мг) растворяют в тетрагидрофуране (2 мл) и добавляют N-метилморфолин (25 мкл). После исчезновения N-карбоксиангидрида проводят инфракрасную спектроскопию.
Результаты экспериментов А и В приведены на графике, представленном на чертеже 1.
П р и м е р 2. N-Карбоксиангидрид N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-L-аланина.
А. Смесь L-аланина (40,3 г, 0,45 моля) и фосгена (275 мл 3,3 М раствора в тетрагидрофуране, 0,90 моля) перемешивают при температуре 62-64оС в течение 4 ч. Полученный раствор оставляют для охлаждения до комнатной температуры, фильтруют и при пониженном давлении удаляют летучие вещества. Полученное масло растворяют в 100 мл тетрагидрофурана и при перемешивании добавляют 300 мл гексана с последующим охлаждением до -20оС. Выход N-карбоксиангидрида L-аланина составил 35,79 г (69% ).
В. Раствор N-метилморфолина (8,15 г, 80,5 моля) в толуоле (50 мл) добавляют к смеси N-карбоксиангидрида L-аланина (8,84 г, 76,8 ммоля) и 9-флуоренилметилоксикарбонилхлорида (19,9 г, 76,8 ммоля) в толуоле (200 мл), находящейся при температуре 0оС. Реакционную смесь перемешивают при температуре 0оС в течение 2 ч и фильтруют. Объем растворителя доводят до 20 мл и после добавления 100 мл гексана выполняют кристаллизацию, в результате чего было получено 21,4 г (82% ) сырого N-карбоксиангидрида 9-флуоренилметилоксикарбонил-L-аланина. Этот продукт чистят путем растирания в порошок с холодным простым диизопропиловым эфиром, после чего производят рекристаллизацию из этилацетата и гексана: температура плавления 106-107оС, инфракрасный спектр (СН2Сl2) 1870, 1801, 1740 см-1; спектр ЯМР (CDCl3) δ 6-90-7,80 (m, 8 Н), 3,95-4,55 (m, 4 Н), 1,35 (d, I = 7 Гц, 3 Н).
Вычислено, % : С 67,65; Н 4,48; N 4,15.
С19Н15NO5.
Найдено, % : С 67,73; Н 4,65; N 4,19.
П р и м е р 3. N-карбоксиангидрид N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-L-лейцина.
А. N-Карбоксиангидрид L-лейцина получают из L-лейцина с достижением 78% выхода с помощью процедуры, описанной в примере ПА.
В. Смесь N-карбоксиангидрида L-лейцина) 9,2 г, 58,4 ммоль) и 9-фтороксилметилоксикарбонилхлорида (15,1 г, 58,4 ммоля) в толуоле (125 мл) охлаждают до 0оС и по каплям добавляют раствор N-метилморфолина (6,5 г, 64 ммоля) в 20 мл толуола. Реакционную смесь перемешивают при температуре 0оС в течение 2,5 ч, фильтруют и объем растворителя уменьшают до 20 мл. Добавляют гексан (480 мл), после чего этот раствор охлаждают до -20оС в течение ночи, в результате чего было получено 18,8 г (85% ) N-карбоксиангидрида N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-L-лейцина. Аналитический образец был получен путем рекристаллизации из смеси простого эфира, метиленхлорида и гексана: температура плавления 119-120оС; спектр ЯМР (CCl4) δ 7: 35-7,91 (m, 8 Н); 4,72 (t, I = 7 Гц, 2 Н); 4,58 (m, 3 Н); 4,37 (t, I = 7 Гц, 1 Н); 2,05 (m, 2 Н); 1,09 (t, I = 6 Гц, 6 Н).
Вычислено, % : С 69,64; Н 5,58; N 3,69.
С22Н21NO5.
Найдено, % : С 69,08; Н 5,97; N 3,70.
П р и м е р 4. N-Карбоксиангидрид N-а-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-N-8-трет-бутилоксикарбонил-L-лизина.
А. Смесь N-ε-трет-бутилоксикарбонил-L-лизина (1,23 г, 5,0 ммолей) и хлортриметилсилана (1,08 г, 10,0 ммолей) в тетрагидрофуране (50 мл) охлаждают до 0оС, после чего по каплям добавляют раствор триэтиламина (1,01 г, 10,0 ммолей) в 5 мл тетрагидрофурана. Эту смесь перемешивают при 0оС в течение 2,5 ч, фильтруют и добавляют к раствору фосгена (10 ммолей) в 15 мл тетрагидрофурана. Температуру повышают до 60оС и раствор перемешивают в течение 2,0 ч, затем в течение ночи при температуре окружающей среды. Летучие примеси удаляют посредством ротационного испарения, в результате чего было получено 0,79 г (58% ) N-карбоксиангидрида - N- ε-трет-бутилоксикарбонил-L-лизина. Инфракрасный спектр (СН2Сl2) 1860, 1795, 1710 см-1.
В. Смесь N-карбоксиангидрида-N-ε-третбутилоксикарбонил-L-лизина (0,79 г, 2,90 ммоля) и 9-флуоренилметилоксикарбонилхлорида (0,75 г, 2,90 ммоля) и в толуоле (25 мл) охлаждают до 0оС, после чего по каплям добавляют раствор N-метилморфолина (0,32 г, 3,2 ммоля) в толуоле (5 мл). Взаимодействие осуществляют так же, как описывалось в примере 3 В, в результате чего получают 0,88 г (66% ) N-карбоксиангидрида N-а-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-N-ε-трет-бутилоксикарбонил- L-лизина: температура плавления 81-85оС (этилацетат/гексан).
Спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,3-7,7 (m, 8 Н), 4,11-4,58 (m, 5Н), 2,95-3,20 (m, 2Н); 1,90-1,98 (m, 2Н); 0,9-1,4 (m, 13 Н).
Вычислено, % : С 65,57; Н 6,11; N 5,67.
С26Н30N2O7.
Найдено, % : С 66,33; Н 6,38; N 5,67.
П р и м е р 5. N-Карбоксиангидрид N-бензилоксикарбонил-L-аланина.
Раствор N-метилморфолина (1,06 г, 10,5 ммоля) в этилацетате (20 мл) по каплям добавляют к смеси N-карбоксиангидрида-L-аланина (из примера ПА) (0,81 г, 7,0 ммолей) и бензилкарбонилхлорида (1,89 г, 10,5 ммоля) в этилацетате (80 мл) при 0оС. Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при 0оС, фильтруют и уменьшают объем раствора до 75 мл. При перемешивании добавляют гексан (75 мл) с последующим охлаждением до -20оС, в результате чего было получено 1,20 г (71% ) N-карбоксиангидрида N-бензилоксикарбонил-L-аланина, температура плавления 101-104оС.
Спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,33 (S, 5Н), 5,27 (S, 2 Н), 4,60 (q, I = 7 Гц, 1 Н), 1,61 (d, I = 7 Гц, 3 Н).
Вычислено, % : С 57,83; Н 4,45; N 5,62.
С12 Н11NO5.
Найдено, % : С 57,60; Н 4,50; N 5.53.
П р и м е р 6. N-Карбоксиангидрид N-бензилоксикарбонил-L-лейцина.
Раствор N-метилморфолина (0,76 г, 7,50 ммоля) в этилацетате (10 мл) по каплям добавляют к раствору N-карбоксиангидрида L-лейцина (0,79 г, 5,0 ммолей) (из примера 3А) и бензилоксикарбонилхлорида (1,35 г, 7,50 ммоля) в этилацетате (50 мл) при 0оС. Реакционную смесь перемешивают при 0оС в течение 1,25 ч, фильтруют и уменьшают объем раствора до 5 мл. Добавляют гексан (50 мл) с последующим охлаждением до -20оС, в результате чего было получено 0,89 г (61% ) N-карбоксиангидрида N-бензилоксикарбонил-L-лейцина: температура плавления 72-73,5оС (простой эфир и гексан).
Спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,40 (S. 5 Н), 5,33 (S, 2Н). 4,71 (t, I = 6 Гц, 1 Н), 1,80-2,04 (m, 3 Н), 0,91 (m, 6Н).
Вычислено, % : С 61,84; Н 5,88; N 4,81.
С15Н17NO5.
Найдено, % : С 61,64; Н 6,02; N 4,90.
П р и м е р 7. N-Карбоксиангидрид N-фенилоксикарбонил-L-валина.
А. N-Карбоксиангидрид L-валина получают из L-валина с 75% выходом в соответствии с процедурой, описанной в примере ПА.
В. Повторяют процедуру, описанную в примере 5, заменяя бензилхлорформиат фенилхлорформиатом и N-карбоксиангидрид лейцина N-карбоксиангидридом валина. В результате был достигнут 78% выход N-карбоксиангидрида N-фенилоксикарбонил-L-валина: температура плавления 105-106оС (хлороформ и гексан).
Спектр ЯМР (CDCl3): δ 7,30 (m, 5 Н), 4,70 (d, J = 3,5 Гц, 1 Н), 2,60 (m, 1 Н), 1,22 (d, J = 7 Гц, 3 Н), 1,07 (d, J = 7 Гц, 3 Н). 1,07 (d, J = 7 Гц, 3 Н).
Вычислено, % : С 59,31; Н 4,98; N 5,32.
С12Н13NO5.
Найдено, % : С 59,09; Н 4,91; N 5,49.
П р и м е р 8. N-Карбоксиангидрид N-этилоксикарбонил-L-аланина.
Повторяют процедуру, описанную в примере 5, заменяя бензилхлорформиат этилхлорформиатом. В результате этого был достигнут 62% выход N-карбоксиангидрида N-этилоксикарбонил-L-аланина: температура плавления 72-73,5оС (этилацетат и гексан).
Спектр ЯМР (CDCl3) δ 4,73 (g, I = 7 Гц, 2 Н), 4,33 (g, I = 7 Гц, 1Н), 1,70 (d, I ) 7 Гц, 3 Н), 1,33 (t, J = 7 Гц, 3 Н).
Вычислено, % : С 44,92; Н 4,85; N 7,49.
С7Н9NO5.
Найдено, % : С 45,08; Н 5,03; N 7,33.
П р и м е р 9. А. N-Карбоксиангидрид L-фенилаланина получают из L-фенилаланина с достижением 53% выхода в результате выполнения процедуры, описанной в примере ПА.
В. К раствору N-карбоксиангидрида L-фенилаланина (2,5 г 13 ммолей) и бензилхлорформиата (3,4 г, 20 ммолей) в этилацетате (130 мл) по каплям добавляют раствор N-метилморфолина (2,0 г 20 ммолей) в этилацетате (10 мл) при 0оС. Полученную смесь перемешивают при температуре 0оС в течение 2,5 ч и обрабатывают так, как описано в примере 5, в результате чего было получено 2,0 г (48% ) N-карбоксиангидрида N-бензилоксикарбонил-L-фенилаланина: температура плавления 108-109оС; спектр ЯМР (CDCl3) δ 7-35 (S, 5 Н) 7,00 (m, 5 Н), 5,31 (S, 2 Н), 4,83 (m, 1 Н), 3,28 (m, 2 Н).
Вычислено, % : С 68,13; Н 5,40; N 4,42.
С18Н17NO5.
Найдено, % : С 68,11; Н 5,38; N 4,20.
П р и м е р 10. N-Тиокарбоксиангидрид фенилоксикарбонил-L-аланина.
А. О-Этил-S-метилксантогенат. К раствору этилксантогената калия (16,0 г, 100 ммолей) в воде (50 мл) по каплям добавляют диметилсульфат (12,6 г 100 ммолей) при температуре 4+1о С. После окончания добавления реакционную смесь промывали дихлорметаном (2х40 мл), после чего соединенные органические фракции высушивают (MgSO4) и концентрируют с образованием О-этил-N-метилксантогената, имеющего достаточную чистоту; необходимую для использования на следующей стадии.
В. Этоксикарбонил-L-аланина. К О-этил-S-метилксантогенату полученному выше, добавляют раствор L-аланина (8,9 г, 100 ммолей) и NaОН (4,0 г, 100 ммолей) в воде (100 мл. ). Этот раствор нагревают до 45оС в течение 2,3 ч. При осуществлении продувки N2 добавляют метанол (50 мл), после чего эту смесь перемешивают при температуре 45оС еще в течение 0,7 ч. Реакционную смесь составляют для охлаждения до комнатной температуры, промывают дихлорметаном (3х25 мл), подкисляют до рН 2,5 концентрированной НСl и экстрагируют этилацетатом (2 х 50 мл). Соединенные органические растворы высушивают (MgSO4) и концентрируют. Добавление гексана к полученному маслу позволило получить 9,5 г (54% ) этилокситиокарбонил-L-аланина в виде бесцветного твердого вещества, которое плавилось при температуре 74-78оС. Этот материал далее очищали рекристаллизацией из простого этила и гексана: температура плавления 77-79оС; инфракрасный спектр (CCl4) 3397, 1716 см-1.
С. N-Тиокарбоксиангидрид L-аланина. К раствору этилокситиокарбонил-L-аланина (3,0 г, 17 ммолей) и имидазола (1,2 г, 17 ммолей) в тетрагидрофуране (20 мл) по каплям добавляют РВr3 (5,4 г 20 ммолей) при температуре 20оС. Перемешивание продолжают до тех пор, пока твердая масса не распадалась в высокодисперсионную суспензию. Эту реакционную смесь выливают в смесь насыщенного раствора NaHCO3 (200 мл) и этилацетата (150 мл) Органический слой отделяют, промывают 1 М раствором НСl (2x х 100 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (100 мл) и рассолом (100 мл). высушивают (MgSO4) и концентрируют. При выстаивании полученное масло затвердевало. Рекристаллизация твердого вещества позволила получить 0,75 г (34% ) N-тиокарбоксиан- гидрида-L-алалина: температура плавления 91-92оС; инфракрасный спектр (ССl4) 1750, 1695 см-1.
Д. N-Тиокарбоксиангидрид фенилоксикарбонил-L-аланина.
К раствору N-тиокарбоксиангидрида L-аланина (0,49 г, 3,8 моля) в 50 мл этилацетата добавляют фенилхлорформиат (0,95 г, 6,1 ммоля) при температуре 0оС, после чего по каплям добавляют раствор N-метилморфолина (0,57 г, 5,6 ммоля) в этилацетате (10 мл) при 0оС. Полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при 0оС, фильтруют и концентрируют с образованием белого полутвердого вещества. Это полутвердое вещество растворяют в 20 мл этилацетата, добавляют гексан (150 мл), после чего смесь охлаждают до -20оС, что позволило получить 0,55 г (62% ) N-тиокарбоксиангидрида фенилоксикарбонил-L-аланина: температура плавления 110-111оС; спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,18 (m, 5Н), 4,83 (q, 1Н, I = 7 Гц), 1,71 (d, 3Н, J = = 7 Гц); инфракрасный спектр (СН2Сl2) 1810, 1740 (дублет), 0,1715 (плечо).
Вычислено, % : С 52,58; Н 3,61; N 5,58; S 12,76.
С11Н9NO4S.
Найдено, % : С 52,75; Н 3,72. N 5,36; S 12,98.
П р и м е р 11. N-Карбоксиангидрид N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-О- трет-бутил-L-треонина.
А. N-Карбоксиангидрид О-трет-бутил-L-треонина получают из О-трет-бутил-L-треонина с 57% выходом в результате использования процедуры на основе триметилсилила, описанной в примере 4А.
В. К раствору N-карбоксиангидрида О-трет-бутил-L-треонина (0,80 г, 4,0 ммоля) и 9-флуоренилметилоксикарбонилхлорида (1,0 г, 4,0 ммоля) в толуоле (50 мл) по каплям добавляют раствор N-метилморфолина (0,49 г, 4,8 ммоля) в 8 мл толуола при температуре 0оС. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при 0оС, фильтруют и удаляют летучие вещества при пониженном давлении. Остаток кристаллизуют из смеси простого эфира и гексана с образованием 1,0 г (60% ) N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-0-трет-бутил-L-треонина: температура плавления 124-127оС; спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,08-7,78 (m, 8 Н), 4,05-4,61 (m, 4 Н). 1,18 (S, 9 Н), 1,16 (d, 3Н, I = 7 Гц).
Вычислено, % : С 68,07; Н 5,95; N 3,31.
С 24Н25NO6.
Найдено, % : С 67,89; Н 5,96; N 3,28.
П р и м е р 12. N-Карбоксиангидрид этилоксикарбонил-а-аминоизомасляной кислоты.
А. N-Карбоксиангидрид а-аминоизомасляной кислоты получают с достижением 67% выхода в результате выполнения процедуры, описанной в примере 2А.
В. Повторяли процедуру, описанную в примере 8В, заменяя N-карбоксиангидрид L-аланина N-карбоксиангидридом аминоизомасляной кислоты, в результате чего был достигнут 16% выход N-карбоксиангидрида этоксикарбонил-L-аминоизомасляной кислоты: температура плавления 68-70оС (хлороформ и гексан), спектр ЯМР (CCl4) δ 4,59 (q, 2 Н, I = 7 Гц), 2,00 (S, 6 Н), 1,65 (t, 3 Н, I = = 7 Гц).
Вычислено, % : С 47,76; Н 5,51; N 6,96.
С8Н11NO5.
Найдено, % : С 47,67; Н 5,51; N 7,14.
П р и м е р 13. N-Карбоксиангидрид N-трет-бутилоксикарбонил-L-аланина.
К раствору трет-бутилового спирта (1,25 г, 16,9 ммоля) и фосгена (3,4 мл 5 М раствора в диоксане, 17 ммолей) в 80 мл этилацетата по каплям добавляют N-метилморфолин (3,4 г, 34 ммоля) при температуре -50оС. Эту реакционную смесь перемешивают в течение 0,5 ч. Затем добавляют N-карбоксиангидрид L-аланина (0,23 г, 2,0 ммоля) в этилацетате (10 мл), после чего смесь перемешивают при температуре -50оС еще в течение 0,75 ч. Добавляют N-метилморфолин (1,0 г, 10 ммолей) и перемешивание продолжают еще в течение 0,75 ч. при температуре -50оС. Твердые вещества удаляют фильтрованием, раствор концентрируют и после измельчения в порошок с гексаном получают целевой продукт. Рекристаллизация из толуола позволила получить 0,28 г (65% ) N-карбоксиангидрида N-трет-бутилокси- карбонил-L-аланина: температура плавления 103-104,5оС; спектр ЯМР (CDCl3) δ 4,71 (q, 1 Н, I = 7 Гц), 1,80 (d, 3 Н, I = 7 Гц), 1,70 (S, 9 Н).
Вычислено, % : С 50,23; Н 6,09; N 6,51.
С8Н13NO5.
Найдено, % : С 50,66; Н 6,36; N 6,38.
П р и м е р 14. N-Карбоксиангидрид N-(трет-бутилоксикарбонил)-0-бензил-L-серина.
А. N-Карбоксиангидрид О-бензил-L-серина получают с достижением 68% выхода в результате выполнения процедуры, описанной в примере ПА.
В. Повторяют процедуру, описанную в примере 13 заменяя N-карбоксиангидрид L-аланина N-карбоксиангидридом О-бензил-L-серина, в результате чего был получен N-карбоксиангидрид N (трет-бутилоксикарбонил)-О-бензил -L-серина с 52% выходом: температура плавления 98-99,5оС.
Спектр ЯМР (CCl4) δ 7,30 (m, 5Н), 4,64 (m, 3Н, бензил СН2 и протон ядра NCА), 4,09 (dd, 1Н, I = 15,5 Гц), 3,88 (dd, 1 Н, J = 15,5 Гц), 1,65 (S, 9Н).
Вычислено, % : С 59,80; Н 5,96, N 4,36.
С15Н19NO6.
Найдено, % : С 59,71; Н 6,25; N 4,05.
П р и м е р 15. Фенилоксикарбоксильное производное N-карбоксиангидрида 1-амино-1-циклогексанкарбоновой кислоты.
А. N-Карбоксиангидрид 1-амино-1-циклошексанкарбоновой кислоты получают из 1-амино-1-циклогексанкарбоновой кислоты с достижением 50% выхода в результате выполнения процедуры, описанной в примере ПА.
В. К раствору N-карбоксиангидрида, полученного в соответствии с примером А (0,85 г , 5,0 ммолей), и фенилхлорформиата (1,2 г, 7,5 ммоля) в этилацетате (30 мл), находящемуся при температуре 0оС добавляют раствор N-метилморфолина (0,76 г, 7,5 ммоля) в 8 мл этилацетата. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 0оС, фильтруют и концентрируют. Белый полутвердый остаток рекристаллизовывают из смеси простого этилового эфира, метиленхлорида и гексана с образованием 0,92 г (66% ) N-карбоксиангидрида: температура плавления 156,5-158оС; спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,28 (m, 5 Н), 1,20-3,10 (m, 10 Н).
Вычислено, % : С 62, 27; Н 5,23; N 4,84.
С15Н15NO5.
Найдено, % : С 62,03; Н 5,22; N 4,77.
П р и м е р 16. N-Карбоксиангидрид N-(9-флуоренилметилоксикарбонил)-L-лей-цина.
А. N-Карбоксиангидрид L-лейцина получали из L-лейцина с достижением 78% выхода в результате выполнения процедуры, описанной в примере ПА.
В. Смесь N-карбоксиангидрида L-лейцина (9,2 г, 58,4 ммоля в сухом дистиллированном этилацетате (150 мл) охлаждают до -10оС после чего в течение 5 мин по каплям добавляют раствор триэтиламина (9 мл, 64 ммолей) в 20 мл этилацетата. Охлаждение прекращают и реакционную смесь перемешивают в течение 15 минут. Добавляют небольшое количество безводной хлористоводородной кислоты в диоксане (4,4 М раствор, 5 мл) с тем, чтобы убедиться в полной нейтрализации триэтиламина. Реакционную смесь фильтруют, а растворитель удаляют в условиях вакуума. Полученный сырой продукт растворяют в простом этиловом эфире, фильтруют, а целевой продукт получают путем кристаллизации после добавления к гексану.
После трех дополнительных тщательных кристаллизаций был получен N-карбоксиангидрид N-(9-флуоренил- метилоксикарбонил)-L-лейцина с 16% выходом (3,6 г). Аналитические данные были в основном идентичны результатам, полученным в примере 3.
П р и м е р 17. L-Лейцил-L-валин.
9-Флуоренилметилоксикарбонил-L-ва- лин, этерифицированный в пира-алкоксибензиловый спирт, замещенный 2% сетчатым полистиролом (0,25 г, 0,13 ммоля, валина), помещают в аппарат для твердофазного синтеза пептидов, Добавляют диметилформамид (5 мл) и суспензию встряхивают в течение 30 мин. Деметилформамид удаляют и разбухшую смолу дважды обрабатывают 10% пиперидином в диметилформамиде (5 мл в течение 5 мин, а затем 5 мл в течение 15 мин) с целью удаления 9-флуоренилметилоксикарбонильной защитной группы. Смолу промывают диметилформамидом (4 х 5 мл) и подвергают взаимодействию с N-карбоксиангидридом 9-флуоренилметилоксикарбонил-L-лейци-ном (145 мг, 0,38 ммоля) в диметилформамиде (6 мл) в течение 45 мин. Флуоренилметилоксикарбонильную защитную группу удаляют так, как описывалось выше, а смолу промывают диметилформамидом (3 х 5 мл) и метиленхлоридом (3 х 5 мл). Полученный дипептид отщепляют от смолы путем обработки метиленхлоридом и трифторуксусной кислотой (6 мл 1/1) в течение 45 мин. Раствор удаляют, а смолу промывают метиленхлоридом (3х5 мл) и метанолом (2х5 мл). Раствор, соединенный с промывками, выпаривают в условиях вакуума до полутвердого состояния, после чего полученное вещество растворяют в дистиллированной воде и фильтруют. Водный раствор сушат вымораживанием и полученное твердое вещество растворяют в порошок вместе с простым эфиром (ЭХ) с целью удаления загрязняющих примесей, относящихся к смоле, и высушивают при пониженном давлении с образованием N-лейцил-L-валина, выход которого составил > 90% . Идентичность дипептида была подтверждена высокоэффективной хроматографией (скорость перемещения фронта растворителя - 1,5 мл/мин, определение при длине волны 215 нм, 30% метанол в 0,5 М раствора хлорной кислоты) при совместном элюировании известным этанолом (время удержания 8,49 мин). Было установлено, что чистота этого продукта превышает 97% , причем все загрязняющие примеси имеют непосредственную связь со смолой. D-лейцил-L-валин (время удержания 32 мин) обнаружен не был (пределы обнаружения < 0,1% ).
П р и м е р 18. L-Лейцил-L-валин.
Повторяют процедуру, описанную в примере 16, за исключением того, N-карбоксиангидрид 9-флуоренилметилоксикарбонил-L-лейцина подвергают взаимодействию со свободным амином L-валина на смоле с использованием метиленхлорида (5 мл) вместо диметилформамида в качестве растворителя. Полученные результаты были сравнимы с результатами, полученными в примере 16.
П р и м е р 19. L-Лейцид-L-аланил-L-валин (процедура с использованием 9-флуоренометилкарбонила).
Процедуру, описанную в примере 16, используют для получения L-лейцил-L-аланил-L-валина. После отщепления от смолы и промывки простым эфиром был получен трипептид в виде белого твердого вещества, выход которого составил > 88% . Анализ посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии в условиях, описанных в примере 16, подтвердил идентичность этого продукта, который подвергают совместному элюированию известным эталоном. (Время удержания 16,28 мин. ). Отбрасываемые последовательности, такие как L-лейцил-L-валин и L-аланил-L-валин, обнаружены не были (пределы обнаружения < 0,1% ).
П р и м е р 20. L-Лейцил-L-аланил-L-валин (процедура с использованием трет-бутилоксикарбонила).
Трет-бутилоксикарбонил-L-валин, этерифицированный в метиллированный 2% сетчатый полистирол (то есть смола Меррифилда) 0,50 г, 0,23 ммоля валина), помещают в аппарат для твердофазного синтеза пептидов, добавляют метиленхлорид (5 мл) и суспензию встряхивают в течение 30 мин. Растворитель удаляют, а смолу обрабатывают смесью метиленхлорида и трифторуксусной кислоты (6 мл, 1/1) в течение 30 мин с целью удаления трет-бутилоксикарбонильной защитной группы. Смолу промывают метиленхлоридом (3 х 5 мл), нейтрализуют 10% триэтиламином в метиленхлоpиде (5 мл), промывают метиленхлоридом (3 х 5 мл), а затем подвергают взаимодействию с раствором N-карбоксиангидрида трет-бутилоксикарбонил-L-аланина (200 мг, 1,0 ммоль) в метиленхлориде (5 мл) в течение 45 мин. Полученную смолу с защищенным дипептидом промывают метиленхлоридом (3х5 мл). Эту смолу снова деблокируют, промывают, нейтрализуют так, как описывалось выше. К смоле добавляют N-карбоксиангидрид трет-бутилоксикарбонил-L-лейцина (240 мг, 1,0 ммоль) в метиленхлориде (6 мл), осле чего эту смесь встряхивают в течение 45 мин. Раствор удаляют, а смолу промывают метиленхлоридом (3х5 мл), метанолом (3х5 мл) и метиленхлоридом (3х5 мл), а затем высушивают в условиях вакуума. Смолу с трет-бутилоксикарбонилзащищенным трипептидом подвергают взаимодействию с жидким фтористым водородом при температуре 0оС в течение 30 мин, Фтористый водород удаляют, а смолу высушивают в условиях вакуума. Пептид растворяют в воде, а смолу удаляют фильтрованием. Раствор сушат вымораживанием, в результате чего был достигнут почти количественный выход L-лейцил-L-аланил-L-валина. Результаты анализа, выполненного посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, были сравнимы с результатами, полученными в примере 18.
П р и м е р 21. L-Аланил-L-фенилаланин (процедура с полной защитой).
А. К пара-толуолсульфонату бензилового эфира L-фенилаланина )1,07 г, 2,5 ммоля) в тетрагидрофуране (20 мл), находящемуся при температуре 0оС, добавляют N-метилморфолин (0,25 г, 2,5 ммоля). Эту смесь перемешивают в течение 0,5 ч при температуре 0оС, а затем добавляют N-карбоксиангидрид N-бензилоксикарбонил-L-аланина (0,50 г, 2,0 ммоля). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при , 0оС, после чего добавляют воду (20 мл) и дихлорметан (50 мл). Слои разделяют и водный слой промывают дихлорметаном (25 мл). Соединенные органические фракции промывают 0,5 М раствором НСl (2 х 50 мл), 10% бикарбонатом натрия (50 мл) и водой (2 х 50 мл) высушивают (MgSO4) и концентрировали. После добавления гексана выполняют кристаллизацию, в результате чего было получено 0,66 г (72% ) бензилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аланил-L-фенилаланина: температура плавления 118,5-119оС.
Спектр ЯМР (CDCl3) δ 7,64 (S, 1 Н), 6,82-7,39 (m, 6 Н), 5,04 (S, 3 Н), 5,00 (S, 2 Н), 4,56-4,92 (Sm, 2 Н), 3,07 (d, I = 6 Гц, 2Н), 1,29 (d, I = 7 Гц, 3 Н).
В. Смесь бензилового эфира N-бензилоксикарбонил-L-аланил-L-фенилаланина (0,50 г, 1,1 ммоля) и палладированного угля с 10% содержанием палладия (0,1 г) в этиловом спирте (150 мл) встряхивают в аппарате для гидрогенизации Парра в течение 6,5 часов при температуре 20оС. Реакционную смесь фильтруют, а фильтрат промывают водой (100 мл). Раствор концентрируют с образованием 0,26 г (100% ) L-аланил-L-фенилаланина. Анализ, выполненный с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, показал, что чистота продукта составляет > 99% и у него отсутствуют признаки рацемизации.
П р и м е р 22. L-Аланил-L-фенилаланин (процедура с частичной защитой).
А. К раствору L-фенилаланина (0,33 г, 2,0 ммоля) в 0,20 М растворе карбоната калия (20 мл) и ацетонитрила (30 мл) по каплям добавляют N-карбоксиангидрид N-бензилоксикарбонил-L-аланина (0,45 г, 1,8 ммоля) в ацетонитриле (6 мл) при 0оС. Эту смесь перемешивают в течение 40 мин при 0оС и разбавляю этилацетатом (50 мл) и 1 М раствором хлористоводородной кислоты (10 мл). Слои разделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом (2 х 35 мл). Соединенные органические фракции промывают рассолом (30 мл), 0,5 М раствором хлористоводородной кислоты (2 х 50 мл) и водой (2 х 50 мл), высушивают (MgSO4) и концентрируют. Остаток рекристаллизуют из смеси хлороформа и гексана, в результате чего получают 0,26 г (39% ) N-бензилоксикарбонил-L-аланил-L-фенилаланина: температура плавления 121-122оС.
Спектр ЯМР (ДМСО- d6) δ 12,71 (S, 1Н), 8,06 (m, 1Н), 7,30 (m, 5 Н), 5,01 (S, 2Н), 4,43 (m, 1Н), 4,06 (m, 1 Н), 2,99 (m, 2 Н), 11,19 (d, 2 Н, I = 7 Гц).
В. Смесь N-бензилоксикарбонил-L-аланил-L-фенилаланина (0,208 г, 0,562 ммоля) и палладированного угля с 10% содержанием палладия (0,1 г) в 95% этиловом спирте (50 мл) встряхивают в аппарате для гидрогенизации Парра в течение 16 ч при температуре 20оС. Реакционную смесь фильтруют и фильтрат промывают водой (100 мл). Соединенные растворы концентрируют с образованием 0,122 г (92% ) L-аланил- L-фенилаланина в виде белого твердого вещества. Анализ, выполненный с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, показал, что чистота продукта составляет > 99,5% и в нем отсутствуют следы рацемизации.
П р и м е р 23. Трет. бутилоксикарбонил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланин.
К раствору L-аланина-L-фенилаланина (0,236 г, 1,0 ммоля) в 0,20 М раствора карбоната калия (20 мл) и ацетонитрила (30 мл) добавляют по каплям раствор Н-трет-бутилоксикарбонил-L-аланина-НСА (0,194 г, 0,9 ммоля) в ацетонитриле (5 мл) при 0оС. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0оС и разбавляют 50 мл этилацетата и 10 мл 1 н. соляной кислоты. Фазы разделяют и экстрагируют водный слой 2 порциями этилацетата по 35 мл. Объединенные органические фракции промывают рассолом (30 мл), 0,5 М раствором соляной кислоты (2 х 50 мл) и водой (2 х 50 мл), сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток осаждают посредством медленного введения продукта в хлороформе к охлажденному гексану при медленном перемешивании. Образующийся продукт собирают фильтрованием и сушат при высоком вакууме, получая в результате 0,2 г (выход 49% ) Boc-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланина. Аминокислотный анализ свидетельствует о наличии 1 фенилаланина и 2 аланинов. Продукт является однородным по данным тонкослойной хроматографии (силикагель, хлороформ) метанол 8/20).
П р и м е р 24. L-серил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланин.
А. Вос-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланин (0,2 г, 0,5 ммоля) перемешивают в течение 45 мин с 4 М раствором хлористого водорода в диоксане (10 мл). Избыток хлористого водорода удаляют посредством отгонки в вакууме. Хлоргидрат L-аланил- L-аланил-L-фенилаланина получают посредством лиофилизации. Данный продукт используют без дальнейшей очистки.
В. К раствору L-аланил-L-аланил-L-фенилаланина (все количество, полученное в описанном выше эксперименте) в 0,20 М растворе карбоната калия (20 мл) и ацетонитриле (30 мл) добавляют по каплям раствор Н-трет-бутилоксикарбонил- (О-бензил)-L-серин-НСА (0,194 г, 0,7 ммоля) в ацетонитриле (5 мл) при 0оС. Смесь перемешивают в течение 1 ч при 0оС и разбавляют 50 мл этилацетата и 10 мл 1н. соляной кислоты. Фазы разделяют и экстрагируют водный слой 2 порциями этилацетата по 35 мл. Объединенные органические фракции промывают рассолом (30 мл), 0,5 М раствором соляной кислоты (2 х 50 мл и водой (2 х 50 мл), сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток осаждают посредством медленного введения продукта в хлороформе к охлажденному гексану при медленном перемешивании. Образующийся продукт собирают фильтрованием и сушат при высоком вакууме, получая в результате 0,202 г (выход 63% ) Вос-(О-бензил)-L-серил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланина.
С. Смесь Вос-(О-бензил)-L-серил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланина (0,2 г, 0,31 ммоля) и уксусной кислоты (50 мл) встряхивают в устройстве для гидрогенизации по Парру в течение 17 ч при 20оС. Реакционную смесь фильтруют и получают продукт посредством лиофилизации уксусной кислоты.
1. Вос-L-серил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланин (все количество, полученное ранее, без дополнительной очистки) перемешивают в течение 45 мин с 4 М раствором хлористого водорода в диоксане (10 мл). Избыток хлористого водорода удаляют отгонкой в вакууме. L-серил-L-аланил-L-аланил-L-фенилаланин (0,102 г, 85% ) получают с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (RP-18, 0,1% ТФА, линейный градиент из смеси вода/ацетонитрил от 95/5 до 50/50, спустя 1 час) с последующей лиофилизацией. Результаты аминокислотного анализа из расчета на (S ААР-серил-аланил-аланил-фенилаланина): S = 1, А = 2; F = 1. Найдено: S = 0,98. А = 2,03, F = 1,0. Масс-спектр (М+Н)+ - рассчитано на SAAF: 395, найдено 395.
П р и м е р 25. Ацильный пептид (65-74, VQAAItDyNG).
Ацильный пептид (65-74, VQAAIDYNG) получают в реакторе в потоке. Колонну загружают ГМОС-глициновой смолой (0,8 г, 0,36 мэкв/г) и уравновешивают сухим диметилформамидом при скорости потока 11 мл/мин. Все растворители сушат при пропускании через колонну с молекулярными ситами 4
Figure 00000012
. Смолу последовательно вводят в реакцию с трехкратным избытком FМОС-аминокислот (NCА) (FМОС-валин-NСА, FМОС-(-тритил)-глицил-NСА, FМОС-аланин-NСА, FМОС-аланин-NСА, FМОС-изолейцин-NСА, FМОС-(трет-бутил)-аспаргин-NСА, FМОС-(о-трет-бутил)-тирозин-NСА, FМОС-изолейцин-NCА, FМОС-(тритил)-аспаргин-NСА) cогласно следующей методике: 1) снятие защиты (10% пиперидина в диметилформамиде), 10 мин при скорости 11 мл/мин; 2) промывка (диметилформамид), 5 мин при скорости 11 мл/мин; 3) расщепление (0,15 М U NСА в диметилформамиде), 45 мин при скорости 11 мл/мин; 4) промывка (диметилформамид), 5 мин при скорости 11 мл/мин; 5) повторение стадий 1-4. После снятия защиты с концевых защитных групп смолу удаляют из колонны, промывают сухим хлористым метиленом и сушат в вакууме. Пептид отщепляют от смолы посредством обработки в течение 1 ч 50% тетрагидрофурана в сухом хлористом метилене, содержащем 2,5% анизола и 2,5% пентаметилбензола. После удаления растворителей при пониженном давлении и лиофилизации получают неочищенный ацильный пептид (65-74) с выходом 73% .
Результаты аминокислотного анализа из расчета на (VQAAIDyNG): V = 1,00, Q = = 1,00, А = 2,00, I = 2,00, D + N = 2,00, y = 1,00, G = 1,00. Найдено: V = 1,00, Q = 1,02; А = 2,08, I = 2,05, D + N = 2,20, y = 1,05, G = 1,00. Масс-спектр: (М+Р) из расчета на VQAAIDyNG): 1064, найдено 1064.
V = валин
Q = глицин
A = аланин
I = изолейцин
D = аспарагин
y = тирозин
Описываемый способ позволяет получить оптически активные пептиды различной длины. (56) Hirschmann R. и др. The controlled synthesis of Peptides in Agueons Medium VIII.
The Preparation and use of Novel L-Amino Acid N-Carboxyanhyd - The rides. J. Amer. Chem, soc. 1971. 93, N 11, c. 2746-2774.
Патент США N 4267344, кл. С 07 D 407/02, 1981.

Claims (3)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ N-КАРБОКСИАНГИДРИДОВ ИЛИ N-ТИОКАРБОКСИАНГИДРИДОВ УРЕТАНЗАЩИЩЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ общей формулы
Figure 00000013

где R - H;
R′ - низший алкил, не замещенный или замещенный аминогруппой, гидроксигруппой, группой
NH-C
Figure 00000014

или R′ -
Figure 00000015
CH2-
бензил или циклоалкил;
Z = O, S
R″ - низший алкил, не замещенный или замещенный арилом,
отличающийся тем, что N-карбоксиангидрид или N-тиокарбоксиангидрид аминокислот общей формулы
Figure 00000016

где R, R′ и Z имеют указанные значения
вводят во взаимодействие с галоидформиатом общей формулы R″-O-
Figure 00000017
-X, ,
где X - галоид;
R″ имеет указанные значения,
в инертном разбавителе в безводных условиях в присутствии третичного аминового основания.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве третичного аминового основания используют n-метилморфолин.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что n-карбоксиангидрид уретанзащищенной аминокислоты, являющийся продуктом реакции, выделяют с помощью кристаллизации.
SU894742483A 1988-03-11 1989-11-10 Способ получения n-карбоксиангидридов или n-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот RU2007396C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US88168087 1988-03-11
US07/168,087 US4946942A (en) 1988-03-11 1988-03-11 Urethane-protected amino acid-N-carboxyanhydrides
PCT/US1989/000875 WO1989008643A1 (en) 1988-03-11 1989-03-03 Urethane-protected amino acid-n-carboxyanhydrides

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2007396C1 true RU2007396C1 (ru) 1994-02-15

Family

ID=22610066

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU894742483A RU2007396C1 (ru) 1988-03-11 1989-11-10 Способ получения n-карбоксиангидридов или n-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот

Country Status (21)

Country Link
US (1) US4946942A (ru)
EP (1) EP0357750B1 (ru)
JP (1) JP2875834B2 (ru)
KR (1) KR970002229B1 (ru)
CN (1) CN1022412C (ru)
AT (1) ATE108438T1 (ru)
AU (1) AU616054B2 (ru)
CA (1) CA1321280C (ru)
CZ (1) CZ148989A3 (ru)
DD (1) DD280322A5 (ru)
DE (1) DE68916722T2 (ru)
FI (1) FI102379B1 (ru)
HK (1) HK1007744A1 (ru)
HU (1) HU205091B (ru)
IE (1) IE65149B1 (ru)
IL (1) IL89541A0 (ru)
NO (1) NO306304B1 (ru)
NZ (1) NZ228282A (ru)
PT (1) PT89961B (ru)
RU (1) RU2007396C1 (ru)
WO (1) WO1989008643A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2560160C2 (ru) * 2011-03-25 2015-08-20 Ниппон Сода Ко., Лтд. N-карбоновый ангидрид бензилового эфира глутаминовой кислоты

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5006661A (en) * 1987-06-16 1991-04-09 University Of Cincinnati Selective stereospecific biologically active beta-lactams
DE3839379A1 (de) * 1988-11-22 1990-05-23 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von tripeptiden
US6406844B1 (en) 1989-06-07 2002-06-18 Affymetrix, Inc. Very large scale immobilized polymer synthesis
US6551784B2 (en) 1989-06-07 2003-04-22 Affymetrix Inc Method of comparing nucleic acid sequences
US5424186A (en) 1989-06-07 1995-06-13 Affymax Technologies N.V. Very large scale immobilized polymer synthesis
US5744101A (en) * 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US6416952B1 (en) 1989-06-07 2002-07-09 Affymetrix, Inc. Photolithographic and other means for manufacturing arrays
US5547839A (en) 1989-06-07 1996-08-20 Affymax Technologies N.V. Sequencing of surface immobilized polymers utilizing microflourescence detection
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
US6309822B1 (en) 1989-06-07 2001-10-30 Affymetrix, Inc. Method for comparing copy number of nucleic acid sequences
US6346413B1 (en) 1989-06-07 2002-02-12 Affymetrix, Inc. Polymer arrays
US5800992A (en) 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US6506558B1 (en) 1990-03-07 2003-01-14 Affymetrix Inc. Very large scale immobilized polymer synthesis
EP1231282A3 (en) 1990-12-06 2005-05-18 Affymetrix, Inc. Methods and compositions for identification of polymers
US6468740B1 (en) 1992-11-05 2002-10-22 Affymetrix, Inc. Cyclic and substituted immobilized molecular synthesis
TW306932B (ru) * 1993-08-27 1997-06-01 Holland Sweetener Co
US7378236B1 (en) 1994-06-17 2008-05-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for analyzing gene expression patterns
US7323298B1 (en) * 1994-06-17 2008-01-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Microarray for determining the relative abundances of polynuceotide sequences
US7625697B2 (en) * 1994-06-17 2009-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for constructing subarrays and subarrays made thereby
IN184759B (ru) * 1997-07-22 2000-09-23 Kaneka Corp
CN1154654C (zh) 1998-07-21 2004-06-23 钟渊化学工业株式会社 N-(1(s)-乙氧基羰基-3-苯丙基)-l-丙氨酰-l-脯氨酸马来酸盐的结晶方法
US6545264B1 (en) 1998-10-30 2003-04-08 Affymetrix, Inc. Systems and methods for high performance scanning
SE0000382D0 (sv) 2000-02-07 2000-02-07 Astrazeneca Ab New process
US6670447B2 (en) * 2000-07-04 2003-12-30 Mitsui Chemicals, Inc. Amino acid N-carboxyanhydrides with acyl substituents on nitrogen atoms thereof
DE10333368B4 (de) * 2003-07-23 2008-08-28 Universität Leipzig Oberflächenfunktionalisiertes Trägermaterial, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendungen
FR2858976B1 (fr) * 2003-08-22 2006-02-10 Isochem Sa Procede d'obtention de n-carboxyanhydrides d'alpha-aminoacides a protection urethane
EP1809616B1 (en) * 2004-10-26 2010-12-22 Sigma-Aldrich Co. Synthesis of amino acid, n-carboxyanhydrides
WO2007070801A2 (en) * 2005-12-12 2007-06-21 Allaccem, Inc. Methods and systems for preparing antimicrobial films and coatings
DK2125026T3 (en) 2007-02-21 2014-12-08 Allaccem Inc FORMATIONS BASED ON bridged POLYCYCLIC COMPOUNDS FOR INHIBITION AND RELIEF OF DISEASES
US20090035816A1 (en) * 2007-08-02 2009-02-05 Scinopharm Taiwan Ltd. Process for the preparation of a polypeptide
US8188068B2 (en) * 2007-08-10 2012-05-29 Allaccem, Inc. Bridged polycyclic compound based compositions for coating oral surfaces in pets
US8153618B2 (en) * 2007-08-10 2012-04-10 Allaccem, Inc. Bridged polycyclic compound based compositions for topical applications for pets
US8153617B2 (en) * 2007-08-10 2012-04-10 Allaccem, Inc. Bridged polycyclic compound based compositions for coating oral surfaces in humans
US20090074833A1 (en) * 2007-08-17 2009-03-19 Whiteford Jeffery A Bridged polycyclic compound based compositions for controlling bone resorption
FR2928372B1 (fr) * 2008-03-10 2010-12-31 Solvay Procede de synthese peptidique
US20100016270A1 (en) * 2008-06-20 2010-01-21 Whiteford Jeffery A Bridged polycyclic compound based compositions for controlling cholesterol levels
US20100004218A1 (en) * 2008-06-20 2010-01-07 Whiteford Jeffery A Bridged polycyclic compound based compositions for renal therapy
SG11201707585UA (en) * 2015-03-17 2017-10-30 Regeneron Pharma Amino acid acylation reagents and methods of using the same
JP6766432B2 (ja) * 2016-04-28 2020-10-14 Jsr株式会社 ポリアミノ酸の製造方法
SG10202108699UA (en) * 2017-03-02 2021-09-29 Glytech Inc Production method for amino-acid polymer
CN112778236A (zh) * 2019-11-08 2021-05-11 华东理工大学 β、γ-氨基酸N-羧基硫代羰基环内酸酐单体的合成、聚合反应、聚合物制备及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1173562A (en) * 1966-04-25 1969-12-10 Pierrel Spa Chloramphenicol Ester Salts, the Preparation therof and Compositions Containing them
US4267344A (en) * 1972-09-22 1981-05-12 Proteinkemisk Institut. Tilknyttet Akademiet For De Tekniske Videnskaber N-Substituted N-carboxyanhydrides of α-amino acids and their application in the preparation of peptides
US4038411A (en) * 1973-09-25 1977-07-26 Merck & Co., Inc. Antihypertensive amino acid esters
US4038282A (en) * 1975-11-26 1977-07-26 Merck & Co., Inc. Pyridyl-4-methyl-succinimidocarbonate and process for its preparation
US4367234A (en) * 1980-07-28 1983-01-04 Pfizer Inc. Hypoglycemic 5-substituted oxazolidine-2,4-diones

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2560160C2 (ru) * 2011-03-25 2015-08-20 Ниппон Сода Ко., Лтд. N-карбоновый ангидрид бензилового эфира глутаминовой кислоты

Also Published As

Publication number Publication date
PT89961A (pt) 1989-11-10
US4946942A (en) 1990-08-07
CN1022412C (zh) 1993-10-13
DD280322A5 (de) 1990-07-04
NO894503D0 (no) 1989-11-10
DE68916722D1 (de) 1994-08-18
PT89961B (pt) 1994-04-29
NO306304B1 (no) 1999-10-18
ATE108438T1 (de) 1994-07-15
IE890778L (en) 1989-09-11
IE65149B1 (en) 1995-10-04
JPH02503923A (ja) 1990-11-15
FI102379B (fi) 1998-11-30
EP0357750A4 (en) 1991-01-30
EP0357750B1 (en) 1994-07-13
FI895382A0 (fi) 1989-11-10
IL89541A0 (en) 1989-09-10
HU891841D0 (en) 1990-04-28
AU4188789A (en) 1989-10-05
HK1007744A1 (en) 1999-04-23
FI102379B1 (fi) 1998-11-30
EP0357750A1 (en) 1990-03-14
JP2875834B2 (ja) 1999-03-31
HUT52488A (en) 1990-07-28
CA1321280C (en) 1993-08-10
CN1040793A (zh) 1990-03-28
CZ148989A3 (en) 1997-11-12
DE68916722T2 (de) 1994-11-03
WO1989008643A1 (en) 1989-09-21
KR900700469A (ko) 1990-08-13
NZ228282A (en) 1990-10-26
KR970002229B1 (ko) 1997-02-26
AU616054B2 (en) 1991-10-17
HU205091B (en) 1992-03-30
NO894503L (no) 1989-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2007396C1 (ru) Способ получения n-карбоксиангидридов или n-тиокарбоксиангидридов уретанзащищенных аминокислот
US5198548A (en) Process for the preparation of D(-) and L(+)-3,3-diphenylalanine and D(-) and L(+)-substituted 3,3-diphenylalanines and derivatives thereof
JPH0629228B2 (ja) ヒドロキシルアミン誘導体
JPH08506569A (ja) エンドテリン変換酵素阻害剤
FR2496654A1 (fr) Nouveaux tri-, tetra- et pentapeptides, leur preparation et les medicaments qui les contiennent
JPH0357118B2 (ru)
EP3924330A1 (en) Method of preparing a don prodrug from l-glutamic acid
Katakai Peptide synthesis using o-nitrophenylsulfenyl N-carboxy. alpha.-amino acid anhydrides
CA2315222A1 (en) Branched building units for synthesizing cyclic peptides
JPH0662511B2 (ja) 新規な置換炭酸のエステル類及びそれらの製造法
JPH0647599B2 (ja) ヘプタノイル―Ｇｌｕ―Ａｓｐ―Ａｌａ―アミノ酸系免疫賦活薬
US4250086A (en) Method and composition for preparation of H-SAR-LYS-SAR-GLN-NH2
Pajpanova et al. Canavanine derivatives useful in peptide synthesis
Elmore et al. Thioesters of amino acid derivatives as thioacylating agents in thiopeptide synthesis
FR2634763A1 (fr) Amino-acides et peptides presentant un residu tyrosine modifiee, leur preparation et leur application comme medicaments
JP5097104B2 (ja) 新規イソジペプチド
CA2412787A1 (en) Process for the preparation of 5-phenylpentanoyl-ala-argl-{2-[3-amino-2-oxopyrrolidin-1-yl]propionyl}-ala-arg-ala-4-aminophenylacetamide
US3780015A (en) Process for preparing lysine containing peptides
EP0018793B1 (en) Peptides and process for their preparation
AU626608B2 (en) A process for the preparation of tripeptides
Katakai et al. Peptide synthesis using o‐nitrophenylsulfenyl N‐carboxy α‐amino acid anhydrides. Sequential oligopeptides having alternate γ‐methyl l‐glutamyl and l‐phenylalanyl residues
US5219988A (en) Gem-diamino derivatives and their use in the synthesis of retro-inverso peptides
JP4050238B2 (ja) Ｋｐｖトリペプチドジアミド誘導体の改良された合成方法
Sureshbabu et al. HOAt. DCHA as co-coupling agent in the synthesis of peptides employing Fmoc-amino acid chlorides as coupling agents: Application to the synthesis of β-casomorphin
FR2482961A2 (fr) Nouveaux tetra- ou pentapeptides, leur preparation et les medicaments qui les contiennent

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080304

REG Reference to a code of a succession state

Ref country code: RU

Ref legal event code: MM4A

Effective date: 20080304