RU188425U1 - DOSED FORM FOR DNA SELECTION - Google Patents
DOSED FORM FOR DNA SELECTION Download PDFInfo
- Publication number
- RU188425U1 RU188425U1 RU2018128276U RU2018128276U RU188425U1 RU 188425 U1 RU188425 U1 RU 188425U1 RU 2018128276 U RU2018128276 U RU 2018128276U RU 2018128276 U RU2018128276 U RU 2018128276U RU 188425 U1 RU188425 U1 RU 188425U1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dosage form
- silicon dioxide
- mixture
- dna extraction
- dna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
- C12M3/02—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with means providing suspensions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Полезная модель относится к медицине и биологии и предназначена для использования при производстве наборов для выделения ДНК, применяемых при проведении молекулярно-генетических исследований. Дозированная форма для выделения ДНК включает ядро, содержащее совместно спрессованный хаотропный компонент, представляющий собой гуанидин тиоцианат или гуанидин гидрохлорид, с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую, по меньшей мере, из одного гидрофобного ингредиента, выбранного из ряда: парафин и воск, и выполнена в виде глобулы или таблетки, при этом глобула имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм, а таблетка имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм и предпочтительную толщину 2,0-4,0 мм, причем содержание хаотропного компонента и диоксида кремния в ядре составляет, мас. %: хаотропный компонент - 85,1-92,3 и диоксид кремния - 7,7-14,9. Техническим результатом полезной модели является увеличение срока хранения дозированной формы, предотвращение перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечение их пароизоляции.The invention relates to medicine and biology and is intended for use in the manufacture of DNA extraction kits used in molecular genetic studies. Dosage form for DNA extraction includes a core containing co-pressed chaotropic component, representing guanidine thiocyanate or guanidine hydrochloride, with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of at least one hydrophobic ingredient selected from the series: paraffin and wax, and made in the form of globules or tablets, while the globule has a preferred diameter of 2.0-4.0 mm, and the tablet has a preferred diameter of 2.0-4.0 mm and a preferred thickness of 2.0-4.0 mm, with the content chaotropic component enta and silicon dioxide in the core is, wt. %: chaotropic component - 85.1-92.3 and silicon dioxide - 7.7-14.9. The technical result of the utility model is to increase the shelf life of the dosage form, prevent cross-contamination of the reaction mixtures and ensure their vapor barrier.
Description
Полезная модель относится к медицине и биологии и предназначена для использования при производстве наборов для выделения ДНК, применяемых при проведении молекулярно-генетических исследований.The invention relates to medicine and biology and is intended for use in the manufacture of DNA extraction kits used in molecular genetic studies.
Выделение нуклеиновых кислот является основой пробоподготовки биологических образцов для молекулярно-генетических исследований: секвенирования, ПЦР и других.The selection of nucleic acids is the basis for the sample preparation of biological samples for molecular genetic studies: sequencing, PCR and others.
Чаще всего для выделения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) используют модификации аналога, предложенного Boom W.R. с соавторами (US 5234809 от 10.08.1993), согласно которому в перечень стадий выделения нуклеиновых входят смешивание исходного материала с хаотропным веществом и твердой фазой, связывающей нуклеиновую кислоту. При этом хаотропное вещество может представлять собой соли гуанидина или мочевину, а в качестве твердой фазы, связывающей нуклеиновую кислоту, можно выбрать частицы диоксида кремния. Согласно формуле данного аналога, в качестве соли гуанидина используют гуанидина (изо)тиоцианат.Most often, for the isolation of nucleic acids (DNA and RNA), modifications of the analog proposed by Boom W.R. with co-authors (US 5,234,809 dated 08/10/1993), according to which the list of nucleic acid isolation stages includes the mixing of the starting material with a chaotropic substance and the solid phase connecting the nucleic acid. While the chaotropic substance can be a salt of guanidine or urea, and as a solid phase, linking the nucleic acid, you can choose particles of silicon dioxide. According to the formula of this analogue, guanidine (iso) thiocyanate is used as the guanidine salt.
Основным недостатком данного аналога являются:The main disadvantage of this analogue is:
а) многостадийность пробоподготовки, в том числе в связи с дозированием компонентов, предварительным смешиванием подготавливаемой пробы, хаотропного компонента (вещества) и твердой фазы (в том числе диоксида кремния);a) a multi-stage sample preparation, including in connection with the dosing of components, the preliminary mixing of the sample being prepared, the chaotropic component (substance) and the solid phase (including silicon dioxide);
б) необходимость доведения до комнатной температуры замороженных или охлажденных растворов соли гуанидина и мочевины перед использованием;b) the need to bring to room temperature frozen or chilled solutions of the salt of guanidine and urea before use;
в) ограниченный срок хранения растворов хаотропных компонентов и ограниченное число циклов их замораживания и размораживания при хранении.c) the limited shelf life of solutions of chaotropic components and a limited number of cycles of their freezing and thawing during storage.
Известен набор для выделения ДНК, состоящий из лизирующего буфера на основе 3-10 М раствора мочевины, связывающего буфера на основе 2,5-5 М хлористого натрия, промывочного буфера на основе 80% этанола, элюирующего буфера на основе 10 мМ Трис-HCl и 1 мМ Трилона Б с рН 8 и сорбента, отличающийся тем, что в качестве сорбента ДНК он содержит кристаллический кварцевый песок с размером частиц 10-50 мкм (RU 2539030 от 10.01.2015).A known kit for DNA extraction, consisting of lysis buffer based on 3-10 M urea solution, binding buffer based on 2.5-5 M sodium chloride, wash buffer based on 80% ethanol, elution buffer based on 10 mm Tris-HCl and 1 mM Trilon B with a pH of 8 and a sorbent, characterized in that it contains crystalline quartz sand with a particle size of 10-50 microns (DNA 2539030 from 01/10/2015) as a DNA sorbent.
Известно также последовательное использование гуанидина гидрохлорида и диоксида кремния для выделения ДНК (WO 2004108925 от 16.12.2004).It is also known to use guanidine hydrochloride and silica sequentially for DNA extraction (WO 2004108925 dated 12.16.2004).
Основными недостатками данных аналогов, согласно их описаниям, являются:The main disadvantages of these analogues, according to their descriptions, are:
а) многостадийность пробоподготовки, в том числе в связи с дозированием компонентов, последовательным добавлением к биоматериалу хаотропного компонента (мочевины или гуанидина гидрохлорида), связывающего буфера и кремнийсодержащего сорбента (диоксида кремния или кристаллического кварцевого песка);a) a multistage sample preparation, including in connection with the dosing of components, the sequential addition of a chaotropic component (urea or guanidine hydrochloride) to the biomaterial, a binding buffer and a silicon-containing sorbent (silicon dioxide or crystalline silica sand);
б) необходимость доведения до комнатной температуры замороженных или охлажденных растворов соли гуанидина и мочевины перед использованием;b) the need to bring to room temperature frozen or chilled solutions of the salt of guanidine and urea before use;
в) ограниченный срок хранения растворов хаотропных компонентов и ограниченное число циклов их замораживания и размораживания при хранении;c) limited shelf life of solutions of chaotropic components and a limited number of cycles of their freezing and thawing during storage;
г) некомпактность жидких компонентов набора.d) non-compactness of the liquid components of the kit.
Наиболее близким аналогом заявляемого технического решения - прототипом - является композиция для выделения и очистки нуклеиновых кислот, представляющая собой смесь твердых веществ, содержащую от 10 до 40 мас. % частиц, состоящих из нерастворимого в воде гидратированного магния силиката (например, талька), имеющего средний размер частиц от 0,8 до 2,5 μm (мкм), и от 20 до 70 мас. % кристаллического забуференного фосфатом солевого раствора, который легко растворим в воде для получения раствора, имеющего рН от 5,5 до 7,0 при температуре от 70 до 95°С. Известная композиция из смеси твердых веществ предпочтительно дозирована в виде таблетки или капсулы, имеющих определенный вес. Известная композиция также предпочтительно дополнительно содержит от 20 до 35 мас. % гидрофильного коллоида, эффективного для диспергирования смеси твердых веществ в воде, и может включать один или несколько нехаотропных лизирующих агентов (WO 2015132216 от 11.09.2015).The closest analogue of the proposed technical solution - the prototype - is a composition for the isolation and purification of nucleic acids, which is a mixture of solids containing from 10 to 40 wt. % of particles consisting of water-insoluble hydrated magnesium silicate (for example, talc), having an average particle size of from 0.8 to 2.5 μm (μm), and from 20 to 70 wt. % crystalline phosphate buffered saline solution, which is easily soluble in water to obtain a solution having a pH from 5.5 to 7.0 at a temperature of from 70 to 95 ° C. The known composition of a mixture of solids is preferably dosed in the form of a tablet or capsule, having a certain weight. The known composition also preferably further comprises from 20 to 35 wt. % hydrophilic colloid, effective for dispersing a mixture of solids in water, and may include one or more non-chaotropic lysing agents (WO 2015132216 from 09/11/2015).
Имеются следующие основные недостатки прототипа, согласно его формуле и описанию:There are the following main disadvantages of the prototype, according to its formula and description:
а) ограничен срок хранения композиции за счет возможности использования нестойких нехаотропных лизирующих компоненетов.a) the shelf life of the composition is limited due to the possibility of using non-persistent, non-chaotropic lysing components.
б) отсутствие оболочки, как предотвращающей при хранении истирание прототипа в виде таблетки (так как истирание уменьшает дозировку активных компонентов в форме и, соответственно, дополнительно снижает срок ее хранения), так и создающей при выделении ДНК гидрофобный барьер, предотвращающий перекрестную контаминацию реакционных смесей и обеспечивающий их пароизоляцию при нагревании, которое ускоряет растворение хаотропного компонента, лизис клеток и высвобождение ДНК из связей с другими веществами (например, US 5234809 от 10.08.1993, KZ 26391 от 15.11.2012).b) the absence of a shell, which prevents abrasion of the prototype in the form of a tablet during storage (since abrasion reduces the dosage of the active components in the form and, accordingly, further reduces its shelf life), and creates a hydrophobic barrier during DNA isolation that prevents cross-contamination of the reaction mixtures and providing them with a vapor barrier when heated, which accelerates the dissolution of the chaotropic component, the lysis of cells and the release of DNA from bonds with other substances (for example, US 5234809 from 10.08.1993, KZ 26391 from 15.11.2 012).
Главной задачей, решаемой заявляемым техническим решением, является получение компактной твердой дозированной формы для выделения ДНК с увеличенным сроком хранения, обеспечивающей пароизоляцию и предотвращающей перекрестную контаминацию реакционных смесей.The main task to be solved by the claimed technical solution is to obtain a compact solid dosage form for the isolation of DNA with an extended shelf life, providing vapor barrier and preventing cross contamination of the reaction mixtures.
Поставленная задача реализуется за счет того, что дозированная форма для выделения ДНК включает ядро, содержащее совместно спрессованный хаотропный компонент, представляющий собой гуанидин тиоцианат или гуанидин гидрохлорид, с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую, по меньшей мере, из одного гидрофобного ингредиента, выбранного из ряда: парафин и воск, и выполнена в виде глобулы или таблетки, при этом глобула имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм, а таблетка имеет предпочтительный диаметр 2,0-4,0 мм и предпочтительную толщину 2,0-4,0 мм, причем содержание хаотропного компонента и диоксида кремния в ядре составляет, мас. %: хаотропный компонент - 85,1-92,3 и диоксид кремния - 7,7-14,9.The task is implemented due to the fact that the dosage form for DNA extraction includes a core containing a co-pressed chaotropic component, which is guanidine thiocyanate or guanidine hydrochloride, with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of at least one hydrophobic ingredient, selected from the range: paraffin and wax, and made in the form of globules or tablets, while the globule has a preferred diameter of 2.0-4.0 mm, and the tablet has a preferred diameter of 2.0-4.0 mm and a preferred thickness tire 2.0-4.0 mm, and the content of the chaotropic component and silicon dioxide in the core is, wt. %: chaotropic component - 85.1-92.3 and silicon dioxide - 7.7-14.9.
В основу заявляемой полезной модели положена обеспечивающая решение поставленной задачи новая совокупность оригинальных отличительных признаков. Во-первых, это использование совместно спрессованного хаотропного компонента, представляющего собой гуанидин тиоцианат или гуанидин гидрохлорид, с диоксидом кремния, выполняющих в заявляемой дозированной форма дополнительные функции, соответственно, как гигроскопичных компонентов (гуанидина тиоцианат или гуанидина гидрохлорид) и нерастворимого разрыхлителя - дезинтегратора (диоксид кремния), что обеспечивает увеличение срока хранения компактной дозированной формы для выделения ДНК, упрощает ее состав, исключая необходимость добавления дополнительного разрыхлителя, а при использовании дозированной формы для выделения ДНК обусловливает увеличение ее распадаемости, уменьшение стадий пробоподготовки и обеспечение оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Во-вторых, это наличие сплошной оболочки, предотвращающей истирание ядра глобулы или таблетки при хранении, в связи с чем дополнительно увеличивающей срок ее хранения, а также создающей гидрофобный барьер при выделении ДНК, предотвращающий перекрестную контаминацию реакционных смесей и обеспечивающий их пароизоляцию. Имеющаяся возможность изменять толщину оболочки в широких пределах обеспечивает полное покрытие реакционных смесей в известных емкостях (в том числе в имеющих различный объем пробирках) гидрофобным слоем из ингредиентов оболочки при дезинтеграции вариантов дозированной формы с эффективным выделением ДНК. Вышеизложенное позволяет при характеристике оболочки заявляемой дозированной формы не указывать предельные значения ее толщины в качестве отличительных признаков. Для облегчения извлечения выделенной ДНК из емкости, в которой проходила реакция, предпочтительно использовать толщину оболочки, минимально необходимую для предотвращения истирания ядра глобулы или таблетки при хранении и испарения воды из емкости при выделении ДНК, что обеспечивается предпочтительными размерами глобул и таблеток заявляемой дозированной формы, соответствующими внутренним диаметрам пробирок, обычно используемых для выделения ДНК.The proposed utility model is based on a new set of original distinctive features providing a solution to the problem. First, it is the use of a jointly compressed chaotropic component, which is guanidine thiocyanate or guanidine hydrochloride, with silicon dioxide, which perform additional functions in the claimed dosage form, respectively, as hygroscopic components (guanidine thiocyanate or guanidine hydrochloride) and insoluble disintegrating agent - disintegrant (dioxide) silicon), which provides an increase in the shelf life of a compact dosage form for DNA extraction, simplifies its composition, eliminating the need to add eniya additional disintegrant, and the use of the dosage form to isolate DNA results in an increase in its disintegration, reducing the sample preparation steps and ensuring optimal concentration and necessary for molecular genetic studies of DNA purification in a prepared sample. Secondly, it is the presence of a continuous shell that prevents abrasion of the core of the globule or tablet during storage, and therefore further increases its shelf life, as well as creating a hydrophobic barrier during DNA isolation, preventing cross contamination of the reaction mixtures and ensuring their vapor barrier. The ability to vary the thickness of the shell over a wide range allows the reaction mixtures to be completely covered in known containers (including those with different volume tubes) with a hydrophobic layer of shell ingredients when disintegrating the dosage form options with effective DNA extraction. The above allows for the characterization of the shell of the claimed dosage form not to indicate the limiting values of its thickness as distinctive features. To facilitate extraction of the isolated DNA from the tank in which the reaction took place, it is preferable to use the shell thickness, which is minimally necessary to prevent abrasion of the core of the globule or tablet during storage and evaporation of water from the tank during DNA extraction, which is ensured by the preferred size of the globules and tablets of the claimed dosage form the internal diameters of the tubes commonly used for DNA extraction.
Из патентно-технической литературы и практики молекулярно-генетических исследований неизвестно о дозированной форме для выделения ДНК, включающей твердые ингредиенты, которая была бы идентична заявляемой.From the patent technical literature and the practice of molecular genetic studies it is not known about the dosage form for the isolation of DNA, including solid ingredients, which would be identical to the claimed one.
Отсюда правомерен вывод о соответствия заявляемого решения критерию «новизна».Hence, the conclusion about the compliance of the proposed decision to the criterion “novelty” is legitimate.
Указанная выше совокупность существенных признаков необходима и достаточна для достижения технического результата - увеличения срока хранения дозированной формы, предотвращения перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечения их пароизоляции.The above set of essential features is necessary and sufficient to achieve a technical result - increasing the shelf life of the dosage form, preventing cross contamination of the reaction mixtures and ensuring their vapor barrier.
Предлагаемая дозированная форма может быть получена многократно, а, значит, заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость».The proposed dosage form can be obtained many times, and, therefore, the claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability".
Предлагаемая дозированная форма апробирована в Обществе с ограниченной ответственностью «Микро Тех».The proposed dosage form was tested in the Limited Liability Company "Micro Tech".
Сущность полезной модели поясняется на следующих примерах, показывающих увеличение срока хранения дозированной формы, предотвращение перекрестной контаминации реакционных смесей и обеспечение их пароизоляции. При этом приведенные примеры дозированной формы для выделения ДНК показывают конкретную реализацию заявляемой полезной модели, но не ограничивают объем притязаний формулы заявляемой полезной модели.The essence of the utility model is illustrated in the following examples, showing an increase in the shelf life of the dosage form, preventing cross-contamination of the reaction mixtures and ensuring their vapor barrier. The examples of the dosage form for DNA extraction show the specific implementation of the claimed utility model, but do not limit the scope of the claims of the claimed utility model.
Пример 1. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин тиоцианат с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - парафина, выполненная в виде глобулы с диаметром 2,0 мм. Соотношение гуанидина тиоцианата и диоксида кремния составляло 85,1 мас. % и 14,9 мас. %, соответственно.Example 1. A dosage form for DNA extraction was obtained, including a core containing co-pressed guanidine thiocyanate with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of one hydrophobic paraffin ingredient, made in the form of a globule with a diameter of 2.0 mm. The ratio of guanidine thiocyanate and silicon dioxide was 85.1 wt. % and 14.9 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки цервикального канала шейки матки пациентки, инфицированной Ureaplasma urealyticum) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 2 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 65°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.For DNA extraction, biological material (mucous material of the cervical canal of the cervix of a patient infected with Ureaplasma urealyticum) was introduced into a container containing 200 μl of saline or a known transport medium described, for example, in guidelines MU 1.3.1794-03 (http: / /base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then, the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 65 ° C, the mixture was shaken for 2 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at 65 ° C for 15 minutes (the volume of the mixture did not decrease under these conditions) centrifuged at 12100 g for 5 seconds and decanted supernatant. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and added to a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Ureaplasma urealyticum, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for Ureaplasma urealyticum was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification required for molecular genetic studies. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Пример 2. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин гидрохлорид с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - воска, выполненная в виде глобулы с диаметром 3,0 мм. Соотношение гуанидина гидрохлорида и диоксида кремния составляло 88,0 мас. % и 12,0 мас. %, соответственно.Example 2. The obtained dosage form for DNA extraction, including the core, containing co-pressed guanidine hydrochloride with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of one hydrophobic ingredient - wax, made in the form of a globule with a diameter of 3.0 mm. The ratio of guanidine hydrochloride and silicon dioxide was 88.0 wt. % and 12.0 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки влагалища пациентки, инфицированной Candida albicans) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при комнатной температуре 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ас.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.For DNA extraction, biological material (material of the mucous membrane of the vagina of a patient infected with Candida albicans) was introduced into a container containing 200 μl of physiological saline or a known transport medium described, for example, in guidelines MU 1.3.1794-03 (http: // base. garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 65 ° C, the mixture was shaken for 3 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at room temperature for 15 minutes (the volume of the mixture did not decrease under these conditions), centrifuged at 12100 g for 5 seconds and the supernatant decanted. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and introduced into a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http: //www.nhm.as.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Candida albicans, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for Candida albicans was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification necessary for molecular genetic studies in the prepared sample. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Пример 3. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин гидрохлорид с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из двух гидрофобных ингредиентов (смеси парафина с воском), выполненная в виде глобулы с диаметром 4,0 мм. Соотношение гуанидина гидрохлорида и диоксида кремния составляло 92,3 мас. % и 7,7 мас. %, соответственно.Example 3. The obtained dosage form for DNA extraction, including the core containing co-pressed guanidine hydrochloride with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of two hydrophobic ingredients (a mixture of paraffin with wax), made in the form of a globule with a diameter of 4.0 mm. The ratio of guanidine hydrochloride and silicon dioxide was 92.3 wt. % and 7.7 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки цервикального канала шейки матки пациентки, инфицированной Chlamydia trachomatis) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 65°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 60°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.For DNA extraction, biological material (mucosal material of the cervical canal of the cervix of a patient infected with Chlamydia trachomatis) was introduced into a container containing 200 μl of saline or a known transport medium described, for example, in guidelines MU 1.3.1794-03 (http: / /base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then, the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 65 ° C, the mixture was shaken for 3 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at 60 ° C for 15 minutes (under these conditions the volume of the mixture did not decrease) centrifuged at 12100 g for 5 seconds and decanted supernatant. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and added to a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Chlamydia trachomatis, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for Chlamydia trachomatis was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification necessary for molecular genetic studies in the prepared sample. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Пример 4. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин гидрохлорид с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - парафина, выполненная в виде таблетки с диаметром 2,0 мм и толщиной 2,0 мм. Соотношение гуанидина гидрохлорида и диоксида кремния составляло 85,1 мас. % и 14,9 мас. %, соответственно.Example 4. Received dosage form for DNA extraction, including the core containing co-pressed guanidine hydrochloride with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of one hydrophobic ingredient - paraffin, made in the form of a tablet with a diameter of 2.0 mm and a thickness of 2.0 mm The ratio of guanidine hydrochloride and silicon dioxide was 85.1 wt. % and 14.9 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (кал больного, инфицированного Trichiuris trichiuria) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 60°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 60°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.In order to isolate DNA, biological material (the feces of a patient infected with Trichiuris trichiuria) was introduced into a container containing 200 μl of saline or a known transport medium described, for example, in guidelines MU 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru / 4180235 / 1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1 / or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then, the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 60 ° C, the mixture was shaken for 3 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at 60 ° C for 15 minutes (the volume of the mixture did not decrease under these conditions) centrifuged at 12100 g for 5 seconds and decanted supernatant. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and added to a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Trichiuris trichiuria, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for Trichiuris trichiuria was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification necessary for molecular genetic studies in the prepared sample. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Пример 5. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин тиоцианат с диоксидом кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из одного гидрофобного ингредиента - воска, выполненная в виде таблетки с диаметром 3,0 мм и толщиной 3,0 мм. Соотношение гуанидина тиоцианата и диоксида кремния составляло 88,0 мас. % и 12,0 мас. %, соответственно.Example 5. The obtained dosage form for DNA extraction, including the core containing co-pressed guanidine thiocyanate with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of one hydrophobic ingredient - wax, made in the form of a tablet with a diameter of 3.0 mm and a thickness of 3.0 mm The ratio of guanidine thiocyanate and silicon dioxide was 88.0 wt. % and 12.0 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (материал слизистой оболочки влагалища пациентки, инфицированной Candida albicans) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 60°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 65°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.For DNA extraction, biological material (material of the mucous membrane of the vagina of a patient infected with Candida albicans) was introduced into a container containing 200 μl of physiological saline or a known transport medium described, for example, in guidelines MU 1.3.1794-03 (http: // base. garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then, the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 60 ° C, the mixture was agitated for 3 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at 65 ° C for 15 minutes (the volume of the mixture did not decrease under these conditions) centrifuged at 12100 g for 5 seconds and decanted supernatant. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and added to a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для Candida albicans, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for Candida albicans was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification necessary for molecular genetic studies in the prepared sample. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Пример 6. Получена дозированная форма для выделения ДНК, включающая ядро, содержащее совместно спрессованный гуанидин тиоцианат с диоксид кремния, а также сплошную оболочку, состоящую из двух гидрофобных ингредиентов (смеси парафина с воском), выполненная в виде таблетки с диаметром 4,0 мм и толщиной 4,0 мм. Соотношение гуанидина тиоцианата и диоксида кремния составляло 92,3 мас. % и 7,7 мас. %, соответственно.Example 6. The obtained dosage form for DNA extraction, including the core containing co-pressed guanidine thiocyanate with silicon dioxide, as well as a continuous shell consisting of two hydrophobic ingredients (a mixture of paraffin with wax), made in the form of a tablet with a diameter of 4.0 mm and 4.0 mm thick. The ratio of guanidine thiocyanate and silicon dioxide was 92.3 wt. % and 7.7 wt. %, respectively.
Полученный вариант заявляемой дозированной формы перед постановкой реакции хранился в течение 2 лет при комнатной температуре.The resulting variant of the claimed dosage form before stating the reaction was stored for 2 years at room temperature.
Для выделения ДНК использовались различные емкости (пробирки объемом от 1,5 мл до 2,5 мл).Various capacities were used for DNA extraction (tubes from 1.5 ml to 2.5 ml).
Выделение ДНК проводили во время работы с образцами, полученными от других пациентов.DNA isolation was performed while working with samples obtained from other patients.
Для выделения ДНК биологический материал (кровь больного гепатитом В) вносили в емкость, содержащую 200 мкл физиологического раствора или известной транспортной среды, описанной, например, в методических указаниях МУ 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235/1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1/ или http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Затем вносили в емкость полученный вариант заявляемой дозированной формы, нагревали смесь до 62°С, взбалтывали смесь в течение 3 минут до полного распадения полученного варианта заявляемой дозированной формы, инкубировали смесь при 62°С 15 минут (при этих условиях объем смеси не уменьшился), центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. К осадку добавляли 500 мкл 70% этилового спирта, полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд и декантировали надосадочную жидкость. Осадок высушивали и вносили в емкость 60 мкл бидистиллированной воды или известного элюирующего буфера (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf), полученную смесь взбалтывали, центрифугировали при 12100 g в течение 5 секунд. Надосадочную жидкость использовали для исследования методом классической ПЦР.For DNA extraction, biological material (the blood of a patient with hepatitis B) was introduced into a container containing 200 μl of a physiological solution or a known transport medium, described, for example, in the guidelines MU 1.3.1794-03 (http://base.garant.ru/4180235 / 1a3794674ba91fb6f13d1885dca9f9e1 / or http://www.lytech.ru/data/file/mu_131974_03.pdf). Then the obtained variant of the claimed dosage form was introduced into the container, the mixture was heated to 62 ° C, the mixture was agitated for 3 minutes until the obtained variant of the claimed dosage form was completely disintegrated, the mixture was incubated at 62 ° C for 15 minutes (the volume of the mixture did not decrease under these conditions) centrifuged at 12100 g for 5 seconds and decanted supernatant. 500 μl of 70% ethanol was added to the precipitate, the mixture was agitated, centrifuged at 12100 g for 5 seconds, and the supernatant was decanted. The precipitate was dried and added to a container of 60 μl of bidistilled water or a known elution buffer (http://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/Coreresearchlabs/te-buffer.pdf ), the resulting mixture was shaken, centrifuged at 12100 g for 5 seconds. The supernatant was used for the study by the method of classical PCR.
При использовании полученного варианта заявляемой дозированной формы по сравнению с использованием обычно используемых аналогичных жидких реагентов отмечено уменьшение в 3 раза числа ручных манипуляций.When using the obtained variant of the claimed dosage form compared with the use of commonly used similar liquid reagents, a 3-fold decrease in the number of manual manipulations was noted.
В результате проведения классической ПЦР с использованием полученного варианта заявляемой дозированной формы установлен положительный результат ПЦР с праймерами для вируса гепатита В, что свидетельствует об обеспечении оптимальной концентрации и необходимой для молекулярно-генетических исследований очистки ДНК в подготовленной пробе. Перекрестной контаминации реакционных смесей не выявлено.As a result of the classical PCR using the obtained variant of the claimed dosage form, a positive PCR result with primers for the hepatitis B virus was established, which indicates the optimal concentration and DNA purification necessary for molecular genetic studies in the prepared sample. Cross-contamination of the reaction mixtures was not detected.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018128276U RU188425U1 (en) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | DOSED FORM FOR DNA SELECTION |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018128276U RU188425U1 (en) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | DOSED FORM FOR DNA SELECTION |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU188425U1 true RU188425U1 (en) | 2019-04-11 |
Family
ID=66168706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018128276U RU188425U1 (en) | 2018-08-02 | 2018-08-02 | DOSED FORM FOR DNA SELECTION |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU188425U1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5405951A (en) * | 1991-05-03 | 1995-04-11 | Becton Dickinson And Company | Solid phase extraction purification of DNA |
| RU2116795C1 (en) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Set for dna isolation |
| WO2004108925A1 (en) * | 2003-06-04 | 2004-12-16 | Qiagen As | Method for sequentially isolating dna and rna from the same nucleic acid-containing sample |
| RU2539030C1 (en) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Kit for dna recovery |
| US20170081704A1 (en) * | 2014-03-07 | 2017-03-23 | Ifp Privates Institut Fur Produktqualitat Gmbh | Method and kit of parts for extraction of nucleic acids |
-
2018
- 2018-08-02 RU RU2018128276U patent/RU188425U1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5405951A (en) * | 1991-05-03 | 1995-04-11 | Becton Dickinson And Company | Solid phase extraction purification of DNA |
| RU2116795C1 (en) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Set for dna isolation |
| WO2004108925A1 (en) * | 2003-06-04 | 2004-12-16 | Qiagen As | Method for sequentially isolating dna and rna from the same nucleic acid-containing sample |
| RU2539030C1 (en) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Kit for dna recovery |
| US20170081704A1 (en) * | 2014-03-07 | 2017-03-23 | Ifp Privates Institut Fur Produktqualitat Gmbh | Method and kit of parts for extraction of nucleic acids |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wallace et al. | State of adenovirus 2 deoxyribonucleic acid in the nucleus and its mode of transcription: studies with isolated viral deoxyribonucleic acid-protein complexes and isolated nuclei | |
| Veesler et al. | Virus maturation | |
| JP4585123B2 (en) | Method for isolating DNA from biomaterial | |
| WO2011098262A2 (en) | P19arf, hmga2 and mdm2 for use in the diagnosis and treatment of aberrant cell growth | |
| US9593325B2 (en) | Stable lysis buffer mixture for extracting nucleic acids | |
| Chen et al. | Comparisons of HIV-1 viral sequences in brain, choroid plexus and spleen: potential role of choroid plexus in the pathogenesis of HIV encephalitis | |
| WO2020172343A2 (en) | Methods for treating injuries | |
| JP2000514666A (en) | Lyophilization of cultured human cells for preservation of RNA and DNA | |
| AU2023200395A1 (en) | Means for the treatment of HIV | |
| BR112014016877B1 (en) | L-nucleic acid molecule capable of binding human c5a, its uses, as well as pharmaceutical composition, complex, method for the selection of an antagonist of a c5a-mediated activity and kit for the detection of c5a | |
| RU188425U1 (en) | DOSED FORM FOR DNA SELECTION | |
| JP2023511279A (en) | Single cell sequencing | |
| RU188424U1 (en) | DOSED FORM FOR DNA SELECTION | |
| Shamur et al. | Interaction of nucleic acid polymers with the large and small forms of the hepatitis delta antigen protein | |
| Teodorescu et al. | Drug delivery system based on PVA and clay for potential treatment of COVID-19 | |
| Marchant et al. | The impact of CVB3 infection on host cell biology | |
| ES2731375T3 (en) | Procedure for the enrichment of microvesicles | |
| CN100334107C (en) | Ligands | |
| Tungaturthi et al. | HIV-1 Vpr: genetic diversity and functional features from the perspective of structure | |
| RU171152U1 (en) | DOSED FORM FOR POLYMERASE CHAIN REACTION | |
| Lin et al. | Combinational therapy for potential HIV-1 eradication and vaccination | |
| Chiu et al. | Composition and template activity of chromatin fractionated by isoelectric focusing | |
| CN115397453A (en) | Products and methods for detecting viral nucleic acids | |
| RU2764245C2 (en) | Method and composition for stabilising cell-free nucleic acids and cells | |
| RU2729223C1 (en) | Dosage form for amplification of nucleic acids |