RU1838409C - Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба - Google Patents
Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микробаInfo
- Publication number
- RU1838409C RU1838409C SU915016438A SU5016438A RU1838409C RU 1838409 C RU1838409 C RU 1838409C SU 915016438 A SU915016438 A SU 915016438A SU 5016438 A SU5016438 A SU 5016438A RU 1838409 C RU1838409 C RU 1838409C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- adenylate cyclase
- immobilized
- activity
- plague microbe
- plague
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Использование: биохими и биотехнологи относитс к получению матриц с кова- лентно св занными белками. Сущность изобретени : получают иммобилизованную аденилатциклазу чумного микроба путем ковалентного св зывани аденилатциклазы с окисленной с помощью периодата сефаро- зой CL 6B. Активность иммобилизованного фермента по отношению к нативному 95%. Активность сохран етс в течение 6 мес.
Description
Изобретение относитс к биохимии и биотехнологии, в частности к способам получени матриц с ковалентно св занными белками.
Цель изобретени - иммобилизаци аденилатциклазы чумного микроба.
. Цель достигаетс тем, что на окислзн- ной с помощью периодата сефарозе CL 6B ковалентно св зывают аденилатциклазу чумного микроба. В отличие от прототипа раствор дл присоединени фермента не содержит фосфатных ионов, инактивирующих аденилатциклазу.
Пример 1. 1,5 г сефарозы CL 6B, промытой 10-кратным объемом воды, помещают в пластиковый флакон объемом 15-20 мл. Добавл ют 3 мл 0,07 М раствора периодата натри и медленно перемешивают реакционную смесь в течение 45-60 мин при комнатной температуре. Добавл ют 0,5 мл 2 М этиленгликол и продолжают перемешивание еще 30 минут. Гель отфильтровывают на пористом стекл нном фильтре,
промывают водой, а затем 0,01 М натрий- карбонатным буфером (рН 9,5).
В 5 мл отдиализованного против 0,01 М карбонатного буфера (рН 8.5) раствора аденилатциклазы чумного микроба (0,5 мг/мл аденилатциклазы с активностью 2 нмоль/мг) внос т активированную матрицу и рН суспензии довод т до 9,5 с помощью 2 М гидроокиси натри . Реакцию продолжают в течение 24 часов, медленно вращал реакционный сосуд при 8-10°С.
Дл восстановлени азометинов и оставшихс альдегидных групп добавл ют 3 мл свежеприготовленного раствора боро- гидрида натри в концентрации 1 мг/мл в том же буфере. Реакцию продолжают при медленном перемешивании в течение 1 часа в холодном помещении. Гель промывают 0,01 М карбонатным буфером рН 8,5, затем 0,01 Мтрис-HCI рН 7,6. Активность св занной с матрицей аденилатциклазы определ ют по методу (Tovey K.S., Whelan J.A.M. A simple direct assay for cyclic AMP in plasma and other biological sampe using an improved
(Л
CO 00 b
GO
ompletive protelin binding technique. Clin. hlm. Acta, 1974, v.56, P.221-224). Ома сотавл ет 2,5 ед/г. За единицу активности денилатциклазы принимают количество аномелей цАМФ синтезированного одним г фермента за 1- минуту при 37°С. Количетво аденилатциклазы, иммобилизованной на 1 г носител равно 1,3 мг, что составл ет 80% от добавленной дл св зывани . Иммобилизованный фермент сохран ет 95% акивности по отношению к нативному состо нию, Иммобилизованна аденилат- циклаза полностью сохран ла свою активность в течение 6 мес цев (срок наблюдени ).
Пример 2. Все операции провод т как в примере 1, но концентраци аденилатциклазы составл ет 0,6 мг/мл, инкубаци 12 часов, температура 22°С. Дальнейшие операции как в примере 1. Количество адени- латцмклазы иммобилизованной на 1 г носител составл ет 1,7 мг, что соответствует 85% от добавленной дл св зывани . Активность св занной с матрицей аденилатциклазы соответствует 3,2 ед/г.
Пример 3. Все операции провод т как в примере 1, но аденилатциклазу отдиа- лизовывают против 0,01 М карбонатного буфера рН 9,5. Концентраци фермента составл ет 0,5 мг/мл, врем инкубации 10 часов, температура 28°С. Количество аденилатциклазы иммобилизованной на 1 г носител составл ет 1,4 мг, что составл ет 82% от добавленной дл св зывани . Активность св занной с матрицей аденилатциклазы составл ет 2,7 ед/г.
Как видно из приведенных примеров,, полученна иммобилизованна аденилат- циклзза чумного микроба вл етс высокоактивным и стабильным продуктом, имеющим большую биотехнологическую и биохимическую значиморть. Поскольку аденилатциклаза вл етс ферментом синтеза циклического аденозинмонофосфата - биологически активного вещества, используемого в биологии и медицине, то
иммобилизованна форма фермента может быть использована в биотехнологическом процессе по получению цАМФ, благодар легкой извлекаемое™ нуклеотида из реакционной смеси и возможности многократного использовани матрицы, Кроме того, св занна аденилатциклзза характеризуетс стабильностью своей структуры, что обус- ловливаетвозможность ее
транспортировки на большие рассто ни без привлечени низкой температуры и других условий, обычно используемых дл ферментов .
Ковалентноё св зывание аденилатциклазы может сыграть свою роль в изучении механизма ее действи , т.к. дает возможность быстро измен ть и контролировать окружение фермента. Если учесть, что большинство белков клетки, к числу которых относитс аденилатциклаза, активируютс присоединением или отщеплением неорганического фосфата, то, име пришитый к матрице белок, последовательно ввод или удал изучаемые вещества из реакционной системы, можно точно, установить, какой именно ион катализирует его активность и какие энзимы клетки принимают в этом уча- стие.
Формула -и з обретени Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба общей формулы
н и
P-C-N-E- . Мгде Р - остаток модифицированного перио- датным окислением сефарозы CL 6В,
Н - N-E остаток молекулы аденилатцикла- зы после восстановлени борогидридом натри ,
обладающа способностью синтезировать циклический аденозинмонофосфат.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU915016438A RU1838409C (ru) | 1991-07-03 | 1991-07-03 | Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU915016438A RU1838409C (ru) | 1991-07-03 | 1991-07-03 | Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1838409C true RU1838409C (ru) | 1993-08-30 |
Family
ID=21591501
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU915016438A RU1838409C (ru) | 1991-07-03 | 1991-07-03 | Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1838409C (ru) |
-
1991
- 1991-07-03 RU SU915016438A patent/RU1838409C/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Дин П.. Джонсон У. Мида Ф Аффинна хррматографи . М.: Мир, 1988, с. 280, * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU1630617A3 (ru) | Способ получени фруктозилдисахаридов | |
CA2087730C (en) | Use of crosslinked crystals as a novel form of enzyme immobilization | |
Mehler | Induced Activation of Amino Acid Activating Enzymes by Amino Acids and† RNA | |
Howard | The biochemistry of rumen protozoa. 2. Some carbohydrases in cell-free extracts of Dasytricha and Isotricha | |
Muzzarelli et al. | Isolation of lysozyme on chitosan | |
EP1137669B1 (en) | Storage-stable composition comprising squaric acid activated carrier usable for immobilisation of compounds containing amine groups | |
RU1838409C (ru) | Иммобилизованна аденилатциклаза чумного микроба | |
Gilmore et al. | Energy-dependent cell cohesion in myxobacteria | |
Cheetham et al. | Studies on dextranases: Part III. Insolubilization of a bacterial dextranase | |
Grunwald et al. | Immobilized bovine lactose synthase A method of topographical analysis of the active site | |
KR950014967B1 (ko) | 모라노린 유도체의 제법 | |
CZ285449B6 (cs) | Způsob výroby D-aminokyselin nebo derivátů D - aminokyselin | |
Dixon et al. | Immobilized lactate dehydrogenases | |
Mosbach | Immobilized enzymes in organic synthesis | |
Kumar et al. | Immobilization of enzymes and biotechnological perspective | |
JP3309188B2 (ja) | アルギン酸リアーゼ | |
Stella et al. | Porphyrin biosynthesis. Immobilized enzymes IV. Studies on aminolaevulate dehydratase attached to Sepharose | |
Horowitz et al. | Generalized affinity chromatography: enzyme-sulfonamide conjugates can be isolated by adsorption on immobilized carbonic anhydrase | |
RU2054485C1 (ru) | Способ получения уропорфирина | |
SU1521775A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной галактозооксидазы | |
SU1052509A1 (ru) | Способ получени сорбента дл иммобилизации биологических активных веществ | |
SU671284A1 (ru) | Способ получени модифицированных ферментов | |
JPH0229318B2 (ja) | Seitaitaiekiseibunnosokuteiho | |
SU810815A1 (ru) | Способ иммобилизации транскортина | |
JPS62126990A (ja) | セドヘプツロ−スの製造法 |