PT95362B - Processo de preparacao de dibenzofuranos substituidos e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

protector inerte, tal como terc-butildimstilsililo, substituição do grupo bromo por um grupo etanol, resultando num composto que pode ser convertido num composto de fórmula A, por conversão do grupo bloqueador num grupo hidroxilo, ou por oxidação para conversão do álcool na metileetona, conversão da metilcetona resultante com metilcarbonato de magnésio no quelato de magnésio do enol do beta-cetoácido resultante,correspondente, acidifieação para obter o ácido livre correspondente e conversão do grupo protector no grupo hidroxilo, se desejado, após esterificação ou amidaçao do grupo OH do ácido carboxílico.

Os compostos exibem actividade como antagonistas dos efeito·' do leucotrieno B4 (LTB4). 0 invento refere-se ainda ao processo de preparação de composições contendo os novos compostos.

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-3MEMÕRIâ...DESCRITiyA

- âmbito......do......Invento invento refere-se ao processo de preparação de dibenzofuranos 2,8-dissubstituídos, a composições contendo estes compostos e a processos para a sua utilização para antagonizar os efeitos de leucotrieno B4.

2. Descrição......da......Arte Anterior leucotrieno 84 (LTD4) é um produto do metabolismo do ácido araquidónico, por meio do caminho da lipoxigenase. 0 leucotrieno 84 é produzido por diversos tipos de células inflamatórias, incluindo neutrófilos, macrófagos, mastócitos e células epiteliais,, A estrutura do LTB4 é a seguinte’·

COOH lisozómicos, aumento dos

Ao nível celular, a libertação de LT84 provoca a agregação e movimento (quimiocinese e quimiotropismo) de leucócitos, em particular neutrófilos,. Outras acções biológicas de LTB4 sobre a função dos leucócitos incluem a libertação de enzimas a expressão dos reoeptores de superfície C3b e o níveis de cGMP intra-leucócitos. Além disso foi sugerida a possibilidade de o LTB4 regular elementos linfócitos da resposta imunitária in vitro,. A evidência deste facto é demonstrada pelos efeitos respectivos, inibidor e estimulador do LT84 na proliferação de linfócitos T reguladores-indutores e supressores-citotóxicos, bem como pela modulação da produção de m ο η o c i n a e 1 i n f o c i n a,.

As acções do L.TB4 são mediadas pela interseção desta molécula com reoeptores específicos, nas membranas de células afectadas«

Sistemicamente, o LTB4 provoca efeitos neutropénicos quando

Code 1492A administrado por via intravenosa, acumulação de neutrófilos quando infusão intraocularί verifica-se acompanhada por exsudação de plasma injecção intradêrmica, ern coelhos e

Ao nível celular, observa-se o LT84 é administrado por a c u m u1açáo de neu tr ó fi10s aquando da administração por no homem,.

Devido à sua actividade como quimioatractor potente para os leucócitos, 0 L.TB4 tem sido implicado na patogeness de diversos estados inflamatórios incluindo psoríase, artrite, gota, fibrose, cística, doenças inflamatórias do . cólon © síndromas ds microembolia pulmonar,. De facto, é possível especular acerca da importância do LT84 como mediador em qualquer estado caracterizado por uma infiltração de glóbulos brancos.

Os a n ’c a g 0 n i s t a s qerão ser usados da iritsr acção do LTB/i com o seu receptor no tratamento de qualquer um dos estados inflamatórios previamente mencionados, bem como no tratamento de desordens do sistema ímunológico.

SUMÁRIO......βθ.......INVENTO presente invento refere-se a uma nova classe de compostos baseados em dibenzofuranos 2,8-dissubstituídos possuindo a seguinte fórmula genéricas

Os novos compostos demonstraram inibir certos tipos respostas celulares que se presume serem mediadas por meio interacções especificas do LTB4 com receptores celulares,, de

As composições farmacêuticas contendo fórmula A e os processos de tratamento composições, são também incluídos no âmbito do os compostos de uti1i za ndo essas p rsse nte inve n to.

DESCRIÇÃO......DETALHADA.....DO.....INVENTO

Os novos compostos do presente invento são dibenzofurano

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dióis 2,8-substituidos, como se pode verificar na fórmula A,

Em relação á fórmula A:

a A: n	é um núrner	0 inteiro.
entre 1 e	5; R^· pode ser	alquilo (de
cíclico);	fenilo; fenilo	substituído
, -CF3, -	OCH3, alquilo,	-CN, -NH2,
di- e t	ris u fos t itu í d0s	derivados);

“CONH2, ou NO2 e fenilos di Ph(CK2)n que n ~ 1-5 ou mais,e em que o anel fenilo pode, também, comportar substituintes; heteroaromático; ou heterociclicoal quilo «~)ι·

R‘“ pode ser uma porção éster (C02R'“' em que R° é alquilo, arilo ou aralquilo); um sal alcanoato (por ex; C02Na ou CC^K); uma porção amida (C(0)NR⁴R~' em que R⁴ é H, alquilo, arilo (substituído ou não substituído) e R⁵ « R⁴ substituintes R⁴, ou R⁴ e R⁵ constituem um anel, ~(CH2)5~ ou (CH₂CH2)2X que X é 0, S, NR⁶ (R⁶ arilo s ubs tituído));

arilo ou sulfóxido um éter ou é um dos outros como tetrazol, ~~ H, alquilo, tioéter (SR), (SOqH); ácido (0R);

(SOR); sulfona (S0pR)_? ácido sulfínico sulfónico (SO3H); ou hemi-éster de ácidos de enxofre (OSO2H, OSO3H, etc,.), ou sulfonamidas suas derivadas.

Apresentam-se, abaixo, quatro esquemas de síntese para a preparação de compostos representativos do presente invento,, Em todos compostos, RÍ é benzilo (Ch^C^H^) sao como indicado na tabela I para os compostos r epresenta t i vos, identificados pelas suas designações numéricas nos síntese l-IV» s esquemas de

SEGUE TABELA I

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Tabela I» Resumo de Compostos A (R^ ~ CHpC&Hk,),,

	H C02H C02Na C(0)N(CH3)2	c(o )n' 1	OH	C(O)N^ 0 V /
1	6 11	12
	26	22
3	45 40	41	42	25	43
4			51

Os compostos mostrados rios esquemas I-IV, cujos números não estão incluídos na Tabela I, são intermediários úteis para a produção dos novos dibenzofuranos„

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-7>!

ESQUEK I: A, n = 1, R¹ = CH₂C₆H5

T = sí(ch₃)₂c(ch₃)₃

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-8ESQUEMA II: A, n=2, R¹ = ΟΗ₂ΟθΗ₅ ( e 25, A, n - 3 )

τ = sí(ch₃)₂c(ch₃)₃

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-9ESQUEMA III: A, n = 3, R¹ = 0¾¾

τ = sí(ch₃)₂c(ch₃)₃

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-10Esquema IV: A, n = 4.

R¹ = ch₂c₆h₅

T = Si(CH₃)2C(CH3)3

Apresenta-se, seguidamente, uma descrição geral das sínteses apresentadas nos Esquemas I-IV:

o 2-bromo-S-fenilacetildibenzofurano (1, Esquema I) foi preparado como previamente referido, por bromação do dibenzofurano (Buu-Hoi, Mg» Ph. and Royer, R. Rec. trav. chim, 1948. 67, 175; veja-se também Mayer, F. e Krrieger, W. Ber. 1922,

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As condições preferidas em refluxo foi então adequado, ( TBDMS), por outro solvente metilsulfóxido,

55, 1659 e Gilmari, H.5 Brown, G.E., Bywater, W.Q.5 e Kirkpatrick, W.H. J» Am. Chem. Soc. 1934, 56 2473), seguida de acilação de Friedel-Crafts com cloreto de f eni lace ti lo (Buu-Hol, loc. clt.) , 0 grupo ceto em 1 foi reduzido, da forma mais conveniente, com um hidreto binário ou complexo, a 0-1002C, preferivelmente, com boro-hidreto de sódio (NaBH4) num solvente prótico adequado como água, etanol ou outros álcoois alifáticos ou suas misturas adequados» a temperaturas compreendidas entre a ambiente e as de refluxo, para originar o álcool 2.

consistiam em 2-propanol, contendo 4 a 10¾ de água, durante um período de cerca de 1 h. A função álcool derivada, usando um grupo protector inerte preferivelmente o grupo terc-butildi met i1si1i1o reacção de 2 em N,N-dimetilformamida (DMF) ou polar aprótico como Ν,Ν-dimetilacetamida, tetrametilureia e compostos relacionados, com TBDMS-imidazol, ou outro conjugado TBDMS-N-alquilo- ou arilamina ou base, formado in situ por um método geral (Corey, E.J. e Venkateswarlu, A» J.. Am» Ch em..-. .§ o c 1972, 94, 6190), a 0-1002C, p r e f e r i v e 1 me n te, à temperatura ambiente, para originar 3. Os grupos protectores alternativos incluem éteres trialquilsílil- ,aril-dialquilsililo e suas variações» Pode, também, empregar-se qualquer grupo éter alquilico ou aralquílico, funcional» 0 derivado organometálico de 3, preferivelmente, o reagente de Grignard, preparado a. partir de por igir reacção com limalhas de / e1mente, tetra-h i dr of ur ano com acetaldeído a -80-1002C.

Mg num solvente etéreo. (THF) em refluxo, é feit< preferivelmente, a 0-25ÔC.

para originar, em condições ácidas, o derivado etanolico 4»

A„ Os compostos A, em que η * 1 (Esquema I), foram preparados como se segue,,

1» 0 desbloqueamento do grupo OH protegido por éter ou sililéter, em 4, com qualquer reagente conhecido para a clivagem de éteres, especíalmente sililéteres, originou o diol 6 (A, n 1, Rl “ CH2C^H5, R^ H)„ Entre estes reagentes encontram-se os ácidos, especialmente ácidos de Lewis; as bases, nomeadamente hidróxidos metálicos, especíalmente, hidróxido de sódio, sais de

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flúor, especialmente, fluoreto ds fce t r a - buti1amόn1o (TBAF) ou outros fluoretos solúveis em solventes orgânicos, ou fluoretos tornados solúveis por complexação, por exemplo, fluoretos metálicos complexados com um éter .-coroa. ou sais de flúor tornados solúveis em meio orgânico, por agentes de transferência de fase. As condições preferidas são fluoreto de tetrabutilamónio (TBAF) em tetra-hidrofurano (THF) à. temperatura ambiente.

2. Alternativamente, o álcool 4 foi oxidado com um oxidante adequado para originar a metilcetona 5. 0 reagente preferido é um oxidante à base de crómio, tal como clorocromato de piridínio num meio de solvente orgânico apoiar, preferivelmente, diclorometano ou clorofórmio, a uma temperatura de 0-1002C preferivelmente, à temperatura ambiente, embora se possam usar outros oxidantes, no mesmo ou noutros solventes. A neutralização do reagente acídico ou dos ácidos produzidos durante a reacção e processamento, é conseguida com alumina, ou por tamponização da mistura com acetato de sódio (Corey, E.J. e Suggs, J.W. Tetrahedron Lett.. 1975, 2647),. Um reagente muito conveniente é o reagente clorocromato de piridínio suportado em alumina referido por C h eng, Y „ -S.; L i u, W. -L. e Chen, S. Synth ©sis, 1980, 223,, i, então, convertido, com metilcarbonato de DMF a 125ÔC, ou a uma temperatura próxima M. í:,. Am. Chem. Sóc. 1959, 81, 2598), no que la to de do enol do β-cetoáeido 7, a partir do qual se obteve o ácido livre 7, por acidificação e cristalização imediata em hepta.no. Verificou-se que o composto 7 descarboxilava rapidamente em repouso na solução.

Quando o composto 7 recentemente preparado era reduzido, preferivelmente, com um hidreto binário ou complexo adequado, como MaBHq em solução alcoólica-aquosa a 0-1002C, preferivelmente, em 2-propanol aquoso à temperatura ambiente, obtinha-se o hidroxiácido 8 após processamento acídico,, A remoção do grupo proteetor TBDMS, como descrito previamente para a conversão de 4 em 6, usando por ex: TBAF em THF, originou o ácido diol-carboxí-

0 .	zornposto	5
magnésio	(MMC)	em
(Stiles,	M,, J..	Am
magnésio	(aducto	MM

lico 11 (A, n * 1, R¹ * CH2C6H5, R^:

COqH)

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-133,. Al ternativamente, o hidroxiácido 8 foi convertido por processos padrão no éster do ácido carboxílico correspondente, preferivelmente, no éster metílico 9, por reacção de 8 com diazometano etéreo, frio. 0 tratamento de 9 com dimetilamina não diluida ou num solvente inerte a 0-15QÔC, preferivelmente, em DMF num tubo selado a 652C, durante 5 dias, originou a hidroxiamida 10» A desprotecção do grupo OH protegido, como nos exemplos prévios, por exemplo TBAF em THF, originou a diolamida 12 [A, n * - 1, Rl - CH₂C₆H₅, R² - C(O)N(CH₃)₂j „

Os; compostos A, em que η>1, foram todos preparados a partir do composto C-acetil 5 por C-acilação in situ do aducto MMC de 5 com osUl-haletos funcionalizados apresentados na Tabela II.

Tabela 11. Reagentes u) -Haleto de Alquilação, X(CH₂)_r) ^Y

n	X		Y
1	fôr	C02C2H5	C(0)N(CH3)2 CQN J	CN
2	fôr ou I	CO2CH3
z.»	Cl + Br		C(0)N(CH3)2
3	Br	CQ2CH3
	B„ Os compostos A, em	que n ~ 2 (Esquema II)	foram
preparados como se	segue.
	1.. Quando o	aducto MMC	de 5, previamente formado em	DMF,
como	no exemplo anterior, foi	tratado com bromoacetato de	etilo

seguido de processamento em ácido, ocorreu alquilação e permuta parcial d® éster e descarboxilação do intermediário 13. As condições incluem a reacção do aducto MMC num solvente inerte, adequado, a 0-200SC com outros ésteres de ácido a-halogenocarboxilicos. As condições preferidas eram a reacção do aducto MMC em DMF seca, sob atmosfera de azoto com o éster «··· -iodometilico a 1002C, durante 140 min,. A mistura de ésteres 14a

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-14e 14b foi convertida nos hidroxicetoésteres 18a e 18b pelos métodos de desproteeção previamente discutidos, por ex» com TBAF em THF,, A redução da mistura, de 18a e 18b, preferivelmente, corn um hidreto binário ou complexo adequado, como NaBH4 em solução alcoólica aquosa, preferivelmente, em 2-propanol aquoso, originou uma mistura 2rl da hidroxilactona 24 e do triol 25 (A, n * 3, Rl« = OH2C6H5, = OH) que foi separada por cromatograf ia em coluna,. A hidroxilactona 24 foi convertida num sal de metal alcalino ou alcalino-terroso de um ácido diolearboxílico, preferivelmente, no sal de sódio 26 (A, n ~ 2, RÍ « CH2C6H5, R^ ~ cC^Na), por tratamento de uma solução alcoólica, preferivelmente, metanó1ica, de 24 com um hidróxido de metal alcalino ou alcalino-terroso aquoso, preferivelmente, hidróxido de sódio,.

2.. As arnidas „ 22 8 23 [A, n = 2, R¹ = ^CH2^C6^H5 ^{8 r2} “ C(0)N(CH3)2 ⁸ 0(0)N(CH2)4, respectivamente], foram obtidas por alquilação do aducto MMC de 5, previamente formado como anteriormente descrito, com Ν,Ν-dimetilbromoacetamida e N.....bromoacetop i r r o1i d i na, ou outras a-ha1oami das adeq uadamente, reactivas, especialmente, as iodoamidas correspondentes, para originar as cetoamidas 15 e 16, respectivamente» Esta reacção de alquilação pode ser conduzida a temperaturas compreendidas entre a ambiente e 2502CS no entanto, as condições óptimas parecem, encontrar-se entre 90 e 1202C com qualquer a-haloamida adequadamente reactiva para originar as arnidas de A (em que n~2), 0 desbloqueamento, como descrito previamente, usando por ex„ TBAF em THF, originou as hidroxicetoamidas 19 e 20, respectivamente» A redução da função ceto em 19 ou 20, foi realizada, preferivelmente, com um hidreto binário ou complexo adequado, como NaBH4, num solvente alcoólico aquoso, pref er ivelrnente, etanol ou 2-propanol aquoso a 0-15Q2C, mas, optimamente, a 55-852C

3» Quando o aducto MMC de 5, preparado como descrito anteriormente, foi tratado com bromoacetonitrilo ou outro haloacetonitrilo, obteve-se o çetonitrilo 17, sob condições semelhantes„

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C„ Os homólogos A, em que n (Esquema III) podem ser obtidos a partir do cetoéster 27, que foi preparado por alquilação do aducto MMC de 5 com um β-halopropionato de alquilo adequado, como 3-bromopropionato de metilo ou, preferivelmente, com 3-iodopropionato de metilo. As condições incluem o uso de um solvente inerte adequado a 0-20020, preferivelmente, DMF a 50-5520, em atmosfera ds azoto.

1» A remoção do grupo protector TBDMS em 27 foi realizada sob as condições descritas anteriormente, usando por ex. TBAF em THF para originar o hidroxicetoéster 34. A hidrólise de 34 com um hidróxido aquoso de metal alcalino ou alcalino-terroso ou outra base aquosa ou alcoólica, preferivelmente hidróxido de sódio aquoso em metanol, originou 35 que foi convertido no ácido livre 36, após tratamento subsequente com ácido mineral aquoso, A redução do sal de sódio 35, convenientemente, com um hidreto binário ou complexo, preferivelmente, com NaBH4 aquoso, a temperaturas compreendidas entre 0-100SC, preferivelmente, da temperatura ambiente até cerca de 602C, seguida por acidificação, originou uma mistura 1:1 da lactona 44 e do hidroxiácido 45. A mistura de 44 e 45 foi convertida, no sal de metal alcalino ou alcalino-terroso do ácido diolcarboxílico, preferivelmente no sal de sódio 40 [A, n - 3, R^ ~ CH₂C^H5, C0₂Na], por reacção com hidróxido aquoso de metal alcalino ou alcalino-terroso, preferivelmente, hidróxido de sódio em metanol à temperatura ambiente.

éster 27 pode ser facilmente hidrolisado no cetoácido 30 com ácido mineral aquoso diluído, c 1 or ídr ico di 1 uí do.

pref er i velme n te, acido diluída num tubo eacção do

2.. A cetoamida 28 foi obtida por reacção do cetoéster 27 com dimetilamina, não diluída ou misturada com um solvente inerte, a 0-20020, preferivelmente, dimetilamina não selado a 80-9520, durante 5 dias. Alternativament aducto MMC de 5 com uma N,N-dimetil-3-halopropíonamida (halo-~Cl, Br, I) num solvente inerte, seco, a 0-20020, preferivelmente, em DMF a 1052C, durante várias horas, originou 28. A remoção do

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Code 1492A grupo protector TBDMS em 28, usando as condições estabelecidas para as reaeções semelhantes, por ex. com TBAF e THF, originou a hidroxicetoamida 37. Este último composto foi reduzido, da forma mais conveniente, com um hidreto binário ou complexo adequado, preferivelmente com NaBH₄ num solvente alcoólico aquoso a temperaturas compreendidas entre 0-100SC. As condições óptimas consistiam em etanol aquoso a temperaturas compreendidas entre a ambiente e cerca de 60ÔC, para originar a diolamida 41 [ft, n - 3, R¹ * CH2C6H5, R² * C(0)N(CH3)₂K ou

R²

3.. A reaeção de um éster alquilico ou ar í lico, preferivelmente, do éster metílico 27, com pirrolidina, quer não diluída quer em solução num solvente inerte, preferivelmente, não diluída e sob refluxo, originou a cetoamida 29„ 0 desbloqueamento do grupo OH protegido em 29, usando as condições descritas anteriormente, por ex. corn TBAF em THF, originou a hidroxicetoamida 38« Este último composto foi reduzido com um hidreto binário ou complexo, preferivelmente NaBH₄ aquoso num solvente alcoólico a uma temperatura compreendida entre 0-1002C, mais apropriadamente, em etanol a cerca de 552C, durante uma hora menos, para originar a diolamida 42 [A, n » 3, RÍ « ^cí'2^c6^h5?

C(O)M(CH₂)₄]„

4.. A hidrólise do éster 27 numa solução aquosa ou alcoólica-aquosa diluida de um hidróxido de metal alcalino ou alcalino--terroso a 0-2002C originou o sal carboxi lato.

preferidas consistiram numa solução ebuliente de sódio metanólico aquoso, que originou o carboxilato de sódio 31. A conversão deste sal no cloreto de ácido 32 com cloreto de e piridina em benzeno à. temperatura do banho de gelo A.L. e Shunk, C.H. J. Am. Chem. Soc.. 1948, 70 2427), de reaeção com um excesso de morfolina, originou a cetona-amida 33. Apesar de estas condições serem altamente favoráveis para a produção directa do cloreto de ãcido 32 a partir do sal carboxilato, podem não ser exclusivas. Os outros reagentes incluem cloreto de tionilo, cloreto de fosforilo ou tricloreto de fósforo (bem' como os halogenetos análogos respectivos), como se emprega, geralmente, para a conversão de

As condições hidróxido de oxa1i1 o (Hilds, seguida

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-17ácidos carboxílicos ou sais seus derivados em haletos de acilo (veja-se, por exemplo, Buehler, C. A. e Pearson, D. E. Survey of Organic Syntheses, Vol. 1, pg. 859-861). A remoção do grupo ΤΒΡΙΊ8 em 33, foi realizada da forma descrita anteriormente, usando por ex. TBAF em THF, para originar a hidroxi-cetona-amida 39. Este último composto foi reduzido na diolamida 43 [A, n = 3, R- = N(CH2CH2)2θ] usando um hidreto binário ou complexo, preferivelmente NaBH4 num solvente aquoso ou aquoso-alcoólico, a temperaturas compreendidas entre 0 e 1503C. As condições óptimas consistem em etanol aquoso a cerca de 60ÔC.

D„ 0 homólogo A, em que n ~ 4, R¹ ~ CH2C6H5 e R² - N(CH2)4 (Esquema IV), foi preparado por alquilação do aducto MMC de 5 com 4-bromobutirato de metilo, ou com um éster 4-halobutirato relacionado, para originar o éster 46, que foi convertido na amida 48 por aquecimento com pirrolidina seca. As condições preferidas são semelhantes às mencionadas anteriormente para a produção dos compostos 16 e 29. Alternativamente, o éster 46 pode ser convertido na amida por um processo em etapas múltiplas, semelhante ao empregue para a conversão do éster 27 na amida 33, q, v. 0 desbloqueamento do grupo OH protegido em 48 foi efectuado como descrito anteriormente, usando por ex. TBAF em THF, para originar 50. A redução do grupo cetona em 50 foi realizada usando um hidreto binário ou complexo, preferivelmente, NaBH4 num solvente alcoólico aquoso a 0-1502C, por ex. em etanol aquoso a cerca de 6020, para originar a diolamida 51.

Testou-se um grande núrnero produzidos pelos processos acima, anti~LTB4, e verificou-se que significati vamente, a actividade de dos novos dibenzofuranos relativamente a actividade estes compostos inibem,

LTB4, in vitro.

presente invento refere-se, também, a composições farmacêuticas contendo como ingrediente activo uma quantidade eficaz, isto é, uma quantidade eficaz para antagonizar a resposta mediada por LTB4 a tratar, de um ou mais dibenzofuranos substituídos, em formas de dosagem farmacêutica convencionais. Essas formas de dosagem incluem, mas não se limitam a, formas de

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-18dosagem oral como cápsulas, comprimidos, drageias, trociscos, líquidos, elixires e suspensões; formas de dosagem parentérica como propilenoglicol ou soluções salinas isotónicas injectáveis; e formas de dosagem tópica incluindo soluções em glicóis ou álcool, loções, cremes, unguentos oleosos, pós e pulverizadores de aerosol. Qualquer uma destas formas de dosagem pode incluir veículos, diluentes.

excipientes.

ligantes e aditivos convencionais, conhecidos dos especialistas em farmácia» Existem diversos exemplos de formas a d eq ua das em Remington* s Pharmaceutical Sciences, (1985).

medicina e ds dosagem 17â„ edição invento compreende, adicionalmente, um método de tratamento de um paciente humano ou animal, para antagonizar ou contrariar os efeitos do LTB4 endógeno, por administração ao paciente de composições farmacêuticas, como as descritas no parágrafo precedente, de uma. a quatro vezes por dia. 0 paciente humano ou animal poderá requer esse tratamento para indicações como asma, desordens inflamatórias e sistema imunológico, choque séptico, doença renal ou uma grande variedade de alérgicas, desordens do rejeição de transplante, outras condições mediadas por LT84. Outras indicações específicas artrite, gota, fibrose cística, doença incluem psoríase i n f 1 a m a t ó r i a d o colon e síndromas de microembolia pulmonar,.

Os exemplos que se seguem fornecem ilustrações detalhadas de preparações de certos dibenzofuranos substituídos ds acordo com o presente invento, juntamente com análises biológicas dos novos compostos. Estes exemplos não pretendem, no entanto, limitar ou restringir de forma alguma o âmbito do invento, e não deverão ser entendidos como fornecendo materiais de partida, reagentes, métodos de síntese ou condições experimentais que devam ser utilizados exclusivamente na prática do presente invento,.

EXEMPLO.......1 l-[2-(8-8romodibenzofuranil)] -2-feniletanol (2). Aqueceu-se uma mistura agitada, de 1 (16,14 g; 44,2 mmol) e 2PrOH (65 ml) a cerca de 452C, tratou-se com uma solução de NaBH4 (0,65 g; 17,2

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mmol) em H₂0 (6,5 ml) e submeteu-se a refluxo durante uma. hora. 0 excesso de NaBH4 foi decomposto por acetona (2,5 ml), a qual foi adicionada à mistura parcialmente arrefecida. Após 20 min, a fase superior foi decantada e a fase pequena, inferior, foi passada com 2-PrOH (3x4 ml). As soluções combinadas de 2-PrOH foram filtradas e evaporadas sob pressão reduzida para originar 2, na forma de xarope, do qual se removeram impurezas residuais, por cromatografia em coluna (silica gel, 40 g, 70-230 mesh, Et₂0)„ As fracções de produto foram evaporadas até próximo da secura sob pressão reduzida» 0 residuo foi tratado com heptano (50 ml), semeado e agitado durante a cristalização exotérmica. A filtração, enxaguagem do sólido com heptano (20 ml) e secagem in vacuo durante 4 h, a 602C, originou 2 puro (15,8 g, 97%), p.f. 94-95,52C. Mesmo antes de se encontrar livre de solvente, observou-se que o sólido captava cargas eléctricas. Separou-se uma segunda porção de produto, pequena, do licor mãe, na forma de agulhas macias, p.f. 79-81ÔC, que apresentava o mesmo espectro RMN (CDCI3) que o produto principal» TLC (silica gel, PhH): Rf 0,3.

Anal.. Cale.para C₂oH₁₅!3rO₂ [PM 367,24]: c, 65,415 H, 4,12; Br, 21,76. Encontrado: C, 65,47; H, 4,15; Br, 21,82.

EXEM.PL0_._2

1.....[ 2 - (8 - !3 r o m o d i b e nzofuranil)]™! -terc- b u t i 1 d i m e t i 1 s i 1 o x i - 2 -feniletano (3). Depois de ter sido deixada em repouso durante uma noite, uma solução de 2 (10,8 g, 29,4 mmol), imidazol (5,0 g, 73 mmol) e t e r c-b u11lclorodime t i1s i1a ηo (5,32 g, 35,3 mmol) em DMF (35 ml, destilada a partir de CaH₂ sob pressão reduzida, armazenada sobre peneires moleculares de 4 8) foi vertida sobre gelo/H₂0 (250 ml). A mistura foi extractada com Et₂0 (2x60 ml). Os extraetos foram lavados com H₂0 (4x50 ml), secos (MgS04) e concentrados a um pequeno volume para originar um xarope que foi dissolvido em heptano e semeado. Durante a noite, separou-se uma primeira porção de 3 (7,65 g), na forma de grãos duros, incolores, que foram filtrados e lavados com heptano (15 ml). A evaporação do solvente, adição de heptano (5 ml) e sementeira,

802

Code 1492A

originaram uma segunda porção (2,89 g) com o mesmo p.f. 63,5™ -71SC,

Os materiais presentes no licor mãe foram fraccionados por cromatografia em sílica gel [75 g; 5% PhH/heptano 300 ml, seguido

0 % P !i H / h e p t a η o ]

As primeiras rracçoes continham contaminantess as últimas fracçSes continham 3 puro (3,50 g; 99,6%, total), p.f. 68-69,520, que captava, prontamente, cargas eléctricas. TLC (sílica gel, 20% PhH/heptano)··; Rf 0,75; GC (CP Sil 19-CB, 10 rn, 5 psi He, 230 20): R_t 16,07 min..

Anal. Calc. para C26H29BrO₂Si [PM 481,50]: C, 64,86; H, 6,07; Br, 16,59, Encontrado: C, 64,74; H, 6,09; Br, 16,51.

EXEMPLO......3

1-[2-[8-(1-tere-Bu ti1dimet i1s i1οκ i)-2-feni1eti1]d i beη ζ ofuranil]etanol (4). Lavou-se, sequencialmente, EtBr, a partir do qual se preparou o iniciador EtMgBr, com H2SQ4 concentrado até o liquido de lavagem ser incolor, H2O, Na^COj aquoso e H₂0, secou™ -se (MgSQ/j.), destilou-se com P₂0s ^s armazenou-se sobre peneiros moleculares de 4

Inundou-se com N₂ seco um balão de 3 tubuladuras, seco, equipado com um condensador munido, no topo, com um tubo cheio com Drisrite, e contendo limalhas de Mg (0,29 g, 12 mmol),. Quando se adicionaram 3 ml de uma solução de EtBr (1,14 g, 10,5 mmol) em THF seco (10,0 ml), ocorreu uma reacção exotérmica espontânea. A porção restante da solução de EtBr foi adicionada a. mistura agitada, durante cerca de 15 minutos à velocidade adequada para ocorrer refluxo suave. A mistura foi, então, aquecida para manter o refluxo durante 45 min e, em seguida, diluída com THF (10 ml). Estas soluções de EtBr, mantidas em frascos selados com septos, retiveram propriedades iniciadoras excelentes durante, pelo menos, uma semana.

Par a a equiv) com í com 3 (4,0 g síntese de 4, tratou-se Mg (0,35 g, 14 mmol, 1,7 solução de EtMgBr acima (5,0 ml), e, seguidamente, 8,3 mmol; seco em vácuo) dissolvido em THF (20 ml).

A mistura, agitada foi submetida a refluxo suave durante 2,5 h sob

802

Code 1492A

-21Ν₂, arrefecida a cerca de 02C e tratada, gota a gota, durante cerca de 3 min, com uma solução (6,5 ml, 2,25 M) de CH3CHO (14,3 mmol, 1,7 equiv) em THF que tinha sido mantida sobre Drierite. A mistura foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e foi, então, tratada com NH4CI aquoso, saturado (10 ml). Após 0,5 h a camada de THF foi decantada e os materiais orgânicos residuais na camada inferior foram extractados com Et₂0- As soluções combinadas de THF e EtpO foram secas (MgSO4) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar um xarope, que foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel, 180 g, 5¾ Et₂0/PhH). As porçoes iniciais continham produtos secundários; as últimas fracções originaram 4 na forma de xarope (3,68 g) que continha um mole de PhH de acordo com um espectro ^H RMN» 0 rendimento de 4 puro foi de 3,13 g, 84¾. TLC (sílica gel/PhH): Rf 0,3., Para análise elementar secou-se uma amostra 1 n vacuo a 65SC.·,

AnalCalc. para C28H34O3SÍ [PM 446,67]: C, 75,29; H, 7,67. Encontrado: C, 75,42; H, 7,76.

Obtiveram-se resultados inferiores quando se utilizou BrCF^CF^Br para iniciar a reacção de Mg com 3 ou quando se utilizou 3 ligeiramente impuro»

EXEMPLO.....4 l-[2-[8-(l-Hidroxi)-2-feniletilJdibenzofuranil]etanol (6). Uma solução de 4 (0,25, 0,56 mmol) THF (6,5 ml) e 8U4NF (0,73 ml, 1 M em THF) foi deixada em repouso durante a noite e, em seguida, percolada através de sílica gel (4,5 g) com THF (20 ml). A evaporação do solvente originou um xarope que foi fraccionado por cromatografia (sílica gel, 17 g, CHCI3); as fracções iniciais continham contaminantes, as últimas fracções originaram 6 puro (cerca de 0,19 g, 100¾) na forma de um xarope duro, que foi seco em vácuo, 40ÔC , 20 h; TLC (sílica gel, CHCI3): Rf 0,1» As tentativas para cristalizar esta mistura, de diastereómeros a partir de Et₂0 não foram bem sucedidas.

Anal» Calc» para C₂₂H20⁰3 C^PM 332,40]: c, 79,49; H, 6,06.

Encontrado: C, 79,23; H, 6,16.

802

Code 1492A

-22EXEMPLQ......5

- [ 2 - [ 8 - (1 -terç- 8 u t i 1 d i m etilsilo x i) - 2 - f e n iletiljdi b s η z o f u raniljetanona (5). A uma solução ds 4 (3,79 g, cerca, ds 7,8 mmol;, contendo cerca de 0,3 g ds PhH) em CH2CI2 (80 ml), adicionou-se alumina (10 g) e clorocromato de piridinio (3,4 g, 16 mmol, 2 equiv). A mistura, protegida com um tubo cheio com Drierite, foi agitada durante a noite,. Os sólidos foram removidos por filtração e lavados com CH2CI2 s PhH. 0 filtrado e os licores de lavagem reunidos, foram evaporados sob pressão reduzida. A porção solúvel em PhH do resíduo foi percolada através de alumina (60 g)

PhH; a evaporação do solvente originou um xarope incolor que dissolvido em heptano (cerca de 3 ml) e •'semeado¹'. .A evaporação heptano originou 5 puro (3,00 g, 93%), p.f. 93 (sílica gel/PhH): Rf 0,7.

com foi do

TLC

94,52C3

Anal. Calc. para C28H32O3SÍ (PM 444,65]: c, 75,64; H, 7,25.

Encontrado: C, 75,73; H, 7,3:

EXEMPLO 6

Á c ido 3-[2-[8-(1-terç-b u t i1d i me t i1s ί1ox i)-2-f e n i1e t i1]d ibe n:ofuranil]-3-oxopropiónico (7). Orna solução agitada de 5 (0,78 g.

1,75 mmol) em DMF (3,0 ml, destilada reduzida, magnésio com o

CaHo sob pressão armazenada sobre peneiros de 4 A) e metilcarbonato de (15 ml, 2 M em DMF, 17 equiv.)

5OO ⁿ2 sec.

TOl aquecida a. 125ÔC (externo) durante 110 min, arrefecida, vertida sobre gelo e água (cerca de 60 g) e tratada com HCl aquoso (45 ml, 1,4 N) até pH <2. Uma vez que, após ser agitada com Et20 (60 ml), a solução tinha um pH de 4, adicionou-se mais HCl (1,5 ml) para obter um pH de cerca de 2» A camada orgânica, combinada com um segundo extracto etéreo (25 ml), foi lavada com água gelada, seca (MgS0₄) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar um resíduo que continha 7 (78%) e 5 (22%) de acordo com o seu espectro Hl RMN. A dissolução do produto em heptano (5 ml), sementeira¹' filtração e lavagem do sólido com heptano (5 ml) originou 7 puro (0,58 g, 68%), p.f. 105 - 106,52C dec (variável); TLC (sílica gel, 20% MeOH/CHCls): Rf ca... 0,4.

Anal. Calc. para C29H32O5SÍ [PM 488,66]: C, 71,28; H, 6,60.

EXEMPLO 7

Á c i cl o 3 ~ [ 2 - [ 8 - (1 -1 e r ç - fo u t i 1 d i m e t i 1 s i 1 o x i ) - 2 - f e η i 1 e t i 1 ] d i fo e n zof uraníl]~3-hidroxipropiónico (8). Imediatarnente após a sua preparação, o composto 7 (0,57 g, 1,17 mmol) foi suspenso em 2-PrQH (20 ml), agitado e tratado, gota a gota, com uma solução de 6,6 mmol) sm água (1,0 ml), Deu-se a libertação de

NaBH4 (0,25 g, hidrogénio, a mistura aqueceu e separou-se outro sólido. Os materiais salpicados foram enxaguados com 2-PrOH (5 ml), e a mistura foi agitada durante 3 h e, seguidamente, tratada com acetona (5 ml) para decompor o excesso de NaBH4. Após 0,5 h, a maioria dos voláteis tinha evaporado sob pressão reduzida, 0 resíduo foi tratado com gelo e água e HC1 aquoso suficiente (1,4 M, cerca de 5,0 ml) para que a camada aquosa tivesse um pH de 2, após extracção com Et₂O. A camada orgânica, combinada com um segundo extracto etéreo, foi lavada com gelo-água, seca (MgSO4), liberta de solvente, para originar um xarope que foi fraccionado em silica gel (30 g). Com CHCI3 eluíram-se pequenas quantidades de 4 (formado por redução do produto de descarboxilação 5); 5 e 10% de MeOH/CHCls originaram 8 na forma de um xarope (0,51 g, 89%); TLC (silica gel, 20% MeOH/CHCls): R_f cerca de. 0,3» Na secagem in vacuo a 40SC durante a noite, o produto endureceu numa forma vítrea.

Anal. Cale, para C29H34O5SÍ [PM 490,68]: c, 70,99; H, 6,98. Encontrado: C, 70,84; H, 7,00.

EXEMPLO8

Ácido 3-[2-[8-(1-Hidroxi)-2-fenileti1jdibenzofurani1]-3™ -hidroxipropiónico (11), Uma solução de 8 (0,42 g, 0,86 mmol) em THF (3 ml) e B114NF (1,35 ml, 1 M, 1,6 equiv. ) foi concentrada a um pequeno volume com uma. corrente de N₂, protegida com um tubo c h e i o c o rn D r i e r i t e e deixada em repouso durante dias.

percolação através de sílica gel (7 g) com THF originou uma fracção A (0,18 g) contendo o sal BU4N⁺ de 11, bem como compostos terç-butildimetilsililo (análise espectral ^H-RMN). A eluição com 20% de MeOH/CHCl3, originou uma fracção B (0,54 g) que continha.

802

Code 1492A fí_s— t9 além do sal BU4N⁴· de 11, sais inorgânicas Bu4N⁺. 0 tratamento de B com H2O (5 ml) e HCl (0,54 ml, 1,4 N) originou uma solução aquosa C e uma goma que foi lavada com H2O e seca por tratamento com PhH e evaporação sob pressão reduzida. A goma (0,25 g) consistia, então, numa mistura de 11 e cerca de 0,5 mol de um sal BuqN⁴',, A cromatograf ia (sílica gel, 7 g, 2% MeOH/CHClj) originou 11 (60 mg) como um xarope, o qual foi, subsequentemente, tratado com CHCI3. Após a clarificação da solução por filtração, formou-se, gradualmente, um sólido à medida que o solvente evaporava. Quando o sólido foi tratado com EtpO a sua aparência modificou-se, gradualmente. A filtração após várias horas originou uma primeira porção de 11 puro (55 mg).

A eluição subsequente da coluna com 15% MeOH/CHCl3 originou um sólido (0,13 g) que retinha a espécie BU4N'¹., 0 sólido, combinado com a fracção A, foi dissolvido em MeOH, tratado com HCl aquodo (0,9 ml, lm4 N), imediatamente seguido de H2O (cerca de 40 ml), para originar uma solução leitosa da qual se separou, gradualmente, uma goma. A decantação, lavagem com água e secagem azeotrópica com PhH sob pressão reduzida originou uma goma que foi dissolvida em Et20. Após clarificação por filtração, a solução depositou 11 lentamente (porção 2, 135 mg). [Crê-se que a cristalização ocorre apenas à medida, que a H2O é gradualmente absorvida da atmosfera pela solução etérea; a evaporação rápida de Et20, mesmo na presença de núcleos de cristais, originou uma goma]„

A solução de HCl aquosa. C (acima) provocou a deposição de uma porção adicional de goma, após ter permanecido em repouso durante a noite. A goma foi tratada como acima (o líquido foi decantado e lavado com H2O, adicionou-se PhH e evaporou-se e, seguidamente, adicionou-se Et20 θ a mistura foi deixada em repouso para cristalizar, durante a noite) para originar uma terceira porção de 11 (43,4 mg; total, 72%). Q material cristalino, após secagem durante a noite a 652C in vacuo, fundia pa r ci a1mente > 85S, r e - s o 1 id i f i cava par ciaime n te a temper at ur as superiores e, subsequentemente, formava um produto fundido claro, contendo gás 149-159SC [A TLC do produto de fusão demonstrou a

802

Code 1492A

ocorrência ds uma decomposição extensiva).

Anal. Cale, para 023Η20θ5»Η20 [PM 394,43]: C, 70,04; H, 5,62. Encontrado: c, 70,23; H, 5,59,

EXEMPLO......9

- [ 2-[8-(1-terc-b u t i1d imeti1si1ox i)~2-f eni1et i1]dibeη ζ ofuranil]~3~hidroxipropionato de metilo (9)„ Uma solução arrefecida em gelo do ácido 8 (cerca de 0,76 g, 1,55 mmol) em Et^O (8 ml), foi tratada, gota a gota, durante cerca de 1 min com CHpN2 etéreo, frio [preparado a partir de N-nitrosometilureia (Qrganic Syntheses, Coli,, Vol. II pp 461 e 166, método da Nota 3 ai inclusa)], até persistir a cor amarela ds CH2N2» Após 30 min, a solução foi seca. (MgS04), filtrada e evaporada até à secura. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (40 g), eluindo primeiro com CHCI3; 2% MeOH/CHCl3 originou 9 como um xarope (0,9 g) que continha cerca de 30% de CHCI3; TLC (sílica gel, CHCI3): Rf 0,2. Secou-se uma porção em vácuo a 80SC durante 22 h,

Anal „ para C3QH35G5SÍ [PM 504,7]: C, 71,39; H, 7,19,, Encontrado: C, 71,44; H, 7,20,

EXEMPLO......10

N,N-Dime ti1-3-[2-[8-(1-terc-buti1dimetiIsi1oxi)-2-f eniletiljdibenzofuranil]-3-hidroxipropanamida (10), Uma solução do éster 9 (cerca de 0,6 g, 1,19 mmol) em DMF seco (8 ml) e dimetilamina (5 ml, seca sobre peneiros moleculares de 4 A)j foi aquecida numa garrafa de vidro selada, a 652C, durante 5 dias. A solução arrefecida foi vertida em gelo +· H2O (50 g) para originar uma suspensão leitosa que foi acidificada a pH 4 com HC1 aquoso (29 i_s4 n) © continha, então, uma goma semi-sólida. Secou-se uma solução da goma em CHCI3 (30 ml) sobre Mg.304, e evaporou-se sob pressão reduzida para originar um xarope que foi fraccionado em sílica gel (50 g). Eluídos de CHCI3 (200 ml) e 2% EtoO/CHCl-j (250 ml) foram rejeitados,. A eluição adicional com Et^O 2%/CHCl3 (50 ml) e 5% EtgQ/CHClx, proporcionou 9 (0,19 g); as últimas fracções de 5 e 10% Et20/CHCl3 (200 e 100 ml respectivamente)

802

Code 1492A

cristalizou em Et20. Secou-se uma porção de 10 a 65SC, 0,1 torr, 24 h para originar um xarope duro.

Anal. Calc. para C31H29NO4SÍ + 0,33 EtçO [PM 539,98]: C, 71,625 H, 7,845 N, 2,59. Encontrado: C, 71,50 e 71,42; H, 7,63 e 7,655 N, 2,58.

EXEMPLO 11

N -> M ™ D i m e t i 1 - 3 - [ 2 - [ 8 - (1 - h i d r o x i) - 2 - f e n i 1 e t i 1 ] d i b e η ζ o f u r a n i 1 ] -3-hidroxipropanamida (12),. Uma solução de 10 (0,32 g, 0,62 mmol) em THF (2 ml) e BU4NF (1,2 ml, 1,1 M em THF, 2,1 equiv) Toi agitada sob N2 durante a noite. A adição de gelo + HçO originou uma goma que, após decantação da fase aquosa, foi dissolvido em CHCI3 (30 ml). A solução foi lavada com água-gelo (2x20 ml), seca (MgS04) e evaporada sob pressão reduzida para originar um xarope que foi fraccionado em silica gel (35 g), eluindo, primeiro, com CHCI3 (100 ml); 10¾ MSOH/CHCI3 (100 ml) eluiu 12 contaminado com c o m ρ o s t o s terc - b u tildimetilsililo cromatografia (silica gel, 40 g) contaminantes5 10¾ MeOH/CHCl3 eluiu 125 TLC (sílica gel 8¾ MeOH/CHCl3): Rf 0,2. Evaporou-se uma solução de 12 em CHCI3 e o resíduo foi, então, seco durante 16,5 h, 0,1 torr, para originar 12 como uma espuma que retinha 4,4¾ de CHCI3 (0,24 g; 92¾).

Anal. Calc. para C25H25NO4 + 0,15 CHCI3 [PM 421,891] s C, repetição da 1¾ MeOH/CHCl3 originou cerca

71,615 H, 6,01; N, 3,32. Encontrado: C, 71,63 e 71,593

EXEMPLO 12

4-[2-[8-(1-terc-Buti1dimet i1s i1oxi)-2~fenileti1]dibeηζ of u 1 “ anil]-4-oxobutanoato, de metilo e etilo, 14a e 14b. 0 composto 5 (0,74 g, 1,66 mmol) dissolvido em DMF seco (3 ml) foi convertido no seu aducto carboxilato de magnésio por aquecimento com metiIcarbonato de magnésio (MMC, 15 ml, 2 M, 18 equiv) sob N2 seco, a 125ÔC durante 110 min. A solução arrefecida foi tratada

802

Code 1492A

com bromoacetato de etilo (0,83 g, 5 mmol, 3 equiv), dissolvida em DMF seco (1 ml) e aquecida a 100ÔC durante 140 min,. A solução foi arrefecida a cerca de 502C, vertida sobre água contendo gelo (cerca de 100 g) e tratada com HC1 aquoso (40 ml, 1,4 M) que provocou a dissolução do precipitado volumoso inicial e a separação de um sólido acastanhado. A extracção com Et₂0 (2x25 ml), secagem do extracto (MgSO/j.) e evaporação sob pressão reduzida, originou um xarope laranja que foi submetido a cromatografia em sílica gel (65 g). PhH eluiu quantidades vestigiais de impurezas e 5, seguidos de misturas dos ésteres etílico e metilico, 14b e 14a. Com 5, 10 e 25¾ CHCl3/PhH (200 .ml de cada) continuaram-se a eluir estas misturas (0,66 g total, cerca de 80¾); TLC (sílica gel, desenvolvida 2x com PhH): Rf 0,45 e 0,4, respectivamente,, As últimas fracções muito enriquecidas no éster metilico (14a), originaram uma goma (0,23 g) que, após tratamento com heptano, cristalizou, apresentando, então, um p.f. 85,5~872C. A goma foi submetida a análise elementar,.

Anal.. Cale. para C31H36O5SÍ [PM 516,72]= C, 72,06; ΊΤ, 7,02. Encontrado: C, 72,10; H, 7,03.

EXEMPLO.....13

4-[2-[8-(1-H i dr ox i))-2-f ε n i1et ί1]d i be η zof uranil]-4-oxob uta.noato, de metilo e etilo, 18a e 18b. 0 grupo protector TBDMS nos ésteres 14a e 14b (0,44 g) foi removido como no Exemplo 4,. Os produtos brutos foram fraccionados em sílica gel (8 g); PhH eluiu compostos ds silício, juntamente com uma porção dos ésteres 18a e 18b (cerca de 10¾) e. com 10 e 20¾ Et₂0/PhH eluiu a porção restante ds 18a e 18b (cerca de 70¾).. Obteve-se uma amostra do éster metilico 18a puro, p.f. 103-1052, por cristalização (Et₂0) do material na última fracção.

Anal,, Cale, para 0₂qH₂₂05 [PM 402,45]: C, 74,61; H, 5,51. Encontrado: C, 74,65; H, 5,58,.

EXEMPLO......14

4.... ₂..... [ 8 - (1 - η í d r o x i) - 2 - f eni 1 e t i 1 ] d i b e η z o f u r a η i 1 ] -1,4 - d i - h i d r o x i butano (25) e 4-[2-[8-(1-H i dr oxi)-2-feηi1etil]di beηz ofur a70 002

Code 1492A

n 11 ] - 4 - h i d r o x i b u t a η ó i c o 1 a c t o n a (24),. Uma solu ç ã o q u e n t e d a mistura de ésteres 18a e 18b (0,24 g) em 2-PrOH (5 ml) foi arrefecida, tratada com NaSH4 aquoso (22 mg, 1 equiv. molar, em 0,25 ml) e agitada durante 90 min. Adicionou-se acetona (0,5 ml), continuou-se a agitação durante 30 min, e a solução foi decantada de uma camada inferior pequena, que foi, então, tratada com H₂0 e extractada com Et₂O. As soluções de 2-PrOH e EtpO foram combinadas, secas (MgS04) e evaporadas sob pressão reduzida. 0 resíduo foi percolado através de sílica gel (8 g) com 2¾ MeOH/CHCl3, originando a lactona 24 (110 mg, 50%, TLC (sílica gel, cerca de 4¾ MeOH/CHCl3): Rf 0,5] e traços dos di-hidroxiésteres 21a e 21b (TLC: R_f 0,3)? com 3% MeOH/CHCl3 eluiu o triol 25 (50 mg), obtido na forma de xarope que, na secagem a 652C in durante a. noite, foi convertido num material vitreo, líigroscópico e duro (41,7 mg, 19%); TLC (sílica gel, 10¾

MeOH/CHClj): Rf 0,25.

Anal. Cale, para C24W24O4 4 0,41 H₂0 [PM 383,84]: C, 75,10? H, 6,52. Encontrado: C, 75,08? H, 6,60.

EXEMPLO 15

- (2 - [ 8 - (1 - H i d r oxi) - 2 - f e n i 1 e t i .1 ] d i b e η ζ o f u r a n i 1 ] - 4 - h i d r o x i b u tanoato de sódio (26).. Uma solução metanólica (2 ml) agitada da lactona 24 (100 mg, cerca de 0,27 mmol), contaminada com pequenas quantidades dos ésteres 21, foi tratada, gota a gota, com NaOH aquoso (1,3 ml, 0,58 M, cerca de 2,8 equiv),. Após 10 min, a solução foi concentrada sob pressão reduzida para originar um xarope amarelo, espesso, que foi fraccionado em resina DIAION H-20 (Mitsubishi Chemical Co., 30 ml de pérolas, lavadas com MeOH e, em seguida, com H₂0). Após eluição sequencial com H₂0 (50 ml), 5, 10 e 25¾ Me0H/H₂0 (30 ml de cada), 50¾ MeOH/H₂O (cerca ds 120 ml), eluiu 26 (90 mg, cerca de 72¾). Clarificou-se uma solução aquosa do xarope por filtração e libertou-se de voláteis sob pressão reduzida. Quando o xarope residual foi tratado com MeOH, separou-se uma pequena quantidade de sólido floculento que foi removido por filtração. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi, então, seco a 65ÔC, 0,1 torr, durante 24 h.

aZ_

802

Code 1492A

-29Anal- Cale. para C24^H21°5^Na 2 ^H2° ⁺ 2,5¾ material inerte

EXEMPLO......1,6

N,N -D ime t i1-4-[2-[8-(1-terc-b ut i1dime ti1s i1oxi)-2-feni1etil]dibenzofuranilj-4-oxobutanamida (15). Uma solução do aducto MMC, preparado a partir de 5 (0,78 g, 1,75 mmol) como no Exemplo 6, mas com menos metilearbonato de magnésio (7,5 equi v„), foi tratada com N,N~dimetilbromoacetamida (0,95 g, 5,7 mmol, 3,3 equiv) dissolvida em DME seco (0,9 ml) e, seguidamente, aquecida a 1202C durante 1 h. A solução arrefecida foi vertida em gelo +· HcO (75 g) e acidificada com HC1 (1,4 M) até pH ~3. 0 produto bruto, isolado por filtração, foi purificado por crornatografia em sílica gel (50 g) com CHCI3. As fracções iniciais continham produtos secundários e 5 (cerca de 0,05 g); a evaporação das últimas fracções originou um xarope que não cristalizou em heptano e foi seco 1n vacuo a 65?C,3 h, para originar 15 (0,68 g; 78¾ baseado em 5 não recuperado)» TLC (sílica gel/CHCl3): Rf cerca de 0,4,.

Anal. Cale,, para C32H39NO4SÍ [PM 529,76] s C, 72,55; H, 7,42;

N, 2,64. Encontrado: C, 72,51; H, 7,48; N, 2,55.

EXEMPLO.....17

N,N-Di me ti1-4-[2-[8-(1-h i dr ox i)-2-f eni1eti1]di benz ofura n i1]-4-oxobutanamida (19),. 0 grupo TBDMS foi removido de 15 (cerca de 0,63 g, 1,2 mmol) como no Exemplo 11. 0 produto foi purificado por crornatografia em sílica gel (50 g), eluindo, primeiro, com CHCI3 (175 ml); com 5¾ MeOH/CHCl3 eluiu 19 que cristalizou, gradualmente, em Et20 para originar um sólido incolor, p.f. 136-1372C; TLC (sílica gel, cerca de 5¾ Me0H/CHCl3): Rf 0,3,, Após secagem a 652C, 0,1 torr, 7 h, o sólido (0,44 g, 88¾) retinha algum EtoQ (análise espectral ³-H RMN),.

Anal,, Cale, para C26H25NO4 + 0,05 C^io® [PM 419,2]: c, 75,07; H, 6,13; N, 3,34,. Encontrado: C, 75,06; H, 6,07» N, 3,36.

802

Code 1492A

-30EXEMPLO......ί?.

N, N - D i m e. t i 1 - 4 - [ 2 - [ 8 - (1 - h i o! r o x i) - 2 - f e n i 1 e t i .1 ] d í b e η ζ o f u r a n - 2 -ilj-4-hidroxibutanamida (22),, Uma solução etanólica quente (8 ml) de 19 (0,20 g, 0,48 mmol) foi tratada com Na8H4 (28,0 mg, 0,74 mmol, 1,5 equiv. molar) dissolvido em H₂0 (0,2 ml) e agitada durante 30 min.

iSÔC. A mistura foi arrefecida, adicionou-se acetona (0,5 ml) e continuou-se a agitação durante 30 min. A concentração de solução sob pressão reduzida originou um resíduo, que foi tratado com gelo + K₂0 (30 g), acidificado a pH 3 e extractado com CHCI3 (4 x 20 ml). Os extraetos foram secos (MgS04), evaporados a 12 torr e, seguidamente, secos a 0,1 torr, 40ÔC 2 d, pra originar 22 como uma espuma (0,19 g, 96%) isenta de CHCI35 TLC (sílica gel, cerca ds 15% MeOH/CHCl3): Rf 0,5.

Anal,, Cale,, para C₂6H₂7N0₄ + 0,7 H₂O [PM 430,12]: C, 72,60;

H, 6,66; N, 3,26. Encontrado: C, 72,56 e 72,51; H, 6,55 e 6,58; M, 3,15; (Cl, 0)„

EXEMPLO......19

N - [ 4 - [ 2 - [ 8 -(l -terc - 8 u t i 1 d i rn e t i 1 s i 1 o x i ) - 2 - f e n i 1 e t i 1 ] d i b e η ζ o f u r a n i 1 ] - 4 - ο χ o b u t a η o i 1 ] p i r r o 1 i d i n a (16),. P r e p a r o u - s e N - b r o m o a c e t i 1 pirrolidina como se segue: uma solução agitada de brometo de bromoacetilo (3,5 ml; 40 mmol) em CMC13 (30 ml, percolada através de alumina para remover EtOH), arrefecida a cerca ds OÔC e protegida com um tubo cheio de Drierite, foi tratada, gota a gota, durante .10 min com uma solução de pirrolidina (6,0 ml, 73 mmol,

I, 8 equiv) em CHCI3 (20 ml). Após mais 30 min, a solução foi lavada com gelo-água (4 x 50 ml) e M3.HCO3 aquoso (20 ml, 0,02 M), seca (MgSO4) e evaporada sob pressão reduzida para originar a bromoamida (5,58 g, 80%) como um líquido ralo, amarelado que solidificou a -17SC.

aducto carboxilato de magnésio do composto 5 (0,78 g, 1,75 mmol) foi preparado como descrito no Exemplo 6, com a excepção de se ter usado menos metilearbonato de magnésio (8,8 ml, 2 M em DMF, 10 equiv),, Adicionou-se uma solução de N-bromoacetilpirrolidina (1,0 g, 5,2 mmol, 3 equiv) ern DMF (1 rnl), e a solução foi, então, aquecida a 100ÔC durante 1 h, sob N₂,

802

Code 1492A

-31tempo ao fim do qual já não se observava a evolução de C0₂- A solução arrefecida foi vertida em gelo-água e tratada com HC1 aquoso (23 ml, 1,4 M) até pH 4. Como o pH aumentou depois de a mistura ter sido extractada com CHCI3 (40 ml), devido, presumivelmente, à absorção de sais de Mg no produto semelhante à goma insolúvel em água, adicionou-se mais HC1 para originar pH 4, após; agitação com o CHCI3. A camada orgânica foi lavada com H₂0, seca (MgS04) e liberta de voláteis sob pressão reduzida, para originar um xarope que foi fraccionado por cromatografia em coluna (sílica gel, 35 g). Com PhH eluíram quantidades vestigiais de um produto secundário, com 10¾ EtçO/PhH eluíu 5 que não reagiu, 50¾ Et₂0/PhH e Et₂0 originaram a amida 16 como um xarope, que após diluição em heptano e mistura/divisão foi convertido num sólido floculento incolor (0,75 g, 76¾), p.f. 91-10120? TLC Rf 0,4. A secagem a 652C in vacuo originou um quebrado por fragmentação captou (sílica gel, Et₂0)’ vidro duro que quando e1ectricidade estática.

Anal. Cale, para C34H43NO4SÍ [PM 555,8]: C, 73,48? H, 7,44; N, 2,52,, Encontrado: C, 73,52? H, '7,45? N, 2,52,,

EXEMPLO.....20

N - [ 4 -- [ 2 - [ 8 -(1 - H i d r o x i ) - 2 - f s η i 1 e t i 1 ] d i b e η z o f u r a n i 1 ] - 4 - o xo b u t a noil]pirrolidina (20). Uma solução do composto .16 (0,70 g, 1,26 mmol) em THF (2,8 ml) e Bu₄NF (2,3 ml, 1 M em THF) sob N₂, foi mantida à temperatura ambiente durante 3,5 h e, seguidarnente, a 42C, durante a noite. A adição de gelo e H₂0 originou uma goma que foi extractada com CHCI3- (30 ml),. 0 extracto foi lavado com gelo-K₂° (2 x 20 ml), seco (MgS04) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar um xarope, que após tratamento com heptano (15 ml), foi convertido num sólido (0,55 g, 98¾) p.f..

144-1452C? TLC (silica gel, 10¾ MeOH/CHCl3): Rf 0,5.

final. Cale,, para C28H27NQ4 [PM 441,54]: C, 76,17; H, 6,16; N, 3,17. Encontrado: C: C, 76,07? H, 6,18? N, 3,16.

-3270 802

Code 1492A

EXEMELO.....2.1

N - [ 4 [2-[8-(l-Hidroxi)~2-feni 1 etiljdibenz o f u r a n i 1 ] - 4 - h i d r o xibutanoilJpirrolidina (23). A cetona 20 (0,50 g) não se dissolveu em 2-PrOH quente (5 ml), mas dissolveu-se quando se adicionou, também, CHCI3 (9 ml). A solução arrefecida foi tratada com NaBHzj. (44 mg, 1,05 equiv. molar) dissolvida em H2O (0,25 ml), agitada vigorosamente durante a noite e seguidamente levada à ebulição durante 15 min, para completar a redução. A solução foi arrefecida, adicionou-se acetona (1,5 ml), continuou-se a agitação durante 30 min e adicionou-se então H₂0 (10 ml) e CHCI3 (15 ml) para originar duas camadas leitosas,. A camada aquosa foi extractada com outra porção de CHCI3 (10 ml), e as soluções combinadas ds CHCI3 foram lavadas com H₂0 (20 ml), secas (MgS04) e evaporadas sob pressão reduzida para originar um xarope, que foi purificado por cromatografia (sílica gel, 35 g), eluindo com 2 e 5% MeOH/CHCl3. ⁰ produto, 23, após secagem durante a noite, 0,1 torr, era uma espuma dura incolor (0,49 g, 96%), p.f. cedência ~ 502C para se tornar num xarope espesso TL.C (silica gel, 10% MeQH/CHCl₃): Rf 0,3,.

Anal, Calc. para C28H29NO4 + 0,19 CHCI3 [PM 443,55]: C, 72,62; H, 6,31; N, 3,00; Cl, 4,34. Encontrados C, 72,65 e 72,60; H, 6,38 e 6,38; N, 2,98 e 2,97; Cl, 4,33.

EXEMPLO......22

4-[2-(8-(1-ter ç-Bu ti1d i metilsilil)-2-f en i1e ti1]d ibe ηζ o furanil]-4~oxobutanonitrilo (17). 0 aducto MMC, preparado a partir de 5 (0,78 g, 1,75 mmol) como no Exemplo 16, foi aquecido com bromoacetonitrilo (0,37 ml, 5,3 mmol, 3 equiv) a 90SC, durante 2 h e deixado em repouso durante a noite, à temperatura ambiente» Após o processamento usual com ácido aquoso, extracção com CHCI3 (2 x 25 ml e seguidamente, 15 ml) e lavagem do extracto com água gelada (25 ml), secagem (MgS04) e evaporação do solvente sob pressão reduzida, obteve-se um líquido (5 g) que foi dissolvido em EtoO (40 ml). A solução foi lavada com gelo-água (40 e 25 ml), seca (MgSOq) e evaporada para originar um xarope que foi fraccionado em sílica gel (60 g). Com PhH eluíram vestígios de um

802

Code 1492A

-33produto secundário seguidos de 5 (0,15 g) e 17, que foi reeristalizado em Et₂0 para originar um sólido incolor (0,37 g, 54%, baseado em 5 não recuperado), p.f. 139-1402C, que capta electricidade estática; TLC (sílica gel, PhH: Rf cerca de 0,4,,

AnalCalc.. para C30H33IMCÍ3SÍ [PM 483,69]: C, 74,50; H, 6,88; IM, 2,90. Encontrado: c, 74,41; H, 6,92; IM, 2,86.

EXEMP.LO.23

5-[2-[8-(1-terç -But i1d i meti1si1oxi)-2-f eni1et i1]dibenzofuranil]-5~oxopentanoato de metilo (27). Método A,. 0 composto 5 (3,1 g, 7 mmol) foi convertido no seu aducto MMC como no Exemplo 19, Adicionou-se 3-bromopropionato de metilo (6,2 ml, 15 mmol, 8,2 equiv), e a solução foi aquecida a 50-552C, durante 1 h e, seguidamente, a 1002C, durante 2 h. A sol ução arrefecida foi vertida em gelo + água (ISO g), acidificada (HCl, 1,4 N, cerca de 50 ml) a pH 4 e extractada com Et₂O (125 ml). 0 extracto foi lavado com água gelada (50 ml), seco (MgSOq) e evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi fraccionado por cromatografia em coluna (sílica gel, 250 g), com PhH eluiram pequenas quantidades de produtos secundários seguidas de 5 (1,57 g, 51%); 5% Et₂0/PhH eluiram 27 (1,87 g contendo 1 equiv mol. de PhH, isto é, 1,63 g de 27 puro ou 89%, baseado em 5 não recuperado), como um xarope que, por tratamento com hexano e sementeira¹' se modificou gradualmente para originar um sólido, p.f. 63-7220; TLC (sílica gel, PhH): R_f 0,35,.

Anal.. Calc. para C32H3QO5SÍ [PM 530,74]: C, 72,42; H, 7,22,. Encontrado: C, 72,55; H, 7,28,,

Método Β. A formação do aducto MMC, a sua alquilação e o isolamento do produto bruto foram realizados como no Método A, com a excepção de a reacção ter sido dimensionada para 1,64 g de 5 e de se ter usado 3-iodopropionato de metilo, em lugar do derivado de bromo.

3-iodopropionato de metilo foi preparado por tratamento de uma solução agitada, em acetona (20 ml), de 3-bromopropionato de metilo (3,3 ml, 30,2 mmol) com IMal (5,8 g, 38,7 mmol), à

802

Code 1492A

-34temperatura ambiente. Após 2 h, a mistura foi aquecida a 502C durante 45 min, arrefecida e filtrada. 0 filtrado foi concentrado so b p ressão r eduzida, di1uí do com E1₂ Q (30 m1), extr ac tado com H₂0 gelada (2 x 20 ml), seco (MgSO₄) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar um líquido (6,57 g, cerca de 95¾), constituído pelo iodo-éster (95¾) e pelo br orno-és ter (5¾) (análise espectral iH-RMN), que foi usado sem purificação adicional,.

Evaporou-se uma solução do produto bruto de alquilação 27 (1,97 g) em hepta.no (5 ml), sob pressão reduzida, e a cerca de 552C (para remover o CH₂~CHC0₂CH3 residual). A cristalização em heptano (3 ml) originou 27 (0.90 g), p.f. 69-722C. 0 material presente no licor mãe foi percolado através de sílica gel (75 g) com phH que eluiuvários produtos secundários e 5 que não reagiu (cerca de 26¾)„ Com 5%Et₂0/PhH eluiu o produto (0,47 g), que foi recristalizado em heptano (4 ml) para originar 27 puro (0,28 g; total, 78-s, baseado em 5 não recuperado); TLC (sílica gel, PhH)

0,35.

EXEMPLO .24

- [ 2 - [ 8 - (1 - H i d r o x i ) - 2 - f e n i 1 ~ e t i 1 ] d i b e η ζ o f u r a n i 1 ] - 5 - o x o p e n tanoato de metilo (34). Uma solução de 27 (0,41 g, 0,77 mmol) em THF seco (1,5 ml) e Bu₄NF (1,5 ml, 1 M em THF, 1,9 equiv) foi agitada sob N₂ durante 2,5 h, tempo ao fim do qual não restava qualquer porção de 27 (análise por TLC),. A solução foi diluida com CHCI3 (25 ml), lavada com H₂0 (2 x 25 ml), seca (MgSO₄) e evaporada sob pressão reduzida, para originar um xarope que foi submetido a cromatografia em coluna (sílica gel, 50 g), eluindo, em primeiro lugar, com CHCI3 (150 ml); 5¾ Et₂0/CHCl₃ eluiu 34, A evaporação do solvente sob pressão reduzida originou 34 como um xarope (0,39 g? 0,31 9-100¾) que continha CHC1₃; TLC (sílica gel, cerca de 10¾ Et₂0/PhH): Rf 0,7. As tentativas de cristalização do produto em Et₂0/heptano ou Et₂0 não tiveram sucesso,. Seco a 652C, 0,1 torr, o composto permaneceu na forma de xarope e absorveu, então, Et₂0.

Anal. Cale, para 0₂5^Η22°5 * CL ² (C₂H₅)₂0 CPM 417,28): C,

802

Code 1492A

74,26; Η, 5,80. Encontrado: c, 74,29 & 74,25; H, 5,89 & 5,92.

EXEMPLO......25

Ácido 5-[2™[8™( 1-Hidroxi)-2-feniletil]dibenzofuranil]-S-ox©pentanóico (36),. Uma solução de 34 (0,29 g cerca de 0,72 mmol) em MeOH (5 ml) e MaOH aquoso (1 ml, IM) foi agitada à temperatura ambiente, durante 2 h, para originar uma mistura que foi, então, mantida em ebulição durante 1 h. A evaporação da maior parte do solvente numa corrente de N.2 originou uma pasta quase incolor A (composto 35),, Tratou-se uma aliquota com H2O (2 ml), acidificou-se com HCI (1,4 M) e extractou-se com CHCI3 (3 x 1,5 ml). Qs extractos foram secos (MgS04) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para originar 36 (20 mg), como urn xarope, que foi seco a 652c, 0,1 torr 24 h, para originar uma espuma.

Anal. Cale., para C25H22O5 + 0,08 CHCI3 [PM 412,01]: C,

73,11; H, 5,40. Encontrado: C, 73,06 & 73,01; H, 5,64 & 5,66»

EXEMPLO.....26

Ácido 5-[2-[8™(1-Hidroxi)-2-fenileti1Jdibenzofuranil)-5-hidroxipenóieo (45) e sua Lactona 44. A pasta A do Exemplo 25, contendo cerca de 0,67 mmol do sal de sódio 35, foi tratada com HoO (5 ml), aquecida para dissolução, arrefecida e, então, tratada com NaBH4 (25,4 g) dissolvido em HqO (0,5 ml), com agitação» Após 15 min a totalidade do material tinha formado uma bola gelatinosa em torno da barra de agitação magnética. Após aquecimento a cerca de 60? C, durante 70 min, obteve-se uma solução que foi tratada com acetona (0,5 ml) e deixada arrefecer. Adicionou-se gelo e HCI (1,4 N, 1,3 ml) até pH **2,a mistura foi extractada duas vezes com CHCI3 (cerca de 40 ml, total) e os extractos foram lavados com água gelada, secos (MgSQ4) e evaporados sob pressão reduzida para originar uma espuma (0,25 g, 93%) que não cristalizou em Et20 e consistia em cerca de 1:1, 44:45 (análise espectral e -^C RMN); TLC (sílica gel, cerca de 15%· Me0H/CHCl3): Rf 0,9 e 0,4 respectivamente.

EXEMPLO......27 ~[2~[8-(1-H idroxi)~2~feni1eti1]di beηζ of ur a ni1]-5-h i dr oxi70 802

Code 1492A

-36»

pentanoato de sódio (40). Uma solução da mistura de 44 e 45 (0,25 g) em MeOH (7 ml) foi clarificada por filtração, seguidamente, agitada com NaOH aquoso (1,4 ml, 0,71 M, cerca de 1,6 equiv) durante 2 h, concentrada sob pressão reduzida a cerca de 1 ml, diluida com H₂0 (2 ml) e deixada em repouso durante a noite., A solução foi, então, percolada através de uma resina DIAION HP-20 (cerca de 35 ml das pérolas), eluindo com H₂0 © 5, e 25¾ Me0H/H₂0 (30 ml de cada); com 50¾ MeOH/H₂O (100 ml) eluiu uma fraeção I de 40 (0,12 g); com MeOH (40 ml) eluiu uma fraeção II de 40 (0,10 g). Após evaporação dos solventes sob pressão reduzida, a fraeção I era um xarope turvo, incolor, enquanto que a fraeção II era um xarope límpido, amarelo pálido,. Os espectros RMN (D₂0) © os tempos de retenção em TLC e HPLC das fracções I e II eram idênticos. HPCL: Rt=10,98 min, Spherisorb C-18 (10 um) 4,6 x 300 mm, tampão fosfato de

Fischer 0,01 M (pH 6,86): CH3CN, 80:20, caudal 2 ml/min, detector UV (254 nrn).

Cada fraeção foi dissolvida em H₂0 (5 ml) e submetida a criodessecrição para originar um sólido amorfo volumoso. Durante a transferência subsequente, cada uma das fracções derivou num material pegajoso, que foi seco a 65ÔC, 0,1 torr, durante a noite,.

Anal „ 40-1: Cale,, para 025^23¾^ ⁺ H₂0 [PM 445,37]:

C, 67,42; H, 5,68. Encontrado: C, 67,42 & 67,34; H, 5,69 &

5,75

40-11: Cale,, para C25^H23°5^Na * l?^{3 H}2° C^PM 449,87): C,

66,75; H, 5,74. Encontrado: C, 66,89; H, 5,99.

EXEMPLO 28

N, N - D i m e t i 1 - 5 - [ 2 - [ 8 - (1 -1 e r c- b u t i 1 d i m e t i 1 s i 1 o x i)-2- f e η i 1 e t i 1 ] - d i b e η z o fura n i 1 ] - 5 - o x o p e n t a n a m i d a (28). A uma s o 1 u ç s. o agitada de cloreto de 3-bromopropionilo (5,22 g, Aldrich, grau técnico) ern CHCI3 (22 ml) a -202C, adicionou-se uma solução gelada de Me₂NH (2,34 g, 52 mmol, cerca de 1,7 equiv), em CHCI3 (18 ml, percolado através de alumina e seco sobre peneiros

O moleculares de 4 A), durante cerca de 5 min,. Depois de a solução

802

Code 1492A

-37t e r a q u e c i d o a. t é à t empe r a t u r a. a. m b i e n t e, (45 min), e κ t r a. c t o u - s e, sequencialmente, com gelo-água (4 κ 25 ml), NaOH aquoso suficiente (4,2 ml, 2,5 M) para tornar alcalina a. fase aquosa e gelo-água (2 x 25 ml), secou-se (MgS04) e evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. A destilação (55-5720, 0,15 torr) do resíduo originou um líquido incolor límpido (3,14 g) que era uma mistura de N,N~dimetil 3-cloro e 3-bromopropanamidas (cerca de 1:3) de acordo com GC/MS, espectroscopia RMN e análise elementar„

AnalCalc. para C5H1QNOCIQ 26®^r0.74^: 35,64; H, 5,98;

N, 8,31; Halogéneo, 40,57, Encontrado: o, 35,80 & 35,79; H, 5,99 & 6,01; N, 8,28 & 8,27; Halogéneo (para 74% Br & 26% 01),

40,31,

Tratou-se uma solução do aducto MMC, preparado a partir da cetona 5 (0,89 g, 2 mmol), como no Exemplo 19, com a mistura de halopropanamidas (1,08 g) dissolvida em DMR seco (1 ml) e aqueceu-se, então, a 10520, durante 75 min, deixou-se repousar durante a noite, tratou-se com outra porção de halopropanamida (1,0 g, cerca de 8 equiv,, total) aqueceu-se a 10520, durante 1 h, arrefeceu-se, verteu-se sobre gelo e tratou-se com HC1 (1,4 M, 18 ml) para originar um sólido pegajoso que foi filtrado, lavado com H2O e, seguidamente, dissolvido em CHCI3 (40 ml), A solução foi seca (MgS04) e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. 0 xarope resultante foi fraccionado ern sílica gel (50 g). Com

PhH (200 ml) e 2,5 e 20% Et₂0/PhH (100 ml de cada) eluiu, primeiramente, 5 (0,75 g); com Et^O eluiu a amida 28 (0,08 g, cerca de 50% baseados em 5 não recuperado); TLC (sílica gel, EtoO): Rf cerca de 0,4. Secou-se uma porção a 652C, 0,1 torr, h, para originar um xarope rígido, incolor.

Anal, Calc. para C33H44NG4SÍ [PM 543,78]: c, 72,89; H, 7,60; N, 2,58» Encontrado: C, 73,03; H, 7,68; N, 2,49.

EXEMPLO 29

N,N-D imet i1-5-[2-[8-(1 -h i drox i)-2-f enilet i1]di beη ζ o fura n i1]-5-oxope ntanamida (37). Ef ec t uo u-se o de s b 1 o queame nto de 28 (0,29 g, 0,5 mmol) como no Exemplo 11. 0 produto bruto foi

802

Code 1492A fraccionado em sílica gel (65 g): com CHCI3 (200 ml) e 2¾ MeOH/CHCl3 (150 ml) eluiram os compostos de silicio; 2 e 5¾ MeOH/CHCl3 (5 0 e 160 ml, respeetivamente) originaram 37 (0,19 g, 80¾) como um xarope, que continha cerca de 1 mol de H₂0 de acordo com um espectro RMN5 TLC (sílica gel, Et₂0): Rf 0,45. Secou.....se uma porção a 652C, 0,1 torr, 2 d.

Anal.. Calo, para C27H27NO4 + 0,29 H₂0 [PM 434,74]: C, 74,60; H, 6,40; N, 3,22. Encontrado: C, 74,75 & 74,71; H, 6,40 & 6,43; N,3,20.

EXEMPLO......30

N,N-Di me t i1-5-[2-[8™(1-h i dr oxi)-2-fe ni1s t i1]di benzof ur a n i1]-5-hidroxipentanamida (41),, A redução de 37 (0,18 g, 0,42 mmol) e o isolamento do produto, foram realizados como no Exemplo 13 para origin-r 41 como uma espuma, após secagem à temperatura ambiente, 0,1 torr (0,17 g, cerca de 100¾); TLC (sílica gel, cerca de 15¾ MeOH/CHCl3): Rf 0,6,.

Anal. Cale, para C27H29NO4 +1,2 H₂0 [PM 453,16]: C, 71,56; H, 6,99; N, 3,09. Encontrado: C, 71,62 & 71,56; H, 6,79 & 6,82; N, 3,04; Halogéneo 0,0.

EXEMELO......31

N [ 5 - [2-[8~(í -terc- b u t i 1 d i m e t i 1 s i 1 o x i ) - 2 - f e n i 1 e til] d i b e η z o furanil]-5-oxopentanoil]pirrolidina (29). Uma solução do éster 27 (0,29 g, 0,55 mmol) em pirrolidina (3 ml, seca sobre peneires

D moleculares de 4 A) contendo um cristal de NH4CI, foi submetida a refluxo sob N₂ seco, durante 27 h. A maior parte do excesso ds pirrolidina foi, então, removido por ebulição. Uma solução em CHCI3 (30 ml) do resíduo foi lavada com gelo-água (25 ml) contendo HC1 (cerca de 0,5 ml, 1,4 N) e gelo-água, seca (MgS04) e evaporada sob pressão reduzida, para originar um xarope laranja que foi fraccionado em sílica gel (40 g)„ Com CHCI3 eluiram impurezas vestigiais; com 1¾ MeOH/CHClj eluiu a amida 29, que foi seca jn..........vacuo para originar um xarope duro (0,32 g, cerca de

100¾); TLC (sílica gel, cerca de 3¾ Me0H/Et₂0): Rf 0,3,. Uma.

amostra analítica, seca a 65SC, 0,1 torr, durante 17 h, era, também, um xarope. 0 composto cristalizou, por fim, e possuía.

802

Code 1492A

-39-então, um p.f. de 90-91ÔC.

Anal, Calc. para C35H43NO4SÍ [PM 569,82]: C, 73,77; H, 7,61; N,2,46. Encontrado: C, 73,50; H, 7,63; N, 2,41.

EXEMPLO 32

N-[5-[2-[8-(l - H i d r o x i) - 2 - f e n i .1 e t i 1 ] d i b e η z o f u r a nil]™ 5 - ο x o p © n tanoil]pirrolidina (38). 0 desbloqueamento da amida 29 (cerca de 0,30 g, 0,5 rnrnol) e isolamento do produto como no Exemplo 11, originou um xarope que foi purificado por cromatografia em silica gel (40 g), eluindo, primeiro, com CHCI3; 5% Me0H/CHCl3 originou um xarope que solidificou por tratamento com Ei^O- A filtração originou 38 como um sólido incolor (0,18 g, cerca-de 75%), p.f. 137-1382C, que foi seco durante 24 h, 652C, 0,1 torr; TLC (sílica gel, cerca, de 7% MeOH/CHCl3): Rf 0,5.

Anal. Calc. para C29H29NO4 [PM 455,56]: C, 76,46; H_; ,42;

N, 3,08. Encontrado:

C, 76,34; H, 6,46;

N,3,Q4»

EXEMPLO......33

N-[5™[2™[8-(1-Hidroxi)-2-f enile ti1]di foe n zofur anil]-5™h idroxipentanoiljpirrolidina (42). 0 composto 38 (cerca de 0,15 g,

0,33 mmol) foi reduzido como no Exemplo 18. A mistura reaccional concentrada foi tratada com CHCI3 (35 ml) e gelo-água (25 ml). A camada orgânica foi lavada com água-gelo (25 ml), seca (MgSOq.) e evaporada sob pressão reduzida para originar 42 como uma espuma dura (0,16 g, 100%); TLC (sílica gel, cerca de 15% MeOH/CHCl₃): Rf 0,4. Sob aquecimento o material começa a amolecer a T>502C e torna-se, gradualmente, num xarope viscoso contendo gases retidos. A análise demonstra que permanecem retidos na espuma dura alguns solventes»

Anal. Calc. para C29H31NO4 + 0,17 CKCI3 + 0,20 H₂0 [PM 481,47]: C, 72,77; H, 6,61; N, 2,91; Cl 3,76» Encontrado: C, 72,82 & 72,77; H, 6,61 & 6,63; N, 2,89 & 2,89; Cl 3,80.

EXEMPLO 34

N-[5-[2-[8-(1-terc—bu ti1d i meti1si1ox i)-2-feni1e til]d ib e ηzofuranil]-5-oxopentanoil]morfolina (33). Uma mistura agitada do tri''

302 Code 1492A

éster 27 (0,98 g, 1,85 mmol), MeOH (20 ml) e NaOH aquoso (5,75 ml, 0,33 N), foi aquecida até próximo do seu ponto de ebulição durante 2,5 h. Quando a solução límpida foi concentrada sob pressão reduzida, separou-se um óleo © formou-se uma espuma volumosa quando o volume era cerca de 10 ml. A mistura foi diluída com CHCI3. Como uma tentativa de extracção da solução com água originou uma emulsão, adicionou-se NaCl aquoso saturado. Quando a emulsão se separou, a camada de CHCI3 foi seca (MgSC^) e evaporada sob pressão reduzida, para originar o sal de sódio 31 como um xarope expesso, que foi dissolvido em benzeno seco (15 ml), e o solvente foi, novamente, evaporado até à secura.

A conversão de 31 na amida 33 por meio do cloreto de ácido 32 foi conseguida como se segue. Uma solução de 80¾ do xarope acima (31, 1,5 mmol) ©m benzeno seco (16 ml) e piridina (3 gotas) foi gradualmente adicionada a uma solução agitada de cloreto de oxalilo (0,25 ml, 2,9 mmol) em benzeno seco (15 ml), sob N2 e arrefecida num banho de gelo,. Como não se observou libertação de gas quando se adicionou metade de 31, durante 10 min, adicionou-se piridina (3 gotas) à mistura reaccional; separou-se imediatamente um sólido amarelo e libertou-se um gás..

Adicionou-se a porção restante de 31 alternando com piridina (8 gotas), seguida de cloreto de oxalilo adicional (0,13 ml’, total, 4,5 mmol, 3 equiv), continuou-se a agitação durante 30 min, morfolina (1,3 ml, 15 mmol, seca sobre d© 4 Â), gota a gota, à mistura fria, min. A mistura durante a noite à temperatura ambiente, sólido tipo cera, amarelo, com benzeno (40 ml) originou um filtrado incolor que foi lavado com água gelada (3 x 25 ml), HC1 aquoso diluído (para originar pH 4 após agitação) © água, seco (MgS04) e evaporado sob pressão reduzida para originar um xarope constituído, principalmente, por 33. A cromatografia em coluna (sílica gel, 90 g, Ef^O) originou quantidades vestigiais de impurezas, seguidas da amida qu© foi dissolvida em phH. A evaporação dos voláteis originou 33 contendo 1 mol de phH (análise espectral ^H-RMN, 0,84 g, cerca de 90¾ no total de 27). Uma adicionou-se, então, ρ e n ei ras mo1ec u1ares durante cerca de 1 foi deixada em repouso A filtração e lavagem do

802

Code 1492A

amostra, seca a 652C, 0,1 torr, durante	7 h, tinha	a forma de	um
vidro duro; TLC (sílica gel, Et20)=	Rf cerca	de 0,2»	(3%
MeOH/PhH): Rf cerca 0,4.
A n a 1, C a 1 c. p a r a C 3 ς H 4 3 N 0 ς S i Γ Ρ M	585,82]:	C, 71,76;	H,
7,40; IM, 2,39» Encontrado: c, 71,86;	H, 7,44;	N, 2,36»

EXEMPLO 35

N - [ 5 - [ 2 - [ 8 ~ (1 - h i d r o x i) ~ 2 - f e n i 1 e t i 1 ] - d i b e η z o f u r a η i 1 ] - 5 - o x o -ρentaη o i 1 ] m o r f o 1 i n a (39). U s o u - s e o procedimento do Exemρ1o 24 para desbloquear o composto 33 (0,75 g, cerca de 1,3 mmol), A evaporação do extracto seco de CHCI3 originou um xarope límpido que após adição de Et^O (cerca de 40 ml), se tornou opaco e cristalizou gradualmente,. 0 sólido foi lavado com várias porções de EtoO^ combinado com o material semelhante obtido em experiências similares (de cerca de 0,37 g de 33) e purificado por cromatográfia (sílica gel, 90 g). Os eluídos de CHCI3 foram re j ei tados (300 ml); 4% Me0H/CHC13 or i gi nar am uma pri meir a fracção impura de 39 (65 mg, cerca de 7%), seguida de 39 puro (0,72 g, cerca de 80%), p.f. 160,5-161,520; TLC (sílica gel, 6% MeOH/CHCl₃): Rf cerca de 0,5.

AnalCale, para C29H29NO5 + 0,14 CHCI3 [PM 488,27]: c, 71,68; H, 6,02; N, 2,87. Encontrado: C, 71,73 & 71,70; ' H, 6,16 & 6,18; N, 2,87.

EXEMPLO 36

- Η - [ 5 - [2-[8-(l~Hid r o x i ) ~ 2 - f e n i 1 β t i 1 ] d i fo e η z o f u r a n i 1 ] ~ 5 - h i d r o ~ xipentanoil]morfolina (43),. A redução (veja-se Exemplo 18) de 39 (0,40 g, 0,85 mmol) com Na8H4 (35 mg, 0,9 mmol) foi completada após 70 min, acerca de 602C. A decomposição do excesso de NaBH4 com acetona e a concentração sob pressão reduzida (a cerca de 5 ml) originaram uma mistura que foi tratada com CHOI3 (40 ml) e lavada com água fria (40 ml e em seguida 2 x 30 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO^J e evaporada sob pressão reduzida para originar um xarope que foi dissolvido em CH2CI2 (5 ml) e o solvente foi novamente evaporado,, Este processo foi repetido para originar 43 como uma espuma sólida volumosa (0,40 g, 100%), após secagem durante 22 h, 0,1 torr, TLC (sílica gel, 10% MeOH/CHCl₃): Rf cerca de 0,5.

802

Code 1492A

-42Anal. Calc. para C29H31NO5 + 0,03 CH2CI2 + 0,45 H2O [PM

483,87]: C, 71,99; H, 6,66; N, 2,89. Encontrado: C, 72,05 e 71,98; H, 6,70 e 6,73; N, 2,90.

EXEMPLO.....37

6-[2-[8-(1-berc-8ut i 1 d i m eti1si1ox i-2-fe ηi1eti1]dibeηζof ur ado no e, temperatura durante a nil]-6~oxohexanoato de metilo (46). Uma solução arrefecida aducto MMC, preparado a partir de 5 (3,1 g, 7 mmol), como Exemplo 19, foi tratada com 4~branobutirato de metilo (5,4 g, mmol), aquecida durante 16 h a 502C e 6 h a 85-902C seguidamente, deixada em repouso durante a noite à ambiente. Mão se observou libertação de CO2 alquilaçao,, A solução foi vertida sobre água+gelo (cerca de 200 g) e tratada com HCl aquoso suficiente ( 1,45 N, 92 ml) para dar pH 4 após extracção com Et20 (125 ml). A camada aquosa foi, novamente, extractada com Ef^O (50 ml) e as soluções combinadas de Et20 foram lavadas com gelo+H2°> secas (MgSO4) e evaporadas sob pressão reduzida para originar um xarope laranja espesso, que foi fraccionado por cromatografia em coluna (sílica gel, 275 g, PhH),, As primeiras fracções continham a etilcetona 47 (0,62 g, 19%, xarope incolor); TLC (sílica gel, PhH): R.p 0,75,, As fracções intermédias originaram misturas de 5 e bromobutirato de metilo (2,47 g, cerca de 1:1,5 p/p); as últimas fracções originaram 46 (1,62 g, 43%) como um xarope espesso, amarelo pálido; TLC (sílica gel, PhH): R.p cerca de 0,2. As amostras de 47 e 46 foram secas a 80ÔC, 0,1 torr, 5 h. 0 composto 46 cristalizou, por fim, em heptano como um sólido incolor, p.f. 69-712C„

Anal(46) Calc. para C33H4QO5SÍ [PM 544,77]: C, 72,76;

H, 7,40. Encontrado: C, 72,91; H, 7,44.

Anal. (47) Calc.. para C29H34O3SÍ [PM 458,68]: C, 75,94; H,

7,47.. Encontrado: C, 75,95; H, 7,52.

4-br omobutirato- de metilo foi preparado por adição ds cloreto de 4-bromobutirilo (3,5 ml, 30 mmol), gota a gota, durante 10 min, a uma solução fria de MeOH anidro (5 ml) em PhH (seco, 10 ml),. A solução foi deixada em repouso durante cerca de

802 Code 492A

-431 h a temperatura ambiente, diluída com PhH (a 50 ml), lavada com gelo+HqO (4 x 25 ml), até os licores de lavagem não serem ácidos, seca (MgS04) e evaporada sob pressão reduzida para originar um líquido incolor (6,2 g) que continha cerca de 1/3 mol de PhH por mol do éster, de acordo com um espectro RMN.

EXEMPLO.....38

N-[6-[2-[8-(1 “terc- 8 u t i 1 d i me t i 1 si 1 oxi -2-feni 1 e t i 1 ] di benzof ur ãni1]-6-oxohexa ηo i1]p irrolidina (48). Des t i1o u-se p ir ro1idina o

(seca sobre peneiros moleculares de 4 A) antes de ser utilizada (p.e. 862C). Aqueceu-se uma solução de 46 (0,80 g, 1,47 mmol) em pirrolidina (3,8 ml), protegida da humidade com Drierite, a 35-9C durante 24 h e evaporou-se então com uma corrente de N2, para originar um xarope espesso vermelho escuro, que foi dissolvido em CHCI3 (50 ml). A solução foi extractada ..comgelo-H^O (30 ml), contendo HC1 suficiente (cerca de 1,2 ml, 1,4 N) para originar pH 5-6 após agitação.. A camada de CHCI3 não emulsifiçada foi separada e a camada aquosa e a interfa.se emulsionada foram, novamente, extractadas com CHCI3» As soluções orgânicas co mb inadas f or am 1avadas com g e 1 o+H20, co n tendo algum HC1, seguidamente, com geloi+^O (re-extractando-se ds cada vez com CHCI3, as camadas aquosa e emulsionada) e, finalmente, com NaCl aquoso saturado (25 ml), contendo Na0H suficiente para originar pH 8 após agitação. As soluções combinadas de CHCI3 foram secas (MgSOq) © evaporadas sob pressão reduzida, para originar um resíduo que foi faccionado por cromatografia em coluna (80 g sílica gel, 2¾ MeOH/CHCl3). 0 produto 48 cristalizou em heptano como um sólido esbranquiçado (0,65 g, 77¾), p.f. 101-1032C; TLC (sílica gel, Et20)s Rf cerca de 0,3.,

Anal. Calc.. para C36H45NO4SÍ [PM 583,85]s C, 74,06; H, 7,77; N, 2,40.. Encontrados C, 74,00; H, 7,78; N, 2,48.

A elui ção adicional com 1¾ ACOH/CHCI3 (100 ml) originou o ácido 49 (0,06 g, 8¾) que cristalizou em Et^O e possuía um p.f, de 132-133,5SC.

Anal. Calc,, para C32H38O5SÍ [PM 530,74]: C, 72,42; H,

7,22.. Encontrados C, 72,27; H, 7,28.,

802

Code 1492A

-AAexemplo......3.2

N - [ 6 - [ 2 - [ 8 - (1 - H i d roxi)~2~~fenile t i 1 ] d i b s η ζ o f u r a n i 1 ] - 6 - o x o --hexanoil]pirrolidina (50). 0 desbloqueamento de 48 (0,60 g, 1,03 mmol) foi efectuado como no Exemplo 11, A mistura, obtida quando se adicionou gelo 4· h₂0 (cerca de 40 g), foi extractada com CHClg (50 ml, e, seguidamente, 4 x 15 ml),. Os extractos combinados foram secos (MgSO,^) e evaporados sob pressão reduzida. Quando a goma resultante foi agitada com Et₂O (3 x 5 ml), solidificou. 0 sólido adicional, que precipitou em Et₂0, foi filtrado, A evaporação de Et₂0 e secagem a 0,1 torr originou uma terceira porção de sólido, [Este procedimento permite a remoção de todos os compostos contendo Si que estão, em parte, retidos . pela goma]. Os sólidos combinados foram purificados por cromatografia em coluna (siliea gel, 75 g), eluindo, primeiro, com CHCI3 (150 ml); 5¾ MeOH/CHC.13 (100 ml) originaram um xarope que se dissolvia em EtpO (cerca de 5 ml). Com''sementeira* 50 precipitou como um sólido esbranquiçado (0,48 g, cerca de 100%); p.f, 128-129,59C:TLC (sílica gel, 10% MeOH/CHCl3): Rf cerca de 0,6,

Anal „ Cale, para C30H33ΙΜΟ4 [PM 469,59]: c, 76,73; H, 6,65; N, 2,98. Encontrado: C, 76,55; H, 6,68; N, 3,00,

EXEMPLO 40

N- [6 - [2- [8- (1-hidroxi)-2-f ériiletír’] d'ibenzofuranilj-6-hidroxi-hexanoilJ pirrolidina (51)

A redução de 50 (0,41 g, 0,85 mmol), que se completou após 5 h, e o isolamento de 51, foram efectuadas como no Exemplo 36, 0 produto seco era uma espuma volumosa (0,40 g, 97%); TLC (sílica gel, 10% MeOH/CMCl3): Rf cerca 0,4,

Anal,, Cale, para C30H33NO4 [471,60]: C, 76,41; H, 7,05; N,

2,97,, Encontrado: C, 76,18; H, 7,12; M, 2,94,, Cale,, para C30H33NO4 i- 0,07 H₂0 [472,86]: c, 76,20; H, 7,06; N, 2,96,.

TESTES......DE......ACTIVIDADE......BIOLÓGICA.......(LT84..).

Cada um dos compostos do invento foi testado em dois modelos in vitro de funções celulares induzidas por LTB4. As respostas celulares medidas , presume-se serem mediadas através de interaeções específicas de LTB4 com receptores celulares,. Os resultados são apresentados na Tabela III.

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Code 1492A

-45™

As respostas celulares estudas incluem 1) desgranulação induzida por LT84 (libertação de mieloperoxidase) de neutrófilos humanos purificados e 2) adesão de neutrófilos humanos a pérolas de latex, induzida por LTB4. Cada suposto antagonista foi testado a 30 u.M_; relativamente ao seu efeito em cada resposta,. Os compostos seleccionados foram testados num modo concentração-resposta.

1.).......TESTE......DE......DESQRANULAÇÃO DE NEUTRÓFILOS □s neutrófilos são isolados de sangue venoso humano por meio de um processo de sedimentação em dois passos, e os eritrócitos contaminantes são lisados seiectivamente„ Os neutrófilos foram pré™incubados em tampão Hanks 0,25¾ contendo albumina de soro bovino (BSA) com 5 ug de Ci tocha las ina i3/ml de células, durante 5 minutos a 37ÔC. Os neutrófilos (4 x 10^') são adicionados ao estímulo (LTB4 ou controlo tampão), na presença e ausencia de antagonistas em tampão Krefos-Ringer, até um νo1ume final de 1,0 ml, e incubados a 37ÔC por períodos de tempo apropriados,. No fim do período reaccional, os neutrófilos são pelotizados por centrifugação a 3 000 rpm durante 5 minutos a 42C „

Adicionou-se aliquôtas (0,2 ml) dos sobrenadantes a tubos de poliestireno, aos quais se adiciona o seguintes 0,6 ml >25% de BSA . Hanks, 0,5 ml de tampão MPO (NaP0₄ 0,2 M, pH 6,2) e, para iniciar a reaeção de coloração, 0,2 ml de uma solução 1:1 v/v 0,05% H2O:1,25 mg/ml de dimetoxibenzidina (DMB). A reaeção prossegue à temperatura ambiente durante 15 minutos e é parada pela adição de 0,05 ml de azida .de sódio a 2%,. A cor desenvolvida é quantificada num espectrofotómetro a 460 nm. A quantidade de mieloperoxidase (MPO) libertada por estimulação com LTB4 pode, assim, ser determinada. Para determinar a quantidade total de MPO nas células, um tubo controlo de neutrófilos, não estimulado é lisado usando 0,01 ml de 10% Triton TX e a MPO total é determinada por meio da reaeção de coloração e leitura espectrotométrica. A actividade de uma dada concentração de LT84 é expressa como a percentagem da MPO total libertada. A

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-46actividade dos antagonistas a uma dada concentração é expressa como percentagem de inibição da libertação de MPO induzida por LTB4, a uma única concentração de L.TB4.

2.).......ADESÃO......DE.....NEUTRÓFILOS......A.....PÊROLOS......DE_LÁTEX

A suspensão de pérolas de látex (0,6 ml; suspensão aquosa a 10%; diâmetro das partículas ~ 1 μ.) é pipetada para um tubo de centrífuga Eppendorf de 1,5 ml. As pérolas são pelotizadas por centrifugação, 0 sobrenadante é rejeitado e as pérolas são lavadas 2 vezes com 1 ml de solução salina a 0,9%. Às pérolas pelotizadas adicionam-se 0,5 ml de solução salina e 0,5 ml de albumina de soro humano (HSA) a 20 mg/ml em tampão Krebs-Ringer. A mistura albumina-pérolas é deixada em repouso à temperatura ambiente durante 10 min, centrifugada durante 1 min, o sobrenadante é removido e as pérolas revestidas com albumina são lavadas 3 vezes com solução salina. As pérolas são novamente suspendidas em 1 ml de tampão Krebs-Ringer,

Os neutrófilos humanos são preparados como descrito para o teste de desgranulação de neutrófilos e adicionam-se 10? células a 0,3 ml de tampão Krebs-Ringer, na presença e ausência de LTB4 e do suposto antagonista, incubando-se a 37ÔC durante um periodo de tempo apropriado.

As pérolas revestidas com albumina são então adicionadas em 0,05 ml para originar uma concentração final de pérolas de 1% v/v, resultando numa proporção pérolas:neutrófilos de 100:1.. Os tubos contendo células e pérolas são, então, colocados num banho de água agitado, a 3720 e a 120 oscilações por minuto, durante 10 minutos., A reacção é parada pela adição de um volume igual de glutaraldeído a 2,5% em solução salina. Os tubos reaccionais são deixados em repouso à temperatura ambiente durante 30 minutos,, As células são, então, lavadas 3 vezes (com centrifugação a 1 000 rpm durante 5 minutos) com solução salina, para remover as pérolas de látex não aderidas, e, novamente, suspensas em 0,3 ml de solução salina,.

Preparam-se montagens húmidas e a aderência é examinada por nicroscopia luminosa a 400x. A aderência ê estabelecida contando

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-47cinco campos aleatoriamente colocados, de, pelo menos, 50 neutrófilos por campo., A percentagem de neutrófilos que demonstra aderência a pérolas de latex revestidas com albumina é determinada estabelecendo como aderentes todas as células que exibem uma ou mais pérolas na sua superfície,. A aetividade dos antagonistas é expressa como a percentagem de inibição de adesão induzida por LTEÍ4..

TABELA 111

Desgranulação de Neutró- Adesão de neutrófilos a Composto filos induzida por LTB4 pérolas, induzida por LTB4 % Inibição I50 % Inibição a a 30 pM 30 pM

11 Ο C O 7	35 62	7 10
z 0 40	38	5
42	100	19 pM 12
	100	1
12	100	13 pM 14
41	57	9 pM 2
Ficou,	portanto.	demonstrado que 0 presente invento
proporciona	compostos,	composições e métodos que permitem
alcançar os	diversos	objectivos do invento e que estão bem
adaptados para satisfazer as condições de uso pratico,.
Uma vez	que se podem efectuar diversas concretizações do
invento acima e que podem ser realizadas diversas modificações
nas concretiz	ações definidas acima, deverá entender-se que todas
as matérias	descritas	no presente invento pretendem ser

802 Code 1492A

interpretadas como ilustrativas s não como limitativas,

Aquilo que se pretende reivindicar como novo e que se deseja proteger com uma Patente é definido nas reivindicações que se seguem.

Claims (3)

1. REIVINDICAÇÕES

   1 - Processo de preparação de um composto de fórmula:

   em que

   a) n é um número inteiro compreendido entre 1 e 5;

   b) RÍ é seleccionado do grupo constituido por alquilo, fenilo, fenilo substituído, Ph(CH2)_n em que n = 1-5 e em que o anel fenilo pode, também, comportar substituintes; heteroaromático; e heterocicloalquilo; e

   c) R^ é seleccionado do grupo constituído por COR^ em que R^ é alquilo, arilo ou aralquilo, sal alcanoato; C(O)NR^R^, em que é H, alquilo ou arilo e = r4 _ou é um dos outros substituintes R⁴, ou R^ e R⁵ constituem um anel carbocíclico ou heterocíclico; éter; tioéter; sulfóxido; sulfona; tetrazol; ácido sulfínico; ácido sulfónico e metades ésteres de ácidos de enxofre ou sulfonamidas derivadas, caracterizado por compreender a sujeição do 2-bromo-8-RÍ-acetildibenzofurano a acilação de Friedel-Crafts, redução do grupo ceto ao grupo hidroxilo correspondente, substituição do grupo hidroxilo com um grupo protector inerte, tal como terc-butildimetilsililo, substituição do grupo bromo por um grupo etanol, resultando num composto que pode ser convertido num composto de fórmula A, por conversão do grupo bloqueador num grupo hidroxilo, ou por oxidação para conversão do álcool na metilcetona, conversão da metilcetona resultante com metilcarbonato de magnésio, no quelato de magnésio do enol do beta-cetoácido resultante correspondente, acidificação para obter o ácido livre correspondente e conversão do grupo protector no grupo hidroxilo, se desejado, após esterificação ou amidização do grupo OH do ácido carboxílico.
2. 2 - Processo de preparação de um composto de fórmula:

   SEGUE FÓRMULA em que

   a) n é um número inteiro compreendido entre 1 e 5;

   b) Rl é seleccionado do grupo constituído por alquilo, fenilo, fenilo substituído, Ph(CH2)_n ^em que ⁿ - e em que o anel fenilo pode, também, comportar substituintes; heteroaromático; e heterocicloalquilo; e

   c) R² é seleccionado do grupo constituído por COR^ em que R3 é alquilo, arilo ou aralquilo, sal alcanoato; C(O)NR⁴R^, em que R⁴ é H, alquilo ou arilo e R^ - R⁴ ou é um dos outros substituintes R⁴, ou R⁴ e R^ constituem um anel carbocíclico ou heterocíclico; éter; tioéter; sulfóxido; sulfona; tetrazol; ácido sulfínico; ácido sulfónico e hemi-ésteres de ácidos de enxofre ou sulfonamidas^S/cFerivadas, caracterizado por compreender um procedimento de acordo com o esquema reaccional I que se segue:

   SEGUE ESQUEMA I

   70 802

   Code 1492A quax pl

   CH₂C₆H por
3. 3 Processo de acordo com a o composto de fórmula 5 ser, e T = Si(CH3)₂C(CH3)3 reivindicação 2, caracteri ainda, feito reagir de ac zado or do com o esquema reaccional 11 que se segue:

   70 802