PT88590B - Processo para a preparacao de uma composicao vacina inactivada - Google Patents

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Description

Este invento relàciona-se com vacinas e em particular com vacinas que são úteis para a protecçao dos cães contra o coronavírus canino.
Os coronavírus foram primeiro reconhecidos e definidos morfologicamente como um grupo por Tyrrell e colaboradores. Foi publicada por H. Wege et al.,
Current Topics in Microbial Immunology, 1982, 99, 165-200, uma revisão compreensiva da biologia e da patogênese dos coronavírus.
Os coronavírus caninos (CCV) foram primeiro isolados em 1971, tendo cada vez mais vindo a consti tuir um problema, particularmente entre os cachorrinhos e entre os cães criados em canil. Produz uma diarreia ligeira a moderada, frequentemente precedida por letargia, depressão e falta de apetite. Segue-se geralmente deshidratação e subsequente perda de peso. Embora a doença não seja geralmente fatal, pensa-se que poucos cachorrinhos conseguem a seguir â infecção desenvolver-se completamente.
Um tratamento que pode ser usado para ultrapassar os efeitos da infecção por CCV consiste em administrar doses maçicas de fluidos para substituir os fluidos perdidos, mais antibióticos para ajudar a controlar qualquer infecção oportunista que possa atingir o cão na sua situação de enfraquecimento. Esses tratamento ê dispendioso e sofre da desvantagem de não ser preventivo e de apenas ser útil para o tratamento da infecção apôs ela ter ocorrido.
Uma vacina viva introduzida em 1983 por Fort Dodge Laboratories, Iowa, que pretendia proteger os caês contra CCV revelou-se logo como não sendo segura e foi afastada voluntáriamente do mercado no mesmo ano (ver M.L. Martin em The Compendium on Continuing Education, 1985, 12, 1012-1017).
Uma vacina inactivada para proteger cães do CCV foi agora introduzida por Fort Dodge Laboratories sob o nome comercial Duramune Cv-K. As Patentes dos Estados Unidos importantes para este produto são a Patente dos E.U.A. No. 4.567.042 e a Patente dos E.U.A. No. 4.567.043.
Tendo em vista a natureza contagiosa do CCV, e os aspectos económicos da doença, continuam a ser urgenteiente necessárias vacinas novas e aperfeiçoadas.
Sabe-se que o coronavirus canino (CCV), o vírus da gastroenterite transmissível dos suínos (TGEV), o vírus da peritonite infecciosa dos felinos (FIPV) e o coronavirus respiratório humano do grupo 229E constituem um grupo antigênico de vírus pertencendo â família Coronaviridae (ver N.C. Pedersen et al., Arch. Virol., 1978, 58, 45-53 e S. Siddell etal_., J. Gen. Virol, 1983, 64, 761-76).
Contudo estudos de protecção cruzada com estes vírus tiveram pouco ou nenhum êxito. Por exemplo, num estudo, porcos que receberam CCV virulentos não produziram anticorpos neutralizantes em relação a TGEV (L.N. Binn et al., Proceedings of the Annual Meeting U.S. Animal Health Association, 1974, 78, 359-366), enquanto que num outro estudo gatos inoculados com um isolado do campo virulento de CCV não ficaram protegidos em relação a uma dose desencadeadora de FIPV (J.E. Barlough, et al,Laboratory Animal Science, 1984, 34, 592-597).
Outro trabalho revelou que gatos vacinados com TGEV virulentos e em seguida expostos a desafio com FIPV virulentos que não focaram protegidos em relação à infecção com FIPV (ver, por exemplo, D.J. Reynolds and D.J. Garwes, Arch.Virol. 1979, 60, 161-166; e R.D.Woods and N.C. Pedersen, Vet. Microbiol 1979, 4, 11-16).
-4Surpreendentemente, verificou-se actualmente que vacinas baseadas em TGEV protegiam o cão contra a infecçâo pelo CCV.
Consequentemente, o presente invento proporciona um método para evitar a infecçâo por coronavirus canino em cães, método esse que compreende a administração a um cão de uma vacina preparada a partir de vírus da gastroenterite transmissível dos suínos (uma vacina TGEV).
invento também proporciona a utilização do vírus da gastroenterite transmissível dos suínos para a produção de uma vacina para evitar a infecçâo por coronavirus canino em cães.
A vacina TGEV pode ser viva ou inactivada.
Uma composição para vacina compreendendo formas de TGEV inactivado constitui um outro aspecto do presente invento.
invento também proporciona um processo para preparar uma composição para vacina inactivada, processo esse que compreende a mistura do vírus inactivado da gastroenterite transmissível dos suínos com um veiculo farmaceuticamente aceitável.
A vacina TGEV para utilização no método do invento pode ser produzida a partir de um isolado de vírus TGE, por exemplo a partir do vírus TG TGE atenuado adaptado a cultura de células o qual foi depositado no American Type Culture Collection e que tem o No. de Depósito ATCC Vr-763.
TGEV vivo atenuado apropriado para utilização no presente invento pode ser preparado passando
-5o isolado de vírus TGE em células de origem porcina e/ou de origem felina váriasvvezes, por exemplo entre 2 e 9 vezes, com uma relação entre o vírus e as células de 1:1 a 1:10.000, de preferencia cerca de 1:100.
De preferencia as células de origem porcina compreendem células de rim de porco (PK), por exemplo linhagens celulares PK TC/115, e PK 15 (ATCC CCL 33).
De preferencia as células de origem felina compreendem células de rim de felinos, especialmente células de rim de felino Grandell (CRFK), (ATCC CCL 94).
Os vírus TGE vivos atenuados podem ser protegidos por cultura de células num meio de cultura apropriado usando células de mamíferos. 0 método inclui os passos de inoculação das células de cultura do tecido de mamífero com TGEV (tendo as células normalmente sido cultivadas numa monocamada confluente a 8-100% antes da inoculação), colheita das células, tipicamente entre 1 e 7 dias, de preferencia entre 2 e 5 dias, apôs inoculação, e recolhendo o vírus propagado a partir das células colhidas.
Os meios de cultura apropriados para utilização no processo atrás descrito incluem os conhecidos nesta técnica. Um meio de cultura preferido em que o vírus TGE pode ser propagado ê o meio essencial mínimo de Eagle (MEM) com ou sem soro.
crescimento das células e dos virus é mantido em condições padrão, normalmente a 33-39°C, de preferencia a 35-38°C.
Os fluidos do virus são inoculados apropriadamente em células de mamíferos com uma relaqão aitre os vírus e as células de 1:1 a 1:10.000, de preferencia cerca
X
de 1:100. De preferencia o meio de cultura do vírus é adicionado após um periodo de 1 a 2 horas.
As células de mamíferos são apropriadamente de origem porcina ou felina, por exemplo células de rim de porco (PK), especialmente a linhagem de células PK 15 (ATCC CCL 33), ou células de rim de felino, especialmente células de rim de felino de Candrell (CRFK) (ATCC CCL 94).
De preferencia as células de mamíferos têm origem felina, com maior preferencia células CRFK.
Os fluidos de vírus são colhidos de preferencia cerca de 3 dias apôs inoculação por meio de congelação-descongelação ou por meio de acção enzimática. Os fluidos com vírus colhidos podem convenientemente ser armazenados congelados.
Normalmente os fluidos virais escolhidos 3 5 tal como foi atrãs descrito contêm pelo menos 10 . unidades /ml de vírus infecciosos.
Quando ê necessária uma vacina de TGEV viva os fluidos do vírus podem ser usados sem qualquer processamento posterior ou podem ser misturados com um estabilizador apropriado, por exemplo amina-gelatina N-Z, glutamato fosfato de sucrose (SPG), ou albumina glutamato fosfato de sucrose (SPGA). Normalmente a vacina ê seca. De preferencia o título apôs a secagem ê de pelo menos 104 por dose.
Quando é requerida uma vacina inactivada (ou 'morta'), os fluidos de vírus colhidos podem ser inactivados por métodos conhecidos na técnica.Os métodos apropriados incluem, por exemplo, tratamento com β-propiolactona formaldeido, ou etilenoimina. Apôs um periodo de inactivação e de incuteção, os fluidos de virus podem ser testados quanto â inactivação completa por métodos conhecidos, por exemplo
X por passagens múltiplas por células de rim.
Um outro método, preferido, para realizar o passo de inactivação consiste em tratar os fluidos de virus colhidos com ácido ascórbico e/ou um seu sal na presença de oxigénio e de uma fonte de iões de metal pesado.
Formas apropriadas de ácido ascórbico incluem os sais de metal alcalino ou alcalino terroso, por exemplo os sais de sódio, potássio ou cálcio, ou o próprio ácido ascórbico.
Um sal preferido ê o sal de sódio.
Uma concentração de ascorbato apropriada para utilização no passo de inactivação varia entre 1 - 10 mM, de preferencia 2,0 mM - 6,0 mM, por exemplo 2,5 mM.
Fontes apropriadas de iões de metal pesado incluem sais de cobre, ferro e zinco e compostos contendo mercúrio.
Um ião de metal pesado preferido ê o
2+ ião cúprico (Cu ), cuja fonte conveniente ê sulfato cúprico.
Um outro ião de metal pesado preferido ê mercúrio, cujas fontes convenientes são compostos de mercúrio orgânico, espeeialmente ácido etilmercuritiodalicílico, sal de sódio (thimerosal).
ião de metal pesado está presente numa quantidade catalítica, uma concentração apropriada para utilização num passo de inactivação variando entre 0,01 mM e 0,1 mM, de preferencia entre 0,015 mM e 0,05 mM,por exemplo 0,022 mM.
-8A presença de oxigénio ê essencial e ê proporcionada convenientemente por arejamento adequado.
Normalmente o passo de inactivação é deixado realizar-se entre 1 e 54°C, de preferencia a cerca de 37°C, até um teste de inactivação provar ser satisfatório 0 requerido periodo de inactivação varia tipicamente entre 10-100 horas, geralmente cerca de 48-72 horas.
Para a inactivação de certos virus, por exemplo parvovirus e rotavirus, pode ser necessária uma segunda adição de ácido ascórbico para completar o processo de inactivação.
Além disso, outros agentes conhecidos como inactivadores de vírus podem ser adicionados facultativamente para completar o processo de inactivação.Um desses reagentes ê a sapcnina tal como ê descrita em, por exemplo, Vet. Med. Nauki, 1980, 17(3), 45-55 (A. Motovski et al_.,), a qual pode, por exemplo, ser adicionada a uma concentração de 0,5 mg/ml cerca de 72 horas após a adição do ácido ascôrbico. Esse processo revelou ser especialmente útil para a inactivação de vírus com invólucro tais como os vírus do grupo Herpes incluindo PRV e IBR.
progresso do processo de inactivação pode ser convenientemente monitorizado medindo a viabilidade do vírus em certos intervalos usando qualquer método conveniente, por exemplo pelo teste do anticorpo fluorescente indirecto para determinar o título residual do vírus.
Para a preparação da vacina TGEV inactivado o passo de inactivação ê normalmente realizado adicio nando quantidades apropriadas de soluções de lotes de ascorbato de sódio e de sulfato cúprico â massa do vírus e misturando a solução resultante na presença de ar durante cerca
-9de 72 horas a 37°C. Após arrefecimento até 4°C, pode ser convenientemente realizado um teste de inactivação usando uma cultura de células apropriadas tais como PK ou CRFK.
A vacina TGEV para utilização no método do invento pode facultativamente conter adicionalmente virus vivos modificados atenuados ou virus mortos tais como virus da doença canina com enfraquecimento geral e tosse, virus da parainfluença canina, adenovirus canino (I e II), parvovirus canino e pode ser combinada com várias vacinas bacterianas inactivadas tais como bacterin (uma suspensão de bactérias mortas ou atenuadas para utilização como vacinas) icterocanicola com Leptospira, ou bacterin (uma suspensão de bactérias mortas ou atenuadas para utilização como vacinas)Bordatella canina.
A composição da vacina TGEV inactivada do invento pode também facultativamente conter adjuvantes incluindo hidróxido de alumínio (por exemplo 2-25%, de preferencia, 5-25%, em peso), saponina (por exemplo 0,5-1,5 mg/dose), e adjuvante incompleto de Freund (água tipica em emulsão em óleo).
A fim de evitar a infecção por coronavirus canina em cães, a vacina TGEV pode ser administrada parentéricamente (subcutaneamente ou intramuscularmente)numa dose de pelo menos 1,9 logs de particulas de virus por dose, de preferencia pelo menos 1.000 particulas de virus (3 logs de particulas de virus) por dose. Vantajosamente a vacina é administrada em pelo menos 4 logs de particulas de virus por dose.
Os exemplos que se seguem ilustram o invento .
-10Exemplos
Nos exemplos a seguir descritos, foram usados os materiais e métodos que se seguem.
A. Vírus TGE
Preparação A.l vírus TGE da estirpe Purdue (ATCC VR-763) foi feito passar 4 vezes por células de rim de porco (designadas PK0809) para produzir um vírus para senHiteira dominate.
As vacinas experimentais foram derivadas do vírus para sementeira dominante após 5 passagens adicionais nas células do rim do porco.
Preparação A.2 vírus para sementeira dominente da Preparação 1 foi feito passar 3 vezes em células de rim de porco e duas vezes em células de rim felino de Candrell (ATCC CCL 94).
B. Cultura de Células
Preparação B.l
Os vírus para sementeira dominante foi propagado a 35-38°C na linhagem das células PK 15 das células de rim de porco (ATCC CCL 33) em MEM de Eagle não contendo mais de 10% de soro bovino.
Preparação B.2 vírus da Preparação A.2 foi propagado a 35-38°C na linha gem de células do rim felino de Candrell (ATCC CCL 94) em MEM de Eagle contendo não mais do que 10% de soro bovino.
C. Crescimento do Vírus
Preparação C.I
Duas pequenas garrafas cilíndricas contendo monocamadas PK0809 confluentes foram inoculadas com 1 ml de vírus de sementeira dominante TGE não diluido.Após um periodo de 1 - 2 horas de periodo de adsorção foi adicionado o meio de crescimento do vírus (MEM de Eagle não contendo rais que 2% de soro bovino) e o vírus foi feito crescer a 35 - 38°C.
Preparação C.2
Duas pequenas garrafas cilíndricas contendo monocamadas confluentes de c-elulas de rim felino Candrell (ATCC CCL 94) foram inoculadas com 1 ml de vírus de sementeira dominante TGE não diluido.Após um periodo de adsorção de 1 - 2 horas o meio de crescimento do vírus (MEM de Eagle contendo não mais do que 2% de soro bovino) foi adicionado e o vírus foi feito crescer a 35 - 38°C.
Exemplo 1
Vacina TGEV Viva Modificada
A uma garrafa cilíndrica contendo vírus TGE preparado tal como na Preparação C.I atrás referida adiciona-se 17% de estabilizador N-Z amina-gelatina.E realizado um ciclo de congelação/descongelação e o material resultante ê seco em volume de 1 ml e mantido a 4°C atê ser requerido.0 titulo após secagem deve ser de pelo menos 104 por
-12Exemplo 2
Vacina TGEV Viva Modificada
Foi preparada uma vacina TGEV viva modificada da mesma maneira que no Exemplo 1 exceptuando o facto de se ter usado o vírus TGE preparado tal como na Preparação C.2.
Exemplo 3
Vacinas TGEV Inactivadas
Uma garrafa cilíndrica contendo vírus TGE preparado tal como na Preparação C.l atrás referida foi congelada e descongelada (tomadas amostras tituladas) e inactivada como se segue (a massa do vírus deve ter um título anC (Γ terior â inactivação de pelo menos 10 ’ por dose);.
vírus da massa foi colocado numa garrafa de vidro de 1 litro e levada atê 37°C.Uma solução do lote ascorbato de sódio (1% p/v) e solução do lote sulfato cúprico (1,1% p/v) foram então adiciobadas para levar a concentração final do ascorbato até 5,05 mM e a concentração final de iões cúpricos atê 0,022 mM. Os conteúdos da garrafa foram misturados com arejamento adequado durante 72 horas a 37°C sendo então arrefecidos até 4°C. Foi realizado um teste de inactivação em células de rim de porco.
Apôs prova de inactivação, o vírus da massa foi dividido e adjuvado para dar origem a duas vacinas inactivadas como se segue:
Vacina A
Metade dos virus da massa inactivados foram tratados com 10% de hidróxido de alumínio por agitação durante 15-20 horas a 4°C.
r
Vacina Β
A outra metade dos virus da massa inactivados foi adjuvada como se segue:
A solução 1 consiste em 5 ml de emulsificador adicionados a 95 ml de Drakoil 6 VR.
A solução 2 consiste em 2,5 ml de Tween 80 adicionados a 47,5 ml de virus TGE mortos.
A solução 1 (21 ml) é adicionada à Solução 2 (7 ml) e misturadas usando uma seringa de emulsificação Perfektum antes da vacinação.
Exemplo 4
Titulação da dose de vacina TGEV viva modificada e avaliação da imunogenicidade de CCV em cães
a) Esquema Experimental
Foram avaliadas quatro permutações da vacina TGEV; dois níveis antigênicos, administrados, cada um intramuscularmente (IM) ou subcutâneamente (SC). Foram atribuídos cinco cães para cada grupo IM e 4 cães para cada grupo SC. Foram usados cinco cães como controles (testemunhas) não vacinados.
Os cães em cada grupo de vacina receberam duas doses de 2 ml de uma vacina TGEV viva modificada administrada IM ou SC com 4 semanas de intervalo.Três semanas a seguir â segunda vacinação todos os caês foram testados quanto à imunidade oralmente e intraamigdalarmente com CCV. Foram avaliados três parâmetros para determinar a eficácia de cada permutação de vacina: resposta serológica, eliminação rectal de CCV e infecção por CCV das células epiteliais do intestino 5 dias após o. seguinte teste quanto â imunidade.
b) Materiais e Métodos
i) Animais
Foram utilizados vinte e três caês de diversas ninhadas, com 16-20 semanas de idade, com uma história de nenhuma vacinação com CCV, Os cães eram sensíveis ao CCV tal como ê indicado por títulos CCV-IFA de <1:2.
ii) Vacina e Vacinação vírus de sementeira dominante TGEV foi feito passar três vezes em células de rim de porco e duas vezes em células de rim felino de Candrell (CRFK): 0 material de colheita de vírus foi mantido a -70°C antes da uti1ização.
iii) Serologia
Os títulos de anticorpos foram determinados na altura da vacinação, do teste de imunidade, e 5 dias após o teste de imunidade usando um teste com anticorpo fluorescente indirecto.
iv) Teste de imunidade
Utilizou-se um isolado do campo designado CCV-6, e feito passar uma vez em CRFK. Os cães foram privados de alimentos durante 24 horas antes do teste de imunidade.Adiministraram-se quatro mis de material de colheita de virus a cada cão de modo que se segue: 2 mis de material com vírus misturado com l/4de chávena de Aipo foram administrados oralmente. Os cães foram então anestesiados com Prom Ace® (Ayerst Laboratories INC NY, NY 10017) de
acordo com as recomendações do rótulo., sendo então injectado 1 ml de CCV em cada amígdala. Os cães foram monitorizados no dia do teste de imunidade e durante 5 dias a seguir ao teste de imunidade para avaliação de sinais clínicos importantes e de eliminação de virus pelo recto.
v) Recuperação do Vírus Rectal a Seguir ao Teste de Imunidade
Foi recolhido com espátula material rectal diáriamente que foi processado para isolamento do vírus por passagem em células CRFK.
vi) Avaliação do Intestino Delgado a Seguir ao Teste de
Imunidade com CCV
Cinco dias após o teste de imunichde com CCV, todos os cães foram autopsiados e foi removida a totalidade do intestino delgado. Fizeram-se impressões de lâminas intestinais de segmentos intestinais espaçados regulamente. A presença de antigénio CCV foi determinada usando um teste de anticorpo fluorescente indirecto.As lâminas de impressão foram registadas de acordo com a percentagem de fluorescência especifica em relação ao CCV observada.
c) Resultados
Não se observaram quaisquer sinais clínicos entre os cães a seguir â vacinação ou ao teste de imunidade.
i) Títulos do Virus da Vacina estudo foram 10
Os níveis antigênicos usados neste 3.3 e 102.3TCID50/dose.
/ <
-16i *) Resposta Serológica „ . .
Os resultados serológicos são resumi dos no Quadro 1.
Quadro 1
Títulos Médios de Anticorpos Geométricos de CCV Recíprocos
Vacina Semanas Post lâ Vac 5D
TGE 0 3 7 PC
io3-3im <2 40 139 422
3 3 ÍO^SC <2 24 113 320
io2*3im < 2 46 53 485
1 o2·3SC < 2 34 24 190
Não-Vac < 2 10 10 10
Todos os cães não tinham título
anticorpos mensurável na altura da vacinação. Os controlos (testemunhas) não-vacinados permaneceram inferiores a 1:10 ao longo do estudo indicando a ausência de uma infecçâo estranha por CCV.
Os caês em todos os quatro grupos de vacina (103.3IM, 10 3<.3SC, 102.3IM e 102.3SC) desenvolveram semelhantes títulos de anticorpos médios geométricos em relaçã) ao CCV (GMAT) no espaço de 3 semanas a seguir à primeira vacinação (1:24 a 1:46) indicando uma resposta primária a partir da replicação do virus. Três semanas a seguir â 2â vacinação a resposta à dose foi demonstrada entre caês dos grupos 103.3 IM e SC(GMAT 1:139 e 1:113) e entre os grupos
10^3 IM e SC (GMAT 1:53 e 1:24). Todos os caês vacinados demonstraram uma resposta anamnêstica a seguir ao teste de imunidade com CCV; as respostas entre os cães nos grupos 3 3 . IM e SC foram 3 vezes maiores e as respostas entre os 2 3 cães nos grupos 10 . IM e SC foram nove e oito vezes maiores respectivamente. Os resultados serolôgicos indicaram que o sistema imunitário canino, aperfeiçoado pela vacina TGEV viva heteróloga respondeu anamnésticamente ao teste de imunidade com CCV virulento homólogo.
Os caês não vacinados, 5 dias apôs o teste de imunidade, não apresentavam resposta mensurável de anticorpos.
iii) Avaliações pós-Teste de Imunidade com CCV
As titulações duplicadas do virus para teste de imunidade CCV indicaram que os cães eram submetidos ao teste de imunidade com 155/ TC IDgg/ml(105 .^TCID5Q/dose).
Os isolamentos do vírus CCV foram minitorizados durante 5 dias a seguir ao teste de imunidade.Todos os cães se apresentavam sem CCV antes do teste de imunidade. As inclusões do vírus CCV no interior do citoplasma CRFK foram observadas em todos os controlos (testemunhas) não vacinados (recuperação de 100%) ao longo de um período de 5 dias. Entre os cães vacinados, não se observaram inclusões do vírus CCV indicando não ter havido recuperação do vírus.
A passagem de material não aumentou a recuperação do vírus.
quadro 2 resume a fluorescência intestinal especifica em relação ao CCV entre os grupos e controlos (testemunhas) não vacinados.
Quadro 2
Registo Médio (%) do CCV Intestinal CCV por Imunofluorescência
GRUPO Número de impressão do Intestino (Duodeno ao íleo) 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 TOTAL
3.3 IM 3.3 SC 2.3 IM 2.3 SC Controlo 7,6 9,0 5,0 2,0 5,0 0,0 2,0 0,0 17,5 5,0 8,8 7,5 2,5 2,5 0,0 12,5 10,0 12,0 2,0 0,4 0,4 6,0 1,4 14,0 10,0 1,3 6,3 0,0 0,0 0,0 15,0 10,0 46,0 82,0 24,0 40,0 35,0 48,0 400 12,0 30,6 56,3 46,2 42,5 327,0
A fluorescência especifica em relação ao CCV tal como foi indicado por fluorescência verde maçã brilhante foi observada ao longo de todo o comprimento do intestino delgado. Todos os cães revelaram um certo grau de infecção por CCV. Observou-se entre todos os cães vacinados, uma significativa redução da fluorescência intestinal, em comparação com os controlos (testemunhas).
Os registos totais médios entre grupos vacinados 5 dias após o teste de imunidade com CCV foram saelhantes (30,6, 56,3, 46,2, 42,5) e o registo total médio dos cães de controlo (testemunhas) não vacinados foi considerávelmente mais elevado (327) do que o dos grupos vacinados .
d) Conclusão
Os cães de todos os grupos vacinados desenvolveram respostas em anticorpos semelhantes 3 semanas a seguir à primeira vacinação. Observou-se uma resposta de dose de anticorpos entre
3 2 3 cães nos grupos de vacina 10 . e 10 . 3 semanas a seguir a segunda vacinação.
A seguir ao teste de imunidade com CCV, o virus foi recuperado a partir de todos os não vacinados e a infecção intestinal por CCV apareceu activa e espalhada.Contudo os cães vacinados em todos os grupos de vacina, demonstraram uma resposta imunitária celular activa sem eliminação rectal do vírus apresentando-se aparentemente protegidos em relação ao teste de imunidade com CCV pelos anticorpos induzidos pela vacina TGE ou imunidade por mediação das células.

Claims (7)

  1. REIVINDICAÇOES lâ. - Processo para a preparação de uma composição de vacina inactivada, caracterizado por compreender a mistura do vírus inactivado da gastroenterite transmissível dos suínos com um veiculo farmacêutico.
  2. 25. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição da vacina ser preparada a partir do vírus Purdue Strain TGE (ATCC No. VR-T63).
  3. 3â. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindicação 2 caracterizado por compreender adicionalmente a mistura de um vírus vivo modificado atenuado ou de um vírus inactivado escolhido entre o grupo consistindo no vírus da doença canina de enfraquecimento e tosse, vírus da parainfluença canina, adenovirus canino (I e II), parvovírus canino e coronavírus canino ou uma vacina bacteriana inactivada escolhida a partir do grupo consistindo em bacterina de Leptospira causadora de canicola-ictêrica e em bacterina de Bordatella canina.
  4. 4â. - Processo para a produção de uma vacina inactivada preparada a partir de vírus da gastroenterite transmissível dos suínos (uma vacina TGEV), caracterizado por compreender:
    (a) passagem de um isolado de vírus TGE em células de origem porcina e/ou felina a uma taxa de vírus em relação às células de 1:1 a 1:10.000 para se obter um vírus TGE vivo atenuado.
    (b) propagação do vírus TGE vivo por cultura de células em células de mamíferos;
    (c) colheita dos fluidos virais assim produzidos; e (d) inactivação dos referidos fluidos virais com um agente de inactivação virai;
  5. 5â- Processo de acordo com a reivindicação
  6. 6 caracterizado por os referidos fluidos virais serem inactivados com ácido ascôrbico e/ou um seu sal na presença de oxigénio e de uma fonte de iões de metal pesado.
    63. - Processo de acordo com a reivindicação 7 caracterizado por a fonte dos iões metálicos ser seleccionada a partir do grupo consistindo em compostos contendo cobre, ferro, zinco e mercúrio.
  7. 7ã. - Processo de acordo com a reivindicação 8 caracterizado por 0 composto contendo mercúrio ser timerosal.
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