PT2154248E

PT2154248E - Compostos e métodos para diagnóstico de tuberculose

Info

Publication number: PT2154248E
Application number: PT09174756T
Authority: PT
Inventors: Raymond Houghton; Steven Reed; Davin Dillon; Antonio Campos-Neto; Thomas Vedvick; Daniel Twardzik
Original assignee: Corixa Corp
Priority date: 1995-09-01
Filing date: 1996-08-30
Publication date: 2012-01-16
Also published as: ES2378051T3; CY2618B2; JPH11514217A; EP0850305B1; ATE324445T1; CA2230927A1; ATE530671T1; CN1154730C; WO1997009429A2; AU7158796A; MX9801687A; DE69636075D1; WO1997009429A3; DK2154248T3; EP2154248A1; EP2154248B1; EP0850305A2; CN1200146A; CN1554664A

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS E MÉTODOS PARA DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE"

Campo Técnico A presente invenção refere-se genericamente à detecçao de Mycobacterium tuberculosis.

Antecedentes da Invenção A tuberculose é uma doença infecciosa crónica que é geralmente causada por infecção por Mycobacterium tuberculosis. É uma doença importante em países em desenvolvimento, bem como um problema crescente em áreas desenvolvidas do mundo, com cerca de 8 milhões de novos casos e 3 milhões de mortes por ano. Apesar da infecção poder ser assintomática durante um período de tempo considerável, a doença manifesta-se mais habitualmente como uma inflamação aguda dos pulmões, resultando em febre e numa tosse seca. Se não for tratada, resulta tipicamente em complicações graves e morte.

Embora a tuberculose possa ser geralmente controlada utilizando terapia prolongada com antibióticos, esse tratamento não é suficiente para prevenir a disseminação da doença. Os indivíduos infectados podem ser assintomáticos, mas contagiosos, durante algum tempo. Adicionalmente, embora a adesão ao regime de tratamento pelo doente seja crítica, é difícil monitorizar o comportamento do doente. Alguns doentes não completam o 1 tratamento, o que pode conduzir a tratamento ineficaz e ao desenvolvimento de resistência a fármacos. A inibição da disseminação da tuberculose requer vacinação eficaz e diagnóstico precoce e rigoroso da doença. Presentemente, a vacinação com bactérias vivas é o método mais eficiente para induzir imunidade protectora. A micobactéria mais comum empregue para este objectivo é o Bacillus Calmette-Guerin (BCG), uma estirpe avirulenta de Mycobacterium bovís. No entanto, a segurança e eficácia da BCG são uma fonte de controvérsia, e alguns paises, como os Estados Unidos, não vacinam o público em geral. 0 diagnóstico é habitualmente realizado utilizando um teste cutâneo, que envolve exposição intradérmica ao PPD (derivado proteico purificado) da tuberculina. As respostas de células T especificas para antigénios resultam em endurecimento mensurável no sitio da injecção às 48-72 horas após a injecção, o que indica exposição a antigénios micobacterianos. Todavia, a sensibilidade e especificidade deste teste têm sido um problema, não sendo possível distinguir entre indivíduos vacinados com BCG e indivíduos infectados.

Embora tenha sido mostrado que os macrófagos actuam como os principais efectores da imunidade a M. tuberculosis, as células T são os indutores predominantes dessa imunidade. 0 papel essencial das células T na protecção contra infecção por M. tuberculosis é ilustrado pela ocorrência frequente de M. tuberculosis em doentes com SIDA, devido à depleção de células T CD4 associada à infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (VIH) . Foi mostrado que as células T CD4 reactivas a micobactérias são produtores potentes de interferão gama (IFN-γ), que foi mostrado, por sua vez, desencadear os efeitos antimicobacterianos de macrófagos em murganhos. Embora o papel 2 do IFN-γ em humanos seja menos claro, estudos mostraram que a 1,25-di-hidroxi-vitamina D3, isoladamente ou em combinação com IFN—γ ou factor de necrose tumoral alfa, activa macrófagos humanos para inibirem a infecção por M. tuberculosis. Adicionalmente, sabe-se que o IFN-γ estimula macrófagos humanos para produzirem 1,25-di-hidroxi-vitamina D3. De modo semelhante, foi mostrado que a IL-12 desempenha um papel na estimulação da resistência à infecção por M. tuberculosis. Para uma revisão da imunologia da infecção por M. tuberculosis ver Chan e Kaufmann em Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control, Bloom (ed.), ASM Press, Washington, DC, 1994.

De acordo com o exposto, existe a necessidade na técnica de vacinas e métodos aperfeiçoados para prevenir, tratar e detectar a tuberculose. A presente invenção cumpre estas necessidades e proporciona ainda outras vantagens relacionadas.

Sumário da Invenção

Em resumo, a presente invenção proporciona métodos para diagnosticar a tuberculose. São divulgados polipéptidos compreendendo uma porção antigénica de um antigénio solúvel de M. tuberculosis ou uma variante desse antigénio que difere apenas em substituições e/ou modificações conservadoras. 0 antigénio solúvel pode ter uma das seguintes sequências do terminal N: (a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu (SEQ ID N° 115); (b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser (SEQ ID N° 116); 3 (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg (SEQ ID N° 117); (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro (SEQ ID N° 118); (e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val (SEQ ID N° 119); (f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro (SEQ ID N° 120); (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser (SEQ ID N° 121); (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly (SEQ ID N° 122); (i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn (SEQ ID N° 123); (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser; (SEQ ID N° 129) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp; (SEQ ID N° 130) ou (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly; (SEQ ID N° 131) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido. São também divulgados polipéptidos compreendendo uma porção imunogénica de um antigénio de M. tuberculosis ou uma variante desse antigénio que difere apenas em substituições e/ou modificações conservadoras, o antigénio tendo uma das seguintes sequências do terminal N: m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-

Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID N° 132) ou 4 (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-

Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEQ ID N° 124) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido.

Os antigénios divulgados podem compreender uma sequência de aminoácido codificada por uma sequência de ADN seleccionada do grupo consistindo de sequências especificadas nas SEQ ID N° 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 94 e 96, os complementos dessas sequências, e sequências de ADN que hibridam com uma sequência especificada nas SEQ ID N° 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 94 e 96 ou um seu complemento sob condições moderadamente severas.

Os polipéptidos divulgados podem compreender uma porção antigénica de M. tuberculosis ou uma variante desse antigénio que difere apenas em substituições e/ou modificações conservadoras, em que o antigénio compreende uma sequência de aminoácidos codificada pela sequência de ADN, seleccionada do grupo consistindo das sequências especificadas nas SEQ ID N° 26-51 e complementos dessas sequências, e sequências de ADN que hibridam com uma sequência especificada nas SEQ ID N° 26-51 ou um seu complemento sob condições moderadamente restringentes. São também divulgadas sequências de ADN codificando os polipéptidos acima, vectores de expressão recombinante compreendendo estas sequências de ADN e células hospedeiras transformadas ou transfectadas com esses vectores de expressão.

De acordo com a presente invenção é proporcionado um método para detectar a sensibilização a um antigénio micobacteriano num indivíduo compreendendo: (a)contactar uma amostra biológica do 5 referido indivíduo com um polipéptido compreendendo uma porção antigénica da SEQ ID N° 8; e (b) detectar na amostra biológica a presença de anticorpos que se ligam ao polipéptido. São proporcionados métodos e kits de diagnóstico para detecção da tuberculose num doente. Os métodos compreendem: (a) fazer contactar uma amostra biológica com pelo menos um polipéptido compreendendo uma porção antigénica da SEQ ID N° 89 e (b) detectar na amostra biológica a presença de anticorpos que se ligam ao polipéptido ou aos polipéptidos, pelo que detectam a infecção de M. tuberculosis na amostra biológica. Amostras biológicas adequadas incluem sangue total, cuspo, soro, plasma, saliva, líquido cefalorraquidiano e urina. Os kits de diagnóstico compreendem um ou mais dos polipéptidos acima em combinação com um reagente de detecção.

Descrição Breve das Figuras e Identificadores de Sequências

As Figuras IA e 1B ilustram a estimulação da proliferação e a produção de interferão-γ em células T derivadas de um primeiro e de um segundo dador imune a M. tuberculosis, respectivamente, pelos antigénios de 14 kD, 20 kD e 26 kD descritos no Exemplo 1. A Figura 2 ilustra a reactividade de dois polipéptidos representativos com soro de indivíduos infectados com M. tuberculosis e não infectados em comparação com a reactividade do lisato bacteriano. A Figura 3 ilustra a reactividade de quatro polipéptidos representativos com soro de indivíduos infectados com M. tuberculosis e não infectados em comparação com a reactividade do antigénio de 38 kD. 6 A Figura 4 ilustra a reactividade dos antigénios de 38 kD e TbRall com soro de doentes com M. tuberculosis, dadores de PPD positivo e dadores normais. A Figura 5 ilustra a reactividade do antigénio TbRa2A com soro negativo para 38 kD. A Figura 6 ilustra a reactividade do antigénio da SEQ ID N° 60 com soro de doentes com M. tuberculosis e dadores normais. SEQ ID N° 1 é a sequência de ADN de TbRal. SEQ ID N° 2 é a sequência de ADN de TbRalO. SEQ ID N° 3 é a sequência de ADN de TbRall. SEQ ID N° 4 é a sequência de ADN de TbRal2. SEQ ID N° 5 é a sequência de ADN de TbRal3. SEQ ID N° 6 é a sequência de ADN de TbRal6. SEQ ID N° 7 é a sequência de ADN de TbRal7. SEQ ID N° 8 é a sequência de ADN de TbRal8. SEQ ID N° 9 é a sequência de ADN de TbRal9. SEQ ID N° 10 é a sequência de ADN de TbRa2 4. SEQ ID N° 11 é a sequência de ADN de TbRa2 6. SEQ ID N° 12 é a sequência de ADN de TbRa2 8. SEQ ID N° 13 é a sequência de ADN de TbRa2 9. SEQ ID N° 14 é a sequência de ADN de TbRa2A. SEQ ID N° 15 é a sequência de ADN de TbRa3. SEQ ID N° 16 é a sequência de ADN de TbRa3 2. SEQ ID N° 17 é a sequência de ADN de TbRa3 5. SEQ ID N° 18 é a sequência de ADN de TbRa36. SEQ ID N° 19 é a sequência de ADN de TbRa4. SEQ ID N° 20 é a sequência de ADN de TbRa9. SEQ ID N° 21 é a sequência de ADN de TbRaB. SEQ ID N° 22 é a sequência de ADN de TbRaC. 7 SEQ ID N° 23 é a sequência de ADN de TbRaD. SEQ ID N° 24 é a sequência de ADN de YYWCPG. SEQ ID N° 25 é a sequência de ADN de AAMK. SEQ ID N° 26 é a sequência de ADN de TbL-23. SEQ ID N° 27 é a sequência de ADN de TbL-24. SEQ ID N° 28 é a sequência de ADN de TbL-25. SEQ ID N° 29 é a sequência de ADN de TbL-28. SEQ ID N° 30 é a sequência de ADN de TbL-29. SEQ ID N° 31 é a sequência de ADN de TbH-5. SEQ ID N° 32 é a sequência de ADN de TbH-8. SEQ ID N° 33 é a sequência de ADN de TbH-9. SEQ ID N° 34 é a sequência de ADN de TbM-1. SEQ ID N° 35 é a sequência de ADN de TbM-3. SEQ ID N° 36 é a sequência de ADN de TbM-6. SEQ ID N° 37 é a sequência de ADN de TbM-7. SEQ ID N° 38 é a sequência de ADN de TbM-9. SEQ ID N° 39 é a sequência de ADN de TbM-12. SEQ ID N° 40 é a sequência de ADN de TbM-13. SEQ ID N° 41 é a sequência de ADN de TbM-14. SEQ ID N° 42 é a sequência de ADN de TbM-15. SEQ ID N° 43 é a sequência de ADN de TbH-4. SEQ ID N° 44 é a sequência de ADN de TbH-4-FWD. SEQ ID N° 45 é a sequência de ADN de TbH-12. SEQ ID N° 46 é a sequência de ADN de Tb3 8-1. SEQ ID N° 47 é a sequência de ADN de Tb3 8-4. SEQ ID N° 48 é a sequência de ADN de TbL-17. SEQ ID N° 49 é a sequência de ADN de TbL-20. SEQ ID N° 50 é a sequência de ADN de TbL-21. SEQ ID N° 51 é a sequência de ADN de TbH-16. SEQ ID N° 52 é a sequência de ADN de DPEP. SEQ ID N° 53 é a sequência de aminoácidos deduzida SEQ ID N° 54 é a sequência proteica do Antigénio de DPEP. N-terminal

de DPV SEQ ID N° 55 é a sequência de AVGS . SEQ ID N° 56 é a sequência de AAMK. SEQ ID N° 57 é a sequência de YYWC. SEQ 1—1 U 3 o 58 é a sequência de DIGS . SEQ ID N° 59 é a sequência de AEES . SEQ ID N° 60 é a sequência de DPEP . SEQ ID N° 61 é a sequência de APKT . SEQ ID N° 62 é a sequência de DPAS . SEQ ID N° 63 é a sequência SEQ ID N° 64 é a sequência proteica do proteica do proteica do proteica do proteica do proteica do proteica do de aminoácidos de aminoácidos SEQ ID TbRal0. N° 65 é a sequência de aminoácidos SEQ ID TbRal1. N° 6 6 é a sequência de aminoácidos SEQ ID TbRal2. N° 67 é a sequência de aminoácidos SEQ ID TbRal3. N° 68 é a sequência de aminoácidos SEQ ID TbRal6. N° 69 é a sequência de aminoácidos SEQ ID TbRal7. N° 70 é a sequência de aminoácidos SEQ ID N° 71 é a sequência de aminoácidos TbRal8. proteica do Antigénio N-terminal

Antigénio N-terminal

Antigénio N-terminal deduzida de TbM-1. deduzida de TbRal. deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de deduzida de 9 SEQ ID N 0 72 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRal9. SEQ ID N 0 73 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa2 4. SEQ ID N 0 74 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa2 6. SEQ ID N 0 75 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa2 8. SEQ ID N 0 76 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa29. SEQ ID N 0 77 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa2A. SEQ ID N 0 78 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa3. SEQ ID N 0 79 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa3 2. SEQ ID N 0 80 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa3 5. SEQ ID N 0 81 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa36. SEQ ID N 0 82 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa4. SEQ ID N 0 83 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRa9. SEQ ID N 0 84 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRaB. SEQ ID N 0 85 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRaC. SEQ ID N 0 86 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbRaD. SEQ ID N 0 87 é a sequência de aminoácidos deduzida de YYWCPG. SEQ ID N 0 00 00 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbAAMK. SEQ ID 1 N 0 89 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb38- _L · SEQ ID N 0 90 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- -4 . SEQ ID N 0 91 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- -8 . SEQ ID N 0 92 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- -9 . 10 SEQ ID N° 93 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH-12 . SEQ ID N° 94 é a sequência de ADN de DPAS. SEQ ID N° 95 é a sequência de aminoácidos deduzida de DPAS. SEQ ID N° 96 é a sequência de ADN de DPV. SEQ ID N° 97 é a sequência de aminoácidos deduzida de DPV. SEQ ID N° 98 é a sequência de ADN de ESAT-6. SEQ ID N 0 99 é a sequência de aminoácidos deduzida de ESAT -6 . SEQ 1—1 u o 100 é a sequência de ADN de TbH-8-2. SEQ ID N° 101 é a sequência de aminoácidos de TbH-9FL. SEQ ID N 0 102 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- 9FL. SEQ ID N° 103 é a sequência de ADN de TbH-9-1. SEQ ID N 0 104 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- 9-1 . SEQ ID N° 105 é a sequência de ADN de TbH-9-4. SEQ ID N 0 106 é a sequência de aminoácidos deduzida de TbH- 9-4 . SEQ ID N° 107 é a sequência de ADN de Tb38-1F2 IN. SEQ ID N° 108 é a sequência de ADN de Tb38-1F2 RP. SEQ ID N 0 109 é : a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de Tb37 '-FL . SEQ ID N 0 110 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb3 8 -IN. SEQ ID N° 111 é a sequência de ADN de Tb38-1F3. SEQ ID N 0 112 é a sequência de aminoácidos deduzida de Tb3 8 -1F3 . SEQ 1—1 U 3 o 113 é a sequência de ADN de Tb38-1F5. SEQ ID N° 114 é a sequência de ADN de Tb38-1F6. SEQ ID N 0 115 é : a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DPV. 11

SEQ ID N° 116 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de AVGS . SEQ ID N° 117 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de AAMK. SEQ ID N° 118 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de YYWC. SEQ ID N° 119 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DIGS . SEQ ID N° 120 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de AAES . SEQ ID N° 121 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DPEP. SEQ ID N° 122 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de APKT . SEQ ID N° 123 é a sequência de aminoácidos N-terminal deduzida de DPAS . SEQ ID N° 124 1 0 a sequência proteica N-terminal do antigénio. SEQ ID N° 125-128 sao as sequências proteicas de quatro fragmentos de DPPD de brometo de cianogénio. SEQ ID : N° 129 is the N-terminal protein sequence of XDS antigen. SEQ ID N° 130 é a sequência proteica N-terminal do antigénio AGD. SEQ ID N° 131 é a sequência proteica N-terminal do antigénio APE. SEQ ID N° 132 é a sequência proteica N-terminal do antigénio XYI . 12

Descrição Pormenorizada da Invenção

Como notado acima, a presente invenção é genericamente dirigida a métodos para diagnosticar tuberculose.

Como aqui utilizado, o termo "polipéptido" abrange cadeias de aminoácidos de qualquer comprimento, incluindo proteínas de tamanho completo (i. e., antigénios), em que os resíduos de aminoácidos estão ligados por ligações peptídicas covalentes. Assim, um polipéptido compreendendo uma porção imunogénica de um dos antigénios acima pode consistir inteiramente da porção imunogénica, ou pode conter sequências adicionais. As sequências adicionais podem derivar do antigénio de M. tuberculosis nativo ou podem ser heterólogas, e essas sequências podem ser (mas não é necessário que sejam) imunogénicas.

Uma "porção antigénica" de um antigénio (o qual pode ser ou não solúvel) é uma porção que é capaz de reagir com soro obtido de um indivíduo infectado com M. tuberculosis (i. e., produz uma leitura de absorvância que reage com soro de indivíduos infectados que é pelo menos três desvios padrão acima a absorvância obtida com soro de indivíduos não infectados num ensaio ELISA representativo aqui descrito). Um "indivíduo infectado com M. tuberculosis" é um humano que foi infectado com M. tuberculosis (e. g., tem uma resposta a um teste cutâneo intradérmico para PPD que tem pelo menos 0,5 cm de diâmetro). Os indivíduos infectados podem apresentar sintomas de tuberculose ou podem estar livres de sintomas da doença. Os polipéptidos compreendendo pelo menos uma porção antigénica de um ou mais antigénios de M. tuberculosis, como descritos aqui, podem ser genericamente utilizados, isolados ou em combinação, para detectar tuberculose num doente. 13

Uma "variante", como é aqui utilizado, é um polipéptido que difere do antigénio nativo apenas em substituições e/ou modificações conservadoras, de modo que seja retida a capacidade do polipéptido para induzir uma resposta imunológica. Essas variantes podem ser geralmente identificadas por modificação de uma das sequências polipeptídicas acima e avaliação das propriedades imunogénicas do polipéptido modificado utilizando, por exemplo, os métodos representativos aqui descritos.

Uma "substituição conservadora" é aquela em que um aminoácido é substituído por outro aminoácido que tem propriedades semelhantes, de modo que um especialista na técnica da química de péptidos esperaria que a estrutura secundária e natureza hidropática do polipéptido permanecessem substancialmente inalteradas. Em geral, os seguintes grupos de aminoácidos representam alterações conservadoras: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gin, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) vai, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his, e (5) phe, tyr, trp, his.

As variantes também (ou alternativamente) podem ser modificadas, por exemplo, pela delecção ou adição de aminoácidos que têm uma influência mínima nas propriedades imunogénicas, estrutura secundária e natureza hidropática do polipéptido. Por exemplo, um polipéptido pode ser conjugado a uma sequência de sinal (ou líder) na extremidade N-terminal da proteína que dirige, em co-tradução ou pós-tradução, a transferência da proteína. 0 polipéptido também pode ser conjugado a um ligante ou outra sequência para facilidade de síntese, purificação ou identificação do polipéptido (e. g. , poli-His), ou para intensificar a ligação do polipéptido a um suporte sólido. Por exemplo, um polipéptido pode ser conjugado à região Fc de uma 14 imunoglobulina. São divulgados polipéptidos de combinação. Um "polipéptido de combinação" é um polipéptido compreendendo, pelo menos, um dos polipéptidos imunogénicos acima, ou consistindo de uma porção imunogénica do mesmo, e uma ou mais sequências de M. tuberculosis imunogénicas adicionais, que são ligadas através de uma ligação peptídica numa única cadeia de aminoácidos. As sequências podem ser ligadas directamente {i. e., sem aminoácidos intermediários) ou podem ser ligadas através de uma sequência ligante (e. g., Gly-Cys-Gly) que não diminua significativamente as propriedades imunogénicas dos polipéptidos componentes.

Em geral, podem preparar-se antigénios de M. tuberculosis e sequências de ADN codificando esses antigénios utilizando qualquer um de uma variedade de métodos. Por exemplo, podem ser isolados antigénios solúveis do filtrado de cultura de M. tuberculosis por métodos conhecidos dos por aqueles com conhecimentos na técnica, incluindo cromatografia de permuta aniónica e de fase reversa. Os antigénios purificados são depois avaliados quanto à sua capacidade para induzir uma resposta imunológica apropriada (e. g., celular) utilizando, por exemplo, os métodos representativos aqui descritos. Os antigénios imunogénicos podem ser depois parcialmente sequenciados utilizando técnicas, tais como a quimica de Edman tradicional. Ver Edman e Berg, Eur. J. Biochem. 80: 116-132, 1967.

Os antigénios também podem ser produzidos de forma recombinante utilizando uma sequência de ADN que codifica o antigénio, que foi inserida num vector de expressão e expressa num hospedeiro apropriado. As moléculas de ADN codificando antigénios solúveis podem ser isoladas por rastreio de uma 15 biblioteca de expressão apropriada de M. tuberculosis com anti-soros (e. g. , de coelho) produzidos especificamente contra antigénios solúveis de M. tuberculosis. Podem identificar-se sequências de ADN codificadoras de antigénios que podem ou não ser solúveis, por rastreio de uma biblioteca de expressão genómica ou de ADNc de M. tuberculosis apropriada com soros obtidos de doentes infectados com M. tuberculosis. Esses rastreios podem geralmente ser efectuados utilizando técnicas bem conhecidas dos por aqueles com conhecimentos na técnica, tais como as descritas em Sambrook et al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NI, 1989.

Também podem obter-se sequências de ADN codificando antigénios solúveis por rastreio de uma biblioteca apropriada de ADNc ou ADN genómico de M. tuberculosis quanto a sequências de ADN que hibridam com oligonucleótidos degenerados derivados de sequências de aminoácidos parciais de antigénios solúveis isolados. As sequências oligonucleotídicas degeneradas para utilização nesse rastreio podem ser concebidas e sintetizadas, e o rastreio pode ser efectuado, como descrito (por exemplo) em Sambrook et ai., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NI, 1989 (e referências aí citadas). Também pode empregar-se a reacção em cadeia da polimerase (PCR), utilizando os oligonucleótidos acima em métodos bem conhecidos na técnica, para isolar uma sonda de ácido nucleico a partir de uma biblioteca de ADNc ou genómica. 0 rastreio da biblioteca pode então ser efectuado utilizando a sonda isolada.

Independentemente do método de preparação, os antigénios aqui descritos são "antigénicos". Mais especificamente, os antigénios têm a capacidade de reagir som soro de um indivíduo 16 infectado com M. tuberculosis. A reactividade pode ser avaliada utilizando, por exemplo, os ensaios ELISA representativos aqui descritos, onde uma leitura de absorvância de soro de indivíduos infectados que é pelo menos três desvios padrão acima da absorvância obtida com soro de indivíduos não infectados, é considerada positiva.

As porções imunogénicas dos antigénios podem ser preparadas e identificadas utilizando técnicas bem conhecidas, como as resumidas em Paul, Fundamental Immunology, 3a ed., Raven Press, 1993, pp. 243-247, e referências aí citadas. Essas técnicas incluem o rastreio de porções polipeptídicas do antigénio nativo quanto a propriedades imunogénicas. Os ELISA representativos aqui descritos podem ser geralmente empregues nestes rastreios. Uma porção imunogénica de um polipéptido é uma porção que, nesses ensaios representativos, gera um sinal nesses ensaios que é substancialmente semelhante ao gerado pelo antigénio de tamanho completo. Por outras palavras, uma porção antigénica de um antigénio de M. tuberculosis gera, pelo menos, cerca de 20% e, de um modo preferido, cerca de 100% do sinal induzido pelo antigénio de tamanho completo num modelo de ELISA como aqui descrito.

Podem gerar-se porções e outras variantes de antigénios de M. tuberculosis por meios sintéticos ou recombinantes. Podem gerar-se polipéptidos sintéticos com menos de cerca de 100 aminoácidos, e geralmente menos de cerca de 50 aminoácidos, utilizando técnicas bem conhecidas dos por aqueles com conhecimentos na técnica. Por exemplo, esses polipéptidos podem ser sintetizados utilizando qualquer das técnicas em fase sólida comercialmente disponíveis, como o método de síntese em fase sólida de Merrifield, em que são sequencialmente adicionados aminoácidos a uma cadeia de aminoácidos em crescimento. Ver 17

Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2146, 1963. 0 equipamento para a síntese automatizada de polipéptidos está disponível comercialmente por fornecedores como a Applied BioSystems, Inc., Foster City, CA, e pode ser operado de acordo com as instruções do fabricante. As variantes de um antigénio nativo podem ser geralmente preparadas utilizando técnicas de mutagénese convencionais, tais como mutagénese dirigida com oligonucleótidos. Também podem remover-se secções da sequência de ADN utilizando técnicas convencionais para permitir a preparação de polipéptidos truncados.

Os polipéptidos recombinantes contendo porções e/ou variantes de um antigénio nativo podem ser facilmente preparados a partir de uma sequência de ADN codificando o polipéptido, utilizando uma variedade de técnicas bem conhecidas dos por aqueles com conhecimentos na técnica. Por exemplo, os sobrenadantes de sistemas adequados de hospedeiro/vector que segregam proteína recombinante para o meio de cultura podem ser primeiramente concentrados utilizando um filtro disponível comercialmente. Após a concentração, o concentrado pode ser aplicado numa matriz de purificação adequada, tal como uma matriz de afinidade ou uma resina de permuta iónica. Por fim, podem empregar-se um ou mais passos de HPLC de fase reversa para purificar adicionalmente uma proteína recombinante.

Pode empregar-se qualquer um, de uma variedade de vectores de expressão conhecidos dos por aqueles com conhecimentos na técnica, para expressar polipéptidos recombinantes desta invenção. Pode obter-se expressão em qualquer célula hospedeira apropriada que tenha sido transformada ou transfectada com um vector de expressão contendo uma molécula de ADN que codifica um polipéptido recombinante. As células hospedeiras adequadas incluem células procarióticas, de levedura e eucarióticas 18 superiores. De um modo preferido, as células hospedeiras empregues são de E. coli, levedura ou uma linha de células de mamífero como COS ou CHO. As sequências de ADN expressas desta forma podem codificar antigénios de ocorrência natural, porções de antigénios de ocorrência natural ou outras variantes dos mesmos.

Em geral, independentemente do método de preparação, os polipéptidos aqui divulgados são preparados em forma substancialmente pura. De um modo preferido, os polipéptidos são, pelo menos, cerca de 80% puros, de um modo mais preferido, pelo menos, cerca de 90% puros e de um modo muito preferido, pelo menos, cerca de 99% puros. Contudo, para utilização nos métodos aqui descritos, esses polipéptidos substancialmente puros podem ser combinados. São aqui divulgados polipéptidos compreendendo, pelo menos, uma porção antigénica de um antigénio de M. tuberculosis solúvel (ou uma variante desse antigénio), em que o antigénio tem uma das seguintes sequências N terminais: (a) (b) (c) (d) (e) (f)

Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu (SEQ ID N° 115); Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser (SEQ ID N° 116);

Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg (SEQ ID N° 117);

Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro (SEQ ID N° 118);

Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val (SEQ ID N° 119);

Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro (SEQ ID N° 120); 19 (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser (SEQ ID N° 121); (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly (SEQ ID N° 122); (i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn (SEQ ID N° 123); (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser; (SEQ ID N° 129) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp; (SEQ ID N° 130) ou (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly; (SEQ ID N° 131) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido, de um modo preferido, um resíduo de cisteína. Uma sequência de ADN codificando o antigénio identificado como (g) acima é proporcionada na SEQ ID N° 52, a sua sequência deduzida de aminoácidos é proporcionada na SEQ ID N° 53. Uma sequência de ADN codificando o antigénio identificado como (a) acima é proporcionada na SEQ ID N° 96; a sua sequência deduzida de aminoácidos é proporcionada na SEQ ID N° 97. Uma sequência de ADN correspondendo ao antigénio (d)

acima é proporcionada na SEQ ID N° 24, uma sequência de ADN correspondendo ao antigénio (c) é proporcionada na SEQ ID N° 25 e uma sequência de ADN correspondendo ao antigénio (1) é divulgada na SEQ ID N° 94 e a sua sequência deduzida de aminoácidos é proporcionada na SEQ ID N° 95. São também aqui divulgados polipéptidos compreendendo pelo menos uma porção imunogénica de um antigénio de M. tuberculosis tendo uma das seguintes sequências de terminal N ou uma sua variante que difere apenas em substituições e/ou modificações conservadoras: 20 m)

Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID N° 132) ou (n) Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-

Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe; (SEQ ID N° 124) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido, de um modo preferido um resíduo de cisteína.

Também são aqui divulgados polipéptidos compreendendo pelo menos uma porção antigénica de um antigénio de M. tuberculosis solúvel (ou uma variante desse antigénio) que compreende um ou mais das sequências de aminoácido codificadas por (a) as sequências de ADN das SEQ ID N° 1, 2, 4-10, 13-25, 52, 94 e 96, (b) os complementos dessas sequências de ADN, ou (c) sequências de ADN substancialmente homólogas a uma sequência em (a) ou (b).

Também são aqui divulgados polipéptidos compreendendo pelo menos uma porção antigénica de um antigénio de M. tuberculosis (ou uma variante desse antigénio), o qual pode ser ou não solúvel que compreende uma ou mais das sequências de aminoácido codificadas por (a) as sequências de ADN das SEQ ID N° 26-51, (b) os complementos dessas sequências de ADN ou (c) sequências de ADN substancialmente homólogas a uma sequência em (a) ou (b).

Os antigénios de M. tuberculosis incluem variantes que são codificadas por sequências de ADN que são substancialmente homólogas a uma ou mais das sequências de ADN especif icamente apresentadas aqui. "Homologia substancial", como é aqui utilizado, refere-se a sequências de ADN que são capazes de 21 hibridar em condições moderadamente restringentes. As condições moderadamente restringentes adequadas incluem pré-lavagem numa solução de 5X SSC, 0,5% de SDS, 1,0 mM de EDTA (pH 8,0); hibridação a 50 °C-65 °C, 5X SSC, de um dia para o outro ou, no caso de homologia de espécies cruzadas, a 45 °C, 0,5X SSC; seguida de lavagem duas vezes, a 65 °C durante 20 minutos, com cada um de 2X, 0,5X e 0,2X SSC contendo 0,1% de SDS).

Também são aqui divulgadas proteínas de fusão compreendendo um primeiro e um segundo polipéptido como aqui divulgados ou, alternativamente, um polipéptido como aqui divulgado e um antigénio conhecido de M. tuberculosis, tal como o antigénio de 38 kD descrito acima ou ESAT-6 (SEQ ID N° 98 e 99), juntamente com variantes dessas proteínas de fusão. As proteínas de fusão também podem incluir um péptido ligante entre o primeiro e o segundo polipéptidos.

Constrói-se uma sequência de ADN codificando uma proteína de fusão da presente invenção utilizando técnicas de ADN recombinante conhecidas, para reunir sequências separadas de ADN, codificando o primeiro e segundo polipéptidos, num vector de expressão apropriado. A extremidade 3' de uma sequência de ADN codificando o primeiro polipéptido é ligada, com ou sem um ligante peptídico, à extremidade 5' de uma sequência de ADN codificando o segundo polipéptido de modo que as grelhas de leitura das sequências estejam em fase, para permitir a tradução do ARNm das duas sequências de ADN numa única proteína de fusão que retém a actividade biológica do primeiro e do segundo polipéptidos.

Noutro aspecto, são proporcionados métodos para detectar infecção por M. tuberculosis numa amostra biológica. 22

Em formas de realização nas quais são empregues múltiplos polipéptidos, podem ser incluídos polipéptidos que não os especificamente descritos aqui, tal como o antigénio de 38 kD descrito em Andersen e Hansen, Infect. Immun. 57:2481-2488, 1989. Como aqui utilizado, uma "amostra biológica" é qualquer amostra contendo anticorpo obtida de um doente. De um modo preferido, a amostra é sangue total, cuspo, soro, plasma, saliva, líquido cefalorraquidiano ou urina. De um modo mais preferido, a amostra é uma amostra de sangue, soro ou plasma obtida de um doente ou banco de sangue. 0 ou os polipéptidos são utilizados num ensaio como descrito abaixo para determinar a presença ou ausência de anticorpos contra o ou os polipéptidos na amostra, relativamente a um valor de base predeterminado. A presença de tais anticorpos indica sensibilização prévia a antigénios microbacterianos que pode ser indicativo de tuberculose.

Em formas de realização, nas quais é empregue mais do que um polipéptido, os polipéptidos utilizados são, de um modo preferido, complementares (i. e., um polipéptido componente tenderá a detectar infecção nas amostras em que a infecção não seja detectada por outro polipéptido componente). Os polipéptidos complementares podem, geralmente, ser identificados pela utilização de cada polipéptido individualmente, para avaliar as amostras de soro obtidas de uma série de doentes conhecidos como estando infectados por M. tuberculosis. Após determinar quais as amostras que são positivas ao teste (como descrito abaixo) com cada polipéptido, podem ser formuladas combinações de dois ou mais polipéptidos que sejam capazes de detectar a infecção na maioria, ou em todas, as amostras analisadas. Tais polipéptidos são complementares. Por exemplo, aproximadamente 25-30% de soro de indivíduos infectados com tuberculose são negativos quanto aos anticorpos para qualquer 23 proteína isolada, tal como o antigénio de 38 kD mencionado acima. Os polipéptidos complementares podem assim ser utilizados em combinação com o antigénio de 38 kD para melhorar a sensibilidade de um teste de diagnóstico.

Existe uma variedade de modos de ensaio conhecidos por aqueles com conhecimentos na técnica para a utilização de um ou mais polipéptidos para detectar anticorpos numa amostra. Ver, e. g. , Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Numa forma de realização preferida, o ensaio envolve a utilização de um polipéptido imobilizado num suporte sólido para ligar e remover o anticorpo da amostra. 0 anticorpo ligado pode então ser detectado utilizando um reagente de detecção que contenha um grupo repórter. Os reagentes de detecção adequados incluem anticorpos que se ligam ao complexo anticorpo/polipéptido e a polipéptido livre marcado com um grupo repórter (e. g. , num ensaio semi-competitivo) . Alternativamente, pode ser utilizado um ensaio competitivo no qual um anticorpo que se liga ao polipéptido é marcado com um grupo repórter e deixado ligar-se ao antigénio imobilizado após incubação do antigénio com a amostra. A extensão em que os componentes da amostra inibem a ligação do anticorpo marcado ao polipéptido é indicativa da reactividade da amostra com o polipéptido imobilizado. 0 suporte sólido pode ser qualquer material sólido, conhecido por aqueles com conhecimentos na técnica, ao qual o antigénio possa ser ligado. Por exemplo, o suporte sólido pode ser um poço de testes numa placa de microtitulação ou uma membrana de nitrocelulose ou outra adequada. Alternativamente, o suporte por ser uma placa ou disco, tais como vidro, fibra de vidro, látex ou um material plástico, tais como poliestireno ou cloreto de polivinilo. 0 suporte pode também ser uma partícula 24 magnética ou um sensor de fibra óptica, tal como os apresentados, por exemplo, na Patente U.S. N° 5359681.

Os polipéptidos podem ser ligados ao suporte sólido utilizando uma variedade de técnicas conhecidas por aqueles com conhecimentos na técnica, as quais são amplamente descritas na literatura de patentes e cientifica. No contexto da presente invenção, o termo "ligado" refere-se à associação não covalente, tal como adsorção e à ligação covalente (que pode ser uma ligação directa entre o antigénio e os grupos funcionais no suporte, ou pode ser uma ligação por meio de um agente de reticulação. É preferida a ligação por adsorção a um poço numa placa de microtitulação ou a uma membrana. Nesses casos a adsorção pode ser conseguida mediante o contacto do polipéptido, num tampão adequado, com o suporte sólido, durante um periodo de tempo adequado. 0 tempo de contacto varia com a temperatura, mas é tipicamente entre cerca de 1 hora e 1 dia. Em geral o contacto de um poço de uma placa de microtitulação de plástico (tais como poliestireno ou cloreto de vinilo) com uma quantidade de polipéptido que varia desde cerca de 10 ng a cerca de 1 pg e, de um modo preferido, cerca de 100 ng, é suficiente para ligar uma quantidade adequada de antigénio.

As ligações covalentes de polipéptido a um suporte sólido podem geralmente ser conseguidas em primeiro lugar fazendo reagir o suporte com um reagente bifuncional que irá reagir com o suporte e com um grupo funcional, tal como um grupo hidroxilo ou amino no polipéptido. Por exemplo, o polipéptido pode ser ligado a suportes que tenham um revestimento polimérico apropriado, utilizando-se benzoquinona, ou por condensação de um grupo aldeido no suporte com uma amina e um hidrogénio activo no polipéptido (ver, e. g., Pierce Immunotechnology Catalog and Handbook, 1991, em A12-A13). 25

Em determinadas formas de realização, o ensaio é um ensaio imunoadsorvente ligado a enzima (ELISA). Este ensaio pode ser realizado, em primeiro lugar, contactando um antigénio de polipéptido que tenha sido imobilizado num suporte sólido, comumente o poço de uma placa de microtitulação, com a amostra, de modo a que permita que os anticorpos contra o polipéptido na amostra se liguem ao polipéptido imobilizado. A amostra não ligada é então removida do polipéptido imobilizado e é adicionado um reagente de detecção capaz de se ligar ao complexo imobilizado de anticorpo-polipéptido. A quantidade de reagente de detecção que permanece ligado ao suporte sólido é então determinada utilizando um processo apropriado para o reagente de detecção especifico.

Mais especificamente, uma vez que o polipéptido é imobilizado no suporte como descrito acima, os restantes sítios de ligação das proteínas no suporte são tipicamente bloqueados. Pode ser empregue qualquer agente de bloqueio adequado conhecido por aqueles com conhecimentos na técnica, tais como albumina de soro bovino ou Tween 20® (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO). O polipéptido imobilizado é então incubado com a amostra e o anticorpo é deixado ligar-se ao antigénio. A amostra pode ser diluída antes da incubação com um diluente adequado, tal como solução salina tamponada com fosfatos (PBS). Em geral, um tempo de contacto apropriado (i. e., tempo de incubação) é aquele período de tempo que é suficiente para detectar a presença de anticorpo numa amostra infectada com M. tuberculosis. De um modo preferido, o tempo de contacto é suficiente para conseguir um nível de ligação que seja pelo menos 95% do obtido em equilíbrio entre o anticorpo ligado e o não ligado. Os por aqueles com conhecimentos na técnica reconhecerão que o tempo necessário para se obter o equilíbrio pode ser facilmente determinado por 26 ensaio do nível de ligação que ocorre durante um período de tempo. À temperatura ambiente, um tempo de incubação de cerca de 30 minutos é em geral suficiente.

As amostras não ligadas podem então ser removidas por lavagem do suporte sólido com um tampão apropriado, tal como PBS contendo 0,1% de Tween 20®. 0 reagente de detecção pode, então, ser adicionado ao suporte sólido. Um reagente de detecção apropriado é qualquer composto que se liga ao complexo imobilizado de anticorpo-polipéptido e que possa ser detectado por qualquer de uma variedade de meios conhecidos por aqueles com conhecimentos na técnica. De um modo preferido, o reagente de detecção contém um agente de ligação (tais como, por exemplo, Proteína A, Proteína G, imunoglobulina, lectina ou antigénio livre) conjugado com um grupo repórter. Os grupos repórter preferidos incluem enzimas (tal como a peroxidase de rábano), substratos, co-factores, inibidores, corantes, radionuclidos, grupos luminescentes, grupos fluorescentes e biotina. A conjugação do agente de ligação ao grupo repórter pode ser conseguida utilizando-se processos padrão conhecidos por aqueles com conhecimentos na técnica. Os agentes de ligação comuns, também podem ser adquiridos comjugados com uma variedade de grupos repórter, de muitas fontes comerciais (e. g., Zymed Laboratories, San Francisco, CA, e Pierce, Rockford, IL). O reagente de detecção é então incubado com o complexo imobilizado de anticorpo-polipéptido, durante uma quantidade de tempo suficiente para detectar o anticorpo ligado. Uma quantidade de tempo apropriada pode ser geralmente determinada a partir das instruções do fabricante ou por ensaio do nível de ligação que ocorre durante um período de tempo. O reagente de detecção não ligado é, então, removido e o reagente de detecção ligado é detectado utilizando o grupo repórter. O processo 27 empregue para detectar o grupo repórter depende da natureza do grupo repórter. Para os grupos radioactivos, os processos de contagem de cintilação ou auto-radiográficos, são geralmente apropriados. Os métodos espectroscópicos podem ser utilizados para detectar corantes, grupos luminescentes e grupos fluorescentes. A biotina pode ser detectada utilizando-se avidina ligada a um grupo repórter diferente (comumente um grupo radioactivo ou fluorescente, ou uma enzima). Os grupos repórteres enzimáticos podem, em geral, ser detectados pela adição de substracto (geralmente por um período específico de tempo), seguido por análise espectroscópica ou outras, dos produtos de reacção.

Para determinar a presença ou ausência de anticorpos anti-M. tuberculosis na amostra, o sinal detectado do grupo repórter que permanece ligado ao suporte sólido é em geral comparado a um sinal que corresponde um valor de base predeterminado. Numa forma de realização preferida, o valor de base é o sinal médio obtido quando o antigénio imobilizado é incubado com amostras de um doente não infectado. Em geral, uma amostra que gere um sinal que esteja três desvios padrão acima do valor de base predeterminado, é considerado positivo para a tuberculose. Numa forma de realização alternativa preferida, o valor de base é determinado utilizando-se uma Curva de Funcionamento de Receptor, de acordo com o processo de Sackett et al.r Clinicai Epidemiology: A Basic Science for Clinicai Medicine, Little Brown and Co., 1985, pp. 106-107.

Resumidamente, nesta forma de realização, o valor de base pode ser determinado a partir de um gráfico de pares de razões positivas verdadeiras (i. e., sensibilidade) e razões positivas falsas (100% de especificidade) que corresponde a cada valor de base possível para o resultado do teste de diagnóstico. 0 valor de base sobre o gráfico que é o mais próximo do canto esquerdo 28 superior (i. e., o valor que inclui a maior área) é o valor de base mais preciso, e uma amostra que gere um sinal que seja maior do que o valor de base determinado por este processo, pode ser determinado por este processo, pode ser considerado positivo. Alternativamente, o valor de base pode ser deslocado para a esquerda ao longo do gráfico, para minimizar a razão do falso positivo, ou para a direita, para minimizar o índice negativo falso. Em geral, uma amostra que gere um sinal que seja mais elevado do que o valor de base determinado por este processo, é considerada positiva para a tuberculose.

Numa forma de realização relacionada, o ensaio é realizado num formato de teste de circulação, rápida ou de tira, em que o antigénio é imobilizado sobre uma membrana, tal como a nitrocelulose. No teste de circulação, os anticorpos na amostra ligam-se ao polipéptido imobilizado, à medida que a amostra passa através da membrana. Um reagente de detecção (e. g., proteína A coloidal-ouro liga-se então ao complexo de anticorpo-polipéptido, à medida que a solução contendo o reagente de detecção flui através da membrana. A detecção do reagente de detecção ligado pode, então, ser realizada como descrito acima. No formato de teste de tiras, uma extremidade da membrana a que o polipéptido está ligado, é imersa numa solução contendo a amostra. A amostra migra ao longo da membrana através de uma região contendo o reagente de detecção e para a área do polipéptido imobilizado. A concentração de reagente de detecção no polipéptido indica a presença na amostra de anticorpos anti-M. tuberculosis. Tipicamente, a concentração de reagente de detecção naquele sitio gera um padrão, tal como uma linha que pode ser visualmente lido. A ausência de um tal padrão indica um resultado negativo. Em geral, a quantidade de polipéptido imobilizado na membrana é seleccionada para gerar um padrão visualmente discernível quando a amostra biológica contém um 29 nível de anticorpos que deve ser suficiente para gerar um sinal positivo num ELISA, como discutido acima. De um modo preferido, a quantidade de polipéptido imobilizado na membrana varia desde cerca de 25 g a cerca de 1 ug e de um modo mais preferido desde cerca de 50 ng a cerca de 50 ng a cerca de 500 ng. Tais testes podem tipicamente ser realizados como uma quantidade muito pequena (e. g., uma gota) de soro ou sangue do doente.

Claro que existem muitos outros protocolos de ensaio, os quais são adequados para utilização com os polipéptidos da presente invenção. As descrições acima pretendem apenas servir de exemplo.

Os seguintes Exemplos são proporcionados a título de ilustração e não a título de limitação. EXEMPLOS EXEMPLO 1

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE POLIPÉPTIDOS DO FILTRADO DE CULTURA DE M. TUBERCULOSIS

Este exemplo ilustra a preparação de polipéptidos solúveis de M. tuberculosis do filtrado de cultura. Salvo especificação em contrário, todas as percentagens no exemplo seguinte são em peso por volume.

Cultivou-se M. tuberculosis (H37Ra, ATCC N° 25177 ou H37Rv, ATCC N° 25618) em meio GAS esterilizado a 37 °C durante catorze dias. O meio foi depois filtrado em vácuo (ficando a maioria das células), através de um filtro de 0,45 μ, para uma garrafa 30 esterilizada de 2,5 L. 0 meio foi depois filtrado, através de um filtro de 0,2 u, para uma garrafa esterilizada de 4 L, tendo-se adicionado NaN3 ao filtrado da cultura até uma concentração de 0,04%. As garrafas foram seguidamente colocadas numa sala arrefecida a 4 °C.

Concentrou-se o filtrado da cultura, colocando o filtrado num reservatório de 12 L que tinha sido submetido a autoclavagem e enchendo com o filtrado uma célula de agitação Amicon de 40 0 mL que tinha sido lavada com etanol e continha uma membrana de MWCO de 10000 kDa. Manteve-se a pressão a 60 psi utilizando azoto gasoso. Este método reduziu o volume de 12 L para aproximadamente 50 mL. O filtrado da cultura foi dialisado em 0,1% de bicarbonato de amónio utilizando uma membrana de éster de celulose de MWCO de 8000 kDa, com duas mudas da solução de bicarbonato de amónio. A concentração da proteína foi depois determinada com um ensaio de BCA disponível comercialmente (Pierce, Rockford, IL). O filtrado da cultura dialisado foi seguidamente liofilizado e os polipéptidos foram ressuspensos em água destilada. Os polipéptidos foram dialisados contra 0,01 mM de 1,3-bis[tris(hidroximetil)-metilamino]propano, pH 7,5 (tampão de Bis-Tris propano), as condições iniciais para cromatografia de permuta aniónica. Procedeu-se ao fraccionamento utilizando cromatografia de perfusão em gel numa coluna de permuta aniónica POROS 146 II Q/M de 4,6 mm χ 100 mm (Perseptive BioSystems, Framingham, MA) equilibrada em tampão de Bis-Tris propano a 0,01 mM pH 7,5. Os polipéptidos foram eluídos com um gradiente linear de NaCl 0-0,5 M no sistema de tampão acima. Monitorizou-se o eluente da coluna a um comprimento de onda de 220 nm. 31

Os agrupamentos de polipéptidos que eluíram da coluna de permuta iónica foram dialisados contra água destilada e liofilizados. Dissolveu-se o material resultante em 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA), pH 1,9, em água, e purificaram-se os polipéptidos numa coluna C18 Delta-Pak (Waters, Milford, MA) de dimensão dos poros de 300 Angstrom, dimensão das partículas de 5 micrones (3,9 χ 150 mm). Os polipéptidos foram eluidos da coluna com um gradiente linear de 0-60% de tampão de diluição (0,1% de TFA em acetonitrilo) . O caudal foi 0,75 mL/minuto e o eluente de HPLC foi monitorizado a 214 nm. Recolheram-se as fracções contendo os polipéptidos eluidos para maximizar a pureza das amostras individuais. Obtiveram-se aproximadamente 200 polipéptidos purificados.

Os polipéptidos purificados foram depois rastreados quanto à capacidade para induzir proliferação de células T em preparações de PBMC. As PBMCs de dadores que se sabe serem positivos no teste cutâneo de PPD e daqueles cujas células T se verificou proliferarem em resposta a PPD e proteínas solúveis em bruto de MTB foram cultivadas em meio compreendendo RPMI 1640 suplementado com 10% de soro humano reunido e 50 pg/mL de gentamicina. Os polipéptidos purificados foram adicionados em duplicado às concentrações de 0,5 até 10 pg/mL. Após seis dias de cultura em placas de fundo redondo de 96 poços num volume de 200 uL, removeram-se de cada poço 50 uL de meio para determinar os níveis de IFN-γ, como descrito abaixo. As placas foram depois submetidas a impulsos de 1 pCi/poço de timidina tritiada durante mais 18 horas e foram recolhidas, tendo-se determinado a captação de tritio utilizando um contador de cintilações gasosas. Consideraram-se positivas as fracções que resultaram em proliferação, nas duas repetições, três vezes maior do que a proliferação observada em células cultivadas apenas em meio. 32

Mediu-se ο IFN-γ utilizando um imunoensaio de absorção ligado à enzima (ELISA). As placas de ELISA foram revestidas com um anticorpo monoclonal de murganho dirigido para o IFN-γ humano (PharMingen, San Diego, CA) em PBS durante quatro horas à temperatura ambiente. Os poços foram depois bloqueados com PBS contendo 5% de leite em pó magro (P/V) durante 1 hora à temperatura ambiente. As placas foram depois lavadas seis vezes em PBS/0,2% de TWEEN-20, e as amostras diluídas 1:2 em meio de cultura nas placas de ELISA foram incubadas de um dia para o outro à temperatura ambiente. Lavaram-se novamente as placas e adicionou-se a cada poço um soro policlonal de coelho anti-IFN-γ humano diluído 1:3000 em PBS/10% de soro normal de cabra. As placas foram então incubadas durante duas horas à temperatura ambiente, foram lavadas e adicionou-se IgG anti-coelho acoplado a peroxidase de rábano (Sigma Chemical Co. , St. Louis, MO) numa diluição 1:2000 em PBS/5% de leite em pó magro. Após mais duas horas de incubação à temperatura ambiente, lavaram-se as placas e adicionou-se substrato de TMB. A reacção foi terminada passados 20 minutos com ácido sulfúrico a 1 N. Determinou-se a densidade óptica a 450 nm utilizando 570 nm como comprimento de onda de referência. Consideraram-se positivas as fracções cujas duas repetições originaram uma OD duas vezes maior do que a OD média de células cultivadas apenas em meio, mais 3 desvios-padrão .

Para a sequenciação, os polipéptidos foram individualmente secos em filtros de fibra de vidro tratados com Biobrene™ (Perkin Elmer/Applied BioSystems Division, Foster City, CA) . Os filtros com polipéptido foram aplicados num sequenciador de proteínas Procise 492 da Perkin Elmer/Applied BioSystems Division. Os polipéptidos foram sequenciados a partir do terminal amino e utilizando química de Edman tradicional. Determinou-se a sequência de aminoácidos para cada polipéptido 33 comparando o tempo de permanência do derivado de aminoácidos PTH com os padrões apropriados de derivado PTH.

Utilizando o método descrito acima isolaram-se antigénios com as seguintes sequências N-terminais: (a) Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu (SEQ ID N° 54); (b) Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser (SEQ ID N° 55); (c) Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg (SEQ ID N° 56); (d) Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro (SEQ ID N° 57); (e) Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val (SEQ ID N° 58); (f) Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro (SEQ ID N° 59); (g) Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Pro-Ala (SEQ ID N° 60); e (h) Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly (SEQ ID N° 61); em que Xaa pode ser qualquer aminoácido.

Além do processo descrito anteriormente, foi isolado um antigénio adicional empregando um passo de purificação por HPLC em microboro. Especificamente, 20 pL de uma fracção compreendendo uma mistura de antigénios do passo de purificação cromatográfica descrita anteriormente foram purificados numa coluna Aquapore C18 (Perkin Elmer/Applied Biosystems Division. Foster City, CA) com um tamanho de poro de 7 micron, tamanho de coluna de 1 mm x 100 mm, num HPLC Modelo 172 da Perkin 34

Elmer/Applied Biosystems Division. As fracções foram eluídas da coluna com um gradiente linear de 1%/minuto de acetonitrilo (contendo TFA a 0,05%) em água (TFA a 0,05%) a um caudal de 80 μύ/ιηίηη^. O eluente foi monitorizado a 250 nm. A fracção original foi separada em 4 picos principais, bem como outros componentes mais pequenos e foi obtido um polipéptido que se demonstrou ter um peso molecular de 12,054 Kd (por espectrometria de massa) e ter a seguinte sequência N-terminal: (i) Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Asn-Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-Val-Ser-Phe-Ala-Asp (SEQ ID N° 62).

Demonstrou-se que este polipéptido induz a proliferação e a produção de IFN-γ em preparações de PBMC utilizando os ensaios descritos acima.

Isolaram-se, do modo seguinte, antigénios solúveis adicionais do filtrado de cultura de M. tuberculosis. Preparou-se o filtrado da cultura de M. tuberculosis como descrito acima. Após diálise contra tampão de Bis-Tris propano, a pH 5,5, procedeu-se ao fraccionamento utilizando cromatografia de permuta aniónica numa coluna Poros QE de 4,6 x 100 mm (Perseptive Biosystems) equilibrada em tampão de Bis-Tris propano pH 5,5. Os polipéptidos foram eluidos com um gradiente linear de NaCl 0-1,5 M no sistema de tampão acima, a um caudal de 10 mL/minuto. Monitorizou-se o eluente da coluna a um comprimento de onda de 214 nm.

As fracções que eluiram da coluna de permuta iónica foram reunidas e submetidas a cromatografia de fase reversa utilizando uma coluna Poros R2 de 4,6 χ 100 mm (Perseptive Biosystems). Os polipéptidos foram eluidos da coluna com um gradiente linear de 35 acetonitrilo de 0-100% (0,1% de TFA) a um caudal de 5 mL/minuto. Monitorizou-se o eluente a 214 nm.

As fracções contendo os polipéptidos eluidos foram liof ilizadas, ressuspensas em 80 uL de 0,1% de TFA aquoso e adicionalmente submetidas a cromatografia de fase reversa numa coluna Vydac C4 de 4,6 χ 150 mm (Western Analytical, Temecula, CA), com um gradiente linear de acetonitrilo de 0-100% (0,1% de TFA), a um caudal de 2 mL/minuto. Monitorizou-se o eluente a 214 nm. A fracção com actividade biológica foi separada num pico principal mais outros componentes menores. A transferência de Western deste pico numa membrana de PVDF revelou três bandas principais de pesos moleculares de 14 kD, 20 kD e 26 kD. Determinou-se que estes polipéptidos têm as seguintes sequências N-terminais, respectivamente: (j) Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser; (SEQ ID N° 134) (k) Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp; (SEQ ID N° 135) e (l) Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly; (SEQ ID N° 136) em que Xaa pode ser qualquer aminoácido.

Utilizando os ensaios descritos acima, foi mostrado que estes polipéptidos induzem proliferação e produção de IFN-γ em preparações de PBMC. As Figs. IA e B mostram os resultados desses ensaios utilizando preparações de PBMC de um primeiro e de um segundo dador, respectivamente.

Obtiveram-se as sequências de ADN codificando os antigénios 36 designados (a), (c) e (g) acima por rastreio de uma biblioteca genómica de M. tuberculosis utilizando oligonucleótidos degenerados marcados na extremidade com 32P correspondentes à sequência N-terminal e contendo codões preferenciais de M. tuberculosis. 0 rastreio efectuado utilizando uma sonda correspondente ao antigénio (a) acima, identificou um clone com a sequência proporcionada na SEQ ID N° 101. O polipéptido codificado pela SEQ ID N° 101 é proporcionado na SEQ ID N° 102. O rastreio efectuado utilizando uma sonda correspondente ao antigénio (g) acima, identificou um clone com a sequência proporcionada na SEQ ID N° 52. O polipéptido codificado pela SEQ ID N° 52 é proporcionado na SEQ ID N° 53. O rastreio efectuado com uma sonda correspondente ao antigénio (c), identificou um clone com a sequência proporcionada na SEQ ID N° 25.

Compararam-se as sequências de aminoácidos acima com sequências de aminoácidos conhecidas do banco de genes utilizando o sistema DNA STAR. A base de dados pesquisada contém cerca de 173000 proteínas e é uma combinação das bases de dados Swiss e PIR conjuntamente com sequências de proteínas traduzidas (Versão 87) . Não se detectaram homologias significativas de sequências de aminoácidos para os antigénios (a)-(g) e (1).

Verificou-se que a sequência de aminoácidos para o antigénio (i) era homóloga a uma sequência do M. leprae. A sequência de comprimento total de M. leprae foi amplificada a partir de ADN genómico utilizando a sequência obtida a partir do GENBANK. Esta sequência foi depois utilizada para rastrear a biblioteca de M. tuberculosis e foi obtida uma cópia de comprimento total do homólogo de M. tuberculosis (SEQ ID N° 94).

Verificou-se que a sequência de aminoácidos para o antigénio (j) é homóloga a uma proteína conhecida de M. tuberculosis 37 traduzida de uma sequência de ADN. Tanto quanto é do conhecimento dos requerentes, não foi previamente mostrado que esta proteina possui actividade estimuladora de células T. Verificou-se que a sequência de aminoácidos para o antigénio (k) está relacionada com uma sequência de M. leprae.

Nos ensaios de proliferação e IFN-γ descritos acima, utilizando três dadores positivos para PPD, os resultados para antigénios representativos, proporcionados acima, são apresentados na Tabela 1: TABELA 1 RESULTADOS DOS ENSAIOS DE PROLIFERAÇÃO DE PBMC E IFN-γ

Sequência Proliferação IFN-γ (a) + - (c) + + + + + + (d) + + + + (g) +++ ++ + (h) +++ +++

Na Tabela 1, as respostas que originaram um indice de estimulação (SI) entre 2 e 4 (em comparação com células cultivadas apenas em meio) receberam a pontuação +, um SI de 4-8 ou 2-4 a uma concentração de 1 pg ou inferior, recebeu a pontuação ++ e um SI superior a 8 recebeu a pontuação +++. Verificou-se que o antigénio da sequência (i) teve um SI elevado (+++) para um dador e SI mais baixo (++ e +) para os outros dois 38 dadores em ambos os ensaios de proliferação e IFN-γ. Estes resultados indicam que estes antigénios são capazes de induzir proliferação e/ou produção de interferão-γ. EXEMPLO 2

UTILIZAÇÃO DE SOROS DE DOENTES PARA ISOLAR ANTIGÉNIOS DE M. TUBERCULOSIS

Este exemplo ilustra o isolamento de antigénios de lisado de M. tuberculosis por rastreio com soro de indivíduos infectados com M. tuberculosis.

Adicionou-se H37Ra de M. tuberculosis desidratado (Difco Laboratories) a uma solução de 2% de NP40, tendo sido alternadamente homogeneizada e sonicada três vezes. Centrifugou-se a suspensão resultante a 13000 rpm em tubos de microcentrifugação e fez-se passar o sobrenadante por um filtro de seringa de 0,2 mícron. Ligou-se o filtrado a esférulas de DEAE Macro Prep (BioRad, Hercules, CA). As esférulas foram extensamente lavadas com 20 mM de Tris pH 7,5 e as proteínas ligadas eluíram com 1 M de NaCl. 0 eluato de 1 M de NaCl foi dialisado de um dia para o outro contra 10 mM de Tris, pH 7,5. Tratou-se a solução dialisada com DNase e RNase a 0,05 mg/mL durante 30 minutos à temperatura ambiente e depois com a-D-manosidase, 0,5 U/mg a pH 4,5 durante 3-4 horas à temperatura ambiente. Depois de regressar a pH 7,5, o material foi fraccionado através de FPLC numa coluna Bio Scale-Q-20 (BioRad). As fracções foram combinadas em nove agrupamentos, foram concentradas num Centriprep 10 (Amicon, Beverley, MA) e depois rastreadas, por transferência de Western, quanto à actividade sorológica utilizando um agrupamento de soros de 39 doentes infectados com M. tuberculosis que não era imunologicamente reactivo com outros antigénios da presente invenção. A fracção mais reactiva foi processada em SDS-PAGE e transferida para PVDF. Cortou-se uma banda aproximadamente a 85 kD que originou a sequência: (m) Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-

Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val; (SEQ ID N° 132), em que Xaa pode ser qualquer aminoácido. A comparação desta sequência com as do banco de genes descrito acima não revelou homologias significativas com sequências conhecidas. EXEMPLO 3

PREPARAÇÃO DE SEQUÊNCIAS DE ADN CODIFICANDO ANTIGÉNIOS

DE M. TUBERCULOSIS

Este exemplo ilustra a preparação de sequências de ADN codificando antigénios de M. tuberculosis por rastreio de uma biblioteca de expressão de M. tuberculosis com soros obtidos de doentes infectados com M. tuberculosis ou com anti-soros produzidos contra antigénios solúveis de M. tuberculosis.

A. PREPARAÇÃO DE ANTIGÉNIOS SOLÚVEIS DE M. TUBERCULOSIS UTILIZANDO ANTI-SOROS DE COELHO

Isolou-se ADN genómico da estirpe H37Ra de M. tuberculosis. 40 0 ADN foi cisalhado aleatoriamente e utilizado para construir uma biblioteca de expressão utilizando o sistema de expressão Lambda ZAP (Stratagene, La Jolla, CA). Geraram-se anti-soros de coelho contra proteínas secretoras das estirpes de M. tuberculosis H37Ra, H37Rv e Erdman por imunização de um coelho com sobrenadante concentrado das culturas de M. tuberculosis. Especificamente, o coelho foi primeiramente imunizado subcutaneamente com 200 pg de antigénio proteico num volume total de 2 mL contendo 10 pg de dipéptido muramilo (Calbiochem, La Jolla, CA) e 1 mL de adjuvante de Freund incompleto. Quatro semanas depois, o coelho recebeu uma administração subcutânea de reforço de 100 pg de antigénio em adjuvante de Freund incompleto. Por fim, o coelho foi imunizado intravenosamente quatro semanas mais tarde com 50 pg de antigénio proteico. Utilizaram-se os anti-soros para rastrear a biblioteca de expressão como descrito em Sambrook et ai., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Purificaram-se as placas bacteriofágicas que expressaram antigénios imunologicamente reactivos. Recolheu-se o fagemideo das placas e deduziram-se as sequências de nucleótidos dos clones de M. tuberculosis.

Purificaram-se trinta e dois clones. Destes, 25 representam sequências que não foram previamente identificadas em M. tuberculosis. As proteínas foram induzidas com IPTG e purificadas por eluição em gel, como descrito em Skeiky et al. , J. Exp. Med. 181: 1527-1537, 1995. As sequências parciais representativas de moléculas de ADN identificadas neste rastreio são proporcionadas nas SEQ ID N° 1-25. As correspondentes sequências de aminoácidos previstas são mostradas nas SEQ ID N° 64-88. 41

Por comparação destas sequências com sequências conhecidas do banco de genes utilizando as bases de dados descritas acima, verificou-se que os clones aqui referidos daqui em diante como TbRA2A, TbRAl 6, TbRAl 8 e TbRA2 9 (SEQ ID N° 77, 69, 71, 76) mostram alguma homologia com sequências previamente identificadas em Mycobacterium leprae, mas não em M. tuberculosis. TbRA 11, TbRA26, TbRA2 8 e TbDPEP (SEQ ID N° 66, 74, 75, 53) foram previamente identificados em M. tuberculosis. Não se encontraram homologias significativas para TbRAl, TbRA3, TbRA4, TbRA9, TbRAl0, TbRAl3, TbRAl7, TbRal9, TbRA29, TbRA3 2, TbRA36 e os clones com sobreposição TbRA35 e TbRA12 (SEQ ID N° 64, 78, 82, 83, 65, 68, 76, 72, 76, 79, 81, 80, 67, respectivamente). 0 clone TbRa24 tem sobreposição com o clone

TbRa29.

B. UTILIZAÇÃO DE SOROS DE DOENTES PARA IDENTIFICAR SEQUÊNCIAS DE ADN CODIFICANDO ANTIGÉNIOS DE M. TUBERCULOSIS A biblioteca de ADN genómico descrita acima e uma biblioteca adicional de H37Rv foram rastreadas utilizando agrupamentos de soros obtidos de doentes com tuberculose activa. Para preparar a biblioteca de H37Rv, foi isolado ADN genómico da estirpe H37Rv de M. tuberculosis, submetido a digestão parcial com Sau3A e utilizado para construir uma biblioteca de expressão utilizando o sistema de expressão Lambda Zap (Stratagene, La Jolla, Ca). No rastreio de expressão utilizaram-se três agrupamentos diferentes de soros, cada uma contendo soros obtidos de três indivíduos com doença pulmonar ou pleural activa. Os agrupamentos foram designados TbL, TbM e TbH, com referência à reactividade relativa com o lisado de H37Ra (i. e., TbL = baixa reactividade, TbM = reactividade média e TbH = reactividade elevada) tanto nos formatos de ELISA como imunotransferência. Também se empregou um 42 quarto agrupamento de soros de sete doentes com tuberculose pulmonar activa. Nenhum dos soros exibiu reactividade acrescida com a proteína recombinante de ligação a fosfato H37Ra de 38 kD de M. tuberculosis.

Todos os agrupamentos foram pré-adsorvidos com lisado de E. coli e foram utilizados para rastrear as bibliotecas de expressão de H37Ra e H37Rv, como descrito em Sambrook et ai., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Purificaram-se as placas bacteriofágicas que expressaram antigénios imunologicamente reactivos. Recolheu-se o fagemídeo das placas e deduziram-se as sequências de nucleótidos dos clones de M. tuberculosis.

Purificaram-se trinta e dois clones. Destes, 31 representaram sequências que não tinham sido previamente identificadas em M. tuberculosis de humano. As sequências representativas das moléculas de ADN identificadas são proporcionadas na SEQ ID N° 26-51 e 100. Destas, TbH-8 e TbH-8-2 (SEQ ID N° 100) são sequências de ADN não contíguas do mesmo clone, e TbH-4 (SEQ ID N° 43) e TbH-4-FWD (SEQ ID N° 44) são sequências não contíguas do mesmo clone. As sequências de aminoácidos para os antigénios daqui em diante identificados como Tb38-1, TbH-4, TbH-8, TbH-9 e TbH-12 são mostradas em SEQ ID N° 89-93. A comparação destas sequências com sequências conhecidas do banco de genes utilizando as bases de dados identificadas acima não revelou homologias significativas com TbH-4, TbH-8, TbH-9 e TbM-3, apesar de se terem encontrado homologias fracas com TbH-9. Verificou-se que o TbH-12 é homólogo a uma proteína antigénica de 34 kD previamente identificada em M. paratuberculosis (N° de Acesso S28515). Verificou-se que o Tb38-1 está localizado 34 pares de bases a 43 montante da grelha de leitura aberta para o antigénio ESAT-6, previamente identificado em M. bovis (N° de Acesso U34848) e em M. tuberculosis (Sorensen et al., Infec. Immun. 63: 1710-1717, 1995) .

Utilizaram-se sondas derivadas de Tb38-1 e TbH-9, ambas isolados de uma biblioteca de H37Ra, para identificar clones numa biblioteca de H37Rv. 0 Tb38-1 hibridou com Tb38-1F2, Tb38-1F3, Tb3 8-1F5 e Tb38-1F6 (SEQ ID N° 107, 108, 111, 113 e 114) . (As SEQ ID N° 107 e 108 são sequências não contíguas do clone Tb38-1F2.) Deduziram-se duas grelhas de leitura aberta em Tb38-1F2; uma corresponde a Tb37FL (SEQ ID N° 109), a segunda, uma sequência parcial, pode ser a homóloga de Tb38-1 e é denominada Tb38-IN (SEQ ID N° 110) . A sequência de aminoácidos deduzida de Tb38-1F3 está apresentada na SEQ ID N° 112. Uma sonda de TbH-9 identificou três clones na biblioteca de H37Rv: TbH-9-FL (SEQ ID N° 101), que pode ser o homólogo de TbH-9 (R37Ra) , TbH-9-1 (SEQ ID N° 103) e TbH-9-4 (SEQ ID N° 105), todas as quais são sequências altamente relacionadas com TbH-9. As sequências de aminoácidos deduzidas para estes três clones são apresentadas na SEQ ID N° 102, 104 e 106. EXEMPLO 4

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE UM POLIPÉPTIDO A PARTIR DO DERIVADO PROTEICO PURIFICADO DA TUBERCULINA

Isolou-se, do modo seguinte, um polipéptido de M. tuberculosis a partir do derivado proteico purificado (PPD) da tuberculina.

Preparou-se PPD como publicado, com algumas modificações 44 (Seibert, F. et al., Tuberculin purified protein derivative. Preparation and analyses of a large quantity for Standard. The American Review of Tuberculosis 44: 9-25, 1941). A estirpe Rv de M. tuberculosis cultivou-se durante 6 semanas em meio sintético em garrafas rotativas a 37 °C. As garrafas contendo o crescimento bacteriano foram depois aquecidas até 100 °C em vapor de água durante 3 horas. As culturas foram filtradas por esterilização utilizando um filtro de 0,22 μ e a fase liquida foi concentrada 20 vezes utilizando uma membrana de limite de 3 kD. As proteínas foram precipitadas uma vez com solução a 50% de sulfato de amónio e oito vezes com solução a 25% de sulfato de amónio. As proteínas resultantes (PPD) foram fraccionadas por cromatografia líquida de fase reversa (RP-HPLC) utilizando uma coluna C18 (7,8 χ 300 mM; Waters, Milford, MA) num sistema de HPLC Biocad (Perseptive Biosystems, Framingham, MA). As fracções foram eluídas da coluna com um gradiente linear de 0-100% de tampão (0,1% de TFA em acetonitrilo) . O caudal foi de 10 mL/minuto e o eluente foi monitorizado a 214 nn e 280 nn.

Recolheram-se seis fracções, que foram secas, suspensas em PBS e testadas individualmente em cobaios infectados com M. tuberculosis quanto à indução da reacção de hipersensibilidade do tipo retardado (DTH). Verificou-se que uma fracção induz uma reacção de DTH forte, tendo sido subsequentemente ainda fraccionada por RP-HPLC numa coluna C18 Vydac microbore (N° de Catálogo 218TP5115) num dispositivo de HPLC Modelo 172 da Perkin Elmer/Applied Biosystems Division. As fracções foram eluídas com um gradiente linear de 5-100% de tampão (0,05% de TFA em acetonitrilo), com um caudal de 80 ul/minuto. Monitorizou-se o eluente a 215 nm. Recolheram-se oito fracções, que foram testadas quanto à indução de DTH em cobaios infectados com M. tuberculosis. Verificou-se que uma fracção induz DTH forte com endurecimento de cerca de 16 mm. As outras fracções não 45 induziram DTH detectável. Submeteu-se a fracção positiva a electroforese em gel de SDS-PAGE e verificou-se que continha uma única banda proteica com peso molecular de aproximadamente 12 kD.

Este polipéptido, daqui em diante referido como DPPD, foi sequenciado a partir do terminal amino utilizando um sequenciador de proteínas Procise 492 da Perkin Elmer/Applied Biosystems Division como descrito acima e verificou-se ter a sequência N-terminal mostrada na SEQ ID N° 124. A comparação desta sequência com sequências conhecidas do banco de genes descrito acima não revelou homologias conhecidas. Isolaram-se quatro fragmentos de brometo de cianogénio do DPPD, tendo-se verificado terem as sequências mostradas em SEQ ID N° 125-128. EXEMPLO 5

SÍNTESE DE POLIPÉPTIDOS SINTÉTICOS

Podem sintetizar-se polipéptidos num sintetizador de péptidos Millipore 9050 utilizando química de FMOC com activação por HPTU (Hexafluorofosfato de O-benzotriazole-N,N, N', N' -tetrametilurónio). Pode ligar-se uma sequência Gly-Cys-Gly ao terminal amino do péptido para proporcionar um método de conjugação ou marcação do péptido. A clivagem dos péptidos do suporte sólido pode ser realizada utilizando a seguinte mistura de clivagem: ácido trifluoroacético:etanoditioltioanisole: água:fenol (40:1:2:2:3). Após clivagem durante 2 horas, os péptidos podem ser precipitados em éter t-butilmetílico frio. Os grânulos peptídicos podem ser depois dissolvidos em água contendo 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) e liofilizados 46 antes da purificação por HPLC de fase reversa em C18. Para eluir os péptidos pode utilizar-se um gradiente de 0%-60% de acetonitrilo (contendo 0,1% de TFA) em água (contendo 0,1% de TFA) . Após liofilização das fracções puras, os péptidos podem ser caracterizados utilizando espectrometria de massa com electropulverização e por análise de aminoácidos.

Este processo foi utilizado para sintetizar um péptido TbM-1 que contém uma repetição e meia de uma sequência TbM-1. O péptido TbM-1 tem a sequência GCGDRSGGNLDQIRLRRDRSGGNL (SEQ ID N° 63). EXEMPLO 6

UTILIZAÇÃO DE ANTIGÉNIOS REPRESENTATIVOS PARA

SORODIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE

Este Exemplo ilustra as propriedades de diagnóstico de vários antigénios representativos. As figuras 1 e 2 apresentam a reactividade dos antigénios representativos com soro de indivíduos infectados e não infectados com M. tuberculosis, como comparado com a reactividade do lisado bacteriológico e o antigénio de 38 kD.

Os ensaios foram realizados utilizando placas de 96. Foram revestidas com 200 ng de antigénio diluído para 50 pL em tampão de revestimento de carbonato, pH 9,6. Os poços foram revestidos de um dia para o outro a 4 °C (ou 2 horas a 37 °C). Os conteúdos da placa foram então removidos e os poços foram bloqueados durante 2 horas com 200 pL de PBS/1% BSA. Após o passo de bloqueio, os poços foram lavados cinco vezes com PBS/0,1% Tween 20®. 50 pL de soro, diluído 1:100 em PBS/0,1% Tween 20®/0,l% BSA, 47 foram então adicionados a cada poço e incubados durante 30 minutos à temperatura ambiente. As placas foram então lavadas cinco vezes com PBS/0,1% Tween 20®. 0 conjugado enzimático (peroxidase de rábano - Proteína A, Zymed, San Francisco, CA) foi então diluído a 1:10000 em PBS/0,1% Tween 20®/0,l% BSA, e 50 pL do conjugado diluído foi adicionado a cada poço e incubado durante 30 minutos à temperatura ambiente. A seguir à incubação, os poços foram lavados cinco vezes com PBS/0,1% Tween 20®. Foi adicionado 100 pL de substrato de tetrametilbenzidina peroxidase (TMB) (Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD) não diluídos e incubados durante cerca de 15 minutos. A reacção foi parada com a adição de 100 pL de H2S04 1 N a cada poço, e as placas foram lidas a 450 nm. A Figura 2 mostra a reactividade por ELISA de dois antigénios isolados utilizando o método A no Exemplo 3 (TbRa3 e TbRa9) com soro de de doentes infectados e não infectados com M. tuberculosis. A reactividade destes antigénios é comparada à do lisado bacteriano isolado da estirpe H37Ra de M. tuberculosis (Difco, Detroit MI) . Em ambos os casos, os antigénios recombinantes diferenciaram o soro positivo do negativo. Com base nos valores de base obtidos das curvas de funcionamento do receptor, TbRa3 detectou 56 dos 87 soros positivos, e TbRa9 detectou 111 dos 165 soros positivos. A figura 3 ilustra a reactividade por ELISA dos antigénios representativos isolados utilizando o método B do Examplo 3. A reactividade dos antigénios recombinantes TbH4, TbH12, Tb38-1 e o péptido TbM-1 (como descrito no Examplo 4) é comparada à do antigénio de 38 kD descrito por Andersen e Hansen, Infect. Immun. 57:2481-2488, 1989. Novamente, todos os polipéptidos 48 diferenciaram o soro positivo do negativo. Com base nos valores de base obtidos das curvas de funcionamento do receptor, TbH4 detectou 67 dos 126 soros positivos, TbH12 detectou 50 dos 125 soros positivos, 38-1 detectou 61 dos 101 soros positivos e o péptido TbM-1 detectou 25 dos 30 soros positivos. A reactividade de quatro antigénios (TbRa3, TbRa9, TbH4 e TbH12) com soro de um grupo de doentes infectados com M. tuberculosis com diferente reactividade na coloração rápida por ácido de cuspo (Smithwick and David, Tubercle 52:226, 1971) também foi examinada e comparada à reactividade do lisado de M. tuberculosis e do antigénio de 38 kD. Os resultados são apresentados na Tabela 2, abaixo: TABELA 2

REACTIVIDADE DE ANTIGÉNIOS COM SORO DE DOENTES COM M. TUBERCULOSIS

Doente Reação rápida a ácido de cuspo Valores de ELISA Lisado 38 kD TbRa9 TbHl 2 TbH4 TbRa3 TbO1B931-2 + + + + 1,853 0,634 0,998 1, 022 1,030 1,314 Tb01B93l-19 + + + + 2,657 2,322 0,608 0, 837 1,857 2,335 Tb01B93l-8 + + + 2,703 0,527 0,492 0,281 0,501 2, 002 Tb01B93l-10 + + + 1,665 1,301 0,685 0,216 0,448 0, 458 Tb01B93l-ll + + + 2,817 0,697 0,509 0,301 0,173 2,608 Tb01B93l-15 +++ 1,28 0,283 0, 808 0, 218 1,537 0, 811 Tb01B93l-16 +++ 2,908 >3 0, 899 0, 441 0,593 1, 080 49 (continuação)

Valores de ELISA Tb01B93l-25 + + + 0,395 0, 131 0,335 0,211 0, 107 0,948 TbO1B931-8 7 + + + 2,653 2, 432 2,282 0,977 1,221 0, 857 Tb01B93l-89 + + + 1,912 2,370 2,436 0, 876 0,520 0,952 Tb01B94I- 108 ++ + 1,639 0,341 0, 797 0,368 0,654 0, 798 Tb01B94I- 201 ++ + 1, 721 0, 419 0,661 0, 137 0,064 0,692 TbO1B931-8 8 + + 1,939 1,269 2,519 1,381 0,214 0,530 Tb01B93l-92 + + 2,355 2,329 2,78 0,685 0,997 2,527 Tb01B94I- 109 ++ 0,993 0,620 0,574 0, 441 LO O 2,558 Tb01B94I- 210 ++ 2, 777 >3 0,393 0,367 1, 004 1,315 Tb01B94I- 224 ++ 2,913 0, 476 0,251 1,297 1,990 0,256 TbO1B931-9 + 2,649 0,278 0,210 0, 140 0, 181 1,586 Tb01B931-14 + >3 1,538 0,282 0,291 0,549 2, 880 TbO1B931-21 + 2,645 0,739 2, 499 0, 783 0,536 1, 770 Tb01B93l-22 + 0, 714 0, 451 2,082 0,285 0,269 1, 159 TbO1B931-31 + 0,956 0, 490 1, 019 0, 812 0, 176 1,293 Tb01B93l-32 — 2,261 0,786 0,668 0,273 0,535 0, 405 TbO1B931-52 — 0,658 0, 114 0, 434 0,330 0,273 1, 140 Tb01B93l-99 — 2, 118 0,584 1,62 0, 119 0,977 0, 729 Tb01B94I- 130 — 1,349 0,224 0,86 0,282 0,383 2, 146 Th01B94I- 131 " 0,685 0,324 1, 173 0, 059 0, 118 1, 431 50 (continuação)

Valores de ELISA AT4-0 0 7 0 Normal 0,072 0, 043 0,092 0, 071 0,040 0, 039 AT 4-0105 Normal 0,397 0, 121 0,118 0, 103 0,078 0, 390 3/15/94-1 Normal 0,227 0, 064 0,098 0, 026 0,001 0, 228 4/15/93-2 Normal 0, 114 0,240 0,071 0, 034 0, 041 0, 264 5/26/94-4 Normal 0, 089 0,259 0,096 0, 046 0, 008 0, 053 5/26/94-3 Normal 0,139 0,093 0,085 0, 019 0, 067 0, 01

Com base nos valores de base obtidos das curvas de funcionamento de receptor, TbRa3 detectou 23 dos 27 soros positivos, TbRa9 detectou 22 dos 27, TbH4 detectou 18 dos 27 e TbH12 detectou 15 dos 27. Se utilizados em combinação, estes quatro antigénios devem ter uma sensibilidade teórica de 27 dos 27, indicando que estes antigénios deverão complementar-se entre si na detecção serológica de uma infecção por M. tuberculosis. Além disso, vários antigénios recombinantes detectaram soros positivosque não foram detectados utilizando o antigénio de 38 kD, indicando que estes antigénios podem ser complementares ao antigénio de 38 kD. A reactividade do antigénio recombinante TbRall com soro de doentes com M. tuberculosis mostraram ser negativos para o antigénio de 38 kD, bem como com soro de dadores PPD positivos e normais de, foi determinada por ELISA como descrito acima. Os resultados são mostrados na Figura 4 o que indica que ThRall, embora sendo negativo com soro de dadores PPD positivos e normais de, detectou soros que foram negativos com o antigénio de 38 kD. Dos treze soros de 38 kD negativos testados, nove foram positivos com TbRall, indicando que este antigénio pode 51 reagir com um subgrupo de soro negativo a antigénio de 38 kD. Ao contrário, num grupo de soro positivo de 38 kD onde TbRall foi reactivo, OD 450 média para TbRall foi inferior ao mesma para o antigénio de 38 kD. Os dados indicam uma relação inversa entre a presença de actividade TbRall e a positividade de 38 kD. O antigénio TbRa2A foi testado num ELISA indirecto utilizando inicialmente 50 pL de soro com diluição 1:100 durante 30 minutos à temperatura ambiente seguido de lavagem em PBS Tween e incubando durante 30 minutos com Proteína A biotinilada (Zymed, San Francisco, CA) numa diluição 1:10000. A seguir à lavagem, foram adicionados 50 pL de estreptavidina-peroxidase de rábano (Zymed) com diluição de 1:10000 e a mistura foi incubada durante 30 minutos. Após lavagem, o ensaio foi desenvolvido com o substrato TMB como descrito acima. A reactividade de TbRa2A com soro de doentes com M. tuberculosis e de dadores normais é mostrado na Tabela 3. O valor médio para a reactividade de TbRa2A com soro de doentes com M. tuberculosis foi 0,444 com um desvio padrão de 0,309. A média para a reactividade com soro de dadores normais foi 0,109 com um desvio padrão de 0,029. Testes de soro negativo por 38 kD (Figura 5) também indica que o antigénio TbRa2A foi capaz de detectar soro nesta categoria. TABELA 3

REACTIVIDADE DE TbRa2A COM SORO DE DOENTES COM M. TUBERCULOSIS E DE DADORES NORMAIS ID Do Soro Situação OD 450 Tb85 TB 0,680 Tb86 TB 0, 450 Tb87 TB 0,263 52 (continuação) ID Do Soro Situaçao OD 450 Tb8 8 TB 0,275 Tb89 TB 0,403 Tb91 TB 0,393 Tb9 2 TB 0, 401 Tb93 TB 0,232 Tb9 4 TB 0,333 Tb95 TB 0, 435 Tb96 TB 0,284 Tb97 TB 0,320 Tb99 TB 0,328 TblOO TB 0, 817 TblOl TB 0,607 Tbl 0 2 TB 0, 191 Tbl 03 TB 0,228 Tbl 0 7 TB 0,324 Tbl09 TB 1,572 Tbl 12 TB 0,338 DL4-0176 Normal 0,036 AT4-0043 Normal 0,126 AT4-0044 Normal 0,130 AT4-0052 Normal 0, 135 AT4-0053 Normal 0,133 AT4-0062 Normal 0,128 AT4-0070 Normal 0,088 AT4-0091 Normal 0,108 AT4-0100 Normal 0,106 AT4-0105 Normal 0,108 AT4-0109 Normal 0, 105 53 A reactividade do antigénio recombinante (g) (SEQ ID N° 60) com soro de doentes com M. tuberculosis e dadores normais foi determinado por ELISA como descrito acima. A figura 6 mostra os resultados da titulação do antigénio (g) com quatro soros positivos de M. tuberculosis que foram todos reactivos com o antigénio de 38 kD e com soro de quatro dadores. Todos os quatro soros positivos reagiram com o antigénio (g). 54

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Corixa Corporation <120> Compostos e métodos para diagnóstico de tuberculose <130> CRX-P417 <150> 08/523435 <151> 1995-09-01 <150> 08/532136 <151> 1995-09-22 <150> 08/620280 <151> 1996-03-22 <150> 08/658800 <151> 1996-06-05 <150> 08/680573 <151> 1996-07-12 <16 0> 132 <170> Patentln versão 3.5

<210> 1 <211> 766 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 55 <220> mi sc <221> característica_ <222> (565)..(565) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (584)..(584) <223> Desconhecido <2 2 0> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (663)..(663) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (673)..(673) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (717)..(717) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (722)..(722) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (729) . . (729) 56 <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterίstica_ <222> (732)..(732) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracteristica_ <222> (740)..(742) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica_ <2 2 2> (746) . . (746) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica_ <222> (748)..(749) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (756)..(756) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterist ica. <222> (759)..(759) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterist ica. 57 <222> (762)..(762) <223> Desconhecido <4 0 0> 1 cgaggcaccg gtagtttgaa ccaaacgcac aatcgacggg caaacgaacg gaagaacaca 60 accatgaaga tggtgaaatc gatcgccgca ggtctgaccg ccgcggctgc aatcggcgcc 120 gctgcggccg gtgtgacttc gatcatggct ggcggcccgg tcgtatacca gatgcagccg 180 gtcgtcttcg gcgcgccact gccgttggac ccggcatccg cccctgacgt cccgaccgcc 240 gcccagttga ccagcctgct caacagcctc gccgatccca acgtgtcgtt tgcgaacaag 300 ggcagtctgg tcgagggcgg catcgggggc accgaggcgc gcatcgccga ccacaagctg 360 aagaaggccg ccgagcacgg ggatctgccg ctgtcgttca gcgtgacgaa catccagccg 420 gcggccgccg gttcggccac cgccgacgtt tccgtctcgg gtccgaagct ctcgtcgccg 480 gtcacgcaga acgtcacgtt cgtgaatcaa ggcggctgga tgctgtcacg cgcatcggcg 540 atggagttgc tgcaggccgc agggnaactg attggcgggc cggnttcagc ccgctgttca 600 gctacgccgc ccgcctggtg acgcgtccat gtcgaacact cgcgcgtgta gcacggtgcg 660 gtntgcgcag ggncgcacgc accgcccggt gcaagccgtc ctcgagatag gtggtgnctc 720 gncaccagng ancacccccn nntcgncnnt tctcgntgnt gnatga 766

<210> 2 <211> 752 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (591) .. (591) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (618)..(618) <223> Desconhecido 58 <220> mi sc <221> característica_ <222> (624)..(624) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (630)..(630) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (642)..(642) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (647)..(647) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (654)..(654) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (660)..(660) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (665)..(665) 59 <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (671)..(671) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (678)..(678) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (685) . . (685) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (686) . . (686) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (696) . . (696) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (700)..(700) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica misc <222> (710)..(710) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (715) . . (715) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (719)..(719) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (724) . . (724) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (731)..(731) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (736) . . (736) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (740)..(740) <223> Desconhecido <220> <221> mist_feature 61 <222> (745)..(745) <223> Desconhecido <400> 2 atgcatcacc atcaccatca cgatgaagtc acggtagaga cgacctccgt cttccgcgca 60 gacttcctca gcgagctgga cgctcctgcg caagcgggta cggagagcgc ggtctccggg 120 gtggaagggc tcccgccggg ctcggcgttg ctggtagtca aacgaggccc caacgccggg 180 tcccggttcc tactcgacca agccatcacg tcggctggtc ggcatcccga cagcgacata 240 tttctcgacg acgtgaccgt gagccgtcgc catgctgaat tccggttgga aaacaacgaa 300 ttcaatgtcg tcgatgtcgg gagtctcaac ggcacctacg tcaaccgcga gcccgtggat 360 tcggcggtgc tggcgaacgg cgacgaggtc cagatcggca agctccggtt ggtgttcttg 420 accggaccca agcaaggcga ggatgacggg agtaccgggg gcccgtgagc gcacccgata 480 gccccgcgct ggccgggatg tcgatcgggg cggtcctccg acctgctacg accggatttt 540 ccctgatgtc caccatctcc aagattcgat tcttgggagg cttgagggtc ngggtgaccc 600 ccccgcgggc ctcattcngg ggtntcggcn ggtttcaccc cntaccnact gccncccggn 660 ttgcnaattc nttcttcnct gcccnnaaag ggaccnttan cttgccgctn gaaanggtna 720

<210> 3 <211> 813 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (760)..(760) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (779)..(779) <223> Desconhecido 62 <220> <221> característica_misc <222> (807)..(807) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (811)..(811) <223> Desconhecido <400> 3 catatgcatc accatcacca tcacacttct aaccgcccag cgcgtcgggg gcgtcgagca 60 ccacgcgaca ccgggcccga tcgatctgct agcttgagtc tggtcaggca tcgtcgtcag 120 cagcgcgatg ccctatgttt gtcgtcgact cagatatcgc ggcaatccaa tctcccgcct 180 gcggccggcg gtgctgcaaa ctactcccgg aggaatttcg acgtgcgcat caagatcttc 240 atgctggtca cggctgtcgt tttgctctgt tgttcgggtg tggccacggc cgcgcccaag 300 acctactgcg aggagttgaa aggcaccgat accggccagg cgtgccagat tcaaatgtcc 360 gacccggcct acaacatcaa catcagcctg cccagttact accccgacca gaagtcgctg 420 gaaaattaca tcgcccagac gcgcgacaag ttcctcagcg cggccacatc gtccactcca 480 cgcgaagccc cctacgaatt gaatatcacc tcggccacat accagtccgc gataccgccg 540 cgtggtacgc aggccgtggt gctcamggtc taccacaacg ccggcggcac gcacccaacg 600 accacgtaca aggccttcga ttgggaccag gcctatcgca agccaatcac ctatgacacg 660 ctgtggcagg ctgacaccga tccgctgcca gtcgtcttcc ccattgttgc aaggtgaact 720 gagcaacgca gaccgggaca acwggtatcg atagccgccn aatgccggct tggaacccng 780 tgaaattatc acaacttcgc agtcacnaaa naa 813

<210> 4 <211> 447 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 63 <400> 4 cggtatgaac acggccgcgt ccgataactt ccagctgtcc cagggtgggc agggattcgc 60 cattccgatc gggcaggcga tggcgatcgc gggccagatc cgatcgggtg gggggtcacc 120 caccgttcat atcgggccta ccgccttcct cggcttgggt gttgtcgaca acaacggcaa 180 cggcgcacga gtccaacgcg tggtcgggag cgctccggcg gcaagtctcg gcatctccac 240 cggcgacgtg atcaccgcgg tcgacggcgc tccgatcaac tcggccaccg cgatggcgga 300 cgcgcttaac gggcatcatc ccggtgacgt catctcggtg aactggcaaa ccaagtcggg 360 cggcacgcgt acagggaacg tgacattggc cgagggaccc ccggcctgat ttcgtcgygg 420 ataccacccg ccggccggcc aattgga 447

<210> 5 <211> 604 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (191)..(191) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (223)..(223) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (237)..(237) <223> Desconhecido 64 <220> <221> caracterίstica_misc <222> (255)..(255) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (262) . . (262) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (266) . . (266) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (270) . . (270) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (319) . . (319) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (322) . . (322) <223> Desconhecido <220> <221> característica misc <222> (331)..(331) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (345)..(345) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (352)..(352) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (356) . . (356) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (361)..(361) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (364)..(364) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (366) . . (366) <223> Desconhecido 6 6 <220> mi sc <221> característica_ <222> (369)..(369) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (387)..(387) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (393) . . (393) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica_ <222> (400) . . (400) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (416)..(416) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (421)..(422) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (424) .. (425) <223> Desconhecido 67 <220> <220> mi sc <221> característica_ <222> (428)..(428) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (430)..(430) <223> Desconhecido <2 2 0> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (433) . . (433) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (438) . . (438) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (440) .. (440) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (444)..(447) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (454)..(454) 68 <223> Desconhecido <2 2 0> <221> característica_misc <222> (458)..(458) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (463)..(463) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <2 2 2> (465) . . (465) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (468)..(468) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (471) . . (471) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (478)..(478) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica misc <222> (481)..(481) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (493) . . (493) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (497)..(500) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (503) . . (503) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (505) . . (505) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (507)..(507) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (510) . . (510) <223> Desconhecido 70 <220> mi sc <221> característica_ <222> (513)..(513) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (516) . . (516) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (519) . . (519) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (521)..(523) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (525)..(526) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (528) . . (529) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (531)..(532) <223> Desconhecido 71 <220> <220> mi sc <221> característica_ <222> (535)..(535) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (537)..(537) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (539) . . (539) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (541)..(543) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (545)..(545) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (548)..(549) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (552) . . (558) 72 <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (561)..(562) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (564)..(565) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (567)..(568) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (570)..(573) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (577) . . (577) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (579)..(581) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica misc <222> (583)..(586) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (588)..(588) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (591)..(592) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (595)..(595) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (598)..(598) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (601)..(601) <223> Desconhecido 74 <400> 5 gtcccactgc ggtcgccgag tatgtcgccc agcaaatgtc tggcagccgc ccaacggaat 60 ccggtgatcc gacgtcgcag gttgtcgaac ccgccgccgc ggaagtatcg gtccatgcct 120 agcccggcga cggcgagcgc cggaatggcg cgagtgagga ggcgggcaat ttggcggggc 180 ccggcgacgg ngagcgccgg aatggcgcga gtgaggaggt ggncagtcat gcccagngtg 240 atccaatcaa cctgnattcg gnctgngggn ccatttgaca atcgaggtag tgagcgcaaa 300 tgaatgatgg aaaacgggng gngacgtccg ntgttctggt ggtgntaggt gnctgnctgg 360 ngtngnggnt atcaggatgt tcttcgncga aanctgatgn cgaggaacag ggtgtncccg 420 nnannccnan ggngtccnan cccnnnntcc tcgncganat cananagncg nttgatgnga 480 naaaagggtg gancagnnnn aantngnggn ccnaanaanc nnnanngnng nnagntngnt 540 nnntnttnnc annnnnnntg nngnngnncn nnncaancnn ntnnnngnaa nnggnttntt 600 naat 604

<210> 6 <211> 633 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (6)..(6) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (39) .. (39) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (507)..(507) <223> Desconhecido 75 <220> <221> característica_misc <222> (583)..(583) <223> Desconhecido <400> 6 ttgcangtcg aaccacctca ctaaagggaa caaaagctng agctccaccg cggtggcggc 60 cgctctagaa ctagtgkatm yyyckggctg cagsaatycg gyacgagcat taggacagtc 120 taacggtcct gttacggtga tcgaatgacc gacgacatcc tgctgatcga caccgacgaa 180 cgggtgcgaa ccctcaccct caaccggccg cagtcccgya acgcgctctc ggcggcgcta 240 cgggatcggt ttttcgcggy gttggycgac gccgaggycg acgacgacat cgacgtcgtc 300 atcctcaccg gygccgatcc ggtgttctgc gccggactgg acctcaaggt agctggccgg 360 gcagaccgcg ctgccggaca tctcaccgcg gtgggcggcc atgaccaagc cggtgatcgg 420 cgcgatcaac ggcgccgcgg tcaccggcgg gctcgaactg gcgctgtact gcgacatcct 480 gatcgcctcc gagcacgccc gcttcgncga cacccacgcc cgggtggggc tgctgcccac 540 ctggggactc agtgtgtgct tgccgcaaaa ggtcggcatc ggnctgggcc ggtggatgag 600 cctgaccggc gactacctgt ccgtgaccga cgc 633

<210> 7 <211> 1362 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 76 <4Ο0> 7 cgacgacgac ggcgccggag agcgggcgcg aacggcgatc gacgcggccc tggccagagt 60 cggcaccacc caggagggag tcgaatcatg aaatttgtca accatattga gcccgtcgcg 120 ccccgccgag ccggcggcgc ggtcgccgag gtctatgccg aggcccgccg cgagttcggc 180 cggctgcccg agccgctcgc catgctgtcc ccggacgagg gactgctcac cgccggctgg 240 gcgacgttgc gcgagacact gctggtgggc caggtgccgc gtggccgcaa ggaagccgtc 300 gccgccgccg tcgcggccag cctgcgctgc ccctggtgcg tcgacgcaca caccaccatg 360 ctgtacgcgg caggccaaac cgacaccgcc gcggcgatct tggccggcac agcacctgcc 420 gccggtgacc cgaacgcgcc gtatgtggcg tgggcggcag gaaccgggac accggcggga 480 ccgccggcac cgttcggccc ggatgtcgcc gccgaatacc tgggcaccgc ggtgcaattc 540 cacttcatcg cacgcctggt cctggtgctg ctggacgaaa ccttcctgcc ggggggcccg 600 cgcgcccaac agctcatgcg ccgcgccggt ggactggtgt tcgcccgcaa ggtgcgcgcg 660 gagcatcggc cgggccgctc cacccgccgg ctcgagccgc gaacgctgcc cgacgatctg 720 gcatgggcaa caccgtccga gcccatagca accgcgttcg ccgcgctcag ccaccacctg 780 gacaccgcgc cgcacctgcc gccaccgact cgtcaggtgg tcaggcgggt cgtggggtcg 840 tggcacggcg agccaatgcc gatgagcagt cgctggacga acgagcacac cgccgagctg 900 cccgccgacc tgcacgcgcc cacccgtctt gccctgctga ccggcctggc cccgcatcag 960 gtgaccgacg acgacgtcgc cgcggcccga tccctgctcg acaccgatgc ggcgctggtt 1020 ggcgccctgg cctgggccgc cttcaccgcc gcgcggcgca tcggcacctg gatcggcgcc 1080 gccgccgagg gccaggtgtc gcggcaaaac ccgactgggt gagtgtgcgc gccctgtcgg 1140 tagggtgtca tcgctggccc gagggatctc gcggcggcga acggaggtgg cgacacaggt 1200 ggaagctgcg cccactggct tgcgccccaa cgccgtcgtg ggcgttcggt tggccgcact 1260 ggccgatcag gtcggcgccg gcccttggcc gaaggtccag ctcaacgtgc cgtcaccgaa 1320 ggaccggacg gtcaccgggg gtcaccctgc gcgcccaagg aa 1362

<210> 8 <211> 1458 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 77 <400> 8 gcgacgaccc cgatatgccg ggcaccgtag cgaaagccgt cgccgacgca ctcgggcgcg 60 gtatcgctcc cgttgaggac attcaggact gcgtggaggc ccggctgggg gaagccggtc 120 tggatgacgt ggcccgtgtt tacatcatct accggcagcg gcgcgccgag ctgcggacgg 180 ctaaggcctt gctcggcgtg cgggacgagt taaagctgag cttggcggcc gtgacggtac 240 tgcgcgagcg ctatctgctg cacgacgagc agggccggcc ggccgagtcg accggcgagc 300 tgatggaccg atcggcgcgc tgtgtcgcgg cggccgagga ccagtatgag ccgggctcgt 360 cgaggcggtg ggccgagcgg ttcgccacgc tattacgcaa cctggaattc ctgccgaatt 420 cgcccacgtt gatgaactct ggcaccgacc tgggactgct cgccggctgt tttgttctgc 480 cgattgagga ttcgctgcaa tcgatctttg cgacgctggg acaggccgcc gagctgcagc 540 gggctggagg cggcaccgga tatgcgttca gccacctgcg acccgccggg gatcgggtgg 600 cctccacggg cggcacggcc agcggaccgg tgtcgtttct acggctgtat gacagtgccg 660 cgggtgtggt ctccatgggc ggtcgccggc gtggcgcctg tatggctgtg cttgatgtgt 720 cgcacccgga tatctgtgat ttcgtcaccg ccaaggccga atcccccagc gagctcccgc 780 atttcaacct atcggttggt gtgaccgacg cgttcctgcg ggccgtcgaa cgcaacggcc 840 tacaccggct ggtcaatccg cgaaccggca agatcgtcgc gcggatgccc gccgccgagc 900 tgttcgacgc catctgcaaa gccgcgcacg ccggtggcga tcccgggctg gtgtttctcg 960 acacgatcaa tagggcaaac ccggtgccgg ggagaggccg catcgaggcg accaacccgt 1020 gcggggaggt cccactgctg ccttacgagt catgtaatct cggctcgatc aacctcgccc 1080 ggatgctcgc cgacggtcgc gtcgactggg accggctcga ggaggtcgcc ggtgtggcgg 1140 tgcggttcct tgatgacgtc atcgatgtca gccgctaccc cttccccgaa ctgggtgagg 1200 cggcccgcgc cacccgcaag atcgggctgg gagtcatggg tttggcggaa ctgcttgccg 1260 cactgggtat tccgtacgac agtgaagaag ccgtgcggtt agccacccgg ctcatgcgtc 1320 gcatacagca ggcggcgcac acggcatcgc ggaggctggc cgaagagcgg ggcgcattcc 1380 cggcgttcac cgatagccgg ttcgcgcggt cgggcccgag gcgcaacgca caggtcacct 1440 ccgtcgctcc gacgggca 1458

<210> 9 <211> 862 <212> ADN 78 <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 9 acggtgtaat cgtgctggat ctggaaccgc gtggcccgct acctaccgag atctactggc 60 ggcgcagggg gctggccctg ggcatcgcgg tcgtcgtagt cgggatcgcg gtggccatcg 120 tcatcgcctt cgtcgacagc agcgccggtg ccaaaccggt cagcgccgac aagccggcct 180 ccgcccagag ccatccgggc tcgccggcac cccaagcacc ccagccggcc gggcaaaccg 240 aaggtaacgc cgccgcggcc ccgccgcagg gccaaaaccc cgagacaccc acgcccaccg 300 ccgcggtgca gccgccgccg gtgctcaagg aaggggacga ttgccccgat tcgacgctgg 360 ccgtcaaagg tttgaccaac gcgccgcagt actacgtcgg cgaccagccg aagttcacca 420 tggtggtcac caacatcggc ctggtgtcct gtaaacgcga cgttggggcc gcggtgttgg 480 ccgcctacgt ttactcgctg gacaacaagc ggttgtggtc caacctggac tgcgcgccct 540 cgaatgagac gctggtcaag acgttttccc ccggtgagca ggtaacgacc gcggtgacct 600 ggaccgggat gggatcggcg ccgcgctgcc cattgccgcg gccggcgatc gggccgggca 660 cctacaatct cgtggtacaa ctgggcaatc tgcgctcgct gccggttccg ttcatcctga 720 atcagccgcc gccgccgccc gggccggtac ccgctccggg tccagcgcag gcgcctccgc 780 cggagtctcc cgcgcaaggc ggataattat tgatcgctga tggtcgattc cgccagctgt 840 gacaacccct cgcctcgtgc cg 862 <210> 10 <211> 622 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica. _misc <222> (578) .. (578) <223> Desconhecido <220> <221> característica. _misc 79 <222> (585)..(585) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (614)..(614) <223> Desconhecido <400> 10 ttgatcagca ccggcaaggc gtcacatgcc tccctgggtg tgcaggtgac caatgacaaa 60 gacaccccgg gcgccaagat cgtcgaagta gtggccggtg gtgctgccgc gaacgctgga 120 gtgccgaagg gcgtcgttgt caccaaggtc gacgaccgcc cgatcaacag cgcggacgcg 180 ttggttgccg ccgtgcggtc caaagcgccg ggcgccacgg tggcgctaac ctttcaggat 240 ccctcgggcg gtagccgcac agtgcaagtc accctcggca aggcggagca gtgatgaagg 300 tcgccgcgca gtgttcaaag ctcggatata cggtggcacc catggaacag cgtgcggagt 360 tggtggttgg ccgggcactt gtcgtcgtcg ttgacgatcg cacggcgcac ggcgatgaag 420 accacagcgg gccgcttgtc accgagctgc tcaccgaggc cgggtttgtt gtcgacggcg 480 tggtggcggt gtcggccgac gaggtcgaga tccgaaatgc gctgaacaca gcggtgatcg 540 gcggggtgga cctggtggtg tcggtcggcg ggaccggngt gacgnctcgc gatgtcaccc 600 cggaagccac ccgngacatt ct 622

<210> 11 <211> 1200 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 80 <4 Ο 0> 11 ggcgcagcgg taagcctgtt ggccgccggc acactggtgt tgacagcatg cggcggtggc 60 accaacagct cgtcgtcagg cgcaggcgga acgtctgggt cggtgcactg cggcggcaag 120 aaggagctcc actccagcgg ctcgaccgca caagaaaatg ccatggagca gttcgtctat 180 gcctacgtgc gatcgtgccc gggctacacg ttggactaca acgccaacgg gtccggtgcc 240 ggggtgaccc agtttctcaa caacgaaacc gatttcgccg gctcggatgt cccgttgaat 300 ccgtcgaccg gtcaacctga ccggtcggcg gagcggtgcg gttccccggc atgggacctg 360 ccgacggtgt tcggcccgat cgcgatcacc tacaatatca agggcgtgag cacgctgaat 420 cttgacggac ccactaccgc caagattttc aacggcacca tcaccgtgtg gaatgatcca 480 cagatccaag ccctcaactc cggcaccgac ctgccgccaa caccgattag cgttatcttc 540 cgcagcgaca agtccggtac gtcggacaac ttccagaaat acctcgacgg tgtatccaac 600 ggggcgtggg gcaaaggcgc cagcgaaacg ttcagcgggg gcgtcggcgt cggcgccagc 660 gggaacaacg gaacgtcggc cctactgcag acgaccgacg ggtcgatcac ctacaacgag 720 tggtcgtttg cggtgggtaa gcagttgaac atggcccaga tcatcacgtc ggcgggtccg 780 gatccagtgg cgatcaccac cgagtcggtc ggtaagacaa tcgccggggc caagatcatg 840 ggacaaggca acgacctggt attggacacg tcgtcgttct acagacccac ccagcctggc 900 tcttacccga tcgtgctggc gacctatgag atcgtctgct cgaaataccc ggatgcgacg 960 accggtactg cggtaagggc gtttatgcaa gccgcgattg gtccaggcca agaaggcctg 1020 gaccaatacg gctccattcc gttgcccaaa tcgttccaag caaaattggc ggccgcggtg 1080 aatgctattt cttgacctag tgaagggaat tcgacggtga gcgatgccgt tccgcaggta 1140 gggtcgcaat ttgggccgta tcagctattg cggctgctgg gccgaggcgg gatgggcgag 1200

<210> 12 <211> 1155 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 81 <4 Ο 0> 12 gcaagcagct gcaggtcgtg ctgttcgacg aactgggcat gccgaagacc aaacgcacca 60 agaccggcta caccacggat gccgacgcgc tgcagtcgtt gttcgacaag accgggcatc 120 cgtttctgca acatctgctc gcccaccgcg acgtcacccg gctcaaggtc accgtcgacg 180 ggttgctcca agcggtggcc gccgacggcc gcatccacac cacgttcaac cagacgatcg 240 ccgcgaccgg ccggctctcc tcgaccgaac ccaacctgca gaacatcccg atccgcaccg 300 acgcgggccg gcggatccgg gacgcgttcg tggtcgggga cggttacgcc gagttgatga 360 cggccgacta cagccagatc gagatgcgga tcatggggca cctgtccggg gacgagggcc 420 tcatcgaggc gttcaacacc ggggaggacc tgtattcgtt cgtcgcgtcc cgggtgttcg 480 gtgtgcccat cgacgaggtc accggcgagt tgcggcgccg ggtcaaggcg atgtcctacg 540 ggctggttta cgggttgagc gcctacggcc tgtcgcagca gttgaaaatc tccaccgagg 600 aagccaacga gcagatggac gcgtatttcg cccgattcgg cggggtgcgc gactacctgc 660 gcgccgtagt cgagcgggcc cgcaaggacg gctacacctc gacggtgctg ggccgtcgcc 720 gctacctgcc cgagctggac agcagcaacc gtcaagtgcg ggaggccgcc gagcgggcgg 780 cgctgaacgc gccgatccag ggcagcgcgg ccgacatcat caaggtggcc atgatccagg 840 tcgacaaggc gctcaacgag gcacagctgg cgtcgcgcat gctgctgcag gtccacgacg 900 agctgctgtt cgaaatcgcc cccggtgaac gcgagcgggt cgaggccctg gtgcgcgaca 960 agatgggcgg cgcttacccg ctcgacgtcc cgctggaggt gtcggtgggc tacggccgca 1020 gctgggacgc ggcggcgcac tgagtgccga gcgtgcatct ggggcgggaa ttcggcgatt 1080 tttccgccct gagttcacgc tcggcgcaat cgggaccgag tttgtccagc gtgtacccgt 1140 cgagtagcct cgtca 1155

<210> 13 <211> 1771 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 82 <4 Ο 0> 13 gagcgccgtc tggtgtttga acggttttac cggtcggcat cggcacgggc gttgccgggt 60 tcgggcctcg ggttggcgat cgtcaaacag gtggtgctca accacggcgg attgctgcgc 120 atcgaagaca ccgacccagg cggccagccc cctggaacgt cgatttacgt gctgctcccc 180 ggccgtcgga tgccgattcc gcagcttccc ggtgcgacgg ctggcgctcg gagcacggac 240 atcgagaact ctcggggttc ggcgaacgtt atctcagtgg aatctcagtc cacgcgcgca 300 acctagttgt gcagttactg ttgaaagcca cacccatgcc agtccacgca tggccaagtt 360 ggcccgagta gtgggcctag tacaggaaga gcaacctagc gacatgacga atcacccacg 420 gtattcgcca ccgccgcagc agccgggaac cccaggttat gctcaggggc agcagcaaac 480 gtacagccag cagttcgact ggcgttaccc accgtccccg cccccgcagc caacccagta 540 ccgtcaaccc tacgaggcgt tgggtggtac ccggccgggt ctgatacctg gcgtgattcc 600 gaccatgacg ccccctcctg ggatggttcg ccaacgccct cgtgcaggca tgttggccat 660 cggcgcggtg acgatagcgg tggtgtccgc cggcatcggc ggcgcggccg catccctggt 720 cgggttcaac cgggcacccg ccggccccag cggcggccca gtggctgcca gcgcggcgcc 780 aagcatcccc gcagcaaaca tgccgccggg gtcggtcgaa caggtggcgg ccaaggtggt 840 gcccagtgtc gtcatgttgg aaaccgatct gggccgccag tcggaggagg gctccggcat 900 cattctgtct gccgaggggc tgatcttgac caacaaccac gtgatcgcgg cggccgccaa 960 gcctcccctg ggcagtccgc cgccgaaaac gacggtaacc ttctctgacg ggcggaccgc 1020 acccttcacg gtggtggggg ctgaccccac cagtgatatc gccgtcgtcc gtgttcaggg 1080 cgtctccggg ctcaccccga tctccctggg ttcctcctcg gacctgaggg tcggtcagcc 1140 ggtgctggcg atcgggtcgc cgctcggttt ggagggcacc gtgaccacgg ggatcgtcag 1200 cgctctcaac cgtccagtgt cgacgaccgg cgaggccggc aaccagaaca ccgtgctgga 1260 cgccattcag accgacgccg cgatcaaccc cggtaactcc gggggcgcgc tggtgaacat 1320 gaacgctcaa ctcgtcggag tcaactcggc cattgccacg ctgggcgcgg actcagccga 1380 tgcgcagagc ggctcgatcg gtctcggttt tgcgattcca gtcgaccagg ccaagcgcat 1440 cgccgacgag ttgatcagca ccggcaaggc gtcacatgcc tccctgggtg tgcaggtgac 1500 caatgacaaa gacaccccgg gcgccaagat cgtcgaagta gtggccggtg gtgctgccgc 1560 gaacgctgga gtgccgaagg gcgtcgttgt caccaaggtc gacgaccgcc cgatcaacag 1620 cgcggacgcg ttggttgccg ccgtgcggtc caaagcgccg ggcgccacgg tggcgctaac 1680 ctttcaggat ccctcgggcg gtagccgcac agtgcaagtc accctcggca aggcggagca 1740 gtgatgaagg tcgccgcgca gtgttcaaag c 1771 83

<210> 14 <211> 1058 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (1025)..(1025) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (1056)..(1056) <223> Desconhecido <40 0> 14 ctccaccgcg gtggcggccg ctctagaact agtggatccc ccgggctgca ggaattcggc 60 acgaggatcc gacgtcgcag gttgtcgaac ccgccgccgc ggaagtatcg gtccatgcct 120 agcccggcga cggcgagcgc cggaatggcg cgagtgagga ggcgggcaat ttggcggggc 180 ccggcgacgg cgagcgccgg aatggcgcga gtgaggaggc gggcagtcat gcccagcgtg 240 atccaatcaa cctgcattcg gcctgcgggc ccatttgaca atcgaggtag tgagcgcaaa 300 tgaatgatgg aaaacgggcg gtgacgtccg ctgttctggt ggtgctaggt gcctgcctgg 360 cgttgtggct atcaggatgt tcttcgccga aacctgatgc cgaggaacag ggtgttcccg 420 tgagcccgac ggcgtccgac cccgcgctcc tcgccgagat caggcagtcg cttgatgcga 480 caaaagggtt gaccagcgtg cacgtagcgg tccgaacaac cgggaaagtc gacagcttgc 540 tgggtattac cagtgccgat gtcgacgtcc gggccaatcc gctcgcggca aagggcgtat 600 84 gcacctacaa cgacgagcag ggtgtcccgt ttcgggtaca aggcgacaac atctcggtga 660 aactgttcga cgactggagc aatctcggct cgatttctga actgtcaact tcacgcgtgc 720 tcgatcctgc cgctggggtg acgcagctgc tgtccggtgt cacgaacctc caagcgcaag 780 gtaccgaagt gatagacgga atttcgacca ccaaaatcac cgggaccatc cccgcgagct 840 ctgtcaagat gcttgatcct ggcgccaaga gtgcaaggcc ggcgaccgtg tggattgccc 900 aggacggctc gcaccacctc gtccgagcga gcatcgacct cggatccggg tcgattcagc 960 tcacgcagtc gaaatggaac gaacccgtca acgtcgacta ggccgaagtt gcgtcgacgc 1020 gttgntcgaa acgcccttgt gaacggtgtc aacggnac 1058 <210> 15 <211> 542 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (406 ) .. (406) <223> Desconhecido <400> 15 gaattcggca cgagaggtga tcgacatcat cgggaccagc cccacatcct gggaacaggc 60 ggcggcggag gcggtccagc gggcgcggga tagcgtcgat gacatccgcg tcgctcgggt 120 cattgagcag gacatggccg tggacagcgc cggcaagatc acctaccgca tcaagctcga 180 agtgtcgttc aagatgaggc cggcgcaacc gcgctagcac gggccggcga gcaagacgca 240 aaatcgcacg gtttgcggtt gattcgtgcg attttgtgtc tgctcgccga ggcctaccag 300 gcgcggccca ggtccgcgtg ctgccgtatc caggcgtgca tcgcgattcc ggcggccacg 360 ccggagttaa tgcttcgcgt cgacccgaac tgggcgatcc gccggngagc tgatcgatga 420 ccgtggccag cccgtcgatg cccgagttgc ccgaggaaac gtgctgccag gccggtagga 480 agcgtccgta ggcggcggtg ctgaccggct ctgcctgcgc cctcagtgcg gccagcgagc 540 gg 542 <210> 16 85 <211> 913

<212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (614)..(614) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (773)..(773) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (886)..(886) <223> Desconhecido 86 60 <4 0 0> 16 cggtgccgcc cgcgcctccg ttgcccccat tgccgccgtc gccgatcagc tgcgcatcgc caccatcacc gcctttgccg ccggcaccgc cggtggcgcc ggggccgccg atgccaccgc 120 ttgaccctgg ccgccggcgc cgccattgcc atacagcacc ccgccggggg caccgttacc 180 gccgtcgcca ccgtcgccgc cgctgccgtt tcaggccggg gaggccgaat gaaccgccgc 240 caagcccgcc gccggcaccg ttgccgcctt ttccgcccgc cccgccggcg ccgccaattg 300 ccgaacagcc amgcaccgtt gccgccagcc ccgccgccgt taacggcgct gccgggcgcc 360 gccgccggac ccgccattac cgccgttccc gttcggtgcc ccgccgttac cggcgccgcc 420 gtttgccgcc aatattcggc gggcaccgcc agacccgccg gggccaccat tgccgccggg 480 caccgaaaca acagcccaac ggtgccgccg gccccgccgt ttgccgccat caccggccat 540 tcaccgccag caccgccgtt aatgtttatg aacccggtac cgccagcgcg gcccctattg 600 ccgggcgccg gagngcgtgc ccgccggcgc cgccaacgcc caaaagcccg gggttgccac 660 cggccccgcc ggacccaccg gtcccgccga tccccccgtt gccgccggtg ccgccgccat 720 tggtgctgct gaagccgtta gcgccggttc cgcsggttcc ggcggtggcg ccntggccgc 780 cggccccgcc gttgccgtac agccaccccc cggtggcgcc gttgccgcca ttgccgccat 840 tgccgccgtt gccgccattg ccgccgttcc cgccgccacc gccggnttgg ccgccggcgc 900 cgccggcggc cgc 913 87

<210> 17 <211> 1872 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (1460)..(1460) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (1854)..(1854) <223> Desconhecido <4 0 0> 17 gactacgttg gtgtagaaaa atcctgccgc ccggaccctt aaggctggga caatttctga 60 tagctacccc gacacaggag gttacgggat gagcaattcg cgccgccgct cactcaggtg 120 gtcatggttg ctgagcgtgc tggctgccgt cgggctgggc ctggccacgg cgccggccca 180 ggcggccccg ccggccttgt cgcaggaccg gttcgccgac ttccccgcgc tgcccctcga 240 cccgtccgcg atggtcgccc aagtggcgcc acaggtggtc aacatcaaca ccaaactggg 300 ctacaacaac gccgtgggcg ccgggaccgg catcgtcatc gatcccaacg gtgtcgtgct 360 gaccaacaac cacgtgatcg cgggcgccac cgacatcaat gcgttcagcg tcggctccgg 420 ccaaacctac ggcgtcgatg tggtcgggta tgaccgcacc caggatgtcg cggtgctgca 480 88 gctgcgcggt gccggtggcc tgccgtcggc ggcgatcggt ggcggcgtcg cggttggtga 540 gcccgtcgtc gcgatgggca acagcggtgg gcagggcgga acgccccgtg cggtgcctgg 600 cagggtggtc gcgctcggcc aaaccgtgca ggcgtcggat tcgctgaccg gtgccgaaga 660 gacattgaac gggttgatcc agttcgatgc cgcaatccag cccggtgatt cgggcgggcc 720 cgtcgtcaac ggcctaggac aggtggtcgg tatgaacacg gccgcgtccg ataacttcca 780 gctgtcccag ggtgggcagg gattcgccat tccgatcggg caggcgatgg cgatcgcggg 840 ccaaatccga tcgggtgggg ggtcacccac cgttcatatc gggcctaccg ccttcctcgg 900 cttgggtgtt gtcgacaaca acggcaacgg cgcacgagtc caacgcgtgg tcggaagcgc 960 tccggcggca agtctcggca tctccaccgg cgacgtgatc accgcggtcg acggcgctcc 1020 gatcaactcg gccaccgcga tggcggacgc gcttaacggg catcatcccg gtgacgtcat 1080 ctcggtgaac tggcaaacca agtcgggcgg cacgcgtaca gggaacgtga cattggccga 1140 gggacccccg gcctgatttg tcgcggatac cacccgccgg ccggccaatt ggattggcgc 1200 cagccgtgat tgccgcgtga gcccccgagt tccgtctccc gtgcgcgtgg cattgtggaa 1260 gcaatgaacg aggcagaaca cagcgttgag caccctcccg tgcagggcag ttacgtcgaa 1320 ggcggtgtgg tcgagcatcc ggatgccaag gacttcggca gcgccgccgc cctgcccgcc 1380 gatccgacct ggtttaagca cgccgtcttc tacgaggtgc tggtccgggc gttcttcgac 1440 gccagcgcgg acggttccgn cgatctgcgt ggactcatcg atcgcctcga ctacctgcag 1500 tggcttggca tcgactgcat ctgttgccgc cgttcctacg actcaccgct gcgcgacggc 1560 ggttacgaca ttcgcgactt ctacaaggtg ctgcccgaat tcggcaccgt cgacgatttc 1620 gtcgccctgg tcgacaccgc tcaccggcga ggtatccgca tcatcaccga cctggtgatg 1680 aatcacacct cggagtcgca cccctggttt caggagtccc gccgcgaccc agacggaccg 1740 tacggtgact attacgtgtg gagcgacacc agcgagcgct acaccgacgc ccggatcatc 1800 ttcgtcgaca ccgaagagtc gaactggtca ttcgatcctg tccgccgaca gttnctactg 1860 gcaccgattc tt 1872

<210> 18 <211> 1482 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 89 <400> 18 cttcgccgaa acctgatgcc gaggaacagg gtgttcccgt gagcccgacg gcgtccgacc 60 ccgcgctcct cgccgagatc aggcagtcgc ttgatgcgac aaaagggttg accagcgtgc 120 acgtagcggt ccgaacaacc gggaaagtcg acagcttgct gggtattacc agtgccgatg 180 tcgacgtccg ggccaatccg ctcgcggcaa agggcgtatg cacctacaac gacgagcagg 240 gtgtcccgtt tcgggtacaa ggcgacaaca tctcggtgaa actgttcgac gactggagca 300 atctcggctc gatttctgaa ctgtcaactt cacgcgtgct cgatcctgcc gctggggtga 360 cgcagctgct gtccggtgtc acgaacctcc aagcgcaagg taccgaagtg atagacggaa 420 tttcgaccac caaaatcacc gggaccatcc ccgcgagctc tgtcaagatg cttgatcctg 480 gcgccaagag tgcaaggccg gcgaccgtgt ggattgccca ggacggctcg caccacctcg 540 tccgagcgag catcgacctc ggatccgggt cgattcagct cacgcagtcg aaatggaacg 600 aacccgtcaa cgtcgactag gccgaagttg cgtcgacgcg ttgctcgaaa cgcccttgtg 660 aacggtgtca acggcacccg aaaactgacc ccctgacggc atctgaaaat tgacccccta 720 gaccgggcgg ttggtggtta ttcttcggtg gttccggctg gtgggacgcg gccgaggtcg 780 cggtctttga gccggtagct gtcgcctttg agggcgacga cttcagcatg gtggacgagg 840 cggtcgatca tggcggcagc aacgacgtcg tcgccgccga aaacctcgcc ccaccggccg 900 aaggccttat tggacgtgac gatcaagctg gcccgctcat accgggagga caccagctgg 960 aagaagaggt tggcggcctc gggctcaaac ggaatgtaac cgacttcgtc aaccaccagg 1020 agcggatagc ggccaaaccg ggtgagttcg gcgtagatgc gcccggcgtg gtgagcctcg 1080 gcgaaccgtg ctacccattc ggcggcggtg gcgaacagca cccgatgacc ggcctgacac 1140 gcgcgtatcg ccaggccgac cgcaagatga gtcttcccgg tgccaggcgg ggcccaaaaa 1200 cacgacgtta tcgcgggcgg tgatgaaatc cagggtgccc agatgtgcga tggtgtcgcg 1260 tttgaggcca cgagcatgct caaagtcgaa ctcttccaac gacttccgaa ccgggaagcg 1320 ggcggcgcgg atgcggccct caccaccatg ggactcccgg gctgacactt cccgctgcag 1380 gcaggcggcc aggtattctt cgtggctcca gttctcggcg cgggcgcgat cggccagccg 1440 ggacactgac tcacgcaggg tgggagcttt caatgctctt gt 1482 90 <210> 19 <211> 876

<212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (204)..(204) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (343)..(343) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (378) . . (378) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (870)..(870) <223> Desconhecido 91 60 <400> 19 gaattcggca cgagccggcg atagcttctg ggccgcggcc gaccagatgg ctcgagggtt cgtgctcggg gccaccgccg ggcgcaccac cctgaccggt gagggcctgc aacacgccga 120 cggtcactcg ttgctgctgg acgccaccaa cccggcggtg gttgcctacg acccggcctt 180 cgcctacgaa atcggctaca tcgnggaaag cggactggcc aggatgtgcg gggagaaccc 240 ggagaacatc ttcttctaca tcaccgtcta caacgagccg tacgtgcagc cgccggagcc 300 ggagaacttc gatcccgagg gcgtgctggg gggtatctac cgntatcacg cggccaccga 360 gcaacgcacc aacaaggngc agatcctggc ctccggggta gcgatgcccg cggcgctgcg 420 ggcagcacag atgctggccg ccgagtggga tgtcgccgcc gacgtgtggt cggtgaccag 480 ttggggcgag ctaaaccgcg acggggtggt catcgagacc gagaagctcc gccaccccga 540 tcggccggcg ggcgtgccct acgtgacgag agcgctggag aatgctcggg gcccggtgat 600 cgcggtgtcg gactggatgc gcgcggtccc cgagcagatc cgaccgtggg tgccgggcac 660 atacctcacg ttgggcaccg acgggttcgg tttttccgac actcggcccg ccggtcgtcg 720 ttacttcaac accgacgccg aatcccaggt tggtcgcggt tttgggaggg gttggccggg 780 tcgacgggtg aatatcgacc cattcggtgc cggtcgtggg ccgcccgccc agttacccgg 840 attcgacgaa ggtggggggt tgcgcccgan taagtt 876

<210> 20 <211> 1021 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (664)..(664) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (1010)..(1010) <223> Desconhecido 92 <220> <221> característica_misc <222> (1014)..(1015) <223> Desconhecido <400> 20 atccccccgg gctgcaggaa ttcggcacga gagacaaaat tccacgcgtt aatgcaggaa 60 cagattcata acgaattcac agcggcacaa caatatgtcg cgatcgcggt ttatttcgac 120 agcgaagacc tgccgcagtt ggcgaagcat ttttacagcc aagcggtcga ggaacgaaac 180 catgcaatga tgctcgtgca acacctgctc gaccgcgacc ttcgtgtcga aattcccggc 240 gtagacacgg tgcgaaacca gttcgacaga ccccgcgagg cactggcgct ggcgctcgat 300 caggaacgca cagtcaccga ccaggtcggt cggctgacag cggtggcccg cgacgagggc 360 gatttcctcg gcgagcagtt catgcagtgg ttcttgcagg aacagatcga agaggtggcc 420 ttgatggcaa ccctggtgcg ggttgccgat cgggccgggg ccaacctgtt cgagctagag 480 aacttcgtcg cacgtgaagt ggatgtggcg ccggccgcat caggcgcccc gcacgctgcc 540 gggggccgcc tctagatccc tgggggggat cagcgagtgg tcccgttcgc ccgcccgtct 600 tccagccagg ccttggtgcg gccggggtgg tgagtaccaa tccaggccac cccgacctcc 660 cggnaaaagt cgatgtcctc gtactcatcg acgttccagg agtacaccgc ccggccctga 720 gctgccgagc ggtcaacgag ttgcggatat tcctttaacg caggcagtga gggtcccacg 780 gcggttggcc cgaccgccgt ggccgcactg ctggtcaggt atcggggggt cttggcgagc 840 aacaacgtcg gcaggagggg tggagcccgc cggatccgca gaccgggggg gcgaaaacga 900 catcaacacc gcacgggatc gatctgcgga ggggggtgcg ggaataccga accggtgtag 960 gagcgccagc agttgttttt ccaccagcga agcgttttcg ggtcatcggn ggcnnttaag 1020 t 1021

<210> 21 <211> 321 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 93 <220> mi sc <221> característica_ <222> (120) . . (120) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (179) . . (179) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (192) . . (192) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (219) . . (219) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (231) . . (231) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (236) . . (236) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (257)..(257) 94 <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (267)..(267) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (282) . . (282) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (285)..(285) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (291)..(291) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (294) . . (294) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica_misc <222> (296)..(296) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica misc <222> (303) .. (303) <223> Desconhecido <220> <221> característica__misc <222> (305)..(305) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (307)..(307) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (312)..(312) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (316)..(316) <223> Desconhecido <400> 21 cgtgccgacg aacggaagaa cacaaccatg aagatggtga aatcgatcgc cgcaggtctg 60 accgccgcgg ctgcaatcgg cgccgctgcg gccggtgtga cttcgatcat ggctggcggn 120 ccggtcgtat accagatgca gccggtcgtc ttcggcgcgc cactgccgtt ggacccggna 180 tccgcccctg angtcccgac cgccgcccag tggaccagnc tgctcaacag nctcgncgat 240 cccaacgtgt cgtttgngaa caagggnagt ctggtcgagg gnggnatcgg nggnancgag 300 ggngngnatc gncgancaca a 321 96 <210> 22 <211> 373

<212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (34)..(34) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (132)..(132) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (159)..(159) <223> Desconhecido <400> 22 tcttatcggt tccggttggc gacgggtttt gggngcgggt ggttaacccg ctcggccagc 60 cgatcgacgg gcgcggagac gtcgactccg atactcggcg cgcgctggag ctccaggcgc 120 cctcggtggt gnaccggcaa ggcgtgaagg agccgttgna gaccgggatc aaggcgattg 180 acgcgatgac cccgatcggc cgcgggcagc gccagctgat catcggggac cgcaagaccg 240 gcaaaaaccg ccgtctgtgt cggacaccat cctcaaacca gcgggaagaa ctgggagtcc 300 ggtggatccc aagaagcagg tgcgcttgtg tatacgttgg ccatcgggca agaaggggaa 360 cttaccatcg ccg 373

<210> 23 <211> 352 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 97 <220> <220> mi sc <221> característica_ <222> (272)..(272) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (296) . . (296) <223> Desconhecido <220> mi sc <221> caracterí st ica_ <222> (298)..(298) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica_ <222> (311)..(311) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (321) . . (321) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracterí st ica. <222> (329) . . (329) <223> Desconhecido <220> misc <221> caracteristica. <222> (335)..(335) 98 <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (347)..(347) <223> Desconhecido <400> 23 gtgacgccgt gatgggattc ctgggcgggg ccggtccgct ggcggtggtg gatcagcaac 60 tggttacccg ggtgccgcaa ggctggtcgt ttgctcaggc agccgctgtg ccggtggtgt 120 tcttgacggc ctggtacggg ttggccgatt tagccgagat caaggcgggc gaatcggtgc 180 tgatccatgc cggtaccggc ggtgtgggca tggcggctgt gcagctggct cgccagtggg 240 gcgtggaggt tttcgtcacc gccagccgtg gnaagtggga cacgctgcgc gccatngngt 300 ttgacgacga nccatatcgg ngattcccnc acatncgaag ttccgangga ga 352

<210> 24 <211> 726 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 99 <400> 24 gaaatccgcg ttcattccgt tcgaccagcg gctggcgata atcgacgaag tgatcaagcc 60 gcggttcgcg gcgctcatgg gtcacagcga gtaatcagca agttctctgg tatatcgcac 120 ctagcgtcca gttgcttgcc agatcgcttt cgtaccgtca tcgcatgtac cggttcgcgt 180 gccgcacgct catgctggcg gcgtgcatcc tggccacggg tgtggcgggt ctcggggtcg 240 gcgcgcagtc cgcagcccaa accgcgccgg tgcccgacta ctactggtgc ccggggcagc 300 ctttcgaccc cgcatggggg cccaactggg atccctacac ctgccatgac gacttccacc 360 gcgacagcga cggccccgac cacagccgcg actaccccgg acccatcctc gaaggtcccg 420 tgcttgacga tcccggtgct gcgccgccgc ccccggctgc cggtggcggc gcatagcgct 480 cgttgaccgg gccgcatcag cgaatacgcg tataaacccg ggcgtgcccc cggcaagcta 540 cgacccccgg cggggcagat ttacgctccc gtgccgatgg atcgcgccgt ccgatgacag 600 aaaataggcg acggttttgg caaccgcttg gaggacgctt gaagggaacc tgtcatgaac 660 ggcgacagcg cctccaccat cgacatcgac aaggttgtta cccgcacacc cgttcgccgg 720 atcgtg 726

<210> 25 <211> 580 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 25 cgcgacgacg acgaacgtcg ggcccaccac cgcctatgcg ttgatgcagg cgaccgggat 60 ggtcgccgac catatccaag catgctgggt gcccactgag cgaccttttg accagccggg 120 ctgcccgatg gcggcccggt gaagtcattg cgccggggct tgtgcacctg atgaacccga 180 atagggaaca ataggggggt gatttggcag ttcaatgtcg ggtatggctg gaaatccaat 240 ggcggggcat gctcggcgcc gaccaggctc gcgcaggcgg gccagcccga atctggaggg 300 agcactcaat ggcggcgatg aagccccgga ccggcgacgg tcctttggaa gcaactaagg 360 aggggcgcgg cattgtgatg cgagtaccac ttgagggtgg cggtcgcctg gtcgtcgagc 420 100 480 tgacacccga cgaagccgcc gcactgggtg acgaactcaa aggcgttact agctaagacc agcccaacgg cgaatggtcg gcgttacgcg cacaccttcc ggtagatgtc cagtgtctgc 540 tcggcgatgt atgcccagga gaactcttgg atacagcgct 580

<210> 26 <211> 160 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 26 60 120 160 aacggaggcg ccgggggttt tggcggggcc ggggcggtcg gcggcaacgg cggggccggc ggtaccgccg ggttgttcgg tgtcggcggg gccggtgggg ccggaggcaa cggcatcgcc ggtgtcacgg gtacgtcggc cagcacaccg ggtggatccg

<210> 27 <211> 272 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 27 gacaccgata cgatggtgat gtacgccaac gttgtcgaca cgctcgaggc gttcacgatc 60 cagcgcacac ccgacggcgt gaccatcggc gatgcggccc cgttcgcgga ggcggctgcc 120 aaggcgatgg gaatcgacaa gctgcgggta attcataccg gaatggaccc cgtcgtcgct 180 gaacgcgaac agtgggacga cggcaacaac acgttggcgt tggcgcccgg tgtcgttgtc 240 gcctacgagc gcaacgtaca gaccaacgcc cg 272

<210> 28 <211> 317 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 101 <400> 28 gcagccggtg gttctcggac tatctgcgca cggtgacgca gcgcgacgtg cgcgagctga 60 agcggatcga gcagacggat cgcctgccgc ggttcatgcg ctacctggcc gctatcaccg 120 cgcaggagct gaacgtggcc gaagcggcgc gggtcatcgg ggtcgacgcg gggacgatcc 180 gttcggatct ggcgtggttc gagacggtct atctggtaca tcgcctgccc gcctggtcgc 240 ggaatctgac cgcgaagatc aagaagcggt caaagatcca cgtcgtcgac agtggcttcg 300 cggcctggtt gcgcggg 317

<210> 29 <211> 182 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 29 gatcgtggag ctgtcgatga acagcgttgc cggacgcgcg gcggccagca cgtcggtgta 60 gcagcgccgg accacctcgc cggtgggcag catggtgatg accacgtcgg cctcggccac 120 cgcttcgggc gcgctacgaa acaccgcgac accgtgcgcg gcggcgccgg acgccgccgt 180 gg 182

<210> 30 <211> 308 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 102 <4Ο0> 30 gatcgcgaag tttggtgagc aggtggtcga cgcgaaagtc tgggcgcctg cgaagcgggt 60 cggcgttcac gaggcgaaga cacgcctgtc cgagctgctg cggctcgtct acggcgggca 120 gaggttgaga ttgcccgccg cggcgagccg gtagcaaagc ttgtgccgct gcatcctcat 180 gagactcggc ggttaggcat tgaccatggc gtgtaccgcg tgcccgacga tttggacgct 240 ccgttgtcag acgacgtgct cgaacgcttt caccggtgaa gcgctacctc atcgacaccc 300 acgtttgg 308

<210> 31 <211> 267 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 31 ccgacgacga gcaactcacg tggatgatgg tcggcagcgg cattgaggac ggagagaatc 60 cggccgaagc tgccgcgcgg caagtgctca tagtgaccgg ccgtagaggg ctcccccgat 120 ggcaccggac tattctggtg tgccgctggc cggtaagagc gggtaaaaga atgtgagggg 180 acacgatgag caatcacacc taccgagtga tcgagatcgt cgggacctcg cccgacggcg 240 tcgacgcggc aatccagggc ggtctgg 267

<210> 32 <211> 189 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 103 <400> 32 ctcgtgccga aagaatgtga ggggacacga tgagcaatca cacctaccga gtgatcgaga 60 tcgtcgggac ctcgcccgac ggcgtcgacg cggcaatcca gggcggtctg gcccgagctg 120 cgcagaccat gcgcgcgctg gactggttcg aagtacagtc aattcgaggc cacctggtcg 180 acggagcgg 189

<210> 33 <211> 851 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (767)..(767) <223> Desconhecido <400> 33 ctgcagggtg gcgtggatga gcgtcaccgc ggggcaggcc gagctgaccg ccgcccaggt 60 ccgggttgct gcggcggcct acgagacggc gtatgggctg acggtgcccc cgccggtgat 120 104 cgccgagaac cgtgctgaac tgatgattct gatagcgacc aacctcttgg ggcaaaacac 180 cccggcgatc gcggtcaacg aggccgaata cggcgagatg tgggcccaag acgccgccgc 240 gatgtttggc tacgccgcgg cgacggcgac ggcgacggcg acgttgctgc cgttcgagga 300 ggcgccggag atgaccagcg cgggtgggct cctcgagcag gccgccgcgg tcgaggaggc 360 ctccgacacc gccgcggcga accagttgat gaacaatgtg ccccaggcgc tgaaacagtt 420 ggcccagccc acgcagggca ccacgccttc ttccaagctg ggtggcctgt ggaagacggt 480 ctcgccgcat cggtcgccga tcagcaacat ggtgtcgatg gccaacaacc acatgtcgat 540 gaccaactcg ggtgtgtcga tgaccaacac cttgagctcg atgttgaagg gctttgctcc 600 ggcggcggcc gcccaggccg tgcaaaccgc ggcgcaaaac ggggtccggg cgatgagctc 660 gctgggcagc tcgctgggtt cttcgggtct gggcggtggg gtggccgcca acttgggtcg 720 ggcggcctcg gtacggtatg gtcaccggga tggcggaaaa tatgcanagt ctggtcggcg 780 gaacggtggt ccggcgtaag gtttaccccc gttttctgga tgcggtgaac ttcgtcaacg 840 gaaacagtta c 851 <210> 34 <211> 254 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 34 gatcgatcgg gcggaaattt ggaccagatt cgcctccggc gataacccaa tcaatcgaac 60 ctagatttat tccgtccagg ggcccgagta atggctcgca ggagaggaac cttactgctg 120 cgggcacctg tcgtaggtcc tcgatacggc ggaaggcgtc gacattttcc accgacaccc 180 ccatccaaac gttcgagggc cactccagct tgtgagcgag gcgacgcagt cgcaggctgc 240 gcttggtcaa gatc 254

<210> 35 <211> 408 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> 105 <221> característica_misc <222> (265)..(265) <223> Desconhecido <400> 35 cggcacgagg atcctgaccg aagcggccgc cgccaaggcg aagtcgctgt tggaccagga 60 gggacgggac gatctggcgc tgcggatcgc ggttcagccg ggggggtgcg ctggattgcg 120 ctataacctt ttcttcgacg accggacgct ggatggtgac caaaccgcgg agttcggtgg 180 tgtcaggttg atcgtggacc ggatgagcgc gccgtatgtg gaaggcgcgt cgatcgattt 240 cgtcgacact attgagaagc aaggnttcac catcgacaat cccaacgcca ccggctcctg 300 cgcgtgcggg gattcgttca actgataaaa cgctagtacg accccgcggt gcgcaacacg 360 tacgagcaca ccaagacctg accgcgctgg aaaàgcaact gagcgatg 408

<210> 36 <211> 181 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (125)..(125) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (143)..(143) <223> Desconhecido <400> 36 106 gcggtgtcgg ggaccggcgc gcggngccgg g cggatccggc taacggtggt caccaatggt gggtggttga gccggcggca ggngtcggcg acggcaacgg acgcctggtt ggtccggcgg cggggccggc gttcggggcc atttgtctac ggggccggcg 60 ggcgggtccg 120 ggcaacggcg 180 181

<210> 37 <211> 290 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (230)..(230) <223> Desconhecido 107 <22 0> <221> característica_misc <222> (266)..(266) <223> Desconhecido <400> 37 gcggtgtcgg cggatccggc gggtggttga acggcaacgg cggtgtcggc ggccggggcg 60 gcgacggcgt ctttgccggt gccggcggcc agggcggcct cggtgggcag ggcggcaatg 120 gcggcggctc caccggcggc aacggcggtc ttggcggcgc gggcggtggc ggaggcaacg 180 ccccggacgg cggcttcggt ggcaacggcg gtaagggtgg ccagggcggn attggcggcg 240 gcactcagag cgcgaccggc ctcggnggtg acggcggtga cggcggtgac 290 <210> 38 <211> 34 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (16)..(16) <223> Desconhecido <400> 38 gatccagtgg catggngggt gtcagtggaa gcat <210> 39 <211> 155 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 108 <220> <221> característica_misc <222> (141)..(141) <223> Desconhecido <220> <221> caracteristica__misc <222> (142)..(142) <223> η is a, c, g, or t <400> 39 gatcgctgct cgtccccccc ttgccgccga cgccaccggt cccaccgtta ccgaacaagc 60 tggcgtggtc gccagcaccc ccggcaccgc cgacgccgga gtcgaacaat ggcaccgtcg 120 tatccccacc attgccgccg gncccaccgg caccg 155 <210> 40 <211> 53 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (38) . . (38) <223> Desconhecido <400> 40 atggcgttca cggggcgccg gggaccgggc agcccggngg ggccgggggg tgg 53

<210> 41 <211> 132 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 109 <220> <221> característica_misc <222> (98)..(98) <223> Desconhecido <400> 41 gatccaccgc gggtgcagac ggtgcccgcg gcgccacccc gaccagcggc ggcaacggcg 60 gcaccggcgg caacggcgcg aacgccaccg tcgtcggngg ggccggcggg gccggcggca 120 agggcggcaa cg 132 <210> 42 <211> 132 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (14)..(14) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (19)..(19) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (41)..(41) <223> Desconhecido 110 <220> <221> característica_misc <222> (55)..(55) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (63)..(63) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (79)..(79) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (84)..(84) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (124)..(124) <223> Desconhecido <400> 42 gatcggcggc cggnacggnc ggggacggcg gcaagggcgg naacgggggc gccgnagcca 60 ccngccaaga atcctccgng tccnccaatg gcgcgaatgg cggacagggc ggcaacggcg 120 gcancggcgg ca 132 111 <210> 43 <211> 702

<212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (325)..(325) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (328) . . (328) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (348) . . (348) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (353) . . (353) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (442) . . (442) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (659) . . (659) 112 <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (679) . . (679) <223> Desconhecido <400> 43 cggcacgagg atcggtaccc cgcggcatcg gcagctgccg attcgccggg tttccccacc 60 cgaggaaagc cgctaccaga tggcgctgcc gaagtagggc gatccgttcg cgatgccggc 120 atgaacgggc ggcatcaaat tagtgcagga acctttcagt ttagcgacga taatggctat 180 agcactaagg aggatgatcc gatatgacgc agtcgcagac cgtgacggtg gatcagcaag 240 agattttgaa cagggccaac gaggtggagg ccccgatggc ggacccaccg actgatgtcc 300 ccatcacacc gtgcgaactc acggnggnta aaaacgccgc ccaacagntg gtnttgtccg 360 ccgacaacat gcgggaatac ctggcggccg gtgccaaaga gcggcagcgt ctggcgacct 420 cgctgcgcaa cgcggccaag gngtatggcg aggttgatga ggaggctgcg accgcgctgg 480 acaacgacgg cgaaggaact gtgcaggcag aatcggccgg ggccgtcgga ggggacagtt 540 cggccgaact aaccgatacg ccgagggtgg ccacggccgg tgaacccaac ttcatggatc 600 tcaaagaagc ggcaaggaag ctcgaaacgg gcgaccaagg cgcatcgctc gcgcactgng 660 gggatgggtg gaacacttnc accctgacgc tgcaaggcga cg 702

<210> 44 <211> 298 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 44 gaagccgcag cgctgtcggg cgacgtggcg gtcaaagcgg catcgctcgg tggcggtgga 60 ggcggcgggg tgccgtcggc gccgttggga tccgcgatcg ggggcgccga atcggtgcgg 120 cccgctggcg ctggtgacat tgccggctta ggccagggaa gggccggcgg cggcgccgcg 180 ctgggcggcg gtggcatggg aatgccgatg ggtgccgcgc atcagggaca agggggcgcc 240 aagtccaagg gttctcagca ggaagacgag gcgctctaca ccgaggatcc tcgtgccg 298 113 <210> 45

<211> 1058 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 45 cggcacgagg atcgaatcgc gtcgccggga gcacagcgtc gcactgcacc agtggaggag 60 ccatgaccta ctcgccgggt aaccccggat acccgcaagc gcagcccgca ggctcctacg 120 gaggcgtcac accctcgttc gcccacgccg atgagggtgc gagcaagcta ccgatgtacc 180 tgaacatcgc ggtggcagtg ctcggtctgg ctgcgtactt cgccagcttc ggcccaatgt 240 tcaccctcag taccgaactc ggggggggtg atggcgcagt gtccggtgac actgggctgc 300 cggtcggggt ggctctgctg gctgcgctgc ttgccggggt ggttctggtg cctaaggcca 360 agagccatgt gacggtagtt gcggtgctcg gggtactcgg cgtatttctg atggtctcgg 420 cgacgtttaa caagcccagc gcctattcga ccggttgggc attgtgggtt gtgttggctt 480 tcatcgtgtt ccaggcggtt gcggcagtcc tggcgctctt ggtggagacc ggcgctatca 540 ccgcgccggc gccgcggccc aagttcgacc cgtatggaca gtacgggcgg tacgggcagt 600 acgggcagta cggggtgcag ccgggtgggt actacggtca gcagggtgct cagcaggccg 660 cgggactgca gtcgcccggc ccgcagcagt ctccgcagcc tcccggatat gggtcgcagt 720 acggcggcta ttcgtccagt ccgagccaat cgggcagtgg atacactgct cagcccccgg 780 cccagccgcc ggcgcagtcc gggtcgcaac aatcgcacca gggcccatcc acgccaccta 840 ccggctttcc gagcttcagc ccaccaccac cggtcagtgc cgggacgggg tcgcaggctg 900 gttcggctcc agtcaactat tcaaacccca gcgggggcga gcagtcgtcg tcccccgggg 960 gggcgccggt ctaaccgggc gttcccgcgt ccggtcgcgc gtgtgcgcga agagtgaaca 1020 gggtgtcagc aagcgcggac gatcctcgtg ccgaattc 1058

<210> 46 <211> 327 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 114 <400> 46 cggcacgaga gaccgatgcc gctaccctcg cgcaggaggc aggtaatttc gagcggatct 60 ccggcgacct gaaaacccag atcgaccagg tggagtcgac ggcaggttcg ttgcagggcc 120 agtggcgcgg cgcggcgggg acggccgccc aggccgcggt ggtgcgcttc caagaagcag 180 ccaataagca gaagcaggaa ctcgacgaga tctcgacgaa tattcgtcag gccggcgtcc 240 aatactcgag ggccgacgag gagcagcagc aggcgctgtc ctcgcaaatg ggcttctgac 300 ccgctaatac gaaaagaaac ggagcaa 327

<210> 47 <211> 170 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (93)..(93) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (160)..(160) <223> Desconhecido <400> 47 cggtcgcgat gatggcgttg tcgaacgtga ccgattctgt accgccgtcg ttgagatcaa 60 ccaacaacgt gttggcgtcg gcaaatgtgc cgnacccgtg gatctcggtg atcttgttct 120 tcttcatcag gaagtgcaca ccggccaccc tgccctcggn tacctttcgg 170 115 60

<210> 48 <211> 127 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 48 120 127 gatccggcgg cacggggggt gccggcggca gcaccgctgg cgctggcggc aacggcgggg ccgggggtgg cggcggaacc ggtgggttgc tcttcggcaa cggcggtgcc ggcgggcacg gggccgt

<210> 49 <211> 81 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 49 60 81 cggcggcaag ggcggcaccg ccggcaacgg gagcggcgcg gccggcggca acggcggcaa cggcggctcc ggcctcaacg g

<210> 50 <211> 149 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (77)..(77) <223> Desconhecido 116 <2 2 0> <221> característica_misc <222> (113) .. (113) <223> Desconhecido <400> 50 gatcagggct ggccggctcc ggccagaagg gcggtaacgg aggagctgcc ggattgtttg 60 gcaacggcgg ggccggnggt gccggcgcgt ccaaccaagc cggtaacggc ggngccggcg 120 gaaacggtgg tgccggtggg ctgatctgg 149

<210> 51 <211> 355 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (67)..(67) <223> Desconhecido <400> 51 cggcacgaga tcacacctac cgagtgatcg agatcgtcgg gacctcgccc gacggtgtcg 60 acgcggnaat ccagggcggt ctggcccgag ctgcgcagac catgcgcgcg ctggactggt 120 tcgaagtaca gtcaattcga ggccacctgg tcgacggagc ggtcgcgcac ttccaggtga 180 ctatgaaagt cggcttccgc ctggaggatt cctgaacctt caagcgcggc cgataactga 240 ggtgcatcat taagcgactt ttccagaaca tcctgacgcg ctcgaaacgc ggttcagccg 300 acggtggctc cgccgaggcg ctgcctccaa aatccctgcg acaattcgtc ggcgg 355 117

<210> 52 <211> 999 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 52 atgcatcacc atcaccatca catgcatcag gtggacccca acttgacacg tcgcaaggga 60 cgattggcgg cactggctat cgcggcgatg gccagcgcca gcctggtgac cgttgcggtg 120 cccgcgaccg ccaacgccga tccggagcca gcgcccccgg tacccacaac ggccgcctcg 180 ccgccgtcga ccgctgcagc gccacccgca ccggcgacac ctgttgcccc cccaccaccg 240 gccgccgcca acacgccgaa tgcccagccg ggcgatccca acgcagcacc tccgccggcc 300 gacccgaacg caccgccgcc acctgtcatt gccccaaacg caccccaacc tgtccggatc 360 gacaacccgg ttggaggatt cagcttcgcg ctgcctgctg gctgggtgga gtctgacgcc 420 gcccacttcg actacggttc agcactcctc agcaaaacca ccggggaccc gccatttccc 480 ggacagccgc cgccggtggc caatgacacc cgtatcgtgc tcggccggct agaccaaaag 540 ctttacgcca gcgccgaagc caccgactcc aaggccgcgg cccggttggg ctcggacatg 600 ggtgagttct atatgcccta cccgggcacc cggatcaacc aggaaaccgt ctcgctcgac 660 gccaacgggg tgtctggaag cgcgtcgtat tacgaagtca agttcagcga tccgagtaag 720 ccgaacggcc agatctggac gggcgtaatc ggctcgcccg cggcgaacgc accggacgcc 780 gggccccctc agcgctggtt tgtggtatgg ctcgggaccg ccaacaaccc ggtggacaag 840 ggcgcggcca aggcgctggc cgaatcgatc cggcctttgg tcgccccgcc gccggcgccg 900 gcaccggctc ctgcagagcc cgctccggcg ccggcgccgg ccggggaagt cgctcctacc 960 ccgacgacac cgacaccgca gcggacctta ccggcctga 999

<210> 53 <211> 332 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 118 <400> 53

Met His His His His HÍS His Met HÍS Gin Val Asp Pro Asn Leu Thr 1 5 10 15 Arg Arg Lys Gly Arg Leu Ala Ala Leu Ala Ile Ala Ala Met Ala Ser 20 25 30 Ala Ser Leu Vai Thr vai Ala Val Pro Àla Thr Ala Asn Ala Asp Pro 35 40 45 Glu Pro Ala Pro Pro Vai Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr 50 55 60 Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro 65 70 75 80 Ala Ala Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gin pro Gly Asp Pro Asn Ala Ala 85 90 95 Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val ile Ala Pro 100 105 110 Asn Ala Pro Gin Pro Vai Arg Ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser 115 120 125 Phe Al a Leu Pro Al a Gly T rp Val Glu Ser Asp Al a Al a Hi S Phe Asp 130 135 140 Tyr Gly Ser Al a Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gly Gin Pro Pro Pro Vai Ala Asn Asp Thr Arg ile Val Leu Gly Arg 165 170 175 Leu Asp Gin Lys Leu Tyr Al a Ser Al a Gl u Al a Thr Asp ser Lys Al a 180 185 190 Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met pro Tyr Pro 195 200 205 Gly Thr Arg Ile Asn Gin Glu Thr val Ser Leu Asp Ala Asn Gly val 210 215 220 Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu val Lys Phe ser Asp pro Ser Lys 225 230 235 240 Pro Asn Gly Gin Ile Trp Thr Gly val Ile Gly Ser Pro Ala Ala Asn 245 250 255 119

Al a Pro Asp Al a Gly Pro Pro Gin Arg T rp Phe Val Val Trp Leu Gly 260 265 270 Thr Al a Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Al a Al a Lys Al a Leu Al a Glu 275 280 285 Ser Ile Arg Pro Leu Vai Al a Pro Pro Pro Al a Pro Al a Pro Al a Pro 290 295 300 Al a Glu Pro Al a Pro Al a Pro Al a Pro Al a Gly Glu Val Al a Pro Thr

Page 37 305 310 315 320

Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gin Arg Thr Leu Pro Ala 325 330 <210> 54 <211> 20 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (11) · · dl) <223> Desconhecido <400> 54 Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gin Val 15 10 15

Vai Ala Ala Leu 20 120 15 <210> 55 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 55 Ala Vai Glu Ser Gly Met 1 5 Leu Ala Leu Gly 10

<210> 56 <211> 19 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 56

Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15

Glu Gly Arg

<210> 57 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 57

Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro 15 10 15

<210> 58 <211> 14 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 121 <22 0>

<221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (12)..(12) <223> Desconhecido <400> 58

Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin Xaa Ala Vai 1 5 10 <210> 59 <211> 13 <212> PRT <213> Mycobacterium tubercul osis <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (8)..(8) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (10) . . (10) <223> Desconhecido <400> 59 Ala Gl u Glu Ser ile Ser Thr Xaa Glu Xaa 1 5 10 <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Mycobacterium tubercul osis <400> 60 122

Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Vai Pro Thr Ala Ala Ala Ala Pro Pro 1 5 10 15 Al a <210> 61 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (6)..(6) <223> Desconhecido <400> 61

Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly 1 5 10 15 <210> 62 <211> 30 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 62

Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Vai Pro Thr Ala Ala Gin Gin Thr Ser 15 10 15

Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Vai Ser Phe Ala Asp 20 25 30 123 <210> 63 <211> 24

<212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 63

Gly Cys Gly Asp Arg Ser Gly Gly Asn Leu Asp Gin lie Arg Leu Arg 15 10 15

Arg Asp Arg ser Gly Gly Asn Leu 20

<210> 64 <211> 187 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (187)..(187) <223> Desconhecido <400> 64

Thr Gly Ser Leu Asn Gl n Thr Hi S Asn Arg Arg Al a Asn Glu Arg Lys 1 5 10 15 Asn Thr Thr Met Lys Met vai Lys Ser ile Al a Al a Gly Leu Thr Al a 20 25 30 Al a Al a Al a ile Gly Al a Al a Al a Al a Gly Vai Thr Ser ile Met Al a 35 40 45 Gly Gly Pro Vai vai Tyr Gin Met Gin Pro Vai Vai Phe Gly Al a Pro 50 55 60 124

Leu Pro Leu Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Vai Pro Thr Ala Ala Gin 65 70 75 80 Leu Thr Ser Leu Leu Asn Ser Leu Al a Asp pro Asn vai Ser phe Al a 85 90 95 Asn Lys Gly Ser Leu Vai Glu Gly Gly Ile Gly Gly Thr Glu Al a Arg 100 105 110 ile Al a Asp Hi S Lys Leu Lys Lys Ala Àla GÍu Hi s Gly Asp Leu Pro 115 120 125 Leu Ser Phe Ser Vai Thr Asn lie Gin Pro Ala Ala Ala Gly Ser Ala 130 135 140 Thr Al a Asp vai Ser vai Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Vai Thr 145 150 155 160 Gin Asn vai Thr Phe Vai Asn Gin Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Ala 165 170 175 Ser Al a Met Glu Leu Leu Gin Ala Ala Gly Xaa 180 185

<210> 65 <211> 148 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 65

Asp Glu Vai Thr Vai Glu Thr Thr Ser Val Phe Arg Ala Asp Phe Leu 1 5 10 15 Ser Glu Leu Asp Al a Pro Al a Gin Al a Gly Thr Glu Ser Al a val Ser 20 25 30 Gly Vai Glu Gly Leu Pro Pro Gly Ser Ala Leu Leu Val Val Lys Arg 35 40 45 Gly Pro Asn Al a Gly Ser Arg Phe Leu Leu Asp Gin Al a Ile Thr Ser 50 55 60 125

Ala Gly Arg Hi s Pro Asp Ser Asp Ile Phe Leu Asp Asp Val Thr Val 65 70 75 80 Ser Arg Arg Hi s Al a Glu Phe Arg Leu Glu Asn Asn Glu Phe Asn Val 85 90 95 Vai Asp val Gly Ser Leu Asn Gly Thr Tyr Val Asn Arg Glu Pro val 100 105 110 Asp Ser Al a Val Leu Al a Asn Gly Asp Glu Val Gin ile Gly Lys Leu 115 120 12 5 Arg Leu Val Phe Leu Thr Gly Pro Lys Gin Gly Glu Asp Asp Gly Ser 130 135 140 Thr Gly Gly Pro 145

<210> 66 <211> 230 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (181) . . (181) <223> Desconhecido <400> 6 6

Thr Ser Asn Arg Pro Al a Arg Arg Gly Arg Arg Al a Pro Arg Asp Thr 1 5 10 15 Gly Pro Asp Arg Ser Al a Ser Leu Ser Leu Val Arg Hi s Arg Arg Gl n 20 25 30 Gin Arg Asp Ala Leu Cys Leu Ser Ser Thr Gin Ile Ser Arg Gin Ser 35 40 45 126

Asn Leu Pro Pro Ala Al a Gly Gly Ala Ala Asn Tyr Ser Arg Arg Asn 50 55 60 Phe Asp Val Arg ile Lys ile Phe Met Leu val Thr Al a val val Leu 65 70 75 80 Leu cys Cys Ser Gly val Al a Thr Ala Ala Pro Lys Thr Tyr cys Glu 85 90 95 Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly Gl n Ala Cys Gl n ile Gl n Met Ser 100 105 110 Asp Pro Al a Tyr Asn ile Asn ile ser Leu Pro Ser Tyr Tyr Pro Asp 115 120 125 Gin Lys Ser Leu Glu Asn Tyr lie Ala Gin Thr Arg Asp Lys Phe Leu 130 135 140 Ser Al a Al a Thr Ser Ser Thr pro Arg Glu Ala Pro Tyr Glu Leu Asn 145 150 155 160 ile Thr Ser Ala Thr Tyr Gin ser Ala Ile Pro Pro Arg Gly Thr Gin 165 170 175 Al a vai Val Leu Xaa Val Tyr Hi s Asn Ala Gly Gly Thr Hi S Pro Thr 180 185 190 Thr Thr Tyr Lys Ala Phe Asp Trp Asp Gin Ala Tyr Arg Lys Pro Ile 195 200 205 Thr Tyr Asp Thr Leu Trp Gl n Ala Asp Thr Asp Pro Leu Pro Val val 210 215 220 Phe Pro lie val Al a Arg 225 230 <210> 67 <211> 132

<212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 127 <4Ο0> 67

Thr Al a Al a Ser Asp Asn Phe Gin Leu Ser Gl n Gly Gly Gl n Gly Phe 1 5 10 15 Al a Ile Pro Ile Gly Gin Al a Met Al a Ile Al a Gly Gin Ile Arg Ser 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Pro Thr val Hi S Ile Gly Pro Thr Al a Phe Leu Gly 35 40 45 Leu Gly val Val Asp Asn Asn Gly Asn Gly Al a Arg val Gin Arg Val 50 55 60 vai Gly Ser Al a Pro Al a Al a Ser Leu Gly ile Ser Thr Gly Asp val 65 70 75 80 ile Thr Al a Val Asp Gly Al a Pro ile Asn Ser Al a Thr Al a Met Al a 85 90 95 Asp Al a Leu Asn Gly Hi s Hi s Pro Gly Asp Val Ile Ser Val Asn T rp 100 105 110 Gl n Thr Lys Ser Gly Gly Thr Arg Thr Gly Asn Val Thr Leu Al a Glu 115 120 125

Gly Pro Pro Ala 130

<210> 68 <211> 100 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (64)..(64) <223> Desconhecido 128 <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (75)..(75) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (79)..(79) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (85)..(85) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (88)..(89) <223> Desconhecido <400> 68

Vai Pro Leu Arg Ser Pro Ser Met 1 5 Al a Gl η Arg Asn Pro Vai ile Arg 20 Pro Arg Lys Tyr Arg Ser Met Pro 35 40 Met Al a Arg Vai Arg Arg Arg Al a 50 55

Ser Pro Ser Lys Cys Leu Al a Al a 10 15 Arg Arg Arg Leu Ser Asn Pro Pro 25 30 Ser Pro Al a Thr Al a Ser Al a Gly 45 ile T rp Arg Gly Pro Al a Thr Xaa 60 129

Ser 65 Ala Gly Met Al a Arg 70 Vai Arg Arg T rp Xaa 75 Vai lie Gin Ser Thr Xaa 85 lie Arg Xaa Xaa Gly 90 Pro Phe

Met Pro Xaa Vai 80

Asp Asn Arg Gly 95

Ser Glu Arg Lys 100

<210> 69 <211> 163 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (39)..(39) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (41)..(41) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (45) .. (45) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (147)..(147) <223> Desconhecido 130 <4 Ο Ο> 6 9

Met Thr Asp Asp ile Leu Leu lie Asp Thr Asp Glu Arg Val Arg Thr 1 5 10 15 Leu Thr Leu Asn Arg Pro Gin Ser Arg Àsn Al a Leu Ser Al a Al a Leu 20 25 30 Arg Asp Arg Phe Phe Ala Xaa Leu Xaa Asp Ala Glu Xaa Asp Asp Asp 35 40 45 ile Asp vai vai ile Leu Thr Gly Ala Asp pro vai Phe cys Ala Gly 50 55 60 Leu Asp Leu Lys Vai Ala Gly Arg Ala Asp Arg Ala Ala Gly Hi s Leu 65 70 75 80 Thr Ala Vai Gly Gly Hi S Asp Gin Ala Gly Asp Arg Arg Asp Gin Arg 85 90 95 Arg Arg Gly Hi s Arg Arg Ala Arg Thr Gly Al a Vai Leu Arg Hi S Pro 100 105 110 Asp Arg Leu Arg Al a Arg Pro Leu Arg Arg Hi s Pro Arg Pro Gly Gly 115 120 125 Al a Al a Al a Hi s Leu Gly Thr Gin cys vai Leu Al a Al a Lys Gly Arg 130 135 140 Hi S Arg Xaa Gly Pro Vai Asp Glu Pro Asp Arg Arg Leu Pro val Arg 145 150 155 160

Asp Arg Arg

<210> 70 <211> 344 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 131 <400> 70

Met Lys Phe vai Asn Hi s ile Glu Pro Vai Al a Pro Arg Arg Ala Gly 1 5 10 15 Gly Ala Vai Ala Glu Vai Tyr Ala Glu Ala Arg Arg Glu Phe Gly Arg 20 25 30 Leu ΡΓΟ Glu Pro Leu Al a Met Leu Ser Pro Asp Glu Gly Leu Leu Thr 35 40 45 Ala Gly Trp Ala Thr Leu Arg Glu Thr Leu Leu Vai Gly Gin vai Pro 50 55 60 Arg Gly Arg Lys Glu Al a Vai Ala Ala Ala vai Al a Ala Ser Leu Arg 65 70 75 80 Cys Pro Trp Cys Vai Asp Ala Hi s Thr Thr Met Leu Tyr Ala Ala Gly 85 90 95

Gin Thr Asp Thr Ala Ala Ala ile Leu Ala Gly Thr Ala Pro Ala Ala 100 105 110 Gly ASP Pro Asn Al a Pro Tyr vai Ala Trp Al a Ala Gly Thr Gly Thr 115 120 125 Pro Ala Gly Pro Pro Ala Pro Phe Gly Pro Asp Val Al a Ala Glu Tyr 130 135 140 Leu Gly Thr Al a Vai Gin Phe Hi s Phe ile Al a Arg Leu Val Leu val 145 150 155 160 Leu Leu Asp Glu Thr Phe Leu Pro Gly Gly Pro Arg Al a Gin Gin Leu 165 170 175 Met Arg Arg Ala Gly Gly Leu val Phe Ala Arg Lys val Arg Ala Glu 180 185 190 Hi S Arg Pro Gly Arg Ser Thr Arg Arg Leu Glu Pro Arg Thr Leu Pro 195 200 205 Asp Asp Leu Ala Trp Al a Thr Pro Ser Glu Pro ile Ala Thr Ala Phe 210 215 220 Ala Ala Leu Ser His Hi s Leu Asp Thr Ala Pro Hi S Leu Pro Pro Pro 225 230 235 240 132

Thr Arg Gin Val Val Arg Arg val Val Gly Ser Trp Hi s Gly Glu Pro 245 250 255 Met Pro Met Ser Ser Arg T rp Thr Asn Glu Hi s Thr Al a Glu Leu Pro 260 265 270 Al a Asp Leu Hi S Al a Pro Thr Arg Leu Al a Leu Leu Thr Gly Leu Al a 275 280 285 Pro Hi s Gin Val Thr Asp Asp Asp Val Al a Ala Al a Arg Ser Leu Leu 290 295 300 Asp Thr Asp Al a Al a Leu Val Gly Al a Leu Al a Trp Al a Al a Phe Thr 305 310 315 320 Al a Al a Arg Arg ile Gly Thr Trp ile Gly Al a Al a Al a Glu Gly Gin 325 330 335 Vai Ser Arg Gin Asn Pro Thr Gly 340

<210> 71 <211> 485 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 71

Asp Asp Pro Asp Met Pro Gly Thr Val Al a Lys Al a Val Al a Asp Al a 1 5 10 15 Leu Gly Arg Gly Ile Al a Pro Val Glu Asp ile Gin Asp Cys Val Glu 20 25 30 Al a Arg Leu Gly Glu Al a Gly Leu Asp Asp Val Al a Arg Val Tyr Ile 35 40 45 Ile Tyr Arg Gin Arg Arg Al a Glu Leu Arg Thr Al a Lys Al a Leu Leu 50 55 60 Gly Val Arg Asp Glu Leu Lys Leu Ser Leu Al a Al a Val Thr Val Leu 65 70 75 80 133

Arg Glu Arg Tyr Leu Leu Hi S Asp Glu Gin Gly Arg Pro Ala Glu Ser 85 90 95 Thr Gly Glu Leu Met Asp Arg Ser Ala Arg Cys Val Ala Ala Ala Glu 100 105 110 Asp Gin Tyr Glu Pro Gly Ser Ser Arg Arg Trp Ala Glu Arg Phe Ala 115 120 125 Thr Leu Leu Arg Asn Leu Glu Phe Leu Pro Asn Ser Pro Thr Leu Met 130 135 140 Asn Ser Gly Thr Asp Leu Gly Leu Leu Ala Gly Cys Phe Val Leu Pro 145 150 155 160 ile Glu Asp Ser Leu Gin Ser ile Phe Ala Thr Leu Gly Gin Ala Ala 165 170 175 Glu Leu Gin Arg Ala Gly Gly Gly Thr Gly Tyr Ala Phe Ser Hi S Leu 180 185 190 Arg Pro Al a Gly Asp Arg Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Ala ser Gly 195 200 205 Pro Val Ser Phe Leu Arg Leu Tyr Asp Ser Al a Al a Gly Val val Ser 210 215 220 Met Gly Gly Arg Arg Arg Gly Ala Cys Met Ala Val Leu Asp Val Ser 225 230 235 240 Hi S Pro Asp Ile Cys Asp Phe Val Thr Ala Lys Al a Glu Ser Pro Ser 245 250 255 Glu Leu Pro Hi s Phe Asn Leu Ser Val Gly Val Thr Asp Ala Phe Leu 260 265 ' 270

Arg Ala Vai Glu Arg Asn Gly Leu His Arg Leu vai Asn Pro Arg Thr 275 280 285

Gly Lys Ile vai Ala Arg Met Pro Ala Ala Glu Leu Phe Asp Ala Ile 290 295 300

Cys Lys Ala Ala His Ala Gly Gly Asp Pro Gly Leu vai Phe Leu Asp 305 310 315 320

Thr Ile Asn Arg Ala Asn Pro Vai Pro Gly Arg Gly Arg ile Glu Ala 325 330 335 134 pro Leu Leu Pro Tyr Glu ser cys Asn 345 350 Arg Met Leu Al a Asp Gly Arg Val Asp 360 365 Ala Gly val Al a Val Arg Phe Leu Asp 380 Tyr Pro Phe Pro Glu Leu Gly Glu Al a 395 400 Gly Leu Gly Val Met Gly Leu Al a Glu 410 415 pro Tyr Asp Ser Glu Glu Al a Val Arg 425 430 Arg ile Gin Gin Al a Al a HÍ S Thr Al a 440 445 Arg Gly Al a Phe Pro Al a Phe Thr Asp 460 Pro Arg Arg Asn Al a Gin Val Thr Ser 475 480

Thr Asn Pro Cys Gly Glu Val 340 Leu Gly Ser Ile Asn Leu Al a 355 Trp Asp Arg Leu Glu Glu Val 370 375 Asp Val Ile Asp Val Ser Arg 385 390 Ala Arg Ala Thr Arg Lys ile 405 Leu Leu Ala Ala Leu Gly ile 420 Leu Ala Thr Arg Leu Met Arg 435 Ser Arg Arg Leu Ala Glu Glu 450 455 Ser Arg Phe Ala Arg Ser Gly 465 470 val Al a Pro Thr Gly 485

<210> 72 <211> 267 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 72

Gly Vai lie Vai Leu Asp Leu Glu Pro Arg Gly Pro Leu Pro Thr Glu 15 10 15 ile Tyr Trp Arg Arg Arg Gly Leu Ala Leu Gly ile Ala Vai vai Vai 20 25 30 135

Vai Gly Ile Ala Val Ala Ile val Ile Ala Phe Val Asp Ser ser Ala 35 40 45 Gly Al a Lys Pro Val Ser Ala Asp Lys Pro Ala Ser Ala Gl n ser Hi s 50 55 60 Pro Gly ser Pro Al a Pro Gin Ala Pro Gin Pro Ala Gly Gin Thr Glu 65 70 75 80 Gly Asn Ala Al a Al a Ala Pro Pro Gin Gly Gin Asn Pro Glu Thr Pro 85 90 95 Thr Pro Thr Al a Al a Val Gin Pro Pro Pro val Leu Lys Glu Gly Asp 100 105 110 Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu Al a Val Lys Gly Leu Thr Asn Al a Pro 115 120 125 Gin Tyr Tyr val Gly Asp Gin Pro Lys Phe Thr Met Val Val Thr Asn 130 135 140 ile Gly Leu val Ser Cys Lys Arg Asp val Gly Al a Al a Val Leu Ala 145 150 155 160 Al a Tyr Val Tyr Ser Leu Asp Asn Lys Arg Leu Trp Ser Asn Leu Asp 165 170 175 Cys Ala Pro Ser Asn Glu Thr Leu val Lys Thr Phe Ser Pro Gly Glu 180 185 190 Gin Vai Thr Thr Al a val Thr Trp Thr Gly Met Gly Ser Ala Pro Arg 195 200 205 Cys Pro Leu Pro Arg Pro Ala Ile Gly pro Gly Thr Tyr Asn Leu Val 210 215 220 Vai Gin Leu Gly Asn Leu Arg Ser Leu Pro val Pro Phe ile Leu Asn 225 230 235 240 Gin Pro Pro Pro Pro pro Gly Pro val Pro Ala Pro Gly pro Ala Gin 245 250 255 Al a Pro Pro Pro Glu Ser Pro Ala Gin Gly Gly 260 265 136

<210> 73 <211> 97 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 73

Leu lie Ser Thr Gly Lys Al a Ser Hi s Al a Ser Leu Gly Val Gin Val 1 5 10 15 Thr Asn Asp Lys Asp Thr Pro Gly Al a Lys lie Val Glu Val Val Al a 20 25 30 Gly Gly Ala Ala Al a Asn Ala Gly Val Pro Lys Gly Val Val Val Thr 35 40 45 Lys Val Asp Asp Arg Pro lie Asn Ser Al a Asp Al a Leu Val Al a Al a 50 55 60 Vai Arg Ser Lys Al a Pro Gly Al a Thr Val Al a Leu Thr Phe Gin Asp 65 70 75 80 Pro Ser Gly Gly Ser Arg Thr Val Gin Val Thr Leu Gly Lys Al a Glu 85 90 95

Gin <210> 74 <211> 364 <212> PRT <213> Mycobact :eri um tuberculosi .s <400> 74 Gly Al a Ala Val Ser Leu Leu Ala Ala Gly Thr Leu Val Leu Thr Ala 1 5 10 15 cys Gl y Gly Gly Thr Asn Ser Ser Ser Ser Gly Al a Gly Gly Thr Ser 20 25 30 137

Gly Ser Val Hi s cys Gly ' Gly f Lys ; Lys Gli j Leu Hi: s Se r Se r Gl y Ser 35 40 45 Thr Ai a Gl n Glu Asn Al a i Met Glu 1 Gl 1 η Phe val Ty r Al a Ty r Val Arg 50 55 60 Ser Cys Pro Gly Tyr Thr 1 Leu Asp ) Tyi r Asi Ί Al; a Asi n Gl; y Se r Gl y Al a 65 70 75 80 Gly Val Thr Gl n Phe Leu i Asn Asr 1 Gl 1 j Thi r Asp Phe Al a Gl y Se r Asp 85 90 95 Val Pro Leu Asn Pro ' Ser Thr ’ Gly ' Gll 1 Pro Asp Arg Se r Al a Gl u Arg 100 105 110 Cys Gly Ser Pro Al a . Trp i Asp Leu i Pro Thi r Val Phe Gl y Pro il e Al a 115 120 125 Ile Thr Tyr Asn Ile Lys Gly Val Ser Thr Leu Asn Leu Asp Gly Pro 130 135 140 Thr Thr Al a Lys Ile Phe Asn Gly Thr Ile Thr Val Trp Asn Asp Pro 145 150 155 160 Gin Ile Gin Al a Leu Asn Ser Gly Thr Asp Leu Pro Pro Thr Pro Ile 165 170 175 Ser Val ile Phe Arg Ser Asp Lys Ser Gly Thr Ser Asp Asn Phe Gin 180 185 190 Lys Tyr Leu Asp Gly Val Ser Asn Gly Al a Trp Gly Lys Gly Ala Ser 195 200 205 Glu Thr Phe Ser Gly Gly val Gly val Gly Al a Ser Gly Asn Asn Gly 210 215 220 Thr Ser Al a Leu Leu Gl n Thr Thr Asp Gly Ser Ile Thr Tyr Asn Glu 225 230 235 240 Trp Ser Phe Al a val Gly Lys Gl n Leu Asn Met Al a Gin ile ile Thr 245 250 255 Ser Al a Gly Pro Asp Pro Val Al a ile Thr Thr Glu Ser val Gly Lys 260 265 270 138

Thr ile Ala Gly Ala Lys ile Met Gly Gin Gly Asn Asp Leu vai Leu 275 280 285

Asp Thr Ser Ser Phe Tyr Arg Pro Thr Gin Pro Gly Ser Tyr Pro ile 290 295 300

Vai Leu Ala Thr Tyr Glu ile vai cys Ser Lys Tyr Pro Asp Ala Thr 305 310 315 320

Thr Gly Thr Ala Vai Arg Ala Phe Met Gin Ala Ala Ile Gly Pro Gly 325 330 335

Gin Glu Gly Leu Asp Gin Tyr Gly Ser Ile Pro Leu Pro Lys Ser Phe 340 345 350

Gin Ala Lys Leu Ala Ala Ala Vai Asn Ala ile Ser 355 360 <210> 75 <211> 309

<212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 75

Gin Ala Ala Ala Gly Arg Ala Vai Arg Arg Thr Gly His Ala Glu Asp 1 5 10 " 15

Gin Thr His Gin Asp Arg Leu His His Gly Cys Arg Arg Ala Ala Vai 20 25 30

Vai vai Arg Gin Asp Arg Ala Ser Vai Ser Ala Thr ser Ala Arg Pro 35 40 45

Pro Arg Arg His Pro Ala Gin Gly His Arg Arg Arg Vai Ala Pro Ser 50 55 60

Gly Gly Arg Arg Arg Pro His Pro His His vai Gin Pro Asp Asp Arg 65 70 75 80

Arg Asp Arg Pro Ala Leu Leu Asp Arg Thr Gin Pro Ala Glu His Pro 85 90 95 139

Asp Pro Hi S Arg Arg Gly Pro Ala Asp Pro Gly Arg val Arg Gly Arg 100 105 110 Gly Arg Leu Arg Arg Val Asp Asp Gly Arg Leu Gin Pro Asp Arg Asp 115 120 125 Ala Asp Hi S Gly Al a Pro val Arg Gly Arg Gly Pro Hi S Arg Gly Val 130 135 140 Gin Hi S Arg Gly Gly Pro val Phe val Arg Arg Val Pro Gly Val Arg 145 150 155 160 Cys Ala Hi s Arg Arg Gly Hi s Arg Arg Val Ala Ala Pro Gly Gin Gly 165 170 175 Asp Val Leu Arg Al a Gly Leu Arg Val Glu Arg Leu Arg Pro Val Al a 180 185 190 Ala Vai Glu Asn Leu Hi S Arg Gly Ser Gin Arg Ala Asp Gly Arg Val 195 200 205 Phe Arg Pro ile Arg Arg Gly Al a Arg Leu Pro Ala Arg Arg Ser Arg 210 215 220 Ala Gly Pro Gin Gly Arg Leu Hi s Leu Asp Gly Al a Gly Pro Ser Pro 225 230 235 240 Leu Pro Ala Arg Al a Gly Gin Gin Gin Pro Ser Ser Al a Gly Gly Arg 245 250 255 Arg Al a Gly Gly Al a Glu Arg Ala Asp Pro Gly Gin Arg Gly Arg Hi s 260 265 270 Hi s Gin Gly Gly Hi s Asp Pro Gly Arg Gl n Gly Al a Gin Arg Gly Thr 275 280 285 Al a Gly Val Al a Hi s Al a Al a Al a Gly Pro Arg Arg Al a Al a Val Arg 290 295 300 Asn Arg Pro Arg Arg 140 305

<210> 76 <211> 580 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 76

Ser Ala Vai Trp Cys Leu Asn Gly Phe Thr Gly Arg Hi S Arg Hi S Gly 1 5 10 15 Arg cys Arg Val Arg Ala Ser Gly Trp Arg Ser Ser Asn Arg Trp cys 20 25 30 Ser Thr Thr Ala Asp Cys Cys Ala Ser Lys Thr Pro Thr Gin Ala Ala 35 40 45 Ser Pro Leu Glu Arg Arg Phe Thr Cys Cys Ser Pro Al a Val Gly Cys 50 55 60 Arg Phe Arg Ser Phe Pro Val Arg Arg Leu Ala Leu Gly Ala Arg Thr 65 70 75 80 Ser Arg Thr Leu Gly val Arg Arg Thr Leu Ser Gin Trp Asn Leu Ser 85 90 95 Pro Arg Al a Gin Pro Ser Cys Al a val Thr val Glu Ser Hi s Thr Hi s 100 105 110 Ala Ser Pro Arg Met Ala Lys Leu Ala Arg Val val Gly Leu Val Gin 115 120 125 Glu Glu Gl n Pro Ser Asp Met Thr Asn Hi S Pro Arg Tyr ser Pro Pro 130 135 140 Pro Gin Gl n Pro Gly Thr Pro Gly Tyr Al a Gin Gly Gin Gin Gin Thr 145 150 155 160 Tyr ser Gl n Gin Phe Asp Trp Arg Tyr Pro Pro Ser Pro Pro Pro Gl n 165 170 175 Pro Thr Gin Tyr Arg Gin Pro Tyr Glu Ala Leu Gly Gly Thr Arg Pro 180 185 190 Gly Leu ile Pro Gly Val ile Pro Thr Met Thr Pro Pro Pro Gly Met 195 200 205 141 val Arg Gin Arg Pro Arg Al a Gly Met Leu Al a Ile Gly Ala Val Thr 210 215 220 ile Al a val val Ser Al a Gly ile Gly Gly Al a Al a Al a Ser Leu val 225 230 235 240 Gly Phe Asn Arg Al a Pro Al a Gly Pro Ser Gly Gly Pro Val Al a Al a 245 250 255 Ser Al a Al a Pro Ser Ile Pro Al a Al a Asn Met Pro Pro Gly Ser Val 260 265 270 Glu Gin Val Ala Al a Lys Val Val Pro Ser Val Val Met Leu Glu Thr 275 280 285 Asp Leu Gly Arg Gl n Ser Glu Glu Gly Ser Gly ile ile Leu Ser Al a 290 295 300 Glu Gly Leu ile Leu Thr Asn Asn Hi S val ile Al a Al a Al a Al a Lys 305 310 315 320 Pro Pro Leu Gly Ser Pro Pro Pro Lys Thr Thr Val Thr Phe Ser Asp 325 330 335 Gly Arg Thr Al a Pro Phe Thr Val val Gly Al a Asp Pro Thr Ser Asp 340 345 350 Ile Al a Val Val Arg Val Gin Gly Val Ser Gly Leu Thr Pro Ile Ser 355 360 365 Leu Gly Ser Ser Ser Asp Leu Arg val Gly Gl n Pro Val Leu Al a ile 370 375 380 Gly Ser Pro Leu Gly Leu Glu Gly Thr Val Thr Thr Gly ile Val Ser 385 390 395 400 Al a Leu Asn Arg Pro val Ser Thr Thr Gly Glu Al a Gly Asn Gl n Asn 405 410 415 Thr Val Leu Asp Al a Ile Gin Thr Asp Al a Al a Ile Asn Pro Gly Asn 420 425 430 Ser Gly Gly Al a Leu val Asn Met Asn Al a Gl n Leu val Gly val Asn 435 440 445 Ser Al a Ile Al a Thr Leu Gly Al a Asp Ser Al a Asp Al a Gin Ser Gly 450 455 460 ±4Ζ

Ser ile Gly Leu Gly Phe Al a ile Pro Val Asp Gin Al a Lys Arg ile 465 470 475 480 Al a Asp Glu Leu lie Ser Thr Gly Lys Al a Ser Hi s Al a Ser Leu Gly 485 490 495 Vai Gin Val Thr Asn Asp Lys Asp Thr Pro Gly Al a Lys Ile Val Glu 500 505 510 Vai Val Al a Gly Gly Al a Al a Al a Asn Al a Gly Val Pro Lys Gly Val 515 520 525 Vai Vai Thr Lys Val Asp Asp Arg Pro Ile Asn Ser Al a Asp Al a Leu 530 535 540 Vai Al a Al a Val Arg Ser Lys Al a Pro Gly Al a Thr Val Al a Leu Thr 545 550 555 560 Phe Gl n Asp Pro Ser Gly Gly Ser Arg Thr Val Gl n Val Thr Leu Gly 565 570 575 Lys Al a Glu Gin 580

<210> 77 <211> 233 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 77

Met Asn Asp Gly Lys Arg Al a Val Thr Ser Al a val Leu Val Val Leu 1 5 10 15 Gly Al a Cys Leu Al a Leu T rp Leu Ser Gly Cys Ser Ser Pro Lys Pro 20 25 30 Asp Al a Glu Glu Gin Gly Val Pro Val Ser Pro Thr Al a Ser Asp Pro 35 40 45 Al a Leu Leu Al a Glu Ile Arg Gin Ser Leu Asp Al a Thr Lys Gly Leu 50 55 60 143

Thr Ser Vai Hi s Val Ala Val Arg Thr Thr Gly Lys Val Asp Ser Leu 65 70 75 80 Leu Gly lie Thr Ser Al a Asp Val Asp Val Arg Al a Asn Pro Leu Al a 85 90 95 Al a Lys Gly Val cys Thr Tyr Asn Asp Glu Gin Gly Val Pro Phe Arg 100 105 110 Vai Gin Gly Asp Asn Ile Ser Val Lys Leu Phe Asp Asp T rp Ser Asn 115 120 12 5 Leu Gly Ser ile Ser Glu Leu Ser Thr Ser Arg Val Leu Asp Pro Al a 130 135 140 Al a Gly Val Thr Gin Leu Leu Ser Gly val Thr Asn Leu Gin Al a Gin 145 150 155 160 Gly Thr Glu Val lie Asp Gly ile Ser Thr Thr Lys ile Thr Gly Thr 165 170 175 lie Pro Al a Ser Ser Val Lys Met Leu Asp Pro Gly Al a Lys Ser Al a 180 185 190 Arg Pro Al a Thr Val Trp Ile Al a Gin Asp Gly Ser Hi s Hi S Leu Val 195 200 205 Arg Al a Ser lie Asp Leu Gly Ser Gly Ser ile Gin Leu Thr Gin Ser 210 215 220 Lys T rp Asn Glu Pro Val Asn Val Asp 225 230

<210> 78 <211> 66 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 144 <4Ο0> 7

Vai lie Asp lie lie Gly Thr ser Pro Thr ser Trp Glu Gin Ala Ala 15 10 15

Ala Glu Ala Vai Gin Arg Ala Arg Asp Ser Vai Asp Asp Ile Arg Vai 20 25 30

Ala Arg vai ile Glu Gin Asp Met Ala Vai Asp Ser Ala Gly Lys ile 35 40 45

Thr Tyr Arg ile Lys Leu Glu Vai Ser Phe Lys Met Arg Pro Ala Gin 50 55 60

Pro Arg 65

<210> 79 <211> 69 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 79

Vai Pro Pro Ala Pro Pro Leu Pro Pro Leu Pro Pro ser Pro ile Ser 15 10 15

Cvs Ala Ser Pro Pro Ser Pro Pro Leu Pro Pro Ala Pro Pro vai Ala 20 25 30

Pro Gly Pro Pro Met Pro Pro Leu Asp Pro Trp Pro Pro Ala Pro Pro 35 40 45

Leu Pro Tyr Ser Thr Pro Pro Gly Ala Pro Leu Pro Pro Ser Pro Pro 50 55 60

Ser Pro Pro Leu Pro 65 <210> 80 <211> 355 <212> PRT 145 <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 80

Met Ser Asn Ser Arg Arg Arg Ser Leu Arg Trp Ser Trp Leu Leu Ser 1 5 10 15 Vai Leu Al a Al a Val Gly Leu Gly Leu Al a Thr Al a Pro Al a Gin Al a 20 25 30 Al a Pro Pro Al a Leu Ser Gin Asp Arg Phe Al a Asp Phe Pro Al a Leu 35 40 45 Pro Leu Asp Pro Ser Al a Met Val Al a Gin Val Al a Pro Gin Val Val 50 55 60 Asn Ile Asn Thr Lys Leu Gly Tyr Asn Asn Al a Val Gly Al a Gly Thr 65 70 75 80 Gly ile Vai ile Asp Pro Asn Gly Val Val Leu Thr Asn Asn Hi s Val 85 90 95 ile Al a Gly Al a Thr Asp ile Asn Al a Phe Ser Val Gly Ser Gly Gl n 100 105 110 Thr Tyr Gly Vai Asp val val Gly Tyr Asp Arg Thr Gin Asp Val Al a 115 120 125 Vai Leu Gin Leu Arg Gly Al a Gly Gly Leu Pro Ser Al a Al a ile Gly 130 135 140 Gly Gly Vai Al a Val Gly Glu Pro Val Val Al a Met Gly Asn Ser Gly 145 150 155 160 Gly Gin Gly Gly Thr Pro Arg Al a Val Pro Gly Arg Val Val Al a Leu 165 170 175 Gly Gin Thr Vai Gin Ala Ser Asp Ser Leu Thr Gly Ala Glu Glu Thr 180 185 190 Leu Asn Gly Leu Ile Gin Phe Asp Al a Al a Ile Gin Pro Gly Asp Ser 195 200 205 146

Gly Gly Pro Val Val Asn Gly Leu Gly Gin Val Val Gly Met Asn Thr 210 215 220 Al a Al a Ser Asp Asn Phe Gin Leu Ser Gin Gly Gly Gl n Gly Phe Al a 225 230 235 240 Ile Pro ile Gly Gin Al a Met Al a ile Al a Gly Gl n ile Arg Ser Gly 245 250 255 Gly Gly Ser Pro Thr Val Hi s ile Gly Pro Thr Al a Phe Leu Gly Leu 260 265 270 Gly Vai Vai Asp Asn Asn Gly Asn Gly Al a Arg Val Gl n Arg Val Val 275 280 285 Gly Ser Al a Pro Al a Al a Ser Leu Gly Ile Ser Thr Gly Asp Val Ile 290 295 300 Thr Al a Val Asp Gly Al a Pro ile Asn Ser Al a Thr Al a Met Al a Asp 305 310 315 320 Al a Leu Asn Gly Hi s Hi S Pro Gly Asp Val Ile Ser Val Asn Trp Gin 325 330 335 Thr Lys Ser Gly Gly Thr Arg Thr Gly Asn Val Thr Leu Al a Glu Gly 340 345 350

Pro Pro Ala 355

<210> 81 <211> 205 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 81

Ser Pro Lys Pro Asp Ala Glu Glu Gin Gly Vai Pro Vai Ser Pro Thr 15 10 15

Ala Ser Asp Pro Ala Leu Leu Ala Glu ile Arg Gin ser Leu Asp Ala 20 25 30 147

Thr Lys Gly Leu Thr Ser Vai Hi S Vai Al a Vai Arg Thr Thr Gly Lys 35 40 45 Vai Asp ser Leu Leu Gly Ile Thr Ser Al a Asp Vai Asp vai Arg Ala 50 55 60 Asn Pro Leu Al a Ala Lys Gly Vai Cys Thr Tyr Asn Asp Glu Gin Gly 65 70 75 80 Vai Pro Phe Arg Vai Gin Gly Asp Asn ile Ser Vai Lys Leu Phe Asp 85 90 95 Asp T rp Ser Asn Leu Gly Ser Ile Ser Glu Leu Ser Thr Ser Arg Vai 100 105 110 Leu Asp Pro Al a Al a Gly vai Thr Gin Leu Leu Ser Gly vai Thr Asn 115 120 125 Leu Gl n Al a Gl n Gly Thr Glu vai ile Asp Gly ile Ser Thr Thr Lys 130 135 140 lie Thr Gly Thr Ile Pro Ala Ser Ser Vai Lys Met Leu Asp Pro Gly 145 150 155 160 Ala Lys Ser Al a Arg Pro Ala Thr Vai Trp ile Ala Gin Asp Gly Ser 165 170 175 Hi s Hi S Leu vai Arg Ala Ser ile Asp Leu Gly Ser Gly Ser Ile Gin 180 185 190 Leu Thr Gin Ser Lys Trp Asn Glu Pro Vai Asn Vai Asp 195 200 205

<210> 82 <211> 286 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (63)..(63) <223> Desconhecido 148 <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (121) . . (121) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (285)..(285) <223> Desconhecido <400> 82

Gly Asp Ser Phe T rp Al a Al a Al a Asp Gin Met Al a Arg Gly Phe Val 1 5 10 15 Leu Gly Al a Thr Al a Gly Arg Thr Thr Leu Thr Gly Glu Gly Leu Gl n 20 25 30 Hi s Al a Asp Gly Hi s Ser Leu Leu Leu Asp Al a Thr Asn Pro Al a Val 35 40 45 Val Al a Tyr Asp Pro Al a Phe Al a Tyr Glu Ile Gly Tyr ile Xaa Glu 50 55 60 Ser Gly Leu Al a Arg Met cys Gly Glu Àsn Pro Glu Asn ile Phe Phe 65 70 75 80 Tyr Ile Thr Val Tyr Asn Glu Pro Tyr Val Gin Pro Pro Glu Pro Glu 85 90 95 Asn Phe Asp Pro Glu Gly val Leu Gly Gly Ile Tyr Arg Tyr Hi S Al a 100 105 110 Al a Thr Glu Gin Arg Thr Asn Lys Xaa Gin Ile Leu Ala Ser Gly Val 115 120 125 Al a Met Pro Al a Al a Leu Arg Al a Al a Gin Met Leu Al a Al a Glu Trp 130 135 140 Asp Val Al a Al a Asp val T rp Ser val Thr Ser T rp Gly Glu Leu Asn 145 150 155 160 Arg Asp Gly Val Val Ile Glu Thr Glu Lys Leu Arg Hi s Pro Asp Arg 165 170 175 149

Pro Ala Gly Vai Pro Tyr Vai Thr Arg Ala Leu Glu Asn Ala Arg Gly 180 185 190

Pro val ile Ala Vai Ser Asp Trp Met Arg Ala vai Pro Glu Gin Ile 195 200 205

Arg Pro Trp Val Pro Gly Thr Tyr Leu Thr Leu Gly Thr Asp Gly Phe 210 215 220

Gly Phe Ser Asp Thr Arg Pro Ala Gly Arg Arg Tyr Phe Asn Thr Asp 225 230 235 240

Ala Glu Ser Gin Val Gly Arg Gly Phe Gly Arg Gly Trp Pro Gly Arg 245 250 255

Arg Val Asn Ile Asp Pro Phe Gly Ala Gly Arg Gly Pro Pro Ala Gin 260 265 270

Leu Pro Gly Phe Asp Glu Gly Gly Gly Leu Arg Pro xaa Lys 275 280 285

<210> 83 <211> 173 <212> PRT <213> Mycobacterium tubérculos is <400> 83

Thr Lys Phe Hi s Ala Leu Met Gin Glu Gin Ile Hi s Asn Glu Phe Thr 1 5 10 15 Ala Ala Gin Gin Tyr Val Ala Ile Al a Val Tyr Phe Asp Ser Glu Asp 20 25 30 Leu Pro Gin Leu Al a Lys Hi s Phe Tyr Ser Gin Al a Val Glu Glu Arg 35 40 45 Asn Hi s Ala Met Met Leu val Gin Hi s Leu Leu Asp Arg Asp Leu Arg 50 55 60 Val Glu Ile Pro Gly Val Asp Thr Val Arg Asn Gin Phe Asp Arg Pro 65 70 75 80 150

Arg Glu Al a Leu Ala Leu Al a Leu Asp Gin Glu Arg Thr Val Thr Asp 85 90 95 Gin Vai Gly Arg Leu Thr Al a Val Al a Arg Asp Glu Gly Asp Phe Leu 100 105 110 Gly Glu Gl n Phe Met Gin Trp Phe Leu Gl n Glu Gin Ile Glu Glu Val 115 120 12 5 Ai a Leu Met Al a Thr Leu Val Arg Val Al a Asp Arg Al a Gly Al a Asn 130 135 140 Leu Phe Glu Leu Glu Asn Phe Val Al a Arg Glu Val Asp Val Al a Pro 145 150 155 160 Ai a Al a Ser Gly Al a Pro Hl s Al a Al a Gly Gly Arg Leu 165 170 <210> 84 <211> 107 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (60)..(60) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (64)..(64) <223> Desconhecido 151 <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (73) . . (73) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (77) . . (77) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (79)..(79) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (86)..(86) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (99)..(99) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (102)..(103) <223> Desconhecido 152 <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (106)..(106) <223> Desconhecido <400> 84

Arg Al a Asp Glu Arg Lys Asn Thr Thr Met Lys Met Val Lys Ser Ile 1 5 10 15 Al a Al a Gly Leu Thr Al a Al a Al a Al a ile Gly Al a Al a Al a Al a Gly 20 25 30 Vai Thr Ser Ile Met Ala Gly Gly Pro Val Val Tyr Gin Met Gin Pro 35 40 45 Val Val Phe Gly Al a Pro Leu Pro Leu Asp Pro Xaa Ser Al a Pro Xaa 50 55 60 Vai Pro Thr Al a Al a Gl n T rp Thr Xaa Leu Leu Asn Xaa Leu Xaa Asp 65 70 75 80 Pro Asn Val Ser Phe Xaa Asn Lys Gly Ser Leu Val Glu Gly Gly ile 85 90 95 Gly Gly Xaa Glu Gly Xaa Xaa Arg Arg Xaa Gl n 100 105

<210> 85 <211> 125 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (12)..(12) <223> Desconhecido 153 <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (45)..(45) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (54)..(54) <223> Desconhecido <400> 85

Vai Leu Ser Vai Pro Vai Gly Asp Gly Phe Trp Xaa Arg Vai Vai Asn 1 5 10 15 Pro Leu Gly Gin Pro Ile Asp Gly Arg Gly Asp Vai Asp Ser Asp Thr 20 25 30 Arg Arg Al a Leu Glu Leu Gl n Al a Pro Ser vai vai Xaa Arg Gl n Gly 35 40 45 Vai Lys Glu Pro Leu Xaa Thr Gly Ile Lys Ala Ile Asp Al a Met Thr 50 55 60 Pro li e Gly Arg Gly Gl n Arg Gin Leu ile ile Gly Asp Arg Lys Thr 65 70 75 80 Gly Lys Asn Arg Arg Leu Cys Arg Thr Pro Ser Ser Asn Gl n Arg Glu 85 90 95 Glu Leu Gly Vai Arg T rp ile Pro Arg Ser Arg Cys Al a Cys Vai Tyr 100 105 110 Vai Gly Hi s Arg Al a Arg Arg Gly Thr Tyr Hi s Arg Arg 115 120 125 154

<210> 86 <211> 117 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (99) . . (100) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (104)..(104) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (108) . . (108) <223> Desconhecido <220>

<221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (112)..(112) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (116)..(116) <223> Desconhecido 155 <4Ο0> 86 cys Asp Ala Vai Met Gly Phe Leu Gly Gly Al a Gly Pro Leu Ala Val 1 5 10 15 Vai Asp Gin Gin Leu Val Thr Arg Val Pro Gin Gly T rp Ser Phe Al a 20 25 30 Gin Al a Al a Al a Val Pro Val Val Phe Leu Thr Al a T rp Tyr Gly Leu 35 40 45 Al a Asp Leu Al a Glu lie Lys Al a Gly Glu Ser Val Leu Ile HÍ S Al a 50 55 60 Gly Thr Gly Gly Val Gly Met Al a Al a Val Gl n Leu Al a Arg Gin T rp 65 70 75 80 Gly Vai Glu Val Phe Val Thr Al a Ser Arg Gly Lys T rp Asp Thr Leu 85 90 95 Arg Al a Xaa Xaa Phe Asp Asp Xaa Pro Tyr Arg Xaa Phe Pro Hi S Xaa 100 105 110 Arg Ser Ser Xaa Gly 115

<210> 87 <211> 103 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 87

Met Tyr Arg Phe Al a Cys Arg Thr Leu Met Leu Al a Al a cys Ile Leu 1 5 10 15 Al a Thr Gly Val Al a Gly Leu Gly Val Gly Al a Gl n Ser Al a Al a Gl n 20 25 30 Thr Al a Pro Val Pro Asp Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp 35 40 45 156

Pro Ala Trp Gly Pro Asn Trp Asp Pro Tyr Thr Cys His Asp Asp Phe 50 55 60

His Arg Asp Ser Asp Gly Pro Asp His Ser Arg Asp Tyr Pro Gly Pro 65 70 75 80 ile Leu Glu Gly Pro Vai Leu Asp Asp Pro Gly Ala Ala Pro Pro Pro 85 90 95

Pro Ala Ala Gly Gly Gly Ala 100

<210> 88 <211> 88 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 88

Vai Gin Cys Arg Vai Trp Leu Glu ile Gin Trp Arg Gly Met Leu Gly 15 10 15

Ala Asp Gin Ala Arg Ala Gly Gly Pro Ala Arg Ile Trp Arg Glu His 20 25 30

Ser Met Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala 35 40 45

Thr Lys Glu Gly Arg Gly Ile vai Met Arg Vai Pro Leu Glu Gly Gly 50 55 60

Gly Arg Leu Vai Vai Glu Leu Thr Pro Asp Glu Ala Ala Ala Leu Gly 65 70 75 80

Asp Glu Leu Lys Gly Vai Thr Ser 85 157

<210> 89 <211> 95 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 89

Thr Asp Al a Al a Thr Leu Al a Gin Glu Al a Gly Asn Phe Glu Arg Ile 1 5 10 15 Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gin Ile Asp Gl n Vai Glu Ser Thr Al a Gly 20 25 30 Ser Leu Gin Gly Gin T rp Arg Gly Al a Al a Gly Thr Al a Al a Gin Al a 35 40 45 Ai a vai Vai Arg Phe Gin Glu Al a Al a Asn Lys Gl n Lys Gin Glu Leu 50 55 60 Asp Glu ile Ser Thr Asn ile Arg Gin Al a Gly Vai Gin Tyr Ser Arg 65 70 75 80 Ai a Asp Glu Glu Gl n Gin Gin Al a Leu Ser Ser Gl n Met Gly Phe 85 90 95 <210> 90 <211> 16 6 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (41)..(42) <223> Desconhecido 158 <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (49)..(49) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (80)..(80) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (152)..(152) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (159) . . (159) <223> Desconhecido <400> 90

Met Thr Gin Ser Gl n Thr Val Thr 1 5 Arg Al a Asn Glu Vai Glu Al a Pro 20 Pro lie Thr Pro cys Glu Leu Thr 35 40 Xaa Vai Leu Ser Al a Asp Asn Met 50 55 Lys Glu Arg Gin Arg Leu Al a Thr 65 70

Val Asp Gl n Gin Glu lie Leu Asn 10 15 Met Al a Asp Pro Pro Thr Asp Val 25 30 Xaa Xaa Lys Asn Al a Al a Gin Gin 45 Arg Glu Tyr Leu Al a Al a Gly Al a 60 Ser Leu Arg Asn Al a Al a Lys Xaa 75 80 159

Tyr Gly Glu Vai Asp Glu Glu Al a 85 Glu Gly Thr Vai Gin Al a Glu Ser 100 Ser Ai a Glu Leu Thr Asp Thr Pro 115 120 Asn Phe Met Asp Leu Lys Glu Al a 130 135 Gin Gly Ai a Ser Leu Al a Hi S Xaa 145 150 Leu Thr Leu Gin Gly Asp 165

Al a Thr Ala Leu Asp Asn Asp Gly 90 95 Al a Gly Al a vai Gly Gly Asp Ser 105 110 Arg Vai Al a Thr Al a Gly Glu Pro 125 Al a Arg Lys Leu Glu Thr Gly Asp 140 Gly Asp Gly T rp Asn Thr Xaa Thr 155 160 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> Mycobacterium tubercul <400> 91 Arg Ala Glu Arg Met 1 5 osis <210> 92 <211> 263 <212> PRT <213> Mycobacterium tubercul <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (254)..(254) <223> Desconhecido osis 160 <4Ο0> 92

Vai Al a Trp Met Ser val Thr 1 5 Gin Vai Arg Val Al a Al a Al a 20 Vai Pro Pro Pro Val Ile Al a 35 lie Al a Thr Asn Leu Leu Gly 50 55 Glu Al a Glu Tyr Gly Glu Met 65 70 Gly Tyr Al a Al a Al a Thr Al a 85 Glu Glu Al a Pro Glu Met Thr 100 Al a Al a Val Glu Glu Al a Ser 115 Asn Asn Val Pro Gl n Al a Leu 130 135 Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu 145 150 Hi S Arg Ser Pro Ile Ser Asn 165 Ser Met Thr Asn Ser Gly val 180 Leu Lys Gly Phe Al a Pro Al a 195 Al a Gin Asn Gly Val Arg Al a 210 215 Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly 225 230

Gly Gin Al a Glu Leu Thr Al a Al a 10 15 Tyr Glu Thr Al a Tyr Gly Leu Thr 25 30 Asn Arg Al a Glu Leu Met ile Leu 45 Asn Thr Pro Al a Ile Al a val Asn 60 Al a Gin Asp Al a Al a Al a Met Phe 75 80 Al a Thr Al a Thr Leu Leu Pro Phe 90 95 Al a Gly Gly Leu Leu Glu Gin Al a 105 110 Thr Al a Al a Al a Asn Gin Leu Met 12 5 Gin Leu Al a Gl n Pro Thr Gin Gly 140 Gly Leu Trp Lys Thr Val Ser Pro 155 160 Val Ser Met Al a Asn Asn Hi s Met 170 175 Met Thr Asn Thr Leu Ser Ser Met 185 190

Al a Al a Gl n Al a val Gin Thr Al a 205 Ser Ser Leu Gly Ser Ser Leu Gly 220 Al a Al a Asn Leu Gly Arg Al a Al a 235 240 161

Ser Vai Arg Tyr Gly His Arg Asp Gly Gly Lys Tyr Ala Xaa Ser Gly 245 250 255

Arg Arg Asn Gly Gly Pro Ala 260

<210> 93 <211> 303 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 93

Met Thr Tyr Ser Pro Gly Asn Pro Gly Tyr Pro Gin Al a Gin Pro Al a 1 5 10 15 Gly Ser Tyr Gly Gly val Thr Pro ser Phe Ala Hi s Al a Asp Glu Gly 20 25 30 Ala Ser Lys Leu Pro Met Tyr Leu Asn ile Ala val Al a val Leu Gly 35 40 45 Leu Ala Al a Tyr Phe Ala Ser Phe Gly Pro Met Phe Thr Leu Ser Thr 50 55 60 Glu Leu Gly Gly Gly Asp Gly Ala Val Ser Gly Asp Thr Gly Leu Pro 65 70 75 80 Vai Gly Val Ala Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Gly val Val Leu Val 85 90 95 Pro Lys Al a Lys Ser Hi s Val Thr Val Val Ala Val Leu Gly Val Leu 100 105 110 Gly Vai Phe Leu Met Val Ser Ala Thr Phe Asn Lys Pro Ser Ala Tyr 115 120 125 Ser Thr Gly Trp Ala Leu Trp Val val Leu Ala Phe ile Val Phe Gin 130 135 140 Ala val Al a Ala Val Leu Ala Leu Leu Val Glu Thr Gly Ala ile Thr 145 150 155 160 162

Ala Pro Ala Pro Arg Pro Lys Phe Asp Pro Tyr Gly Gin Tyr Gly Arg 165 170 175 Tyr Gly Gin Tyr Gly Gin Tyr Gly Val Gl n Pro Gly Gly Tyr Tyr Gly 180 185 190 Gin Gin Gly Al a Gl n Gin Al a Al a Gly Leu Gl n Ser Pro Gly Pro Gin 195 200 205 Gin Ser Pro Gl n Pro Pro Gly Tyr Gly Ser Gl n Tyr Gly Gly Tyr Ser 210 215 220 Ser Ser Pro Ser Gl n Ser Gly Ser Gly Tyr Thr Al a Gin Pro Pro Al a 225 230 235 240 Gin Pro Pro Al a Gin Ser Gly Ser Gin Gin Ser Hi s Gin Gly Pro Ser 245 250 255 Thr Pro Pro Thr Gly Phe Pro Ser Phe Ser Pro Pro Pro Pro Val Ser 260 265 270 Ala Gly Thr Gly Ser Gin Ala Gly Ser Al a Pro Val Asn Tyr Ser Asn 275 280 285 Pro Ser Gly Gly Glu Gin Ser Ser Ser Pro Gly Gly Al a Pro Val 290 295 300

<210> 94 <211> 168 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 94

Met Lys Met Val Lys Ser lie Al a Al a Gly Leu Thr Al a Al a Al a Al a 1 5 10 15 ile Gly Al a Al a Al a Al a Gly Val Thr Ser ile Met Al a Gly Gly Pro 20 25 30 Val Val Tyr Gin Met Gl n Pro Val Val Phe Gly Al a Pro Leu Pro Leu 35 40 45 163 ASP Pro Al a Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gin Leu Thr Ser 50 55 60 Leu Leu Asn Ser Leu Al a Asp Pro Asn val Ser Phe Al a Asn Lys Gly 65 70 75 80 Ser Leu Vai Glu Gly Gly ile Gly Gly Thr Glu Al a Arg ile Al a Asp 85 90 95 Hi s Lys Leu Lys Lys Al a Al a Glu Hi s Gly Asp Leu Pro Leu Ser Phe 100 105 110 Ser vai Thr Asn Ile Gl n Pro Al a Al a Al a Gly Ser Al a Thr Al a Asp 115 120 12 5 Vai Ser Vai Ser Gly Pro Lys Leu Ser Ser Pro Val Thr Gl n Asn Val 130 135 140 Thr Phe Val Asn Gl n Gly Gly Trp Met Leu Ser Arg Al a Ser Al a Met 145 150 155 160 Glu Leu Leu Gl n Al a Al a Gly Asn 165

<210> 95 <211> 332 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 95

Met Hi S Hi S Hi s Hi s Hi s Hi s Met Hi s Gin Val Asp Pro Asn Leu Thr 1 5 10 15 Arg Arg Lys Gly Arg Leu Al a Al a Leu Al a ile Al a Al a Met Al a Ser 20 25 30 Al a Ser Leu Val Thr Val Al a Val Pro Ala Thr Al a Asn Al a Asp Pro 35 40 45 Glu Pro Al a Pro Pro val Pro Thr Thr Al a Al a Ser Pro Pro Ser Thr 50 55 60 164

Ala Al a Al a Pro Pro Al a Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro 65 70 75 80 Ai a Al a Al a Asn Thr Pro Asn Al a Gin Pro Gly Asp Pro Asn Al a Al a 85 90 95 Pro Pro Pro Al a Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val Ile Al a Pro 100 105 110 Asn Al a Pro Gl n Pro vai Arg ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser 115 120 125 Phe Al a Leu Pro Al a Gly T rp Val Glu Ser Asp Ala Al a Hi s Phe Asp 130 135 140 Tyr Gly Ser Al a Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro 145 150 155 160 Gly Gl n Pro Pro Pro Vai Al a Asn Asp Thr Arg ile Val Leu Gly Arg 165 170 175 Leu Asp Gin Lys Leu Tyr Al a Ser Al a Glu Al a Thr Asp Ser Lys Al a 180 185 190 Al a Al a Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met Pro Tyr Pro 195 200 205 Gly Thr Arg ile Asn Gin Glu Thr Val Ser Leu Asp Al a Asn Gly Val 210 215 220 Ser Gly Ser Al a Ser Tyr Tyr Glu Val Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys 225 230 235 240 Pro Asn Gly Gin ile T rp Thr Gly Val ile Gly Ser Pro Al a Al a Asn 245 250 255 Al a Pro Asp Al a Gly Pro Pro Gin Arg Trp Phe Val Val T rp Leu Gly 260 265 270 Thr Al a Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Al a Al a Lys Al a Leu Al a Glu 275 280 285 Ser lie Arg Pro Leu Vai Al a Pro Pro Pro Al a Pro Al a Pro Al a Pro 290 295 300 165

Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Gly Glu Vai Ala Pro Thr 305 310 315 320

Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gin Arg Thr Leu Pro Ala 325 330

<210> 96 <211> 500 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 9 6 cgtggcaatg tcgttgaccg tcggggccgg ggtcgcctcc gcagatcccg tggacgcggt 60 cattaacacc acctgcaatt acgggcaggt agtagctgcg ctcaacgcga cggatccggg 120 ggctgccgca cagttcaacg cctcaccggt ggcgcagtcc tatttgcgca atttcctcgc 180 cgcaccgcca cctcagcgcg ctgccatggc cgcgcaattg caagctgtgc cgggggcggc 240 acagtacatc ggccttgtcg agtcggttgc cggctcctgc aacaactatt aagcccatgc 300 gggccccatc ccgcgacccg gcatcgtcgc cggggctagg ccagattgcc ccgctcctca 360 acgggccgca tcccgcgacc cggcatcgtc gccggggcta ggccagattg ccccgctcct 420 caacgggccg catctcgtgc cgaattcctg cagcccgggg gatccactag ttctagagcg 480 gccgccaccg cggtggagct 500 <210> 97 <211> 96 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 16 6 <400> 97

Vai Ala Met Ser Leu Thr vai Gly Ala Gly vai Ala Ser Ala Asp Pro 15 10 15

Vai Asp Ala Vai lie Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gin Vai Vai Ala 20 25 30

Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro Gly Ala Ala Ala Gin Phe Asn Ala Ser 35 40 45

Pro Vai Ala Gin ser Tyr Leu Arg Asn Phe Leu Ala Ala Pro Pro Pro 50 55 60

Gin Arg Ala Ala Met Ala Ala Gin Leu Gin Ala vai Pro Gly Ala Ala 65 70 75 80

Gin Tyr ile Gly Leu vai Glu Ser Vai Ala Gly Ser cys Asn Asn Tyr 85 90 95

<210> 98 <211> 154 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 98 atgacagagc agcagtggaa tttcgcgggt atcgaggccg cggcaagcgc aatccaggga aatgtcacgt ccattcattc cctccttgac gaggggaagc agtccctgac caagctcgca gcggcctggg gcggtagcgg ttcggaagcg tacc 60 120 154

<210> 99 <211> 51 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 167 < 4 Ο Ο > 99

Met Thr Glu Gin Gin Trp Asn Phe Ala Gly Ile Glu Ala Ala Ala Ser 1 5 10 15 Ala Ile Gin Gly Asn Vai Thr Ser Ile Hi S Ser Leu Leu Asp Glu Gly 20 25 30 Lys Gin Ser Leu Thr Lys Leu Ala Ala Ala Trp Gly Gly Ser Gly Ser 35 40 45

Glu Ala Tyr 50 <210> 100 <211> 282 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica. _misc <222> (41)..(41) <223> Desconhecido <2 2 0> <221> característica. _misc <222> (154)..(154) <223> Desconhecido <220> <221> característica. __misc <222> (165)..(165) <223> Desconhecido 168 <220> <221> característica_misc <222> (190)..(190) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (226) . . (226) <223> Desconhecido <220> <221> misc feature <222> (229)..(229) <223> Desconhecido <220> <221> característica_misc <222> (255)..(255) <223> Desconhecido <400> 100 cggtcgcgca cttccaggtg tcaagcgcgg ccgataactg gctcgaaacg cggcacagcc gacaattcgn cgggggcgcc acctgtgtgg tctgnagccg nctggaggat tcctgaacct tttccagaac atcctgacgc gctgnctcca aaatccctga attcgncgng tatctggtcg cg actatgaaag tcggcttccg aggtgcatca ttaagcgact gacggtggct ccgncgaggc tacaaggaag tcggtgctga gacgaagcgg tgctcgacgt 60 120 180 240 282

<210> 101 <211> 1565 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 169 <4 Ο 0> 101 gtatgcggcc actgaagtcg ccaatgcggc ggcggccagc taagccagga acagtcggca 60 cgagaaacca cgagaaatag ggacacgtaa tggtggattt cggggcgtta ccaccggaga 120 tcaactccgc gaggatgtac gccggcccgg gttcggcctc gctggtggcc gcggctcaga 180 tgtgggacag cgtggcgagt gacctgtttt cggccgcgtc ggcgtttcag tcggtggtct 240 ggggtctgac ggtggggtcg tggataggtt cgtcggcggg tctgatggtg gcggcggcct 300 cgccgtatgt ggcgtggatg agcgtcaccg cggggcaggc cgagctgacc gccgcccagg 360 tccgggttgc tgcggcggcc tacgagacgg cgtatgggct gacggtgccc ccgccggtga 420 tcgccgagaa ccgtgctgaa ctgatgattc tgatagcgac caacctcttg gggcaaaaca 480 ccccggcgat cgcggtcaac gaggccgaat acggcgagat gtgggcccaa gacgccgccg 540 cgatgtttgg ctacgccgcg gcgacggcga cggcgacggc gacgttgctg ccgttcgagg 600 aggcgccgga gatgaccagc gcgggtgggc tcctcgagca ggccgccgcg gtcgaggagg 660 cctccgacac cgccgcggcg aaccagttga tgaacaatgt gccccaggcg ctgcaacagc 720 tggcccagcc cacgcagggc accacgcctt cttccaagct gggtggcctg tggaagacgg 780 tctcgccgca tcggtcgccg atcagcaaca tggtgtcaat ggccaacaac cacatgtcaa 840 tgaccaactc gggtgtgtca atgaccaaca ccttgagctc gatgttgaag ggctttgctc 900 cggcggcggc cgcccaggcc gtgcaaaccg cggcgcaaaa cggggtccgg gcgatgagct 960 cgctgggcag ctcgctgggt tcttcgggtc tgggcggtgg ggtggccgcc aacttgggtc 1020 gggcggcctc ggtcggttcg ttgtcggtgc cgcaggcctg ggccgcggcc aaccaggcag 1080 tcaccccggc ggcgcgggcg ctgccgctga ccagcctgac cagcgccgcg gaaagagggc 1140 ccgggcagat gctgggcggg ctgccggtgg ggcagatggg cgccagggcc ggtggtgggc 1200 tcagtggtgt gctgcgtgtt ccgccgcgac cctatgtgat gccgcattct ccggcggccg 1260 gctaggagag ggggcgcaga ctgtcgttat ttgaccagtg atcggcggtc tcggtgtttc 1320 cgcggccggc tatgacaaca gtcaatgtgc atgacaagtt acaggtatta ggtccaggtt 1380 caacaaggag acaggcaaca tggcctcacg ttttatgacg gatccgcacg cgatgcggga 1440 catggcgggc cgttttgaag tgcacgccca gacggtggag gacgaggctc gccggatgtg 1500 ggcgtccgcg caaaacattt ccggtgcggg ctggagtggc atggccgagg cgacctcgct 1560 agaca 1565 <210> 102 <211> 391 170

<212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 102

Met Vai Asp Phe Gly Al a Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Al a Arg Met 1 5 10 15 Tyr Al a Gly Pro Gly Ser Al a Ser Leu Val Al a Al a Al a Gin Met Trp 20 25 30 Asp Ser Val Al a Ser Asp Leu Phe Ser Al a Al a Ser Al a Phe Gin Ser 35 40 45 Vai Vai Trp Gly Leu Thr Val Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Al a Gly 50 55 60 Leu Met Val Al a Al a Al a Ser Pro Tyr Val Al a T rp Met Ser Val Thr 65 70 75 80 Al a Gly Gin Al a Glu Leu Thr Al a Al a Gin Val Arg Val Al a Al a Al a 85 90 95 Al a Tyr Glu Thr Al a Tyr Gly Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Al a 100 105 110 Glu Asn Arg Al a Glu Leu Met Ile Leu ile Al a Thr Asn Leu Leu Gly 115 120 125 Gl n Asn Thr Pro Al a ile Al a Val Asn Glu Al a Glu Tyr Gly Glu Met 130 135 140 T rp Al a Gin Asp Al a Al a Al a Met Phe Gly Tyr Al a Al a Al a Thr Al a 145 150 155 160 Thr Al a Thr Ala Thr Leu Leu Pro Phe Glu Glu Al a Pro Glu Met Thr 165 170 175 Ser Al a Gly Gly Leu Leu Glu Gl n Al a Al a Al a Val Glu Glu Al a Ser 180 185 190 Asp Thr Al a Al a Al a Asn Gin Leu Met Asn Asn Val Pro Gin Al a Leu 195 200 205 Gin Gl n Leu Al a Gin Pro Thr Gl n Gly Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu 210 215 220 171

Gly Gly Leu T rp Lys Thr Val Ser Pro Hi s Arg Ser Pro Ile Ser Asn 225 230 235 240 Met vai Ser Met Al a Asn Asn Hi s Met Ser Met Thr Asn Ser Gly Val 245 250 255 Ser Met Thr Asn Thr Leu Ser Ser Met Leu Lys Gly Phe Al a Pro Al a 260 265 270 Al a Al a Al a Gin Al a vai Gin Thr Al a Al a Gin Asn Gly Val Arg Al a 275 280 285 Met Ser Ser Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly 290 295 300 Vai Al a Al a Asn Leu Gly Arg Al a Al a Ser Val Gly Ser Leu Ser Val 305 310 315 320 Pro Gin Al a T rp Al a Al a Al a Asn Gl n Al a Val Thr Pro Al a Al a Arg 325 330 335 Ala Leu Pro Leu Thr Ser Leu Thr Ser Ala Ala Glu Arg Gly Pro Gly 340 345 350 Gin Met Leu Gly Gly Leu Pro val Gly Gin Met Gly Al a Arg Ala Gly 355 360 365 Gly Gly Leu Ser Gly Val Leu Arg Val Pro Pro Arg Pro Tyr Val Met 370 375 380 Pro Hi S Ser Pro Al a Al a Gly 385 390

<210> 103 <211> 259 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característica_misc <222> (18)..(18) <223> Desconhecido 172 <4 Ο 0> 103 accaacacct tgcactcnat gttgaagggc ttagctccgg cggcggctca ggccgtggaa 60 accgcggcgg aaaacggggt ctgggcaatg agctcgctgg gcagccagct gggttcgtcg 120 ctgggttctt cgggtctggg cgctggggtg gccgccaact tgggtcgggc ggcctcggtc 180 ggttcgttgt cggtgccgcc agcatgggcc gcggccaacc aggcggtcac cccggcggcg 240 cgggcgctgc cgctgacca 259

<210> 104 <211> 86 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 104

Thr Asn Thr Leu Hi s Ser Met Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Ala Al a 1 5 10 15 Gin Ala Vai Glu Thr Ala Ala Glu Asn Gly Val Trp Ala Met ser Ser 20 25 30 Leu Gly Ser Gin Leu Gly Ser ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Ala 35 40 45 Gly Vai Al a Al a Asn Leu Gly Arg Al a Al a Ser Val Gly Ser Leu Ser 50 55 60 Vai Pro Pro Ala T rp Al a Ala Ala Asn Gin Ala Val Thr Pro Ala Al a 65 70 75 80 Arg Al a Leu Pro Leu Thr 85

<210> 105 <211> 1109 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis 173 <4 Ο 0> 105 tacttgagag aatttgacct gttgccgacg ttgtttgctg tccatcattg gtgctagtta 60 tggccgagcg gaaggattat cgaagtggtg gacttcgggg cgttaccacc ggagatcaac 120 tccgcgagga tgtacgccgg cccgggttcg gcctcgctgg tggccgccgc gaagatgtgg 180 gacagcgtgg cgagtgacct gttttcggcc gcgtcggcgt ttcagtcggt ggtctggggt 240 ctgacgacgg gatcgtggat aggttcgtcg gcgggtctga tggtggcggc ggcctcgccg 300 tatgtggcgt ggatgagcgt caccgcgggg caggccgagc tgaccgccgc ccaggtccgg 360 gttgctgcgg cggcctacga gacggcgtat gggctgacgg tgcccccgcc ggtgatcgcc 420 gagaaccgtg ctgaactgat gattctgata gcgaccaacc tcttggggca aaacaccccg 480 gcgatcgcgg tcaacgaggc cgaatacggg gagatgtggg cccaagacgc cgccgcgatg 540 tttggctacg ccgccacggc ggcgacggcg accgaggcgt tgctgccgtt cgaggacgcc 600 ccactgatca ccaaccccgg cgggctcctt gagcaggccg tcgcggtcga ggaggccatc 660 gacaccgccg cggcgaacca gttgatgaac aatgtgcccc aagcgctgca acaactggcc 720 cagcccacga aaagcatctg gccgttcgac caactgagtg aactctggaa agccatctcg 780 ccgcatctgt cgccgctcag caacatcgtg tcgatgctca acaaccacgt gtcgatgacc 840 aactcgggtg tgtcaatggc cagcaccttg cactcaatgt tgaagggctt tgctccggcg 900 gcggctcagg ccgtggaaac cgcggcgcaa aacggggtcc aggcgatgag ctcgctgggc 960 agccagctgg gttcgtcgct gggttcttcg ggtctgggcg ctggggtggc cgccaacttg 1020 ggtcgggcgg cctcggtcgg ttcgttgtcg gtgccgcagg cctgggccgc ggccaaccag 1080 gcggtcaccc cggcggcgcg ggcgctgcc 1109

<210> 106 <211> 341 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 174 <4 Ο 0> 106

Vai Vai Asp Phe Gly Al a Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Al a Arg Met 1 5 10 15 Tyr Al a Gly Pro Gly Ser Al a Ser Leu Vai Al a Al a Al a Lys Met Trp 20 25 30 Asp Ser Vai Al a Ser Asp Leu Phe Ser Al a Al a Ser Al a Phe Gl n Ser 35 40 45 Vai Vai T rp Gly Leu Thr Thr Gly Ser T rp Ile Gly Ser Ser Al a Gly 50 55 60 Leu Met vai Al a Al a Al a Ser Pro Tyr Vai Al a T rp Met Ser Val Thr 65 70 75 80 Al a Gly Gl n Al a Glu Leu Thr Al a Al a Gin Vai Arg val Al a Al a Al a 85 90 95 Al a Tyr Glu Thr Al a Tyr Gly Leu Thr Vai Pro Pro Pro val ile Al a 100 105 110 Glu Asn Arg Al a Glu Leu Met ile Leu ile Al a Thr Asn Leu Leu Gly 115 120 12 5 Gin Asn Thr Pro Al a Ile Ala Vai Asn Glu Al a Glu Tyr Gly Glu Met 130 135 140 T rp Al a Gin Asp Al a Al a Al a Met Phe Gly Tyr Al a Al a Thr Al a Al a 145 150 155 160 Thr Al a Thr Glu Al a Leu Leu Pro Phe Glu Asp Al a Pro Leu Ile Thr 165 170 175 Asn Pro Gly Gly Leu Leu Glu Gin Al a Vai Al a Vai Glu Glu Al a Ile 180 185 190 Asp Thr Al a Al a Al a Asn Gin Leu Met Asn Asn Val Pro Gin Al a Leu 195 200 205 Gin Gin Leu Al a Gl n Pro Thr Lys Ser lie Trp Pro Phe Asp Gin Leu 210 215 220 Ser Glu Leu T rp Lys Al a ile Ser Pro Hi s Leu Ser Pro Leu Ser Asn 225 230 235 240 175 lie Vai Ser Met Leu Asn Asn Hi s 245 Ser Met Ala Ser Thr Leu Hi s Ser 260 Ala Ala Gin Al a Val Glu Thr Al a 275 280 Ser Ser Leu Gly Ser Gin Leu Gly 290 295 Gly Ala Gly Val Ala Ala Asn Leu 305 310 Leu Ser Vai Pro Gin Ala Trp Al a 325 Ala Ala Arg Al a Leu 340 265 250 255 270 285 300 315 320 330 335 <210> 107 <211> 1256 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> característic <222> (48)..(48) <223> Desconhecido <400> 107 catcggaggg agtgatcacc ggctgatggc cggcgcgggt tttcggcggc tctggacgct aagcctggac tggaggtggc ggctacaaac cgcgtcaaca mi sc atgctgtggc acgcaatgcc ccggctccaa tgcttgcggc caggccgtcg agttgaccgc agcgacaagg cgcttgcggc caggccaaga cccgtgcgat accggagnta aataccgcac ggccgcggga tggcagacgc gcgcctgaac tctctgggag tgcaacgccg atggtggtct gcaggcgacg gcgcaagccg 60 120 180 240 176 300 cggcatacac ccaggccatg gccacgacgc cgtcgctgcc ggagatcgcc gccaaccaca 360 tcacccaggc cgtccttacg gccaccaact tcttcggtat caacacgatc ccgatcgcgt 420 tgaccgagat ggattatttc atccgtatgt ggaaccaggc agccctggca atggaggtct 480 accaggccga gaccgcggtt aacacgcttt tcgagaagct cgagccgatg gcgtcgatcc 540 ttgatcccgg cgcgagccag agcacgacga acccgatctt cggaatgccc tcccctggca 600 gctcaacacc ggttggccag ttgccgccgg cggctaccca gaccctcggc caactgggtg 660 agatgagcgg cccgatgcag cagctgaccc agccgctgca gcaggtgacg tcgttgttca 720 gccaggtggg cggcaccggc ggcggcaacc cagccgacga ggaagccgcg cagatgggcc 780 tgctcggcac cagtccgctg tcgaaccatc cgctggctgg tggatcaggc cccagcgcgg 840 gcgcgggcct gctgcgcgcg gagtcgctac ctggcgcagg tgggtcgttg acccgcacgc 900 cgctgatgtc tcagctgatc gaaaagccgg ttgccccctc ggtgatgccg gcggctgctg 960 ccggatcgtc ggcgacgggt ggcgccgctc cggtgggtgc gggagcgatg ggccagggtg 1020 cgcaatccgg cggctccacc aggccgggtc tggtcgcgcc ggcaccgctc gcgcaggagc 1080 gtgaagaaga cgacgaggac gactgggacg aagaggacga ctggtgagct cccgtaatga 1140 caacagactt cccggccacc cgggccggaa gacttgccaa cattttggcg aggaaggtaa 1200 agagagaaag tagtccagca tggcagagat gaagaccgat gccgctaccc tcgcgc 1256 <210> 108 <211> 432 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 108 ctagtggatg ggaccatggc cattttctgc agtctcactg ccttctgtgt tgacattttg 60 gcacgccggc ggaaacgaag cactggggtc gaagaacggc tgcgctgcca tatcgtccgg 120 agcttccata ccttcgtgcg gccggaagag cttgtcgtag tcggccgcca tgacaacctc 180 tcagagtgcg ctcaaacgta taaacacgag aaagggcgag accgacggaa ggtcgaactc 240 gcccgatccc gtgtttcgct attctacgcg aactcggcgt tgccctatgc gaacatccca 300 gtgacgttgc cttcggtcga agccattgcc tgaccggctt cgctgatcgt ccgcgccagg 360 ttctgcagcg tacqcctccq cgttgttcag aa ctcggtagcc gtggcgtccc atttttgctg gacaccctgg 420 432 177

<210> 109 <211> 368 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (10)..(10) <223> Desconhecido <400> 109

Met Leu T rp Hi s Al a Met Pro Pro Glu Xaa Asn Thr Al a Arg Leu Met 1 5 10 15 Al a Gly Al a Gly Pro Al a Pro Met Leu Al a Al a Al a Al a Gly T rp Gin 20 25 30 Thr Leu Ser Al a Al a Leu Asp Al a Gin Al a Vai Glu Leu Thr Al a Arg 35 40 45 Leu Asn Ser Leu Gly Glu Al a T rp Thr Gly Gly Gly Ser Asp Lys Al a 50 55 60 Leu Al a Al a Al a Thr Pro Met Vai Vai T rp Leu Gin Thr Al a Ser Thr 65 70 75 80 Gin Al a Lys Thr Arg Al a Met Gin Al a Thr Al a Gin Al a Al a Al a Tyr 85 90 95 Thr Gin Al a Met Al a Thr Thr Pro Ser Leu Pro Glu Ile Al a Al a Asn 100 105 110 Hi s Ile Thr Gin Al a Vai Leu Thr Al a Thr Asn Phe Phe Gly Ile Asn 115 120 125 Thr Ile Pro Ile Al a Leu Thr Glu Met Asp Tyr Phe Ile Arg Met T rp 130 135 140 Asn Gin Al a Ala Leu Ala Met Glu Vai Tyr 1 Gin i Ala Glu Thi " Alí a Vai 145 150 155 160

Asn Thr Leu Phe Glu Lys Leu Glu Pro Met Ala ser ile Leu Asp Pro 165 170 175 178

Gly Ala ser Gin ser Thr Thr Asn Pro ile Phe Gly Met Pro Ser Pro 180 185 190

Gly Ser Ser Thr Pro Val Gly Gl n Leu i Pro Pro Ala Ala Thi " Gll i Thr 195 200 205 Leu Gly Gin Leu Gly Glu Met Ser Gly Pro Met Gl n Gin Leu Thr Gin 210 215 220 Pro Leu Gin Gin Vai Thr Ser Leu Phe Ser Gin Val Gly Gly Thr Gly 225 230 235 240 Gly Gly Asn Pro Al a Asp Glu Glu Al a Al a Gl n Met Gly Leu Leu Gly 245 250 255 Thr Ser Pro Leu Ser Asn Hi s Pro Leu Al a Gly Gly Ser Gly Pro Ser 260 265 270 Al a Gly Al a Gly Leu Leu Arg Al a Glu Ser Leu Pro Gly Al a Gly Gly 275 280 285 Ser Leu Thr Arg Thr Pro Leu Met Ser Gin Leu Ile Glu Lys Pro Val 290 295 300 Al a Pro Ser Vai Met Pro Al a Al a Al a Al a Gly Ser Ser Al a Thr Gly 305 310 315 320 Gly Ala Ala Pro vai Gly Ala Gly Ala Met Gly Gl n Gly Ala Gin Ser 325 330 335 Gly Gly Ser Thr Arg Pro Gly Leu Val Ala Pro Al a Pro Leu Ala Gin 340 345 350 Glu Arg Glu Glu Asp Asp Glu Asp Asp T rp Asp Glu Glu Asp Asp T rp 355 360 365

<210> 110 <211> 12 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 179 <400> 110

Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala 1 5 10

<210> 111 <211> 396 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 111 gatctccggc gacctgaaaa cccagatcga ccaggtggag tcgacggcag gttcgttgca 60 gggccagtgg cgcggcgcgg cggggacggc cgcccaggcc gcggtggtgc gcttccaaga 120 agcagccaat aagcagaagc aggaactcga cgagatctcg acgaatattc gtcaggccgg 180 cgtccaatac tcgagggccg acgaggagca gcagcaggcg ctgtcctcgc aaatgggctt 240 ctgacccgct aatacgaaaa gaaacggagc aaaaacatga cagagcagca gtggaatttc 300 gcgggtatcg aggccgcggc aagcgcaatc cagggaaatg tcacgtccat tcattccctc 360 cttgacgagg ggaagcagtc cctgaccaag ctcgca 396

<210> 112 <211> 80 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 112

Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gin Ile Asp Gin vai Glu Ser Thr Ala 15 10 15

Gly Ser Leu Gin Gly Gin Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gin 20 25 30

Ala Ala Vai Vai Arg Phe Gin Glu Ala Ala Asn Lys Gin Lys Gin Glu 35 40 45 180

Leu Asp Glu lie Ser Thr Asn ile Arg Gin Ala Gly vai Gin Tyr ser 50 55 60

Arg Ala Asp Glu Glu Gin Gin Gin Ala Leu Ser Ser Gin Met Gly Phe 65 70 75 80

<210> 113 <211> 387 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 113 gtggatcccg atcccgtgtt tcgctattct acgcgaactc ggcgttgccc tatgcgaaca 60 tcccagtgac gttgccttcg gtcgaagcca ttgcctgacc ggcttcgctg atcgtccgcg 120 ccaggttctg cagcgcgttg ttcagctcgg tagccgtggc gtcccatttt tgctggacac 180 cctggtacgc ctccgaaccg ctaccgcccc aggccgctgc gagcttggtc agggactgct 240 tcccctcgtc aaggagggaa tgaatggacg tgacatttcc ctggattgcg cttgccgcgg 300 cctcgatacc cgcgaaattc cactgctgct ctgtcatgtt tttgctccgt ttcttttcgt 360 attagcgggt cagaagccca tttgcga 387

<210> 114 <211> 272 <212> ADN <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 114 gctccgttcc gggggcgagc 60 tggatggacc agttgctacc 120 cccggcgcgc acgtcgggag 180 cagacggtct ggacggaacg 240 272 ggcgggggtt cgccgattgg catctttgcc ca 181

<210> 115 <211> 20 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 115

Asp Pro Vai Asp Ala Vai Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gin Vai 15 10 15

Vai Ala Ala Leu 20

<210> 116 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 116

Ala Vai Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser 15 10 15

<210> 117 <211> 19 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 117

Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys 15 10 15

Glu Gly Arg 182 <210> 118 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 118

Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gin Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro 15 10 15 <210> 119 <211> 14 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (12)..(12) <223> Desconhecido <400> 119

Asp ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gin Gin xaa Ala vai 1 5 10 <210> 120

<210> 120 <211> 13 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 183 <220> <221> CARACTERÍ STICA_MISC <222> (8)..(8) <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (10) . . (10) <223> Desconhecido <400> 120 Ala Gl u Glu Ser ile Ser Thr xaa Glu Xaa ile vai 1 5 10 <210> 121 <211> 17 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 121

Pro Pro 15

Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Vai Pro Thr Thr Ala Ala Ser 15 10

Ser <210> 122 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis 184 <220>

<221> CARACTERÍSTICA_MISC <222> (6)..(6) <223> Desconhecido <400> 122

Thr Asp Thr Gly 15

Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly 15 10

<210> 123 <211> 30 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 123

Ala Gin Leu Thr Ser 15

Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Vai Pro Thr Ala 1 5 10

Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Vai Ser 20 25 <210> 124 <211> 22 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (8) . • (8) <223> Desconhecido

Phe Ala Asn 30 185 <22 0> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (21)..(21) <223> Desconhecido <400> 124

Asp Pro Pro Asp Pro His Gin Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro 15 10 15

Gly Gly Arg Arg Xaa Phe 20 <210> 125 <211> 7 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 125

Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly 1 5 <210> 126 <211> 10 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (D · · (D <223> Desconhecido 186 <22 0> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (2) . . (2) <223> Pro or Thr <400> 126

Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gin Phe Tyr 1 5 10 <210> 127 <211> 9 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (D · · (D <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (3)..(3) <223> Gin or Leu <400> 127

Xaa Pro Xaa Vai Thr Ala Tyr Ala Gly 1 5

<210> 128 <211> 9 <212> PRT 187 <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (D · · (3) <223> Desconhecido <400> 128

Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg 1 5 <210> 129 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERISTICA_MISC <222> (D · · (D <223> Desconhecido <400> 129

Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Vai Thr Asp Ala Ser 15 10 15

<210> 130 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERISTICA_MISC 188 <222> (5)..(5) <223> Desconhecido <4 0 0> 130

Ala Gly Asp Thr xaa lie Tyr lie vai Gly Asn Leu Thr Ala Asp 15 10 15

<210> 131 <211> 15 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <400> 131

Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr vai Gin Ala Gly 15 10 15 <210> 132 <211> 21 <212> PRT <213> Mycobacterium tuberculosis <220> <221> CARACTERÍ STICA. _MI SC <222> (D · · (D <223> Desconhecido <220> <221> CARACTERÍSTICA _MI SC <222> (6) .. (6) <223> Desconhecido 189 <4 Ο 0> 132

Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Vai Pro Gly Lys Ile 15 10 15

Asn Vai His Leu vai 20

Lisboa, 5 de Janeiro de 2012 190

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Método para detectar a sensibilidade de um indivíduo a um antigénio micobacteriano compreendendo: (a) contactar uma amostra biológica do referido indivíduo com um polipéptido compreendendo uma porção antigénica da SEQ ID N° 89; e (b) detectar na amostra biológica a presença de anticorpos que se ligam ao polipéptido.
2. Método de acordo com a reivindicação 1 para detectar infecção por M. tuberculosis num indivíduo compreendendo: (a) contactar uma amostra biológica do referido indivíduo com um polipéptido compreendendo uma porção antigénica da SEQ ID N° 89; e (b) detectar na amostra biológica a presença de anticorpos que se ligam ao polipéptido.
3. Método da reivindicação 2, em que o passo (a) compreende adicionalmente contactar uma amostra biológica com um antigénio de 38 kD de M. tuberculosis e o passo (b) compreende adicionalmente detectar na amostra a presença de anticorpos que se ligam ao antigénio de 38 kD de M. tuberculosis.
4. Método da reivindicação 1 ou 2, em que o polipéptido está ligado a um suporte sólido. 1
5. Método da reivindicação 4, em que o suporte sólido compreende nitrocelulose, látex ou um material plástico.
6. Método da reivindicação 2, em que a amostra biológica é seleccionada do grupo consistindo de sangue total, soro, plasma, saliva, liquido cefalorraquidiano e urina.
7. Método da reivindicação 6, em que a amostra biológica é sangue total ou soro.
8. Kit de diagnóstico compreendendo: (a) um polipéptido compreendendo uma porção antigénica da SEQ ID N° 89; e (b) um reagente de detecção.
9. Kit de diagnóstico da reivindicação 8, em que o polipéptido está imobilizado num suporte sólido.
10. Kit da reivindicação 9, em que o suporte sólido compreende nitrocelulose, látex ou um material plástico.
11. Kit da reivindicação 8, em que o reagente de detecção compreende um grupo repórter conjugado com um agente de ligação.
12. Kit da reivindicação 11, em que o agente de ligação é seleccionado do grupo consistindo de imunoglobulinas, Proteína G, Proteína A e lectinas.
13. Kit da reivindicação 11, em que o grupo repórter é seleccionado do grupo consistindo de radioisótopos, grupos 2 biotina e fluorescentes, grupos luminescentes, enzimas, partículas de corantes. Lisboa, 5 de Janeiro de 2012 3