PT2139490E

PT2139490E - Miméticos bicíclicos diazo de smac e utilizações destes

Info

Publication number: PT2139490E
Application number: PT87457503T
Authority: PT
Inventors: Shaomeng Wang; Yuefeng Peng; Haiying Sun; Qian Cai; Zaneta Nikolovska-Coleska; Jianfeng Lu; Su Qiu
Original assignee: Univ Michigan
Priority date: 2007-04-13
Filing date: 2008-04-14
Publication date: 2014-10-08
Also published as: US8278293B2; PL2139490T3; JP2010523722A; EP2139490A2; ZA200907055B; SI2139490T1; US20120309961A1; BRPI0810522B1; CN101686981A; AU2008240119B2; HUE024142T2; BRPI0810522A2; US20100273812A1; US8664212B2; MX2009011069A; IL201474A; AU2008240119A1; JP5416089B2; WO2008128171A2; DK2139490T3

Description

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DESCRIÇÃO "MIMÉTICOS BICÍCLICOS DIAZO DE SMAC E UTILIZAÇÕES DESTES" ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção

Esta invenção está no campo da química medicinal. Em particular, a invenção refere-se a miméticos conformacionalmente constrangidos da sequência N-terminal de Smac que funcionam como inibidores do Inibidor de Proteínas de Apoptose. A invenção refere-se também à utilização destes miméticos para indução ou sensibilização de células para a indução de morte celular apoptótica. Técnica Relacionada 0 fenótipo agressivo de células de cancro é o resultado de uma variedade de alterações genéticas e epigenéticas levando à desregulação de vias de sinalização intracelular (Ponder, Nature 411: 336 (2001)) . O ponto em comum para todas as células de cancro, no entanto, é a sua

incapacidade para executar um programa apoptótico, e a falta de apoptose apropriada devido a defeitos na maquinaria de apoptose normal é uma marca característica do cancro (Lowe et ai., Carcinogenesis 21: 485 (2000)). A maioria das terapias actuais de cancro, incluindo agentes quimioterapêuticos, radiação e imunoterapia, funciona através da indução indirecta de apoptose em células de cancro. A incapacidade das células de cancro para executar um programa apoptótico devido a defeitos na maquinaria apoptótica normal é assim frequentemente associada a um 2 aumento na resistência à apoptose induzida por quimioterapia, radiação, ou imunoterapia. A resistência primária ou adquirida de cancro humano de diferentes origens a protocolos actuais de tratamento devido a defeitos de apoptose é um dos principais problemas na terapia de cancro actual (Lowe et al., Carcinogenesis 21: 485 (2000); Nicholson, Nature 407: 810 (2000)). Assim, os esforços actuais e futuros para a concepção e o desenvolvimento de novas terapias moleculares anticancro especificas do alvo para melhorar a sobrevivência e a qualidade de vida de pacientes de cancro deve incluir estratégias que visem especificamente a resistência das células de cancro à apoptose. A este respeito, atingir reguladores negativos cruciais que desempenhem um papel central na inibição directa da apoptose em células de cancro representa uma estratégia terapêutica muito promissora para a concepção de novos fármacos anticancro.

Duas classes de reguladores negativos centrais de apoptose foram identificadas. A primeira classe de reguladores é a familia de proteínas Bcl-2, tal como exemplificada por duas potentes moléculas anti-apoptóticas, proteínas Bcl-2 e Bcl-XL (Adams et al., Science 281: 1322 (1998); Reed, Adv. Pharmacol. 41: 501 (1997); Reed et al., Adv. Pharmacol. 41: 501 (1997); Reed et al., J. Cell. Biochem. 60: 23 (1996)). As estratégias terapêuticas para atingir Bcl-2 e Bcl-XL em cancro para restaurar a sensibilidade das células de cancro e superar a resistência das células de cancro a apoptose têm sido extensivamente revistas (Adams et al., Science 281: 1322 (1998); Reed, Adv. Pharmacol. 41: 501 (1997); Reed et al., J. Cell. Biochem. 60: 23 (1996)). Vários laboratórios estão interessados na concepção de inibidores de pequena molécula de Bcl-2 e Bcl-XL. 3 A segunda classe de reguladores negativos centrais de apoptose é o inibidor de proteínas de apoptose (IAP) (Deveraux et al., Genes Dev. 13: 239 (1999); Salvesen et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 3: 401 (2002)). Esta classe inclui proteínas tais como XIAP, cIAP-1, cIAP-2, ML-IAP, HIAP, KIAP, TSIAP, NAIP, survivina, livina, ILP-2, apolon e BRUCE. As proteínas IAP suprimem potencialmente a apoptose induzida por uma grande variedade de estímulos apoptóticos, incluindo agentes quimioterapêuticos, radiação e imunoterapia em células de cancro. IAP ligado ao X (XIAP) é o inibidor mais potente em supressão de apoptose entre todos os membros IAP (Holcik et al.r Apoptosis 6:253 (2001); LaCasse et al., Oncogene 17:3247 (1998); Takahashi et al., J. Biol. Chem. 273: 7787 (1998); Deveraux et al., Nature 388: 300 (1997); Sun et al., Nature 401: 818 (1999); Deveraux et al., EMBO J. 18: 5242 (1999); Asselin et al., Câncer Res. 61: 1862 (2001)). XIAP desempenha um papel chave na regulação negativa da apoptose tanto nas vias mediadas por receptores de morte como mediadas por mitocôndrias. XIAP funciona como um potente inibidor endógeno de apoptose ligando-se directamente e fortemente inibindo três membros da família de enzimas caspases, caspase-3, Ί, e 9 (Takahashi et al., J. Biol. Chem. 273: 7787 (1998); Deveraux et al., Nature 388: 300 (1997); Sun et al., Nature 401: 818 (1999);

Deveraux et al., EMBO J. 18: 5242 (1999); Asselin et al., Câncer Res. 61: 1862 (2001); Riedl et al., Cell 104: 791 (2001); Chai et al., Cell 104: 769 (2001) ; Huang et al.,

Cell 104: 781 (2001)). XIAP contém três domínios de repetição de baculovírus inibidores de apoptose (BIR), bem como um dedo RING C-terminal. O terceiro domínio BIR (BIR3) 4 dirige-se selectivamente a caspase-9, a caspase iniciadora na via mitocondrial, enquanto a região ligadora entre BIR1 e BIR2 inibe tanto a caspase-3 como a caspase-7 (Salvesen et al. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 3: 401 (2002)). Embora a ligação a XIAP impeça a activação de todas as três caspases, é aparente que a interacção com a caspase-9 é a mais critica para a sua inibição da apoptose (Ekert et al., J. Cell Biol. 152: 483 (2001); Srinivasula et al., Nature 410: 112 (2001)) . Como XIAP bloqueia a apoptose na fase efectora a jusante, um ponto em que convergem múltiplas vias de sinalização, estratégias para atingir XIAP podem revelar-se especialmente eficazes para superar a resistência das células de cancro a apoptose (Fulda et al. Nature Med. 8: 808 (2002); Arnt et al., J. Biol. Chem. 277: 44236 (2002)).

Embora o papel exacto de XIAP em cada tipo de cancro esteja longe de estar completamente compreendido, há evidências que indicam que XIAP é amplamente sobre-expressa em muitos tipos de cancro e pode ter um papel importante na resistência das células de cancro a uma variedade de agentes terapêuticos actuais (Holcik et al., Apoptosis 6: 253 (2001); LaCasse et al., Oncogene 17: 3247 (1998)).

Verificou-se que a proteína XIAP é expressa na maioria das linhas celulares de cancro humano NCI 60 (Tamm et al., Clin. Câncer Res. 6: 1796 (2000)). A análise de amostras de tumores em 78 pacientes não tratados mostrou anteriormente que aqueles com níveis mais baixos de XIAP tiveram uma sobrevivência significativamente maior (Tamm et al. Clin. Cancro Res. 6: 1796 (2000)). Verificou-se que XIAP é expressa em glioma maligno humano (Wagenknecht et al., Cell Death Differ. 6: 370 (1999); Fulda et al., Nature Med. 8: 5 808 (2002)) . Verificou-se que XIAP é expressa em células de cancro da próstata humano e bloqueia a apoptose relacionada com ligando Apo2/factor de necrose tumoral induzindo apoptose mediada por ligando de células de cancro da próstata na presença de activação mitocondrial (McEleny et al., Prostate 51: 133 (2002); Ng et al., Mol. Câncer Ther. 1: 1051 (2002)). XIAP é sobre-expressa em cancro do pulmão de células não pequenas (NSCLC) em pacientes e tem sido implicada na patogénese de NSCLC (Hofmann et al., J. Câncer Res. Clin. Oncol. 128: 554 (2002)). A expressão de XIAP e a falta de sub-regulação de XIAP após tratamento com cisplatina foram implicadas na resistência à cisplatina de cancro do ovário humano (Li et al., Endocrinology 142: 370 (2001); Cheng et al., Drug Resist. Update 5: 131 (2002)). Tomados em conjunto, estes dados sugerem que XIAP pode desempenhar um papel importante na resistência de vários cancros humanos a agentes terapêuticos actuais. A integridade da parede dos vasos sanguíneos é essencial para a homeostasia vascular e a função dos órgãos. Um equilíbrio dinâmico entre a sobrevivência e a apoptose das células endoteliais contribui para esta integridade durante o desenvolvimento vascular e a angiogénese patológica. Foi demonstrado que cIAP-1 é essencial para a manutenção da sobrevivência das células endoteliais e a homeostasia dos vasos sanguíneos durante o desenvolvimento vascular (Santoro et al., Nature Genetics, 39: 1397 (2007) . Como tal, cIAP-1 pode desempenhar um papel importante no controlo de angiogénese e na homeostasia dos vasos sanguíneos durante a embriogénese, regeneração e tumorigénese. 6 A apoptose não é um processo único, em vez disso está envolvida com várias vias de sinalização diferentes, por vezes interligadas, conduzindo à degradação da célula. As vias envolvidas numa forma particular de apoptose dependem de muitos factores, tais como o insulto ou insultos gue iniciam o processo. Outros factores incluem a activação ou sobre-activação de receptores específicos, tais como a activação de receptores de "morte" através de factor de necrose tumoral alfa (TNFa), ligando de indução de apoptose relacionado com o factor de necrose tumoral (TRAIL ou Apo2L), ou ligando FAS. Outro factor determinante é o tipo de célula que está envolvido, uma vez que se mostram diferentes vias de sinalização para as chamadas células de tipo I e tipo II após activação do receptor de Fas ou TNFa.

Mostrou-se que TRAIL (Apo2L) é um indutor selectivo e potente de apoptose em células de cancro (mas não em células normais) após ligação a qualquer um dos dois receptores de TRAIL pró-apoptóticos, TRAIL-R1 (ou DR4) (Pan et al. , Science 276: 111 (1997)) ou TRAIL-R2 (KILLER, ou DR5) (Wu et al., Nat. Genet. 17: 141-143 (1997); Pan et al., Science 277: 815 (1997); Walczak et al., EMBO J. 16: 5386 (1997)) . A activação dos receptores de morte pró- apoptóticos por TRAIL induz a formação de complexo de sinalização indutor de morte (DISC), que consiste no receptor FADD como um adaptador (Kischkel et al., Immunity 12: 611 (2000); Kuang et al. , J. Biol. Chem. 275: 25065 (2000)), e caspase-8 como uma caspase iniciadora. Uma vez formado o DISC, a caspase-8 é auto-processada e activada através de proximidade induzida (Medema et al., EMBO J. 16: 2794 (1997); Muzio et al., J. Biol. Chem. 273: 2926 (1998)). 7 TRAIL tem gerado grande interesse como um potencial terapêutico de cancro (French et al., Nat. Med. 5: 146 (1999)), devido a atingir selectivamente células de cancro, enquanto a maioria das células normais parece ser resistente a TRAIL (Ashkenazi et ai., Science 281: 1305 (1998) ; Walczak et al., Nat. Med. 5: 157 (1999)). A administração sistémica de TRAIL provou ser segura e eficaz a matar tumores xenoenxertados da mama ou do cólon e a prolongar a sobrevivência em ratinhos (Walczak et al. Nat. Med. 5: 157 (1999)). Embora TRAIL possa matar especificamente muitos tipos de células de cancro, muitos outros exibem resistência a TRAIL (Kim et al., Clin. Câncer Res. 6: 335 (2000); Zhang et al. , Câncer Res. 59: 27 47 (1999) ) . Além disso, células de cancro foram mortas através da aplicação de anticorpos (monoclonais ou policlonais) que reconhecem especificamente TRAIL-R1 ou TRAIL-R2.

Numerosos mecanismos foram identificados como potenciais factores responsáveis pela resistência a TRAIL. Tais mecanismos existem a vários niveis, incluindo ao nível do receptor, ao nível das mitocôndrias, ao nível pós-mitocôndria e ao nível de DISC. Por exemplo, a perda de expressão de caspase-8 (Teitz et al., Nat. Med. 6: 529 (2000) ; Griffith et al., J. Immunol. 161: 2833 (1998)), ou a elevada expressão da proteína inibidora de FLICE celular (cFLIP) (Kim et al., Clin. Câncer Res. 6: 335 (2000); Zhang et al., Câncer Res. 59: 2747 1999; Kataoka et ai., J.

Immunol. 161: 3936 (1998)) torna as células de cancro resistentes a TRAIL. Yeh et al. mostraram que fibroblastos embrionários de ratinho deficientes em cFLIP são particularmente sensíveis a apoptose medida por receptores (Yeh et al., Immunity 12: 533 (2000)). São conhecidas várias variantes de processamento de cFLIP, incluindo uma 8 variante de processamento curta, cFLIP-S, e uma variante de processamento mais longa, cFLIP-L. Mostrou-se que fibroblastos embrionários de ratinho deficientes em cFLIP se tornam resistentes a apoptose induzida por TRAIL em resultado de transdução mediada por retrovirus de cFLIP-S (Bin et al.f FEBS Lett. 510: 37 (2002)).

Embora TRAIL represente um candidato potencialmente promissor para activação de receptor de morte selectiva para tumores (isto é, induz apoptose de preferência em células tumorais mas não em tecidos normais), muitas células de cancro são resistentes a fármacos indutores de apoptose, tal como discutido acima. Como resultado, o tratamento com tais fármacos requer frequentemente co-tratamento com irradiação e/ou químicos citotóxicos para alcançar um efeito terapêutico. No entanto, tanto a radiação como a quimioterapia têm efeitos secundários significativos, e são geralmente, se possível, evitados.

Assim, existe a necessidade de um agente que possa selectivamente e eficazmente sensibilizar células tumorais a fármacos selectivos indutores de apoptose tais como TRAIL ou anticorpos de receptores de TRAIL, sem também sensibilizar células normais circundantes. Um tal agente também seria útil para reduzir ou prevenir a resistência a fármacos normalmente associada ao uso de fármacos de cancro apoptóticos mediados por receptores, melhorando assim a sua eficácia e eliminado a necessidade de terapias de combinação.

Recentemente, Smac/DIABLO (activador secundário de caspases derivado de mitocôndrias) foi identificado como uma proteína libertada a partir de mitocôndrias para o citosol 9 em resposta a estímulos apoptóticos (Budihardjo et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15: 269 (1999); Du et al., Cell 102: 33 (2000)) . Smac é sintetizado com uma sequência de direccionamento mitocondrial N-terminal que é removida proteoliticamente durante a maturação no polipéptido maduro. Mostrou-se que Smac interage directamente com XIAP e outras IAP e destrói a sua ligação às caspases e facilita a activação de caspases. Smac é um potente inibidor endógeno de XIAP.

Estruturas tridimensionais (3D) experimentais de alta resolução do domínio BIR3 de XIAP em complexo com a proteína e o péptido Smac foram recentemente determinadas (Sun et al., J. Biol. Chem. 275: 36152 (2000); Wu et al., Nature 408: 1008 (2000)) (Figura 1). O tetrapéptido N-terminal de Smac (Ala-Val-Pro-Ile, ou AVPI (SEQ ID NO:l)) reconhece um sulco na superfície do domínio BIR3 de XIAP através de várias interacções de pontes de hidrogénio e de contactos de van der Waals. Também se demonstrou que a interacção entre BIR3 e a caspase-9 envolve quatro resíduos (Ala-Thr-Pro-Phe, ou ATPF (SEQ ID NO:2)) no terminal amino da subunidade pequena da caspase-9 no mesmo sulco na superfície do domínio BIR3. Vários estudos recentes demonstraram de forma convincente que Smac promove a actividade catalítica de caspase-9 através da competição com a caspase-9 pelo mesmo sulco de ligação na superfície do domínio BIR3 (Ekert et al., J. Cell Biol. 152: 483 (2001); Srinivasula et al., Nature 410: 112. (2001)).

Ao contrário da maioria das interacções proteína-proteína, a interacção Smac-XIAP é mediada apenas por quatro resíduos de aminoácidos na proteína Smac e um sulco superficial bem definido no domínio BIR3 de XIAP. O valor de Kd do péptido 10 de Smac AVPI (SEQ ID NO:l) para BIR3 de XIAP (Kd = 0,4 μΜ) é essencialmente o mesmo que o da proteína madura Smac (Kd = 0,42 μΜ) . Este local de interacção bem definido é ideal para a concepção de pequenas moléculas não peptídicas, semelhantes a fármacos que imitem a ligação de Smac a XIAP.

Mostrou-se recentemente que um péptido de Smac permeável nas células, que consiste nos primeiros quatro resíduos de aminoácidos (AVPI (SEQ ID NO:l)) do terminal N de Smac preso a um péptido transportador para facilitar a distribuição intracelular, sensibiliza várias células tumorais in vitro e células de glioma maligno in vivo para apoptose induzida por ligação a receptores de morte ou fármacos citotóxicos (Fulda et al. Nature Med. 8: 808 (2002)) . É importante notar que este péptido de Smac aumentou fortemente a actividade anti-tumoral de Apo2L/TRAIL num modelo de xenoenxerto de glioma maligno intracraniano in vivo. A erradicação completa de tumores estabelecidos e a sobrevivência dos ratinhos apenas foram conseguidas através de tratamento combinado com péptidos de Smac e Apo2L/TRAIL. De importância, o péptido de Smac não tem toxicidade detectável no tecido normal do cérebro.

Um segundo estudo independente recente mostrou também que péptidos consistindo nos primeiros quatro a oito resíduos de aminoácidos do terminal N de Smac presos a um péptido transportador diferente aumentaram a indução de apoptose e os efeitos anti-proliferativos a longo prazo de diversos fármacos quimioterapêuticos, incluindo paclitaxel, etopósido, SN-38, e doxorrubicina em MCF-7 e outras linhas celulares de cancro da mama humano (Arnt et al., J. Biol. Chem. 277: 44236 (2002). Este estudo mostrou 11 conclusivamente que XIAP e cIAP-1 sao os alvos moleculares primários para estes péptidos nas células.

Um terceiro estudo demonstrou que um péptido de Smac dos primeiros sete resíduos N-terminais presos a poliarginina restaurou a actividade do apoptossoma e reverteu a resistência à apoptose de células de cancro do pulmão de células não pequenas H460 (Yang et al., Câncer Res. 63: 831 (2003)). Mostrou-se que XIAP é responsável pelo defeito na actividade do apoptossoma e na supressão da actividade da caspase em células H460. Quando utilizado em combinação com quimioterapia, o péptido de Smac permeável nas células regrediu o crescimento de tumores in vivo com pouca toxicidade em murideo. Tomados em conjunto, estes estudos independentes recentes sugerem fortemente que um mimético de Smac permeável nas células, potente e estável, pode ter grande potencial terapêutico para o tratamento de cancro da mama humano e de outros tipos de cancro.

Os inibidores baseados em péptidos são ferramentas úteis para elucidar a função anti-apoptótica dos IAP e o papel dos IAP na resposta das células de cancro a agentes quimioterapêuticos. Mas os inibidores baseados em péptidos têm em geral limitações intrínsecas como agentes terapêuticos potencialmente úteis. Estas limitações incluem a sua fraca permeabilidade nas células e fraca estabilidade in vivo. De facto, nestes três estudos publicados utilizando inibidores peptídicos baseados em Smac, os péptidos tiveram de ser fundidos com péptidos transportadores para os tornar relativamente permeáveis nas células. 12 WO2005069894 e W02006010118 descrevem ambos miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos que funcionam como inibidores de IAP. Estas divulgações relacionam-se também com a utilização destes miméticos para indução de morte celular apoptótica e para sensibilização de células a indutores de apoptose.

Para superar as limitações intrínsecas dos inibidores baseado em péptidos, a presente invenção envolve a concepção de miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO É geralmente aceite que a incapacidade das células de cancro ou das suas células de suporte para sofrer apoptose em resposta a lesões genéticas ou exposição a indutores de apoptose (tais como agentes anticancro e radiação) é um factor importante no aparecimento e na progressão do cancro. Pensa-se que a indução de apoptose em células de cancro ou nas suas células de suporte (P- ex., células neovasculares na vasculatura do tumor) seja um mecanismo universal de acção para virtualmente todos os fármacos terapêuticos de cancro eficazes ou terapias de radiação no mercado ou na prática actualmente. Uma razão para a incapacidade de uma célula sofrer apoptose é o aumento da expressão e acumulação de IAP. A presente invenção contempla que a exposição de animais sofrendo de cancro ou outros distúrbios hiper-proliferativos ou doenças associadas a desregulação de apoptose a quantidades terapeuticamente eficazes de um ou mais fármacos (p. ex., pequenas moléculas) que inibam a 13 função ou as funções dos IAP, matará as células doentes ou de suporte definitivas (as células cuja sobrevivência continuada é dependente da hiperactividade ou sobre-expressão de IAP) e/ou tornará tais células numa população mais susceptivel à actividade de indução de morte celular de fármacos terapêuticos de cancro ou terapias de radiação. A presente invenção contempla que inibidores de IAP satisfazem uma necessidade não satisfeita para o tratamento de vários tipos de cancro, quando administrados como monoterapia para induzir apoptose em células de cancro dependentes da função de IAP, ou quando administrados numa relação temporal com outros fármacos terapêuticos de cancro de indução de morte celular ou terapias de radiação de modo a tornar uma qrande proporção das células de cancro ou células de suporte susceptíveis à execução do programa de apoptose em comparação com a correspondente proporção de células num animal tratado apenas com o fármaco terapêutico de cancro ou terapia de radiação sozinhos. A presente invenção contempla também que o tratamento de animais sofrendo de doenças associadas a células endoteliais (p. ex., angiogénese tumoral, retinopatias e aterosclerose) com quantidades terapeuticamente eficazes de um ou mais fármacos (p. ex., pequenas moléculas) que inibem a função ou funções dos IAP (p. ex., cIAP-1), pode evitar ou inibir a angiogénese e perturbar a homeostasia dos vasos sanguíneos durante o desenvolvimento vascular em condições patológicas. Distúrbios particulares que podem ser tratados com os compostos da invenção incluem degeneração macular, artrite reumatóide, psoríase, retinopatia diabética, retinopatia da prematuridade, rejeição de enxerto da córnea, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolenticular, rubeose, Síndroma de Osler-Webber, angiogénese do 14 miocárdio, neovascularização de placas, telangiectasia, articulações de hemofílicos, angiofibroma, granulação de feridas, aderências intestinais, aterosclerose, esclerodermia e cicatrizes hipertróficas.

Os requerentes verificaram que a inserção de NR5 no sistema de anéis biciclico tem certa influência inesperada na ligação a XIAP em comparação com os análogos carbocíclicos (p. ex., SM-122) (Quadro 1) . Por exemplo, a afinidade de ligação a BIR3 de XIAP e a actividade celular nas linhas celulares de cancro MDA-MB-231 e SK-OV-3 de SM-245P3 (R5 = Me) e SM-246P (R5 = Bn) são inferiores às de SM-122. Surpreendentemente, a afinidade de ligação a BIR3 de XIAP e a actividade celular nas linhas celulares de cancro MDA-MB-231 e SK-OV-3 de SM-337 (R5 = COCH2Ph) e SM-406 (R5 = COCH2CH (CH3)2 são iguais ou melhores que as de SM-122. Além de certas propriedades biológicas, os Requerentes verificaram que SM-406 e outros análogos relacionados apresentam uma inesperada melhoria na biodisponibilidade oral relativamente a SM-122.

Quadro 1 15

Os requerentes verificaram também que os compostos da presente invenção quando combinados com outros agentes anticancro (p. ex., Tykerb®, Taxotere, gemcitabina, mitoxantrona, etopósido) apresentam melhorias inesperadas na actividade in vitro em linhas celulares de cancro. Além disso, os Requerentes verificaram que os compostos da presente invenção quando combinados com outros agentes anticancro (p. ex., Tykerb®, Taxotere, gemcitabina) apresentam reduções surpreendentes no volume médio do tumor em modelos de xenoenxerto de cancro in vivo. Assim, em certas formas de realização da invenção, o tratamento de combinação de animais com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção e um curso de um agente anticancro ou radiação produz uma maior resposta do tumor e beneficio clinico em tais animais, em comparação 16 com os tratados com o composto ou os fármacos anticancro/radiação sozinhos. De outra forma, como os compostos da presente invenção baixam o limiar apoptótico de todas as células que expressam IAP, a proporção das células que executam com sucesso o programa de apoptose em resposta à actividade de indução de apoptose de fármacos anticancro/radiação é aumentada. Alternativamente, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para permitir a administração de uma dose inferior, e portanto menos tóxica e mais tolerável, de um agente anticancro e/ou radiação para produzir a mesma resposta do tumor/beneficio clinico que a dose convencional do agente anticancro/radiação sozinho. Uma vez que as doses para todos os fármacos anticancro aprovados e tratamentos de radiação são conhecidas, a presente invenção contempla as várias combinações destas com os compostos da presente invenção. Também, uma vez que os compostos da presente invenção actuam pelo menos em parte através da inibição de IAP, a exposição de células de cancro e células de suporte a quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos pode ser temporariamente ligada para coincidir com as tentativas das células para executar o programa de apoptose em resposta ao agente anticancro ou terapia de radiação. Assim, nalgumas formas de realização, a administração das composições da presente invenção em ligação com certas relações temporais, proporciona práticas terapêuticas especialmente eficazes. A presente invenção refere-se a miméticos de Smac que são úteis para inibição de proteínas IAP e inter alia aumento da sensibilidade das células a indutores de apoptose. Numa forma de realização particular, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula VI: X 17

τ-υ

Ν-Α2

VI em que :

Ai e Α2 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo opcionalmente substituído; X é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo C1-3 opcionalmente substituído; T é C=0; U é NídR2; cada um de R1 e R2 é independentemente seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; R5 é COR7; e R7 é -CH2CH (CH3) 2; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. A invenção refere-se a compostos representados pela Fórmula VI que são inibidores de proteínas IAP. A invenção refere-se aos compostos da invenção para utilização em indução de apoptose em células e inibição de angiogénese. A invenção refere-se também aos compostos da invenção para utilização em sensibilização de células a indutores de apoptose. Os compostos são úteis para o tratamento, a melhoria, ou a prevenção de distúrbios responsivos a indução de morte 18 celular apoptótica, p. ex., distúrbios caracterizados por desregulação de apoptose, incluindo doenças hiperproliferativas tais como cancro. Em certas formas de realização, os compostos podem ser utilizados para tratar, melhorar, ou prevenir cancro que seja caracterizado por resistência a terapias de cancro (p. ex., os que são resistentes à quimioterapia, resistentes a radiação, resistentes a hormonas, e semelhantes) . Noutras formas de realização, os compostos podem ser utilizados para tratar doenças hiperproliferativas caracterizadas por sobre-expressão de IAP. Noutras formas de realização, os compostos podem ser usados como um método de prevenção ou inibição de angiogénese em animais a necessitar destas. A presente invenção proporciona composições farmacêuticas compreendendo os compostos de Fórmula VI numa quantidade terapeuticamente eficaz para induzir apoptose em células ou para sensibilizar células a indutores de apoptose. A invenção proporciona ainda estojos compreendendo um composto de Fórmula VI e instruções para administração do composto a um animal. Os estojos podem conter opcionalmente outros agentes terapêuticos, p. ex., agentes anticancro ou agentes de modulação de apoptose. A presente invenção proporciona também um processo para preparação de um composto de Fórmula XI:

XI 19 em que:

Ai e A2 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo opcionalmente substituído; V é N; W é CH; X é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo C1-3 opcionalmente substituído; Y é NHCO; Z é (CR1R2)r quando r é 0; T é C=0; U é NRXR2; m é 1; cada um de R1 e R2 é independentemente seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; e R7 é -CH2CH (CH3) 2; compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XII:

\ /

XII em que Ai, A2, V, W, X, Y, Z, T, U e m têm os significados descritos acima para a Fórmula XI, com R7CO-L, em que: R7 é -CH2CH (CH3) 2; e L é um grupo de saída, para formar um composto de Fórmula XI. 20

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Fig. 1 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) num modelo de xenoenxerto de cancro da mama. A Fig. 2 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e taxotere num modelo de xenoenxerto de cancro da próstata. A Fig. 3 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Tykerb® num modelo de xenoenxerto de cancro da próstata. A Fig. 4 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e taxotere num modelo de xenoenxerto de cancro da mama. A Fig. 5 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Tykerb® num modelo de xenoenxerto de cancro da mama. A Fig. 6 é um gráfico ilustrando a actividade anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e gemcitabina num modelo de xenoenxerto de cancro pancreático. A Fig. 7 é um gráfico ilustrando estudos de optimização do programa de doses de SM-406 (AT-406) num modelo de xenoenxerto de cancro da mama. A Fig. 8 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de SM-406 na linha celular de cancro da mama MDA-MB-231, e nas linhas celulares de cancro do ovário SK-OV-3 e OVCAR-4 e na linha celular de cancro melanoma SK-Mel-2. A Fig. 9 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de SM-406 nas linhas celulares de leucemia HL-60 e SR. 21 A Fig. 10 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de SM-406 nas linhas celulares de cancro da mama humano BT-549, MDA-MB-415, SUM-159, MDA-MB-468, MDA-MB-453 e 2LMP. A Fig. 11 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular de TNFa em combinação com SM-406 na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-436. A Fig. 12 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular de TNFa em combinação com SM-406 na linha celular de cancro da mama humano SUM-159. A Fig. 13 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de TRAIL em combinação com SM-406 na linha celular pancreática humana Panc-1. A Fig. 14 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de TRAIL em combinação com SM-406 na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-23 (2LMP). A Fig. 15 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de gemcitabina em combinação com SM-406 na linha celular pancreática humana Panc-1. A Fig. 16 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de mitoxantrona em combinação com SM-406 na linha celular pancreática humana Panc-1. A Fig. 17 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular através de SM-406 em combinação com roscovitina (Ros) na linha celular da próstata humana PC3. A Fig. 18 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular de taxotere (TXT) em combinação com SM-406 na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-453. A Fig. 19 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento celular de VP-16 em combinação com SM-406 na linha celular pancreática humana Panc-1. A Fig. 20 é uma figura ilustrando o efeito de miméticos de Smac na proteina cIAP-1 em células de cancro MDA-MB-231. 22 A Fig. 21 é uma figura ilustrando o efeito de miméticos de Smac em proteínas cIAP-1/2 em células de cancro SK-OV-3. A Fig. 22 é uma figura ilustrando a indução de apoptose através de SM-406 em células de cancro da mama MDA-MB-231. A Fig. 23 é uma figura ilustrando a indução de apoptose através de SM-406 em células de cancro do ovário SK-OV-3. A Fig. 24 é uma figura ilustrando a indução de apoptose através de SM-406 em células de cancro pancreático Panc-1. A Fig. 25 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento tumoral através de SM-406 no modelo de xenoenxerto MDA-MB-231 de cancro da mama humano em ratinhos com imunodeficiência grave combinada (SCID). A Fig. 26 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento tumoral através de SM-406 no modelo de xenoenxerto PC-3 de cancro da próstata humano em ratinhos nus. A Fig. 27 é um gráfico ilustrando a inibição do crescimento tumoral através de SM-406 no modelo de xenoenxerto 2LMP de cancro da mama humano em ratinhos nus. A Fig. 28 é uma série de gráficos ilustrando as curvas de ligação competitiva de SM-406 e SM-428 a domínios BIR3 de quatro membros de proteínas IAP ( (A) XIAP; (B) cIAPl; (C) clAP2; (D) ML-IAP) determinadas utilizando um ensaio de ligação baseado em polarização da fluorescência.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos conformacionalmente constrangidos representados pela Fórmula VI, que são miméticos de Smac e funcionam como inibidores de IAP. Estes compostos sensibilizam as células a indutores de apoptose e, nalguns casos, eles próprios induzem apoptose através da inibição de IAP. Portanto, a invenção refere-se aos compostos de Fórmula VI para 23 utilização em métodos de sensibilização de células a indutores de apoptose e a métodos de indução de apoptose em células, compreendendo o contacto das células com um composto de Fórmula VI sozinho ou em combinação com um indutor de apoptose. A invenção refere-se ainda a compostos de Fórmula VI para utilização em métodos de tratamento, melhoria, ou prevenção de distúrbios num animal que são responsivos à indução de apoptose compreendendo a administração ao animal de um composto de Fórmula VI e um indutor de apoptose. Tais distúrbios incluem os caracterizados por uma desregulação de apoptose e os caracterizados por sobre-expressão de IAP. A invenção refere-se ainda a compostos de Fórmula VI para utilização em métodos de prevenção ou inibição de angiogénese num animal a necessitar destas compreendendo a administração a um animal de um composto de Fórmula VI. 0 termo "proteínas IAP", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer membro da família de Proteínas Inibidoras de Apoptose, incluindo, mas não limitado a, XIAP, cIAP-1, ClAP-2, ML-IAP, HIAP, TSIAP, KIAP, NAIP, survivina, livina, ILP-2, apolon, e BRUCE. 0 termo "sobre-expressão de IAP", tal como aqui utilizado, refere-se a um nível elevado (p. ex., nível aberrante) de ARNm codificando para uma proteína ou proteínas IAP, e/ou a níveis elevados de proteína ou proteínas IAP em células em comparação com células não patológicas correspondentes semelhantes expressando níveis basais de ARNm codificando proteínas IAP ou possuindo níveis basais de proteínas IAP. Métodos para detecção dos níveis de ARNm codificando proteínas IAP ou níveis de proteínas IAP numa célula incluem, mas não se limitam a, Western blotting utilizando anticorpos de proteína IAP, métodos imuno-histoquímicos, e métodos de amplificação de ácidos nucleicos ou detecção directa de ARN. Tão importante como o nível absoluto de proteínas IAP nas células é a determinação de que sobre-expressam proteínas IAP, como é também o nível relativo de proteínas IAP para outras moléculas de sinalização pró-apoptóticas (p. ex., proteínas pró-apoptóticas da família Bcl-2) dentro de tais células. Quando o equilíbrio destas duas é tal que, se não fosse pelos níveis das proteínas IAP, as moléculas de sinalização pró-apoptóticas seriam suficientes para fazer com que as células executassem o programa de apoptose e morressem, as referidas células seriam dependentes das proteínas IAP para a sua sobrevivência. Em tais células, a exposição a uma quantidade eficaz de inibição de um inibidor de proteína IAP será suficiente para fazer com que as células executem o programa de apoptose e morram. Assim, o termo "sobre-expressão de uma proteína IAP" refere-se também a células que, devido aos níveis relativos de sinais pró-apoptóticos e sinais anti-apoptóticos, sofrem apoptose em resposta a quantidades de inibição eficazes de compostos que inibem a função das proteínas IAP.

Os termos "agente anticancro" e "fármaco anticancro", tal como aqui utilizados, referem-se a quaisquer agentes terapêuticos (p. ex., compostos quimioterapêuticos e/ou compostos terapêuticos moleculares), terapias de radiação, ou intervenções cirúrgicas, utilizadas no tratamento de doenças hiperprolif erat ivas tais como cancro (p. ex., em mamíferos). 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer sal (p. ex., obtido através 25 de reacção com um ácido ou uma base) de um composto da presente invenção que seja fisiologicamente tolerado no animal alvo (p. ex., um mamifero). Os sais dos compostos da presente invenção podem ser derivados de ácidos e bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos incluem, mas não se limitam a, ácido clorídrico, bromidrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p- sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanossulfónico, etanossulfónico, fórmico, benzóico, malónico, sulfónico, naftaleno-2-sulfónico, benzenossulfónico, e semelhantes. Outros ácidos, tais como oxálico, embora não em si mesmos farmaceuticamente aceitáveis, possam ser empregues na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e seus sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis.

Exemplos de bases incluem, mas não estão limitados a, hidróxidos de metais alcali (P- ex., sódio), hidróxidos de metais de terras alcalinas (P- ex., magnésio), amónia, e compostos de Fórmula NW4+, em que W é alquilo C1-4, e semelhantes.

Exemplos de sais incluem, mas não se limitam a: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzeno-sulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canfor-sulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, fumarato, fluco-heptanoato, glicerofosfato, hemi-sulfato, heptanoato, hexanoato, cloreto, brometo, iodeto, 2-hidroxietano-sulfonato, lactato, maleato, mesilato, metanossulfonato, 2- naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, 26 propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, e semelhantes. Outros exemplos de sais incluem aniões dos compostos da presente invenção compostos com um catião adequado tal como Na+, NIHU+, e NW4+ (em que W é um grupo alquilo C1-4) , e semelhantes. Para utilização terapêutica, os sais dos compostos da presente invenção estão contemplados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. No entanto, os sais de ácidos e bases que são não farmaceuticamente aceitáveis podem também ter utilização, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz", tal como aqui utilizado, refere-se à quantidade do agente terapêutico suficiente para resultar em melhoria de um ou mais sintomas de um distúrbio, ou prevenir o avanço de um distúrbio, ou causar regressão do distúrbio. Por exemplo, em relação ao tratamento de cancro, uma quantidade terapeuticamente eficaz refere-se de preferência à quantidade de um agente terapêutico que diminui a taxa do crescimento tumoral, diminui a massa tumoral, diminui o número de metástases, aumenta o tempo para a progressão do tumor, ou aumenta o tempo de sobrevivência em pelo menos 5%, de preferência pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100%. O termo "sensibilizar" e "sensibilização", tal como aqui utilizados, referem-se a tornar, através da administração de um primeiro agente (p. ex., um composto de Fórmula I), 27 um animal ou uma célula num animal mais susceptivel, ou mais responsivo, aos efeitos biológicos (p. ex., promoção ou retardamento de um aspecto da função celular incluindo, mas não limitado a, divisão celular, crescimento celular, proliferação, invasão, angiogénese, ou apoptose) de um segundo agente. 0 efeito de sensibilização de um primeiro agente numa célula alvo pode ser medido como a diferença no efeito biológico pretendido (p. ex., promoção ou retardamento de um aspecto da função celular incluindo, mas não limitado a, crescimento celular, proliferação, invasão, angiogénese, ou apoptose) observado após administração de um segundo agente com e sem administração do primeiro agente. A resposta da célula sensibilizada pode ser aumentada em pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 100%, pelo menos 150%, pelo menos 200%, pelo menos 350%, pelo menos 300%, pelo menos 350%, pelo menos 400%, pelo menos 450%, ou pelo menos 500% em relação à resposta na ausência do primeiro agente. O termo "desregulação da apoptose", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer aberração na capacidade (p. ex., predisposição) de uma célula para sofrer morte celular através de apoptose. A desregulação da apoptose está associada a ou é induzida por uma variedade de condições, incluindo por exemplo, distúrbios auto-imunes (p. ex., lúpus eritematoso sistémico, artrite reumatóide, doença de enxerto versus hospedeiro, miastenia grave, ou síndroma de Sjõgren), condições inflamatórias crónicas (p. ex., psoriase, asma ou doença de Crohn), distúrbios hiperproliferativos (p. ex., tumores, linfomas de células B, ou linfomas de células T) , infecções virais (p. ex., 28 herpes, papiloma, ou HIV), e outras condições tais como osteoartrite e aterosclerose. Deve notar-se que quando a desregulação é induzida por ou associada a uma infecção virai, a infecção virai pode ou não ser detectável no momento em que a desregulação ocorre ou é observada. Isto é, a desregulação induzida por virus pode ocorrer mesmo após o desaparecimento dos sintomas de infecção virai. 0 termo "angiogénese", tal como aqui utilizado significa a geração de novos vasos sanguíneos num tecido ou órgão. 0 termo "anti-angiogénese", tal como aqui utilizado, refere-se a prevenção ou redução do crescimento de novos vasos sanguíneos. Exemplos de doenças ou distúrbios associados a angiogénese que podem ser tratados com os compostos da invenção incluem degeneração macular, artrite reumatóide, psoríase, retinopatia diabética, retinopatia de prematuridade, rejeição de enxerto da córnea, glaucoma neovascular, fibroplasia retrolenticular, rubeose, Síndroma de Osler-Webber, angiogénese do miocárdio, neovascularização de placas, telangiectasia, articulações de hemofílicos, angiofibroma, granulação de feridas, aderências intestinais, aterosclerose, esclerodermia e cicatrizes hipertróficas. 0 termo "doença hiperproliferativa", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer condição na qual uma população localizada de células em proliferação num animal não é governada pelas limitações usuais do crescimento normal. Exemplos de distúrbios hiperproliferativos incluem, mas não estão restringidos a cancros (p. ex., tumores, neoplasmas, linfomas e semelhantes) ou distúrbios auto-imunes. Um neoplasma é referido como sendo benigno se não sofrer invasão ou metástase e maligno se sofrer uma destas. 29

Uma célula "metastática" significa que a célula pode invadir e destruir estruturas corporais vizinhas. A hiperplasia é uma forma de proliferação celular envolvendo um aumento no número de células num tecido ou órgão, sem alteração significativa na estrutura ou função. A metaplasia é uma forma de crescimento celular controlado em que um tipo de célula totalmente diferenciada substitui outro tipo de célula diferenciada. Noutra forma de realização, a doença hiperproliferativa é artrite reumatóide, doença inflamatória do intestino, osteoartrite, leiomiomas, adenomas, lipomas, hemangiomas, fibromas, oclusão vascular, restenose, aterosclerose, lesões pré-neoplásicas (tais como hiperplasia adenomatosa e neoplasia intra-epitelial prostática), carcinoma in situ, leucoplasia pilosa oral ou psoriase. 0 crescimento patológico de células linfóides activadas resulta frequentemente num distúrbio auto-imune ou numa condição inflamatória crónica. Tal como aqui utilizado, o termo "distúrbio auto-imune" refere-se a qualquer condição na qual um organismo produz anticorpos ou células imunitárias que reconhecem as moléculas, as células ou os tecidos do próprio organismo. Exemplos não limitantes de distúrbios auto-imunes incluem anemia hemolitica auto-imune, hepatite auto-imune, doença de Berger, ou nefropatia de IgA, doença celíaca, síndrome de fadiga crónica, doença de Crohn, dermatomiosite, fibromialgia, doença do enxerto versus hospedeiro, doença de Grave, tiroidite de Hashimoto, púrpura trombocitopénica idiopática, líquen plano, esclerose múltipla, miastenia grave, psoriase, febre reumática, artrite reumática, esclerodermia, síndrome de Sjogren, lúpus eritematoso sistémico, diabetes tipo 1, colite ulcerosa, vitiligo e semelhantes. 30 O termo "doença neoplásica", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer crescimento anormal de células, sendo benigno (não canceroso) ou maligno (canceroso). O termo "agente antineoplásico", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer composto que retarde a proliferação, o crescimento ou a disseminação de um neoplasma (p. ex., maligno) alvo.

Os termos "prevenir" e "prevenção", tal como aqui utilizados, referem-se a uma diminuição na ocorrência de células patológicas (p. ex., células hiperproliferativas ou neoplásicas) num animal. A prevenção pode ser completa, p. ex., a ausência total de células patológicas num indivíduo. A prevenção pode também ser parcial, de modo a que a ocorrência de células patológicas num indivíduo seja menor que a que teria ocorrido sem a presente invenção. O termo "agentes moduladores da apoptose", como aqui utilizado, refere-se a agentes que estão envolvidos na modulação (p. ex., inibição, diminuição, aumento, promoção) da apoptose. Numa forma de realização, o agente de modulação da apoptose é um indutor de apoptose. O termo "indutor de apoptose", tal como aqui utilizado, refere-se a um agente que induz apoptose em células (p. ex., células de cancro), tornando essas células mais susceptíveis à execução do programa de apoptose. Numa forma de realização, um agente que induz apoptose é um agente anticancro. Exemplos de agentes moduladores da apoptose incluem proteínas que compreendem um domínio de morte tal como, mas não limitados a, Fas/CD95, TRAMP, TNF RI, DRl, DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, e RIP. Outros exemplos de agentes 31 moduladores da apoptose incluem, mas não se limitam a, TNFa, ligando Fas, anticorpos para Fas/CD95 e outros receptores da família TNF, TRAIL (também conhecido como Ligando de Apo2 ou Apo2L/TRAIL) , agonistas (p. ex., anticorpos agonistas monoclonais ou policlonais) de TRAIL-R1 ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, Pl3-cinase, PP1, e proteínas caspase. Agentes de modulação incluem amplamente agonistas e antagonistas de receptores da família TNF e ligandos da família TNF. Os agentes moduladores da apoptose podem ser solúveis ou ligados à membrana (p. ex. ligando ou receptor) . Os agentes moduladores da apoptose preferidos são indutores de apoptose, tais como TNF ou um ligando relacionado com TNF, em particular um ligando TRAMP, um ligando Fas/CD95, um ligando de TNFR-1, ou TRAIL. São aqui descritos inibidores de IAP que são miméticos de Smac possuindo a Fórmula geral I:

em que:

Ai e A2 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo opcionalmente substituído, em que A2 está ausente quando V é 0; V é seleccionado a partir do grupo que consiste em N, CH e 0; W é seleccionado a partir do grupo que consiste em CH e N; 32 X é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo C1-3 opcionalmente substituído; Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em CONH, NHCO, C (0) 0, OC (0) , (CH2) 1-3, em que um ou mais grupos CH2 podem ser substituídos por 0, S, ou NR1, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; Z é (CRiR^r; D é (CR1R2) n-NR5- (CR3R4) m; J é seleccionado a partir do grupo que consiste em alquilenilo opcionalmente substituído e (CR1R2) P-R6- (CR3R4) q; T é seleccionado a partir do grupo que consiste em c=0, C=s, C=NR4, S, S=0, S02, 0, NR', CR4R2, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; U é seleccionado a partir do grupo que consiste em H, NR2R2, NÍR^COR7, OR', SR1, alquilo opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo; n, m, p e q são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em 0-5; r é 0-3; cada R1, R2, R3 e R4 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; R5 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, heteroalquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente 33 substituído, arilo opcionalmente substituído, heteroarilo opcionalmente substituído e COR7; R6 é seleccionado a partir do grupo que consiste em 0, S, NR1, CR1R2, C=0, C=S e C=NR1; e R7 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. São também descritos compostos em que R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo.

Sao também descritos compostos de Fórmula II:

do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo opcionalmente substituído, em que A2 está ausente quando V é 0; V é seleccionado a partir do grupo que consiste em N, CH e 0; 34

W é seleccionado a partir do grupo que consiste em CH e N; X é alquilo C1-3 opcionalmente substituído; Y é seleccionado a partir do grupo que consiste em CONH, C(0)0, (CH2)i-3 em que um ou mais grupos CH2 podem ser substituídos por 0, S, ou NR1, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; D é (CR1R2) n_NR5- (CR3R4) m; J é seleccionado a partir do grupo que consiste em alquilenilo opcionalmente substituído e (CR1R2) P-R6-(CR3R4) q; T é seleccionado a partir do grupo que consiste em C=0, C=S, C=NR', S, 0, NR1, CR1R2, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; U é seleccionado a partir do grupo que consiste em H, NR2R2, OR1, SR1, alquilo opcionalmente substituído e arilo opcionalmente substituído; n, m, p e q são independentemente seleccionados a partir 0-5; cada R1, R2, R3 e R4 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; R5 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, heteroalquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído, heteroarilo opcionalmente substituído e COR7; 35 R6 é seleccionado a partir do grupo que consiste em 0, S, NR1, CR1R2, C=0, C=S e C=NR!; e R7 é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

Numa forma de realização descrita, os substituintes opcionais não incluem ácido carboxílico, cicloalquilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo, halo, hidroxilo ou haloalquilo, ou arilo opcionalmente substituído com um grupo arilo, e um grupo heterocíclico opcionalmente substituído não inclui oxopiperizinilo.

Noutra forma de realização descrita, nem são independentemente seleccionados a partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4. Noutra forma de realização, p e q são independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1. Noutra forma de realização, nem são independentemente seleccionados a partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4 e p e q sejam independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1. Noutra forma de realização, nem são independentemente seleccionados a partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4, p e q sejam independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1 e T seja C=0. Noutra forma de realização, nem são independentemente seleccionados a partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4, p e q sejam independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1 e U seja NR1R2. Noutra forma de realização, nem são independentemente seleccionados a 36 partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4, p e q são independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1 e R5 é CH2. Noutra forma de realização, n e m são independentemente seleccionados a partir de 0-4 de modo a que n + m seja 3 ou 4, p e q são independentemente seleccionados a partir de 0 e 1 de modo a que p + q seja 1, Y é CONH, W é CH e V é N. Noutra forma de realização, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo.

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula III: em que Ai, descritos aceitáveis

A2, V, W, X, Y, R5, T acima para a Fórmula I; destes. e ou III U têm os significados sais farmaceuticamente

Numa forma de realização descrita, Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula II. Noutra forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NR1R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbocíclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente 37 substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização descrita, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH(CH3) .

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula IV:

A2 IV em que Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula II. Noutra forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NR7R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbocíclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente 38 substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização descrita, R7 é -CH2CH (CH3) 2.

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula V:

,V"A2 A, em que Ai, A2, V, W, X, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. São também descritos compostos em que, Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula II. Noutra forma de realização descrita, W é CH, V é N, T é C=0, U é NR1R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 39 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbociclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização, R é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização descrita, R7 é -CH2CH (CH3) 2.

Noutra forma de realização particular, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula VI:

em que Ai, A2, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula I, e X é alquilo opcionalmente substituído; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, Ai, A2, X, R5, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula II. Noutra forma de realização descrita, T é C=0, U é NR7R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização, Ai é alquilo 40 opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbocíclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH (CH3) 2.

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula VII:

/

Vli em que Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os mesmos significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NRXR2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização, Y é CONH. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma 41 de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbociclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização, R é -CHPh2. Noutra forma de realização descrita, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH (CH3) 2.

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula VIII:

/

VIU em que Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os mesmos significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NR2R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização, Y é CONH. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbociclico opcionalmente substituído e 42 alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e o heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização descrita, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH(CH3) 2.

Noutra forma de realização particular, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula IX:

/

IX em que Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os mesmos significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NR1R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização, Y é CONH. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbociclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes 43 opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização descrita, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH (CH3) 2.

Noutra forma de realização particular descrita, os miméticos de Smac são compostos de Fórmula X:

/

X em que Ai, A2, V, W, X, Y, R5, T e U têm os mesmos significados descritos acima para a Fórmula I; ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Numa forma de realização descrita, W é CH, V é N, Té C=0, U é NR1R2 e R5 é COR7. Noutra forma de realização, Y é CONH. Noutra forma de realização descrita, Ai é alquilo opcionalmente substituído e A2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é seleccionado a partir do grupo que consiste em carbocíclico opcionalmente substituído e alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes 44 opcionais são seleccionados a partir do grupo que consiste em arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo. Noutra forma de realização descrita, R1 é alquilo opcionalmente substituído em que os substituintes opcionais são arilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo ou heteroarilo, e R2 é hidrogénio. Noutra forma de realização descrita, R1 é -CHPh2. Noutra forma de realização descrita, R7 é alquilo opcionalmente substituído. Noutra forma de realização, R7 é -CH2CH(CH3) 2 ·

Grupos alquilo úteis incluem grupos alquilo Ci-is de cadeia linear ou ramificada, especialmente grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, t-butilo, sec-butilo, 3-pentilo e 3-hexilo. Numa forma de realização, o alquilo é um grupo alquilo C1-6. 0 termo "alquilenilo" refere-se a um radical alquilo bivalente contendo 1, 2, 3 ou 4 grupos metileno unidos tal como exemplificado por -(CH2)4-.

Grupos alcenilo úteis incluem grupos alquilo C2-18 de cadeia linear ou ramificada, especialmente etenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, e hexenilo.

Grupos alcinilo úteis são grupos alcinilo C2-is, especialmente grupos etinilo, propinilo, butinilo e 2-butinilo.

Grupos cicloalquilo úteis incluem grupos cicloalquilo C3-10. Grupos cicloalquilo típicos incluem ciclopropilo, 45 ciclobutilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-heptilo, adamantilo e norbornilo.

Grupos arilo úteis incluem arilo Ce-ii, especialmente grupos fenilo (abreviado como "Ph"), naftilo, fenantrenilo, antracenilo, indenilo, azulenilo, bifenilo, bifenilenilo e fluorenilo.

Grupos heteroarilo úteis incluem grupos heteroarilo C5-14, especialmente tienilo, benzo[b]tienilo, nafto[2,3-b] tienilo, tiantrenilo, furilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, fenoxantenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, triazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalzinilo, naftiridinilo, quinozalinilo, cinolinilo, pteridinilo, carbazolilo, β-carbolinilo, fenantridinilo, acridinilo, perimidinilo, fenantrolinilo, fenazinilo, isotiazolilo, fenotiazinilo, isoxazolilo, furazanilo, fenoxazinilo, 1,4-di-hidroquinoxalina-2,3-diona, 7-aminoisocoumarina, pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona, 1,2-benzoisoxazol-3-ilo, benzimidazolilo, 2-oxindolilo e 2-oxobenzimidazolilo. Quando o grupo heteroarilo contém um átomo de azoto num anel, tal átomo de azoto pode estar na forma de um N-óxido, p. ex., um N-óxido de piridilo, N-óxido de pirazinilo, N-óxido de pirimidinilo, e semelhantes.

Substituintes opcionais incluem um ou mais grupos alquilo; halo; hidroxilo; ácido carboxilico (isto é, -CO2H e sais deste); haloalquilo; cicloalquilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo, halo, hidroxilo ou haloalquilo; arilo opcionalmente substituído com um ou mais 46 grupos alquilo inferior, halo, haloalquilo, arilo ou heteroarilo; ariloxilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo, ou heteroarilo; aralquilo; heteroarilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; heteroariloxilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; alcoxilo; alquiltio; ariltio; amido; amino; aciloxilo; arilaciloxilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; difenilfosfiniloxilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, halo ou haloalquilo; heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; heterocicloalcoxilo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; heterocicloalquilo parcialmente insaturado opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo; ou heterocicloalquiloxilo parcialmente insaturado opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquilo inferior, haloalquilo e arilo.

Grupos carbocíclicos saturados ou parcialmente saturados úteis são grupos cicloalquilo tal como definidos acima, bem como grupos cicloalcenilo, tais como ciclopentenilo, ciclo-heptenilo e ciclo-octenilo. Os grupos carbocíclicos também incluem grupos possuindo arilo opcionalmente substituído fundido tais como tetralina.

Grupos halo ou halogénio úteis incluem flúor, cloro, bromo e iodo. 47

Grupos aralquilo e heteroaralquilo úteis incluem qualquer um dos grupos alquilo Ci-is acima mencionados substituído por um ou mais dos grupos arilo Ce-14 ou grupos heteroarilo opcionalmente substituídos acima mencionados. Numa forma de realização, o aralquilo é substituído com dois grupos arilo C6-14 opcionalmente substituídos. Noutra forma de realização, o aralquilo é substituído com um grupo arilo Cõ—i4 opcionalmente substituído. Numa forma de realização, o grupo arilo Cõ-14 opcionalmente substituído é um grupo fenilo opcionalmente substituído. Grupos aralquilo úteis incluem benzilo (abreviado como Bn), fenetilo e naftilmetilo.

Grupos haloalquilo úteis incluem grupos alquilo Ci-io substituídos por um ou mais átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo, p. ex., os grupos fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, pentafluoroetilo, 1,1-difluoroetilo, clorometilo, clorofluorometil e triclorometilo.

Grupos alcoxilo úteis incluem oxigénio substituído por um dos grupos alquilo Ci-is mencionados acima.

Grupos alquiltio úteis incluem enxofre substituído por um dos grupos alquilo Ci-is acima mencionados. Estão também incluídos os sulfóxidos e sulfonas de tais grupos alquiltio.

Grupos amido úteis incluem carbonilamido bem como qualquer acilo Ci—6 (alcanoílo) ligado a um azoto aminado, p. ex., acetamido, propionamido, butanoilamido, pentanoilamido, hexanoilamido bem como grupos acilo C2-6 substituídos com arilo. 48

Grupos aciloxilo úteis são qualquer acilo Ci-6 (alcanoílo) ligado a um grupo oxi (-0-) , p. ex., formiloxilo, acetoxilo, propionoiloxilo, butanoiloxilo, pentanoiloxilo, hexanoiloxilo e semelhantes.

Grupos arilaciloxilo úteis incluem qualquer um dos grupos arilo mencionados acima substituído em qualquer um dos grupos aciloxilo mencionados acima, p. ex., os grupos 2,6-diclorobenzoiloxilo, 2,6-difluorobenzoiloxilo e 2,6-di-(trifluorometil)-benzoiloxilo.

Grupos amino úteis incluem -NH2, -NHRn, e -NR11R12, em que Rn e R12 são grupos alquilo ou cicloalquilo Ci-is tal como definido acima.

Grupos heterocíclicos saturados ou parcialmente saturados úteis incluem os grupos tetra-hidrofuranilo, piranilo, piperidinilo, piperizinilo, oxopiperizinilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, indolinilo, isoindolinilo, quinuclidinilo, morfolinilo, isocromanilo, cromanilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, tetronoilo e tetramoilo.

Grupos arileno úteis incluem arileno Ce-14, especialmente os grupos fenileno, naftileno, fenantrenileno, antracenileno, indenileno, azulenileno, bifenileno, bifenilenileno, e fluorenileno.

Grupos heteroarileno úteis incluem grupos heteroarilo bi-substituídos tais como 2,5-tienileno, 2,4-imidazoileno, e 1,3-triazolileno. 0 termo "grupo de saída" tal como aqui utilizado refere-se a um átomo ou grupo que se torna destacado de um átomo ou 49 grupo em que é considerado ser a parte residual ou a parte principal do substrato numa reacção especificada. Em reacções de acoplamento de amidas, grupos de saida exemplares incluem -F, -Cl, -L, -OH, -OC6F5, -0 (CO)alquilo e semelhantes. Numa forma de realização, o grupo de saida é -Cl. Noutra forma de realização, o grupo de saida é uma forma activada de -OH (p. ex., OBt, O-acilisoureia) . Um agente de activação (p. ex., diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDO), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfónio (PyBop)) pode ser empregue para activar um ácido carboxilico (i.e., o grupo de saida é -OH) para a formação de amida. Tais agentes de activação são bem conhecidos dos peritos na técnica de síntese orgânica. Outros aditivos, tais como N-hidroxibenzotriazol (HOBt) ou N-hidroxissuccinimida (HOSu), podem também ser adicionados para optimizar os parâmetros da reacção (p. ex., velocidade, rendimento, pureza, racemização). 0 termo "isolado", tal como aqui utilizado, quando se refere ao produto de uma reacção química significa que o produto ou os produtos desejados são separados de componentes indesejados da mistura reaccional (p. ex., solventes, materiais de partida, reagentes químicos) antes de uma transformação química subsequente. 0 produto ou os produtos desejados de uma reacção química podem ser separados de componentes indesejáveis através de uma variedade de métodos, p. ex., filtração através de celite ou sílica-gel, seguida por remoção dos componentes voláteis (p. ex., solventes). 0 termo "grupo protector de amina" tal como aqui utilizado refere-se ao grupo que bloqueia (i.e., protege) a 50 funcionalidade amina enquanto são realizadas reacções noutros grupos funcionais ou partes da molécula. Os peritos na técnica estarão familiarizados com a selecção, ligação, e clivagem de grupos protectores de amina e apreciarão que muitos grupos protectores diferentes são conhecidos na técnica, estando a adequação de um grupo protector ou outro dependente do esquema de síntese planejado em particular. Tratados sobre o assunto estão disponíveis para consulta, tais como Greene e Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a ed., Págs. 17-245 (J. Wiley & Sons, 1999).

Grupos protectores de amina adequados incluem o grupo carbobenziloxilo (Cbz), terc-butiloxicarbonilo (BOC), 9- fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC), e benzilo (Bn). O termo "cerca de", tal como aqui se utiliza, inclui o número citado ± 10%. Assim, "cerca de 10" significa 9 a 11.

Ao longo da descrição, grupos e substituintes opcionais destes são escolhidos para proporcionar porções e compostos estáveis.

Alguns dos compostos da presente invenção podem existir como estereoisómeros incluindo isómeros ópticos. A invenção inclui todos os estereoisómeros, tanto como preparações de estereoisómeros individuais puros como preparações enriquecidas de cada um, e tanto como misturas racémicas de tais estereoisómeros ou como enantiómeros individuais que podem ser separados de acordo com métodos que são bem conhecidos dos peritos na técnica. O composto de Fórmula I pode ser seleccionado a partir do grupo que consiste em: 51

52

*

53

54 F

55

56

57

58

59

60

61

> 62

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. 0 composto de Fórmula II pode ser seleccionado a partir do grupo que consiste em: 63

Βη·ν. Ν HCI Η Ο Μ-., ' Π $; *--------·\, Ν, \ r Ν Ο Η \ •Λ·.

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H€! X ou a base livre destes, ou outro sal farmaceuticamente aceitável destes. O composto de Fórmula I pode ser: 67

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste. um

É aqui divulgado um processo para a preparação de composto de Fórmula XI

compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XII

com R7CO-L, em que Ai, A2, V, W, X, Y, Z, T, U e R7 têm significados descritos acima para a Fórmula I, m é 1 ou e L é um grupo de saída. Numa forma de realização, L é ou OBt. Numa forma de realização, Z é (CR7R2) , e r é Noutra forma de realização, m é 1. os 2, Cl 0 . 68

Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em diclorometano. Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 25°C. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada a cerca de 20°C . Numa forma . de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas. Noutra forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 12 horas. Numa forma de realização, L é -OH. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação. Noutra forma de realização, o agente de activação é diciclo- hexilcarbodiimida, 1- -etil-3- (3- dimetilaminopropil)carbodiimida ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio. Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação e um aditivo que optimiza parâmetros da reacção tais como pureza e rendimento. Noutra forma de realização, o aditivo é N-hidroxibenzotriazol. O progresso da reacção de condensação entre um composto de Fórmula XII e k7CO-L pode ser monitorizado através de 69 métodos analíticos conhecidos na técnica tais como TLC, LC, LC/MS, HPLC, RMN, etc. Um composto de Fórmula XI pode ser isolado e purificado através de qualquer meio conhecido na técnica tal como cromatoqrafia de coluna normal e de fase inversa (p. ex., cromatografia de coluna em sílica-gel ou HPLC de fase inversa), cristalização, extracção, etc. 0 produto assim isolado pode ser submetido a mais purificação (p. ex., recristalização) até ser alcançado o nível de pureza desejado. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XI tem uma pureza de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais.

É também aqui divulgado um processo para a preparação de um composto de Fórmula XIII

compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XIV m

com R7CO-L, em que Ai, A2, V, W, X, Y, Z, T e U têm os significados descritos acima para a Fórmula I, m é 1 ou 2, e L é um grupo de saída. Numa forma de realização, L é Cl 70 ou OBt. Numa forma de realização, Z é (CR1R2)r e r é 0.

Noutra forma de realização, m é 1.

Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra- hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em diclorometano. Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 25°C. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada a cerca de 20°C. Numa forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas. Noutra forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 12 horas.

Numa forma de realização, L é -OH ou -OBt. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação. Noutra forma de realização, o agente de activação é diciclo- hexilcarbodiimida, 1- -et il-3- (3- dimetilaminopropil)carbodiimida ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio. Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação e um aditivo que optimiza parâmetros da reacção tais como pureza e rendimento. Noutra forma de realização, o aditivo é N-hidroxibenzotriazol. 71 0 progresso da reacção de condensação entre um composto de Fórmula XIV e R7CO-L pode ser monitorizado através de métodos analíticos conhecidos na técnica tais como TLC, LC, LC/MS, HPLC, RMN, etc. Um composto de Fórmula XIII pode ser isolado e purificado através de meios conhecidos na técnica tais como cromatografia de coluna normal e de fase inversa (p. ex., cromatograf ia de coluna em sílica-gel ou HPLC de fase inversa), cristalização, extracção, etc. 0 produto assim isolado pode ser submetido a maior purificação (p. ex., recristalização) até ser alcançado o nível de pureza desejado. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XIII tem uma pureza de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais. 71 Adicionalmente é agui divulgado um processo preparação de um composto de Fórmula XV: para a

compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XVI 72

X, T, U e R7 têm os Fórmula I, m é 1 ou 2, de realização, L é Cl, m é 1. com R7CO-L, em que Ai, A2, V, W, significados descritos acima para a e L é um grupo de saída. Numa forma OH ou OBt. Numa forma de realização,

Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em diclorometano. Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 25°C. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada a cerca de 20°C. Numa forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas Noutra forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 12 horas.

Numa forma de realização, L é -OH ou -OBt. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação. Noutra forma de 73 realização, o agente de activação é diciclohexilcarbodiimida, l-etil-3- (3-dimetilaminopropil)carbodiimida ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio. Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação e um aditivo que optimiza parâmetros da reacçao tais como pureza e rendimento. Noutra forma de realizaçao, o aditivo é N- hidroxibenzotriazol. 0 progresso da reacção de condensação entre um composto de Fórmula XIV e R7CO-L pode ser monitorizado através de métodos analíticos conhecidos na técnica tais como TLC, LC, LC/MS, HPLC, RMN, etc. Um composto de Fórmula XV pode ser isolado e purificado através de meios conhecidos na técnica tais como cromatografia de coluna normal e de fase inversa (p. ex., cromatograf ia de coluna em sílica-gel ou HPLC de fase inversa), cristalização, extracção, etc. 0 produto assim isolado pode ser submetido a maior purificação (p. ex., recristalização) até ser alcançado o nível de pureza desejado. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XV tem uma pureza de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais.

Adicionalmente é aqui divulgado um processo para a preparação de um composto de Fórmula XVII 74 74

χ·

compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XVIII

com R7CO-L, em que Ai, A2, V, X, T, U e R7 têm os significados descritos acima para a Fórmula I, m é 1 ou 2, e L é um grupo de saida. Numa forma de realização, L é Cl, OH ou OBt. Numa forma de realização, m é 1.

Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada em diclorometano. Numa forma de realização, a reacção de condensação é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 75 25°C. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada a cerca de 20°C. Numa forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas. Noutra forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 12 horas.

Numa forma de realização, L é -OH ou -OBt. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação. Noutra forma de realização, o agente de activação é diciclo-hexilcarbodiimida, l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio. Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação e um aditivo que optimiza parâmetros da reacção tais como pureza e rendimento. Noutra forma de realização, 0 aditivo é N- hidroxibenzotriazol. 0 progresso da reacção de condensação entre um composto de Fórmula XVIII e R7CO-L pode ser monitorizado através de métodos analíticos conhecidos na técnica tais como TLC, LC, LC/MS, HPLC, RMN, etc. Um composto de Fórmula XVII pode ser isolado e purificado através de meios conhecidos na técnica tais como cromatografia de coluna normal e de fase inversa (p. ex., cromatograf ia de coluna em silica-gel ou HPLC de fase inversa), cristalização, extracção, etc. 0 produto assim isolado pode ser submetido a maior purificação (p. ex., recristalização) até ser alcançado o nivel de pureza desejado. Numa forma de realização, um composto de Fórmula 76 XVII tem uma pureza de 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais.

A divulgação aqui refere-se também à preparaçao de um composto de Fórmula XIX

em que m é 1 ou 2, e P1 é um grupo protector de amina compreendendo:

a) a condensação de um composto de Fórmula XX

com um composto de Fórmula XXI,

em que P1 e P2 sao grupos protectores de amina, e P1 não é igual a P2, para dar um composto de Fórmula XXII

b) a conversão do alceno de fórmula XXII num aldeído, para dar um composto de Fórmula XXIII;

xxm c) a remoção do grupo protector de amina P2 de um composto de Fórmula XXIII para dar um composto de Fórmula XXIV;

.XXIV; e d) a redução da ligação dupla C=N de um composto de Fórmula XXIV, para dar um composto de Fórmula XIX.

Numa forma de realização, um composto de Fórmula XXI é ácido N-a-(terc-butoxilcarbonil)-Ν-β-(benzoxilcarbonil)-L-diamino-propiónico (Boc-Dap(Z)-OH). Numa forma de realização, a condensação de um composto de Fórmula XX com um composto de Fórmula XXI é realizada na presença de um agente de activação. Noutra forma de realização, o agente de activação é diciclo-hexilcarbodiimida, l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida ou hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio. Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada na presença de um agente de activação e um aditivo que optimiza parâmetros da reacção tais como pureza e rendimento. Noutra forma de realização, o aditivo é N-hidroxibenzotriazol. 78

Os grupos protectores de amina P1 e P2 que são adequados para utilização nos processos da presente invenção são bem conhecidos, tais como mas não se limitando a trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (Boc), benziloxicarbonilo (CBz), aliloxicarbonilo (Alloc), tritil(trifenilmetilo), 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc) e semelhantes. Tais grupos são geralmente capazes de ser introduzidos e removidos selectivamente utilizando condições reaccionais suaves que não interferem com outras porções dos compostos sujeitos. Estes grupos protectores podem ser introduzidos ou removidos numa fase conveniente utilizando métodos conhecidos da técnica. As propriedades químicas de tais grupos protectores, os métodos para a sua introdução e a sua remoção são conhecidos na técnica e podem ser verificados, por exemplo, em Greene e Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3a ed., pág. 17-245 (J. Wiley & Sons, 1999), aqui incorporado por referência na sua totalidade.

Numa forma de realização, P1 e P2 são seleccionados a partir do grupo que consiste em trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (Boc), benziloxicarbonilo (CBz), aliloxicarbonilo (Alloc), tritil(trifenilmetilo) e 9-fluorenilmetilenoxicarbonilo (Fmoc) de modo a que P1 não seja igual a P2. Numa forma de realização, P1 e P2 são grupos protectores ortogonais, i.e., o grupo protector P1 é capaz de ser selectivamente removido na presença do grupo protector P2 ou o grupo protector P2 é capaz de ser selectivamente removido na presença do grupo protector P1. As estratégias de grupo protector ortogonal são conhecidas da técnica. Numa forma de realização, P1 é t-butoxicarbonilo (Boc) . Numa forma de realização, P2 é 79 benziloxicarbonilo (CBz). Numa forma de realização, P1 é t-butoxicarbonilo (Boc) e P2 é benziloxicarbonilo (CBz).

Numa forma de realização, a condensação de um composto de Fórmula XX com um composto de Fórmula XXI é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2, -dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a condensação de um composto de Fórmula XX com um composto de Fórmula XXI é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a condensação de um composto de Fórmula XX com um composto de Fórmula XXI é realizada em diclorometano.

Numa forma de realização, a condensação de um composto de Fórmula XX com um composto de Fórmula XXI é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 30°C. Noutra forma de realização, a reacção de condensação é realizada a de cerca de 20 a cerca de 30 °C. Numa forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas. Noutra forma de realização, a reacção de condensação está completa em cerca de 12 horas.

Noutra forma de realização, o alceno de Fórmula XXII é tratado com ozono para dar o aldeído de Fórmula XXIII, e m é 1. Numa forma de realização, a reacção com ozono é realizada num solvente orgânico inerte tal como clorofórmio, 1,2-dicloroetano, dioxano, diclorometano ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a reacção com ozono é realizada em diclorometano. Numa forma de realização, a reacção com ozono é realizada a de cerca de -100°C a cerca de 0°C. Noutra forma de realização, a reacção 80 com ozono é realizada a cerca de -78°C. Numa forma de realização, a reacção com ozono está completa quando a cor da mistura reaccional se torna azul, indicando uma quantidade excessiva de ozono em solução.

Numa forma de realização, o alceno de fórmula XXII é primeiro convertido num álcool primário e o álcool é oxidado para dar um aldeído de Fórmula XXI, e m é 2. Numa forma de realização, o alceno de Fórmula XXII é convertido num álcool primário através de hidroboração. Numa forma de realização, a hidroboração é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, 1,2,-dimetoxietano, dioxano, ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a hidroboração é realizada em tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a hidroboração é realizada utilizando 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (9-BBN). Numa forma de realização, o álcool primário é oxidado no aldeído com periodinano de Dess-Martin para dar um aldeído de Fórmula XXIII, e m é 2. Numa forma de realização, a oxidação é realizada num solvente orgânico inerte tal como diclorometano. Numa forma de realização, a oxidação é realizada a de cerca de -20°C a cerca de 25°C. Noutra forma de realização, a oxidação é realizada a cerca de 20°C. Numa forma de realização, a oxidação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 48 horas. Noutra forma de realização, a oxidação está completa em cerca de 12 horas.

Numa forma de realização, P2 é um grupo Cbz. Noutra forma de realização, P2 é CBz e é clivado através de hidrogenação sobre paládio em carbono. Numa forma de realização, a hidrogenação é realizada em metanol, etanol, 1-butanol, 2-butanol, 3-butanol, terc-butanol, 1-propanol ou 2-propanol. Noutra forma de realização, a hidrogenação é realizada em 81 2-propanol. Numa forma de realização, a hidrogenação é realizada a de cerca de 0°C a cerca de 40°C. Noutra forma de realização, a hidrogenação é realizada a de cerca de 20°C a cerca de 30°C. Numa forma de realização, a hidrogenação está completa em cerca de 1 hora a cerca de 24 horas. Noutra forma de realização, a hidrogenação está completa em cerca de 12 horas.

Numa forma de realização, um composto de Fórmula XXIV é isolado antes da redução da ligação dupla C=N. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XXIV é isolado por filtração através de celite. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XXIV é isolado por filtração através de celite seguido de evaporação do solvente ou dos solventes.

Numa forma de realização, a ligação dupla C=N de um composto de Fórmula XXIV é reduzida com H2 e paládio em carbono, Na(CN)BH3 ou NaBH(OAc)3. Noutra forma de realização, o agente redutor é NaBH(0Ac)3. Numa forma de realização, a redução é realizada num solvente orgânico inerte tal como metanol, etanol, 1-butanol, 2-butanol, 3-butanol, terc-butanol, 1-propanol, 2-propanol, acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. Noutra forma de realização, a redução é realizada em tetra-hidrofurano. Numa forma de realização, a redução é realizada a de cerca de 0°C a cerca de 25°C. Noutra forma de realização, a redução é realizada a de cerca de 20°C a cerca de 30°C. Numa forma de realização, a redução está completa em cerca de 1 hora a cerca de 24 horas. Noutra forma de realização, a reacção com ozono está completa em cerca de 12 horas. 82 0 progresso de qualquer uma das reacções acima para a preparação de um composto de Fórmula XIX pode ser monitorizado através de métodos analíticos conhecidos na técnica tais como TLC, LC, LC/MS, HPLC, RMN, etc. Um composto de Fórmula XIX pode ser isolado e purificado através de meios conhecidos na técnica tais como cromatografia de coluna normal e de fase inversa (p. ex., cromatograf ia de coluna em sílica-gel ou HPLC de fase inversa), cristalização, extracção, etc. 0 produto assim isolado pode ser submetido a maior purificação (p. ex., recristalização) até ser alcançado o nível de pureza desejado. Numa forma de realização, um composto de Fórmula XIX tem uma pureza de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais.

Os compostos desta invenção podem ser preparados utilizando métodos conhecidos dos peritos na técnica. Especificamente, compostos de Fórmula VI podem ser preparados tal como ilustrado pelas reacções exemplares nos Exemplos.

Um aspecto importante da presente invenção é que os compostos de Fórmula VI induzem apoptose e também potenciam a indução de apoptose em resposta a sinais de indução de apoptose. Portanto, está contemplado que estes compostos sensibilizam as células a indutores de apoptose, incluindo células que são resistentes a tais indutores. Os inibidores de IAP da presente invenção podem ser utilizados para induzir apoptose em qualquer distúrbio que possa ser tratado, melhorado, ou prevenido através da indução de apoptose. Assim, a presente invenção proporciona composições e métodos para se dirigirem a animais caracterizados como sobre-expressando uma proteína IAP. 83

Nalgumas das formas de realização, as células (p. ex., células de cancro) mostram elevados níveis de expressão de proteínas IAP em comparação com amostras não patológicas (p. ex., células não cancerosas) . Noutras formas de realização, as células manifestam operacionalmente níveis elevados de expressão de proteínas IAP em virtude da execução do programa de apoptose e morte, em resposta a uma quantidade eficaz de inibição de um composto de Fórmula VI, a referida resposta ocorrendo, pelo menos em parte, devido à dependência de tais células da função da proteína IAP para a sua sobrevivência.

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a compostos de Fórmula VI para utilização em modulação de um estado associado a apoptose gue esteja associado a um ou mais agentes moduladores da apoptose. Exemplos de agentes moduladores da apoptose incluem, mas não se limitam a, Fas/CD95, TRAMP, TNF RI, DR1, DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, RIP, TNFa, ligando Fas, TRAIL, anticorpos para TRAIL-R1 ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, Pl3-cinase, PP1, e proteínas caspase. Outros agentes envolvidos na fase de iniciação, decisão e degradação da apoptose estão também incluídos. Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem agentes cuja actividade, presença, ou modificação na concentração podem modular a apoptose num sujeito. Os agentes de modulação de apoptose preferidos são indutores de apoptose, tais como TNF ou um ligando relacionado com TNF, particularmente um ligando TRAMP, um ligando Fas/CD95, um ligando de TNFR-1, ou TRAIL.

Nalgumas formas de realização, as composições e os compostos da presente invenção são utilizados para tratar células, tecidos ou órgãos doentes ou condições patológicas 84 e/ou estados de doença num animal (p. ex., um sujeito mamífero incluindo, mas não limitado a humanos e animais veterinários). A este respeito, várias doenças e patologias são passíveis de tratamento ou profilaxia utilizando os presentes métodos e composições. Uma lista exemplar não limitativa destas doenças e condições inclui, mas não se limita a, cancro da mama, cancro da próstata, linfoma, cancro da pele, cancro pancreático, cancro do cólon, melanoma, melanoma maligno, cancro do ovário, cancro do cérebro, carcinoma cerebral primário, cancro da cabeça ou do pescoço, glioma, glioblastoma, cancro do fígado, cancro da bexiga, cancro do pulmão de células não pequenas, carcinoma da cabeça ou do pescoço, carcinoma da mama, carcinoma do ovário, carcinoma do pulmão, carcinoma do pulmão de células pequenas, tumor de Wilms, carcinoma do colo do útero, carcinoma testicular, carcinoma da bexiga, carcinoma pancreático, carcinoma do estômago, carcinoma do cólon, carcinoma da próstata, carcinoma genito-urinário, carcinoma da tiróide, carcinoma do esófago, mieloma, mieloma múltiplo, carcinoma supra-renal, carcinoma das células renais, carcinoma do endométrio, carcinoma do córtex supra-renal, insulinoma do pâncreas maligno, carcinoma carcinóide maligno, coriocarcinoma, micose fungóide, hipercalcemia maligna, hiperplasia do colo do útero, leucemia, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielóide aguda, leucemia mielóide crónica, leucemia granulocítica crónica, leucemia granulocitica aguda, leucemia de células pilosas, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, sarcoma de Kaposi, policitemia vera, trombocitose essencial, doença de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, sarcoma de tecidos moles, sarcoma osteogénico, macroglobulinemia primária e retinoblastoma, e semelhantes, doenças auto-imunes mediadas 85 por células T e B; doenças inflamatórias; infecções (p. ex., como agentes anti-ulcerosos, p. ex., no contexto de infecção por H. pylori); doenças hiperproliferativas; SIDA; doenças degenerativas; doenças vasculares (p. ex., varicose primária) e semelhantes. Os compostos da presente invenção podem também ser úteis no tratamento de doenças em gue existe um defeito na morte celular programada ou na maquinaria apoptótica, p. ex., esclerose múltipla, asma, arteriosclerose e semelhantes. Nalgumas formas de realização, as células de cancro a tratar são metastáticas. Noutras formas de realização, as células de cancro a tratar são resistentes a agentes anticancro.

Nalgumas formas de realização, infecções adequadas para tratamento com as composições e os métodos da presente invenção incluem, mas não se limitam a, infecções causadas por virus, bactérias, fungos, micoplasma, priões, e semelhantes.

Algumas formas de realização da presente invenção proporcionam compostos de Fórmula VI para utilização em métodos para administração de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula VI e de pelo menos um agente terapêutico adicional (incluindo, mas não limitado a, antineoplásicos quimioterapêuticos, agentes moduladores da apoptose, agentes antimicrobianos, antivirais, antifúngicos, e anti-inflamatórios) e/ou técnica terapêutica (p. ex., intervenção cirúrgica, e/ou radioterapias). Vários agentes anticancro adequados estão contemplados para utilização nos métodos da presente invenção. De facto, a presente invenção contempla, mas não está limitada a, 86 administração de vários agentes anticancro, tais como: agentes que induzem apoptose; polinucleótidos (P· ex., anti-sentido , ribozimas, siRNA) ; polipéptidos (P· ex., enzimas e anticorpos ); miméticos biológicos (P· ex., gossipol ou miméticos de BH3) ; agentes que se ligam (P· ex., oligomerizam ou complexam) com uma proteína da família Bcl-2 tal como Bax; alcaloides; agentes alquilantes; antibióticos anti-tumorais; anti-metabolitos; hormonas; compostos de platina; anticorpos monoclonais ou policlonais (p. ex., anticorpos conjugados com fármacos anticancro, toxinas, defensinas), toxinas; radionuclídeos; modificadores da resposta biológica (p. ex., interferões (p. ex., IFN-oí) e interleucinas (p. ex., IL-2)); agentes de imunoterapia adoptiva; factores de crescimento hematopoéticos; agentes que induzem a diferenciação de células tumorais (p. ex., ácido al-trans-retinóico); reagentes de terapia génica (p. ex., reagentes e nucleótidos de terapia anti-sentido); vacinas tumorais; inibidores da angiogénese; inibidores de proteossomas; moduladores de NF-KB; compostos anti-CDK; inibidores de HDAC; e semelhantes. Numerosos outros exemplos de compostos quimioterapêuticos e terapias anticancro adequadas para co-administração com os compostos divulgados são conhecidos dos peritos na técnica.

Em certas formas de realização, os agentes anticancro compreendem agentes que induzem ou estimulam apoptose. Agentes que induzem apoptose incluem, mas não se limitam a, radiação (p. ex., raios X, raios gama, UV); factores relacionados com o factor de necrose tumoral (TNF) (p. ex., proteínas receptoras da família TNF, ligandos da família TNF, TRAIL, anticorpos para TRAIL-R1 ou TRAIL-R2); inibidores de cinases (p. ex., inibidor do receptor cinase 87 do factor de crescimento epidérmico (EGFR), inibidor do receptor cinase do factor de crescimento vascular (VGFR), inibidor do receptor cinase do factor de crescimento de fibroblastos (FGFR), inibidor do receptor cinase do factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), e inibidores das cinases Bcr-Abl (tais como GLEEVEC)); moléculas anti-sentido; anticorpos (p. ex., HERCEPTIN, RITUXAN, ZEVALIN, e AVASTIN); anti-estrogénios (p. ex., raloxifeno e tamoxifeno); anti-androgénios (p. ex., flutamida, bicalutamida, finasteride, aminoglutetamida, cetoconazol, e corticosteróides); inibidores da ciclo-oxigenase 2 (COX-2) (p. ex., celecoxib, meloxicam, NS-398, e fármacos anti-inflamatórios não esteróides (ΑΙΝΕ)); fármacos anti-inflamatórios (p. ex., butazolidina, DECADRON, DELTASONE, dexametasona, dexametasona intensol, DEXONE, HEXADROL, hidroxicloroquina, METICORTEN, ORADEXON, ORASONE, oxifenbutazona, PEDIAPRED, fenilbutazona, PLAQUENIL, prednisolona, prednisona, PRELONE, e TANDEARIL); e fármacos quimioterapêuticos de cancro (p. ex., irinotecano (CAMPTOSAR), CPT-11, fludarabina (FLUDARA), dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona, MILOTARG, VP-16, cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, 5-FU, doxorrubicina, gemcitabina, bortezomib, gefitinib, bevacizumab, TAXOTERE ou TAXOL); moléculas de sinalização celular; ceramidas e citocinas; estaurosporina, e semelhantes.

Ainda noutras formas de realização, a composições e os compostos para utilização em métodos da presente invenção proporcionam um composto de Fórmula VI e pelo menos um agente anti-hiperproliferativo ou antineoplásico seleccionado a partir de agentes alquilantes, anti- metabolitos e produtos naturais (p. ex., ervas e outros compostos derivados de plantas e/ou animais).

Agentes de alquilação adequados para utilização nas presentes composições e métodos incluem, mas não se limitam a: 1) mostardas de azoto (p. ex., mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano (L-sarcolisina) e clorambucilo); 2) etileniminas e metilmelaminas (p. ex., hexametilmelamina e tiotepa); 3) sulfonatos de alquilo (p. ex., bussulfano); 4) nitrosoureias (p. ex., carmustina (BCNU); lomustina (CCNU); semustina (metil-CCNU) e estreptozocina (estreptozotocina)); e 5) triazenos (p. ex., dacarbazina (DTIC; dimetiltriazenoimid-azolcarboxamida).

Nalgumas formas de realização, anti-metabolitos adequados para utilização nas presentes composições e métodos incluem, mas não se limitam a: 1) análogos de ácido fólico (p. ex., metotrexato (ametopterina) ) ; 2) análogos de pirimidina (p. ex., fluorouracilo (5 — fluorouracilo, 5-FU), floxuridina (fluorode-oxiuridina; FudR), e citarabina (arabinósido de citosina)); e 3) análogos de purina (p. ex., mercaptopurina (6-mercaptopurina, 6-MP), tioguanina (6-tioguanina; TG) e pentostatina (2'-desoxicoformicina)).

Ainda noutras formas de realização, agentes quimioterapêuticos adequados para utilização nas composições e nos métodos da presente invenção incluem, mas não se limitam a: 1) alcaloides vinca (p. ex., vinblastina (VLB), vincristina); 2) epipodofilotoxinas (p. ex., etopósido e tenipósido); 3) antibióticos (p. ex., dactinomicina (actinomicina D) , daunorrubicina (daunomicina; rubidomicina) , doxorrubicina, bleomicina, plicamicina (mitramicina), e mitomicina (mitomicina C)); 4) 89 enzimas (p. ex., L-asparaginase); 5) modificadores da resposta biológica (p. ex., interferão-alfa); 6) complexos de coordenação de platina (p. ex., cisplatina (cis-DDP) e carboplatina); 7) antracenodionas (p. ex., mitoxantrona); 8) ureias substituídas (p. ex., hidroxiureia); 9) derivados de metil-hidrazina (p. ex., procarbazina (N-metil-hidrazina; MIH)); 10) supressores supra-renais (p. ex., mitotano (ο,ρ'-DDD) e aminoglutetimida) ; 11) adrenocorticosteróides (p. ex., prednisona); 12) progestinas (p. ex., caproato de hidroxiprogesterona, acetato de medroxiprogesterona, e acetato de megestrol); 13) estrogénios (p. ex., caproato, acetato de medroxiprogesterona, e acetato de megestrol); 13) estrogénios (p. ex., dietilstilbestrol e etinil-estradiol); 14) anti-estrogénios (p. ex., tamoxifeno); 15) androgénios (p. ex., propionato de testosterona e fluoximesterona); 16) anti-androgénios (p. ex., flutamida): e 17) análogos da hormona de libertação da gonadotrofina (p. ex., leuprolide).

Qualquer agente oncolítico que seja rotineiramente utilizado num contexto de terapia de cancro tem aplicação nas composições e nos métodos da presente invenção. Por exemplo, a U.S. Food and Drug Administrat ion mantém um formulário dos agentes oncolíticos aprovados para utilização nos Estados Unidos. As agências internacionais equivalentes à U.S.F.D.A. mantêm formulários semelhantes. A Tabela 1 proporciona uma lista de agentes antineoplásicos exemplares aprovados para utilização nos EUA. Os peritos na técnica apreciarão que os "rótulos dos produtos" exigidos em todos os quimioterapêuticos aprovados nos EUA descrevem as indicações aprovadas, informação de dosagem, dados de toxicidade, e semelhantes, para os agentes exemplares. 90

Tabela 1

Aldesleucina (des-alanil-1, serina-125 interleucina-2 humana) Proleukin Chiron Corp., Emeryville, CA Alemtuzumab (anticorpo IgGlK anti-CD52) Campath Millennium e ILEX Partners, LP, Cambridge, MA Alitretinoína (ácido 9-cis-retinóico) Panretin Ligand Pharmaceuticals , Inc., San Diego CA Alopurinol (sal monossódico de 1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona) Zyloprim GlaxoSmithKline , Research Triangle Park, NC Altretamina (N,N,N',N',N",N"-hexametil-1,3, 5-triazina-2,4,6-triamina) Hexalen US Bioscience, West Conshohocken, PA Amifostina (etanotiol, 2 —[ (3— aminopropil)amino]di-hidrogenofosfato (éster)) Ethyol US Bioscience Anastrozol (1,3- Benzenodiacetonitrilo,a, a, a ' , a ' -tetrametil-5-(lH-l,2,4-triazol-1-ilmetil)) Arimidex AstraZeneca Pharmaceuti-cals, LP, Wilmington, DE Trióxido de arsénico Trisenox Cell Therapeutic, 91

Inc., Seattle, WA Asparaginase (L-asparagina-amido-hidrolase, tipo EC-2) Elspar Merck & Co., Inc. , Whitehouse Station, NJ BCG Vivo (preparação liofilizada de uma estirpe atenuada de Mycobacterium bovis (Bacillus de Calmette-Guérin [BCG], subestirpe Montreal) TICE BCG Organon Teknika, Corp., Durham, NC cápsulas de bexaroteno ácido (4-[1-(5,6,7,8-tetra-hidro-3,5,5,8,8-pentametil-2-naftalenil)etenil]benzóico) Targretin Ligand Pharmaceuti- cals gel de bexaroteno Targretin Ligand Pharmaceuti- Bleomicina (antibióticos glicopeptidicos citotóxicos produzidos por Streptomyces verticillus; bleomicina A2 e bleomicina B2) Blenoxane Bristol-Myers Squibb Co., NY, NY Capecitabina (5'-desoxi-5-fluoro-N-[(pentiloxi)carbonil]-citidina) Xeloda Roche Carboplatina (platina, diamina-[1,1-ciclobutanodicarboxilato(2-)-0,0']-, (SP-4-2)) Paraplatin Bristol-Myers Squibb Carmustina (1,3-bis (2-cloroetil)-1- BCNU, BiCNU Bristol-Myers Squibb 92 nitrosoureia) Carmustina com Implante de Polifeprosan 20 Gliadel Wafer Guilford Pharmaceuticals r Inc., Baltimore, MD Celecoxib (como 4-[5-(4-metilfenil)-3-(trifluorometil)-lH-pirazol-1-il]benzenossulfonamida) Celebrex Searle Pharmaceuti- cals, Inglaterra Clorambucilo (ácido 4- [bis(2-cloretil)amino]benzenobutanóico) Leukeran GlaxoSmith- Kline Cisplatina (PtCl2H6N2) Platinol Bristol-Myers Squibb Cladribina (2-cloro-2'-desoxi-b-D-adenosina) Leustatin, 2-CdA R.W. Johnson Pharmaceutical Research Institute, Raritan, NJ Ciclofosfamida 2-óxido mono-hidratado de (2-[bis(2-cloroetil)amino]tetra-hidro-2H-13,2-oxazafosforina) Cytoxan, Neosar Bristol-Myers Squibb Citarabina (1-b-D-Arabinofuranosileitosina, C9H13N3O5) Cytosar-U Pharmacia & Upjohn Company citarabina lipossómica DepoCyt Skye Pharmaceuticals , Inc., San Diego, CA Dacarbazina; DTIC-Dome Bayer AG, 93 (5-(3,3-dimetil-l-triazeno)-imidazol-4-carboxamida (DTIC)) Leverkusen, Alemanha Dactinomicina, actinomicina D (actinomicina produzida por Streptomyces parvullus, C62H86N12O16) Cosmegen Merck Darbepoetina alfa (péptido recombinante) Aranesp Amgen, Inc., Thousand Oaks, CA daunorrubicina lipossómica (cloridrato de (8S-cis)-8-acetil-10-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi-à-L-lixo-hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetra-hidro-6,8,11-tri-hidroxi-l-metoxi-5,12-naftacenodiona) DanuoXome Nexstar Pharmaceuti-cals, Inc., Boulder, CO Daunorrubicina-HCl, daunomicina (Cloridrato de (IS,3S)-3-acetil-1,2,3,4,6,1l-hexa-hidro-3,5,12-tri-hidroxi-10-metoxi-6, 11-dioxo-l-naftacenil-3-amino-2,3,6-tridesoxi-(alfa)-L-lixo-hexopiranósido) Cerubidine Wyeth Ayerst, Madison, NJ Denileucina diftitox (péptido recombinante) Ontak Seragen, Inc., Hopkinton, MA Dexrazoxano ( (S)-4,4'-(1-met i1-1,2-etanodiil)bis-2, 6-piperazinadiona) Zinecard Pharmacia & Upjohn Company Docetaxel (4-acetato 2-benzoato tri-hidratado de (2R,3S)-N-carboxi- Taxotere Aventis Pharmaceuticals , Inc., 94 3-fenilisoserina, N-terc-butiléster, 13-éster com 5b-20-epoxi-12a,4,7b,10b,13a-hexa-hidroxitax-ll-en-9-ona) Bridgewater, NJ Doxombicina-HCl (cloridrato de (8S,10S)—10—[(3— amino-2,3,6-tridesoxi-a-L-lixo-hexopiranosil)oxi]-8-glicolil-7,8,9,10-tetra-hidro-6,8,11-tri-hidroxi-l-metoxi-5, 12-naftacenodiona) Adriamicina , Rubex Pharmacia & Upjohn Company doxombicina Injecção intravenosa de Adriamicin PFS Pharmacia & Upjohn Company doxorrubicina lipossómica Doxil Sequus Pharmaceuti-cals, Inc., Menlo park, CA propionato de dromostanolona (Propionato de 17b-hidroxi-2a-metil-5a-androstan-3-ona) Dromostanol one Eli Lilly & Company, Indianapolis, IN propionato de dromostanolona Injecção de Masterone Syntex, Corp., Paio Alto, CA Solução B de Elliott Solução B de Elliott Orphan Medicai, Inc Epirrubicina (cloridrato de (8S-cis)-10-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi-a-L-arabino-hexopiranosil)oxi]- Ellence Pharmacia & Upjohn Company 95 7,8,9,10-tetra-hidro-6,8,11-tri-hidroxi-8-(hidroxiacetil)-1-metoxi-5,12-naftacenodiona) Epoetina alfa (péptido recombinante) Epogen Amgen, Inc Estramustina (estra-1,3,5(10)-trieno-3, 17-diol (17(beta))-, 3-[bis(2-cloroetil)carbamato] 17-(di-hidrogenofosfato) , sal dissódico, mono-hidratado, ou 3-[bis(2-cloroetil)carbamato de estradiol] 17-(di-hidrogenofosfato), sal dissódico, mono-hidratado) Emcyt Pharmacia & Upjohn Company Fosfato de etopósido (9-[4, 6-0-(R)-Etilideno-(beta)-D-glucopiranósido] de 4'-demetilepipodofilotoxina, 4'-(di-hidrogenofosfato)) Etopophos Bristol-Myers Squibb etopósido, VP-16 (9-[4,6-0-(R)-etilideno-(beta)-D-glucopiranósido] de 4'-demetilepipodofilotoxina) Vepesid Bristol-Myers Squibb Exemestano (6-metilenandrosta-l,4-dieno-3, 17-diona) Aromasin Pharmacia & Upjohn Company Filgrastim (r-metHuG-CSF) Neupogen Amgen, Inc floxuridina (intra-arterial) (2'-desoxi-5-fluorouridina) FUDR Roche Fludarabina (análogo nucleotidico fluorado Fludara Berlex Laboratories, 96

do agente antiviral vidarabina, 9-b-D-arabinofuranosiladenina (ara-A)) Inc., Cedar Knolls, NJ Fluorouracilo, 5-FU (5-fluoro-2,4(1H,3H)-pirimidinadiona) Adrucil ICN Pharmaceuti-cals, Inc., Humacao, Puerto Rico Fulvestrant (7-alfa-[9-(4,4,5,5,5-penta fluoropentilsulfinil)nonil]estra -1,3,5-(10)-trieno-3,17-beta-diol) Faslodex IPR Pharmaceuti-cals, Guayama, Puerto Rico Gemcitabina (monocloridrato de 2'-doxi-2',2'-difluorocitidina (isómero b) ) Gemzar Eli Lilly Gemtuzumab Ozogamicina (anti-CD33 hP67.6) Mylotarg Wyeth Ayerst Acetato de goserelina (sal acetato de acetato de [D-Ser (But) 6,Azgli10] LHRH; piro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2 [C59H84N18O14 · ( C2H4O2 ) X Implante Zoladex AstraZeneca Pharmaceuti- cals Hidroxiureia Hidrea Bristol-Myers Squibb Ibritumomab Tiuxetan (imunoconjugado resultante de uma ligação covalente de tioureia entre 0 anticorpo monoclonal Ibritumomab e 0 Zevalin Biogen IDEC, Inc., Cambridge MA 97 ligador-quelante tiuxetan [N-[2-bis (carboximetil)amino]-3- (p-isotiocianatofenil)-propil]-[N-[2-bis(carboximetil)amino]-2-(metil)-etil]glicina) Idarrubicina (5,12-Naftacenodiona, 9-acetil-7-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi-(alfa)-L-lixo- hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetra-hidro-6,9,11-tri-hidroxicloridrato, (IS-cis)) Idamicina Pharmacia & Upjohn Company Ifosamida (2-óxido de 3-(2-cloroetil)-2-[ (2-cloroetil)amino]tetra-hidro-2H-l,3,2-oxazafosforina) IFEX Bristol-Myers Squibb Mesilato de Imatinib (Metanossulfonato 4-[(4-metil-l-piperazinil)metil]-N-[4-meti1-3-[ [4- (3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-fenil]benzamida) Gleevec Novartis AG, Basel, Suiça Interferão alfa-2a (péptido recombinante) Roferon-A Hoffmann-La Roche, Inc., Nutley, NJ Interferão alfa-2b (péptido recombinante) Intron A (Betaseron Liofilizado ) Schering AG, Berlin, Alemanha Irinotecano-HCl (cloridrato de (4S)-4,11-dietil-4-hidroxi-9-[(4-piperi- Camptosar Pharmacia & Upjohn Company 98 dinopiperidino)carboniloxi]-1H-pirano[3',4',6,7]indolizino[1,2-b]quinolina-3,14(4H,12H)diona tri-hidratado) Lenalidomida 3-(4-amino-l-oxo-l,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6- diona Revlimid Celgene Letrozol (4,4'-(1H-1,2,4-Triazol-l-ilmetileno)dibenzonitrilo) Femara Novartis Leucovorina Wellcovorin Immunex, Corp., (Ácido L-glutâmico, N[4[[(2-amino-5-formil-1,4,5,6,7,8-hexa-hidro-4-oxo-6- pteridinil)metil]amino]benzoil] , sal de cálcio (1:1)) r Leucovorin Seattle, WA Levamisol-HCl (monocloridrato de (-)-(S)-2,3,5,6-tetra-hidro-6-fenilimidazo[2,l-b]tiazol ChHi2N2S · HC1) Ergamisol Janssen Research Foundation, Titusville, NJ Lomustina (1- (2-cloro-etil)-3-ciclo-hexil-1-nitrosoureia) CeeNU Bristol-Myers Squibb Mecloretamina, mostarda de azoto (cloridrato de 2-cloro-N-(2-cloroetil)-N-metiletanamina) Mustargen Merck Acetato de Megestrol 17a(acetiloxi)-6-metilpregna- 4,6-dieno-3,20-diona Megace Bristol-Myers Squibb Melfalano, L-PAM Alkeran GlaxoSmith- 99 (4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina) Kline Mercaptopurina, 6-MP (1,7-di-hidro-6H-purina-6-tiona mono-hidratada) Purinethol GlaxoSmith- Kline Mesna (sulfonato de 2-mercaptoetano sódico) Mesnex Asta Medica Metotrexato (L-ácido N-[4-[ [ (2,4-diamino-6-pteridinil)metil]metilamino]benz oil]-glutâmico) Methotrexat e Lederle Laboratories Metoxsalen ( 9-metoxi-7H-furo[3,2-g] [1]-benzopiran-7-ona) Uvadex Therakos, Inc., Way Exton, Pa Mitomicina C Mutamycin Bristol-Myers Squibb mitomicina C Mitozytrex SuperGen, Inc., Dublin, CA Mitotano (1, l-dicloro-2-(o-clorofenil)-2-(p-clorofenil)etano) Lysodren Bristol-Myers Squibb Mitoxantrona (dicloridrato de 1,4-di-hidroxi-5,8-bis[[2-[(2- hidroxietil)amino]etil]amino]-9,1O-antracenodiona) Novantrone Immunex Corporation Fenpropionato de nandrolona Durabolin- 50 Organon, Inc., West Orange, NJ Nofetumomab Verluma Boehringer Ingelheim 100

Pharma KG, Alemanha Oprelvekin (IL-11) Neumega Genetics Institute, Inc., Alexandria, VA Oxaliplatina (cis-[(IR,2R)-1,2-ciclo-hexanodiamina-N,N'] [oxalato(2-)-0,0'] platina) Eloxatin Sanofi Synthelabo, Inc., NY, NY Paclitaxel (5B, 2 0-Epoxi-l.2a,4,7B,10B,13a-hexa-hidroxitax-ll-en-9-ona 4,10-diacetato 2-benzoato 13-éster com (2R,3S)-N-benzoil-3-fenilisoserina) TAXOL Bristol-Myers Squibb Pamidronato (ácido fosfónico(3-amino-l-hidroxipropilideno)bis-, sal dissódico, penta-hidratado, (APD)) Aredia Novartis Pegademase ((monometoxipolietilenoglicol-succinimidil)11-17-adenosina-desaminase) Adagen (Pegademase Bovina) Enzon Pharmaceuti-cals, Inc., Bridgewater, NJ Pegaspargase (monometoxipolietilenoglicol- succinimidil-L-asparaginase) Oncaspar Enzon Pegfilgrastim (conjugado covalente de G-CSF humano de metionilo recombinante Neulasta Amgen, Inc 101

(Filgrastim) e monometoxipolietilenoglicol) Pentostatina Nipent Parke-Davis Pharmaceutical Co., Rockville, MD Pipobromano Vercyte Abbott Laboratories, Abbott Park, IL Plicamicina, Mitramicina (antibiótico produzido por Streptomyces plicatus) Mithracin Pfizer, Inc., NY, NY Porfimer sódico Photofrin QLT Phototerapêutic os, Inc., Vancouver, Canadá Procarbazina (monocloridrato de N-isopropil-μ-(2-metil-hidrazino)-p-toluamida) Matulane Sigma Tau Pharmaceuticals , Inc., Gaithersburg, MD Quinacrina (6-cloro-9-(l-metil-4-dietil-amina)butilamino-2-metoxiacridina) Atabrine Abbott Labs Rasburicase (péptido recombinante) Elitek Sanofi-Synthelabo, Inc., Rituximab (anticorpo anti-CD20 recombinante) Rituxan Genentech, Inc., South San Francisco, CA 102

Sargramostim (péptido recombinante) Prokine Immunex Corp Estreptozocina (estreptozocina 2-desoxi-2-[[(metilnitrosoamino)carbonil]am ino]-a (e b)-D-glucopiranose e 220 mg de ácido cítrico anidro) Zanosar Pharmacia & Upjohn Company Talco (Mg3SÍ40io (OH) 2) Sclerosol Bryan, Corp., Woburn, MA Tamoxifeno ( (Z)2- [4- (1,2-difenil-l-butenil) fenoxi]-N,N-dimetiletanamina 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato (1:1)) Nolvadex AstraZeneca Pharmaceuti-cals Temozolomida (3,4-di-hidro-3-metil-4-oxoimidazo[5,1-d]-as-tetrazina-8-carboxamida) Temodar Schering Tenipósido, VM-26 (4'-demetilepipodofilotoxina-9-[4,6-0-(R)-2-tenilideno-(beta)-D-glucopiranósido]) Vuraon Bristol-Myers Squibb Testolactona (ácido 13-hidroxi-3-oxo-13, 17-secoandrosta-1,4-dien-17-óico [gr]-lactona) Teslac Bristol-Myers Squibb Tioguanina, 6-TG (2-amino-l,7-di-hidro-6H-purina- 6-tiona) Tioguanine GlaxoSmith- Kline Tiotepa (Aziridina, 1,1',1"- Tioplex Immunex Corporation 103 fosfinotioilidinetris-, ou sulfureto de Tris(l-aziridinil)fosfina) Fopotecano-HCl (monocloridrato de (S)-10-[(dimetilamino)metil]-4-etil-4,9-di-hidroxi-lH-pirano[3',4' :6, 7] indolizino[l,2-b]quinolina-3, 14-(4H,12H)-diona) Hycamtin GlaxoSmith- Kline Toremifeno (2 — (p—[ (Z)-4-cloro-l,2-difenil- 1-butenil]-fenoxi)-N,N- dimetiletilamina citrato (1:1)) Fareston Roberts Pharmaceutical Corp., Eatontown, NJ Tositumomab, I 131 Tositumomab (anticorpo monoclonal anti-CD20 IgG2a lambda imunoterapêutico de murideo recombinante, (I 131 é um anticorpo radioimunoterapêutico)) Bexxar Corixa Corp., Seattle, WA Trastuzumab (anticorpo monoclonal anti-HER2 IgGi kapa recombinante) Herceptin Genentech, Inc Tretinoina, ATRA (ácido retinóico al-trans) Vesanoid Roche Mostarda de Uracilo Cápsulas de Mostarda de Uracilo Roberts Labs Valrubicina, N-trifluoroacetiladriamicina-14-valerato (pentanoato de (2S-cis)-2- Valstar Anthra -> Medeva 104 [1,2,3,4,6,1l-hexa-hidro-2,5,12-tri-hidroxi-7 metoxi-6,11-dioxo-[[4-2,3,6-tridesoxi-3-[(trifluoroacetil)-amino-a-L-iixo-hexopiranosil]oxil]-2-naftacenil]-2-oxoetilo) Vinblastina, Leurocristina (C46H56N4O10 · H2SO4) Velban Eli Lilly Vincristina (C46H56N4O10 · H2SO4) Oncovin Eli Lilly Vinorelbina (3',4'-di-desidro-4'-desoxi-C'-nomincaleucoblastina [R-(R*,R*)-2,3-di-hidroxibutanodioato (1:2) (sal)]) Navelbine GlaxoSmith- Kline Zoledronato, Ácido zoledrónico (Ácido (l-hidroxi-2-imidazol-l-il-fosfonoetil))fosfónico mono-hidratado Zometa Novartis

Os agentes anticancro incluem ainda compostos que foram identificados como tendo actividade anticancro mas não estão actualmente aprovados pela U.S. Food and Drug Administration ou outras agências equivalentes ou estão sob avaliação para novas utilizações. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, 3-AP, 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato, 17AAG, 852A, ABI-007, ABR-217620, ABT-751, ADI-PEG 20, AE-941, AG-013736, AGROIOO, alanosina, AMG 706, anticorpo G250, antineoplastões, AP23573, apaziquona, APC8015, atiprimod, ATN-161, atrasenten, azacitidina, BB-10901, BCX-1777, bevacizumab, BG00001, bicalutamida, BMS 247550, bortezomib, briostatina-1, buserelina, calcitriol, CCI-779, CDB-2914, cefixime, cetuximab, CG0070, 105 cilengitide, clofarabina, fosfato de combretastatina A4, CP-675,206, CP-724,714, CpG 7909, curcumina, decitabina, DENSPM, doxercalciferol, E7070, E7389, ecteinascidina 743, efaproxiral, eflornitina, EKB-569, enzastaurina, erlotinib, exisulind, fenretinide, flavopiridol, fludarabina, flutamida, fotemustina, FR901228, G17DT, galiximab, gefitinib, genisteína, glufosfamida, GTI-2040, histrelina, HKI-272, homo-harringtonina, HSPPC-96, proteína de fusão hul4.18-interleucina-2, HuMax-CD4, iloprost, imiquimod, infliximab, interleucina-12, IPI-504, irofulveno, ixabepilona, lapatinib, lestaurtinib, leuprolide, LMB-9 imunotoxina, lonafarnib, luniliximab, mafosfamida, MB07133, MDX-010, MLN2704, anticorpo monoclonal 3F8, anticorpo monoclonal J591, motexafin, MS-275, MVA-MUC1-IL2, nilutamida, nitrocamptotecina, di-cloridrato de nolatrexed, nolvadex, NS-9, 06-benzilguanina, oblimersen sódico, ONYX-015, oregovomab, OSI-774, panitumumab, paraplatina, PD-0325901, pemetrexed, PHY906, pioglitazona, pirfenidona, pixantrona, PS-341, PSC 833, PXD101, pirazoloacridina, R115777, RAD001, ranpirnase, análogo da rebecamicina, proteína rhuAngiostatina, rhuMab 2C4, rosiglitazona, rubitecano, S-l, S-8184, satraplatina, SB-, 15992, SGN-0010, SGN-40, sorafenib, SR31747A, ST1571, SU011248, ácido hidroxâmico de suberoilanilide, suramina, talabostat, talampanel, tariquidar, temsirolimus, imunotoxina TGFa-PE38, talidomida, timalfasin, tipifarnib, tirapazamina, TLK286, trabectedina, glucuronato de trimetrexato, TroVax, UCN-1, ácido valpróico, vinflunina, VNP40101M, volociximab, vorinostat, VX-680, ZD1839, ZD6474, zileuton, e tricloridrato de zosuguidar. 106

Numa forma de realização, o agente anticancro é seleccionado a partir do grupo que consiste em taxotere, gemcitabina, lapatinib (Tykerb®) e etopósido.

Para uma descrição mais detalhada dos agentes anticancro e outros agentes terapêuticos, os peritos na técnica são direccionados para vários manuais instrutivos incluindo, mas não limitados a, "Physician's Desk Reference e "Pharmaceutical Basis de Therapeutics" de Goodman e Gilman décima edição, Eds. Hardman et ai., 2002. A presente invenção proporciona compostos para utilização em métodos para administração de um composto de Fórmula VI com terapia de radiação. A invenção não está limitada pelos tipos, quantidades, ou sistemas de distribuição e administração utilizados para distribuir a dose terapêutica de radiação a um animal. Por exemplo, o animal pode receber radioterapia de fotões, terapia de radiação de feixe de partículas, outros tipos de radioterapias, e combinações destas. Nalgumas formas de realização, a radiação é distribuída ao animal utilizando um acelerador linear. Ainda noutras formas de realização, a radiação é distribuída utilizando uma faca gama. A fonte de radiação pode ser externa ou interna ao animal. A terapia de radiação externa é muito comum e envolve a direcção de um feixe de elevada energia de radiação para um local de tumor através da pele utilizando, por exemplo, um acelerador linear. Embora o feixe de radiação se localize no local do tumor, é quase impossível evitar a exposição de tecido normal, saudável. No entanto, a radiação externa é geralmente bem tolerada pelos animais. A terapia de radiação interna envolve o implante de uma fonte emissora 107 de radiação, tal como contas, fios, pastilhas, cápsulas, partículas, e semelhantes, dentro do corpo no, ou próximo do local do tumor incluindo a utilização de sistemas de distribuição que se dirijam especificamente células de cancro (p. ex., utilizando partículas ligadas a ligandos que se ligam a células de cancro). Tais implantes podem ser removidos após tratamento, ou deixados no corpo inactivos. Tipos de terapia de radiação interna incluem, mas não estão limitados a: braquiterapia, irradiação intersticial, irradiação intracavidade, radioimunoterapia, e semelhantes. O animal pode receber opcionalmente radiosensibilizantes (p. ex., metronidazol, misonidazol, BudR intra-arterial, iododesoxiuridina intravenosa (IudR), nitroimidazol, 4-nitroimidazóis substituídos em 5, 2H-isoindoledionas, [[(2-bromoetil)-amino]metil]-nitro-lH-imidazol-l-etanol, derivados de nitroanilina, citotoxinas selectivas de hipóxia com afinidade para ADN, ligando de ADN halogenado, óxidos de 1,2,4-benzotriazina, derivados de 2-nitroimidazol, derivados de nitroazol contendo flúor, benzamida, nicotinamida, acridina-intercalante, derivado de 5-tiotretrazol, 3-nitro-l,2,4-triazol, derivado de 4,5-dinitroimidazol, texafrinas hidroxiladas, cisplatina, mitomicina, tiripazamina, nitrosoureia, mercaptopurina, metotrexato, fluorouracilo, bleomicina, vincristina, carboplatina, epirrubicina, doxorrubicina, ciclofosfamida, vindesina, etopósido, paclitaxel, calor (hipertermia), e semelhantes), radioprotectores (p. ex., cisteamina, di-hidrogenofosforotioatos de aminoalquilo, amifostina (WR 2721), IL-1, IL-6, e semelhantes). Os radiosensibilizantes aumentam a morte das células tumorais. Os radioprotectores protegem o tecido saudável dos efeitos prejudiciais da radiação. 108

Qualquer tipo de radiação pode ser administrado a um animal, desde que a dose de radiação seja tolerada pelo paciente sem efeitos secundários negativos inaceitáveis. Tipos adequados de radioterapia incluem, por exemplo, radioterapia ionizante (electromagnética) (p. ex., raios X ou raios gama) ou terapia de radiação de feixe de partículas (p. ex., radiação de elevada energia linear). A radiação ionizante é definida como radiação compreendendo partículas ou fotões que têm energia suficiente para produzir ionização, i.e., ganho ou perda de electrões (tal como descrito, por exemplo, em U.S. 5,770,581). Os efeitos de radiação podem ser pelo menos parcialmente controlados pelo médico. A dose de radiação é de preferência fraccionada para máxima exposição das células alvo e reduzida toxicidade. A dose total de radiação administrada a um animal é de preferência de cerca de 0,01 Gray (Gy) a cerca de 100 Gy. De maior preferência, cerca de 10 Gy a cerca de 65 Gy (p. ex., cerca de 15 Gy, 20 Gy, 25 Gy, 30 Gy, 35 Gy, 40 Gy, 45 Gy, 50 Gy, 55 Gy, ou 60 Gy) são administrados ao longo do curso de tratamento. Enquanto nalgumas formas de realização uma dose completa de dose de radiação pode ser administrada ao longo de um dia, a dose total é idealmente fraccionada e administrada ao longo de vários dias. Desejavelmente, a radioterapia é administrada ao longo de pelo menos 3 dias, p. ex., pelo menos 5, 7, 10, 14, 17, 21, 25, 28, 32, 35, 38, 42, 46, 52, ou 56 dias (cerca de 1-8 semanas) . Assim, uma dose diária de radiação compreenderá aproximadamente 1-5 Gy (p. ex., cerca de 1 Gy, 1,5 Gy, 1,8 Gy, 2 Gy, 2,5 Gy, 2,8 Gy, 3 Gy, 3,2 Gy, 3,5 Gy, 3,8 Gy, 4 Gy, 4,2 Gy, ou 4,5 Gy) , de preferência 1-2 Gy (p. ex., 1,5-2 Gy) . A dose diária de radiação deve ser suficiente para induzir a destruição das células alvo. Se esticado ao longo de um 109 período, a radiação não é de preferência administrada todos os dias, permitindo assim que o animal repouse dos efeitos da terapia a realizar. Por exemplo, a radiação é desejavelmente administrada em 5 dias consecutivos, e não administrada em 2 dias, para cada semana de tratamento, permitindo assim 2 dias de repouso por semana. No entanto, a radiação pode ser administrada 1 dia/semana, 2 dias/semana, 3 dias/semana, 4 dias/semana, 5 dias/semana, 6 dias/semana, ou todos os 7 dias/semana, dependendo da capacidade de resposta do animal e quaisquer potenciais efeitos secundários. A terapia de radiação pode ser iniciada a qualquer momento no período terapêutico. De preferência, a radiação é iniciada na semana 1 ou semana 2, e é administrada durante o tempo restante do período terapêutico. Por exemplo, a radiação é administrada nas semanas 1-6 ou nas semanas 2-6 de um período terapêutico compreendendo 6 semanas para tratamento, por exemplo, de um tumor sólido. Alternativamente, a radiação é administrada nas semanas 1-5 ou nas semanas 2-5 de um período terapêutico compreendendo 5 semanas. Estes esquemas de administração de radioterapia exemplares não pretendem, no entanto, limitar a presente invenção.

Agentes terapêuticos antimicrobianos podem também ser utilizados como agentes terapêuticos na presente invenção. Qualquer agente que possa matar, inibir, ou de outro modo atenuar a função de organismos microbianos pode ser utilizado, bem como qualquer agente contemplado como tendo tais actividades. Agentes antimicrobianos incluem, mas não se limitam a, antibióticos naturais e sintéticos, anticorpos, proteínas inibidoras (p. ex., defensinas), ácidos nucleicos anti-sentido, agentes de ruptura da membrana e semelhantes, utilizados sozinhos ou em combinação. De facto, qualquer tipo de antibiótico pode ser usado incluindo, mas não limitado a, agentes 110 antibacterianos, agentes antivirais, agentes antifúngicos e semelhantes.

Nalgumas formas de realização da presente invenção, um composto de Fórmula VI e um ou mais agentes terapêuticos ou agentes anticancro são administrados a um animal sob uma ou mais das seguintes condições: a diferentes periodicidades, a diferentes durações, a diferentes concentrações, através de diferentes vias de administração, numa única composição, em composições separadas, etc. Nalgumas formas de realização, o composto é administrado antes do agente terapêutico ou anticancro, p. ex., 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou 18 horas, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias, 1, 2, 3, ou 4 semanas antes da administração do agente terapêutico ou agente anticancro. Nalgumas formas de realização, o composto é administrado após o agente terapêutico ou anticancro, p. ex., 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou 18 horas, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias, 1, 2, 3, ou 4 semanas após a administração do agente anticancro. Nalgumas formas de realização, o composto e o agente terapêutico ou anticancro são administrados concomitantemente mas em esquemas diferentes, p. ex., o composto é administrado diariamente, enquanto o agente terapêutico ou anticancro é administrado uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas. Noutras formas de realização, o composto é administrado uma vez por semana enquanto o agente terapêutico ou anticancro é administrado diariamente, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatro semanas.

As composições farmacêuticas dentro do âmbito da presente invenção incluem todas as composições em que os compostos 111 da presente invenção estão contidos numa quantidade que é eficaz para atingir a sua finalidade. Enquanto as necessidades individuais variam, a determinação dos intervalos óptimos das quantidades eficazes de cada componente está dentro da perícia na técnica. Tipicamente, os compostos podem ser administrados a mamíferos, p. ex., humanos, oralmente numa dose de 0,0025 a 50 mg/kg, ou numa quantidade equivalente do sal farmaceuticamente aceitável destes, por dia do peso corporal do mamífero a tratar para os distúrbios responsivos à indução de apoptose. Por exemplo, cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg são administrados por vial oral para tratar, melhorar, ou prevenir tais distúrbios. Para injecção intramuscular, a dose é geralmente de cerca de metade da dose oral. Por exemplo, uma dose intramuscular adequada seria cerca de 0,0025 a cerca de 25 mg/kg, p. ex., de cerca de 0,01 a cerca de 5 mg/kg. A unidade de dose oral pode compreender de cerca de 0,01 a cerca de 1000 mg, p. ex., cerca de 0,1 a cerca de 100 mg do composto. A unidade de dose pode ser administrada uma ou mais vezes ao dia, como um ou mais comprimidos ou cápsulas contendo cada um de cerca de 0,1 a cerca de 10, convenientemente cerca de 0,25 a 50 mg do composto ou seus solvatos.

Numa formulação tópica, o composto pode estar presente numa concentração de cerca de 0,01 a 100 mg por grama de transportador. Numa forma de realização, o composto está presente numa concentração de cerca de 0,07-1,0 mg/mL, p. ex., cerca de 0,1-0,5 mg/mL, p. ex., cerca de 0,4 mg/mL. 112

Além da administração do composto como um produto quimico em bruto, os compostos da invenção podem ser administrados como parte de uma preparação farmacêutica contendo transportadores farmaceuticamente aceitáveis adequados compreendendo excipientes e auxiliares que facilitam o processamento dos compostos em preparações que possam ser utilizadas farmaceuticamente. De preferência, as preparações, particularmente as preparações que podem ser administradas por via oral ou por via tópica e que podem ser utilizadas para o tipo de administração preferido, tais como comprimidos, drageias, pastilhas e cápsulas de libertação lenta, colutórios e lavagens bucais, géis, suspensões liquidas, lavagens do cabelo, géis do cabelo, champôs e também preparações que podem ser administradas por via rectal, tais como supositórios, bem como soluções adequadas para administração por infusão intravenosa, injecção, por via tópica ou oral, contêm de cerca de 0,01 a 99 por cento, p. ex., de cerca de 0,25 a 75 por cento de composto ou compostos activos, juntamente com o excipiente.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas a qualquer animal que possa experimentar os efeitos benéficos dos compostos da invenção. Em primeiro lugar entre esses animais estão mamíferos, p. ex., humanos, embora não se pretenda que a invenção esteja tão limitada. Outros animais incluem animais veterinários (vacas, ovelhas, porcos, cavalos, cães, gatos e semelhantes). bucal, transdérmica

Os compostos e as composições farmacêuticas destes podem ser administrados através de quaisquer meios que atinjam a sua finalidade. Por exemplo, a administração pode ser por via parentérica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, 113 intracraniana, intranasal ou tópica. Alternativamente, ou concorrentemente, a administração pode ser pela via oral. A dosagem administrada será dependente da idade, da saúde, e do peso do receptor, do tipo de tratamento concorrente, se houver algum, da frequência de tratamento, e da natureza do efeito desejado.

As preparações farmacêuticas da presente invenção são fabricadas de uma forma que é ela própria conhecida, por exemplo, através de processos convencionais de mistura, granulação, fabrico de drageias, dissolução, ou liofilização. Assim, preparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidas por combinação dos compostos activos com excipientes sólidos, opcionalmente triturando a mistura resultante e processando a mistura de grânulos após adição de auxiliares adequados, se desejado ou necessário, para obter comprimidos ou núcleos de drageias.

Os excipientes adequados são, em particular, enchimentos tais como sacáridos, por exemplo lactose ou sacarose, manitol ou sorbitol, preparações de celulose e/ou fosfatos de cálcio, por exemplo fosfato de tricálcio ou hidrogenofosfato de cálcio, bem como aglomerantes tais como pasta de amido, utilizando, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma adragante, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, e/ou polivinilpirrolidona. Se desejado, podem ser adicionados agentes de desintegração tais como os amidos acima mencionados e também carboximetilamido, polivinilpirrolidona reticulada, agar, ou ácido algínico ou um sal destes, tais como alginato de sódio. Os auxiliares são, acima de tudo, agentes reguladores de fluxo e lubrificantes, por exemplo, sílica, 114 talco, ácido esteárico ou sais destes, tais como estearato de magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polietilenoglicol. Os núcleos das drageias são proporcionados com revestimentos adeguados que, se desejado, são resistentes aos sucos gástricos. Para esta finalidade, podem ser utilizadas soluções concentradas de sacáridos, que podem opcionalmente conter goma-arábica, talco, polivinilpirrolidona, polietilenoglicol e/ou dióxido de titânio, soluções de laca e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. Para produzir revestimentos resistentes aos sucos gástricos, são utilizadas soluções de preparações de celulose adequadas tais como ftalato de acetilcelulose ou ftalato de hidroxipropilmetilcelulose. Materiais corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos revestimentos dos comprimidos ou das drageias, por exemplo, para identificação ou para caracterizar combinações de doses de composto activo.

Outras preparações farmacêuticas que podem ser utilizadas oralmente incluem cápsulas de encaixe feitas de gelatina, bem como cápsulas seladas, moles feitas de gelatina e um plastificante tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixe podem conter os compostos activos sob a forma de grânulos que podem ser misturados com enchimentos tais como lactose, aglomerantes tais como amidos, e/ou lubrificantes tais como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Em cápsulas moles, os compostos activos são de preferência dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos gordos, ou parafina líquida. Além disso, podem ser adicionados estabilizantes.

Possíveis preparações farmacêuticas que podem ser utilizadas por via rectal incluem, por exemplo, 115 supositórios, que consistem numa combinação de um ou mais dos compostos activos com uma base de supositórios. Bases de supositórios adequadas são, por exemplo, triglicéridos naturais ou sintéticos, ou hidrocarbonetos de parafina. Além disso, é também possível utilizar cápsulas rectais de gelatina que consistem numa combinação dos compostos activos com uma base. Possíveis materiais de base incluem, por exemplo, triglicéridos líquidos, polietilenoglicóis, ou hidrocarbonetos de parafina.

Formulações adequadas para administração parentérica incluem soluções aquosas dos compostos activos em formas solúveis em água, por exemplo, sais solúveis em água e soluções alcalinas. Além disso, podem ser administradas suspensões dos compostos activos como suspensões oleosas adequadas para injecção apropriadas. Solventes ou veículos lipofílicos adequados incluem ácidos gordos, por exemplo, óleo de sésamo, ou ésteres de ácidos gordos sintéticos, por exemplo, oleato de etilo ou triglicéridos ou polietilenoglicol-400. As suspensões aquosas para injecção podem conter substâncias que aumentem a viscosidade da suspensão incluindo, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, sorbitol, e/ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão pode também conter estabilizantes.

As composições tópicas de presente Invenção são formuladas de preferência como óleos, cremes, loções, pomadas e semelhantes através da escolha dos transportadores apropriados. Transportadores adequados incluem óleos vegetais ou minerais, vaselina (parafina branca mole), gorduras ou óleos de cadeia ramificada, gorduras animais e álcool de elevado pelo molecular (superior a C12) . Os transportadores preferidos são aqueles em que o ingrediente 116 activo é solúvel. Emulsionantes, estabilizantes, humectantes e antioxidantes podem também ser incluídos bem como agentes dando cor ou fragrância, se desejado. Adicionalmente, potenciadores de penetração transdérmica podem ser empregues nestas formulações tópicas. Exemplos de tais potenciadores podem ser encontrados em Pat. U.S. Nos. 3,989,816 e 4,444,762.

Os cremes são de preferência formulados a partir de uma mistura de óleo mineral, cera de abelha auto-emulsionante e água em cuja mistura o ingrediente activo, dissolvido numa pequena quantidade de um óleo tal como óleo de amêndoa, é misturado. Um exemplo típico de tal creme é um que inclui cerca de 40 partes de água, cerca de 20 partes de cera de abelha, cerca de 40 partes de óleo mineral e cerca de 1 parte de óleo de amêndoa.

As pomadas podem ser formuladas através de mistura de uma solução do ingrediente activo num óleo vegetal tal como óleo de amêndoa com parafina mole quente e deixando a mistura arrefecer. Um exemplo típico de uma tal pomada é uma que inclua cerca de 30% de óleo de amêndoa e cerca de 70% de parafina mole branca em peso.

As loções podem ser convenientemente preparadas através da dissolução do ingrediente activo, num álcool de elevado peso molecular adequado tal como propilenoglicol ou polietilenoglicol.

Os seguintes exemplos são ilustrativos, e não limitantes, do método e das composições da presente invenção. EXEMPLO 1 117 Síntese de Miméticos de Smac Covalentemente Constrangidos Métodos Gerais: os espectros de RMN foram adquiridos a uma frequência de protões de 300 MHz. Os deslocamentos químicos de 3Η são relatados com Me4Si (0,00 ppm), CHCI3 (7,26 ppm) , CD2HOD (3,31 ppm), ou DHO (4,79 ppm) como padrões internos. Os deslocamentos químicos de 13C são relatados como CDCI3 (77,00 ppm), CD3OD (49,00 ppm), ou 1,4-dioxano (67,16 ppm) como padrões internos. As rotações ópticas foram medidas à temperatura ambiente. Os compostos da invenção podem ser purificados através de HPLC de fase inversa (TFA a 0,1% em água e TFA a 0,1% em acetonitrilo como eluente) e isolados como o sal de TFA.

Procedimento geral A (condensação entre ácido carboxílico e amina): A uma solução dos dois substratos em CH2CI2 (20 mg/mL para o substrato menor) foi adicionado EDC (1,1 eq por grupo amino), HOBt (1,1 eq por grupo amino) e N,N- diisopropilet ilamina (4 eq por grupo amino) a 0°C com agitação. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante oito horas e depois concentrada. O resíduo foi purificado através de cromatografia para dar o produto.

Procedimento geral B (desprotecção de Boc): A uma solução do substrato em metanol (20 mg/mL) foi adicionada uma solução de HC1 em 1,4-dioxano (4 M, 10-20 eq por Boc) . A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois condensada para dar o produto. EXEMPLO 2 118 Síntese de

Intermediários dos Miméticos de

Smac 0S intermediários na via sintética para miméticos de Smac c°nformacionalmente constrangidos podem ser sintetizados utilizando a metodologia descrita nos Esquemas 1-7.

O

COOH

a

COOMe

CbaHN "Q NHBoc 3

intermediário eaamína 3

HCX. CbzHN NHBoc

intermediário eaamina

Reagentes e condições: (a) i. HC1 4 N em 1,4-dioxano, metanol; ii. Boc-Dap(Z)-OH, EDC, HOBt, N, N-diisopropiletilamina, CH2CI2, 52% ao longo de dois passos; (b) 03, depois PPh3, CH2CI2, 90%; (C) h2, 10% Pd-C, i-PrOH, 41%; (d) H2, Pd-C a 10%, i-PrOH; (e) NaBH(OAc)3, THF; (f) 9-BBN (2 eq) , THF, refluxo, 12 h, depois NaOH 3 N (2 eq) , H2O2 a 35% (2,5 eq) , 0°C - ta, 85%; (f) i. periodinano de 119

Dess-Martin, CH2CI2; ii. H2, Pd-C a 10%, i-PrOH, 50% ao longo de dois passos; (h) H2, Pd-C a 10%, i-PrOH; (i)

NaBH (OAc) 3, THF . A síntese dos intermediários 5 e 7 é mostrada no Esquema 1. O Composto 2 pode ser preparado em cinco passos a partir do ácido piroglutâmico 1 de acordo com métodos relatados (ver: (1) Zhang, J.; Xiong, C.; Wang, W. ; Ying, J.; Hruby, V., J. Org. Lett., 2002, 4(23): 4029-4032, (2) Polyak, F. e

Lubell, W. D. J. Org. Chem. 1998, 63: 5937-5949, e (3)

Tetrahedron Letters 2005, 46: 945-947) como uma mistura de dois diastereoisómeros com o isómero de forma R como principal produto (a razão é de cerca de 4:1). A remoção do grupo Boc em 2 seguida de condensação com ácido N-oí-(terc-butoxilcarbonil)-Ν-β-(benzoxilcarbonil)-L-diamino-propiónico (Boc-Dap(Z)-OH) deu a amida 3. A oxidação do ozono da ligação dupla C-C em 3 rendeu o aldeído 4. A clivagem do grupo Cbz em 4, a condensação intramolecular da amina resultante com o grupo aldeído e a subseguente redução da enamina foram realizadas num vaso para dar o composto 5 sob tempos de reacção prolongados.

Alternativamente, a desprotecção do grupo CBz de 4, a ciclização intramolecular, o isolamento do intermediário enamina e a redução proporcionam 5. Nesta transformação apenas o composto 5 foi obtido e não houve formação detectável do seu isómero, sugerindo que o aldeído amino do isómero menor não cicliza sob estas condições. A uma solução de composto 2 (54 0 mg, 2 mmol) em 2 0 mL de metanol foram adicionados 4 mL de uma solução de HC1 4 N em 1,4-dioxano. A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e depois concentrada para dar um sal de amónio. A uma mistura deste sal em 15 mL de diclorometano foram adicionados 1,17 g (2,4 eq) de Boc-Dap (Z)-OH-DCHA, 460 mg (2,4 mmol) de EDC, 320 mg (2,4 mmol) de HOBt, e 3 mL de N, N-diisopropiletilamina. A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e 120 depois condensada. O resíduo foi purificado através de cromatografia para dar o composto 3 (YP-348) (580 mg, 59%). 3Η RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) (isómero principal) δ 7,34-7,28 (m, 5H) , 5, 80-5, 77 (m, 1H) , 5,59 (m, 1H) , 5,36-5,33 (d, J= 10,0 Hz, 2H) , 5,19-5,01 (m, 4H) , 4, 67-4, 62 (m, 1H) , 4,47-4,44 (m, 1H) , 3, 76-3, 74 (s, 1H) , 3,74-3,71 (s, 2H) , 2,32-2,30 (m, 1H) , 2,16-2,12 (m, 1H) , 1, 99-1, 95 (m, 2H) , 1,42 (s, 9H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 172,4, 170,5, 156, 5, 155,2, 136, 4, 134, 6, 133, 8, 128,3, 127, 9, 118,5, 117,1, 80, 0, 66, 6, 59, 7, 58,2, 52,6, 43, 4, 29,2, 28, 1, 26, 6.

Foi borbulhado O3 através de uma solução de composto 3 (490 mg, 1 mmol) em 20 mL de CH2CI2 a -78°C até a cor se tornar azul pálido. Foi borbulhado O3 durante mais 15 min antes de ser borbulhado ar para libertar ο O3 em excesso. Após adição de 3 mL de Et3N, a mistura foi aguecida até à temperatura ambiente e mexida durante 1 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado através de cromatografia para dar o aldeído 4 (YP-367) (340 mg, 69%). 3H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) (isómero principal) δ 9,78-9,67 (m, 1H), 7,53-7,32 (m, 5H), 5,44 (s, 1/2 H), 5,32 (s, 1/2 H), 5,15-5,06 (m, 2H), 4,64 (m, 1H), 4,40-4,39 (m, 1H), 3, 78-3,76 (s, 3/2 H) , 3,76-3,74 (s, 3/2H), 3, 48-3,42 (m, 3H) , 2,78-2,52 (m, 1H) , 2,40-2,20 (m, 1H) , 2,16 (m, 2H) , 2, 06-1, 89 (m, 1H) , 1,44-1,43 (m, 9H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 200,3, 199,5, 172, 6, 172,2, 170,3, 156,5, 136,4, 128,4, 128,0, 66,7, 59,7, 59,1, 54,3, 52,4, 52,3, 48,4, 43,3, 29, 6, 28,2, 21,0. A uma solução de composto 4 (290 mg, 0,6 mmol) em 20 mL de isopropanol foram adicionados 0,2 g de Pd/C a 10%. A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob H2 de um dia para o outro, filtrada através de celite e concentrada. O resíduo foi dissolvido em THF seco. A esta solução foram adicionados NaBH(OAc)3 (380 mg, 1,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, diluída com CH2CI2, lavada com solução salina, seca sobre 121

Na2SC>4 e concentrada. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia para dar o composto 5 (72 mg, 35%) . [oí]20d- 30,2 (c = 1,7, CHCI3) ; 3H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 5, 45 (L, J = 8,0 Hz , 1H), 4,67 (m, 1H) , 4, 52 (t, J = 9,0 Hz, 1H) , 4,23 (m, 1H) , 3,74 (s, 3H) , 3,20 (m, 2H) , 2,94 (m, 1H) , 2,74 (dd, N K Oh O 1—1 oo 1—1 II >"0 D , 2,35 (m, 1H) , 2,14 (m, 1H) , 1, 99 (m, 1H), 1,86-1,74 (m, 3H) , 1,66 (m, 1H) , 1,43 (L, 9H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3, TMS) δ 173,42, 170, 60, 155,16, 79,68, 59,46, 58,39, 54,92, 52,44, 46,72, 37,45, 32, 15, 29, 64, 28,29, 26, 98. A hidroboração da ligação dupla C-C em 3 com 9-BBN seguido de oxidação alcalina do borano resultante originou o álcool 6. A oxidação de 6 com periodinano de Dess-Martin forneceu uma mistura de dois aldeídos, que foram tornados cíclicos no mesmo procedimento que aquele para o composto 5 para dar o composto 7. Semelhante a 5, durante esta transformação foi obtido apenas um isómero.

Dados analíticos para o composto 7: [a]20D-23,2 (c = 1,0, chci3: ); 2H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS ) δ 5,23 (L, J = = 8,0 Hz, 1H) , 4,79 (m, 1H) , 4, 65 (dd, J = 9,7, 8,2 Hz), 4,22 (m, 1H) , 3, 74 (s, 3H) , 3, 02 -2, 80 (m, 4H), 2,38-1,70 (m, 9H) , 1,43 (L, 9H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3, TOMS) δ 173,38, 171,59, 155,09, 79,68, 62,03, 59,82, 53,72, 53,15, 52,48, 50, 09, 34, 66, 34,55, 29, 47, 28,31, 27,33. 122

Esquema 2 122

5

Dados analíticos para YP-248P: 3Η RMN mostra que este composto tem dois rotâmeros com uma razão de 2:1. !H RMN (300 MHz, CDC1 3, TMS) δ 7,47-7, 44 (m, 1H) , 7, 38-7, 32 (m, 4H) , 5, 65 -5, 62 (d, J = 8 Hz, 1H) , 5,31- -5,16 (m, 2H) , 4, . 64- 4, 60 (m, 1H) , 4,51 -4,46 (t, J = 8 Hz, 1H) , 4, 24-4, 23 (m, 1H) , 4,23 -4,21 (m, 1H) , 3,75 (s, 1H) , 3, 73 (s, 2H) , 3, . 66- 3, 63 (m, 1H) , 3, 63' -3, 61 (m, 1H) , . 3,61- 3,31 (m, 1H) , 2, . 36- 2,34 (m, 1H) , 2 ,11- 1,76 (m, 6H) , 1,44-1 ,45 (; s, 9H) .

Dados analíticos para o intermediário amida: XH RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 5,79 (L, J = 7,0 Hz, 1H) , 4, 50-4, 35 (m, 2H) , 4,05 (m, 1H) , 3, 98-3, 85 (m, 2H) , 3,70 (s, 3H) , 3,32-3,04 (m, 2H) , 2,54 (m, 1H) , 2,40-2,26 (m, 2H) , 2,25-1,60 (m, 6H) , 1,39 (s, 9H) , 0, 98-0,89 (m, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 173,12, 172,52, 168,85, 154, 69, 79, 80, 59, 51, 56.11, 54,38, 53,51, 52,23, 46,18, 42,02, 32,51, 31,12, 28.12, 26,54, 25,81, 22,69, 22,40. 123

Esquema 3 123Γ\ ΗΟ'^^Ν^ι Ν COOt-Bu Βπ

TBSO eoot-Bu ΥΡ-237Ρ

COOt-Bu ΗΟ

CbzHN NHCbz γΦ' r^o COOt-Bu

CbzHN NHCbz "Cq J \ Kc YP-239

BocHN O COOt'Bu YP-239P

YP-238P

Dados analíticos para YP-237P: [ a] 20D-21,5° 1 :c = 1,0, CHCI3) ; 2H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS ) δ 3,71 (t, J = 6,5 Hz, 3H) , 3,60 (dd, J = 9,0, 5,4 Hz, 1H) , 3 ,11 (m, 1H) , 2,05 (m, 1H) , 1,95-1,63 (m, 3H) , 1,46 (s, 9H) , 1,25 (m, 1H) , 0,89 (s, 9H) , 0,05 (s, 6H) ; 13C RMN ( 75 MHz, CDCI3) δ 174,5, 80, 8, 61,5, 60, 6, 57,5, 38,8, 3, 1, 8, 30,4, 28,0, 25, 9, 18,2, -5,4; HRMS: m/z calculado para [M+H]+ 330,2464; verificado 330,2466.

Dados analíticos para YP-238P: [a] 20D-90,0° (c = 1,67, CHCI3) ; 3H RMN mostra que este composto tem dois rotâmeros com uma razão de 1:1, 2H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 7,28 (m, 5H) , 5,59 (m, 1H) , 5,35 (m, 1H) , 5,20-5,05 (m, 2H) , 4, 85 (m, ** H) , 4,65 (m, ½ H) , 4,46 (m, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 3, 80 (m, H) , 3,70-3,50 (m, 2H), 3,40 (m, 1H), 3,25 (m, Vi H) , 2,32 (m, 1H), 2,20-1,50 (m, 4H) , 1 ,46 (s, 4,5H), 1,44 (s, 4,5H), 1, 43 (s, 4,5H), 1,41 (s, 4,5H); HRMS: m/ z calculado 558,2791 para [M+Na]+; verificado 558,2794.

Dados analíticos para YP-239: [a] 20D-51,60 (c = 1,67, CHCI3) ; 2H RMN mostra que este composto tem dois rotâmeros 124 com uma razão de 2:1, 2H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 9,76 (s, 2/3 H), 9,71 (s, 1/3 H), 7,40-7,28 (m, 5H) , 5,72-5,30 (m, 2H) , 5,20-4, 95 (m, 2H) , 4,90-4,25 (m, 3H) , 3,52-3,05 (m, 3H) , 2,90-1, 60 (m, 4H), 1,50-1,35 (m, 18H) ; HRMS: m/z calculado 556,2635 para [M+Na]+; verificado 556,2629.

Dados analíticos para YP-239P: [a]20D-8,4° (c = 0,65, CHC13) ; 2H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 5,49 (L, J= 8,1 Hz, 1H) , 4,70 (m, 1H) 1—I (t, J II 00 Hz 1—1 O PO (m, 1H) , 3, 25- -3, 18 (m, 2H) , 2,89 (m, 1H) , 2, 75 (dd, J = 13 ,5, 11,1 Hz, 1H) , 2,34 (m , 1H) , 2,18- 1, 60 (m, 6H) , 1,49 (s, 9H) , 1,44 (s, 9H) ; 13C RMN (7 5 MHz, CDCI3) δ 171, 8 , 170,4 , 155,2, 81,7 , 79, 5, 60 , 6, 58,5, ! 34,9, 52,3, 46, 9, 37 ,5, 32, 1, 28,3, 28,0, 27,0; HRMS: m/z calculado 406,2318 para [M+Na]+; verificado 406,2317. 125

Esquema 4

Dados analíticos para YP-244: ΤΗ RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 7, 92- -7,75 (m 1, 1H) , 7,48-7 ,46 (m, 1H) r 7, 37- 7, 24 ( m, 15H) , 6, 24 -6, 18 (t, J = 8,3 Hz, 1H) , 5,76- 5, 70 (t r J = 7, 3 Hz, 1H) , 5 ,15 (s, 2H) , <\ O 1 65 1 (m, 1H) r 4, 57- -4, 54 (m, 1H) , 4, 15 -4, 10 (m, 2H) , OO 1 0 VO OO 40 ( m, 1H) r 2, 67- -2, 61 (m, 2H) , 2, 12 -2, 01 (m, 2H) , 1,82-1,7 6 (m, , 2H) , 1, , 4 8 -1, 47 (s, 9H) .

Dados analíticos para YP-244P2: ΤΗ RMN mostra que este composto tem dois rotâmeros com uma razão de 1:1. ΤΗ RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 7, 83-7, 69 (m, 1H) , 7,47-7,45 (m, 126 1Η) , 7,36-7,26 (m, 15H) , 6,24-6,18 (t, J = 8,2 Hz, 1H) , 5,15 (s, 2H) , 4, 89-4,79 (m, 1H) , 4,70-4, 62 (q, J= 6,9 Hz, 1H) , 4,23- -4,07 (m, 2H) , 3,60 -3,47 (1H), 2,82 (s, 3/2 H), 2,79 (s, 3/2 H) , 2,62-2,59 (m, 2H), 2,48-2, 30 (m, 1H), 2,13-2,03 (m, 2H), 1,86-1,79 (m, 2H), 1,51 (s, 9/2 H) , 1,49 (s, 9/2 H) , 1,38-1,35 (d, J - 7,0 Hz, 3H) .

Dados analíticos para YP-245: TH RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 9, 09-9, 07 (d, J= 7,2 Hz, 1H) , 7,32-7,18 (m, 10H) , 6,99- 6,80 (L, 1H) , 6,23-6, 20 (d, J= 7,3 Hz, 1H) , 5, 08-5, 04 (m, 1H), 4,72-4,67 (t, J= 8,5 Hz, 1H), 4,33-4,18 (m, 1H), 307-2,94 (m, 1H) , 2,80 (s, 3H) , 2,73-2,54 (m, 1H) , 2,53-2,38 (m, 1H), 2,31-2,24 (t, J = 11 Hz, 1H) , 2,18-2,00 (m, 2H) , 1,75-1,74 (m, 2H), 1,53 (s, 9H), 1,35-1,26 (d, J= 7,1 Hz, 3H) .

Dados analíticos para YP-370: Ή RMN (300 MHz, CDCls, TMS) δ 7, 60-7,05 (m, 9H) , 5,78-5,50 (m, 1H) , 5,20-5,11 (m, 2H) , 4, 65-4,30 (m, 2H) , 4,28-4,22 (m, 1H) , 3, 60-3, 48 (m, 1H) , 3, 42-3,38 (m, 1H) , 2, 93-2, 68 (m, 2H) , 2,58-2,40 (m, 1H) , 2, 28-1, 98 (m, 4H), 1, 98-1,70 (m, 6H), 1,44 (s, 9H) .

Dados analíticos para YP—372: ΤΗ RMN mostra que este

composto tem dois rotâmeros com uma razão de 1:1. 1H RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 7,45 (m, 1H) , 7 , 36 -7,10 (m, 9H) , 6, 72- -6, 58 (m, 1H) , 5,21- 5, 14 (t, J = 9, 9 Hz, 2H) , 4, 82 (m, 1H) , 4, .48- -4,41 (m, 1H) , 4, 14 -4,09 (m, 2H) , 3, 82- -3, 60 (m, 1H) , 3, 20- -2, 90 (m, 2H) , 2,79 (s, 3/2 H) r 2, 77 (s, 3/2 H) , 2, 50- -2, 36 (m, 1H) , 2,18 -2,01 (m, 4H) , 1 ,89 -1, 82 (m, 6H) , 1,49 (s, 9/2 H), 1,46 (s, 9/2 H), 1,37-1,33 (m, 3H) ; HRMS: m/z calculado 698,3530 para [M+Na]+; verificado 698,3541.

Dados analíticos para YP-373: Ή RMN (300 MHz, CDCI3, TMS) δ 8,77-8,75 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 7,21-7,05 (m, 4H) , 6,90-6,73 (L, 1H) , 5, 06-4, 98 (m, 2H) , 4, 65-4,59 (t, J= 8,1 Hz, 1H) , 4,23-4,17 (m, 1H) , 3,02-3,01 (m, 1H) , 2,76 (s, 3H) , 2, 70-2, 68 (m, 2H) , 2, 60-2,48 (m, 2H) , 2,38 (m, 1H) , 2,12- 127 2,03 (m, 4H) , 1, 82-1,72 (m, 6H) , 1,47 (s, 9H) , 1,32-1,29 (d, J= 7,1 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, CDCI3) δ 170, 6, 168,4, 137,6, 136,4, 129,3, 128,9, 127,2, 125,8, 60,3, 58,2 54,4, 49,3, 47,4, 46, 8, 34, 9, 31,8, 29, 0, 28,2, 27, 6, 18,7, 14, 1; HRMS: m/z calculado 564,3162 para [M+Na]+; verificado 564,3163.

Um composto representado pela Fórmula A, em que m é 1-2, e R1 e R2 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbociclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído, pode ser preparado através do método mostrado no Esquema 5. Resumidamente, a protecção do grupo amino no intermediário a com o grupo protector Cbz dá o intermediário b. A hidrólise do grupo éster de b rende o 128 ácido c. A condensação de c com a amina NFdR2 fornece um composto de Fórmula A.

Esquema 6

Um composto representado pela Fórmula B em que Ai, A2, Z, X, T, U, m e R5 têm os significados descritos acima para a Fórmula I, pode ser preparado tal como mostrado no Esquema 6. Resumidamente, a remoção do grupo protector Boc em a proporciona a amina b. A condensação de b com o aminoácido protegido com Boc correspondente dá a amida c. A remoção do grupo Cbz protector em c fornece a amina d. A introdução de R5 no grupo amino em d rendeu e. R5 pode ser introduzido através de substituição de d com o halogeneto de alquilo correspondente (p. ex., Mel) ou através de outras reacções de deslocamento nucleofilico com electrófilos adequados. Quando R5 é COR7, COR7 pode ser introduzido através de condensação de d com R7CO-L em que L é um grupo de saída. Por exemplo, R7CO-L pode ser o ácido carboxílico correspondente (i.e., R7C02H) ou cloreto ácido (i.e., 129 R7C0C1) . A remoção do grupo protector Boc em e dá f. A introdução do grupo Ai através da substituição de f com um halogeneto de alquilo ou aminação redutora de f com o correspondente aldeído proporciona o mimético de Smac representado pela Fórmula B.

Numa forma de realização, COR7 é introduzido através de condensação de d com o correspondente ácido carboxilico (i.e., R7C02H) . Noutra forma de realização, a condensação de R7C02H com d é realizada na presença de um agente de activação (p. ex., diciclo-hexilcarbodiimida, l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida, hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio). Noutra forma de realização, o agente de activação é l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida. Noutra forma de realização, a condensação de R7CC>2H com d é realizada na presença de um agente de activação e um ou mais aditivos adicionais (p. ex., N-hidroxibenzotriazol) para optimizar parâmetros da reacção tais como o rendimento. Numa forma de realização, a reacção está completa em cerca de 1 hora a cerca de 24 horas. Numa forma de realização, a reacção é realizada a uma temperatura de cerca de -20°C a cerca de 25°C. Numa forma de realização, a reacção é realizada num solvente orgânico inerte tal como acetonitrilo, benzeno, clorofórmio, 1,2-dicloroetano, 1,2,-dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dioxano, diclorometano, N-metil-2-pirrolidinona ou tetra-hidrofurano. 130

Esquema 7 130cbzN y\

BocHN

m

J~OMe _ O LíBH4 1. MsCl2. NaN3

BocHN

OH /- ^om Cbz,. CbzN ώΓ) pPh3 N R1CHO - SocHN^" BocHN^~ O -NHj NaBHí

Um composto representado pela Fórmula C em que m é 1 ou 2, e R1, R2 e R7 têm os significados descritos acima para a Fórmula I, pode ser sintetizado no método mostrado no Esquema 7. A redução do grupo éster em a rende um álcool b. A mesilação de grupo hidroxilo em b seguido da substituição do mesilato resultante com azida de sódio fornece a azida c. A redução da azida com PPím em THF-H2O proporciona a amina d. A aminação redutora de d com um aldeido R1CH0 dá a amina e. A introdução de R" no grupo amino em e dá um composto de Fórmula C. Quando R" é R2, este pode ser ligado ao grupo amino através de substituição com halogeneto de alquilo ou outro electrófilo adequado, ou aminação redutora

N BocHN

O e NH V~R1 t \mCbz v /“tO N V\

BocHN FO) v\_

o Fórmula C R1 131 de um aldeído. Quando R" é COR7, este pode ser introduzido através de condensação de e com R7CO-L em que L é um grupo de saída. Numa forma de realização, R7CO-L é um ácido (i.e., R7C02H) ou cloreto ácido (i.e., R7C0C1) . EXEMPLO 3 de Referência YP~24$P3

li .ticos para YP-245P3: 7H RMN (300 MHz, D20, TMS) 20 (m, 10H), 5, 97 (s, 1H) , 5, 25 (L, 1H) , 4,51 (L, 1- -3, 84 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 3, 82- 3,70 (m, 1H) , ( m, 1H ), 3,48- 3,43 (m, 1H) , 3,23-3 ,19 (t, J = 12 2 , 90 ( s, 3H) , 2,56 (s, 3H), 2,40- -2,36 (m, 1H) , ( m, 5H), 1,41- 1,38 (d, J = 7, 1 Hz, 3H) ; HRMS : m/ z calculado para [M+H]+ 492,2975; verificado 492,2971 EXEMPLO 4 de Referência YP^

Dados analíticos para YP-246P: 7H RMN (300 MHz, D2O, TMS) δ 7,33-7,13 (m, 15H) , 6,03-6,01 (m, 1H), 5,32-5,30 (m, 1H) , 4,64-4,61 (m, 1H) , 4,31 (s, 2H) , 3,85-3,83 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 3,69 (m, 1H), 3,59-3,51 (m, 1H) , 3,12-3,08 (t, J = 132 11, 6 Hz, 1H) , 2,55 (s, 3H) (m, 1H) , OO \—1 1 \—1 OD \—1 (m, 4H) , HRMS : m/ z calculado para 568, 3284 . 2,40-2,28 (m, 1H), 2,09-2,04 1,37-1,35 (d, J= 7,1 Hz, 3H) ; [M+H]+ 568,3288; verificado EXEMPLO 5 SM430

Dados analíticos para SM-330: 3H RMN (300 MHz, D2O, TMS) δ co co co 1 co 76 (m, 1H) , 7,30-7, 18 (m, 1 OH) , 5, 95 -5, 93 i (d, J = 4,7 Hz, 1H) , 4 , 93-4 ,91 (m, 1H) , 4,38-4, 2 6 (m, 1H) , 4,24 (m, 1H) , 3, 90-3, 86 (m, 1H), 3, 69- -3, 65 (m, 1H) , 3, 50 -3,38 (m, 2H) , 2, 58 (s, 3H) , CN 1 OO CN CN 18 (m, 1H) , 2,04 (s, 3H) , 1, 93 (s, 2H) , 1, 81- 1,74 (m, 4H) , 1, 43-1 ,41 (d, J = = 7,0 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 175 ,3, 173 ,3, 172,9, 170, 2, 141,2, 129 ,2, 128, d, 127, 7, 62,3, 62,1 58,5 , 57,8 , 57 ,3, 52,6, 51, 8, 32,2 r 31,3, 27,5, 21 ,5, 20,7 15, 5; HRMS: m/ z calculado para [M+H]+ 520,2924; verificado 520,2924. EXEMPLO 6 •3 d f

133

Dados analíticos para SM-337: 3H RMN (300 MHz, CD3OD, TMS) δ 7,34-7,27 (m, 15H) , 6,18-6,15 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 4,60- 4,57 (m, 1H) , 4,28 (m, 1H) , 4,12-4,07 (m, 1H) , 3,99-3,82 (m, 4H) , 3, 50-3, 40 (m, 1H) , 2,67 (s, 3/2H) , 2,66 (s, 3/2H) , 2,34 (m, 1H), 2, 07-2, 00 (m, 3H) , 1,88-1,81 (m, 2H) , 1,56- 1,52 (d, J = 6,8 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, CD3OD) δ 174,6, 174, 0, 169, 6, 169, 4, 143, 1, 136, 4, 130,3, 129, 5, 128, 6, 128,2, 127, 8, 62,7, 58,3, 54,2, 41, 6, 33, 3, 31, 9, 28,2, 16,3. EXEMPLO 7 SM450

Dados analíticos para SM-350: 3H RMN (300 MHz, CD3OD, TMS) δ 8, 94-8, 92 (d, J= 7,9 Hz, 1H) , 7,34-7,26 (m, 12H) , 7,04- 6,98 (m, 2H) , 6,18-6,15 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 4, 60-4,57 (m, 1H) , 4,31 (L, 1H), 4,02-3,76 (m, 4H) , 3,50 (m, 1H) , 2,68 (s, 3H), 2,34 (m, 1H), 2,11-1,82 (m, 5H), 1,55-1,53 (d, J= 7,0 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, CD3OD) δ 173,2, 170,2, 169,7, 164, 8, 161,5, 143, 1, 132,5, 131, 9, 129, 6, 128, 6, 128,1, 116,2, 62,7, 58,4, 53,9, 40,5, 33,3, 32,3, 31,8, 28,3, 16,3; HRMS: m/z calculado para [M+Na]+ 636,2962; verificado 636,2974. EXEMPLO 8 134 s

Dados analíticos para SM-356: 3Η RMN (300 MHz, CD3OD, TMS) δ 8,93-8,91 (d, J= 8,0 Hz, 1H) , 7,38-7,26 (m, 11H) , 6,90-6,86 (m, 2H) , 6,18-6,16 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 5,10-5,00 (m, 1H) , 4,61-4,58 (m, 1H) , 4, 40-4,28 (m, 1H) , 4,15-3,91 (m, 4H) , 3,36 (m, 2H) , 2,69 (s, 2H) , 2,67 (s, 1H) , 2,42-2,28 (m, 1H) , 2,02-1, 95 (m, 5H) , 1,55-1,53 (d, J= 7,0 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, CD3OD) δ 173, 2, 172,4, 170,2, 169, 7, 169, 4, 143,2, 134,1, 129, 6, 128,4, 128, 1, 120, 1, 112, 0, 104, 1, 62,7, 58,4, 53, 9, 34,2, 33,3, 32,3, 31,7, 28,3, 16, 2; HRMS: m/z calculado para [M+Na]+ 654,2868; verificado 654,2866. EXEMPLO 9

Dados analíticos para SM-376: ΤΗ RMN (300 MHz, CD3OD, TMS) δ 8,50-8,43 (m, 1H), 7,46-7,44 (m, 1H), 7,32-7,31 (m, 4H), 7,26-7,24 (m, 1H) , 7,15-7,11 (m, 3H) , 5,09 (m, 2H) , 4,43 (m, 1H) , 4,20 (m, 1H) , 4,01-3,92 (m, 4H) , 3,58-3,42 (m, 1H), 2,83-2,81 (m, 2H) , 2,70 (s, 1H), 2,68 (s, 2H) , 2,38- 135 2,25 (m, 1H), 2,09-1,82 (m, 8H), 1,27-1,53 (d, J= 7,0 Hz, 3H) ; 13C RMN (75 MHz, CD3OD) δ 174,1, 173, 6, 169, 6, 169, 3, 138,5, 137, 9, 136, 5, 130,2, 129, 8, 128, 0, 127, 0, 62, 9, 58,3, 54,4, 41, 6, 32, 1, 31, 9, 31,4, 30,2, 28,4, 21,7, 16, 4; HRMS: m/z calculado para [M+Na]+ 582,3056; verificado 582,3080. EXEMPLO 10

Dado s analíticos para SM—377: ΧΗ RMN (300 MH z, CD3OD, TMS) δ 8, 50- 8,40 (m , 1H) , 7,47- 7,44 (m, 1H) , 7,36 -7, 31 (m, 2H) , 7, 15 -7, 01 (m, 5H) , 5, 09 ( m, 2H) , 4,43 (m, 1H) r 4,38- -4,28 (m, 1H) , 4 ,12 (m, 1H) , 4 , 02- -3, 93 (m, 4H) , 2, 83 -2, 81 (m, 2H) , 2, 70 (s, 3H) , 2,38-2 ,28 (m, 1H) , 2,12- -1, 82 (m, 8H) , 1,56 -1, 53 (d, J = 7,0 Hz, 3H); 1: ?C RMN (75 MHz, CD3OD) δ 173, 8, 173 ,5, 169, 7, 169, 3, 138, 5, 132,5, 13 1, 8, 12 !9, 9, 126, 9, 116 ,3, 62, 9 , 58,3, 57,8, 54,1, 40, 6 r 33 ,4, 32,2, 31,7, 30,2, 28,4, 21,7, 16,3; HRMS: m/z calculado para [M+H]+ 578,3143; verificado 578,3147. EXEMPLO 11 136

SM-4CH 136

Dados analíticos para SM-401: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,37 (m, 2H) , 7,30 (m, 5H) , 7,05 (m, 2H) , 4,46 (m, 2H) , 4,33 (m, 2H) , 3,92- 3, 81 (m, 6H) , 3,54 (m, 1H) , 3,32 (m, 1H) , 2,74 (s , 3H) , 2,34 (m, 1H) , 2,16- -1,78 (m, 5H) , 1,54 (d, J = 6,3 Hz, 3H) , 13c RMN (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 173,2, 168.8, 168,5, 164,0, 160,8, 135,3, 129,4, 129,2, 128,8, 126.9, 115,3, 115,0, 62,0, 61,2, 57,3, 57,1, 53,2, 53,0, 42.9, 42,3, 40,7, 32,5, 31,3, 27,5, 15,5. EXEMPLO 12 $M~4C>2

Dados analíticos para SM-402: 8, 60 (m, 1H) , 7,40 (m, 4H) , 2H) , 4,35-4,29 (m, 2H) , 4,08 3,38 (m, 1H) , 2,70 (s, 3H) , 5H) , 1,54 (d, J = 6, 9 Hz, 3H) , 173, 1 , 172,8, 168,8 , 168,5, 129,2 , 115,3, 115, 0 , 61, 9, 5 31,3, 30, 9, 27, 3, 15 ,3. 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,02 (m, 4H) , 4,52-4,43 (m 3, 80 (m, 6H) , 3,54 (m, 1H) 2,33 (m, 1H) , 2,13-1,82 (m 13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 164,1, 135,1, 131,5, 131,0, , 3, 52, 9, 42,3, 39, 6, 32,4, 137 EXEMPLO 13 137

Dados analíticos para SM-403: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,39 -7, 22 (m, 9H) , 7,08 -7,02 (m, 4H) , 6, 15 (d, J = 6,0, 1H) , 4, 97 (m, 1H) , 4,54 (m, 1H) , 4,30 (m, 1H) , 4,02-3,66 (m, 6H) r 3,59 -3, 54 (m, 1H) , 2, 66 (s, 3H) , 2,33 (m , 1H) , 2,11 -i, 80 (m, 5H) , 1 , 53 (d, J = 6, 6 Hz, 3H) , 13C RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 173 ,4, 172,4, 168 ,8, 168,4, 164, 2, 160,9, 138,1, 135,3, 129, 8, 129,7, 129, 6, 129,5, 129,4, 129, 0, 128,7, 128, 6, 126, 9, 115, 6, 115,3, 115, 0, 72, 6, 61, 9, 57,3, 56,2, 53,1, 47,0, 40,6, 32,3, 31,5, 31,1, 27,4, 15,5. EXEMPLO 14

S.M4CN

F

138

Dados analíticos para SM-404: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,37 -7,25 (m, 6H) , 7 r 11 \—1 05 OD 1 (m, 6H) , 6, 15 (d, J = 7 ,5, 1H) , 4,83 (m, 1H) , 4 r 54 (m, 1H) , 4,30 (m, 1H), 4, 02-3 , 60 (m, 6H) , 3 ,51 (m, 1H) r 2 ,94 (m, 2H) , 2 ,72 (s, 3H) , 2 , 23 (m, 1H) , 2,11- 1,80 (m, 5H) r 1,53 (d, J = 6, 6 Hz , 3H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 174,0, 172 ,4, 168, 7, 168,4, 163 ,7, 160, 8, 137,9, 137,4, 130,7, 130, 6, 129, 9, 129,8, 129 , 6, 129, 5, 115 , 6, 115,3, 115 ,1, 115,0, 114 ,0, 71, 5, 67,2 , 57 ,4, 56, 0 , 55,9 , 52 ,8, 51, 7 f 35, 0, 32,3 , 31 ,5, 31, 1, 30,7 , 27 ,4, 15,4 . EXEMPLO 15 SM-405

Dados analíticos para SM-405: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,40 -7,25 (m, 10H) , 6, 15 (s, 1H) , 4,61-4 , 55 (m, 1H) , 4, 28- 4,22 (m, 1H) , 4,00- 3, 95 (m, 2H) , 3,86-3, 81 (m, 1H) , 3, 68- 3, 66 (m, 1H) , 3, 45- -3, 40 (m, 1H) , 2,94-2 , 92 (m , 1H) , 2 ,72 (s, 3H) , 2, 68- -2,57 (m, 2H) , 2,34 -2,23 i [m, 2H) , 2,16-1 ,79 (m, 7H) , 1,66- -1,53 (m , 4H) , 1,52 (d, J = 7 ,2 1 Hz, 3H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 176, 1, 172 , 2 , 168,8, 168 ,3, 142, 2, 142,1, 132,2, 132,0, 129, 1, 128 , 7, 128,4, 127 , 9, 127, 8, 127,7, 127,5 r 127,2, 61,8, 57,5, 57, 3, 53,1, 38 , 9, 38,7 , 37, 2, 32 ,5, 32,2 , 31,4, 31,0 , 27,4, 24 , 9, 15,3 . EXEMPLO 16 139 SM-4136

Dados analíticos para SM-406: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,38- -7,25 (m, 10H) , r 6,14 (d, J = 7,5 Hz , 1H) , 4,62-4, 56 (m 1H) , 4,30 -4,25 (m, 1H) , 4, ( 35-3, 96 (m, 2H) , 3,87-3, 49 (m 4H) , 2,72 (s, 3H) , 2,46 (m, 2H) , 2, 37- -2,32 (m, 1H) , 2, 15 2,00 (m, 5H) , 1, 84 -1,80 (m, 1H) , 1,56 (d, J = 5,4 Hz , 3H) 1,00 (m, 6H) , 13C RMN (Me OH -d4, 300 M Hz) δ 175,7, 172 ,3 168,8, 168,3, 142,2, 142,1, 132,2, 132,0, 129,1, 129,0, 128,7, 128,4, 127,8, 127,7, 127,5, 127,2, 61,8, 57,4, 57,3, 53,2, 41,7, 38,6, 37,2, 32,2, 31,4, 31,0, 27,4, 26,3, 22,0, 15,3 . EXEMPLO 17 >7

Dados analíticos para SM-407: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,31 -7, 27 (m, 12H) , 6, 94 (m, 2H) , 6, 15 (m, 1H) , 4,82-4,70 (m, 1H) r 4,53 (m, 1H) , 4,09- -3,58 (m, 5H) , 3,36 (m, 1H), 3, 05 -2, 72 (m, 4H) , 2,71 (s, 3H) , 2,30 (m, 1H) , 2,05-1,81 (m, 5H) r 1,56 (m, 3H) , 13C RMN í (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 173,9, 140 172,3, 169,4, 168,5, 163,5, 160,2, 142,3, 142,1, 137,5 132,9, 132,2, 130,8, 130,6, 129,0, 128,6, 127,7, 127,5 127,3, 115,2, 114,9, \—1 OD 57, 6, 57, 2, 53, 1, 52, 9, 46, 8 38,2, 35,3, 34,9, 32,4, 31,6,30,8,27,5, 15,8. EXEMPLO 18

$M~40S

Dados analíticos para SM-408: 3Η RMN (MeOH-cL, 300 Μ Hz) δ 7,35 -7, 16 (m, 15H) , 6, 18 (m, 1H) , 4,82-4,70 (m, 1H) , 4 , 53 (m, 1H) , 4 ,09- -3, 58 (m, 5H) , 3,30 (m, 1H) , 3, 10 (m , 1H) , 2, 98 (t , J = 6 , 0 Hz, 2H) , 2, 75 (m, f 1H), 2,72 (s, 3H) , 2 , 30 (m, 1H) , 2, , 05- 1,81 (m, 5H) r 1,56 (m, 3H) , 13C RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 174,3, 172, 4, 169, 0, 168,5, 142, 3, 141 ,8, 132, 9, 132 , 1, 129, 1 , 128, 9, 128, 7, 128,5, 127, 7, 127 , 6, 127, 3, 126 ,2, 61,8, 57,4, 57,2, 52,8, 46,6 , 34 , 9, 32 ,3, 31,7, 30,9, 27,5, 15,4. EXEMPLO 19

141

Dados analíticos para SM-409: ΤΗ RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,37 -7,26 (m , 1 0H) , 6 ,16 (s, 1H) , 4, 60 (m, 1H) , 4,26 (m, 1H) , 4,06-3, 92 (m, 2H) , 3, 80 (m, 1H) , 3, 68- 3, 35 (m, 2H) , 2,72 (s, 3H), - 2, 56 (m, 2H) , 2,; 30 (m, 1H) , 2, 05- -1,81 (m, 5H) , 1, 64 (q, J = = 7, 5 Hz, 2H) , 1, 56 (d, J = = 6, 6 Hz, 3H) , 0, 96 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 13C RMN (MeOH -d4, 300 M Hz) δ 175,6, 172,3, 168,7, 168,5, 142,2, 142,1, 132,9, 132,8, 132,2, 132,0, 129,1, 129,0, 128,7, 128,4, 127,7, 127,3, 61,8, 57,4, 57,3, 53, 0, 46, 9, 35,3, 34,9, 32,4, 31,4, 30, 9, 27,3, 18,9, 15,4, 13,3. EXEMPLO 20

Reagentes e condições: i. ácido fenilacético, EDC, HOBt, N, N-diisopropriletilamina, CH2CI2; ii. LiOH 3 N, 1,4-diocano, depois HC1 1 N; iii. aminodifenilmetano, EDC, HOBt, N, N-diisopropilet ilamina, CH2CI2; iv. HC1 4 N em 1,4-dioxano, v. N-Boc-N-metilalanina, EDC, HOBt, N,N-diisopropiletilamina, CH2CI2; vi. HC1 4 N em 1,4-dioxano, 62% ao longo de seis passos. A condensação de 7 com ácido fenilacético seguido de hidrólise do éster metílico deu um ácido que foi condensado com aminodifenilamina dando a amida. A remoção do grupo protector Boc nesta amida proporcionou um sal de amónio. A condensação deste sal com N-Boc-N-metil-alanina seguido de a remoção do grupo protector Boc forneceu SH-207. 142

Dados analíticos para SM-207: 3H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,22- 6, 80 (m, 15H) , 5,95 (s, 1H) , 4,75 (m, 1H), 4, 38 (m, 1H) , 4,18-3,45 (m, 5H) , 3,42- -2,85 (m, 3H) , 2,67 (s, 3H) , 2 ,12- 0, 80 (m, 11H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 174, 27, 172 ,09, 170,94, 169,24, 142,01, 141,83, 141,68, 134,86, 129,32, 128,16, 128,99, 127,76, 127,34, 71,92, 61,13, 58,57, 57,31, 49,77, 49,21, 49,05, 41,46, 31,44, 18,06, 15,73, 15,62. EXEMPLO 21 de Referência SM-412

Dados analíticos para SM-412: 3H RMN (MeOH-cL, 300 Μ Hz) δ 8,81 (m, 1H) , 7,41-7,26 (m, 10H), 6,06 (m, 1H), 4,56-4,43 (m, 3H) , 4, 11 (m, 2H) , 3,99-3,76 (m, 4H), 3,58-3,47 (m, 4H) , 3,32 (m, 1H), 2,72 (m, 3H) , 2,34-1,80 (m, 6H) , 1,60 (m, 3H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 172,1, 169,2, 168,7, 164,1, 163,6, 160,2, 142,3, 142,0, 128,7, 128,2, 127,9, 127,7, 127,5, 127,3, 116,3, 62,2, 58,0, 57,8, 53,5, 50,3, 46,4, 37,3, 32,0, 30,8, 27,9, 15,2. 143 EXEMPLO 22 de Referência SM-413

Dados analíticos para SM-413: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 9, 00 (d, , j = 8,1Hz, 1H) , 7, 41- -7, 26 (m, 10H) , 6, 17 (m , 1H) , 4, 62 (m , 2H) , 4,32 (m, 1H) f 4, 00 (m, 2H) , 3,75 (m, r 3H) , 3,47 (m, r 1H) , 3,20 (m, 1 H) r 2, 92 (m, 1H) , 2,72 (2s , 3H) , 2,30 (m, 1H) , 2,07- 1,80 (m, 5H) , 1, 54 (d, J = 7,2 Hz , 3H) , 13C RMN (MeOH- -d4, 300 M Hz) δ 174, 8, 172,4, 171, 7, 168,8, 168,5 r 142,2, 142, 0, 128,7 r 128,4 , : 127,8, 127, ' 7, 127,5, 127,3 r 68,2, 61,8, 57, 3, 51, 7, 4 6,9 , 37,7 , 32, r 2 , 30,8, 27,4, 15,2. EXEMPLO 23 de Referência SJVMÍ-4

Dados analíticos para SM-414: 3Η RMN (MeOH-cL, 300 Μ Hz) δ 8,80 (m, 1H) , 7,41-7,26 (m, 12H) , 6,09 (m, 1H) , 5,12 (m, 1H) , 4,56 (m, 2H) , 4,32 (m, 1H) , 4,18 (m, 1H) , 4,03 (m, 2H) , 144 3,75 (m, 2H) , 3,46 (m, 1H) , 3,16 (m, 1H) , 2,72 (s, 3H) , 2,30-1, 80 (m, 6H) , 1,54 (m, 3H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 M Hz) δ 172,2, 171,4, 170,4, 169,1, 168,7, 142,3, 142,2, 136,0, 128,7, 128,4, 128,1, 127,9, 127,6, 127,5, 127,1, 122,4, 119, 6, 62,1, 57, 6, 57,3, 46,4, 45,4, 33,4, 32,3, 30,8, 27,7, 15,2. EXEMPLO 24 de Referência SM-4J.5

Dados analíticos para SM-415: 3H RMN (MeOH-cd, 300 Μ Hz) δ 8, 97 d d II co ,4 Hz, 1H) , 7, 38-7,25 (m, 10H) , 6,16 (m, 1H) 4, 80 (m, 1H) , 4, 58 (m, 1H) , 4,25 (m, 1H) , 3, 96 (m , 3H) 3, 47 (m, 1H) , 3, 20 (m, 1H) , 2,72 (s, 3H) , 2, 62 (m , 1H) 2, 49 (m, 1H) , 2, 34 (m, 1H) , 2,15- -1,87 (m, 5H) , 1, 5 6 (m 3H) , 1,08 (s, 9H) , 13C RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 174,2 172,5 , 169,0, 168,4 , 142,1 , 142,C ), 128,7, 128,5 r 127,8 127,7 , 127,5, 127,3, . 61 ,7, 57,4, 57,3 , 53, 1 51, 9, 46,7 44 , 6, 32,5, 31 ,5, 31 ,2, 30,8 , 29,4, 27, 2, 15, 3. EXEMPLO 25 de Referência 145 SM<4Í$

Dados analíticos para SM-416: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 8, 95 (d, . J = 8,1 Hz, 1H), 7,38 -7,25 (m, 10H), 6,16 (m, 1H) 4,80 (m , 1H) , 4,56 (m, 1H) , 4,25 (m, 2H) , 3, 92 (m , 3H) 3,47 (m , 1H) , 2,72 (s, 3H) , 2, 60 (m, 3H) , 2,34 (m , 1H) 2,12 -1,81 (m, , 8H) , 1,56 (m, 4H) , 1,47 (m, 1H) , 1, 30 (m 1H) , 13C RMN (MeOH-d4 , 300 M Hz) δ 174,6, 172,4 r 169,5 168, 4, 142,2 , 142,0 , 128,7, 128, 4, 127,8, 127,7 r 127,5 127, 3, 73,0, 61,7, 57,3, 57, .2, 53,1, 51,9 , 46, 6, 42,0 39,4, 34,4, 32,5, 31,2, 30,8, 27,2, 15,2. EXEMPLO 26 de Referência

SM41S

Dados analíticos para SM-418: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,37-7,25 (m, 10H) , 6,16 (m, 1H) , 4,89 (m, 1H) , 4,58 (m, 1H) , 4,40 (m, 1H) , 4,26 (m, 1H) , 4,03-3, 83 (m, 3H) , 3,66- 3,48 (m, 3H), H), 2,70 (m, 3H), 2,33 (m, 1H), 2,08-1,75 (m, 146 1 OH) , 1,54 (m, 3H) , 13C RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 177, 6, 172,4, 169, .2, 168,6, . 142,2, 142,0 r 128,7, 128,5 r 128, 4, 127,8, . 127, 7, 127,6, 127,5, 127,3, 73 ,4, 61,7, 57, 3, 57, 1, 53, 0, 51, 9, 4 6 ,9, 39, 4, 38,9, 34,7, 32 ,7, 31,3, 30, 8, 28, 0, 27,3, 15,2 . EXEMPLO 27 de Referência SM-4I9

Dados analíticos para SM-419: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,37- 7,25 (m, 1 OH) , 6, 16 (m, 1H) , 4, 89 (m, 1H) , 4, 58 (m 2H) , 4,26 (m, 1H) , 4,( 33-3,71 (m, 5H) , 3,55- -3,37 (m , 2H) 2,70 (m, 3H) , 2, 67 (m , 2H) , 2,33 (m , 1H) , 2,08- 1, 75 (m 6H) , 1,54 (m, 3H) , 13C RMN (MeOH- -d4, 300 M Hz) δ 173,5 172,2 , 169 ,2, 16 8,6 f 142,2, 141, 9, 128,8, 128,7 f 128,5 128,4 , 128 ,2, 127,8 r 127,7, 127, 6, 127,5, 127,3 r 127,2 73,1, 67,5, 61, , 8, 57 ,3, 4 6,6, 37,1, , 35 ,9, 32, 5, 32, 1, 31,4 00 o 00 27,4, 15, r 2 . EXEMPLO 28 de Referência 147 SM-420

Dados analíticos para SM-420: >Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,38 -7, 25 (m, 10H) , 6,16 (s, 1H) , 4 r 87 (m, 1H) , 4 , 58 (m, 1H) , 4, 24 (m, 1H) , 3, 98 (m, 2H) , 3, 75 (m, 1H) , 3 ,42 (m, 1H) , 3, 24 (m, 1H) , 2, 68 (s, 3H) , 2, 49 (m, 2H), 2, 37-2 , 32 (m, 1H) , : 2, 15- -2,00 (m, 5H), 1, 84 -i, 80 (m, 1H) , 1 , 56 (m, 6H) , 1, 00 (2d, J = 6 , 0Hz, 6H) , 13c RMN (MeOH- d4, 30 0 Μ Hz) δ 175, 4, 171 d 4, 168, 9 , 168 , 6, 142, 2, 142 ,0, 128,7, 128 ,5, 127, 8, 127 ,7, 127,5, 127, 3, 61,8, 57 ,3, 53, 0, 52,0 , 46 , 6, 34,4 , 32,5 , 31. ,5, 30 ,9, 28 , 0, 27,3, 22, 0,21 9 r J r 15,3. EXEMPLO 29 de Referência

Dados analíticos para SM-421: >Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 8, 95 (m ., 1H) , 7,38-7, 14 (m, 15H) , . 6, 17 (m, 1H) , 4, 85 (m, 1H) , 4, 5 6 (m, 1H), 4, 23 (m, 1H) , 4,04-3 , 85 (m, 2H) , 3, 73 (m, 1H) , 3,46 (m, 1H) , 3,20 (m, 1H) , 2, 70 (2s, 3H) , 2, 62 (t, J = 7,8 Hz , 2H) , ; >,45 (m, 2H) , , 2,30 (m, 1H) , 2,05-1, 81 (m, 7H) , 1,54 (d, J = 7,2 Hz , 3H) , 13C RMN (MeOH- -d4, 300 M Hz) δ 174,8, 172,3, 169,0, 168, 6, 142, r 2 , 142, 1, 141, 9, 128, 7, 128,5, 128,4, 127,8, 127 ,5, 127,3, 126 ,0, 61, 8, 57,3 , 52,8, 52, . 0, 4 6,6 , 35,2, 32, 9 , 32,5, 31 ,8, 31,4, 30, 8, 27,2, 15,3, EXEMPLO 30 de Referência 148 «íy

Dados analíticos para SM-422: 3H RMN (MeOH- -d4, 30 0 Μ Hz) δ 7,38 -7, 25 (m, 1 OH) , 6, 18 (s, 1H) , 4, , 87 (m , 1H) , 4 , 57 (m, 1H) , 4, 22 (m, 1H) , 3, 98 (m, 2H) , 3, 76 (m , 1H) , 3 ,42 (m, 1H) , 3, 24 (m, 1H) , 2,70 (2s, 3H) , 2, 49 (m, 2H), 2, 37-2 , 32 (m, 1H) r 2,15 -2,00 (m , 4H) , 1,78 (m, 1H) , 1,68- 1 , 58 (m, 3H) , 1, 55 (2d, J = 7,2 Hz, 3H) ' , li , 27- -1, 19 (m,2H), 0 , 95 (m, 6H) , 13C RMN (MeOH- -d4, 300 M Hz) δ 175,3 , 172,4 f 169 ,0, 168, 6, 142,2, 142, 1, 128,7, 128, 5, 127,8 , 127,7 r 127 ,5, 127, 3, 61 ,8, 57,4, 57,3, 52, 9, 51, 9, 46, r 6, 38, 7, , 32 , 9, 32,5, 31,3, 30, 8, 28,2, 27,3, 23,5, 22,0, 21, 9, 15,3. EXEMPLO 31 SM-423

Dados analíticos para SM-423: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 4, 84 (m, 1H) , 4,42 (m, 1H) , 4,30 (m, 1H) , 3, 95 (m, 3, 42 (m, 1H) , 3,24 (m, 1H), 2,71 (s, 3H), 2, 50 (d, J Hz r 2H) , 2,34 (m, 1H) , 2,15-2,00 (m, 10H), 1, 65 (m, 149

1,55 (2d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,16 (m, 6H) , 1,00 (m, 6H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 174,7, 172,2, 169,1, 168,6, 61,7, 57,3, 57,2, 56, 6, 53, 2, 50,3, 46,7, 41, 8, 32,7, 32, 6, 31,3, 30,8, 27,4, 27,2, 26,0, 25,7, 25,1, 22,0, 21,8, 15,2. EXEMPLO 32 SM-425

Dados analíticos para SM-425: 3H RMN (MeOH-cL, 300 Μ Hz) δ 7,25 -7,18 (m, 4H) , 5,36 (t, J = 7, 5 Hz , 1H) , 4,89 (m ., 1H), 4,47 (m, 1H) , 4, 30 (m , 1H) , 3, 90 (m, 3H) , 3,40 (m , 1H) , 3, 00 (m, 2H) , 2, 71 (s , 3H) , 2,55 -2,41 (m, 3H) , 2,. 38 (m, 2H) , 2,15 )-2,00 (m, 6H) , 1,81 (m, 1H) , 1,54 (m, : 3H) , 1,00 (m, 6H) , 13C RMN (MeOH- d4, 30 0 Μ Hz) δ 174,7, 173, 1, 169,1, 168, 7, 143,6, 143,4, 128,0, 126, 7, 124,7, 124, 0, 61,8, 57,3 , 56, 9, 54 , 9, 53,1, 51,8, 46,8, 42, 1, 41, 5, 33 ,3, 32,7, 31,2 , 30, 8, 30 ,0, 27, 6, 26,1, 25, 9, 22, 2, 21, 9, 15 ,2. EXEMPLO 33 ΒΜΆ26

150

Dados analíticos para SM-426: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7, 64 -7,55 (m, 4H) , 4, 65 (d, J = 16, 2 Hz, 1H) , 4,55 (m, 1H) , 4,39 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 4, 22 (m, 1H) , 3, 98 (m, 2H) , 3,76 (m, 1H) , 3,42 (m, 1H) , 2,70 (s, 3H), 2 ,47 (m, 2H) , 2 ,37- 2,32 (m, 1H) , 2,15-2,00 (m, 6H) , 1,83 (m, 1H) , 1,54 (m, 3H) , 0, 95 (m, 6H) , 13c RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 174,7, 173,5, 169,5, 168,7, 143,6, 143,4, 127,8, 127,5, 125,4, 125,3, 123, 0, 61, 8, 57,4, 57,2, 56, 6, 52, 9, 51,8, 46,7, 42,4, 42,1, 41,5, 32,5, 31,3, 30,8, 27,4, 26,2, 23,5, 22,0, 21,9, 15,3. EXEMPLO 34

Dados analíticos para SM-427: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,45 (m, 1H) , 7,20 -7, 10 (m, 3H) , 5, 07 (m, 1H) , 4, 88 (m, 1H) , 4,43 (m, 1H) , 4,22 (m, 1H) , 3, 98 (m, 3H) , 3, 48 (m, 1H) , 2,89 (m, 2H) , 2,75 (s, 3H), 2, 55 (d , J = 6,6 Hz, 2H) , 2,44 (m, 1H) , 2,30- -1,78 (m, 11H) , 1, 55 (m, 3H) , 1, 00 (m, 6H),13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 174,7, 172,7, 169,5, 168,5, 137, 6, 136, 9, 128,8, 127,1, 126, 0, 61, 9, 57,3, 56,7, 53,2, 51, 9, 46, 7, 42, 1, 41,5, 32, 6, 31,2, 30,8, 29,3, 27,4, 26, 1, 22,2, 21, 9, 20,8, 15,2. EXEMPLO 35 151 SM-429

(m, 6H) , 4,87 (m, 1H) , 1H), 3,98 (m, 2H), 3,82 (m, 1H), 2,46 (d, J= 7,2 Hz, 2H), 2,33 1,53 (2d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,98 (m, 300 Μ Hz) δ 174,8, 173,2, 169,6, 139, 6, 129,2, 128, 9, 127,5, 127,1, 57,2, 56,5, 53,0, 51,8, 46,7, 43,2, 32, 6, 31,2, 30,8, 27,3, 26, 0, 22,2, 21, 9,

Dados analíticos para SM-429: 7,64 (m, 3H) , 7,53-7,32 (m, 3H), 4,23 (m, 1H), 2,71 (s, 3H), 2,15-1,78 (m, 7H), 13C RMN (MeOH-d4, 141,7, 141,2, 125,9, 61,8, 41,5, 35,0, EXEMPLO 36 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 4,55-4,40 3,38 (m, (m, 1H) , 6H) , 168,7, 126,1, 42,1, 15,3 . SM-430

Dados analíticos para SM-430: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 8, 05 (d, J = 7,8 Hz, r 1H) , 7, , 88 (m, 1H) , 7,81 (d , J = 8, 1Hz, 1H) , 7,57-7, 43 (m, 4H) , 4, 87-4,80 (m, 3H) , 4, 49 (m, 1H) , 4, 23 (m, 1H) , 3, 98 (m, 2H) , 3, 85 (m, 1H) , 3, 43 (m, 1H) , 2, 71 (s, 3H) , 2,50 (d, J = 6,9Hz, 2H) , 2,33 (m, r 1H), 2 ,15- 1, 78 (m, 7H) , 1,53 (2d, J = = 7,2 Hz, 3H) , o, 99 (m, 6H) , , 13c 152 RMN (MeOH-cL, 300 M Hz) δ 174,7, 173,0, 169,3, 168,7, 134,3, 133, 9, 131,7, 128,8, 128,2, 126,4, 125,8, 125,5, 123,4, 61,8, 57,3, 56,7, 53, 1, 51,8, 46,7 , 42,1, 41,4, 41,3, 35,0, 32 ,6, 31, 1, 30,8, 27,3, 26,2, 22, 2, 21,9, 15,2 . EXEMPLO 37 SM«431

Dados analíticos para SM-431: 3Η RMN (MeOH-cL, 300 Μ Hz) δ 7, 45 (m, 1H) , - 7, 25-7 , 17 (m, 3H) , 5, 40 (t, J = 7,8 Hz , 1H) , 4, 88 (m, 1H) , 4 ,46 (m, 1H) r 4 , 25 (m, 1H) , 3 , 98 (m , 3H) , 3, 40 (m, 1H) , 3 , 00 (m, 2H) r 2 ,71 (s, 3H) , 2 , 55 (m , 2H) , 2, 44 (m, 1H) , 2, 34 (m, 2H) , 2 r 15-2 , 00 (m, 6H) , i ,81 (m, 1 H) , i , 53 (m, 3H) , 1, 00 (m, 6H) r 13C RMN (MeOH- d4, 300 M Hz) δ 174 , 7, 173 , 1, 169, r 5 , 168, 6, 143, 6, 143,3, 127, 8, 126,5, 124,5 , 61,9, 57 ,3, 56, , 6, 54, 8 :, 53,2 , 51,8, 4 6, ' 7, 42,1, 41 ,5, 35, 1, 33,4 , 32 , 6, 31,2, OO O 00 30, ,0, 27,4 , 26 , 1, 22,2, 21,9, 15,2. EXEMPLO 38 153 SM-432

Dados analíticos para SM-432: 3H RMN (MeOH-d4 , 300 Μ Hz) δ 7,38-7,25 (m, 10H), 4,80 (m, 1H), 4,32 (m, 2H) , 4,18 (m, 1H) , 3,98 (m, 2H) , 3,87 (m, 1H) , 3,63 (m, 1H) , 3,49 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,50 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,32 (m, 1H) , 2,15-1,74 (m, 7H) , 1,56 (m, 3H) , 1,00 (m, 6H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 174,7, 173,0, 169,1, 16 8,6 , 142,8, 128,6, 128 ,4, 128,1, 126,7, 61,8, 57,2, 56,7 , 53, 1, 50,9, 46,7, 44, 0, 42, 0, 41,5, 32, 6, 30,8, 27,1, 26, 1, 22,2, 21, 9, 15,2 . EXEMPLO 39 SM-433

Dados analíticos para SM-433: 3H RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7,54-7,22 (m, 9H), 4,86 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,4-4,19 (m, 3H) , 4, 09-3, 84 (m, 3H) , 3,40 (m, 1H) , 2,71 (s, 3H) , 2,49 (d, J= 6,6 Hz, 2H) , 2,33-1,74 (m, 8H) , 1,53 (2d, J= 6,9

Hz, 3H) , 0,98 (m, 6H) , 13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 174,7, 154 173,1, 169,3, 168,7, 141,9, 141,2, 135,6, 130,0, 129,2, 128,3, 128,1, 127,8, 127,3, 61,8, 57,3, 56,9, 53,2, 51,8, 46,7, 42,0, 41,5, 41,3, 35, 0, 32,6, 31,2, 30,8, 27,3, 26, 0, 22,2, 21,9, 15,2. EXEMPLO 40 SM-434

Dados analíticos para SM-434: 3Η RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 7, 60 (m, 4H) , 7,38 (m, 4H) , 7,30 (m, r 1H) , 4,86 (m , 1H) , 4,57 -4,36 (m, 3H) , 4,22 (m, 1H) , 4,04-3,89 (m, 3H) , 3 ,42 (m, 1H) , 2,71 (s, 3H), 2,49 (d, J = 6 ,6 Hz, 2H), 2,35-1 ,79 (m, 8H) , 1,53 (2d, J = 6, 9 : Hz, 3H), 0,98 (m, 6H), 13C RMN (MeOH-d4, 300 Μ Hz) δ 174,7 , 173, 2, 169,2, 168,7, 141 ,1, 140, 3, 138,0, 128,9, 128,0, 127, 3, 127,1, 126,9, 61 ,8, 57,3 , 56, 9, 53 ,1, 51,8, 46,7, 42,8, 42 ,1, 41, 5, 35,2, 32 , 6, 31,2 , 30, 8, 27 ,4, 26,0, 22,2, 21, 9, 15, 2 . EXEMPLO 41 de Referência

155

Dados analíticos para SM-227: 3H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,34- 7, 12 (m , : 10H) , 5,92 (L, 1H), 5,23 (dd, J = 12,06, 5 ,34 Hz, 1H) , 4, 65 (m , 1H) r 4,50 (m, 1H) , 3, 88 (m , 1H) , 3, , 52 (m, 1H) , 3, 45 (m , 1H) r 3,31 (m, 1H) , 3, 13 (m , 1H) , 2, , 58 (s, 3H) , 2,: 36 (m, 1H) , 2 ,20-1, 72 (m, 5H) ' , 1, 41 (d, J = 7 , 05 Hz, 3H) ; 13c RMN (75 MHz, D20) δ 173,93, 170, 10, 168,28, 140, 81, 140, 63, 129, 37, 128,33, 128,24, 127, 53, 61,31, 59, 11, 58,52, 57 , 15, , 48, 68 , 47, 50, 46, 10 , 31 , 82 , 31,26 r 30, . 94, 27,13, 15,46. EXEMPLO 42 SM-211

Dados analíticos para SM-211: 3H RMN (300 MHz, D2O) δ 7,23- 7, 02 (m, 10H) , 5,85 (s r 1H) , 4,70 (m, 1H) , 4, 32 (m, 1H) , 4, 01 (m, 1H) , 3, 85 (m, 1H) , 3, 65- -3,20 (m, 4H) , 2 , 90- 2,70 (m, 2H) , 2,27-2 , 0 3 (m, 3H) , 2, . 01-1, 43 (m, 8H) , 1,36 (d, J = 6, 90 Hz, 3H) , 0 ,78 (t, J = 7, 3 Hz, 3H) , 0, 76-0, 70 (m, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 176 ,89, 173,57 r 170, 10, 170 ,06, 142, 14, 142,08, , 129,86 129, 77, 128,72 r 128, 62, 128 ,35, 128, 21, 62,77, 58,54, 56 , 95, 49,58, 49, 29 , 48 ,82, 48 ,72, 48,43, 48,14, 43,00, : 31, 92, 26,74, 22, 83 , 22 , 64, 20 ,33, 16,55, 11,20. EXEMPLO 43 156

Dados analíticos para SM-212: 3Η RMN (300 MHz, D2O) δ 7,37- 7,16 (m, 10H), 6 ,12 (m, 1H) , 4,82 (m , 1H) , 4, 56 (m, 1H) , 4,20 (m, 1H) , 4, 08 (m, 1H) , 3, 96 (m, , 1H) , 3, 87 1 (m, 1H) , 3, 42 -3,25 (m, 2H) , 2 , 52-1 ,70 (m, 14H), 1,52 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,98 (t, J = 7,5 Hz, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 176, 45, 173,01 r 169 ,39, 168 ,33, 141 ,38, 141, 23, 129 ,27, 129, 16, 128,10 r 127,73, 127,55, 127,52, 62 ,77, 62 , 11, 57,92, 57,01, 52 ,49 , 51 , 96, 47,58, 46,71 , 41 .,39, 31 ,82, 27,26, 26,29, 23, 69, 22,14, 8,50. EXEMPLO 44 m

Dados analíticos para SM-213: 3Η RMN (300 MHz, D2O) δ 7,38- (m, 10H) , 6,05 (s, 1H) co 00 (m, 1H) , 4,62 (m, 1H) , (m, 1H) , 4,36-4,10 (m, 2H) , 3 , 95- -3, 40 (m, 4H) , 3 ,28- (m, 1H) , 2,50-1,75 (m, 9H), 1, 59 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1, 85 (m, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 177,09, 173 , 01, 169,46, 167,43, 141,52, 141,39, 129,24, 129,16, 128,11, 127,96, 127,78, 127,64, 61,80, 58,06, 57,17, 56,51, 51,72, 157 49,30, 48,73, 48,25, 47,87, 41,42, 27,32, 26,29, 22,25, 22,15, 21,88, 15,92. EXEMPLO 45 de Referência SM-269

F

Dados analíticos para SM-209: 1H RMN (300 MHz, D2O δ 7,22- 7, 05 (m , 4H) , 6, 95- 6,77 (m, 4H) , 5, 90 (s, 1H) r 4, 90 (m, 1H) , 4, 45 (m , 1H) , 4, 13 (m, 1H) , 3, 97 (m, 1H) r 3, 85- 3, 60 (m, 1H) , 3,50-3, 10 (m, 3H) , 2,80 (m, 1H) , 2, 65 (s, 3H) , 2,30 -1,< 50 (m, 6H) , 1 ,46 (d, J = 7, 2 Hz, 3H) , 1, 12- -0, 85 (m, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 180,27, . 172, 52, 169, 36 , 160 ,48, 137, 37, 137, 19, 129,55, 129 ,45, 115,81, 115, 53 , 61 , 98, 57,32, 56,43 , 51 , 92 , 49 , 98, 46,81, 35 , 07, 32, r 7 C 31 ,30, 30,82, 27,44, 19,18, 18,76, 15,53.

EXEMPLO 46

158

Dados analíticos para SM-210: 3Η RMN (300 MHz, D2O) δ 7,22-7,03 (m, 4H) , 6, 95-6, 80 (m, 4H) , 5,90 (s, 1H) , 4,82 (m, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 4,12 (m, 1H) , 3,89 (m, 1H) , 3,82-3,15 (m, 4H) , 2,60 (s, 3H) , O OO CN -1, 50 (m, 9H), 1, 42 (d, J = 7, Hz, 3H) , 0,82-0, 65 (m, 6H) ; 13C RMN (75 MHz, D20) δ 176, 09 172 ,70, 169,50, 160,53, 137, 27, 137 , 14, 129,49, 129, 35 115 , 92, 115,84, 115,80, 115, 62 , 62,10, 61,80, 58,07, 56, 54 52, 26, 46,59, 42,28, 41,38 r 32,40, 31,35, 27,43, 25, 98 22, 16, 15,59. EXEMPLO 47 SM-230

Dados analíticos para SM-230: 3Η RMN (300 MHz, D2O) δ 7,32-7,16 (m, 3H) , 7,12-7,05 (m, 2H) , 5,02 (m, 1H) , 4,32-4,12 (m, 3H) , 4,02-3,20 (m, 5H) , 3,10 (m, 1H) , 2,52 (s, 3H) , 2,28-1,52 (m, 12H), 1,42-1,39 (m, 3H) , 0, 82-0, 60 (m, 6H) . EXEMPLO 48 159 EXEMPLO 49

EXEMPLO 50 de Referência SM-436

EXEMPLO 51 de Referência 160 SM-437

Dados analíticos para SM-437: ΧΗ RMN (MeOH-dí, 300 Μ Hz) δ

7,45 (m, 1H) , 7,30 (m, 4H) , 7,14 (m, 1H) , 7,02- 1 03 CO (m, 2H) , 5, 43 (t, J = 8, , 1 Hz , 1H) , 4,79 (m, 1H) , 4,39 (m, 1H) , O O -3, 77 (m, 4H) , 3,56 (m, 1H) , 3 ;, 40 (m, 1H) , 3, 00 (m, 6H) , 2, 70 (s, 3H) , 2,49 (m, 1H) , 2 ,28 (m, 1H) , 2,00- 1,75 (m, 6H) r 1,54 (d, J = 6, 6 Hz, - 3H) , i3C ; RMN (MeOH- d4, 300 M

Hz) δ 174,1, 173,0, 169,1, 168,5, 143,6, 143,2, 137,4, 130,6, 127,7, 126,5, 124,5, 124,4, 62,1, 57,3, 54,8, 52,6, 51, 6, 46, 6, 35, 1, 33,4, 32,4, 31,4, 30, 8, 30, 0, 27,5, 15,2. EXEMPLO 52

Ligação de Inibidores a XIAP

Para testar a capacidade de ligação dos miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos a proteínas IAP, um ensaio de ligação in vitro sensível e quantitativo utilizando o método baseado em polarização de fluorescência (FP) foi desenvolvido e utilizado para determinar a afinidade de ligação de miméticos de Smac à proteína XIAP (Nikolovska-Coleska et al., Anal. Biochem. 332: 261-73

(2004)). Para este ensaio, 5-carboxifluoresceína (5-Fam) foi ligada à cadeia lateral da lisina do péptido Smac mutado, AbuRPF-K-(5-Fam)-NH2 (designado SM5F). O valor de Kd da ligação do péptido SM5F à proteína BIR3 de XIAP foi determinado ser de 17,92 nM, mostrando que este péptido se liga à bolsa superficial da proteína XIAP com elevada afinidade. A proteína BIR3 de XIAP recombinante da XIAP 161 humana (resíduos 241-356) fundido com a etiqueta His era estável e solúvel, e foi utilizada para o ensaio de ligação baseado em FP.

As experiências de FP de ligação dependente da dose foram realizadas com diluições em série dos compostos testados em DMSO. Uma amostra de 5 pL das amostras testadas e proteína BIR3 de XIAP pré-incubada (30 nM) e péptido SM5F (5 nM) no tampão de ensaio (fosfato de potássio 100 mM, pH 7,5; gama-globulina bovina a 100 pg/mL; azida de sódio a 0,02%, adquirida em Invitrogen™ Life Technology), foram adicionados em placas negras de fundo redondo de 96 poços Dynex (Fisher Scientific) para produzir um volume final de 125 pL. Para cada ensaio, foi incluído o controlo de péptido ligado contendo proteína BIR3 de XIAP recombinante e SM5F (equivalente a 0% de inibição) e controlo de péptido livre contendo apenas SM5F livre (equivalente a 100% de inibição). Os valores de polarização foram medidos após 3 h de incubação, quando a ligação alcançou o equilíbrio utilizando um ULTRA READER (Tecan US Inc., Research Triangle Park, NC) . Os valores de CI50, a concentração de inibidor à qual 50% de péptido ligado é deslocado, foram determinados a partir de um gráfico utilizando análise dos mínimos quadrados não linear. O ajuste à curva foi realizado utilizando o suporte lógico GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).

Alternativamente, num procedimento optimizado, foram realizadas experiências de FP em placas de fundo redondo negras Mucrofluor®, ThermoLabsystems (Fisher Scientific), usando o leitor de placas Ultra (Tecan, Research Triangle Park, NC) . As experiências de ligação dependentes da dose foram realizadas com diluições em série dos compostos activos. Uma amostra de 5 pL do composto testado e BIR3 de XIAP pré-incubado (30 nM) e péptido SM5F Smac-Flu (5 nM) no tampão de ensaio (fosfato de potássio 100 mM, pH 7,5, gama-globulina bovina a 100 pg/mL, azida de sódio a 0,02%), foi 162 adicionada em 96 poços para produzir um volume final de 125 pL. Para cada ensaio, serão incluídos em cada placa de ensaio controlos negativos contendo BIR3 de XIAP e SM5F Smac-Flu (equivalente a 0% de inibição) e controlos positivos contendo apenas péptido Smac-Flu livre (equivalente a 100% de inibição) . As placas foram misturadas num agitador durante 15 minutos e incubadas à temperatura ambiente durante 1-3 h. Os valores de polarização foram medidos no comprimento de onda de excitação de 485 nm e comprimento de onda de emissão de 530 nm. A percentagem de inibição foi derivada da equação % de inibição = 100 [ 1-(mP-mPf) / (mPb-mPf) ] , em que mPf é o controlo de péptido livre (mP mínimo) e mPb é o controlo de péptido ligado (mP máximo). IC50, a concentração de inibidor a que 50% do péptido ligado é deslocado, foi determinada a partir do gráfico utilizando análise dos minimos quadrados não linear, e o ajuste à curva foi realizado utilizando o suporte lógico GraphPad Prism®. O valor de K± para um mimético de Smac foi derivado do valor de CI50 medido e do valor de Kd de SM5F usando um método matemático e suporte lógico desenvolvido especificamente para ensaios baseados em FP.

Quando testados no ensaio de ligação, os miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos aqui divulgados exibiram forte afinidade de ligação à proteína BIR3 de XIAP tal como mostrado na Tabela 2. Estas afinidades de ligação foram mais de 10 vezes melhores que a afinidade de ligação do péptido Smac natural AVPI (SEQ ID NO: 1) (1,183 ± 441 nM).

Estes dados sugerem que os miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos actuarão como potentes inibidores da actividade de IAP.

Tabela 2

Nome CI50 (PM) SM-401 <1 SM-402 <1 163 SM-403 <1 YP-245P3 <100 YP-246P <10 SM-330 <1 SM-337 <1 SM-350 <1 SM-356 <1 SM-376 <0, 1 SM-377 <0,1 SM-404 <1 SM-405 <1 SM-406 <0,1 SM-407 <1 SM-408 <1 SM-409 <1 SM-412 <10 SM-413 <1 SM-414 <1 SM-415 <1 SM-416 <1 SM-418 <1 SM-419 <1 SM-420 <1 SM-421 <1 SM-422 <1 SM-423 <10 SM-424 <10 SM-425 <1 SM-426 <10 SM-427 <1 SM-428 >10 SM-429 <1 SM-430 <1 SM-431 <1 SM-432 <1 SM-433 <1 164 SM-434 <10 SM-207 <1 SM-209 <1 SM-210 <1 SM-211 <1 SM-212 <1 SM-213 <1 SM-222 <1 SM-230 <10 SM-227 <1 EXEMPLO 53

Ligação de Inibidores a Outras Proteínas IAP

Para testar a capacidade de ligação de miméticos de Smac conformacionalmente constrangidos a outras proteínas IAP (ML-IAP, cIAPl, e cIAP2), foram desenvolvidas e optimizadas as condições do ensaio de ligação. 0 domínio BIR3 de cIAPl recombinante (resíduos 253-363), o domínio BIR3 de cIAP2 (resíduos 238-349), e o domínio BIR3 de ML-IAP (resíduos 63-179), fundidos com uma etiqueta His, foram utilizados nos ensaios de ligação. Ensaios de ligação competitiva para outras proteínas IAP foram realizados de modo semelhante ao descrito para BIR3 de XIAP. Resumidamente, o mesmo marcador de afinidade elevada péptido SM5F Smac-Flu foi utilizado o qual se liga a cIAPl, cIAP2, e ML-IAP com elevada afinidade: 4,1 nM, 6,6 nM, e 160 nM, respect ivamente. A seguinte concentração de proteína e marcador foram utilizados no ensaio competitivo: cIAPl 10 nM e SM5F 2 nM, clAP2 25 nM e SM5F 2 nM, ML-IAP 300 nM e SM5F 5 nM. EXEMPLO 54

Inibição do Crescimento Celular através de Miméticos de Smac Conformacionalmente Constrangidos 165 0 efeito dos compostos aqui divulgados no crescimento de várias linhas de células de cancro foi testado. As células foram semeadas em placas de cultura de células de 96 poços de fundo plano a uma densidade de 3.000 células/poço com um composto testado e incubado a 37°C numa atmosfera de 95% de ar e 5% de CO2 durante 4 dias. A taxa de inibição do crescimento celular após tratamento com diferentes concentrações do composto foi determinada utilizando um estojo WST-8 (sal monossódico de 2-(2-metoxi-4-nitrofenil)-3- (4-nitrofenil)-5-(2,4-dissulfofenil)-2H-tetrazólio; Dojindo Molecular Technologies, Inc., Gaithersburg, Mariland). WST-8 foi adicionado a uma concentração final de 10% a cada poço, e depois as placas foram incubadas a 37°C durante 2-3 h. A absorvância das amostras foi medida a 450 nm utilizando um ULTRA Tecan Reader (Molecular Device). A concentração do composto testado que inibiu o crescimento celular em 50% (CI50) foi calculada através da comparação da absorvância em células não tratadas e nas células tratadas com o composto testado.

Quando testados contra a linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-2131, os compostos da presente invenção exibiram forte actividade inibidora tal como mostrado na Tabela 3, sugerindo que os compostos são potentes inibidores do crescimento de células de cancro. Quando testados contra a linha celular de cancro do ovário SK-OV-3, os compostos foram ainda mais potentes (Tabela 3).

Tabela 3

Nome CI50 de MDA-MB-231 (μΜ) Ciso de SK-OV-3 (μΜ) YP-337 <1 <1 YP-376 <1 <1 SM-401 <1 <1 SM-402 <1 <1 SM-403 <1 <1 SM-404 <1 <1 YP-245P3 >1 não testado ΥΡ-246Ρ >1 não testado SM-330 <1 não testado SM-350 <1 <1 SM-356 <1 não testado SM-377 <1 <1 SM-405 <1 <1 SM-406 <1 <1 SM-407 <1 <1 SM-408 <1 <1 SM-409 <1 <1 SH-207 <1 <1 SM-412 >1 >1 SM-413 <100 <100 SM-414 <100 <100 SM-415 <1 <1 SM-416 <10 <10 SM-418 <10 <10 SM-419 <10 <10 SM-420 <1 <1 SM-421 <1 <1 SM-422 <1 <1 SM-423 <100 <100 SM-424 >10 >10 SM-425 <10 <10 SM-426 <10 <10 SM-427 <1 <1 SM-428 >5 >5 SM-429 <10 <10 SM-430 <10 <10 SM-431 <1 <1 SM-432 <10 <10 SM-433 <10 <10 SM-434 <10 <10 SM-207 <10 <10 SM-209 <10 <10 SM-210 <1 <1 167 SM-211 <10 <10 SM-212 <10 <10 SM-213 <10 <10 SM-222 <1 <1 SM-230 <100 <100 SM-227 <10 <10 EXEMPLO 55

Indução de Morte Celular Através de YP-337 A capacidade de YP-337 para induzir morte celular foi testada nas linhas celulares de cancro da mama MDA-MB-231 e de ovário SK-OV-3 (Tabela 4). As células foram tratadas com YP-337 durante 48 horas e a viabilidade celular foi determinada utilizando o ensaio de exclusão de tripano azul.

Tabela 4 % Aproximada de células mortas após 48 h Concentração (nM) MDA-MB-231 SK-OV-3 Controlo <5% <5% i—1 O 10% 20% 1 35% 40% 10 60% 65% 100 75% 75% EXEMPLO 56

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) no Modelo de

Xenoenxerto de Cancro da Mama A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como agente anti-tumoral foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da mama MDA-MB-231 (ratinhos nus) . SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana durante duas 168 semanas. Tal como ilustrado na Fig. 1, SM-406 (AT-406), a doses de 30, 100 e 200 mg/kg de SM-406 (AT-406) , mostrou actividade anti-tumoral. Uma perda de peso dependente da dose até 11% foi observada a 100 e 200 mg/kg. EXEMPLO 57

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Taxotere no

Modelo de Xenoenxerto de Cancro da Próstata A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como um agente anti-tumoral sozinho e em combinação com taxotere foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da próstata PC-3 (ratinhos nus). SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana, taxotere uma vez por semana, durante duas semanas. Tal como ilustrado na Fig. 2, SM-406 (AT-406) a doses de 100 e 200 mg/kg mostrou actividade anti-tumoral. Além disso, SM-406 (AT-406) (100 mg/kg) em combinação com taxotere (8 mg/kg) mostrou maior actividade anti-tumoral. EXEMPLO 58

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Tykerb® no Modelo de Xenoenxerto de Cancro da Próstata A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como um agente anti-tumoral sozinho e em combinação com Tykerb® foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da próstata PC-3 (ratinhos nus). SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana, Tykerb® duas vez por dia x5 por semana durante duas semanas. Tal como ilustrado na Fig. 3, SM-406 (AT-406) a doses de 100 e 200 mg/kg mostrou actividade anti-tumoral. Além disso, SM-406 (AT-406) (100 mg/kg) em combinação com Tykerb® (90 mg/kg) mostrou maior actividade anti-tumoral. EXEMPLO 59 169

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Taxotere no

Modelo de Xenoenxerto de Cancro da Mama A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como um agente anti-tumoral sozinho e em combinação com taxotere foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da mama 2LMP. SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana, taxotere uma vez por semana, durante duas semanas. Tal como ilustrado na Figura 4, SM-406 (AT-406) a uma dose de 100 mg/kg mostrou actividade anti-tumoral. Além disso, SM-406 (AT-406) (100 mg/kg) em combinação com taxotere (12 mg/kg) mostrou actividade anti-tumoral. EXEMPLO 60

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) e Tykerb® no

Modelo de Xenoenxerto de Cancro da Mama A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como um agente anti-tumoral sozinho e em combinação com Tykerb® foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da mama 2LMP. SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana, Tykerb® 1 vez por dia durante duas semanas. Tal como ilustrado na Fig. 5, SM-406 (AT-406) a doses de 30, 100 e 200 mg/kg mostrou actividade anti-tumoral. Além disso, SM-406 (AT-406) (30, 100 e 200 mg/kg) em combinação com Tykerb® (90 mg/kg) mostrou maior actividade anti-tumoral . EXEMPLO 61

Actividade Anti-tumoral de SM-406 (AT-406) no Modelo de

Xenoenxerto de Cancro Pancreático A capacidade de SM-406 (AT-406) para actuar como um agente anti-tumoral foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro 170 pancreático Panc-1. SM-406 (AT-406) foi administrado 1 vez por dia x5 por semana. Tal como ilustrado na Fig. 6, SM-406 (AT-406) a doses de 30 e 100 mg/kg mostrou actividade anti-tumoral. EXEMPLO 62

Optimização do Esquema de Dosagem de SM-406 (AT-406) Modelo de Xenoenxerto de Cancro da Mama

Tal como ilustrado na Fig. 7, estudos dirigidos para a optimização do esquema de dosagem de SM-406 (AT-406) no modelo de xenoenxerto de cancro da mama MDA-MB-231 (ratinhos nus) foram realizados utilizando 200 mg/kg de SM-406 (AT-406) . A administração a 1 por dia *5, dia 1-5 por semana, 1 por dia *3, dia 1-3 por semana ou uma vez por semana produziu actividade anti-tumoral. A perda de peso corporal foi menor na dosagem semanal (<5%) em comparação com os outros esquemas de dosagem. EXEMPLO 63

Actividade in vitro de SM-406 em Linhas Celulares de Cancro A capacidade de SM-406 para inibir o crescimento celular como único agente foi testada na linha celular de cancro da mama MDA-MB-231, linhas celulares de cancro do ovário SK-OV-3 e OVCAR-4 e linha celular de cancro melanoma SK-Mel-2. As células foram tratadas durante 4 dias. O crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 8, SM-406 inibiu todas as quatro linhas celulares de cancro com valores de CI50 de 82 nM, 238 nM, 6.638 nM e 926 nM para MDA-MB-231, SK-OV-3, SK-Mel-2 e OVCAR-4, respectivamente. EXEMPLO 64 171

Actividade in vitro de SM-406 em Linhas Celulares de Cancro A capacidade de SM-406 para inibir o crescimento celular como único agente foi testada nas linhas celulares de leucemia HL-60 e SR. As células foram tratadas durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 9, SM-406 inibiu ambas as linhas celulares com valores de CI50 de 58 nM e 7.290 nM, respectivamente. EXEMPLO 65

Actividade in vitro de SM-406 em Linhas Celulares de Cancro A capacidade de SM-406 para inibir o crescimento celular como único agente foi testada nas linhas celulares de cancro da mama humano BT-549, MDA-MB-415, SUM-159, MDA-MB-468, MDA-MB-453 e 2LMP. As células foram tratadas durante 4 dias. O crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 10, SM-406 inibiu o crescimento celular em todas as seis linhas celulares. EXEMPLO 66

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com TNFa na Linha Celular MDA-MB-436 A capacidade de SM-406 em combinação com TNFa, e SM-428 como único agente, para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-436. As células foram tratadas com TNFa sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406, ou com SM-428 durante 4 dias. O crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 11, SM-406 em combinação com TNFa mostrou 172 uma maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com TNFa sozinho. EXEMPLO 67

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com TNFa na Linha Celular SUM-159 A capacidade de SM-406 em combinação com TNFa, e SM-428 como único agente, para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular de cancro da mama humano SUM-159. As células foram tratadas com TNFa sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406, ou com SM-428 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 12, SM-406 em combinação com TNFa mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com TNFa sozinho. EXEMPLO 68

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com TRAIL na Linha Celular Panc-1

A capacidade de SM-406 em combinação com TRAIL para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular pancreática humana Panc-1. As células foram tratadas com TRAIL sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 13, SM-406 em combinação com TRAIL mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com TRAIL sozinho. EXEMPLO 69 173

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com TRAIL na Linha Celular MDA-231 (2LMP) A capacidade de SM-406 em combinação com TRAIL para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-231(2LMP). As células foram tratadas com TRAIL sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 14, SM-406 em combinação com TRAIL mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com TRAIL sozinho. EXEMPLO 70

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com Gemcitabina na Linha Celular Panc-1 A capacidade de SM-406 em combinação com gemcitabina para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular pancreática humana Panc-1. As células foram tratadas com gemcitabina sozinha ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406 durante 4 dias. O crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 15, SM-406 em combinação com gemcitabina mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com gemcitabina sozinho. EXEMPLO 71

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com Mitoxantrona na Linha Celular Panc-1 A capacidade de SM-406 em combinação com mitoxantrona para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular pancreática humana Panc-1. As células foram tratadas com mitoxantrona sozinha ou em combinação com diferentes 174 concentrações de SM-406 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 16, SM-406 em combinação com mitoxantrona mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com mitoxantrona sozinho. EXEMPLO 72

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com Roscovitina na Linha Celular PC3 A capacidade de SM-406 em combinação com roscovitina (Ros) para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular da próstata humana PC3. As células foram tratadas com SM-406 sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de roscovitina durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 17, SM-406 em combinação com roscovitina inibiu o crescimento celular. EXEMPLO 73

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com Taxotere na Linha Celular MDA-MB-453 A capacidade de SM-406 em combinação com taxotere (TXT) para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular de cancro da mama humano MDA-MB-453. As células foram tratadas com TXT sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 18, SM-406 em combinação com taxotere mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com taxotere sozinho. EXEMPLO 74 175

Actividade in vitro de SM-406 em Combinação com VP-16 na Linha Celular Panc-1 A capacidade de SM-406 em combinação com VP-16 para inibir o crescimento celular foi testada na linha celular pancreática humana Panc-1. As células foram tratadas com VP-16 sozinho ou em combinação com diferentes concentrações de SM-406 durante 4 dias. 0 crescimento celular foi determinado utilizando um ensaio baseado em WST. Tal como ilustrado na Fig. 19, SM-406 em combinação com VP-16 mostrou maior inibição do crescimento celular versus o tratamento com VP-16 sozinho. EXEMPLO 75

Efeito de SM-406 na Proteína cIAP-1 em Células MDA-MB-231 0 efeito de SM-406 e SM-428 foi medido na proteína cIAP-1 em células de cancro MDA-MB-231. As células foram tratadas com SM-406 ou SM-428 a diferentes concentrações e momentos. Os níveis de proteína foram analisados através de transferência Western. Tal como ilustrado na Fig. 20, SM-406 reduziu os níveis da proteína cIAP-1. EXEMPLO 76

Efeito de SM-406 nas Proteínas cIAP-1 e cIAP-2 em Células SK-OV-3 O efeito de SM-406 e SM-428 foi medido nas proteínas cIAP-1 e cIAP-2 em células de cancro SK-OV-3. As células foram tratadas com SM-406 ou SM-428 a diferentes concentrações e momentos. Os níveis de proteína foram analisados através de transferência Western. Tal como ilustrado na Fig. 21, SM-406 reduziu os níveis das proteínas cIAP-1 e cIAP-2. 176 EXEMPLO 77

Indução de Apoptose por SM-406 em Células MDA-MB-231 A indução de apoptose por SM-406 ou SM-428 foi medida em células de cancro da mama MDA-MB-231. As células foram tratadas com SM-406 ou SM-428 durante diferentes períodos de tempo e a apoptose foi analisada através de coloração de Anexina V-FITC/iodeto de propídio utilizando um citómetro de fluxo. Tal como ilustrado na Fig. 22, 3 μΜ de SM-406 induziu apoptose em células de cancro da mama MDA-MB-231. EXEMPLO 78

Indução de Apoptose por SM-406 em Células SK-OV-3 A indução de apoptose por SM-406 ou SM-428 foi medida em células de cancro do ovário SK-OV-3. As células foram tratadas com SM-406 ou SM-428 a diferentes concentrações. A apoptose foi analisada através de coloração de Anexina V-FITC/iodeto de propídio utilizando um citómetro de fluxo. Tal como ilustrado na Fig. 23, 0,1, 0,3, 1 e 3 μΜ de SM-406 induziram apoptose em células de cancro do ovário SK-OV-3. EXEMPLO 79

Indução de Apoptose por SM-406 em Células Panc-1 A indução de apoptose por SM-406 ou SM-428 foi medida em células de cancro pancreático Panc-1. As células foram tratadas com SM-406 ou SM-428 a diferentes concentrações. A apoptose foi analisada através de coloração de Anexina V-FITC/iodeto de propídio utilizando um citómetro de fluxo. Tal como ilustrado na Fig. 24, 0,3, 1 e 3 μΜ de SM-406 induziram apoptose em células de cancro pancreático panc-1. EXEMPLO 80 177

Actividade Anti-tumoral de SM-406 no Modelo de Xenoenxerto MDA-MB-231 A capacidade de SM-406 para actuar como um agente anti-tumoral foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da mama humano MDA-MB-231 em ratinhos com imunodeficiência grave combinada (SCID). 0 tratamento começou guando os tumores cresceram até um tamanho médio de 150 mm3. SM-406 foi dado diariamente, 5 dias por semana durante 2 semanas via sonda oral. Taxotere foi dado por via intravenosa (i.v.) uma vez por semana durante 2 semanas. Tal como ilustrado na Fig. 25, SM-406 mostrou actividade anti- tumoral a 30 e 100 mg/kg PO. EXEMPLO 81

Actividade Anti-tumoral de SM-406 no Modelo de Xenoenxerto PC-3 A capacidade de SM-406 para actuar como agente anti-tumoral foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da próstata humano PC-3 em ratinhos nus. O tratamento começou quando os tumores cresceram até um tamanho médio de 100 mm3. SM-406 foi dado diariamente, 5 dias por semana durante 2 semanas via sonda oral entre os dias 15-25 e durante outras 2 semanas entre os dias 43-53. Taxotere foi dado por via intravenosa (i.v.) uma vez por semana durante 3 semanas no dia 16, 23 e 44. Tal como ilustrado na Fig. 26, SM-406 sozinho ou em combinação com taxotere mostrou actividade anti-tumoral. EXEMPLO 82

Actividade Anti-tumoral de SM-406 no Modelo de Xenoenxerto 2LMP 178 A capacidade de SM-406 para actuar como agente anti-tumoral foi testada no modelo de xenoenxerto de cancro da mama humano 2LMP em ratinhos nus. SM-406 foi dado diariamente durante 10 dias por via intraperitoneal (i.p.) ou oral (p.o.) entre os dias 16-26. Taxotere foi dado por via intravenosa (i.v.) uma vez por semana durante 2 semanas. O ligando de indução de apoptose relacionado com factor de necrose tumoral (TNF) (TRAIL) foi i.p. uma vez por dia durante 10 dias entre os dias 16-26. Tal como ilustrado na Fig. 27, SM-406 sozinho ou em combinação com TRAIL mostrou actividade anti-tumoral. EXEMPLO 83

Ligação de SM-406 a Domínios BIR3 de Proteínas IAP

As curvas de ligação competitiva de SM-406 e SM-428 a domínios BIR3 de quatro membros de proteínas IAP foram determinadas utilizando um ensaio de ligação baseado em polarização da fluorescência. As proteínas IAP testadas incluem: (A) XIAP; (B) cIAPl; (C) cIAP2; (D) ML-IAP. Tal como ilustrado na Fig. 28, SM-406 liga-se a todas as quatro proteínas IAP.

Tendo agora descrito totalmente a invenção, os peritos na técnica entenderão que a mesma pode ser realizada dentro de um vasto e equivalente intervalo de condições, formulações, e outros parâmetros, sem afectar o âmbito da invenção ou qualquer uma das formas de realização desta definidas pelas reivindicações.

Lisboa

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto possuindo a Fórmula VI:

em que: Ai e A2 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo opcionalmente substituído; X é seleccionado a partir do grupo que consiste em hidrogénio e alquilo C1-3 opcionalmente substituído; T é C=0; U é NFdR1 2 3; R1 e R1 são independentemente seleccionados a partir do grupo que consiste em hidrogénio, alquilo opcionalmente substituído, carbocíclico opcionalmente substituído, heterocíclico opcionalmente substituído, arilo opcionalmente substituído e heteroarilo opcionalmente substituído; R5 é COR7; e R7 é -CH2CH (CH3) 2; ou sal farmaceuticamente aceitável destes. 1 Composto da reivindicação 1, em que R1 é alquilo 2 opcionalmente substituído em que os substituintes 3 opcionais são arilo opcionalmente substituído com um 2 ou mais grupos alquilo Ci-6, halo, haloalquilo ou heteroarilo, R2 é hidrogénio, e R7 é -CH2CH (CH3) 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

3. Composto da reivindicação 1, seleccionado a partir do grupo que consiste em: 3

4

5

6

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. que

4. Composto seleccionado a partir do grupo consistindo em: 7 Ο Μ 'X ""•'Λ Ο χ. .,ÍW ,.Ν- Α ΑΧ ι , Ν Q L $

JF Ή Ο I* .Μ* HCJ.

'X ,Ν "tf \ -·\

OONHCHPha

*

9

10 e

11

ou a base livre destes ou outro sal farmaceuticamente aceitável destes.

5. Composto de acordo com a reivindicação 1 de Fórmula:

ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

6. Composição farmacêutica compreendendo o composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

7. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para utilização num método de tratamento, melhoria, ou prevenção de um distúrbio responsivo à indução de apoptose num animal.

8. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para 12 utilização num método de tratamento, melhoria, ou prevenção de cancro num animal.

9. Composto para utilização da reivindicação 8, em que o referido método de tratamento, melhoria ou prevenção compreende ainda a administração de um agente anticancro.

10. Composto para utilização da reivindicação 8, em que o referido método de tratamento, melhoria ou prevenção compreende ainda a administração de um agonista de TRAIL-R1 ou TRAIL-R2.

11. Composto para utilização da reivindicação 10, em que o referido agonista de TRAIL-R1 ou TRAIL-R2 é um anticorpo.

12. Composto para utilização de qualquer uma das reivindicações 8-11, em que o referido cancro é seleccionado a partir do grupo que consiste em cancro da mama, cancro do ovário, cancro da próstata, cancro pancreático, leucemia, melanoma, cancro do cólon, cancro do fígado, mieloma múltiplo, carcinoma de células renais, leucemia linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielóide aguda e sarcoma dos tecidos moles.

13. Composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, para utilização num método de prevenção ou inibição de angiogénese num animal. 13

14. Estojo compreendendo o composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal f armaceut icamente aceitável deste, e instruções para administração do referido composto a um animal.

15. Estojo da reivindicação 14, compreendendo ainda um agente anticancro.

16. Processo para preparação de um composto de Fórmula VI tal como recitado na reivindicação 1 compreendendo a condensação de um composto de Fórmula XII

em que Ai, A2, X, T, e U têm os significados expostos na reivindicação 1; com R7CO-L, em que: V é N; W é CH; Y é NHCO; Z é (CR1R2)r quando r é 0; m é 1; R7 é -CH2CH (CH3) 2; e L é um grupo de saída, para formar um composto de Fórmula VI. Lisboa