PT2134742E - Métodos e composições imunogénicas para tratar e prevenir infecções em animais - Google Patents

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Description

1
DESCRIÇÃO
"COMPOSIÇÕES IMUNOGÉNICAS PARA TRATAR E PREVENIR INFECÇÕES EM ANIMAIS"
CAMPO TÉCNICO A presente descrição refere-se a composições e métodos que proporcionam tratamento ou protecção contra infecções virais e bacterianas em animais. Mais especificamente, a presente descrição refere-se a composições de vacina multivalente para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios em caninos causados por ou associados a um ou mais de vírus da esgana canina, adenovírus canino (tipo 1 ou tipo 2), vírus da parainfluenza canina, parvovírus canino,
Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorrhagiae,
Leptospira grippotyphosa, Leptospira pomona, Leptospira bratislava, Leptospira hardjo, Leptospira autumnalis,
Leptospira australis, Leptospira hebdomadis, e Bordetella bronchiseptica. As composições de Leptospira podem também ser usadas para tratar ou prevenir doenças ou distúrbios em caninos, suínos, e bovinos.
ANTECEDENTES
Leptospirose é uma doença contagiosa que afecta tanto animais como seres humanos. A infecção é causada por um agente patogénico bacteriano chamado Leptospira. As bactérias do género Leptospira são espiroquetas, que podem ser patogénicas e incluem diversas espécies conhecidas e um grande número de serovares (serovariantes). Espécies patogénicas exemplares incluem L. interrogans, L. inadai, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. kirschneri, L weilii ou L. noguchii. Serovares de Leptospira patogénicos ocorrem naturalmente numa grande variedade de animais como gado, animais de companhia, animais selvagens, e seres humanos. A gama de hospedeiros de serovares de Leptospira é geralmente bem ampla, mas ocorreram sintomas diferentes dependendo do 2 hospedeiro infectado. Por exemplo, a leptospirose em caninos pode ter como resultado doença do rim e do figado crónica, e em morte. 0 curso e gravidade da doença causada por leptospira são com frequência dependentes do serovar responsável pela infecção. Serovares associados a infecção no fígado e sintomas de descoloração da urina e/ou icterícia (ictero), enzimas do fígado elevadas, e sintomas gastrointestinais, incluem L. icterohaemorrhagiae e L. grippotyphosa. 0 serovar L. grippotyphosa é também associado a sintomas de insuficiência renal, como é o serovar L. pomona. Ainda na década de 80, L. icterohaemorrhagiae e L. canicola foram identificados como os serovares mais prevalentes que causam leptospirose em caninos. Na década de 90, no entanto, uma incidência aumentada de L. grippotyphosa e L. pomona foi observada em conjunto com um ressurgimento de doença leptospirose o que sugere que uma tendência de mudança na epidemiologia desta doença. Alguns serovares de Leptospira patogénicos adicionais estão a começar a emergir como medicamente relevantes, tais como L. bratistava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis.
Os serovares de Leptospira são classificados com base nos tipos de antigénios na sua superfície (isto é, marcadores de superfície celular que provocam a produção de anticorpos), mas estes antigénios de superfície celular proporcionam pouca imunidade cruzada entre serovares. Assim, a vacinação contra certos serovares não propicia protecção contra outros serovares. Além disso, as vacinas que combinam antigénios de diversos serovares, ou antigénios de outros organismos (por exemplo, vírus), podem ter como resultado interferência de antigénio - isto é, uma falha de um ou mais dos antigénios combinados para provocar uma resposta imune por causa de um efeito de "mascaramento" causado pelos outros antigénios na composição. 3
Portanto, existe uma necessidade do desenvolvimento de composições e métodos eficazes para tratar e prevenir doença ou distúrbios causados ou associados a infecção por Leptospira. 0 documento WO 2006/038115 revela vacinas caninas multivalentes contra Leptospira bratislava e outro agente patogénico.
Moore et al: "Emerging Infectious Diseases"; 2006 March; 12(3):501-3, refere-se a um estudo sobre "Canine leptospirosis, United States, 2002-2004".
Adin et al: "Journal of the American Veterinary Medicai Association", vol. 216, N° 3,1 2000 February, pages 371-375, refere-se ao "Treatment and outcome of dogs with leptospirosis: 36 cases (1990-1998)."
Um artigo de autoria anónima em internet: encontrado em http://www.wyetah.ca/artiole.aspipage id=prlepto4_0505>, refere-se a "Introduction of Leptovax 4 canine vaccine". SUMÁRIO A presente invenção proporciona composições imunogénicas que compreendem um imunogénio de superfície de célula de Leptospira ou uma preparação de célula parcial ou completa inactivada de Leptospira bratislava. Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e Leptospira hebdomadis. Em certas formas de realização, as composições da invenção compreendem uma ou mais proteínas capsulares de membrana exterior (OMC) derivadas de Leptospira bratislava, Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e/ou Leptospira hebdomadis. A invenção também proporciona composições imunogénicas que compreendem um imunogénio de superfície de célula de Leptospira ou uma preparação de célula parcial ou completa inactivada de Leptospira bratislava, Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e Leptospira hebdomadis, e que compreendem ainda um ou mais imunogénios virais seleccionados a partir do grupo que consiste em vírus da esgana canina (CD), uma estirpe 4 atenuada de adenovírus canino do tipo-2 (CAV-2), uma estirpe atenuada de vírus da parainfluenza canina (CPI), uma estirpe atenuada de parvovírus canino (CPV), e uma estirpe inactivada de coronavírus canino (CCV). As composições imunogénicas da presente invenção, em certas formas de realização, podem também compreender imunogénios de superfície de célula de Leptospira ou uma preparação de célula parcial ou completa inactivada derivada de uma ou mais estirpes de Leptospira seleccionadas a partir do grupo que consiste em L. canicola, L. grippotyphosa. L icterohaemorrhagiae, L. pomona, e L. hardjo. Em certas formas de realização, as composições imunogénicas da invenção podem incluir pelo menos um imunogénio de Bordetella bronchiseptica tal como, por exemplo, a proteína de superfície de Bordetella p68.
Estas e outras formas de realização, características, e vantagens da descrição tornar-se-ão aparentes a partir da descrição pormenorizada e as reivindicações anexas apresentadas no presente documento a seguir.
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA A presente descrição proporciona uma variedade de composições de imunogénio multivalente para tratar ou prevenir infecções bacterianas ou tanto infecções bacterianas como virais. Esta descrição, portanto se refere geralmente à descoberta surpreendente de que uma combinação diferente de imunogénios de superfície de célula de Leptospira poderia ser combinado para criar uma composição imunogénica que não tem como resultado uma interferência antigénica. Isto é, cada imunogénio individual da composição é capaz de provocar uma resposta imune, particularmente uma resposta imune protectora, esta actividade não é afectada pela presença de outros antigénios. Mais especificamente, uma forma de realização da composição imunogénica compreende um imunogénio de superfície de célula de Leptospira de Leptospira 5 bratislava, Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e Leptospira hebdomadis. Além disso, estes imunogénios de Leptospira são justamente imunogénicos quando são combinados com outros antigénios virais, incluindo um antigénio de vírus da esgana canina (CD) , um antigénio de adenovírus canino do tipo 2 (CAV-2), um antigénio de vírus da parainfluenza canina (CPI), um antigénio de parvovírus canino (CPV), um antigénio de coronavírus canino (CCV) , e qualquer combinação dos mesmos. Adicionalmente, um antigénio de Bordetella bronchiseptica, tal como p68 (uma proteína de superfície de Bordetella), pode também ser adicionado à composição imunogénica. Estas composições imunogénicas podem ser usadas como uma vacina para tratar ou melhorar ou prevenir várias infecções de Leptospira e várias infecções virais. Discutido em mais pormenores a seguir são composições de imunogénio multivalente adequadas para utilização dentro da presente descrição, bem como utilizações veterinárias ou terapêuticas representativas.
Antes de apresentar a descrição em mais pormenores, pode ser de ajuda a um entendimento dos mesmos para apresentar definições de certos termos a serem usados a seguir no presente documento. ambos
Como é descrito no presente documento, qualquer intervalo de concentração, intervalo de percentagem, intervalo de razão ou intervalo de números inteiros é para ser entendido que inclui o valor de qualquer número inteiro dentro do intervalo mencionado e, quando for apropriado, fracções do mesmo (tal como um décimo e um centésimo de um número inteiro), a não ser que de outro modo indicado. Como é usado no presente documento, "cerca de" ou "que compreende essencialmente de" significam ±15% do valor ou intervalo indicado, a não ser que de outro modo indicado. Deve ser entendido que a utilização da alternativa (por exemplo, "ou") que significa um, ambos, ou qualquer combinação dos mesmos das alternativas. 6 0 termo "imunogénio" ou "antigénio", como é usado no presente documento, refere-se a um agente que é reconhecido pelo sistema imune quando é introduzido num indivíduo e é capaz de provocar uma resposta imune. Em certas formas de realização, o que a resposta imune gera é uma resposta imune protectora. Os imunogénios incluem "antigénios de superfície" que são expressos naturalmente na superfície de um microrganismo (por exemplo, um agente patogénico), ou a superfície de uma célula infectada, ou a superfície de uma célula tumoral.
Como é usado no presente documento, o termo "composição imunogénica" significa dois ou mais imunogénios (antigénios) que são capazes de induzir uma resposta imune protectora num indivíduo a ser tratado, tal como um hospedeiro canino ou suíno ou bovino. Os efeitos protectores de uma composição imunogénica contra um ou mais agentes patogénicos são normalmente alcançados por meio da indução no indivíduo animal de uma resposta imune, uma resposta mediada por células ou uma resposta imune humoral ou uma combinação de ambas, e preferentemente uma resposta imune protectora. 0 termo "imunogénio de polipéptido capsular de membrana exterior" ou "imunogénio OMC" refere-se a uma preparação de proteínas de membrana exterior que são isoladas ou substancialmente removidas de células de Leptospira intactas. Um método representativo para preparar imunogénios OMC é proporcionado em, por exemplo, Yang et ai., J. Am. Soc. Nephrol. 13:2037-2045 (2002). O termo "imunidade protectora" como é usado no presente documento refere-se a imunidade adquirida contra um imunogénio, quando um indivíduo tenha sido exposto ao imunogénio, que é uma resposta imune (activa/adquirida ou passiva/inata, ou ambas) no indivíduo que leva a inactivação e/ou redução na quantidade de um agente patogénico e tem como resultado memória imunológica (por 7 exemplo, células T de memória ou células B) . Imunidade protectora proporcionada por uma vacina pode ser na forma de imunidade humoral (mediada por anticorpo) ou imunidade celular ou ambas. Por exemplo, a imunidade protectora pode ter como resultado uma redução na propagação virai ou bacteriana, uma diminuição na incidência ou duração de infecções, níveis de proteína sérica de fase aguda reduzidos, temperaturas rectais reduzidas, ou aumento em absorção dos alimentos ou crescimento.
Como é usado no presente documento, uma "vacina" é uma composição que pode ser usada para provocar a imunidade protectora num destinatário. Um indivíduo que tenha sido vacinado com um imunogénio desenvolverá uma resposta imune que previne, atrasa, ou atenua o desenvolvimento ou gravidade de uma doença ou distúrbio no indivíduo exposto ao imunogénio, ou um imunogénio relacionado, em comparação com um indivíduo não vacinado. A vacinação pode, por exemplo, provocar uma resposta imune que elimina ou reduz o número de agentes patogénicos ou células infectadas, ou pode produzir qualquer outro alívio clinicamente mensurável de uma infecção.
Como é usado no presente documento, "adjuvante" é para ser entendido no seu sentido mais amplo e inclui qualquer composto de estimulação imune. Em certas formas de realização preferidas, o adjuvante é alúmen, um polímero solúvel em água de ácido acrílico reticulado com polialil sacarose (por exemplo, Carbopol®), brometo de dimetil dioctadecil amónio (DDA), ou qualquer combinação dos mesmos. Qualquer adjuvante pode ser usado em conjunto com um ou mais adjuvantes adicionais. Outros adjuvantes exemplares incluem emulsões em óleo e adjuvantes à base de emulsificante tais como uma emulsão água em óleo, emulsão óleo em água, água em emulsão óleo em água, adjuvante de Freund completo, adjuvante de Freund incompleto, MF59, ou SAF; géis minerais tais como hidróxido de alumínio (alúmen, 8 por exemplo, A1(0H)3 reHydragel disponível de Reheis,
Berkley Heights, NJ), sais de alumínio (por exemplo, fosfato de alumínio) ou sais de cálcio (por exemplo, fosfato de cálcio); adjuvantes derivados de maneira
microbiana tais como toxina da cólera (CT) , toxina pertussis, toxina lábil ao calor de Escherichia coli (LT) , toxinas mutantes (por exemplo, LTK63 ou LTR72), Bacilo de Calmette e Guérin (BCG), lipopolissacáridos (LPS), micobactérias, toxina do tétano, Corynebacterium parvum, motivos de CpG ADN, dipéptido muramilo, ou lípido A monofosforilo; adjuvantes particulados tais como complexos imunoestimuladores (ISCOMs), lipossomas, microesferas biodegradáveis, ou saponinas (por exemplo, QS-21); citocinas tais como IFN-γ, IL-2, IL-12 ou GM-CSF; adjuvantes sintéticos tais como copolímeros em bloco não iónicos ou tensioactivos, análogos de péptido muramilo (por exemplo, N-acetil- muramil-L-treonil-D-isoglutamina [thr-MDP] , N-acetil-nor-muramil-L-alanil-D-isoglutamina, N- acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutaminil-L-alanina-2-[1'-2'-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxifosforiloxi]-etilamina), polifosfazenos, polinucleótidos sintéticos, ácido poliacrilico esterificado parcial com um peso molecular de 450.000 D (Carbopol 907 (PAA), Goodrich, Cleveland, Ohio, EUA; como é revelado nas Patentes US N° 6.340.464 e 6.610.310) e substâncias tensioactivas, tal como lisolecitina, polióis plurónicos, polianiões, péptidos, emulsões de hidrocarbonetos, ou hemocianinas de molusco keyhole limpet (KLH). Adjuvantes adicionais incluem CMC (carboxil metilcelulose) e HPMC (hidroxipropil metil-celulose).
Como é usado no presente documento, os termos "serogrupo" e "serovar" referem-se a uma classificação de Leptospira gue é com base em dados de tipagem serológica, em particular dados obtidos usando ensaios de aglutinação, tais como o teste de aglutinação microscópica (MAT). Um MAT 9 exemplar é apresentado no Exemplo 1 no presente documento. Por exemplo, "serogrupo" ou "serovar" refere-se a um grupo de Leptospira cujos membros aglutinam cruzadamente com antigénios de grupo partilhado, mas não aglutinam cruzadamente com os membros de outros grupos e, como uma consequência, os membros de um serogrupo (serovar) têm mais ou menos relações antigénicas próximas uma com outra por simples aglutinação cruzada. Além disso, Leptospira que pertencem a espécies diferentes pode ser classificada no mesmo serovar ou serogrupo porque são indistinguíveis por determinação antigénica. 0 termo "anticorpo", como é usado no presente documento, pretende-se que inclua fragmentos do mesmo que são também especificamente reactivos com uma molécula que compreende, miméticos, ou reage de maneira cruzada com um epitopo de célula B ou célula T de uma molécula de superfície ou polipéptido de superfície ou outra molécula produzida por um serovar de Leptospira, Bordetella bronchiseptica, ou um vírus. Os anticorpos podem ser fragmentados usando técnicas convencionais. Por exemplo, fragmentos F(ab')2 podem ser gerado por meio do tratamento de anticorpo com pepsina. 0 fragmento F(ab')2 resultante pode ser tratado para reduzir pontes dissulfureto para produzir fragmentos Fab'. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade de uma composição imunogénica suficiente para provocar uma resposta imune protectora no indivíduo (por exemplo, um canino ou um porco ou uma vaca) ao qual é administrada. Como é notado no presente documento, a resposta imune pode ter como resultado uma indução de imunidade celular ou humoral. A quantidade de uma composição de imunogénio multivalente que é terapeuticamente eficaz pode variar dependendo do antigénio particular usado na composição, a 10 idade e condição do indivíduo a ser tratado, ou o grau de infecção, se houver algum.
COMPOSIÇÕES IMUNOGÉNICAS
Num aspecto, a presente descrição é geralmente direccionada a composições que compreendem imunogénios de polipéptido capsular de membrana exterior (OMC) isolados derivados de Leptospira ou preparações de célula completa ou parcial inactivada de Leptospira. Consequentemente, uma forma de realização da presente descrição é direccionada a uma composição imunogénica que compreende um imunogénio de superfície de célula de Leptospira de Leptospira bratislava, Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e Leptospira hebdomadis. Em outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem quatro imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente um antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em certas formas de realização, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num ser humano ou gado ou animal de companhia, tal como suíno, bovino, ovino, caprino, equino, veado, vicugna, canino ou felino. Numa forma de realização preferida, a resposta imune provocada é uma resposta imune protectora.
Em outro aspecto da presente descrição, o componente imunogénio de uma composição eficaz pode compreender ainda um ou mais imunogénios virais. nao O imunogénio virai pode ser um imunogénio virai atenuado, completo que tenha sido passado ou pré-tratado para torná-lo não infeccioso e predominantemente 11 assintomático. Os imunogénios que podem ser utilizados na geração das composições, incluindo composições imunogénicas descritas no presente documento, podem ser viriões vivos, atenuados (tais como CD, CAV- 2, CPI, e CPV) , ou mortos (inactivados) (tais como CCV) . Se forem atenuados, então a passagem em série do vírus usando a tecnologia disponível pode ser recomendado para atenuar sua virulência, enquanto retém sua imunogenicidade. Subunidades de viriões influenza ou viriões influenza completos podem ser inactivados por meios convencionais tais como, por exemplo, através de inactivação química usando um ou mais agentes de inactivação química incluindo, mas não limitados a, um ou mais de etileneimina binária, beta-propiolactona, formalina, gluteraldeído, e/ou dodecil sulfato de sódio. Viriões podem também ser inactivados por calor ou psoraleno na presença de luz ultravioleta. Métodos de atenuação estirpes virulentas destes vírus e métodos de preparar uma preparação virai inactivada são conhecidos no estado da técnica e são descritos em, por exemplo, Patentes U.S. n° 4.567.042 e 4.567.043. Os antigénios destes agentes patogénicos para utilização nas composições de vacina da presente invenção podem ser na forma de uma preparação virai viva modificada ou uma preparação virai inactivada.
Numa forma de realização, uma composição imunogénica da presente descrição inclui estirpes atenuadas de um vírus da esgana canina (CD), adenovírus canino do tipo 2 (CAV-2), vírus da parainfluenza canina (CPI) e parvovírus canino (CPV); uma preparação inactivada de coronavírus canino (CCV); e um imunogénio de superfície celular de quatro serovares de Leptospira (L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis). Em outra forma de realização, esta composição imunogénica compreende ainda três serovares adicionais de Leptospira (L. canicola, L. grippotyphosa, e L. icterohaemorrhagiae). Em ainda outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem cinco 12 imunogénios virais e sete imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de Bordetella bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Num aspecto adicional da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; e um imunogénio de superfície celular de guatro serovares de Leptospira (L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis) . Em outra forma de realização, esta composição imunogénica compreende ainda três serovares adicionais de Leptospira (L. canicola, L. grippotyphosa, e L. icterohaemorrhagiae) . Em ainda outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem quatro imunogénios virais e sete imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em ainda um aspecto adicional da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, e CPV; e um imunogénio de superfície celular de quatro serovares de Leptospira (L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis) . Em outra forma de realização, esta composição imunogénica compreende ainda três serovares adicionais de Leptospira (L. canicola, 13 L. grippotyphosa, e L. icterohaemorrhagiae) . Em ainda outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem três imunogénios virais e sete imunogénios de superficie de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superficie de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em ainda um aspecto adicional da presente descrição, uma composição imunogénica inclui uma estirpe atenuada de um virus CPI; e um imunogénio de superficie celular de quatro serovares de Leptospira (L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis) . Em outra forma de realização, esta composição imunogénica compreende ainda três serovares adicionais de Leptospira (L. canicola, L. grippotyphosa, e L. icterohaemorrhagiae). Em ainda outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem um imunogénio virai e sete imunogénios de superficie de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em certas formas de realização da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um imunogénio de superfície celular de três serovares de Leptospira (L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis). Em outra forma de realização, esta 14 composição imunogénica compreende ainda dois serovares adicionais de Leptospira (L. canicola e L. icterohaemorrhagiae). Em ainda outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem cinco imunogénios virais e cinco imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em formas de realização adicionais da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um imunogénio de superfície celular de cinco serovares de Leptospira (L. bratislava, L. canicola, L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, e L. pomona). Em outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem cinco imunogénios virais e cinco imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num suíno ou canino, tal como um porco ou cão, respectivamente, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em ainda uma forma de realização adicional da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um imunogénio de superfície celular de quatro serovares de Leptospira (L. canicola, L. 15 icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, e L. pomona) . Em outra forma de realização, esta composição imunogénica que tem cinco imunogénios virais e quatro imunogénios de superfície de célula de Leptospira, compreende ainda um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em outro aspecto da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um imunogénio de superfície celular de quatro serovares de Leptospira (L. bratislava, L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, e L. pomona). Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num suíno, tal como um porco, e mais preferentemente uma resposta imune protectora.
Em ainda outro aspecto da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um vírus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um imunogénio de superfície celular de cinco serovares de Leptospira (L. canicola, L. hardjo, L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, e L. pomona). Em certas formas de realização preferidas, os imunogénios de superfície de célula de Leptospira são imunogénios OMC. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num bovino, tal como uma vaca, e mais preferentemente uma resposta imune protectora. 16
Em outras formas de realização da presente descrição, uma composição imunogénica inclui estirpes atenuadas de um virus CD, CAV-2, vírus CPI, e CPV; uma preparação inactivada de CCV; e um antigénio de B. bronchiseptica, preferentemente o antigénio de p68. Em outras formas de realização preferidas, a composição imunogénica é capaz de provocar uma resposta imune num hospedeiro canino, tal como um cão, e mais preferentemente uma resposta imune protectora. A presente descrição também inclui quaisquer das composições imunogénicas anteriores, em que um antigénio de B. bronchiseptica é especificamente excluído das composições. Por exemplo, uma composição imunogénica que compreende um imunogénio virai de uma estirpe atenuada de vírus da esgana canina (CD) , uma estirpe atenuada de adenovírus canino do tipo 2 (CAV-2), uma estirpe atenuada de vírus da parainfluenza canina (CPI), uma estirpe atenuada de parvovírus canino (CPV), uma preparação de célula parcial ou inactivada de uma estirpe de coronavírus canino (CCV) e um antigénio de L. bratislava (por exemplo, uma proteína capsular de membrana exterior (OMC) de L. bratislava) , em que a composição não inclui um antigénio de B. bronchiseptica.
Composições imunogénicas exemplares são também proporcionadas no Quadro 1: η
Quadro 1: Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 1 2 3 4 5 6 7 3 9 10 11 12 13 14 15 10 17 vírus CDf X X X X X X CAV-21 X X X X X X CPVf X X X X X X vírus CPI1 X X X X X ccv1 X X X X X L. hrâtislâvâ* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, autumaiis* X X X X X X X X X X X X X X X X X l. australis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, canicola* l. grippotyphosa* L, icterohaemrrhagiae* L. pomnâ * L. hardjo* B, bronchiseptica11 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira nantigénio de B, bronchiseptica (por exemplo, antigénio de p68) 18
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 18 19 20 21 22 23 24 25 28 27 28 29 30 31 32 33 34 vírus CDf X X X X X X X X X X CAV-21 X X X X X X X X X CPVf X X X X X X X X X vírus CPI1 X X X X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X L. hrâtislâvâ* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, autumalis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, australis* X X X X X X X X X k X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, canicola* l. grippotyphosa* L, icteiohaemiihagiae* L. pomnâ * L. hardjo* B, bronchiseptica11 X X X X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 19 19 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 20
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 vírus CDf X X X X X X X X X X CAV-21 X X X X X X X CPVf X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X L. bratislava* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, autumaiis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, australis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. canicola* L. grippotypbosa* L, icterohaemrrhâgiâe* L, poiaoaa * L, hardjo* B. bronchisepticâ^ X X X X X X X X X X X X X X X X X
Vstirpes atenuadas Vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira Vntigénio de B. bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 21
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 52 53 54 55 55 57 53 59 60 61 62 63 64 65 66 67 oo vírus CDf X X X X X X X X X X X X X X CAV-21 X X X X X X X X X X X X X X X CPVf X X X X X X X X X X X X X X X X vírus CPI1 X X X X X X X X X X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X X X X L. hrâtislâvâ* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, autumalis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, australis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, canicola* X X X X X X X X X l. grippotyphosa* X X X X X X L, icteiohaemiihagiae* X X X L. pomnâ * L. hardjo* B, bronchiseptica11 X X X X X X X X X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 22 22 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 23
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 vírus CD1 X X X X X X X X X X X X CAV-21 X X X X X X X X X X X X CPVf X X X X X X X X X X X X vírus CPI1 X X X X X X X X X CCV1 L. hrâtislâvâ* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, autumnalis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, australis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X X X L, canicola* X X X X X X X X X X X X l. grippotyphosa* X X X X X X X X L, icteiohaewnhagiae* X X X X l, pomona * L, hãrdjo* B, bronchiseptica^ X X X X X X X X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 24 24 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 25
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 86 81 88 89 90 91 92 93 94 95 96 91 oo ΟΓ"! 99 100 101 102 vírus CD1 X X X X X X X X X X X X X X W-2] X X X X X X X X X X X X X X CPVf X X X X X X X X X X X X X X vírus CPI1 X X X X X X X X X X X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X X X X X X X L. hrâtislâvâ* X X X X X L, autumalis* X X X X X X X X X X X X X X X L, australis* X X X X X X X X X X X X X X X L. hebdomdis* X X X X X X X X X X X X X X X L, canicola* X X X X X X X X X X X X X l. grippotyphosa* X X X X X X X X L, icteiohaemiihagiae* X X X X X X X X X L, pomona * X X X X L. hardjo* B, bronchiseptica^ X X X X X X X X X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 26 26 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) π
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 vírus CD* X X X X X X X X X X X X X X X X X CAV-2f X X X X X X X X X X X X X X X X X cpv' X X X X X X X X X X X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X X X X X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X X X X X X X X X X L, bratislava* X X X X L. âutumnâlis* X L. australis* X L, hebdomdis* X L. cânicolâ* X X X X X L, grippotypbosa* X X X X X X X X L. icterobaemribagiae* X X X X X X X X L, pomoaa * X X X X X X X L, hârdjo* X X B, broncbiseptica^ X X X X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 28 28 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 29
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 120 121 122 123 124 125 126 127 oo 0\] 129 130 131 132 133 134 135 136 vírus CD1 X X X X X X X X X X X X X W-2] X X X X X X X X X X X X X CPV1 X X X X X X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X X X X X X ccv1 X X X X X X X X X X X X L, bratislava* X X X X X X X X X X X X X X X L, autumalis* X L. australis* X L, hebdomdis* X L, cânicolâ* X L, grippotyphosa* X L, icterodaesiorrdagiae* X L. pomona * X L, hardjo* X X B. hronchisepticân X X 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 30 migénio de B, bronchisepticã (por exemplo, antigénio de p68) 31
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 vírus CDf X X X X X X X X W-2] X X X X X X X X X CPV1 X X X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X ccv1 X X X X X X X L. bratislava* X X X X X X X X X X X X X X X X X L. âutumnâlis* L, australis* l, hebdomdis* L, cânicolâ* L, gríppotyphosa* L. icterohâemorrhâgiâe* L, pomona * L. hardjo* B. bronchisepticân 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira nantigénio de B, bronchiseptica (por exemplo, antigénio de p68) 32
Quadro 1 (continuação): Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 oo 169 170 vírus CDf X X X X X X X X X X X X X CAV-2f X X X X X X X X X X X X X X X cpv' X X X X X X X X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X X X X X X X X ccv1 X X X X X X X X X X X X X L, bratíslava* X X X X X X X X X X X X X X X L. âutumnâlis* X X L, australis* X L, hebáomaáis* X L. canicola* L, grippotyphosa* L. icteroiiaemorrJiagiae* L. pomnâ * L. Jiardjo* B, bronchiseptica^ 'estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira 33 33 migénio de bronchisepticâ (por exemplo, antigénio de p68) 34
Quadro 1 (continuação : Composições imunogénicas exemplares da invenção
Combinação m 112 113 174 175 116 177 178 179 180 181 0\] oo vírus CD* X X X X X X X X X X X X CAV-2f X X X X X X X X X X X X cpv' X X X X X X X X X X X X vírus CPIf X X X X X X X X X X X X CCV1 X X X X X X X X X X X X L, bratislava* L. âutumnâlis* X X X X X X L. australis* X X X X X X L, hebdomdis* X L. cânicolâ* X X L, grippotyphosa* X X L, icterohâewrrhâgiae* X X L. pomna * X X L, íiardjo* X X B. hronchisepticân X estirpes atenuadas 'vírus inactivado * imunogénio de superfície celular de serovar de Leptospira nantigénio de B, bronchiseptica (por exemplo, antigénio de p68) 1
As combinações exemplares apresentadas no Quadro 1 acima não se destinam a serem limitativas. Por exemplo, a Combinação 1 apresentada no Quadro 1 significa que inclui composições imunogénicas que contêm antigénios de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis, bem como outros componentes imunogénicos não explicitamente listados no Quadro. Além disso, a Combinação 1 é também destinada a denotar uma composição imunogénica que contém antigénios de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis, e especificamente não inclui um ou mais dos componentes imunogénicos listados no Quadro 1 que não são marcados com um 'x' sob a Combinação 1.
Em vista dos ensinamentos apresentados no presente documento, as combinações adicionais podem ser facilmente feitas e testadas por peritos ordinários na especialidade.
Qualquer das formas de realização da composição imunogénica descritas na presente descrição pode ter ainda um ou mais transportadores ou diluentes farmaceuticamente ou veterinários aceitáveis. Em outras formas de realização, as composições imunogénicas podem compreender ainda pelo menos um adjuvante ou pelo menos um conservante ou qualquer combinação das mesmas. Preferentemente, as composições imunogénicas de acordo com estas formas de realização são uma preparação de vacina. Em certas formas de realização, as composições induzem uma resposta imune humoral contra um ou mais serovares de Leptospira, um ou mais imunogénios virais, ou um antigénio de B. bronchiseptica quando administrado a um indivíduo humano ou animal, preferentemente um hospedeiro canino, suíno ou bovino.
Ainda outra vacina de combinação preferida inclui uma estirpe atenuada de vírus CD, uma estirpe atenuada de CAV-2, uma estirpe atenuada de vírus CPI, uma estirpe atenuada de CPV, e um antigénio de p68 de Bordetella bronchiseptica recombinante. 2
FORMULAÇÕES E UTILIZAÇÕES
Como é apresentado no presente documento, a presente descrição proporciona uma composição imunogénica adequada para administração a um indivíduo, tal como um hospedeiro canino, suíno, ou bovino, para provocar uma resposta imune. A composição imunogénica da presente descrição pode incluir ainda um antigénio de Bordetella bronchiseptica, tal como p68 ou p68 recombinante, cuja composição é capaz de induzir uma resposta imune em, por exemplo, canino, suíno ou bovino. Outra forma de realização da presente descrição inclui uma composição que compreende dois ou mais antigénios de agentes patogénicos caninos, capazes de induzir uma resposta imune em cães contra doença causada por tal(is) agente(s) patogénico(s).
Contempla-se ainda que as composições imunogénicas da presente descrição exibem excelente actividade terapêutica, por exemplo, na prevenção de infecção por um ou mais agentes patogénicos de Leptospira, um ou mais agentes patogénicos virais, ou Bordetella bronchiseptica. Preferentemente, a composição de imunogénio multivalente é eficaz na mediação de uma resposta imune protectora quando administrado a um animal, tal como a um ser humano ou gado ou um animal de companhia, tal como suíno, bovino, ovino, caprino, equino, veado, vicugna, canino, felino, ou similares. A composição pode ser administrada de uma maneira conveniente tal como pelas vias oral, intravenosa (onde solúvel em água), intramuscular, subcutânea, intranasal, intradérmica ou supositório ou por meio de implantação (por exemplo, usando moléculas de libertação lenta) . Dependendo da via de administração, os imunogénios contidos na mesma podem ser requeridos que sejam revestidos num material para proteger os mesmos da acção de enzimas, ácidos e outras condições naturais que de outro modo poderiam inactivar os imunogénios. Com a finalidade de administrar a composição 3 por outra administração que não a parentérica, serão revestidas por, ou administradas com, um material para prevenir a sua inactivação. Por exemplo, o imunogénio pode ser administrado com um adjuvante, co-administrado com inibidores de enzima, ou em lipossomas. A composição da presente invenção pode também ser administrada parentericamente ou intraperitonealmente. Dispersões do componente imunogénio podem também ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, e misturas dos mesmos e em óleos. Sob condições ordinárias de armazenagem e utilização, estas preparações podem conter um conservante para prevenir o crescimento de microrganismos, tais uma gentamicina.
Como é usado no presente documento "transportador e/ou diluente farmaceuticamente aceitável ou veterinário aceitável" inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes de atraso de absorção e isotónicos e similares. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente activas é bem conhecida na técnica. Ingredientes activos suplementares, tais como antimicrobianos, podem também ser incorporados nas composições. 0 transportador pode ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido, e similares), misturas adequadas dos mesmos, e óleos vegetais. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela utilização de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e pela utilização de tensioactivos. A prevenção da acção de microrganismos pode ser efectuada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, e similares. Em muitos casos, 4 será preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo, açúcares ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injectáveis pode ser causada pela utilização nas composições de agentes de atraso de absorção, por exemplo, alumínio monoestearato e gelatina.
As soluções injectáveis estéreis são preparadas por meio da incorporação das composições de imunogénio multivalente da presente descrição na quantidade requerida do solvente apropriado com vários dos outros ingredientes enumerados no presente documento, conforme for requerido, seguido por esterilização por calor, irradiação ou outros meios de esterilização adequados. Geralmente, as dispersões são preparadas por meio da incorporação dos vários ingredientes activos esterilizados num veiculo estéril que contém o meio de dispersão básico e os outros ingredientes requeridos daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injectáveis estéreis, os métodos preferidos de preparação são secagem a vácuo e a técnica de secagem por congelamento que produzem um pó do ingrediente activo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir da solução filtrada previamente estéril do mesmo. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas em forma farmacêutica unitária para facilitar a administração e uniformidade de dosagem. Forma farmacêutica unitária como é usado no presente documento refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para os indivíduos mamíferos a serem tratados; cada unidade que contém uma quantidade predeterminada de material activo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o transportador farmaceuticamente ou veterinário aceitável requerido. A presente descrição também proporciona métodos de protecção de um indivíduo, tal como caninos, suínos, ou 5 bovinos, contra infecções bacterianas ou virais por meio da administração de uma composição de imunogénio multivalente como é descrito no presente documento.
Numa forma de realização adicional, a descrição proporciona uma composição imunogénica, como é descrito no presente documento, que contém ainda um antigénio de p68 de Bordetella bronchiseptica, que é adequado para a administração a, por exemplo, cães, e é capaz de proteger cães contra doença causada por Bordetella bronchiseptica, por exemplo, traqueobronquite infecciosa ("tosse de canil").
De acordo com a presente invenção, os antigénios de p68 adequados para utilização na presente invenção incluem tanto as proteínas p68 nativas (isto é, proteínas p68 de ocorrência natural purificadas de Bordetella bronchiseptica) e proteínas p68 recombinantemente produzidas. A purificação de p68 nativa de Bordetella bronchiseptica é conhecida na técnica (veja-se, por exemplo, Montaraz et ai., Infect. Immun. 47: 744-751, 1985, e Publicação de Patente US N° 2004/0185062) . A produção recombinante de p68 pode ser alcançada usando qualquer uma das técnicas de clonagem molecular e expressão recombinante conhecidas aos peritos na especialidade. Por exemplo, uma molécula de ácido nucleico que codifica p68 pode ser introduzida numa célula hospedeira apropriada, tal como uma bactéria, uma célula de levedura (por exemplo, uma célula de Pichia), uma célula de insecto ou uma célula de mamífero (por exemplo, célula CHO).
Preferentemente, as composições imunogénicas são formuladas para serem administradas por meio de injecção num volume de dosagem unitária de cerca de 0,1 a 5 ml, preferentemente num volume de dosagem unitária de cerca de 0,5 a cerca de 2,5 ml, ou ainda mais preferentemente num volume de dosagem unitária de cerca de 1 ml. Em certas formas de realização, as composições farmacêuticas da 6 presente invenção devem ser tornadas estéreis por procedimentos bem conhecidos. A quantidade do antigénio de B. bronchiseptica nas composições imunogénicas deve ser eficaz em provocar uma resposta imune e é geralmente proporcionada no intervalo de cerca de 0,5 a cerca de 1000 yg por dose. Preferentemente, a quantidade de antigénio de p68 é no intervalo de cerca de 1 yg a cerca de 260 yg por dose. Mais preferentemente, a quantidade de antigénio de p68 é no intervalo de cerca de 10 yg a cerca de 100 yg por dose. Ainda mais preferentemente, a quantidade de antigénio de p68 é cerca de 15 a cerca de 25 yg por dose.
As composições farmacêuticas que compreendem os imunogénios da descrição podem ser fabricadas por meio de processos de mistura, dissolução, granulação, formação de drageias, levigação, emulsificação, encapsulação, aprisionamento ou liofilização convencionais. As composições farmacêuticas podem ser formuladas de uma maneira convencional usando um ou mais transportadores fisiologicamente aceitáveis, diluentes, excipientes ou auxiliares que facilitam a formulação de derivados de lipopéptido antimicrobiano activo em preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. As composições de imunogénio multivalente podem ser combinadas com um ou mais agentes biologicamente activos e podem ser formuladas com um transportador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável para gerar composições farmacêuticas ou veterinárias da presente descrição.
Transportadores, diluentes ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis para utilização terapêutica são bem conhecidos na especialidade farmacêutica, e são descritos no presente documento e, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro, ed., 18a Edição, 1990) e em CRC Handbook of Food, Drug, and Cosmetic Excipients, CRC Press LLC (S.C. 7
Smolinski, ed., 1992). Em certas formas de realização, as composições imunogénicas podem ser formuladas com um transportador, diluente ou excipiente farmaceuticamente ou veterinário aceitável é aquoso, tal como água ou uma solução de manitol (por exemplo, cerca de 1% a cerca de 20%), hidrofóbica (por exemplo, óleo ou lipido), ou uma combinação dos mesmos (por exemplo, emulsões óleo e água). Em certas formas de realização, quaisquer das composições farmacêuticas descritas no presente documento têm um conservante ou estabilizante (por exemplo, um antibiótico) ou são estéreis.
As composições farmacêuticas da presente descrição podem ser formuladas para permitir que os imunogénios contidos na mesma estejam biodisponiveis após a administração da composição a um indivíduo. O nível de imunogénio no soro e outros tecidos após a administração pode ser monitorizado por várias técnicas bem estabelecidas, tais como ensaios cromatográficos ou à base de anticorpo (por exemplo, ELISA). Em outras formas de realização, as composições imunogénicas são formuladas para a administração parentérica a um indivíduo em necessidade da mesma (por exemplo, que tem infecção por bactérias Gram positivas), tal como um animal ou um ser humano. Vias preferidas de administração incluem administrações subcutânea e intramuscular. A formulação apropriada é dependente da via de administração escolhida, como é conhecido na técnica. Por exemplo, formulações sistémicas são uma forma de realização que inclui aquelas projectadas para a administração por meio de injecção, por exemplo, injecção subcutânea, intravenosa, intramuscular, intratecal ou intraperitoneal, bem como aquelas projectadas para a administração transdérmica, transmucosal, oral, intranasal, ou pulmonar. Numa forma de realização, a formulação sistémica é estéril. Em formas de realização para injecção, as composições imunogénicas da presente descrição podem ser formuladas em soluções aquosas, preferentemente em soluções fisiologicamente compatíveis ou tampões tais como solução de Hank, solução de Ringer, soluções de manitol ou tampão de solução salina fisiológica. Em certas formas de realização, qualquer das composições imunogénicas descritas no presente documento pode conter agentes de formulação, tais como agentes de suspensão, estabilização ou de dispersão. Alternativamente, as composições imunogénicas podem estar na forma sólida (por exemplo, pó) para constituição com um veículo adequado (por exemplo, água livre de pirogénio estéril) antes da utilização. Em formas de realização para a administração transmucosal, penetrantes, solubilizantes ou emolientes apropriados à barreira a ser permeada podem ser usados na formulação. Por exemplo, l-dodecilhexahidro-2H-azepin-2-ona (Azone®), ácido oleico, propileno glicol, mentol, dietilenoglicol etoxiglicol monoetil éter (Transcutol®), polisorbato polietilenosorbitan monolaurato (Tween®-20), e o fármaco 7-cloro-l-metil-5-fenil-3H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Diazepam), isopropilo miristato, e outros tais penetrantes, solubilizantes ou emolientes geralmente conhecidos na técnica podem ser usados em qualquer das composições da presente descrição. A administração pode ser alcançada usando uma combinação de vias, por exemplo, primeira administração usando uma via parentérica e subsequente administração usando uma via mucosal.
Em outro aspecto, a presente descrição proporciona métodos de protecção de um indivíduo contra infecções bacterianas ou virais, como é descrito no presente documento. De acordo com a presente descrição, a composição imunogénica proporciona cães com uma imunidade a longo prazo durante pelo menos cerca de 4 meses, preferentemente durante pelo menos cerca de 6 meses, ou ainda mais preferentemente durante cerca de um ano. 9 A composição imunogénica da presente invenção pode ser administrada a cães que têm pelo menos 6 semanas de idade, preferentemente pelo menos 7 semanas de idade, e mais preferentemente, pelo menos 8 ou 9 semanas de idade. Os cães podem ser vacinados com uma dose ou com mais de uma dose de uma composição imunogénica. Preferentemente, duas doses de uma composição imunogénica são administradas a cães com um intervalo de cerca de 2-4 semanas, preferentemente cerca de 3 semanas, entre as duas administrações. Se os cães forem vacinados antes da idade de 4 meses, é recomendado que sejam revacinadas com uma única dose após alcançar 4 meses de idade, porque os anticorpos maternais podem interferir com o desenvolvimento de uma resposta imune adequada em cachorros menos de 4 meses de idade. Os cães podem também ser revacinados anualmente com uma única dose. Quando a exposição de B. bronchiseptica é provável, tal como situações de criação, inspecção, e exposição, um reforço adicional pode ser dado dentro de 1 ano, ou preferentemente 6 meses, da ocorrência destes eventos.
De acordo com a presente descrição, as composições imunogénicas geralmente incluem um transportador veterinário aceitável. Como é descrito no presente documento, um transportador veterinário aceitável inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos, agentes retardantes da adsorção, e similares. Os diluentes podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol, e similares. Os agentes isotónicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol, e lactose, entre outros. Os estabilizantes incluem albumina, entre outros.
Preferentemente, a composição imunogénica é formulada tal que pode ser administrada a um indivíduo, tal como um 10 cão, por meio de injecção numa dose de cerca de 0,1 a 5 ml, ou preferentemente cerca de 0,5 a 2,5 ml, ou ainda mais preferentemente, numa dose de cerca de 1 ml.
As composições imunogénicas podem ser preparadas por meio da reidratação de uma preparação seca por congelamento das estirpes virais atenuadas (ou uma preparação feita por outros métodos tais como secagem por pulverização ou dessecação) e preparação virai com uma preparação liquida, cuja preparação liquida é composta dos antigénios de Leptospira, dissolvida em solução salina estéril e com adjuvantes. Tais composições imunogénicas podem também ser preparadas por meio da reidratação de uma preparação seca por congelamento das estirpes virais atenuadas e preparação virai de Leptospira (ou uma preparação feita por outros métodos tais como secagem por pulverização ou dessecação) com uma solução estéril, ou reidratação da preparação seca por congelamento com CCV mais diluente.
De acordo com a presente invenção, as composições imunogénicas podem ser administradas a um cão de pelo menos 6 semanas de idade, preferentemente pelo menos 7 semanas de idade, e mais preferentemente, pelo menos 8 ou 9 semanas de idade. As vacinas de combinação podem ser administradas em 2 a 4 doses, preferentemente em 2 a 3 doses. As doses podem ser administradas com 2 a 6 semanas entre cada dose, preferentemente com 2 a 4 semanas entre cada dose. O virus CD atenuado deve estar numa quantidade de pelo menos cerca de 102 a cerca de 109 TCID50 ( 50% de efeito citopático de dose infecciosa de cultura de tecido) por dose, e preferentemente no intervalo de cerca de 104 a cerca de 106 TCID50 por dose. O CAV-2 atenuado deve estar numa quantidade de pelo menos cerca de 102 TCID50 a cerca de 109 TCID50 por dose, preferentemente no intervalo de 104 a cerca de 106 TCID50 por dose. O virus CPI atenuado deve estar numa quantidade de pelo menos cerca de 102 TCID50 a cerca de 109 TCID50 por dose, e preferentemente no intervalo 11 de 106 a cerca de 108 TCID50 por dose. O CPV atenuado deve estar numa quantidade de pelo menos cerca de 102 TCID50 a cerca de 109 TCID50 por dose, preferentemente, uma quantidade no intervalo de 107 a cerca de 109 TCID50 por dose. A quantidade de CCV numa preparação virai inactivada deve ser pelo menos cerca de 100 unidades relativas por dose, e preferentemente no intervalo de 1000-4500 unidades relativas por dose. Cada espécie de Leptospira na vacina deve ser no intervalo de cerca de 100-3500 NU (unidades nefelométricas) por dose de vacina, e preferentemente no intervalo de 200-2000 NU por dose. Em certas formas de realização, unidades de dosagem compreendem pelo menos cerca de 1 x 106 TCID50, ou pelo menos cerca de lxlO7 TCID50 ou pelo menos cerca de 5xl07 TCID5o de virião morto ou inactivado completo ou subunidade ou porção do mesmo. Em certos aspectos destas unidades de dosagem de formas de realização podem compreender no máximo 1 X 109 TCID50 ou mais de virião morto ou inactivado completo ou subunidade ou porção do mesmo. Assim, um intervalo adequado de virião morto ou inactivado completo ou subunidade ou porção do mesmo é entre cerca de lxlO4 TCID5o e cerca de lxlO9 TCID5o.
Em outro aspecto, a presente descrição proporciona um kit farmacêutico de partes que compreendem uma composição imunogénica como definido no presente documento. O kit pode compreender ainda adicionalmente instrucções para utilização no tratamento de uma doença canina, suína, ou bovina (tal como leptospirose, como é descrito no presente documento). Os agentes activos da composição imunogénica podem ser co-embalados em forma farmacêutica unitária.
Os seguintes exemplos não limitativos são proporcionados para ilustrar vários aspectos da presente descrição. EXEMPLOS EXEMPLO 1 12
IMUNOGENICIDADE/EFICÁCIA DE LEPTOSPIRA BRATISLAVA NUMA
VACINA DE COMBINAÇÃO
INTRODUÇÃO
Este exemplo ilustra a imunogenicidade de L. bratislava e a falta de bloqueio de antigénio quando L. bratislava é adicionada a uma vacina de combinação. DA2PP/CvK/LCIGP é a designação dada a um produto de vacina de combinação que contém virus atenuado da esgana canina (virus CD), adenovirus canino do tipo 2 (CAV-2) atenuado, coronavirus canino (CCV) inactivado, virus atenuado da parainfluenza canina (virus CPI), e parvovírus canino (CPV) atenuado. A proteína capsular de membrana exterior (OMC) derivada de L. bratislava foi adicionada a DA2PP/CVK/LCIGP para produzir um novo produto de combinação designado DA2PP/CvK/LCIGPB.
Como é mostrado neste exemplo, proteína OMC de L. bratislava, quando misturada com DA2PP/CvK/LCIGP, foi eficaz na indução de imunidade protectora em cachorros contra um desafio de L. bratislava virulenta.
MATERIAIS E MÉTODOS SELECÇÃO ANIMAL ANIMAIS DE TESTE
Um total de 34 beagles (22 vacinados e 12 controlos), seis semanas a seis semanas e 6 dias de idade, foi utilizado neste estudo. Todos os cachorros foram comprados de Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, IN) e com teste negativo às fracções na vacina de combinação. Com base no intervalo de idade, os 34 cachorros foram divididos em dois lotes para a vacinação. Os cachorros de cada lote foram aleatorizados em grupos vacinados e de controlo usando o gerador de número aleatório de Microsoft Excel. Todos os vacinados foram vacinados duas vezes com um intervalo de 21 dias. Para assegurar que todos os cachorros foram desafiados simultaneamente, os cachorros do primeiro lote foram desafiados em 28 dias após a segunda vacinação (DPV2) 13 enquanto que o segundo lote de cachorros foi desafiado em 21 DPV2.
ALOJAMENTO E CUIDADO DE ANIMAIS
Os animais foram engaiolados até o final do estudo. 0 espaço de alojamento foi em conformidade com regulações aplicáveis de bem-estar animal.
VACINA DE TESTE COMPOSIÇÃO DE VACINA A proteína OMC de L. bratislava foi adicionada ao produto de combinação designado CvK/LCIGP (que contém coronavírus canino (inactivado), Leptospira canicola,
Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira grippotyphosa, e Leptospira pomona) para produzir um novo produto de combinação designado CvK/LCIGPB. 0 bolo, DA2PP que contém vírus da esgana canina, adenovírus canino do tipo 2, vírus da parainfluenza canina e parvovírus canino foi combinado com CvK/ LCIGPB para produzir um novo produto de embalagem de combinação designado DA2PP/CvK/LCIGPB. A concentração de proteína OMC de L. bratislava no produto de combinação final foi 50 pg/l ml de dose.
ARMAZENAGEM
As vacinas foram armazenadas entre 2 °C e 7 °C. PLANEAMENTO DE EXPERIÊNCIAS
Grupo Vacina Via de Desafio com L. bratislava Número de Animais Principal DA2PP/CvK/LCI GPB Intraperitoneal 22 Controlos Nenhuma Intraperitoneal 12
Os cachorros de cada ninhada foram aleatorizados, de acordo com a ninhada, em dois grupos como é mostrado no Quadro 2 a seguir usando o gerador de número aleatório de Microsoft Excel, então classificados de maneira ascendente: QUADRO 2: Planeamento de experiências_ 14
VACINAÇÃO
Deram-se a cada animal no grupo principal duas doses (1 ml/dose) da vacina atribuida subcutaneamente em lados opostos do pescoço separadas de três semanas.
As vacinas codificadas e amostras foram usadas para assegurar que o estudo seja cego.
DESAFIO EXPERIMENTAL A estirpe de desafio de L. bratislava foi a estirpe B26 P2 (fornecida pelo Center Veterinary Biologics Laboratory, Ames, IA). Para obter a quantidade suficiente e a boa viabilidade, os organismos de desafio foram cultivados em meio T-80 (Sulzer e Jones, U.S. Dept. of Health, Education and Welfare, Publ. N° (CDC) 76-8275, pp. 12-15, Center for Disease Control, Atlanta, GA) a 28 (±2) °C. Imediatamente antes do desafio, os organismos dotados de mobilidade foram contados e o número de organismos ajustado a 1 x IO10 organismo por dose para o desafio. Os cachorros nos grupos principal e de controlo foram desafiados, via a via intraperitoneal (IP), com L. bratislava virulenta. 0 volume de material de desafio foi ajustado a uma dose de desafio de 2,0 ml.
OBSERVAÇÕES E COLHEITA DE AMOSTRA OBSERVAÇÃO PRÉ-DESAFIO
Temperaturas rectais e sinais clinicos foram monitorizados e registados durante três dias consecutivos antes do desafio com a finalidade de assegurar condição saudável.
OBSERVAÇÃO APÓS O DESAFIO
Após o desafio, os animais foram monitorizados diariamente para temperaturas rectais e observados para quaisquer sinais clinicos possíveis associados a infecção por L. bratislava durante duas semanas e os resultados registados.
Os cachorros foram submetidos a eutanásia quando o estudo foi terminado e o fígado e rins foram examinados 15 para potenciais lesões graves associadas a infecção por L. bratislava.
PERFIL HEMATOLÓGICO
Após o desafio, as amostras de sangue anti-coaguladas (2 ml) foram colhidas diariamente de cada cachorro para monitorizar de contagem de leucócito total até 15 DPC, excepto 13 e 14 DPC quando o Cell-Dyne (contador de sangue) estava indisponível.
Trombócitos e leucócitos diferenciais foram contados usando o contador de sangue Cell-Dyne de Abbott ou um contador de célula automático.
ISOLAMENTO DE L. BRATISLAVA DE AMOSTRAS DE SANGUE
As amostras de sangue foram usadas para inocular meio de crescimento de Leptospira semi-sólido T-80. Os tubos inoculados foram incubados a 28(±2) °C durante um período de quatro semanas. Todas as culturas negativas foram subcultivadas em meio fresco e incubadas durante um período adicional de mais duas semanas antes de descartar como negativo. Todas as culturas foram examinadas semanalmente usando um microscópio de campo escuro para a presença de Leptospiras e os resultados registados. TESTES DE MICRO-AGLUTINAÇÃO (MAT) 0 anticorpo de aglutinação de soro a antigénio de célula completa de Leptospira foi medido usando o ensaio de micro-aglutinação. De maneira breve, diluições de duas vezes seriadas de soros foram preparadas em placas de microtitulação de fundo chato. A cada soro diluído, um volume igual (0,05 ml) de suspensão de L. icterohaemorrhagiae, L. canicola, L. grippotophysa, L. bratislava ou L. pomona viva (equivalente a uma leitura de nefelómetro de 20) foi adicionado. Controlos apropriados foram incluídos em cada placa. As placas foram agitadas durante 30 segundos e incubadas a temperatura ambiente durante duas horas antes dos resultados terem sido 16 registados. A titulação de cada soro foi definida como a reciproca da diluição mais alta de soro que produziu pelo menos 50 por cento de aglutinação.
ANÁLISE DE DADOS A unidade experimental foi o animal individual. Os resultados primários foram titulações de anticorpo e espiroquetemia. As percentagens de titulações de anticorpo e espiroquetemia para animais em cada grupo foram calculadas.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
NÍVEL DE ANTIGÉNIO DE L. BRATISLAVA
Cinquenta microgramas (50 pg) por dose de proteína capsular de membrana exterior (OMC) de L. bratislava foram carregados na vacina de imunogenicidade.
RESPOSTAS SEROLÓGICAS
As titulações de anticorpo de cachorros individuais foram registadas e analisadas. Em 0DPV1, todos os cachorros foram negativos com titulações de anticorpo inferior a 2. Com a excepção de um cachorro vacinado, todos os outros vacinados foram seropositivos a L. bratislava por 0DPV2 com titulação de média geométrica (GMT) de 17. Como outros serovares de leptospira, a GMT aumentou a 741 a 7DPV2, o pico de titulação após duas vacinações, e então gradualmente declinou a 405 e 222 a 14 e 21 DPV2, respectivamente. As titulações de anticorpo aumentaram substancialmente a 7 DPC em ambos os grupos de controlo e vacinado. Estes resultados indicam um forte efeito de reforço nos vacinados e imunoresposta dos controlos. Todos os 12 controlos permaneceram negativos até 21 DPV2, o dia de desafio. Estes dados mostraram que a fracção de L. bratislava no produto de combinação, DA2PP/CvK/LCIGPB é altamente imunogénico na indução de respostas imunes serológicas in vivo.
OBSERVAÇÕES CLÍNICAS 17
As temperaturas rectais, sinais clínicos, contagens de células sanguíneas brancas e contagens de plaquetas foram avaliados para todos os cachorros. Um cachorro teve um dia de descarga ocular. Outro cachorro teve um dia de depressão/letargia. Dois outros cachorros tiveram um dia de diarreia, e um cachorro teve um dia de con juntivite. Os outros cachorros permaneceram clinicamente normais após o desafio virulento. Nenhum dos cachorros teve temperaturas rectais elevadas ou diminuídas, contagens de células sanguíneas brancas ou contagens de plaquetas durante o estudo. Como outras leptospiras caninas, tais como Leptospira canicola canina, pomona e L. icterohaemorrhagiae, etc., L. bratislava em separado causa doença clínica mínima em cães livres de agente patogénico específico evidenciado por espiroquetemia. No entanto, quando é complicado com outros agentes patogénicos, stress, condições imunocomprometidas, e/ou ambiente de campo pobre, é provavelmente torne mais significativo ou mesmo impactos letais na saúde canina como é o caso com os serovares de leptospirose canina reconhecidas a muito mais tempo. Não haviam lesões graves observadas no rim e fígado após a conclusão do estudo.
ISOLAMENTO DE L. BRATISLAVA A espiroquetemia em seguida ao desafio de L. bratislava virulenta foi medida por cultura de sangue completo em meio T80. Com a excepção de um cachorro, todos os cachorros de controlo (11 dos 12 cachorros ou 92% cachorros de controlo) deram positivo para L. bratislava. Em contraste, somente um cachorro no grupo vacinado deu positivo com espiroquetemia. Em outras palavras, cerca de 95% (21 dos 22 cachorros) dos vacinados permaneceram livres de espiroquetemia após o desafio de L. bratislava virulenta. Estes dados demonstram que a vacina é imunologicamente potente na indução de imunidade protectora e protecção de cachorros contra a replicação da L. 18 bratislava virulenta após o desafio. Os resultados claramente mostraram que o antigénio da membrana exterior de L. bratislava é eficaz quando é misturado com outras fracções.
CONCLUSÃO
Relatórios recentes mostram prevalência aumentada de resultados de teste positivo de anticorpo entre cães vigiados para a exposição de L. bratislava. Estudos de caso suportam ainda uma associação entre L. bratislava e doenças renal e hepática em cães no campo. Para a maioria dos serovares de leptospira associados tradicionalmente a doença renal e hepática, a chave para a protecção tem sido a prevenção de espiroquetemia. 0 presente estudo demonstra que vacinação de L. bratislava pode ser esperada que tenha como resultado benefícios similares à saúde canina.
Os resultados do presente estudo demonstram que a proteína de membrana exterior de L. bratislava, quando misturada com as fracções de DA2PP/CvK/LCIGP (para formar DA2PP/CvK/LCIGPB), é potente e eficaz em cachorros de seis semanas de idade. A carga de antigénio mínima (50 pg/dose) foi suficiente para induzir a protecção de vacinados de espiroquetemia devido a desafio de L. bratislava virulenta. A eficácia de L. bratislava no produto de combinação DA2PP/CvK/LCIGPB foi demonstrada pela seroconversão de 100% de vacinados e nenhum dos controlos, e liberdade de espiroquetemia após o desafio virulento em 95% de vacinados e somente 8% dos controlos. A redução na espiroquetemia no sangue acoplada com a seroconversão nos vacinados em comparação com os controlos indica que as outras 9 fracções, tanto de antigénios mortos e vivos modificados, não interferiram com a eficácia de bacterina morta de L. bratislava em DA2PP/CvK/LCIGPB. EXEMPLO 2
VACINA QUE COMPREENDE LEPTOSPIRA BRATISLAVA, LEPTOSPIRA AUTUMNALIS, LEPTOSPIRA AUSTRALIS, E LEPTOSPIRA HEBDOMADIS 19
Neste exemplo, uma vacina de combinação é preparada por meio da obtenção primeiro dos polipéptidos capsulares de membrana exterior (OMC) isolados de cada de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, e L. hebdomadis usando métodos padrão disponíveis na técnica. Os polipéptidos OMC são então combinados na presença de um diluente veterinário aceitável numa concentração final de cerca de 50 pg de cada preparação de polipéptido OMC por 1 ml de dose.
Administram-se duas doses da vacina de combinação a 40 cachorros beagle num Grupo Experimental pela via intraperitoneal no dia 0 e no dia 21, enquanto se administra diluente somente a 40 cachorros beagle num Grupo de Controlo nos mesmos pontos de tempo.
Experimental Controlo Desafio: A B C D A B C D L. bratislava x X X L. autumnalis X X L. australis X X L. hebdomadis X X
Vinte e um dias após a segunda vacinação, os cachorros tanto no Grupo Experimental como no Grupo de Controlo são sub-divididos em quatro Sub-Grupos de 10 cachorros cada. Os Sub-Grupos são designados A, B, C ou D. Os cachorros em cada Sub-Grupo são desafiados com estirpes virulentas de Leptospira como é mostrado no Quadro a seguir:_
Após o desafio, os cachorros em ambos os Grupos são monitorizados diariamente para temperaturas rectais e quaisquer sinais clinicos possíveis associados a infecção por L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, ou L. hebdomadis. Além disso, as amostras de sangue são colhidas diariamente de cada cachorro em ambos os Grupos durante 21 dias após o desafio. As amostras de sangue são ensaiadas para células bacterianas (L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, ou L. hebdomadis) e para anticorpo de 20 aglutinação de soro a antigénio de célula completa de Leptospira usando o ensaio de micro-aglutinação.
Uma vacina de combinação eficaz de acordo com este exemplo produzirá um ou mais dos seguintes efeitos: (a) a presença de anticorpos contra pelo menos um de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, ou L. hebdomadis, com titulações de anticorpo de pelo menos entre 10 a 500 a 0 a 21 dias após a segunda vacinação (antes do desafio) ; (b) sintomas clínicos inferiores de infecção de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, ou L. hebdomadis em seguida ao desafio com a(s) respectiva(s) estirpe(s) virulent(s), em comparação com os sintomas clínicos observados em cachorros de controlo que não receberam a vacina de combinação; e/ou (c) isolamento reduzido de células vivas de L. bratislava, L. autumnalis, L. australis, ou L. hebdomadis do sangue de cachorros desafiados em comparação com a quantidade de células vivas isoladas do sangue de cachorros de controlo.
REFERÊNCIAS 1. Rentko VI, Clark N, Ross LA, et al. Canine leptospirosis: a retrospective study of 17 cases. J. Vet Intern Med 1992; 6:235-244. 2. Nielsen JN, Cochran GK, Casseis JA, et al. Leptospira interrogans serovar bratislava infection in two dogs. J Am Vet Med Assoe 1991; 3:351-352. 3. Harkin KR, Gartrell CL. Canine leptospirosis in New Jersey and Michigan: 17 cases (1990-1995). J Am Anim Hosp Assoe 1996; 32:495-501. 4. Adin CA e Cowgill LD. Treatment and outeome of dogs with leptospirosis: 36 cases (1990-1998). J Am Vet Med Assoe 2000; 216: 371-375.
Todas as publicações e patentes mencionadas nesta memória descritiva são indicativas do nível de habilidade dos peritos na especialidade ao qual pertence esta invenção. 21
DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO
Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.
Documentos de patente referidos na descrição •WO 2006038115 A [0006] •US 20022004 B [0007] •US 6340464 B [0020] •US 6610310 B [0020] •US 4567042 A [0027] •US 4567043 A [0027] •US 20040185062 B [0054]
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Claims (14)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição imunogénica, que compreende uma proteína capsular da membrana exterior (OMC) de Leptospira bratislava, e que compreende ainda um produto de vacina de combinação que contém (i) um imunogénio virai de uma estirpe atenuada de vírus da esgana canina (CD), (ii) uma estirpe atenuada de adenovírus canino do tipo 2 (CAV-2), (iii) uma preparação de célula parcial ou completa inactivada de uma estirpe de coronavírus canino (CCV), (iv) uma estirpe atenuada do vírus da parainfluenza canina (CPI), e (v) uma estirpe atenuada de parvovírus canino (CPV).
2. A composição de acordo com a reivindicação 1, que compreende ainda uma proteína OMC de Leptospira autumnalis, Leptospira australis, e Leptospira hebdomadis.
3. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, que compreende ainda uma OMC de Leptospira conicola, Leptospira grippotyphosa, e Leptospira icterohaemorrhagiae.
4. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-3, que compreende ainda um antigénio de Bordetella bronchiseptica.
5. A composição de acordo com a reivindicação 4, em que o antigénio de B. bronchiseptica é um antigénio de p68.
6. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a composição é capaz de 2 provocar uma resposta imune protectora contra infecçao por L. bratislava num hospedeiro.
7. A composição de acordo com a reivindicação 6, em que o hospedeiro é um hospedeiro canino, suíno, ou bovino.
8. A composição de acordo com a reivindicação 7, em que o hospedeiro é um hospedeiro canino.
9. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, que compreende ainda um transportador veterinário ou farmaceuticamente aceitável, excipiente, ou diluente.
10. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, que compreende ainda um conservante.
11. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, que compreende ainda um adjuvante.
12. A composição de acordo com a reivindicação 11, em que o conservante é um antibiótico.
13. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, para utilização como uma vacina num animal.
14. A composição de acordo com a reivindicação 13 para a utilização definida na dita reivindicação, em que o animal é um canino.
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