PT1913009E

PT1913009E - Novos (tio)carbamatos de benzimidazole com actividade antiparasitária e sua síntese

Info

Publication number: PT1913009E
Application number: PT06777837T
Authority: PT
Inventors: Christophe Pierre Alain Chassaing
Original assignee: Intervet Int Bv
Priority date: 2005-07-28
Filing date: 2006-07-18
Publication date: 2010-06-25
Also published as: WO2007014846A1; EP1913009A1; US20090131369A1; ES2344275T3; CA2616512A1; JP2009502858A; JP5227795B2; TW200740838A; ATE467637T1; PL1913009T3; EP1913009B1; DK1913009T3; US7893271B2

Description

ΕΡ 1 913 009/ΡΤ DESCRIÇÃO "Novos (tio)carbamatos de benzimidazole com actividade antiparasitária e sua síntese" 0 presente invento refere-se a novos (tio)carbamatos de benzimidazole com actividade antiparasitária.

Os benzimidazoles foram originalmente desenvolvidos como fungicidas vegetais e mais tarde como anti-helmínticos veterinários e humanos. Uma família de benzimidazoles com actividade anti-helmíntica inclui benzimidazoles de tiazolilo e carbamatos de benzimidazole. Os benzimidazoles exibem um amplo espectro de actividade contra parasitas helmintas. Benzimidazoles bem conhecidos com actividade contra helmintas são por exemplo tiabendazole; cambendazole; e carbamatos de benzimidazole, tais como parbendazole (US 3480642), mebendazole (US 3657267), flubendazole (US 3657267), fenbendazole (US 3954791), oxfendazole (US 3929821), oxibendazole (US 3574845), albendazole (US 3915986), ricobendazole (sulfóxido de albendazole) (US 3915986) e luxabendazole (US 4639463), em que todos diferem nos substituintes no núcleo original de benzimidazole. Os carbamatos de benzimidazole também são divulgados em US 5459155.

Julga-se que os benzimidazoles devem a sua actividade ao facto de bloquearem a polimerização da beta-tubulina em microtúbulos. Isto afecta as funções de transporte das células no parasita e em última análise mata o parasita.

Também foram desenvolvidas prodrogas de fenilguanidina que são metabolicamente transformadas em benzimidazoles anti-helmínticos. Por exemplo, o febantel (US 3993682) é uma prodroga que é convertida em fenbendazole, e a netobimina (US 4406893) origina albendazole.

Os benzimidazoles são geralmente pouco solúveis em água. São administrados de modo per oral como uma suspensão, pasta ou pó, ou por injecção intra-ruminal (McKellar and Scott, J. Vet. Pharmacol. Therap., 13, 223-247, 1990). O facto dos benzimidazoles, e em especial os carbamatos de benzimidazole, 2

ΕΡ 1 913 009/PT serem pouco solúveis em água limita a sua aplicação. Em particular, a solubilidade dos carbamatos de benzimidazole é extremamente baixa, provavelmente devido à presença do grupo carbamato na porção benzimidazole. Estes compostos são praticamente insolúveis em água. Para algumas aplicações úteis dos compostos, tais como a utilização em aplicações de aquacultura e aplicações em água potável, a fraca solubilidade dos benzimidazoles é um obstáculo principal.

Muitos esforços têm sido desenvolvidos para resolver o problema da fraca ou nula solubilidade aquosa dos (carbamatos)benzimidazoles. Têm também sido feitas tentativas para proporcionar derivados de benzimidazole mais solúveis (prodrogas, que são metabolizadas no composto activo). A eficácia de uma prodroga depende de muitos factores, tais como a velocidade e extensão a que a prodroga é convertida na substância activa e o sitio desta transformação. Além disso, a prodroga deveria possuir uma elevada solubilidade em água ao pH de máxima estabilidade e suficiente estabilidade aquosa antes da aplicação. É claro que a prodroga deveria ser bem tolerada e não ser mais tóxica que o composto activo.

Foram desenvolvidos esforços em relação a prodrogas de benzimidazole no contexto da utilização de benzimidazoles no combate a infecções sistémicas, por exemplo com a fase larvar de cestodos, Echinococcus multicularis e E. granulosis. Nestes casos, os níveis das drogas no plasma e nos tecidos são importantes, dado que para actuarem sistemicamente, os benzimidazoles têm de ser absorvidos na corrente sanguínea.

Certas prodrogas de albendazole são descritas por Hernández-Luis et al. em Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 11, 1359-1362, 2001. Hernández-Luis et al. tentaram melhorar a solubilidade de albendazole através da síntese de três derivados de N-acilo e dois de N-alcoxicarbonilo. Estes derivados foram desenvolvidos sobretudo no contexto da utilização de prodrogas de albendazole para algumas infestações situadas em tecidos tais como triquinelose, cisto hidático (equinococose) e neurocisticercose, em que são requeridas doses elevadas e um tratamento prolongado, devido à pobre solubilidade e absorção do albendazole. 3 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Outro grupo, Nielsen et al. (Acta Pharm. Nord., 4(1), 43-49, 1992) produziu prodrogas de tiabendazole por N-acilação da porção benzimidazole com vários cloroformatos, assim como por acilmetilação, também com o objectivo de aumentar a solubilidade dos benzimidazoles para utilização contra cisto hidático. Foi referido que um derivado de N-(4-amino-metilbenzoil)oximetilo apresentou uma solubilidade em água aumentada 300 vezes. No entanto, este tipo de composto não é particularmente estável em relação a hidrólise e seria portanto inadequado, por exemplo, para aplicações em água potável. A sua solubilidade também ainda é insuficiente para ser utilizada em aplicações em água potável. Além disso, deve ser notado que o ácido 4-aminometilbenzóico foi utilizado como agente antibrinolitico (Kloecking, H.P.; Markwardt, F., Haematologia, Supplement 1, 175-9, 1970), sugerindo que a pro-porção cindida não é farmacologicamente inactiva. O grupo de Nielsen também relatou derivados N-alcoxicarbonilo de mebendazole em Int. J. Pharm., 104, 175-179, 1994.

Bases de Mannich de albendazole e fenbendazole foram preparadas por Dhaneshwar et al., Indian drugs, 28(1), 24-26, 1990, utilizando várias aminas secundárias tais como dimetilamina, dipropilamina, pirrolidina, piperazina, etc. Outras bases de Mannich são descritas em Garst et al. (US 6093734) . No entanto, a actividade real não foi demonstrada para as bases de Mannich, e estes derivados exibem uma estabilidade em água muito baixa.

Existem prodrogas de albendazole solúveis em água, nomeadamente netobimina. Mas embora a netobimina seja solúvel em água, foi relatado que provoca toxicidade embrional.

Em WO 9312124 é discutida outra classe de benzimidazoles, nomeadamente compostos de 2-[[(3,4-dialcoxi-2-piridinil)-metil]sulfonil]-1(H)-benzimidazole-l-ilo substituídos. Estes benzimidazoles são inibidores da secreção de ácido gástrico (inibidores da bomba de protões) e estruturalmente assemelham-se aos bem conhecidos inibidores de secreção de ácido gástrico como omeprazole e lansoprazole. Em contraste com os carbamatos de benzimidazole, que são praticamente insolúveis em água, os inibidores da bomba de protões de benzimidazole 4 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ sao marcadamente mais solúveis em água. Por exemplo, o omeprazole possui uma solubilidade de 500 pg/ml.

Em WO 9312124 são listados derivados destes inibidores da bomba de protões que são modificados para conter um grupo fosfonooximetilo ligado como um N-substituinte na posição 1 no núcleo de benzimidazole. Os compostos assim modificados possuem o efeito benéfico de não bloquearem a absorção de iodo na glândula tiróide. Além disso, refere-se que os compostos possuem uma elevada solubilidade e estabilidade química em água. Crê-se que estes compostos são metabolizados no N-substituinte na posição 1 do núcleo de benzimidazole antes de exercerem o seu efeito, o que de facto os torna prodrogas. Foi preparado um xarope para administração oral dos compostos contendo 1 g/L, assim como uma solução para administração intravenosa contendo 4 mg/mL e 6 mg/mL.

Os carbamatos de benzimidazole anti-helmínticos tais como fenbendazole possuem solubilidades muito menores, sendo mesmo inferiores a 0,05 pg/mL (Nguomo, A.J., PhD. Thesis, 1983, citado por McKellar et al. em J. Vet. Pharmacol. Therap. 1990, 13, 223-247).

Dado que carbamatos de benzimidazole são administrados a, por exemplo, aves e porcos em quintas de grande produção, seria conveniente que os compostos pudessem ser administrados via água potável medicada. No entanto, devido à sua muito baixa solubilidade, a administração via água potável é altamente problemática.

Para aplicações em água potável, tem sido desenvolvido um grande esforço para encontrar uma formulação adequada para os compostos que assegure uma dosagem precisa. O problema com as suspensões e emulsões de drogas insolúveis em água é que, para assegurar um doseamento preciso via um sistema de água potável, a suspensão ou emulsão tem de ser uniforme e muito estável. Por exemplo, EP 1214052 refere-se a uma suspoemulsão para flubendazole, que se destina a utilização em aplicações em água potável.

Em vez de preparar uma suspensão ou emulsão, seria mais conveniente que pudessem ser proporcionadas alternativas 5 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ solúveis em água, por exemplo derivados modificados dos compostos activos originais não solúveis, gue ainda possuíssem a desejada actividade, ou gue fossem convertidos in vivo nas substâncias activas actuais. Mas especialmente as aplicações em água potável reguerem uma solubilidade muito elevada. Para uma aplicação em água potável de qualquer droga, normalmente é necessário produzir primeiro um concentrado, o que requer uma solubilidade da droga ainda superior. 0 composto deveria também dissolver-se num curto período de tempo. Além disso, se qualquer composto que é administrado via água potável não se dissolve de modo conveniente ou se deposita após algum tempo, pode acumular-se nas tubagens de um sistema de água potável, e todo o sistema pode ficar colmatado.

Como a água potável pode repousar em tanques ou tubagens de um sistema de água potável durante um período de tempo prolongado, os compostos que são dissolvidos também necessitam ser quimicamente muito estáveis. Se os compostos não são quimicamente estáveis durante um período de tempo prolongado, nenhuma ou uma insuficiente quantidade do presente composto activo pode chegar aos animais que bebem a água.

Especialmente para aplicações em água potável, é requerida uma estabilidade de pelo menos 8 horas a uma gama de pH de 5 a 9.

Uma directiva sobre "aspectos da qualidade de medicamentos farmacêuticos veterinários para administração via água potável" (EMEA/CVMP/540/03) foi publicada pela European Medicines Agency (EMEA). Nesta directiva são reflectidos dados requeridos para produtos medicinais veterinários que são administrados na água potável para animais. A directiva proporciona, por exemplo, critérios para a estabilidade e solubilidade dos produtos e tempo necessário para a sua completa dissolução.

Assim, especialmente para drogas que se destinam a ser administradas via sistemas de água potável, tais como os utilizados em grandes instalações de produção animal, existem muitas restrições que limitam a adequabilidade de muitas 6

ΕΡ 1 913 009/PT drogas, e especialmente dos carbamatos de benzimidazole, para este propósito particular. 0 presente invento proporciona novos (tio)carbamatos de benzimidazole que se dissolvem prontamente em água, são quimicamente estáveis, e proporcionam excelente actividade antiparasitária. Os compostos de acordo com o invento são adequados para as mesmas aplicações terapêuticas que os carbamatos de benzimidazole do estado da técnica, e são especialmente adequados para uso como anti-helminticos. O presente invento proporciona compostos da seguinte fórmula geral:

Fórmula I

em que X1 e X2 são S ou 0, em que preferivelmente pelo menos um dos dois é 0, e muito preferivelmente são ambos 0; Y1 e Y2 são S ou 0, em que preferivelmente pelo menos um dos dois é 0, e muito preferivelmente são ambos 0.

Os compostos preferidos de acordo com o invento são carbamatos de benzimidazole substituídos com N-fosfono-oximetilo que cabem na fórmula geral I, isto é, compostos em que X1 e X2, assim como Y1 e Y2, são 0. R1 é alquilo possuindo 1-4 átomos de carbono, preferivelmente metilo; R2, R3 e R4 são independentemente entre si hidrogénio ou um catião, sendo o catião preferivelmente sódio, potássio ou amónio. Compostos preferidos de acordo com o invento são sais, isto é, compostos em que um ou mais de R2, R3 e R4 são catiões. Isto inclui sais em que, por exemplo, R2 é H e R3 e 7

ΕΡ 1 913 009/PT R4 são sódio, e aqueles em que os três de R2, R3 e R4 são sódio, assim como misturas de, por exemplo, sais di- e tri-sódicos; R5 e R6 são ambos independentemente hidrogénio ou halogéneo ou alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, preferivelmente 1-6, muito preferivelmente 4 átomos de carbono, em que os compostos mais preferidos são ésteres metilicos de ácido (5- e 6-butil-l-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (parbendazole substituídos com N-fosfonooximetilo), ou -0R7, em que R7 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, preferivelmente 1-6, muito preferivelmente 3 átomos de carbono, em que os compostos preferidos são ésteres metilicos de ácido (1-fosfonooximetil-5- e 6-propoxi-l(H)-benzo-imidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (oxibendazole substituído com N-fosfonooximetilo), ou em que R7 é um arilo, preferivelmente um grupo fenilo que pode ser substituído ou não substituído; -SR8, em que R8 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, preferivelmente 1-6, muito preferivelmente 3 átomos de carbono, em que os compostos mais preferidos são ésteres metilicos de ácido (1-fosfonooximetil-5- e 6-propilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (albendazole substituído com N-f osf onooximet ilo) , ou em que R8 pode ser arilo, preferivelmente um grupo fenilo que pode ser substituído ou não substituído, em que os compostos preferidos são ésteres metilicos de ácido (5- e 6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (fenbendazole substituído com N-fosfonooximetilo); -CO-R9, em que R9 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono ou cicloalquilo possuindo 3-6 átomos de carbono, sendo os compostos mais preferidos ésteres metilicos de ácido (5- e 6-ciclopropanocarbonil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzo-imidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (ciclobendazole substituído com N-fosfonooximetilo), ou R9 é arilo, preferivelmente um grupo 8 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ fenilo substituído ou não substituído, em que os compostos preferidos são ésteres metílicos de ácido (5- e 6-benzoíl-l-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (mebendazole substituído com N-fosfonooximetilo), e, quando o grupo fenilo é substituído, são preferidos substituintes halo tais como flúor, os quais podem estar na posição para- e os compostos preferidos são ésteres metílicos de ácido [5- e 6-(4-fluoro-benzoí1)-1-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il]-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (flubendazole substituído com N-fosfonooximetilo), ou -0SC>2-Ar, em que Ar é arilo, preferivelmente um grupo fenilo substituído ou não substituído, e preferivelmente é substituído na posição 4 por um átomo de flúor, e os compostos mais preferidos são ésteres 2-metoxicarbonilamino-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-5- e β-ílicos de ácido 4-fluorobenzenossulfónico ou uma sua mistura e muito preferivelmente seus sais (luxabendazole substituído com N-fosfonooximetilo), ou -S(0)R10, em que R10 pode ser alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, preferivelmente 3 átomos de carbono, em que os compostos preferidos são ésteres metílicos de ácido [1-fosfonooximetil-5- e 6-(propano-l-sulfinil)-1(H)-benzo-imidazol-2-il]-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (ricobendazole substituído com N fosfonooximetilo) ou em que R10 pode ser arilo, preferivelmente um grupo fenilo substituído ou não substituído, e os compostos preferidos são ésteres metílicos de ácido (5- e 6-benzenossulfinil-l-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico ou uma sua mistura, e muito preferivelmente seus sais (oxfendazole substituído com N-fosfonooximetilo).

Preferivelmente, R5 é H e R6 está ligado à posição 5- ou 6- do núcleo de benzimidazole. Os grupos alquilo podem ser lineares ou ramificados, por exemplo metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, tert-butilo, hexilo e octilo, e podem opcionalmente ser substituídos, por exemplo com um substituinte halo. Em compostos preferidos do invento contendo um alquilo, o alquilo é de cadeia linear e não substituído. 0 9

ΕΡ 1 913 009/PT termo arilo significa um grupo hidrocarboneto aromático possuindo 6-14 átomos de carbono, tais como fenilo, naftilo, que pode ser opcionalmente substituído com um ou mais substituintes, tais como hidroxi, halogéneo, nitro, ciano, amino, alquilo, alcoxi, amino, desde que não afecte a actividade antiparasitária do composto. Em compostos preferidos do invento contendo um grupo fenilo, o referido fenilo é não substituído ou substituído com um substituinte halo.

Alguns dos compostos dentro da fórmula geral acima descrita de acordo com o invento, podem, como resultado da via sintética escolhida, existir como uma mistura de regioisómeros. Por exemplo, pode ser sintetizada uma mistura de compostos em que R6 está ligado à posição 5- no núcleo de benzimidazole e posição 6- no núcleo de benzimidazole, respectivamente. Para além dos regioisómeros puros, é claro que se subentende que tais misturas compreendendo diferentes regioisómeros são parte do presente invento. Alguns dos compostos de acordo com o invento podem conter um ou mais centro quirais, formando enantiómeros opticamente activos. Pretende-se que a fórmula geral (Fórmula I) inclua os enantiómeros individuais, assim como misturas de enantiómeros.

Os compostos do invento são altamente solúveis e estáveis em água. Por exemplo, uma mistura de sais dissódicos de ésteres metílicos de ácido (5- e 6-fenilsulfanil-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico possui uma solubilidade em água de 132 mM (67 g/L) . Além disso, outros compostos de acordo com o invento tais como sais sódicos de albendazole, mebendazole, flubendazole e luxabendazole substituídos com N-fosfonooximetilo possuem solubilidades aquosas de pelo menos 50 mM.

Além disso, verificou-se que os compostos de acordo com o invento são estáveis durante mais de 8 horas a pH 5 e a pH 9, que são os limites de pH inferior e superior a que os compostos deveriam ser estáveis durante mais de 8 horas para serem adequados para aplicações em água potável.

Além disso, os compostos do presente invento possuem uma excelente actividade antiparasitária, e especialmente anti-helmíntica in vivo, que é comparável à dos carbamatos de 10

ΕΡ 1 913 009/PT benzimidazole insolúveis em água do estado da técnica, tais como albendazole e fenbendazole.

Os compostos do invento são portanto especialmente úteis para administração via água medicada a humanos e animais, tanto animais de produção alimentar (por exemplo gado bovino, porcos, aves de aviário ou peixe), assim como animais de companhia. A administração de água medicada é prática comum no tratamento de aves e porcos alojados em grandes quintas de produção. Mas também para administração a animais individuais a administração via água medicada pode ser adequada. Os compostos do invento são especialmente úteis como anti-helmínticos. 0 presente invento permite assim a administração de benzimidazoles anti-helminticos via água medicada.

Embora os compostos de acordo com o invento sejam especialmente adequados para administração via água medicada devido à sua elevada solubilidade, podem de modo similar ser administrados via qualquer outra via adequada, oral ou outra, por exemplo por injecção. Quando administrados oralmente, os compostos podem também ser misturados através de alimentos, ou formulados em pilulas, cápsulas, bólus ou similares. Embora, para os compostos de acordo com o invento, as vias de administração oral sejam preferidas, também é possível o tratamento através de outras vias de administração, por exemplo parentérica. Por exemplo, para animais de estimação, pode ser também possível a administração subcutânea ou intramuscular.

Os compostos podem ser utilizados isolados ou em formulações ajustadas para a utilização específica e para os parasitas ou hospedeiros específicos envolvidos. Os compostos de acordo com o invento podem ser utilizados isolados, como o único ingrediente activo numa formulação, ou juntamente com outros agentes terapêuticos. A formulação e a via de administração irão depender da doença e do método de tratamento. Tais formulações podem ser preparadas de uma maneira padrão de acordo com as práticas médicas veterinárias ou humanas convencionais. 0 presente invento engloba ainda uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de acordo com o invento. 11 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Tais composições podem conter adicionalmente quaisquer auxiliares necessários farmaceuticamente aceitáveis, tais como um portador, estabilizante ou outros excipientes, e opcionalmente outros aqentes terapêuticos. 0 termo "aceitável" significa ser compatível com os outros ingredientes da composição e não ser prejudicial para os seus recipientes.

Um portador pode ser um diluente líquido ou um sólido. Qualquer portador farmacêutico convencional que não interfira com o desempenho do ingrediente activo pode ser empregue nas preparações de acordo com o presente invento.

As drogas solúveis a serem administradas via água potável podem ser fornecidas como grânulos ou pó para solução ou como um pré-concentrado para solução oral. As formulações destinadas a utilização oral podem conter agentes aromatizantes, agentes corantes, agentes conservantes e similares. Podem preparar-se cápsulas, bólus e comprimidos através de mistura do composto(s)/substância(s) activo(a)(s) com um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável.

Para administração parentérica, o composto pode ser dissolvido ou disperso num veículo portador líquido. Podem ser utilizadas soluções salinas isotónicas e soluções injectáveis esterilizadas, contendo agentes estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis. Se necessário, pode adicionar-se um conservante. A quantidade ou concentração eficaz dos compostos do invento pode variar e está dependente das necessidades individuais. A quantidade mínima está dependente do efeito desejável e o máximo é determinado pelos efeitos secundários indesejados. A dose concreta depende do tipo e gravidade da infecção. A dose específica é influenciada por muitos factores tais como a actividade do composto empregue, e da espécie, idade, peso corporal, saúde geral, dieta, tempo de administração, via de administração, etc.

Os compostos do presente invento podem ser preparados seguindo a sequência sintética descrita em seguida: 12 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

No primeiro passo, um sal adequado de um (tio)carbamato de benzimidazole II funcionalizado, tal como um sal de sódio, potássio ou litio, reage com um diéster de ácido fosfórico III substituído com um grupo metileno suportando um grupo de saída, Q, tal como cloro, bromo, iodo, tosilato ou mesilato, para proporcionar um composto de Fórmula IV, em que R11 e R12 são grupos protectores.

Grupos protectores adequados são conhecidos dos peritos na especialidade, e podem por exemplo ser alquilo tal como tert-butilo, ou fenilo ou benzilo. Este tipo de fosfato III pode ser preparado utilizando procedimentos da literatura (por exemplo Tetrahedron Letters; 2002, 43, 3793). A formação do sal alcalino de (tio)carbamato de benzimidazole pode ser conseguida através da adição de uma base como hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidreto de sódio ou hidreto de potássio ao (tio)benzimidazole II a uma temperatura variando entre -10 e 30°C, num solvente adequado, preferivelmente um solvente orgânico, por exemplo N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, N-etilpirrolidina, tetra-hidrofurano ou dioxano. A reacção do sal assim obtido com o triéster de fosfato III pode ser realizada a temperaturas que variam de 0 a 80°C, preferivelmente entre 10 e 50°C. Dependendo da temperatura a que a reacção é realizada, o tempo de reacção pode variar entre 1 e 24 horas. Dependendo do tipo de (tio)carbamato de benzimidazole reagido, o electrófilo deveria ser adicionado ao nucleófilo, ou a adição deveria ser conseguida de modo inverso. 13 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

No segundo passo, os intermediários IV podem então ser hidrolisados para gerar compostos I (nos quais Fd, R3 e R4 são todos H) pela adição de um ácido, tal como ácido acético, ácido trifluoroacético ou ácido clorídrico, opcionalmente num solvente orgânico, tal como éter dietílico, tetra-hidrofurano, dioxano ou diclorometano a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 50°C.

Num terceiro passo opcional, os produtos isolados podem depois ser convertidos nos seus sais correspondentes I (nos quais pelo menos um de R2, R3 e R4 é um catião, preferivelmente sódio, potássio ou amónio) pela adição de uma base, tal como alcóxido de sódio, hidróxido de sódio, alcóxido de potássio, hidróxido de potássio ou amoníaco. A reacção pode ser realizada em água ou num solvente orgânico, tal como metanol, etanol, isopropanol, tert-butanol ou suas misturas.

Exemplos

Exemplo 1: Síntese de sal dissódico de éster metílico de ácido (5-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 6 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)- carbâmico 7

Os compostos podem ser sintetizados utilizando a seguinte sequência de síntese geral:

Passo A: Síntese de éster di-tert-butil-clorometílico de ácido fosfórico 1

De acordo com um procedimento da literatura (Tetrahedron Letters; 2002, 43, 3793), o composto 1 foi preparado do modo seguinte: Dissolveram-se di-tert-butilfosfato de potássio (6,35 g), hidrogenossulfato de tetra-n-butilamónio (917 mg) e bicarbonato de sódio (8,96 g) em água (230 mL) . Adicionou-se 14

ΕΡ 1 913 009/PT diclorometano (130 mL) e a mistura resultante foi arrefecida a 0°C. Juntou-se uma solução de clorometilclorossulfato (917 mg) em diclorometano (100 mL) , lentamente e sob agitação vigorosa. Deixou-se a mistura reaccional atingir a temperatura ambiente e manteve-se a agitação durante a noite a esta temperatura. A fase orgânica foi depois separada, lavada com salmoura (50 mL) , seca sobre Na2SC>4 e concentrada sob vácuo. O desejado produto 1 foi obtido como um óleo incolor (2,4 g). Éster di-tert-butil-clorometilico de ácido fosfórico 1. Óleo incolor, 1H-RMN (CDC13) δ 5,65 (d, J=15,0 Hz, 2H) , 1,52 (s, 18H) ; 13C-RMN (CDCI3) δ 84,2 (d, J=7,6 Hz), 73,3 (d, J=6,9 Hz), 29,8 (d, J=4,3 Hz); 31P-RMN (CDC13) δ -11,8.

Passo B: Sintese de éster metilico de ácido [l-(di-tert-butoxi-fosfonooximetil)-5-fenilsulfanil-1(H)-benzo-imidazol-2-il]-carbâmico 2 e éster metilico de ácido [l-(di-tert-butoxi-fosfonooximetil)-6-fenilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il]-carbâmico 3

Dissolveu-se éster metilico de ácido (5-fenilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico (2 g) em dimetilformamida (200 mL), e juntou-se uma suspensão de hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (960 mg) . A resultante solução verde foi agitada durante 45 min a temperatura ambiente e adicionou-se lentamente uma solução de éster di-tert-butil-clorometilico de ácido fosfórico (2,3 g) em dimet ilf ormamida (100 mL) . A reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi depois diluída com diclorometano (600 mL). A fase orgânica foi depois sequencialmente lavada com água (300 mL), NaHCCg aquoso saturado (300 mL) e salmoura (duas vezes 200 mL) , seca sobre Na2SC>4, e filtrada. A fase orgânica foi arrefecida a 4°C, o éster metilico de ácido (5-fenilsulfanil- 15

ΕΡ 1 913 009/PT 1 (Η) -benzoimidazol-2-il)-carbâmico precipitado e não reagido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo oleoso foi purificado por filtração numa pequena almofada de sílica gel. Os contaminantes não polares foram eluídos com acetato de etilo/éter de petróleo 1:1 e o produto desejado foi depois eluído com éter dietílico. O produto desejado foi obtido como um sólido incolor (1,4 g) , numa razão 1:1 dos dois regio-isómeros 2 e 3. Éster metílico de ácido [1-(di-tert-butoxi-fosfonooximetil)- 5- fenilsulfanil-1 (H)-benzoimidazol-2-il]-carbâmico 2. Sólido incolor, ^-RMN (DMSO-d6) δ 12,2 (s, 1H) , 7,49 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,34 (d, J=8,l Hz, 1H), 7,33 (t, J=7,3 Hz, 2H), 7,24 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,19 (d, J=7,3 Hz, 2H), 5,85 (d, J=10,3 Hz, 2H), 3,64 (s, 3H) , 1,34 (s, 18H) ; 13C-RMN (DMSO- d6) δ 162, 8, 154, 1, 137,3, 130,8, 129, 9, 129,2, 127, 9, 127,6, 127,1, 116,1, 111,6, 83,1 (d, J=7,2 Hz), 67,0, 52,5, 29,7 (d, J=3,9 Hz); 31P-RMN (DMSO-d6) δ -11,3 (t, J=10,3 Hz). Éster metílico de ácido [1-(di-tert-butoxi-fosfonooximetil)- 6- fenilsulfanil-1 (H)-benzoimidazol-2-il]-carbâmico 3. Sólido incolor, 1H-RMN (DMSO-d6) δ 12,3 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,46 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,30 (t, 2H) , 7,21 (t, 1H) , 7,19 (d, 2H), 5,83 (d, J=10,2 Hz, 2H) , 3,63 (s, 3H) , 1,30 (s, 18H) ; 13C-RMN (DMSO-d6) δ 162,8, 154, 1, 137, 6, 130,2, 129, 9, 129, 8, 129,3, 128,6, 126,8, 126,4, 113,1, 115,5, 83,1 (d, J=7,2 Hz), 67, 0, 52,5, 29, 6 (d, J=3,9 Hz); 31P-RMN (DMSO-d6) δ -11,4 (t, J=10,2 Hz).

Passo C: Síntese de éster metílico de ácido (5-fenilsulfanil-1-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 4 e éster metílico de ácido (6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 5

16 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Uma mistura 1:1 dos isómeros 2 e 3 (1 g) foi dissolvida em dioxano (10 mL) e juntou-se sob agitação uma solução de HC1 4N em dioxano (10 mL). A conversão completa dos materiais de partida nos ácidos correspondentes foi assegurada por monitorização da reacção por HPLC. O precipitado formado foi removido por filtração (550 mg) e as águas-mães concentradas sob vácuo até metade do volume. Juntou-se éter dietilico (5 mL) e obteve-se uma segunda colheita dos produtos desejados (100 mg) após filtração. Os produtos desejados foram obtidos como um sólido incolor (650 mg), numa razão 1:1 dos dois regio-isómeros 4 e 5. Éster metilico de ácido (5-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 4. 1H-RMN (D2O) δ 7,41 (d, J=1, 4 Hz, 1H), 7,39 (d, J=8,2 Hz, 1H ); 7,15-7,07 (m, 6H) , 5.52 (d, J=3,3 Hz, 2H), 3,53 (s, 3H) ; 13C-RMN (D20) δ 162,8, 158,6, 142,2, 137,9, 133,3, 129,3, 129,2, 128,3, 126,2, 124,3, 120,6, 110,2, 66, 0, 52,1; 31P-RMN (D20) δ 1,97 (t, J=3,3 Hz). Éster metilico de ácido (6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 5. ^-RMN (D20) δ 7,62 (d, J=1, 4 Hz, 1H), 7,31 (d, J=8,2 Hz, 1H) , 7,22-7,11 (m, 6H) , 5.52 (d, J=4,3 Hz, 2H), 3,60 (s, 3H) ; 13C-RMN (D20) δ 161,4, 156,2, 139,8, 137,8, 133,2, 129,3, 128,6, 128,5, 128,1, 124, 4, 114, 7, 66,5, 52,3; 31P-RMN (D20) δ 2,24 (t, J=4,3 Hz).

Passo D: Síntese de éster metilico de sal dissódico de ácido (5-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 6 e sal dissódico de éster metilico de ácido (6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 7

Uma mistura 1:1 dos isómeros 4 e 5 (50 mg) foi suspensa em metanol (2 mL) e juntou-se uma solução de metóxido de 17 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ sódio Ο,ΙΝ sob agitação até ser atingido pH 11. A solução foi concentrada e depois seca sob vácuo elevado. Os produtos desejados foram obtidos (52 mg) como um sólido branco, numa razão 1:1 dos dois regio-isómeros 6 e 7.

Sal dissódico de éster metilico de ácido (5-fenilsulfanil-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 6 e sal dissódico de éster metilico de ácido (6-fenilsulfanil-1-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 7. 1H-RMN (D20) δ 7,75 (d, J=l,3Hz, 1H) , 7,59 (d, J=6,8 Hz, 1H) , 7,58 (s, 1H), 7,46 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,40-7,26 (m, 12H), 5,69 (d, J=6,0 Hz, 2H), 5,66 (d, J=6,2 Hz, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,75 (s, 3H) ; 31P-RMN (D20) δ 2,89 (s).

Exemplo 2: Sintese de sal dissódico de éster metilico de ácido (5-benzoí1-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 8 e sal dissódico de éster metilico de ácido (6-benzoil-l-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 9

Os compostos 8 e 9 foram sintetizados utilizando a sequência de sintese descrita no Exemplo 1.

Sal dissódico de éster metilico de ácido (5-benzoí1-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 8 e sal dissódico de éster metilico de ácido (6-benzoil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 9. 1H-RMN (D20) δ 7,91-7,45 (m, 16H) , 5,67-5,61 (m, 4H), 3,73-3,71 (m, 6 H) ; 31P-RMN (D20) δ 2,72 (s).

Exemplo 3: Sintese de sal dissódico de éster 2-metoxi-carbonilamino-l-fosfonooximetil-3(H)-benzoimidazol-5-ίlico de ácido 3-fluoro-benzenossulfónico 10 e sal dissódico de éster 2-metoxicarbonilamino-3-fosfonooximetil-3ií-benzoimidazol-5-ílico de ácido 3-fluoro-benzenossulfónico 11 18 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Os compostos 10 e 11 foram sintetizados utilizando a sequência de síntese descrita no Exemplo 1.

Sal dissódico de éster 2-metoxicarbonilamino-l-fosfono-oximetil-3(H)-benzoimidazol-5-ίlico de ácido 3-fluoro-benzenossulfónico 10 e sal dissódico de éster 2-metoxi-carbonilamino-3-fosfonooximetil-3(H)-benzoimidazol-5-ίlico de ácido 3-fluoro-benzenossulfónico 11. ^-RMN (D20) δ 7,83-7,75 (m, 4H), 7,39-7,20 (m, 8H), 6,80-6,70 (m, 2H), 5,58-5,61 (m, 4H) , 3,71 (s, 6 H); 31P-RMN (D20) δ 3,23 (s).

Exemplo 4: Síntese de sal dissódico de éster metílico de ácido (5-(4-fluoro)-benzoí1-1-fosfonooximetil-1(H)-benzo-imidazol-2-il)-carbâmico 12 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-(4-fluoro)-benzoí1-1-fosfonooximetil-1(H)-benzo-imidazol-2-il)-carbâmico 13

Os compostos 12 e 13 foram sintetizados utilizando a sequência de síntese descrita no Exemplo 1.

Sal dissódico de éster metílico de ácido (5-(4-fluoro)-benzoí1-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 12 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-(4-fluoro)-benzoí1-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 13. ^-RMN (D20) δ 7, 86-7, 45 (m, 10H) , 7,21-7,16 (m, 4H) , 5, 66-5, 60 (m, 4H) , 3,71 (m, 6 H) ; 31P-RMN (D20) δ 3,08 (s). 19

ΕΡ 1 913 009/PT

Exemplo 5: Síntese de sal dissódico de éster metílico de ácido l-fosfonooximetil-5-propilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 14 e sal dissódico de éster metílico de ácido 1-fosfonooximeti1-6-propilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il)- carbâmico 15 \ uOCnh' \ / 14 O / 15 Ov NaO'/P~° NaO"/P=0 NaO NaO compostos 14 e 15 foram sintetizados utilizando sequência de síntese descrita no Exemplo 1. No entanto, neste caso foi mais apropriado durante o primeiro passo adicionar uma solução do sal sódico de éster metílico de ácido (5-propilsulfanil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico em N-metilpirrolidona a uma solução de éster di-tert-butil-clorometílico de ácido fosfórico em dimetilformamida.

Sal dissódico de éster metílico de ácido 1-fosfonooximetil-5-propilsulfanil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 14 e sal dissódico de éster metílico de ácido 1-fosfonooximetil-6-propilsulfanil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 15. ^-RMN (D20) δ 7, 53-7, 22 (m, 6H) , 5,58 (s, 4H) , 3,70 (s, 6H) , 2,91-2,83 (m, 4H) , 1,56 -1, 49 (m, 4H) , 0,90-0,85 (m, 6H) ; 31P-RMN (D20) 5 2, 71 (s) .

Exemplo 6: sal dissódico de éster metílico de ácido (5-butil-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 16 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-butil-l-fosfono-oximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 17

20

ΕΡ 1 913 009/PT

Os compostos 16 e 17 foram sintetizados utilizando a sequência de síntese descrita no Exemplo 1.

Sal dissódico de éster metílico de ácido (5-butil-l-fosfono-oximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 16 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-butil-l-fosfono-oximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 17. 1H-RMN (D2O) δ 7, 36-7, 00 (m, 6H) , 5,51 (d, 4H) , 3,62 (s, 6H) , 2,55 (q, 4H), 1,50-1,43 (m, 4H), 1,22-1,13 (m, 4H), 0,78-0,74 (m, 6H); 31P-RMN (D20) δ 2,50 (s) .

Exemplo 7: Sal dissódico de éster metílico de ácido (5-benzenossulfinil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 18 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-benzenossulfinil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 19

Os compostos 18 e 19 foram sintetizados utilizando a sequência de síntese descrita no Exemplo 1.

Sal dissódico de éster metílico de ácido (5-benzenossulfinil-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 18 e sal dissódico de éster metílico de ácido (6-benzenossulfinil-1-fosfonooximetil-1 (H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmico 19. 1H-RMN (D20) δ 7, 74-7, 43 (m, 16H) , 5,63 (d, 4H) , 3,71 (m, 6H) ; 31P-RMN (D20) δ 3,25 (s) . A utilidade dos compostos como anti-helmínticos pode, por exemplo, ser avaliada através das seguintes técnicas:

Exemplo 8: Actividade contra Ascaridia galli (verme intestinal de frango) e Oesophagostomum dentatum (verme nodular de suíno) 21

ΕΡ 1 913 009/PT

Os efeitos anti-helmínticos dos compostos do presente invento foram testados in vitro utilizando fases larvares alojadas no intestino de duas espécies de nemátodos parasitas: Ascaridia galli (verme intestinal de frango), fase larvar 3 (L3), e Oesophagostomum dentatum (verme nodular de suíno), fases larvares 3 e 4 (L3; L4).

Princípio dos ensaios:

Incubaram-se diversas concentrações dos compostos em placas de microtitulação de 96 poços, em que os parasitas foram depois distribuídos a 20 larvas por poço. Os efeitos anti-helmínticos foram classificados ao dia 5 por exame microscópico avaliando mortalidade, danos, motilidade, progressão do desenvolvimento e absorção de vermelho neutro pelas larvas em comparação com um controlo de DMSO e o anti-helmínticos padrão fenbendazole. Os efeitos anti-helmínticos foram definidos pela concentração eficaz mínima (MEC) como reflectido na Tabela 1.

Tabela 1

Efeitos anti-helmínticos definidos pela concentração eficaz mínima (MEC)

Concentrações eficazes mínimas (μΜ) Compostos A. galli (L3) O. dentatum (L3) 0. dentatum (L4) 4 e 5 (como mistura 1:1) 0, 050 0, 050 0,050 0,050 0, 050 0,050 0,025 0, 050 0,050 0,050 0, 050 0,050 fenbendazole 0,050 1, 000 0,025

Exemplo 9: Avaliação da eficácia anti-helmíntica de ésteres metílicos de ácidos (5- e 6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmicos em frangos infectados experimentalmente com Ascaridia galli

Este estudo foi concebido para avaliar a eficácia de ésteres metílicos de ácidos (5- e 6-fenilsulfanil-l-fosfono- 22 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ oximetil-1(Η)-benzoimidazol-2-il)-carbâmicos (em diante referidos como "Composto A"), em comparação com fenbendazole misturados na alimentação e uma formulação de mercado de fenbendazole (Panacur® Suspensão a 2,5% ad us. vet.) contra A. galli em frangos infectados experimentalmente.

Os frangos foram infectados experimentalmente por via oral (per entubação) com 150 larvas contendo ovos de A. galli. Um total de 60 frangos foi agrupado em gaiolas de 5 frangos e divididos em 4 grupos de tratamento (A-D) consistindo em 15 frangos cada. Os animais foram alimentados com uma dieta completa para frangos jovens, e tinham livre acesso a água potável. 0 grupo A foi tratado com Composto A, o grupo B foi tratado com Panacur® Suspensão a 2,5%, e o grupo C foi alimentado com dieta completa medicada com fenbendazole. O grupo D serviu como controlo não tratado e aplicou-se-lhe água desionizada sem droga. Os detalhes dos grupos de tratamento são listados na Tabela 1.

Preparação das formulações de tratamento:

Pesou-se o composto A em tubos de 50 mL de tampa roscada e dissolveu-se em NaHC03 aquoso. Transferiu-se Panacur® Suspensão a 2,5% para tubos de 50 mL de tampa roscada e diluiu-se com água desionizada. Misturou-se fenbendazole com a dieta completa para frangos jovens.

Dosagem e aplicação:

Aos grupos A, B e D doseou-se oralmente por entubação, dividindo-se em 4 doses simples diariamente durante 5 dias consecutivos, ao grupo C forneceu-se alimentação medicada. As doses dadas por entubação foram calculadas com base na ingestão de alimento média medida sob a assunção de que a alimentação teria sido medicada.

Os detalhes do doseamento e administração são listados na Tabela 2. 23 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Tabela 2

Detalhes de doseamento e administração

Grupo Gaiola Composto Formulação Dosagem Administração 1 Composto A NaHC03 aquoso 100 ppm 0,5 ml por entubação, 4 vezes por dia A 2 3 Panacur® suspensão a 2,5 % água desionizada 60 ppm B 5 6 7 fenbendazole alimentação medicada 100 ppm na alimentação, ad libitum C 8 9 10 - água desionizada - 0,5 ml por entubação, 4 vezes por dia D 11 12

Desde DO (primeiro tratamento) até D8 (necropsia) os vermes excretados foram recolhidos uma ou duas vezes por dia e contabilizados. Os animais foram eutanasiados 4 dias após o último tratamento, e o tracto gastrointestinal foi removido e aberto (excepto caeca) . Foram contados os vermes adultos presentes no intestino. 0 resultado do tratamento foi uma redução de 100% no número de vermes em todos os grupos tratados (A-C) comparado com o grupo de controlo (D).

Exemplo 10; Avaliação da eficácia anti-helmintica de ésteres metilicos de ácidos (5- e 6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmicos em gerbilos infectados experimentalmente com Haemonchus contortus

Este estudo foi concebido para comparar a eficácia anti-helmintica de ésteres metilicos de ácidos (5- e 6-fenil-sulfanil-1-fosfonooximeti1-1(H)-benzoimidazol-2-il)carbâmicos (adiante referidos como "Composto A") e fenbendazole contra um nemátodo estrongilideo do estômago (Haemonchus contortus) em gerbilos (Meriones unguiculatus) após administração 24 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ intraperitoneal (IP), subcutânea (SC) e oral (PO). Os compostos foram testados a doses de 3 mg/kg de peso corporal (BW), 1 mg/kg BW e 0,3 mg/kg BW.

Os animais foram infectados oralmente com larvas L3 de H. contortus. No dia D10 pós-infecção (PI), os animais foram tratados uma vez IP, SC ou PO com os compostos de teste em DMF a 10%/água a 90%, a doses de 3,0 mg/kg BW, 1,0 mg/kg BW ou 0,3 mg/kg BW. Três dias após o tratamento, os animais foram necropsiados e foi determinada a carga de larvas nos estômagos. A eficácia foi definida como a redução da contagem média de larvas (média geométrica) nos grupos de tratamento em comparação com o grupo de controlo. A relação dose-resposta foi investigada através do cálculo do coeficiente de correlação de Pearson.

Para fenbendazole e uma dose de 3 mg/kg BW, foi observada uma redução do número de larvas entre 95,10% (administração SC) e 100,00% (administração IP). Para grupos doseados com 1 mg/kg BW, a redução foi entre 78,05% (administração PO) e 89,33% (administração IP). Para grupos doseados com 0,3 mg/kg BW, a redução foi entre 80,63% (administração IP) e 91,73% (administração PO).

Para o composto A e uma dose de 3 mg/kg BW (1,8 mg/kg BW de fenbendazole equivalente) , foi observada uma redução do número de larvas entre 90,81% (administração PO) e 94,84% (administração SC). Para grupos doseados com 1 mg/kg BW (0,6 mg/kg BW de fenbendazole equivalente) a redução foi entre 87,61% (administração SC) e 90,65% (administração IP). Para grupos doseados com 0,3 mg/kg BW (0,2 mg/kg BW de fenbendazole equivalente), a redução foi entre 47,40% (administração SC) e 87,00% (administração PO). Todas as reduções nos números de larvas nos grupos de tratamento foram significativamente diferentes em comparação com o grupo de controlo.

Os resultados tal como descritos anteriormente são mostrados na Tabela 3. 25 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Tabela 3

Eficácia de fenbendazole e composto A sobre o número de larvas de H. contortus em comparação com o grupo de controlo não tratado

Via de administração Fenbendazole equivalente [mg/kg] Redução no número de vermes [%] Fenbendazole Composto A Fenbendazole Composto A IP 100,00 93,81 SC 3,0 1,8 95,10 94, 84 PO 96,49 90,81 IP 89,33 90,65 SC 1,0 0,6 89,16 87, 61 PO 78, 05 88,62 IP 80,63 65, 02 SC 0,3 0,2 88,36 47, 40 PO 91, 73 87, 00 IP/SC/PO - - - - 0 tratamento com composto A teve a mesma eficácia que o tratamento com fenbendazole e a comparação com as contagens de larvas entre os diferentes equivalentes de fenbendazole mostrou uma elevada correlação com um coeficiente de correlação de R = -0,7622. Pode ser provada uma dependência da dose e uma correlação com a dose para ambos compostos.

Exemplo 11: Avaliação da eficácia anti-helmintica de ésteres metilicos de ácidos (5- e 6-fenilsulfanil-l-fosfonooximetil-1(H)-benzoimidazol-2-il)-carbâmicos em gerbilos infectados experimentalmente com Trichostrongylus axei e Γ. colubriformis

Este estudo foi concebido para comparar a eficácia anti-helmíntica de ésteres metilicos de ácidos (5- e 6-fenil-sulfanil-1-fosfonooximeti1-1 (H)-benzoimidazol-2-il)carbâmicos (adiante referidos como “Composto A") e fenbendazole contra nemátodos estrongilideos do estômago e intestino (Γ. axei e T. colubriformis) em gerbilos (Meriones unguiculatus) após administração intraperitoneal (IP), subcutânea (SC) e oral (PO). Os compostos foram testados a doses de 3 mg/kg de peso corporal (BW), 1 mg/kg BW e 0,3 mg/kg BW. 26 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ

Os animais foram infectados oralmente com larvas L3 de cada T. axei e T. colubri forrais. No dia D19 após infecção (PI), os animais foram tratados uma vez IP, SC ou PO com os compostos em teste em DMF a 10% /água a 90%, a doses de 3 mg/kg BW, 1 mg/kg BW ou 0,3 mg/kg BW. Três dias após o tratamento os animais foram necropsiados e determinou-se a carga de vermes no estômago e intestino delgado. A eficácia foi definida como a redução da contagem média de vermes (média geométrica) nos grupos de tratamento em comparação com o grupo de controlo. A relação dose-resposta foi investigada através do cálculo do coeficiente de correlação de Pearson.

Para fenbendazole e uma dose de 3 mg/kg BW, foi observada uma redução do número de vermes de 100% para todas as três administrações e ambas espécies de vermes, e era significativamente diferente em comparação com o grupo de controlo (p=0,0011). Para grupos doseados com 1 mg/kg BW, a redução estava entre 80,94% (administração IP; p=0,0422) w 88,80% (administração PO; p=0,0162) para a infecção com Γ. axei. Para T. Colubri forrais, a redução do número de vermes estava entre 80,04% (administração IP; p=0,0173 e administração PO; p=0,0563) e 81,10% (administração SC; p=0,0097). Para grupos doseados com 0,3 mg/kg BW, a redução era de 82,15% para administração SC (p=0,0162) para infecção com T. axei, e nenhuma redução do número de vermes podia ser observada para as outras administrações (administração IP: -283,85%; p=não calculável e administração PO: -115,44%; p=não calculável) . Para T. Colubri forrais, a redução do número de vermes estava entre 43,18% (administração SC a; p=0,2543) and 79,33% (IP administração; p=0,0162).

Para o composto A e uma dose de 3 mg/kg BW (1,8 mg/kg BW de fenbendazole eguivalente) foi observada uma redução do número de vermes entre 98,00% (administração PO; p=0,0011) e 100% (administração IP e SC; p=0,0011) foi observada para infecção com T. axei. Para infecção com T. Colubriformis, a redução do número de vermes estava entre 85,70% (administração SC; p=0,0108) e 100,00% (administração PO; p=0,0011). Para grupos doseados com 1 mg/kg BW (0,6 mg/kg BW de fenbendazole equivalente) a redução estava entre 82,98% (administração SC; p=0,0108) e 96,71% (administração PO; p=0,0022) para a infecção com Γ. axei. Para T. Colubri forrais, a redução do 27

ΕΡ 1 913 009/PT número de vermes estava entre 28,18% (administração IP; p=0,3019) e (SC administração; p=0,0682). Para os grupos doseados com 0,3 mg/kg BW (0,2 mg/kg BW de fenbendazole equivalente), a redução era de 69,66% para administração IP (p=0,0530) e 59,20% para administração PO (p=0,1407) para a infecção com T. axei, e nenhuma redução do número de vermes podia ser observada para administração (-43,64%; P=não calculável). Para T. colubriformis nenhuma redução do número de vermes podia ser observada para administração IP (-50,17%; P=não calculável), administração SC (-106,50%; P=não calculável) e administração PO (-3,71%; p=0,4740).

Os resultados descritos anteriormente são ilustrados na Tabela 4.

Tabela 4

Eficácia de fenbendazole e composto A sobre o número de larvas de T. axei e T. colubriformis em comparação com o grupo de controlo não tratado

Espécie de verme Via de administração Fenbendazole equivalente [mg/kg] Redução no número de vermes [%] Fenbendazole Composto A Fenbendazole Composto A IP 100,00 100,00 SC 3,0 1,8 100,00 100,00 PO 100,00 98, 00 IP (D X rç SC 1,0 0,6 PO IP SC 0,3 0,2 PO IP/SC/PO - - - - IP 100,00 SC 3,0 1,8 100,00 to •h PO 100,00 100,00 ÍH 0 •H ÍH IP SC 1,0 0,6 3 PO 0 0 IP SC 0,3 0,2 PO IP/SC/PO - - - - 28 ΕΡ 1 913 009/ΡΤ Ο tratamento com composto A tinha a mesma eficácia que o tratamento com fenbendazole, e a comparação com as contagens de vermes entre os diferentes fenbendazole equivalentes mostrou uma elevada correlação com um coeficiente de correlação de R = -0,8146 para T. axei e R = -0,9161 para T. colubriformis. Provou-se para ambos compostos uma dependência da dose e uma correlação com a dose.

Lisboa, 2010-06-18

Claims

ΕΡ 1 913 009/PT 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Composto da seguinte fórmula geral: Fórmula I

em que X1 e X2 são 0 ou S, em que pelo menos um de X1 e X2 é 0, Y1 e Y2 são 0 ou S, em que pelo menos um de Y1 e Y2 é 0, R1 é alquilo de 1-4 átomos de carbono, R2, R3 e R4 são independentemente entre si hidrogénio, ou um catião, R1 e R2 podem ambos independentemente ser hidrogénio ou halogéneo ou alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, ou -0R3, em que R3 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, ou -SR8, em que R8 pode ser alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, ou arilo, ou -C0-R9, em que R9 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, cicloalquilo possuindo 3-6 átomos de carbono, ou R9 é arilo, ou -0S02-Ar, em que Ar é arilo, ou -S(0)R10, em que R10 é alquilo possuindo 1-8 átomos de carbono, ou em que R10 é arilo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que X1 e X2 são ambos 0.
3. Composto de acordo com as reivindicações 1 ou 2, em que Y1 e Y2 são ambos 0.
4. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-3, em que X1 e X2, assim como Y1 e Y2, são 0. 1 Composto de acordo com qualquer das reivindicações 2 precedentes, em que R2 é H e R3 e R4 são sódio, ou em que R2, 3 R3 e R4 são sódio.
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6. Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que R1 é metilo.
7. Composto de acordo com qualquer das reivindicações precedentes, em que R5 é H e R6 é n-butilo. 1-6,
8. Composto de acordo com qualquer das reivindicações em que R5 é H e R6 é -0R7, em que R7 é n-propilo.
9. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-6, em que R5 é H e R6 é -SR8, em que R8 é n-propilo ou fenilo. em que R8 é
10. Composto de acordo com reivindicação 9, fenilo.
11. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-6, em que R5 é H e R6 é -CO-R9, em que R9 é fenilo, opcionalmente substituído na posição 4 por um átomo de flúor.
12. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-6, em que R5 é H e R8 é -0S02-Ar, em que Ar é fenilo substituído na posição 4 por um átomo de flúor.
13. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-6, em que R5 é H e R6 é -S(0)R10, em que R10 é n-propilo ou fenilo.
14. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 6-13, em que R6 está ligado a qualquer das posições 5- ou 6-no núcleo de benzimidazole.
15. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-14, para utilização como medicamento.
16. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-14, para utilização como agente anti-helmíntico.
17. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 14, e um portador farmaceuticamente aceitável. ΕΡ 1 913 009/ΡΤ 3/3
18. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-14, num processo para a preparação de água medicada destinada ao tratamento de animais contra parasitas.
19. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1-14, num processo para a preparação de água medicada destinada ao tratamento de animais contra helmintas. Lisboa, 2010-06-18