PT1109937E - Um novo método de diagnóstico, monitorização, identificação de estágio, imagiologia e tratamento de vários cancros - Google Patents

Description

6639

DESCRIÇÃO

UM NOVO MÉTODO DE DIAGNÓSTICO, MONITORIZAÇÃO, IDENTIFICAÇÃO DE ESTÁGIO, IMAGIOLOGIA E TRATAMENTO DE

VÁRIOS CANCROS

AREA DA INVENÇÃO

Esta invenção relaciona-se, em parte, com ensaios recentemente realizados para a detecção, diagnóstico, monitorização, identificação do estágio, prognóstico, radiografia e tratamento do cancro do ovário, do endométrio uterino e do cancro da mama.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A American Câncer Society estimou que mais de 560000 americanos morrerão este ano vítimas de cancro. O cancro é a segunda maior causa de morte nos Estados Unidos da América, ultrapassada apenas pelos ataques cardíacos. Estima-se que, só em 1999, mais de um milhão de novos casos de cancro serão diagnosticados.

Nas mulheres, os cancros ginecológicos correspondem a mais de um quarto das doenças.

Dos cancros ginecológicos, o cancro da mama é o mais comum. De acordo com a Women's Câncer Network, uma em cada oito mulheres nos Estados Unidos está em risco de desenvolver o cancro da mama e uma em cada 28 mulheres corre o risco de morrer vítima do cancro da mama. 6639

Aproximadamente 77% das mulheres diagnosticas com cancro da mama têm mais de 50 anos. No entanto, o cancro da mama é a principal causa de morte nas mulheres entre os 40 e 55 anos. O carcinoma do ovário é outro tipo de cancro ginecológico muito comum. Aproximadamente uma em cada 70 mulheres irá desenvolver cancro do ovário durante a sua vida. Em 1995, calcula-se que 14500 mortes foram causadas pelo cancro do ovário. Este causa mais mortes do que qualquer outro tipo de cancro no sistema reprodutivo feminino. 0 cancro do ovário não provoca muitas vezes nenhum sintoma visível. Alguns sinais possíveis de alarme, no entanto, são um abdómen distendido devido à acumulação de fluidos ou distúrbios digestivos leves (desconforto, gás ou distensão) em mulheres acima dos 40; raramente ocorrerão sangramentos vaginais anormais. Os exames pélvicos completos e periódicos são importantes; uma citologia cervical não detecta o cancro do ovário. Recomenda-se a realização de exames pélvicos para mulheres acima dos 40.

Igualmente comum em mulheres é o cancro do endométrio ou carcinoma do útero. De acordo com o Women's Câncer Center, o cancro do endométrio corresponde a cerca de 13% de todas as doenças em mulheres. São diagnosticados anualmente cerca de 34000 casos de cancro do endométrio nos Estados Unidos. 0 sarcoma uterino é outro tipo de enfermidade uterina muito mais rara quando comparada com outros 2 6639 cancros ginecológicos. No sarcoma uterino, as células malignas começam a desenvolver-se nos músculos ou noutros tecidos de suporte do útero. 0 sarcoma do útero é diferente do cancro do endométrio, doença em que as células cancerígenas começam a desenvolver-se no revestimento do útero. Este cancro uterino surge normalmente após a menopausa. As mulheres que tenham recebido terapia com níveis elevados de Raios X (terapia externa de radiação) na pélvis apresentam um risco superior de desenvolverem sarcoma do útero. Estes raios X são normalmente prescritos para as mulheres deixarem de sangrar do útero. 0 documento WO 97/38125 descreve a expressão diferencial de pRb2/pl30 em correlação com a presença de cancro e os anticorpos específicos da proteína pRb2/pl30.

Os procedimentos usados para detectar, diagnosticar, monitorizar, identificar o estágio e realizar 0 prognóstico de cada um destes tipos de cancro é de importância crucial para o resultado do paciente. Em todos os casos, os pacientes a quem tenha sido diagnosticado o cancro numa fase precoce possuem normalmente uma taxa de sobrevivência muito superior a cinco anos, quando comparados com a taxa de sobrevivência para pacientes diagnosticados com cancro metastizado. São evidentemente necessários novos métodos de diagnóstico, mais sensíveis e específicos para a detecção precoce de vários tipos de cancro. 3 6639

Na presente invenção são facultados métodos para a detecção, diagnóstico, identificação do estágio, prognóstico, imagiologia in vivo e tratamento do cancro do ovário, da mama, do endométrio e/ou uterino, através da detecção de Genes Específicos do Cancro (CSGs). Foram identificados CSG e referem-se, entre outras coisas, a proteínas nativas exprimidas pelo gene que consiste numa sequência polinucleótida de SEQ ID N°: 1. Em alternativa, o que se subentende pela CSG, conforme usada aqui, é a ARNm nativa codificada pelos genes que consistem numa sequência polinucleótida de SEQ ID N°: 1 ou poderá referir-se ao próprio gene que consiste em sequências polinucleótidas de SEQ ID N° 1.

Também podem ser detectados fragmentos de CSG, tal como descritos na SEQ ID N°: 10, 11, 12 ou 13.

Outros objectos, características, vantagens e aspectos da presente invenção tornar-se-ão evidentes para os peritos a partir da seguinte descrição. No entanto, deve ficar claro que a seguinte descrição e os exemplos específicos, embora indiquem concretizações preferidas da invenção, são disponibilizados apenas para fins ilustrativos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com o primeiro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de diagnóstico indicativo da presença de cancro retirado de cancro da 4 6639 mama, do ovário, do endométrio e uterino num paciente, consistindo o método em: a) Medição dos niveis de uma polinucleótida constituida pela SEQ ID N° 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada e uma ARNm nativa codificada ou um seu fragmento (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais recolhidos do paciente; b) Comparação dos níveis medidos de CSG com os níveis de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais obtidos a partir de um controlo humano normal, em que uma alteração nos níveis medidos de CSG no paciente versus os níveis de CSG no controlo humano regular está associada à presença de um cancro seleccionado.

De acordo com o outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de diagnóstico indicativo da presença de metástases de um cancro recolhido de cancro da mama, do ovário, do endométrio e uterino num paciente portador do cancro seleccionado, desconhecendo-se se metastizou, e consistindo o método em: a) Medição dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N° 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada e uma ARNm nativa codificada ou um seu fragmento (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais recolhidos do paciente; 5 6639 b) Comparação dos níveis medidos de CSG com os níveis de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais obtidos a partir de um controlo humano regular, em que uma alteração nos níveis medidos de CSG no paciente versus os níveis de CSG no controlo humano regular está associada à presença de um cancro metastizado.

De acordo com o outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de identificação do estágio de um cancro recolhido de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e uterino num paciente portador do cancro seleccionado, consistindo o método em: a) Medição dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N° 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada e uma ARNm nativa codificada ou um seu fragmento (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais recolhidos do paciente; b) Comparação dos níveis medidos de CSG com os níveis de CSG de uma amostra de células, tecidos ou fluidos corporais obtidos a partir de um controlo humano regular, em que um aumento nos níveis medidos de CSG no referido paciente versus os níveis de CSG no controlo humano regular está associado a um cancro em progressão e a diminuição nos níveis medidos de CSG está associada a um cancro em regressão ou remissão. 6 6639

De acordo com o outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de monitorização de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e uterino num paciente portador do cancro seleccionado no aparecimento de metástases, consistindo em: a) Medição periódica dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N° 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada e uma ARNm nativa codificada ou um seu fragmento (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal recolhidos do paciente que possua o cancro seleccionado, desconhecendo-se se metastizou; b) Comparação periódica dos níveis medidos de CSG com os níveis de CSG de células, tecidos ou tipos de fluidos corporais obtidos a partir de um controlo humano regular, em que um aumento em qualquer um dos níveis medidos periodicamente de CSG no paciente versus os níveis de CSG do controlo humano regular está associado a um cancro em progressão e a diminuição nos níveis medidos de CSG está associada a um cancro metastizado.

De acordo com o outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de monitorização da alteração num estágio de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e uterino num paciente portador do cancro seleccionado, consistindo em: 7 6639 a) Medição periódica dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N° 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada e uma ARNm nativa codificada ou um seu fragmento (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal recolhidos do paciente que possua o cancro seleccionado; b) Comparação periódica dos níveis medidos de CSG com os níveis de CSG de células, tecidos ou tipo de fluido corporal obtidos a partir de um controlo humano regular, em que um aumento em qualquer um dos níveis medidos periodicamente de CSG no paciente versus os níveis de CSG do controlo humano regular está associado a um cancro que em progressão no respectivo estágio e a diminuição está associada a um cancro que se encontra a regredir no estágio ou em remissão.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, é proporcionado um anticorpo isolado ou fragmento de anticorpo que se vincula especificamente a um fragmento da proteína codificada pela SEQ ID N°: 1, em que o fragmento da proteína codificada pela sequência da polinucleótida SEQ ID N° : 1 é codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 12 ou 13. Tais anticorpos podem ser policlonais ou monoclonais ou preparados por técnicas moleculares biológicas.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, é proporcionado o uso de um anticorpo ou fragmentos de um anticorpo que se vincula especificamente a uma proteína 8 6639 codificada pela sequência da polinucleótida SEQ ID N°: 1 em que o fragmento da proteína codificada pela sequência da polinucleótida SEQ ID N°: 1 é codificada pela sequência da polinucleótida SEQ ID N°: 10, 11, 12 ou 13, no fabrico de um medicamento para imagiologia in vivo de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e uterino.

De preferência, o referido anticorpo ou fragmento de anticorpo é marcado com iões paramagnéticos ou um radioisótopo.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, é proporcionado o uso de um anticorpo ou fragmento de um anticorpo que se vincula especificamente a uma proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1 ou a um fragmento da proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N° : 1, em que o fragmento da proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N° : 1 é codificada pela sequência polinucleótica SEQ ID N° 10, 11, 12 ou 13, no fabrico de um medicamento para o tratamento de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do endométrio e uterino.

De preferência, o anticorpo ou o fragmento do anticorpo é conjugado com um agente citotóxico.

Outros objectos, características, vantagens e aspectos da presente invenção tornar-se-ão evidentes para os peritos através da seguinte descrição. No entanto, deve ficar claro que a seguinte descrição e os exemplos 9 6639 específicos, embora indiquem concretizações preferidas da invenção, são disponibilizados apenas para fins ilustrativos.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

A presente invenção está relacionada apenas com o assunto referido nas reivindicações. Neste sentido, a presente invenção refere-se a análises e métodos de diagnóstico, ambos quantitativos e qualitativos, para detectar, diagnosticar, monitorizar, identificar o estágio e prognosticar os cancros seleccionados, através da comparação dos níveis de CSG com os de CSG num controlo humano regular. Os níveis de CSG, conforme são aqui usados, significam os níveis de proteína nativa expressos pelo gene que consiste numa sequência polinucleótida de SEQ ID N°:l. Alternativamente, os níveis de CSG, conforme são aqui usados, significam os níveis de ARNm nativa codificada pelo gene consistindo em qualquer sequência polinucleótida da SEQ ID N°:l ou níveis do gene consistindo na sequência polinucleótida da SEQ ID N° : 1. Também podem ser detectados fragmentos de CSG, tais como os descritos na SEQ ID N° : 10, 11, 12 ou 13. Tais níveis são preferivelmente medidos em pelo menos uma das células, tecidos e/ou fluidos corporais, incluindo a determinação de níveis normais e anormais. Assim, por exemplo, um ensaio de diagnóstico, de acordo com a invenção, para diagnosticar a sobreexpressão da proteína CSG comparada com o controlo normal de fluidos corporais, células ou amostras de tecido pode ser usado para diagnosticar a presença dos cancros seleccionados. O 10 6639 que se pretende afirmar com "cancros seleccionados", conforme é aqui usado, é um cancro ginecolóqico, como o cancro do ovário, da mama, do endométrio ou uterino.

Para os métodos relacionados com os cancros ginecológicos, incluindo o cancro do ovário, da mama, do endométrio e uterino, são determinados os níveis de CSG que consistem na SEQ ID N° : 1 ou num fragmento. Os fragmentos típicos deste CSG que podem ser detectados são descritos na SEQ ID N°: 10, 11, 12 ou 13.

Todos os métodos aqui descritos podem também incluir a medição dos níveis de outros marcadores de cancro, bem como de CSG. Outros marcadores de cancro, para além de CSG, úteis nestes métodos irão depender do cancro que se encontra a ser testado e são conhecidos dos peritos.

Análise de diagnóstico A presente invenção proporciona métodos para diagnosticar a presença de cancros seleccionados, ao analisar as alterações nos níveis de CSG nas células, tecidos ou fluidos corporais e comparando-as com os níveis de CSG nas células, tecidos ou fluidos corporais, preferivelmente do mesmo tipo, de um controlo humano regular, em que uma alteração nos níveis de CSG no paciente versus o controlo humano regular está associada à presença de um cancro seleccionado.

Sem limitar a invenção actual, normalmente, num ensaio de diagnóstico quantitativo, um resultado positivo 11 6639 indicando que o paciente a ser testado possui cancro é um nos quais os níveis das células, tecidos ou níveis de fluido corporal do marcador de cancro, como o CSG, são pelo menos duas vezes superiores, e preferencialmente são pelo menos cinco vezes superiores do que, de preferência, nas mesmas células, tecidos ou fluido corporal de um controlo humano regular. A presente invenção também proporciona um método de diagnosticar metástases de cancros seleccionados num paciente portador do cancro seleccionado, o qual ainda não metastizou no início da metástase. No método da presente invenção, um paciente com cancro, o qual se julgava ter um cancro seleccionado que poderá ter metastizado (mas que não se sabia previamente que teria metastizado) é identificado. Isto é conseguido por uma variedade de meios conhecidos dos peritos. Por exemplo, no caso do cancro do ovário, os pacientes são normalmente diagnosticados com cancro do ovário após identificação do estágio, através de cirurgia e monitorização dos níveis CA125. Os métodos tradicionais de detecção encontram-se igualmente disponíveis e são bem conhecidos para outros cancros seleccionados que podem ser diagnosticados pela determinação dos níveis CSG num paciente.

Na presente invenção, a determinação da presença de níveis de CSG em células, tecidos ou fluido corporal é sobretudo útil para distinguir entre um cancro seleccionado que não metastizou e um que metastizou. As técnicas existentes têm dificuldade em distinguir entre cancros que metastizaram e cancros que não metastizaram e 12 6639 a escolha do tratamento adequado depende frequentemente de tal informação.

Na presente invenção, os níveis do marcador de cancro medidos em tais células, tecidos ou fluido corporal é CSG, e são comparados os níveis de CSG de preferência nas mesmas células, tecidos ou fluido corporal num controlo humano regular, ou seja, se 0 marcador de cancro em observação for o CSG em soro, este nível é preferencialmente comparado com o nível de CSG em soro de um paciente humano normal. Um aumento de CSG do paciente versus o controlo humano normal está associado ao cancro que metastizou.

Sem limitar a invenção actual, normalmente, num ensaio de diagnóstico quantitativo um resultado positivo indicando que o cancro no paciente a ser testado ou monitorizado metastizou é um no qual os níveis das células, tecidos ou níveis de fluido corporal do marcador de cancro, como CSG, são pelo menos duas vezes superiores, e preferencialmente, pelo menos cinco vezes superiores, de preferência, aos das mesmas células, tecidos ou fluido corporal de um paciente saudável.

Um controlo humano normal, conforme o que é usado aqui, inclui um paciente humano sem cancro e/ou amostras não cancerígenas do paciente; nos métodos de diagnóstico e monitorização de metástases, o controlo humano normal também pode incluir amostras de um paciente humano a quem tenha sido diagnosticado, através de métodos fiáveis, um cancro seleccionado que ainda não metastizou. 13 6639

Identificação do estágio A invenção também proporciona um método de identificação do estágio de cancros seleccionados em pacientes humanos. 0 método consiste na identificação de um paciente humano portador do cancro seleccionado e análise de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal de tal paciente humano. Depois, o método compara os niveis de CSG em tais células, tecidos ou fluido corporal aos niveis de CSG preferencialmente nas mesmas células, tecidos ou tipo de fluido corporal de uma amostra de controlo humano normal, em que o aumento nos niveis de CSG no paciente humano versus o controlo humano normal está associado a um cancro que se encontra a progredir e a diminuição nos níveis de CSG está associada a um cancro que se encontra a regredir ou em remissão.

Monitorização É igualmente proporcionado um método para monitorizar cancros seleccionados em humanos no início da metástase. 0 método consiste na identificação de um paciente humano que tenha o cancro seleccionado e que se desconheça se metastizou; análise periódica de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal de tal paciente humano; comparação dos niveis de CSG em tais células, tecidos ou fluido corporal com os níveis de CSG de preferência nas mesmas células, tecidos ou tipo de fluido corporal de uma amostra de controlo humano regular, em que um aumento nos níveis de CSG no paciente 14 6639 humano versus o controlo humano regular está associado a um cancro que metastizou. É igualmente proporcionado por esta invenção um método para monitorizar a mudança de estágio em cancros seleccionados em humanos portadores desses cancros. 0 método consiste na identificação de um paciente humano que tenha o cancro seleccionado; análise periódica de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal de tal paciente humano; comparação dos niveis de CSG em tais células, tecidos ou fluido corporal com os niveis de CSG de preferência nas mesmas células, tecidos ou tipo de fluido corporal de uma amostra de controlo humano normal, em que um aumento nos niveis de CSG no paciente humano versus o controlo humano normal está associado a um cancro que está a progredir no respectivo estágio e uma diminuição nos níveis de CSG está associada a um cancro que está a regredir no respectivo estágio ou em remissão. A monitorização deste paciente no início da metástase é periódica e é realizada, de preferência, trimestralmente. No entanto, isto poderá ser mais ou menos frequente dependendo do cancro, do paciente em particular e do estágio do cancro. Técnicas de Ensaio

As técnicas de ensaio que podem ser usadas para determinar os níveis de expressão de genes, tal como CSG na presente invenção, numa amostra obtida de um paciente são bem conhecidas dos peritos. Tais métodos de análise 15 6639 incluem análise por rádio-imunologia (RIA), transcriptase reversa PCR (RT-PCR), análise imuno histo-química, análise de hibridização in situ, análise vinculação competitiva, análises Western Blot, análises ELISA e abordagens proteómicas. Entre estas, normalmente são preferidas as ELISAs para diagnosticar a expressão de uma proteína de um gene nos fluidos biológicos.

Um ensaio ELISA consiste inicialmente na preparação de um anticorpo, se não estiver disponível imediatamente de uma fonte comercial, específica de CSG, preferencialmente um anticorpo monoclonal. Além disso, normalmente é preparado um anticorpo repórter que se vincula especificamente ao CSG. 0 anticorpo repórter é ligado a um reagente detectável, como um reagente radioactivo, fluorescente ou enzimático, por exemplo, enzima peroxidase de rábano ou fosfatase alcalina.

Para realizar um ensaio ELISA, o anticorpo específico do CSG é incubado num suporte sólido, por exemplo, que vincula o anticorpo. Quaisquer áreas livres de vinculação de proteínas no disco de poliestireno são então cobertas através da incubação de uma proteína não específica como a albumina de soro bovino. De seguida, a amostra a ser analisada é incubada no disco, tempo durante o qual o CSG se vincula ao anticorpo específico fixado ao disco de poliestireno. A amostra separada é limpa com uma substância química. Um anticorpo repórter especificamente direccionado para o CSG e associado à peroxidase de rábano é colocado no disco, originando a vinculação do anticorpo repórter a qualquer anticorpo 16 6639 monoclonal unida ao CSG. O anticorpo repórter desagregado é então limpo. Os reagentes da actividade da peroxidase, incluindo o substrato colorimétrico são então adicionados ao disco. A peroxidase imobilizada, associada aos anticorpos CSG, produz um produto de reacção colorido. A quantidade de cor desenvolvida num dado período de tempo é proporcional à quantidade de proteína CSG presente na amostra. Os resultados quantitativos são usualmente obtidos por referência a uma curva padrão.

Pode ser usado um ensaio de competição em que os anticorpos específicos de CSG, ligados a um suporte sólido e marcados como CSG, e uma amostra obtida do anfitrião são movidos para o suporte sólido e a quantidade de marcação detectada ligada ao suporte sólido pode estar correlacionada com a quantidade de CSG na amostra.

Podem ser usados métodos com ácido nucleíco para detectar CSG ARNm como marcador para os cancros seleccionados. A reacção em cadeia da polimerase (PCR) e de outros métodos do ácido nucleíco, tais como a reacção em cadeia da ligase (LCR) e a sequência de ácido nucleíco baseada na amplificação (NASABA), pode ser usada para detectar células malignas para diagnosticar e monitorizar várias doenças seleccionadas. Por exemplo, a transcriptase reversa PCR (RT-PCR) é uma técnica eficaz que pode ser usada para detectar a presença de uma população ARNm especifica numa mistura complexa de milhares de outras espécies de ARNm. Numa RT-PCR, uma espécie de ARNm é a primeira revertida transcrita para 17 6639 ADN complementar (cDNA) com o uso da enzima transcriptase reversa; o cDNA é então amplificado como numa reacção PCR normal. A RT-PCR pode assim revelar-se, pela amplificação da presença de uma espécie única de ARNm. Da mesma forma, se o ARNm é extremamente especifico da célula que o produz, a RT-PCR pode ser usada para identificar a presença de um tipo de célula específico. A hibridização de clones ou oligonucleótidas testados num suporte sólido (i.e. grelha) pode ser usada quer para detectar a expressão quer para quantificar o nível de expressão daquele gene. Segundo esta abordagem, a codificação cDNA do gene CSG é fixada a um substrato. 0 substrato pode ser de qualquer tipo adequado, incluindo, entre outros, vidro, nitrocelulose, nylon ou plástico. Pelo menos uma porção do ADN que codifica o gene CSG está ligado ao substrato e é então incubado com o analito, o qual pode ser RNA ou uma cópia ADN complementar (cDNA) do RNA, isolado do tecido de interesse. A hibridização entre o ADN ligado ao substrato e o analito pode ser detectada e quantificada de diversas formas, incluindo, entre outros, a marcação radioactiva ou fluorescente do analito ou uma molécula secundária concebida para detectar o híbrido. A quantificação do nível de expressão do gene pode ser realizada através da comparação da intensidade do sinal do analito com aquela determinada pelas normas conhecidas. As normas podem ser obtidas através da transcrição in vitro do gene alvo, quantificando o produto e depois usando aquele material para gerar uma curva Standard. 18 6639

Das abordagens proteómicas, a electroforese 2D é uma técnica bem conhecida dos peritos. 0 isolamento de proteínas individuais numa amostra, como o soro, é realizado usando a separação sequencial de proteínas por diferentes características, normalmente em gel de poliacrilamida. Em primeiro lugar, as proteínas são separadas por tamanho, usando uma corrente eléctrica. A corrente age uniformemente em todas as proteínas, por isso as proteínas mais pequenas movem-se mais no gel do que as proteínas maiores. A segunda dimensão aplica uma corrente perpendicular na primeira e separa as proteínas não com base no tamanho, mas na carga eléctrica específica transportada por cada proteína. Uma vez que não há duas proteínas com diferentes sequências idênticas com base no tamanho e carga, o resultado de uma separação 2D é um gel igual em que cada proteína ocupa uma área única. A análise dos locais com provas químicas e anticorpos ou subsequente microsequenciamento de proteína pode revelar a abundância relativa de uma dada proteína e da identidade das proteínas na amostra.

Os testes acima podem ser realizados em amostras obtidas de uma variedade de células, fluidos corporais e/ou extractos de tecido (homogenatos ou tecido solubilizado) de pacientes, tais como de biopsia de tecido e material de autópsia. Os fluidos corporais, úteis na presente invenção, são o sangue, a urina, a saliva e qualquer secreção corporal ou derivada da mesma. 0 sangue total, plasma, soro ou qualquer derivado do sangue. 19 6639

Uso de anticorpo in vivo

Os anticorpos contra CSG também podem ser usados in vivo nos pacientes que se crê sofrerem de cancro do ovário, da mama, do endométrio e uterino. 0 uso de anticorpos no diagnóstico in vivo é bem conhecido na área. Por exemplo, os anticorpos quelantes marcados com Indium-111 foram descritos para o uso na imagiologia de radioimunocintilografia de tumores de expressão do antigeno carcinoembriónico (Sumerdon et al. Nucl. Med. Biol. 1990 17:247-254). Estes anticorpos quelantes, em particular, têm sido usados na detecção de tumores em pacientes que se crê terem cancro colo-rectal recorrente (Griffin et al. J. Clin. One. 1991 9:631-640). Os anticorpos com iões paramagnéticos marcados para utilização na imagiologia de ressonância magnética também foram descritos (Lauffer, R.B. Magnetic Resonance in Medicine 1991 22:339-342). Os anticorpos direccionados contra CSGs podem ser usados de uma forma semelhante. A marcação usada será seleccionada de acordo com a modalidade de imagiologia usada. Por exemplo, as marcações radioactivas, como Indium-111, Tecnécio-99m ou Iodina-131 podem ser usadas em imagens planas ou tomografia computada por emissão de fotão único (SPECT). A emissão de marcações de positrões como Fluorine-19 pode ser usada na tomografia de emissão de positrões. Os iões paramagnéticos como Gadlinium (III) ou Manganese (II) podem ser usados na imagiologia de ressonância magnética (MRI). A localização da marcação permite determinar a propagação do cancro. A quantidade de marcação no órgão 20 6639 ou tecido permite determinar a presença ou ausência de cancro nesse órgão ou tecido.

Para pacientes diagnosticados com um cancro seleccionado, um anticorpo contra CSG também podem ter um beneficio terapêutico. 0 anticorpo pode exercer o seu efeito terapêutico sozinho. Alternativamente, o anticorpo é conjugado com um agente citotóxico, como uma droga, uma toxina ou um radionuclideo para melhorar o seu efeito terapêutico. Os anticorpos monoclonais sob a forma de droga já foram descritos pela arte, por exemplo, por Garnett e Baldwin, Câncer Research 1986 46:2407-2412. O uso de toxinas conjugado com os anticorpos monoclonais para a terapia de vários cancros também foi descrito por Pastan et al. Cell 1986 47:641-648. Os anticorpos monoclonais marcados com Yttrium-90 foram descritos para a maximização da dose administrada no tumor enguanto limitam a toxicidade dos tecidos normais (Goodwin e Meares Câncer Supplement 1997 80:2675-2680). Outros radionuclideos citotóxicos como, entre outros, Copper-67, Iodina-131 e Rhenium-186 também podem ser usados para identificar os anticorpos contra CSGs.

Os anticorpos usados nestes métodos in vivo incluem anticorpos quer policlonais quer monoclonais e anticorpos preparados através de técnicas de biologia molecular. Também podem ser usados fragmentos de anticorpos, de aptâmeros e de oligonucleótidos, tais como os obtidos a partir de um protocolo de evolução in vitro, referido como SELEX e bem conhecido dos peritos. 21 6639 A presente invenção é ainda descrita pelos seguintes exemplos. Estes exemplos são fornecidos apenas para ilustrar a invenção para referência a concretizações especificas. As exemplificações, embora ilustrem certos aspectos da invenção, não retratam as limitações ou circunstâncias do âmbito da invenção divulgada.

EXEMPLOS

Exemplo 1: A identificação de CSGs foi realizada através de uma análise sistemática de dados na base de dados LIFESEQ disponibilizada pela Incyte Pharmaceuticals, Paio Alto, CA, utilizando os dados extraídos do Câncer Leads Automatic Search Package (CLASP) desenvolvido pela diaDexus LLC, Santa Clara, CA. 0 CLASP executa as seguintes fases: selecção de genes específicos de órgão com elevada expressão, baseada no nível de abundância do EST correspondente no órgão específico versus todos os outros órgãos; análise do nível de expressão de cada gene específico de órgão com elevada expressão em tecido normal, tecido de tumor, tecido afectado e bibliotecas de tecidos associadas a tumores ou a doenças. A selecção dos candidatos que evidenciam componente ESTs foi exclusivamente ou mais frequentemente encontrada em bibliotecas de tumor. 0 CLASP permite a identificação de órgãos de elevada expressão e de genes específicos de cancro. Uma avaliação 22 6639 final, manual e profunda é então executada para finalizar a selecção de CSG.

Tabela 1: Sequências de CSG SEQ ID Na: ID de Clone ID de Gene 1 16656542 234617

Os exemplos que se seguem são realizados utilizando técnicas padrão, as quais são bem conhecidas e habituais para os peritos, excepto onde descrito pormenorizadamente de forma diferente. As técnicas de biologia molecular habituais do exemplo que se segue podem ser executadas conforme descrito nos manuais laboratoriais padrão, tais como Sambrook e tal., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989).

Exemplo 2: Quantificação Relativa de Expressão Genética A quantificação em tempo real por polimerização em cadeia (PCR) com sondas Taqman fluorescentes é um sistema de detecção de quantificação que utiliza a actividade de nuclease 5' - 3' da Taq DNA polimerase. 0 método utiliza uma sonda (Taqman) de oligonucleótido fluorescente interna marcada com um corante repórter 5' e um corante posterior, silenciador 3'. Durante a polimerização em cadeia, a actividade de nuclease 5' - 3' de Taq DNA liberta o repórter, cuja fluorescência pode então ser detectada pelo detector de laser do Sistema de Detecção 23 6639 de Sequência Modelo 7700 (PE Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). A amplificação de um controlo endógeno é utilizada para estandardizar a quantidade de amostra RNA adicionada à reacção e normalizar por eficiência de Transcriptase Reversa (RT) . Tanto a ciclofilina, gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), como o RNA (rRNA) ribossómico 18S são utilizados como controlo endógeno. Para calcular a quantificação relativa entre todas as amostras estudadas, foram usados os níveis alvo de RNA para uma amostra como base para resultados comparativos (calibrador). A quantificação relativa para o "calibrador" pode ser obtida utilizando o método de curva modelo ou o método comparativo (Boletim de Utilizador #2: Sistema de Detecção de Sequência ABI PRISM 7700).

Foram avaliados a distribuição de tecido e o nível do gene alvo para todos os exemplos no tecido cancerígeno e no normal. O RNA total foi extraído de tecidos normais, tecidos cancerígenos e de cancros e dos correspondentes tecidos adjacentes equivalentes. Subsequentemente, foi preparada a primeira cadeia cDNA com transcriptase reversa e a reacção de polimerização em cadeia foi efectuada utilizando iniciadores e uma sonda Taqman específica para cada gene alvo. Os resultados são analisados utilizando o Detector de Sequência ABI PRISM 7700. Os números absolutos são níveis relativos de expressão do gene alvo num tecido particular comparado com o tecido calibrador. 24 6639

Medição de OvrllO; Cone ID16656542; ID do Gene 234617 (SEQ ID Ns : 1, 10, 11, 12 ou 13)

Os números absolutos apresentados na Tabela 2 são níveis relativos de expressão de OvrllO (SEQ ID N°:l ou um seu fragmento, conforme mostrado na SEQ ID N°:10, 11, 12 ou 13) em 12 tecidos normais diferentes. Todos os valores são comparados a um estômago normal (calibrador). Estas amostras RNA são reservas comercialmente disponíveis, com origem em amostras de reserva de um tecido particular de diferentes indivíduos.

Tabela 2: Níveis Relativos de Expressão de OvrllO em Amostras de Reserva

Tecido NORMAL cólon 0.00 endométrio 8.82 rim 7.19 fígado 0.36 ovário 1.19 pâncreas 21.41 próstata 2.79 intestino delgado 0.03 baço 0.00 00000000000000 estôma 1.00 Testículo 8.72 Útero 0.93 25 6639

Os níveis relativos de expressão na Tabela 2 mostram que o OvrllO se expressa a níveis comparáveis na maioria dos tecidos normais analisados. O pâncreas, com um nível de expressão relativo de 21.41, o endométrio (8.82), o testículo (8.72) e o rim (7.19) são os únicos tecidos que expressam elevados níveis de OvrllO ARNm.

Os números absolutos na Tabela 2 foram obtidos analisando reservas de amostras de um determinado tecido de diferentes indivíduos. Não podem ser comparados com os números absolutos originados a partir de RNA obtido de amostras de tecido de um único indivíduo na Tabela 3.

Os números absolutos representados na Tabela 3 são níveis relativos de expressão de OvrllO em 73 pares de amostras correspondentes. Todos os valores são comparados com o estômago normal (calibrador). Um par correspondente é formado por ARNm da amostra de cancro para um tecido específico e ARNm da amostra normal adjacente para esse mesmo tecido do mesmo indivíduo. Além disso, foram também testadas 15 amostras não correspondentes de cancro (do ovário e da glândula mamária) e 14 amostras não correspondentes normais (do ovário e da glândula mamária).

Tabela 3: Níveis Relativos de Expressão OvrllO em Amostras Individuais 26 6639

Amostra ID Tecido Cancro Correspondente Normal Adjacente Normal Ovr103x Ovário 1 86.22 0.53 0vrl0400 Ovário 2 168.31 Ovrll57 Ovário 3 528.22 Ovr63A Ovário 4 1 . 71 Ovr7730 Ovário 5 464.65 0vrl0050 Ovário 6 18.32 Ovrl028 Ovário 7 7 . 78 Ovr1118 Ovário 8 0.00 Ovr13 Ox Ovário 9 149.09 Ovr63 8A Ovário 10 3.14 OvrAlB Ovário 11 21.26 OvrAlC Ovário 12 1.83 OvrC360 Ovário 13 0.52 Ovr18GA Ovário 14 1.07 Ovr20GA Ovário 15 1.88 Ovr2 5GA Ovário 16 2.52 Ovr2 0 61 Ovário 17 2.51 Ovr3 2RA Ovário 18 3.01 Ovr3 5GA Ovário 19 5.17 Ovr40G Ovário 20 0.45 Ovr50GB Ovário 21 2.69 0vrC08 7 Ovário 22 0.47 OvrCl7 9 Ovário 23 1.46 OvrCO 0 4 Ovário 24 4.99 OvrCO 0 7 Ovário 25 13.36 OvrCl0 9 Ovário 26 6.61 MamS516 Glândula 16.39 13.74 27 6639

Mamária 1 MamS621 Glândula Mamária 2 826.70 4.60 MamS854 Glândula Mamária 3 34.60 18.30 Mam59X Glândula Mamária 4 721.57 27.00 MamSO 79 Glândula Mamária 5 80 . 73 5.10 MamS96 7 Glândula Mamária 6 6746.90 72.80 MamS12 7 Glândula Mamária 7 7.00 20.00 MamBOllX Glândula Mamária 8 1042.00 29.00 Maml2B Glândula Mamária 9 1342.00 Mam82XI Glândula Mamária 10 507.00 MamS123 Glândula Mamária 11 24.85 4.24 MamS6 9 9 Glândula Mamária 12 84.74 5.54 MamS997 Glândula Mamária 13 482.71 11.84 Maml62X Glândula Mamária 14 15.73 10.59 MamAOôX Glândula Mamária 15 1418.35 8.20 Mam6 03X Glândula 294.00 28 6639

Mamária 16 Mam6 9 9F Glândula Mamária 17 567.40 86.60 Maml2X Glândula Mamária 18 425.00 31.00 MamAO 4 Glândula Mamária 19 2.00 Mam42DN Glândula Mamária 20 46.05 31.02 Utr Útero 1 600.49 27.95 Utr Útero 2 73.52 18.83 Utr Útero 3 178.00 274.00 Utr Útero 4 289.00 26.00 CutNKS54 Colo Ut 1 2.47 0.61 CutKS83 Colo Ut 2 1.00 2.00 CutNKS18 Colo Ut 3 1.00 0.00 CutNK23 Colo Ut 4 5.84 14.47 CutNK2 4 Colo Ut 5 20.32 33.13 End6 8X Endométrio 1 167.73 544.96 End8963 Endométrio 2 340.14 20.89 End8XA Endométrio 3 1.68 224.41 End65RA Endométrio 4 303.00 5.00 End8 911 Endométrio 5 1038.00 74.00 End3AX Endométrio 6 6.59 1.69 End4XA Endométrio 7 0.43 15.45 End5XA Endométrio 8 17.81 388.02 Endl0479 Endométrio 9 1251.60 31.10 Endl2XA Endométrio 10 312.80 33.80 Riml0 7XD Rim 1 2.68 29.65 Riml0 9XD Rim 2 81.01 228.33 29 6639

RimlOXD Rim 3 0.00 15.30 Rim6XD Rim 4 18.32 9.06 RimllXD Rim 5 1.38 20.75 Rim5XD Rim 6 30.27 0.19 Figl5XA Fígado 1 0.00 0.45 Fig42X Fígado 2 0.81 0.40 Fig9 4XA Fígado 3 12.00 2.16 Plm LC71 Pulmão 1 5.45 3.31 PlmAC3 9 Pulmão 2 1.11 0.00 PlmBR9 4 Pulmão 3 4.50 0.00 PlmSQ45 Pulmão 4 15.03 0 . 76 PlmC20X Pulmão 5 0.00 1.65 PlmSQ56 Pulmão 6 91.77 8.03 ClnAS 8 9 Cólon 1 0 . 79 7.65 ClnC9XR Cólon 2 0.03 0.00 ClnRC6 7 Cólon 3 0.00 0.00 ClnSG36 Cólon 4 0.81 0.35 ClnTX8 9 Cólon 5 0.00 0.00 ClnSG45 Cólon 6 0.00 0.06 ClnTXOl Cólon 7 0.00 0.00 Pan7 7X Pâncreas 1 0.89 2.62 Pan71XL Pâncreas 2 3.99 0.12 Pan82XP Pâncreas 3 59.92 28.44 Pan92X Pâncreas 4 17.21 0.00 EstAC93 Estômago 1 7.54 6.43 EstAC9 9 Estômago 2 19.49 3.19 EstAC4 4 Estômago 3 3.62 0.37 InD21XA Intestino Delgado 1 0.00 0.00 InDH8 9 Intestino 0.00 0.00 30 6639

Delgado 2 Bex32XK Bexiga 1 0.00 0.21 Bex46XK Bexiga 2 0.36 0.32 BexTRl7 Bexiga 3 0.28 0.00 Tst39X Testículo 11.24 2.24 Pro Próstata 1 2.60 24.30 Pro Próstata 2 1.40 2.00 0.00= Negativo A Tabela 2 e a Tabela 3 representam um total combinado de 187 amostras em 16 tipos diferentes de tecidos. Na análise das amostras correspondentes, os níveis mais elevados de expressão encontravam-se na glândula mamária, no útero, no endométrio e no ovário, mostrando um elevado grau de especificidade de tecido nos tecidos ginecológicos. De todas as amostras analisadas, diferentes das acima mencionadas, somente algumas amostras (Riml09XD, PlmSQ56 e Pan82XP) mostravam elevados níveis de expressão de OvrllO.

Além disso, o nível de expressão de ARNm foi comparado em amostras de cancro e no tecido adjacente isogénico, normal do mesmo indivíduo. Esta comparação fornece uma indicação de especificidade para o estágio de cancro (por ex. níveis mais elevados de expressão de ARNm na amostra de cancro comparada com a amostra normal adjacente). A Tabela 3 mostra uma sobre-expressão de OvrllO em 15 dos 16 tecidos de cancro da glândula mamária comparados com os seus normais adjacentes (amostras de 31 6639 glândula mamária MamS516, MamS621, MamS854, Mam59X, MamSO 79, MamS967, MamBOllX, MamS123, MamS699, MamS997, Maml62X, MamA06X, Mam699F, Maml2X e Mam42DN). Verificou-se a sobre-expressão no tecido de cancro em 94% das amostras correspondentes de glândula mamária testadas.

Para o útero, há sobre-expressão de OvrllO em 3 das 4 amostras correspondentes (amostras de útero Utr23XU, Utr85XU e Utrl41X0). Verificou-se a sobre-expressão no tecido de cancro em 75% das amostras correspondentes de útero analisadas.

Para o endométrio, há sobre-expressão de OvrllO em 6 das 10 amostras correspondentes (amostras do endométrio End8963, End65RA, End8911, End3AX, Endl0479 e Endl2XA). Verificou-se a sobre-expressão no tecido de cancro em 60% das amostras correspondentes de endométrio.

Para o ovário, o OvrllO evidencia sobre-expressão em 1 de 1 amostra correspondente. Para as amostras não correspondentes do ovário, 8 das 12 amostras de cancro mostram valores de expressão de OvrllO superiores à média (2.52) nas amostras normais não correspondentes de ovário. Verificou-se a sobre-expressão no tecido de cancro em 67% das amostras não correspondentes de ovário.

No conjunto, o nivel mais a sobre-expressão de correspondentes testadas (incluindo SEQ ID N° : 1, marcador de diagnóstico de especificidade de tecido, ARNm na maioria das amostras são indicativos de OvrllO 10, 11, 12 ou 13) sendo um dos cancros ginecológicos, 32 6639 especificamente, do cancro da glândula mama, uterino, do ovário e do endométrio. mamária ou da 33 6639

LISTAGEM DA SEQUÊNCIA

<110> Salceda, Susana Sun, Yongming Recipon, Hervé Cafferrkey, Robert DIADEXUS LLC

<120> UM NOVO MÉTODO DE DIAGNÓSTICO, MONITORIZAÇÃO, IDENTIFICAÇÃO DE ESTÁGIO, IMAGIOLOGIA E TRATAMENTO DE VÁRIOS CANCROS <130> DEX-0043 <140> <141> <150> 60/098,880 <151> 1998-09-02 <160> 15 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> <211> <212> <213> Homo sapiens <400> 1 ggaaggcagc gggcagctcc actcagccag tacccagata cgctgggaac cttccccagc 60 catggcttcc ctggggcaga tcctcttctg gagcataatt agcatcatca ttattctggc 120 tggagcaatt gcactcatca ttggctttgg tatttcaggg agacactcca tcacagtcac 180 tactgtcgcc tcagctggga acattgggga ggatggaatc ctgagctgca cttttgaacc 240 tgacatcaaa ctttctgata tcgtgataca atggctgaag gaaggtgttt taggcttggt 300 ccatgagttc aaagaaggca aagatgagct gtcggagcag gatgaaatgt tcagaggccg 360 gacagcagtg tttgctgatc aagtgatagt tggcaatgcc tctttgcggc tgaaaaacgt 420 gcaactcaca gatgctggca cctacaaatg ttatatcatc acttctaaag gcaaggggaa 480 1 6639 tgctaacctt gagtataaaa ctggagcctt cagcatgccg gaagtgaatg tggactataa 540 tgccagctca gagaccttgc ggtgtgaggc tccccgatgg ttcccccagc ccacagtggt 600 ctgggcatcc caagttgacc agggagccaa cttctcggaa gtctccaata ccagctttga 660 gctgaactct gagaatgtga ccatgaaggt tgtgtctgtg ctctacaatg ttacgatcaa 720 caacacatac tcctgtatga ttgaaaatga cattgccaaa gcaacagggg atatcaaagt 780 gacagaatcg gagatcaaaa ggcggagtca cctacagctg ctaaactcaa aggcttctct 840 gtgtgtctct tctttctttg ccatcagctg ggcacttctg cctctcagcc cttacctgat 900 gctaaaataa tgtgccttgg ccacaaaaaa gcatgcaaag tcattgttac aacagggatc 960 tacagaacta tttcaccacc agatatgacc tagttttata tttctgggag gaaatgaatt 1020 catatctaga agtctggagt gagcaaacaa gagcaagaaa caaaaagaag ccaaaagcag 1080 aaggctccaa tatgaacaag ataaatctat cttcaaagac atattagaag ttgggaaaat 1140 aattcatgtg aactagacaa gtgtgttaag agtgataagt aaaatgcacg tggagacaag 1200 tgcatcccca gatctcaggg acctccccct gcctgtcacc tggggagtga gaggacagga 1260 tagtgcatgt tctttgtctc tgaattttta gttatatgtg ctgtaatgtt gctctgagga 1320 agcccctgga aagtctatcc caacatatcc acatcttata ttccacaaat taagctgtag 1380 tatgtaccct aagacgctgc taattgactg ccacttcgca actcaggggc ggctgcattt 1440 tagtaatggg tcaaatgatt cactttttat gatgcttcca aaggtgcctt ggcttctctt 1500 cccaactgac aaatgccaaa gttgagaaaa atgatcataa ttttagcata aacagagcag 1560 tcggcgacac cgattttata aataaactga gcaccttctt tttaaacaaa caaatgcggg 1620 tttatttctc agatgatgtt catccgtgaa tggtccaggg aaggaccttt caccttgact 1680 atatggcatt atgtcatcac aagctctgag gcttctcctt tccatcctgc gtggacagct 1740 aagacctcag ttttcaatag catctagagc agtgggactc agctggggtg atttcgcccc 1800 ccatctccgg gggaatgtct gaagacaatt ttggttacct caatgaggga gtggaggagg 1860 atacagtgct actaccaact agtggataaa ggccagggat gctgctcaac ctcctaccat 1920 gtacaggacg tctccccatt acaactaccc aatccgaagt gtcaactgtg tcaggactaa 1980 gaaaccctgg ttttgagtag aaaagggcct ggaaagaggg gagccaacaa atctgtctgc 2040 ttctcacatt agtcattggc aaataagcat tctgtctctt tggctgctgc ctcagcacag 2100 agagccagaa ctctatcggg caccaggata acatctctca gtgaacagag ttgacaaggc 2160 ctatgggaaa tgcctgatgg gattatcttc agcttgttga gcttctaagt ttctttccct 2220 tcattctacc ctgcaagcca agttctgtaa gagaaatgcc tgagttctag ctcaggtttt 2280 cttactctga atttagatct ccagaccctt cctggccaca attcaaatta aggcaacaaa 2340 catatacctt ccatgaagca cacacagact tttgaaagca aggacaatga ctgcttgaat 2400 tgaggccttg aggaatgaag ctttgaagga aaagaatact ttgtttccag cccccttccc 2460 acactcttca tgtgttaacc actgccttcc tggaccttgg agccacggtg actgtattac 2520 atgttgttat agaaaactga ttttagagtt ctgatcgttc aagagaatga ttaaatatac 2580 atttcct 2587 2 6639

<210> 2 <211> 2070 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 cacagagaga ggcagcagct tgctcagcgg acaaggatgc tgggcgtgag ggaccaaggc 60 ctgccctgca ctcgggcctc ctccagccag tgctgaccag ggacttctga cctgctggcc 120 agccaggacc tgtgtgggga ggccctcctg ctgccttggg gtgacaatct cagctccagg 180 ctacagggag accgggagga tcacagagcc agcatgttac aggatcctga cagtgatcaa 240 cctctgaaca gcctcgatgt caaacccctg cgcaaacccc gtatccccat ggagaccttc 300 agaaaggtgg ggatccccat catcatagca ctactgagcc tggcgagtat catcattgtg 360 gttgtcctca tcaaggtgat tctggataaa tactacttcc tctgcgggca gcctctccac 420 ttcatcccga ggaagcagct gtgtgacgga gagctggact gtcccttggg ggaggacgag 480 gagcactgtg tcaagagctt ccccgaaggg cctgcagtgg cagtccgcct ctccaaggac 540 cgatccacac tgcaggtgct ggactcggcc acagggaact ggttctctgc ctgtttcgac 600 aacttcacag aagctctcgc tgagacagcc tgtaggcaga tgggctacag cagcaaaccc 660 actttcagag ctgtggagat tggcccagac caggatctgg atgttgttga aatcacagaa 720 aacagccagg agcttcgcat gcggaactca agtgggccct gtctctcagg ctccctggtc 780 tccctgcact gtcttgcctg tgggaagagc ctgaagaccc cccgtgtggt gggtggggag 840 gaggcctctg tggattcttg gccttggcag gtcagcatcc agtacgacaa acagcacgtc 900 tgtggaggga gcatcctgga cccccactgg gtcctcacgg gcagcccact gcttcaggaa 960 acataccgat gtgttcaact ggaaggtgcg ggcaggctca gacaaactgg gcagcttccc 1020 atccctggct gtggccaaga tcatcatcat tgaattcaac cccatgtacc ccaaagacaa 1080 tgacatcgcc ctcatgaagc tgcagttccc actcactttc tcaggcacag tcaggcccat 1140 ctgtctgccc ttctttgatg aggagctcac tccagccacc ccactctgga tcattggatg 1200 gggctttacg aagcagaatg gagggaagat gtctgacata ctgctgcagg cgtcagtcca 1260 ggtcattgac agcacacggt gcaatgcaga cgatgcgtac cagggggaag tcaccgagaa 1320 gatgatgtgt gcaggcatcc cggaaggggg tgtggacacc tgccagggtg acagtggtgg 1380 gcccctgatg taccaatctg accagtggca tgtggtgggc atcgttagct ggggctatgg 1440 ctgcgggggc ccgagcaccc caggagtata caccaaggtc tcagcctatc tcaactggat 1500 ctacaatgtc tggaaggctg agctgtaatg ctgctgcccc tttgcagtgc tgggagccgc 1560 ttccttcctg ccctgcccac ctggggatcc cccaaagtca gacacagagc aagagtcccc 1620 ttgggtacac ccctctgccc acagcctcag catttcttgg agcagcaaag ggcctcaatt 1680 cctataagag accctcgcag cccagaggcg cccagaggaa gtcagcagcc ctagctcggc 1740 cacacttggt gctcccagca tcccagggag agacacagcc cactgaacaa ggtctcaggg 1800 3 6639 gtattgctaa gccaagaagg aactttccca cactactgaa tggaagcagg ctgtcttgta 1860 aaagcccaga tcactgtggg ctggagagga gaaggaaagg gtctgcgcca gccctgtccg 1920 tcttcaccca tccccaagcc tactagagca agaaaccagt tgtaatataa aatgcactgc 1980 cctactgttg gtatgactac cgttacctac tgttgcattg ttattacagc tatggccact 2040 attattaaag agctgtgtaa catctctggc 2070 <210> 3 <211> 1709 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 3 agcagactca caccagaact acattccctg gccccctgcc tgtgtgcttc tggccaggcc 60 ttggttggca agtctgaccc gagaaaagga tctgcagaaa atcagactat gggatcactt 120 tgtttgtgca ttgggaatga cattctttcc caccccagga aaacctttgg gactttcaga 180 gacattgtgg ctagccaacc acatggtcag cctcaaagtt gagaggctca gtaaccctcc 240 tatccctaga gaattccaaa gtgtggatgt aatttaacta gaaagccatt ggtgactatc 300 tgtgatcctc tggaagtatg ctatgttgtg tatatcttgc atccaaagcc agagggaacc 360 acaatgacta gtaaaacggt ggtctcaatg cccacttagc ctctgcctct gaatttgacc 420 atagtggcgt tcagctgata gagcgggaag aagaaatatg cattttttat gaaaaaataa 480 atatccaaga gaagatgaaa ctaaatggag aaattgaaat acatctactg gaagaaaaga 540 tccaattcct gaaaatgaag attgctgaga agcaaagaca aatttgtgtg acccagaaat 600 tactgccagc caagaggtcc ctggatgccg acctagctgt gctccaaatt cagttttcac 660 agtgtacaga cagaattaaa gacctggaga aacagttcgt aaagcctgat ggtgagaata 720 gagctcgctt ccttccaggg aaagatctga ccgaaaaaga aatgatccaa aaattagaca 780 agctggaact acaactggcc aagaaggagg agaagctgct ggagaaggat ttcatctatg 840 agcaggtctc caggctcaca gacaggctct gcagcaaaac tcagggctgc aagcaggaca 900 cactgctctt agccaagaag atgaatggct atcaaagaag gatcaaaaat gcaactgaga 960 aaatgatggc tcttgttgct gagctgtcca tgaaacaagc cctaaccatt gaactccaaa 1020 aggaagtcag ggagaaagaa gacttcatct tcacttgcaa ttccaggata gaaaaaggtc 1080 tgccactcaa taaggaaatt gagaaagaat ggttgaaagt ccttcgagat gaagaaatgc 1140 acgccttggc catcgctgaa aagtctcagg agttcttgga agcagataat cgccagctgc 1200 ccaatggtgt ttacacaact gcagagcagc gtccgaatgc ctacatccca gaagcagatg 1260 ccactcttcc tttgccaaaa ccttatggtg ctttggctcc ttttaaaccc agtgaacctg 1320 gagccaatat gaggcacata aggaaacctg ttataaagcc agttgaaatc tgaatatgtg 1380 aacaaatcca ggcctctcaa ggaaaagact tcaaccaggc ttccttgtac ccacaggtga 1440 4 6639 aaaatgtgag cataatactt ctaatattat tgataagtaa ggtaaccaca attagtcagc 1500 aacagagtac aacagggttt ctatttaccc accaactact atacctttca tgacgttgaa 1560 tgggacatag aactgtccta catttatgtc aaagtatata tttgaatcgc ttatattttc 1620 tttttcactc tttatattga gtacattcca gaaatttgta gtaggcaagg tgctataaaa 1680 atgcactaaa aataaatctg ttctcaatg 1709 <210> 4 <211> 257 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 4 ttaatgggta agtatttttt atatgcttta gctatagcta aagaaaactg atacttaaca 60 aagttgaata gtattattca ctggtgctcc taaaatattg tttttcagtg taaaatatgc 120 atatcttcta tatttaatat gaaagtcttg aaatgtatca gacagaaggg gatttcagtt 180 tgcaaataat gagcaatgta gcaattttaa cacatttcat aaatatatat tttgtcattg 240 gtggagagca ccatttg 257 <210> 5 <211> 359 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 5 gcctgagagc acttagcgtt catgagtgtc cccaccatgg cctggatgat gcttctcctc 60 ggactccttg cttatggatc aggtcaggga gtggattctc agactgtggt gacccaagag 120 ccatcgttat cagtgtcccc tggagggaca gtcacactca cttgtggctt ggcctctgac 180 tcagtctcta ctaatttctt ccccacctgg taccagcaga ccccaggcca ggctccacgc 240 acgctcatct acagcacaag cactcgctct tctggggtcc ctgatcgttt ctctggctcc 300 atccttggga acaaagctgc cctcaccatt acgggggccc aggcagatga tgaatctga 359 <210> 6 <211> 1372 <212> ADN <213> Homo sapiens 5 6639 <220> <221> variável <222> (6) <220> <221> variável <222> (9) <4 Ο Ο> 6 ccttanagnc ttggttgcca aacagaatgc ccatatccgt cttacttgtg aggaagcttg 60 ccttgggcgc cctctgctgg ccctcctgaa gctaacaggg gcgagtgctc ggtggtttac 120 aaattgcctc catgcagact atgaaactgt tcagcctgct atagttagat ctctggcact 180 ggcccaggag gtcttgcaga tttgcagatc aaggagaacc caggagtttc aaagaagcgg 240 ctagtaaagg tctctgagat ccttgcacta gctacatcct cagggtagga ggaagatggc 300 ttccagaagc atgcggctgc tcctattgct gagctgcctg gccaaaacag gagtcctggg 360 tgatatcatc atgagaccca gctgtgctcc tgggatggtt ttaccacaag tccaattgct 420 atggttactt caggaagctg aggaactggt ctgatgccga gctcgagtgt cagtcttacg 480 gaaacggagc ccacctggca tctatcctga gtttaaagga agccagcacc atagcagagt 540 acataagtgg ctatcagaga agccagccga tatggattgg cctgcacgac ccacagaaga 600 ggcagcagtg gcagtggatt gatggggcca tgtatctgta cagatcctgg tctggcaagt 660 ccatgggtgg gaacaagcac tgtgctgaga tgagctccaa taacaacttt ttaacttgga 720 gcagcaacga atgcaacaag cgccaacact tcctgtgcaa gtaccgacca tagagcaaga 780 atcaagattc tgctaactcc tgcacagccc cgtcctcttc ctttctgcta gcctggctaa 840 atctgctcat tatttcagag gggaaaccta gcaaactaag agtgataagg gccctactac 900 actggctttt ttaggcttag agacagaaac tttagcattg gcccagtagt ggcttctagc 960 tctaaatgtt tgccccgcca tccctttcca cagtatcctt cttccctcct cccctgtctc 1020 tggctgtctc gagcagtcta gaagagtgca tctccagcct atgaaacagc tgggtctttg 1080 gccataagaa gtaaagattt gaagacagaa ggaagaaact caggagtaag cttctagccc 1140 ccttcagctt ctacaccctt ctgccctctc tccattgcct gcaccccacc ccagccactc 1200 aactcctgct tgtttttcct ttggccatgg gaaggtttac cagtagaatc cttgctaggt 1260 tgatgtgggc catacattcc tttaataaac cattgtgtac ataagaggtt gctgtgttcc 1320 agttcagtaa atggtgaatg tggaaaagtg aaataagacc aagaaataca aa 1372

<210> 7 <211> 291 <212> ADN 6 6639 <213> Homo sapiens <220> <221> variável <222> (277) <400> 7 agaatggtag tagtaagaag aagaaaaata ccactggact tagagatgga ttgaatgtgg gtcttaggtt tcatcttcag atgactgggt agactaggga aaagagccag ttctgtattg ggtccaaaga caatgttgat tttttttctt gaggatctga atgtattttg aaggtagagt 60 aagattaagg aaagggagaa atgaaagata 120 gaacagcagt gttctttgct aagatgggga 180 agcatattat atttaagaca atcccatctg 240 agatacntgc cctttagacc t 291 <210> 8 <211> 1275 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> variável <222> (410) <220> <221> variável <222> (728)..(756) <220> <221> variável <222> (957) <400> 8 attctagaac atatgtataa gctaaaaaca ctatcagcta taaaaaaaat caactgccag tatagaaccg ttttgtgtag cattggaata cttaattatc agcttgaagg tatttttgta atgatgggat ttggggccag tagtgaaagt gtattttact cagatcagta gttatcgtgt 60 ccaagaactt taaaacttta agctgtgtat 120 ttgtccattt tgtaagtcat tgtgaatgtt 180 ttaaaagttg acattgaaga acctaagtgg 240 atgtttcctc taaaatattt ccctaaacag 300 7 6639 tggtatacat ggttatttta ttatgagatt tgtatatgtt ctgtgtttct ctgtgaacaa 360 tgtttcagtc tctctgtcac catatgtaag gggaagtcca caaatatagn actacattgc 420 acaaaactaa aattgttaat tacaagaaaa tataggtgct taccttttga aggtttatta 480 atacatatgg ttgtcacaat acgtatatat gataaatggt gtacatatac agatgtttat 540 ggtgtataaa tttttctata cccaattaga attatcttcc tgattcttta ttcaataaca 600 tgctaattcc tcttctatgt tctatagtga cagaatgcta acttttctta taccctggca 660 gaggacagag gagtctggtc taggatgggg aactgaattt ttgaacgaaa aggaaagaga 720 aaggatgnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnntaat gtttcttagt cattttgatt 780 ggccatttga acagtctaca agtttaacgt tatttccagt gaagtaggat ggctgaccta 840 gcaatacatg tttcttcaaa agggtaaaca tgctttagtg acctaaagct aaattttgta 900 catttgacat caggggtgtt ataagtactg cacttaatac aaagctattt ctcaatngtg 960 ttatttttga gacaaatttt tcttcaccat taacttcttg ttggtagctt tttgttttgt 1020 aaaaattgag agatggcaat gcttatctca accagattat ccatctgcag aattaaggta 1080 tgcaactggt aaataaaaga caaatgctcc agtttgtctt tctcaacctt tgagttctta 1140 acctttgagt taaaacctag tctaaatagt gggaatgtct tggtttacag taaggttttc 1200 ttgggaagga tcttggtttt gtgatctatt tgtgaattaa ggagtagatg ttaaccatta 1260 ttttatagat aagtg 1275 <210> 9 <211> 2479 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 9 gtcatattga acattccaga tacctatcat tactcgatgc tgttgataac agcaagatgg 60 ctttgaactc agggtcacca ccagctattg gaccttacta tgaaaaccat ggataccaac 120 cggaaaaccc ctatcccgca cagcccactg tggtccccac tgtctacgag gtgcatccgg 180 ctcagtacta cccgtccccc gtgccccagt acgccccgag ggtcctgacg caggcttcca 240 accccgtcgt ctgcacgcag cccaaatccc catccgggac agtgtgcacc tcaaagacta 300 agaaagcact gtgcatcacc ttgaccctgg ggaccttcct cgtgggagct gcgctggccg 360 ctggcctact ctggaagttc atgggcagca agtgctccaa ctctgggata gagtgcgact 420 cctcaggtac ctgcatcaac ccctctaact ggtgtgatgg cgtgtcacac tgccccggcg 480 gggaggacga gaatcggtgt gttcgcctct acggaccaaa cttcatcctt cagatgtact 540 catctcagag gaagtcctgg caccctgtgt gccaagacga ctggaacgag aactacgggc 600 gggcggcctg cagggacatg ggctataaga ataattttta ctctagccaa ggaatagtgg 660 atgacagcgg atccaccagc tttatgaaac tgaacacaag tgccggcaat gtcgatatct 720 8 6639 ataaaaaact gtaccacagt gatgcctgtt cttcaaaagc agtggtttct ttacgctgtt 780 tagcctgcgg ggtcaacttg aactcaagcc gccagagcag gatcgtgggc ggtgagagcg 840 cgctcccggg ggcctggccc tggcaggtca gcctgcacgt ccagaacgtc cacgtgtgcg 900 gaggctccat catcaccccc gagtggatcg tgacagccgc ccactgcgtg gaaaaacctc 960 ttaacaatcc atggcattgg acggcatttg cggggatttt gagacaatct ttcatgttct 1020 atggagccgg ataccaagta caaaaagtga tttctcatcc aaattatgac tccaagacca 1080 agaacaatga cattgcgctg atgaagctgc agaagcctct gactttcaac gacctagtga 1140 aaccagtgtg tctgcccaac ccaggcatga tgctgcagcc agaacagctc tgctggattt 1200 ccgggtgggg ggccaccgag gagaaaggga agacctcaga agtgctgaac gctgccaagg 1260 tgcttctcat tgagacacag agatgcaaca gcagatatgt ctatgacaac ctgatcacac 1320 cagccatgat ctgtgccggc ttcctgcagg ggaacgtcga ttcttgccag ggtgacagtg 1380 gagggcctct ggtcacttcg aacaacaata tctggtggct gataggggat acaagctggg 1440 gttctggctg tgccaaagct tacagaccag gagtgtacgg gaatgtgatg gtattcacgg 1500 actggattta tcgacaaatg aaggcaaacg gctaatccac atggtcttcg tccttgacgt 1560 cgttttacaa gaaaacaatg gggctggttt tgcttccccg tgcatgattt actcttagag 1620 atgattcaga ggtcacttca tttttattaa acagtgaact tgtctggctt tggcactctc 1680 tgccatactg tgcaggctgc agtggctccc ctgcccagcc tgctctccct aaccccttgt 1740 ccgcaagggg tgatggccgg ctggttgtgg gcactggcgg tcaattgtgg aaggaagagg 1800 gttggaggct gcccccattg agatcttcct gctgagtcct ttccaggggc caattttgga 1860 tgagcatgga gctgtcactt ctcagctgct ggatgacttg agatgaaaaa ggagagacat 1920 ggaaagggag acagccaggt ggcacctgca gcggctgccc tctggggcca cttggtagtg 1980 tccccagcct acttcacaag gggattttgc tgatgggttc ttagagcctt agcagccctg 2040 gatggtggcc agaaataaag ggaccagccc ttcatgggtg gtgacgtggt agtcacttgt 2100 aaggggaaca gaaacatttt tgttcttatg gggtgagaat atagacagtg cccttggtgc 2160 gagggaagca attgaaaagg aacttgccct gagcactcct ggtgcaggtc tccacctgca 2220 cattgggtgg ggctcctggg agggagactc agccttcctc ctcatcctcc ctgaccctgc 2280 tcctagcacc ctggagagtg aatgcccctt ggtccctggc agggcgccaa gtttggcacc 2340 atgtcggcct cttcaggcct gatagtcatt ggaaattgag gtccatgggg gaaatcaagg 2400 atgctcagtt taaggtacac tgtttccatg ttatgtttct acacattgat ggtggtgacc 2460 ctgagttcaa agccatctt 2479

<210 > 10 <211> 576 <212> ADN <213> Homo sapiens <4 0 0> 10 9 6639 ttcaaagaca tattagaagt tgggaaaata attcatgtga actagacaag tgtgttaaga 60 gtgataagta aaatgcacgt ggagacaagt gcatccccag atctcaggga cctccccctg 120 cctgtcacct ggggagtgag aggacaggat agtgcatgtt ctttgtctct gaatttttag 180 ttatatgtgc tgtaatgttg ctctgaggaa gcccctggaa agtctatccc aacatatcca 240 catcttatat tccacaaatt aagctgtagt atgtacccta agacgctgct aattgactgc 300 cacttcgcaa ctcaggggcg gctgcatttt agtaatgggt caaatgattc actttttatg 360 atgcttccaa aggtgccttg gcttctcttc ccaactgaca aatgccaaag ttgagaaaaa 420 tgatcataat tttagcataa acagagcagt cggcgacacc gattttataa ataaactgag 480 caccttcttt ttaaacaaac aaatgcgggt ttatttctca gatgatgttc atccgtgaat 540 ggtccaggga aggacctttc accttgacta tatggc 576 <210> 11 <211> 890 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 11 caagctctga ggcttctcct ttccatcctg cgtggacagc taagacctca gttttcaata 60 gcatctagag cagtgggact cagctggggt gatttcgccc cccatctccg ggggaatgtc 120 tgaagacaat tttggttacc tcaatgaggg agtggaggag gatacagtgc tactaccaac 180 tagtggataa aggccaggga tgctgctcaa cctcctacca tgtacaggga cgtctcccca 240 ttacaactac ccaatccgaa gtgtcaactg tgtcaggact aagaaaccct ggttttgagt 300 agaaaagggc ctggaaagag gggagccaac aaatctgtct gcttcctcac attagtcatt 360 ggcaaataag cattctgtct ctttggctgc tgcctcagca cagagagcca gaactctatc 420 gggcaccagg ataacatctc tcagtgaaca gagttgacaa ggcctatggg aaatgcctga 480 tgggattatc ttcagcttgt tgagcttcta agtttctttc ccttcattct accctgcaag 540 ccaagttctg taagagaaat gcctgagttc tagctcaggt tttcttactc tgaatttaga 600 tctccagacc cttcctggcc acaattcaaa ttaaggcaac aaacatatac cttccatgaa 660 gcacacacag acttttgaaa gcaaggacaa tgactgcttg aattgaggcc ttgaggaatg 720 aagctttgaa ggaaaagaat actttgtttc cagccccctt cccacactct tcatgtgtta 780 accactgcct tcctggacct tggagccacg gtgactgtat tacatgttgt tatagaaaac 840 tgattttaga gttctgatcg ttcaagagaa tgattaaata tacatttcct 890 <210> 12 <211> 406 10 6639 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> variável <222> (30) <220> <221> variável <222> (248) <220> <221> variável <222> (383) <4 0 0> 12 gtgaatgtgg actataatgc cagctcagan accttgcggt gtgaggctcc ccgatggttc 60 ccccagccca cagtggtctg ggcatcccaa gttgaccagg gagccaactt ctcggaagtc 120 tccaatacca gctttgagct gaactctgag aatgtgacca tgaaggttgt gtctgtgctc 180 tacaatgtta cgatcaacaa cacatactcc tgtatgattg aaaatgacat tgccaaagca 240 acaggggnta tcaaagtgac agaatcggag atcaaaaggc ggagtcacct acagctgcta 300 aactcaaagg cttctctgtg tgtctcttct ttctttgcca tcagctgggc acttctgcct 360 ctcagccctt acctgatgct aanataatgt gccttggcca caaaaa 406

<210> 13 <211> 462 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 13 ggaaggcagc ggcagctcca ctcagccagt acccagatac gctgggaacc ttccccagcc 60 atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct 120 ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact 180 actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct 240 gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc 300 catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg 360 acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg 420 11 6639 caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca ct 462

<210> 14 <211> 272 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 14 gcagcttgct cagcggacaa ggatgctggg cgtgagggac caaggcctgc cctgcactcg 60 ggcctcctcc agccagtgct gaccagggac ttctgacctg ctggccagcc aggacctgtg 120 tggggaggcc ctcctgctgc cttggggtga caatctcagc tccaggctac agggagaccg 180 ggaggatcac agagccagca tggatcctga cagtgatcaa cctctgaaca gcctcgtcaa 240 ggtgattctg gataaatact acttcctctg cg 272

<210> 15 <211> 492 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15

Met Ala Leu Asn Ser Gly Ser Pro Pro Ala Ile Gly Pro Tyr Tyr Glu 15 10 15

Asn His Gly Tyr Gin Pro Glu Asn Pro Tyr Pro Ala Gin Pro Thr Vai 20 25 30

Vai Pro Thr Vai Tyr Glu Vai His Pro Ala Gin Tyr Tyr Pro Ser Pro 35 40 45

Vai Pro Gin Tyr Ala Pro Arg Vai Leu Thr Gin Ala Ser Asn Pro Vai 50 55 60

Vai Cys Thr Gin Pro Lys Ser Pro Ser Gly Thr Vai Cys Thr Ser Lys 65 70 75 80

Thr Lys Lys Ala Leu Cys Ile Thr Leu Thr Leu Gly Thr Phe Leu Vai 12 6639 85 90 95

Gly Ala Ala Leu Ala Ala Gly Leu Leu Trp Lys Phe Met Gly Ser Lys 100 105 110

Cys Ser Asn Ser Gly Ile Glu Cys Asp Ser Ser Gly Thr Cys Ile Asn 115 120 125

Pro Ser Asn Trp Cys Asp Gly Vai Ser His Cys Pro Gly Gly Glu Asp 130 135 140

Glu Asn Arg Cys Vai Arg Leu Tyr Gly Pro Asn Phe Ile Leu Gin Met 145 150 155 160

Tyr Ser Ser Gin Arg Lys Ser Trp His Pro Vai Cys Gin Asp Asp Trp 165 170 175

Asn Glu Asn Tyr Gly Arg Ala Ala Cys Arg Asp Met Gly Tyr Lys Asn 180 185 190

Asn Phe Tyr Ser Ser Gin Gly Ile Vai Asp Asp Ser Gly Ser Thr Ser 195 200 205

Phe Met Lys Leu Asn Thr Ser Ala Gly Asn Vai Asp Ile Tyr Lys Lys 210 215 220

Leu Tyr His Ser Asp Ala Cys Ser Ser Lys Ala Vai Vai Ser Leu Arg 225 230 235 240

Cys Leu Ala Cys Gly Vai Asn Leu Asn Ser Ser Arg Gin Ser Arg Ile 245 250 255

Vai Gly Gly Glu Ser Ala Leu Pro Gly Ala Trp Pro Trp Gin Vai Ser 260 265 270

Leu His Vai Gin Asn Vai His Vai Cys Gly Gly Ser Ile Ile Thr Pro 275 280 285 13 6639

Glu Trp Ile Vai Thr Ala Ala His Cys Vai Glu Lys Pro Leu Asn Asn 290 295 300

Pro Trp His Trp Thr Ala Phe Ala Gly Ile Leu Arg Gin Ser Phe Met 305 310 315 320

Phe Tyr Gly Ala Gly Tyr Gin Vai Gin Lys Vai Ile Ser His Pro Asn 325 330 335

Tyr Asp Ser Lys Thr Lys Asn Asn Asp Ile Ala Leu Met Lys Leu Gin 340 345 350

Lys Pro Leu Thr Phe Asn Asp Leu Vai Lys Pro Vai Cys Leu Pro Asn 355 360 365

Pro Gly Met Met Leu Gin Pro Glu Gin Leu Cys Trp Ile Ser Gly Trp 370 375 380

Gly Ala Thr Glu Glu Lys Gly Lys Thr Ser Glu Vai Leu Asn Ala Ala 385 390 395 400

Lys Vai Leu Leu Ile Glu Thr Gin Arg Cys Asn Ser Arg Tyr Vai Tyr 405 410 415

Asp Asn Leu Ile Thr Pro Ala Met Ile Cys Ala Gly Phe Leu Gin Gly 420 425 430

Asn Vai Asp Ser Cys Gin Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Vai Thr Ser 435 440 445

Asn Asn Asn Ile Trp Trp Leu Ile Gly Asp Thr Ser Trp Gly Ser Gly 450 455 460

Cys Ala Lys Ala Tyr Arg Pro Gly Vai Tyr Gly Asn Vai Met Vai Phe 465 470 475 480 14 6639

Thr Asp Trp Ile Tyr Arg Gin Met Lys Ala Asn Gly 485 490

Lisboa, 29 de Janeiro de 2009 15

Claims (10)

1. 6639 REIVINDICAÇÕES 1. Um método diagnóstico indicativo da presença de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero num paciente, consistindo o método em: (a) medição dos níveis de uma polinucleótida constituído pela SEQ ID NO. 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada, um ARNm nativo codificado ou um fragmento derivado (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais obtida do paciente; (b) comparação de níveis medidos de CSG com os níveis de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluidos corporais obtidos num controlo humano normal, em que uma alteração nos níveis medidos de CSG no paciente versus os níveis de CSG no controlo humano normal está associada à presença de um cancro seleccionado.
2. 2. Um método diagnóstico indicativo da presença de metástase de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero num paciente possuindo o cancro seleccionado, desconhecendo-se se metastatizou, e consistindo o método em: (a) medição dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID NO. 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada, um ARNm nativo codificado ou um fragmento derivado (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal obtida do paciente; 1 6639 b) comparação de níveis medidos de CSG com níveis de CSG numa amostra de células, tecido ou fluido do corpo obtidos de um controlo humano normal, em que um aumento nos níveis medidos de CSG no paciente versus os níveis de CSG no controlo humano normal está associado a um cancro metastatizado.
3. 3. Um método de identificar o estágio de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero num paciente possuindo o cancro seleccionado, consistindo o método em: (a) medição dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N° . 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada, um ARNm nativo codificado ou um fragmento derivado (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal obtida do paciente; (b) comparação de níveis medidos de CSG com níveis de CSG numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal obtidos de uma amostra de controlo humano normal, em que um aumento nos níveis medidos de CSG no paciente referido versus os níveis de CSG no controlo humano normal está associado a um cancro em progressão e um decréscimo nos níveis medidos de CSG está associado a um cancro que está em regressão ou em remissão.
4. 4. Um método de monitorizar um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero num 2 6639 paciente possuindo o cancro seleccionado no inicio de metástase, consistindo em: (a) medição periódica dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N°. 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada, um ARNm nativo codificado ou um fragmento derivado (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal obtidos do paciente que possui o cancro seleccionado, desconhecendo-se se metastatizou; (b) comparação da medição periódica de níveis de CSG com níveis de CSG num tipo de células, tecidos ou fluido corporal obtidos de um controlo humano normal, no qual um aumento em qualquer dos níveis de CSG periodicamente medidos no paciente versus os níveis de CSG do controlo humano normal está associado a um cancro que metastatizou.
5. 5. Um método de monitorizar a alteração do estágio de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero num paciente que possui o cancro seleccionado, consistindo em: (a) medição periódica dos níveis de uma polinucleótida constituída pela SEQ ID N°. 1, 10, 11, 12 ou 13, uma proteína nativa codificada, um ARNm nativo codificado ou um fragmento derivado (CSG) numa amostra de células, tecidos ou fluido corporal obtidos do paciente que possui o cancro seleccionado; 3 6639 (b) comparação da medição periódica de níveis de CSG com níveis de CSG num tipo de células, tecidos ou tipo de fluido corporal obtidos num controlo humano normal, em que um aumento em qualquer dos níveis de CSG periodicamente medidos no paciente versus os níveis de CSG do controlo humano normal está associado a um cancro cujo estágio está em progressão e um decréscimo está associado a um cancro cujo estágio está a regredir ou em remissão.
6. 6. Um anticorpo isolado ou fragmento de anticorpo que se vincula especificamente a um fragmento da proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1, em que o fragmento da proteína codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1 está codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 12 ou 13.
7. 7. Utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se vincula especificamente à proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1 ou a um fragmento da proteína codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1, em que o fragmento da proteína codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1 está codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 10, 11, 12 ou 13, no fabrico de um medicamento para imagiologia in vivo de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do ovário, do endométrio e do útero.
8. 8. Utilização de acordo com a reivindicação 7, em que o anticorpo ou fragmento de anticorpo mencionado se 4 6639 encontra marcado com iões paramagnéticos ou um radioisótopo.
9. 9. Utilização de um anticorpo ou fragmento de anticorpo que se vincula especificamente à proteína codificada pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1 ou a um fragmento da proteína codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N°: 1, em que o fragmento da proteína codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N° : 1 está codificado pela sequência polinucleótida SEQ ID N° : 10, 11, 12 ou 13, no fabrico de um medicamento para o tratamento de um cancro seleccionado de um cancro da mama, do endométrio e do útero.
10. 10. Utilização de acordo com a reivindicação 9, em que o anticorpo ou fragmento de anticorpo mencionado é conjugado para um agente citotóxico. Lisboa, 29 de Janeiro de 2009 5