NO872227L - Tumornekrosefaktorformulering. - Google Patents
Tumornekrosefaktorformulering.Info
- Publication number
- NO872227L NO872227L NO872227A NO872227A NO872227L NO 872227 L NO872227 L NO 872227L NO 872227 A NO872227 A NO 872227A NO 872227 A NO872227 A NO 872227A NO 872227 L NO872227 L NO 872227L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- tnf
- polymer
- polyethylene glycol
- unsubstituted
- peg
- Prior art date
Links
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 66
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 56
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims abstract description 6
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 95
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 10
- JBMAUZQHVVHPEL-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-3-nitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1[N+]([O-])=O JBMAUZQHVVHPEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 claims description 8
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 7
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical group O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 claims description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 5
- -1 4-hydroxy-3-nitrobenzene sulfonate ester Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 91
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 15
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 12
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N glutaric acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 2
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 1
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Polymers OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000573199 Homo sapiens Protein PML Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000605939 Wolinella succinogenes Species 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000008043 acidic salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001913 cyanates Chemical class 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 description 1
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 102000054896 human PML Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N isocyanuric acid Chemical compound OC1=NC(O)=NC(O)=N1 ZFSLODLOARCGLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003509 long acting drug Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 210000002864 mononuclear phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- UPXAZUFKXWLNMF-UHFFFAOYSA-N n'-propan-2-ylmethanediimine Chemical compound CC(C)N=C=N UPXAZUFKXWLNMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en kjemisk modifisering av tumornekrosefaktor TNF som endrer og forbedrer de kjemiske og/eller fysiologiske egenskaper derav.
Human-TNF er et 157-aminosyreprotein inneholdende to cystein-rester, én i posisjon 69 og den andre i posisjon 101. TNF ble først beskrevet av Carswell et al.,"Proe. Nati. Acad. Sei."
(USA), 1975, 72:3666, og har vist seg å være cytotoksisk selektiv mot neoplastiske celler. TNF er videre renset fra cellekultur av Matthews et al., "Brit. J. Cancer", 1981, 44:418 (fra mononukleær fagocyter avledet fra BCG-injiserte kaniner) og av Mannel et al., "Infect. Immun." (1980), 30:523; (1981), 33:156 (fra kulturer av makrofaganriket peritoneal eksudatceller fra BCG-injiserte mus). Sekvensen som koder TNF, produsert av humanpromyelocytisk leukemicelle-linje HL-60, ATCC Deposit No. CCL240 er klonet og eksprimen-tert i E. coli. Se PCT US85/01921 og PCT US/02381.
Bruken av polypeptider i sirkulatoriske systemer for å fremstille en spesiell fysiologisk respons er velkjent i medisinen. En begrensning til den potensielle terapeutiske fordel oppnådd fra den kliniske bruk av polypeptider er deres evne å gi en immunrespons i det sirkulatoriske system. Denne immunrespons kan forårsakes av aggregater i materialet før injisering som beskrevet av R. Uling (1970), "J. Clin. Endrocr.", 31, 679-688, W. Moore (1978), "J. Clin. Endrocrinol. Metab.", 46, 20-27 og W. Moore og P. Leppert (1980)", J. Clin. Endrocrinol. Metab".,, 51, 691-697. Denne respons involverer produksjon av antistoffer mot polypeptidene i det sirkulatoriske system inn i hvilket de injiseres. Denne anti-stoffproduksjon kan redusere eller eliminere den ønskede biologiske funksjon for polypeptidet, enkelte ganger ved å forårsake redusert oppholdstid i det sirkulatoriske system (redusert halveringstid) eller ved å modifisere molekylet via antistoff-polypeptidinteraksjon.
Modifikasjon av disse potensielt brukbare terapeutiske polypeptider slik at immunresponsen ødelegges eller i det minste reduseres mens det fremdeles opprettholder de ønskede fysiologiske aktiviteter ville tillate bruken av disse polypeptider i pattedyrsirkulatoriske systemer uten de ovenfor nevnte mangler. I tillegg, og på grunn av den økede halveringstid for det sirkulerende polypeptid ville mindre mengder av polypeptidet være nødvendig for den ønskede terapeutiske virkning enn det som til nå har vært mulig.
Problemene med immunogenitet og kort halveringstid i sirkula-sjonen som nevnt ovenfor samt andre uønskede egenskaper for visse proteiner er vel erkjent og forskjellige modifikasjoner av polypeptider har vært foretatt for å løse problemene. Dette inkluderer modifiseringen av proteiner med i det vesentlige rettkjedede polymerer slik som polyetylenglykol, PEG, eller polypropylenglykol, PPG. F.eks. beskriver US-PS 4.261.973 konjugering av immunogene allergenmolekyler med ikke-immunogene vannoppløselige polymerer slik som PEG for å redusere allergenets immunogenitet. US-PS 4.301.144 beskriver konjugering av hemoglobin til PEG, PPG, en kopolymer av etylenglykol og propylenglykol, eller etere, estere eller dehydratiserte produkter av slike polymerer for å øke den oksygenbærende evne for hemoglobinmolekylet. EP-publikasjon 98.110 beskriver at kobling av et polypeptid eller et glykoprotein til en polyoksyetylen-polyoksypropylenkopolymer øker lengden av den fysiologiske aktivitet. Fortrinnsvis er polypeptidet eller glykoproteinet et enzym eller nativ interferon som er vannoppløselige. US-PS 4.179.337 beskriver kobling av vannoppløselige polypeptider slik som enzymer og insulin til PEG eller PPG for å redusere immunogeniteten for polypeptidet mens man bibeholder en vesentlig andel av den ønskede fysiologiske aktivitet. US-PS 4.002.531 beskriver en forskjellig metode for kobling av enzymer til PEG via et aldehydderivat.
US-PS 4.055.635 beskriver farmasøytiske preparater som omfatter et vannoppløselig kompleks av et proteolytisk enzym bundet kovalent til et polymermateriale slik som polysak-karider.
US-PS 3.960.830 beskriver peptider bundet til en polyalkylen-glykolpolymer slik som polyetylenglykol.
US-PS 4.088.538 beskriver et reversibelt oppløselig enzyma-tisk aktivt polymerenzymprodukt omfattende et enzymkovalent bundet til en organisk polymer slik som polyetylenglykol.
US-PS 4.415.665 beskriver en fremgangsmåte for kobling av en organisk ligand inneholdende minst én primær eller sekundær aminogruppe, minst én tiolgruppe og/eller minst én aromatisk hydroksygruppe (beskrevet i kolonne 3, linje 19-36) til en polymerbærer med minst én hydroksylgruppe (beskrevet i kolonne 2, linje 42-66).
US-PS 4.495.285 beskriver en ikke-immunogen plasminogenakti-vator hvis aminosyresidekjeder er koblet til en polyalkylen-glykol via et koblingsmiddel.
US-PS 4.412.989 beskriver et oksygenbærende materiale inneholdende hemoglobin eller et derivat derav, kovalent koblet via en amidbinding til polyetylen- eller polypropylenglykol .
US-PS 4.496.689 beskriver et kovalent forbundet kompleks av a-l-proteinaseinhibi tor med en polymer slik som PEG eller metoksypolyetylenglykoler.
US-P 3.619.371 beskriver en polymermatriks med en biologisk aktiv substans kjemisk bundet dertil.
US-PS 3.788.948 beskriver bruken av organiske cyanatforbind-elser for å binde proteiner til polymerer.
US-PS 3.876.501 beskriver aktivering av vannoppløselige karbohydrater med cyanogenbromid for å forbedre bindingen til enzymer og andre proteiner.
US-PS 4.055.635 beskriver farmasøytiske preparater av et proteolytisk enzym kovalent bundet til et polymermateriale.
EP-PS 152.847 beskriver et enzymkonjugatpreparat omfattende et enzymkonjugat, et kalsiumsalt og et polyetylenglykol.
JP-publikasjon 57192435 beskriver modifiserte polypeptider der alle, eller en del, av aminogruppene er substituert med en polyetoksyldel. DE-PS 2312615 beskriver kobling av polymerer til forbindelsene inneholdende hydroksy- eller aminogrupper.
EP-PS 147.761 beskriver et kovalent konjugat av a-l-proteina-seinhibitor og vannoppløselig polymer der polymeren kan være polyetylenglykol.
US-PS 4.414.147 beskriver at man kan gjøre interferon mindre hydrofobt ved å konjugere det til et anhydrid av en dikarbok-sylsyre slik som polyetylenravsyreanhydrid.
EP-PS 154.316 beskriver kjemisk modifiserte lymfokiner inneholdende PEG bundet direkte til minst én primær aminogruppe av et lymfokin slik som a-, p- eller gammainterferon eller interleukin-2.
I tillegg til disse patenter og publikasjoner diskuterer diverse artikler konseptet med anvendelse av aktivert PEG eller PPG som modif iseringsmiddel for proteiner slik som enzymer, IgG og albumin. F.eks. beskriver ' Inada et al. "Biochem and Biophys. Res. Comm.", 122, 845-850 (1984) modifisering av vannoppløselig lipoproteinlipase for å gjøre den oppløselig i organiske oppløsningsmidler slik som benzen ved bruk av cyanursyreklorid som koblingsmiddel med PEG. Takahashi et al., "Biochem. and Biophys. Res. Comm.", 121, 261-265 (1984) beskriver modifisering av peperrotperoksydase ved bruk av cyanursyrekloridtirazin med PEG for å gjøre det vannoppløselige enzym aktivt og oppløselig i benzen. Suzuki et al., "Biochem. Biophys. Acta", 788, 248-255 (1984) beskriver undertrykkelse av aggregering av IgG ved bruk av cyanursyrekloridaktiverte PEG. Abuchowski et al., "Cancer Biochem. Biophys.", 7, 175-186 (1984) angir at modifisering av asparaginaser fra E. coli og Vibrio succinogenes ved bruk av PEG som er aktivert med suksinimidylsuksinat øker halveringstiden og reduserer proteinenes immunogenitet. Davis et al., "Biomedical Polymers", (New York: Academic Press, 1980), s. 441-451 beskriver at enzymer som vanligvis er uoppløselige kan oppløseliggjøres med PEG-forbindelse uten ytterligere detaljer. Diverse andre artikler diskuterer modifisering av enzymer slik som urikase, streptokinase, katalase, araginase og asparaginase med PEG, aktivert av suksinimidylsuksinat eller cyanursyreklorid for å øke halveringstiden og å redusere proteinets immunogenitet.
Ingen av disse referanser beskriver imidlertid hvordan man skal benytte en polymermodifiseringsprosess for å øke den biologiske aktivitet og TNF's farmokinetika.
I henhold til dette tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en modifisering av TNF for å bibeholde dens biologiske aktivitet og potensielt å øke den fysiologiske halveringstid derav og å redusere immunogeniteten ved å redusere eller eliminere aggrigering av proteinet eller ved å maskere antigenedeterminanter. Det er også tatt sikte på at den forlengede halveringstid av det modifiserte TNF, relateres til proteinets effektivitet.
Mere spesielt er foreliggende oppfinnelse rettet mot et farmasøytisk preparat omfattende et ikke-toksisk, inert, farmasøytisk akseptabelt vandig bærermedium hvori det er oppløst biologisk aktivt TNF, kovalent konjugert til en vannoppløselig polymer valgt blant polyetylenglykolpolymerer og polyoksyetylerte polyoler, hvori polyetylenglykolpolymeren er usubstituert eller substituert i en ende med en alkylgruppe, og polyolen er usubstituert.
Fortrinnsvis er polymeren usubstituert polyetylenglykol, PEG, eller monometyl , PEG, mPEG, og er koblet til TNF via en amidbinding som dannes fra 4-hydroksy-3-nitrobenzensulfonat-esteren eller N-hydroksysuksinimidesteren av en PEG- eller mPEG-karboksylsyre.
Et annet trekk ved oppfinnelsen ligger i en fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat og som omfatter: a) å fremstille en vannoppløselig polymer med minst én terminal reaktiv gruppe der polymeren er valgt blant polyetylenglykolpolymerer og polyoksyetylerte polyoler idet polyetylenglykolpolymeren er usubstituert eller substituert i en ende med en alkylgruppe og polyolen er usubstituert; b) å omsette biologisk aktivt TNF med den reaktive gruppe av polymeren for å tilveiebringe biologisk aktivt, selektivt
konjugert TNF; og
c) å formulere nevnte TNF i et ikke-toksisk, inert farma-søytisk akseptabelt vandig bærermedium.
Det nevnte TNF kan oppnås fra vevkulturer eller ved rekombi-nantteknikker og fra en hvilken som helst pattedyrkilde slik som f.eks. mus, rotte, kanin, primater, svin og mennesker. Fortrinnsvis oppnås slikt protein fra en humankilde og er helst rekombinant human-TNF.
Det her nevnte TNF kan oppnås i rekombinant form som beskrevet av Pennica et al., "Nature", (1984) 312: 724-729; Yamada et al., "J. Biotechnology", (1985) 3: 141-153; Wang et al., "Science" (1985) 228: 149-154; Shirai et al., "Nature", (London), (1985) 313: 803-806; EP-PS 155.549, EP-PS 158.286, EP-PS 168.214 samt PCT US85/01921. Rekombinant kanin-TNF kan oppnås som beskrevet i EP-PS 146.026 og EP-PS 148.311.
Kloning av human-TNF med 151 og 155 aminosyrer (2 og 6 mindre enn den native form) er beskrevet i EP-PS 155.549 og human-TNF på 155 aminosyrer er beskrevet i EP-PS 158.286 tilsvarende GB-PS 2.158.829A. Kloning av natur-TNF med 157 aminosyrer og forskjellige modifiserte former (muteiner) derav, er beskrevet i EP-PS 168.214 og PCT US85/01921.
Fortrinnsvis er det her beskrevne TNF et human-TNF-mutein hvori de første 8 aminosyrerester er utelatt, ved bruk av den prosedyre som er beskrevet i PCT W086/02381 eller dette TNF er et cysteinfattig mutein, fremstilt på samme måte som beskrevet i US-PS 4.518.584.
Den nøyaktige kjemiske struktur for det her nevnte TNF vil avhenge av et antall faktorer. Da ioniserbare amino- og karboksylgrupper er tilstede i molekylet, kan en spesiell form av TNF oppnås som et surt eller basisk salt eller i nøytral form. Alle slike preparater bibeholder sin bioaktivitet når de anbringes i egnede omgivelsesbetingelser og er også inkludert under definisjonen av TNF slik den her gis. Videre kan den primære aminosyresekvens til dette TNF forbedres ved derivatisering ved bruk av sukkerdeler (glyko-sylering) eller ved andre supplementære molekyler slik som lipider, fosfat, acetylgrupper o.l., mere generelt ved konjugering med sakkarider. Visse aspekter ved en slik forbedring gjennomføres via posttranslasjonell behandlings-systemer i den produserende vert; andre slike modifiseringer kan gjennomføres in vitro. I ethvert tilfelle er slike modifiseringer inkludert i den her gitte definisjon av TNF sålenge bioaktiviteten til TNF ikke ødelegges. Det er selvfølgelig forventet at slike modifiseringer kvantitativt eller kvalitativt påvirker bioaktiviteten, enten ved å forbedre eller redusere aktiviteten til TNF i forskjellige analyser.
Uttrykket "selektivt konjugert" slik det her benyttes for anvendelse på TNF henviser til TNF som er kovalent bundet via en av sine aminosyrerester. Mens restene kan være hvilke som helst rekative aminosyrer på proteinet, slik som en eller to cysteiner eller den N-terminale aminosyregruppe, er den reaktive aminosyre fortrinnsvis lycin som er bundet til en reaktiv gruppe av den aktiverte polymer via sin frie c-aminogruppe, eller glutamin- eller aspartinsyre som er bundet til polymeren via en amidbinding.
Polymeren hvortil TNF er bundet, er en homopolymer eller kopolymer av PEG eller er en polyoksyetylert polyol, forut-satt i alle tilfeller at polymeren er oppløselig i vann ved romtemperatur. Eksempler på kopolymerer inkluderer f.eks. kopolymerer av etylenglykol og propylenglykol, eller av etylen og maleinsyreanhydrid. Eksempler på polyoksyetylerte polyoler inkluderer f.eks. polyoksyetylert glyserol, polyoksyetylert sorbitol, polyoksyetylert glukose o.l. Fortrinnsvis er PEG-polymeren en homopolymer og den polyoksylerte polyol polyoksylert glyserol.
Glyserolskjelettet til polyoksyetylert glyserol er det samme skjelett som opptrer naturlig hos f. eks. mennesker og dyr som mono-, di- og triglyserider. Derfor vil denne forgrening ikke nødvendigvis sees som et fremmed stoff i legemet.
Polymeren behøver ikke å ha noen spesiell molekylvekt, men det er foretrukket at molekylvekten er mellom ca. 300 og 100.000 og helst mellom 3050 og 40.000, avhengig f.eks. av det spesielle benyttede protein.
Fortrinnsvis er PEG-polymeren usubstituert , men den kan også være substituert i en ende med en alkylgruppe. Fortrinnsvis er alkylgruppen C1_4-alkylgruppe, og aller helst en metyl-gruppe. Fortrinnsvis er polymeren en usubstituert homopolymer av PEG, eller en monometylsubstituert homopolymer av PEG, og har en molekylvekt fra ca. 350 til 40.000.
Dette TNF er konjugert via en terminalreaktiv gruppe på polymeren. Polymeren med den eller de reaktive grupper kalles her aktivert polymer. Den reaktive gruppe reagerer selektivt med frie amino- eller andre reaktive grupper på TNF. Da reaksjonen av reaktiv gruppe med for mange aktive grupper på TNF ikke kan være mulig for å unngå fullstendighet, anbefales det at generelt fra ca. 1 til 10 mol og fortrinnsvis 1 til 5 mol aktivert polymer pr. mol TNF, avhengig av TNF-konsentra-sjonen, benyttes. Den ultimate mengde som benyttes er en avveining for å opprettholde optimal aktivitet mens man samtidig hvis mulig optimaliserer halveringstiden for proteinet. Fortrinnsvis bibeholdes minst ca. 10, helst ca. 25, aller helst 50 og selvfølgelig hvis mulig 100$ av den biologiske aktivitet til prorteinet.
Den kovalente modifiseringsreaksjon kan skje på en hvilken som helst egnet måte som generelt benyttes for å omsette biologisk aktive stoffer med inerte polymerer, fortrinnsvis ved ca. pH 5-9, hvis de reaktive grupper på TNF er lysingrup-per. Generelt involverer prosessen fremstilling av en aktivert polymer (med minst én temrinal hydroksylgruppe) med etterfølgende omsetning av TNF med aktivert polymer for å fremstille det modifiserte TNF som er egnet for formuleringen .
Den ovenfor angitte modifiseringsreaksjon kan gjennomføres ved forskjellige metoder som kan involvere ett eller flere trinn. Eksempler på egnede monifiserende midler som kan benyttes for å fremstille den aktiverte polymer i en en-tr innsreaksj on inkluderer cyanursyreklorid (2,4,6-tirklor-S-triazin) og cyanursyrefluorid.
I en foretrukket utførelsesform skjer modidf iseringsmodif ika-sjonen i to trinn der polymeren først omsettes med et syreanhydrid slik som ravsyre- eller glytarsyreanhydrid for derved å danne en karboksylsyre, og denne så omsettes med en forbindelse istand til å reagere med karboksylsyren for å danne en aktivert polymer med en reaktiv estergruppe som er istand til å reagere med proteinet. Eksempler på slike forbindelser inkluderer N-hydroksysuksininimid, 4-hydroksy-3-ni trobenzensulfonsyre o.l., og fortrinnsvis benyttes N-hydroksysuksinimid eller 4-hydroksy-3-nitrobenzensulfonsyre . F.eks. kan monometylsubstituert PEG omsettes ved forhøyede temperaturer, fortrinnsvis 100 til 110°C i fire timer, med glutarsyreanhydrid. Monometyl PEG-glutarsyren som således er fremstilt omsettes så med en hydroksysuksinimid i nærvær av et karbodiimidreagens slik som dicykloheksyl- eller isopro-pylkarbodiimid for derved å oppnå den aktiverte polymer, metoksypolyetylenglykol-N-suksinimidylglutarat, som så kan omsettes med TNF. Denne metode er beskrevet i detalj av Abuchowski et al., "Cancer Biochem. Biophys.", 7, 175-186
(1984). I et annet eksempel kan monometylsubstituert PEG omsettes med glutarsyreanhydrid fulgt av omsetning med 4-hydroksy-3-nitrobenzensulfonsyre (HNSA) i nærvær av dicykloheksylkarbodiimid for derved å gi den aktiverte polymer. HNSA er beskrevet av Bhatnagar et al., "Peptides: Synthesis-Structure-Function, Proceedings of the Seventh American Peptide Symposium", Rich. et al. (Pierce Chemical Co., Rockford IL, 1981), s. 97-100 og Nitecki et al., "High-Thecnology Route to Virus Vaccines" (American Soiciety for Microbiology; 1986) med tittel "Novel AGent for Coupling Synthetic Peptides to Carriers and Its Application".
Da esterbindinger kjemisk og fysiologisk er mindre stabile enn amidbindinger, kan det være foretrukket å benytte kjemiske transformasjoner 1 koblingsreaksjonen som så gir karboksylsyrer eller amidsyrer uten samtidig dannelse av estere.
Det således modifiserte TNF formuleres så i et ikke-toksisk inert farmasøytisk aksepterbart vandig bærermedium, fortrinnsvis ved en pH-verdi på ca. 3-8 og helst 6-8. For in vi tro-anvendelser er administreringsmetodene og formuleringen ikke kritiske. Vandige formuleringer som er kompatible med kulturer- eller perfusjonsmediet vil vanligvis benyttes. Benyttet in vivo for terapi vil det sterile produkt bestå av en blanding av TNF oppløst i en vandig buffer i en mengde osm gir en farmasøytisk aksepterbar pH-verdi når blandingen rekonstitueres. En vannoppløselig bærer slik som mannitol kan eventuelt tilsettes til mediet.
Doseringsnivået for protein i formuleringen vil avhenge av de in vivo-effektivitetsdata som oppnås etter preklinisk prøving og vil hovedsakelig avhenge av sluttanvendelsen.
Hvis formuleringen lyofiliseres kan lyofiliserte blanding rekonstitueres ved injisering i ampullen av en konvensjonell parenteral vandig injeksjon slik som f.eks. destillert vann.
Den rekonstituerte formulering som beskrives som angitt ovenfor er egnet for parenteral administrering til mennesker eller andre pattedyr i terapeutisk aktive mengder (dvs. mengder som eliminerer eller reduserer pasientens patologiske tilstand for derved å gi terapi, dvs. å drepe neoplastiske celler.
Dosen og doseringsplanen for dette TNF vil f.eks. avhenge av medikamentets farmakokinetika, arten av sykdom, dette TNF' s karakteristika, pasienten og pasientens historie. F.eks. er forskjellige modifiserte TNF-proteiner forventet å ha forskjellige farmakokinetiske og terapeutiske egenskaper som er fordelaktige for forksjellige administreringsveier. Et lengevirkende medikament behøver kun å administreres 3-4 dager hver uke, enkelte sågar én gang pr. to uker. Klarings-hastigheten kan varieres for å gi ultimatfleksibilitet for tilpasning til det spesielle behov som foreligger ved f.eks. å endre polymertype og polymerstørrelse.
I de følgende eksempler som illustrerer oppfinnelsen er alle deler og prosentandeler på vektbasis hvis ikke annet er sagt, alle temperaturer er gitt i grader Celsius.
EKSEMPEL I
Fremstilling av PEG-ylert TNF.®
A. Fremstilling av PEG-ester.
En lineær, monometylsubstituert ester av PEG med molekylvekt 5000 ble oppnådd ved først å omsette monometyl PEG-500 som er kommersielt tilgjengelig med glutarsyreanhydrid ved 100-llOcC i 4 timer ved en metode tilsvarende den til Abuschowski et al., "Cancer Biochem. Biophys.",, 7, 175-186 (1984). Den resulterende PEG-glurtarsyre ble omsatt med en hydroksysuksinimid i nærvær av dicykloheksylkarbodiimid som beskrevet i detalj av Abuchowski et al., på side 176. Det resulterende produkt er monometoksypolyetylenglykol N-suksinimidylglutarat, heretter kalt PEG** .
I et alternativt trinn og ved en tilsvarende metode kan monometoksypolyetylenglykol N-suksinimidylsuksinat fremstilles ved bruk av ravsyreanhydrid i stedet for glutarsyreanhydrid. I en tredje og tilsvarende metode kan en PEG-karboksylsyreester HNSA fremstilles ved å benytte HNSA i stedet for en hydroksysuksinimid. Dette sistnevnte esterpreparat er beskrevet av Bhatnagar et al., supra og av Nitecki et al., supra. PEG karboksylsyreester-HNSA kan benyttes osm det aktiverte PEG i prosedyrene som beskrives i dette eksempel.
B. Kobling av PEG<*>til TNF.
Et mute in av human TNF med de første 8 aminosyrer utelatt fra N-terminus ble fremstilt som følger. TNF ble indusert fra generelt tilgjengelige HL-60-celler og ble renset og sekven-sert. Deretter ble en intronfri sekvens som kodet human-TNF fremstilt ved å produsere anriket mRNA, og konstruere et cDNA-bibliotek, og selektere en probe og probing av bibliote-ket for å gjenvinne sekvensen. Deretter ble et ATG-startkodon innført umiddelbart foran GTC-sekvensen som kodet N-terminalt valin i det nature protein ved sete-rettet mutagense. Kloner ble valgt og strenger ligerte inn i eksprimeringsvektorer for å oppnå prokariotisk eksprimerinmg av muteinet. Muteinet ble deretter renset ved kolonnerensing ved bruk av en hvilken som helst standard renseteknikk og gjenvunnet i rensebufferen.
Til 1 mg av TNF-muteinet i 0,5 ml 50 mM natriumfosfat, pH 8,2 ble det tilsatt nypreparert vandig PEG<*>i molforhold fra 1 til 50 pr. mol TNF og tilstrekkelig 50 mM boratbuffer, pH 9,0, til å gi et sluttvolum på 1 ml. PEG<*>ble oppløst til 100 mg pr. ml i kold 10 mM natriumfosfat, pH 7,0. Etter grundig blanding skred reaksjonen frem ved 23° C i 30 minutter. Reaksjonen ble gjort ferdig i løpet av 30 minutter og PEH<*->TNF var klar for yttelrigere behandling.
C. Rensing av modifisert TNF.
Ved bruk av DEAE ionebyttekromatografi ble forksjellige former av PEGylert TNF separert fra ikkemodifisert TNF. En prøve på 1 mg TNF, modifisert med et fem gangers molart overskudd av PEG<*>ble ført til kolonnen. Man kjørte en lieær gradient på 0-200 mM natriumklorid i 30 minutter ved 1,0 ml/min. på en 7,5 mm x 7,5 cm TSK DEAE-5-PW-kolonne. Bufferen var 10 mM trisk°°lor id pH 8,2. Mengder av frakonene ble analysert på TNF-bioaktivitet som beksrevet under eksempel
IIB.
PEGEKSEMBEINF.
Karakterisering av PEG-ylert TNF
A. Størrelseskarakterisering av modifiserte TNF-produkter.
Fraksjonene fra DEAE-kolonnen ble analysert på en SDS-PAGE ( 15%,, ikke-rduserende) gel. Før påføring på gleen ble fraksjonene blandet med konsentrert SDS prøvebuffer. Deretter ble 2,5 pm protein fylt på et gelspor og eléktroforesert i ca. 1,5 time ved 35 milliampere. Gelene ble flekket og så avflekket.
Den siste eluerende topp fra ionebyttekolonnen viste seg å være ikke-modifisert TNF ved SDS-PAGE. Den bestod av monomere det monomere TNF-bånd med molekylvekt 15.000. De tidligere elueringstopper fra ionebyttingen inneholdt en viss andel høyere molekylvektsbånd, sett på SDS-PAGE. Disse bånd var TNF-monomeren konjugert med ett, to elelr flere molekyler PE<*>. De relative andeler qav ikke-modifisert TNF-monomer i forhold til modifiserte monomerer sank jo tidligere toppene eluerte fra kolonnen. Dvs. at de tidligere eluerte topper var sterkere modifisert med PEG. Andelen TNF som var modifisert med to eller tre PEG" var også høyest i de første elueringstopper .
B. Bioaktivitet for PEG-ylert TNF som en funksjon av modifi Fraksjoner fra den tidligere nevnte DEAE kolonneseparering av TNF, modifisert med fem gangers molart overskudd av PEG<*>ble analysert ved L-929 TNF cytotoksybioanalyse som beskrevet nedenfor.
Dette system er en forbedret, hensiktsmessig in vitroanalyse som tillater hurtig måling av TNF-aktiviteten. Korrelasjo9ns-graden med in vivo-tumornekrose avvnalysen i e hhenhold til Carswell et al., "Proe. Nati. Acad,. Sei (USA),(1975 ), 72: 3666, supra, er, på det nuværende tidspunkt, ukjent; da den imidlertid spesifikt benytter urintumorceller antas korrela-sjonen å være høy. Proteinet som kalles lymfotoksin i EP0-publikasjon 0100641 gir også aktiviteten i denne analyse. Analysen tilsvarer i konsept det som er beskrevet i US-PS 4.457.916, som benytter murin L-M celler og metylenblåflek-king. Imidlertid er L-929-analysen her vist å korrelere (for HL-60-avledet TNF) med humantumorcellelinjecytotoksysitet.
I L-929-analysesystemet blir L-929-celler preparert overnat-ten som monosjikt i mikrotiterplater. Undersøkelsesprøvene fortynnes to ganger på tvers av flaten, UV-bestråles og tilsettes så til de preparerte monosjikt. Kulturmedia i brønnene bringes så til 1 pg/ml aktinomycin D. Platene tillates inkubering i 18 timer ved 37" C og platene bedømmes visuelt under mikroskopet. Hver brønn gis en 25, 50, 75 eller 100$ angivelse som signifikerer graden av celledød i brønnen. En enhet TNF-aktivitet defineres som den resiproke verdi av fortynningen ved hvilken 50$ avlivning skjer.
Resultatene av L-929-analysene av DEAE-kolonne-f raks j onene er vist i tabell I. Fraksjonene 48-58 er modifisert TNF og fraksjon 60 er ikke-modifisert TNF. Resultatene antyder at det PEG-ylerte TNF i fraksjonene 56-58 har den samme spesifikke aktivitet som ikke-modifissert TNF. Sterkere PEG-ylerte former av TNF, fraksjonene 48-54, viuser redusert spesifikk aktivitet. Det aktive PEG-TNF Inneholder omtrent like mengder ikke-modifiserte TNF-monomerer og mono-PEG-ylerte monomerer, bestemt ved SDS-PAGE. Da TNF er en dimer er mest sannsynlig de aktive arter en mono-PEG-TNF-monomer, kombinert med en ikke-modifisert monomer. Kombinasjonen av to modifiserte monomerer (fraksjonene 52-54) er så og si 2-10 ganger mindre aktive enn det ikke.-modifiserte TNF.
Når reaksjonen utføres som beskrevet I eksempel I ved bruk av 5 mol PEG<*>pr. mol TNF, hadde det ikke-fraksjonerte TNF en spesifikk aktivitet på 20$ i forhold til ikke-modifisert TNF; ved 10 gangers overskkudd av PEG<*>var det 1$ tilbake av den spesifikke aktivitet. C. Farmakokinetika for PEG-ylert TNF sammenlignet med ikke-modifisert TNF.
Det er antatt at de aktive TNF-arter har en lengere halveringstid enn ikke-modifisert TNF ved injeksjon i mus.
EKSEMPEL III
Fremstilling av PEG-ylert TNFmed
2000 molekylvekts-PEG.
Et TNF-derivat av PEG med molekylvekt 2000 ble preparert ved den generelle metode som er beskrevet i eksempel I ved bruk av PEG 2000. Det resulterende derivat var biologisk aktivt.
EKSEMPEL IV
Fremstilling av TNF modifisert med polyokyetylert glyserol, POG,
(Forventede resultater)
A. Fremstilling av aktivert POG-TNF.
Polyoksyetylert glyserol, POG, med molekylvekt 5000, ble syntetisert for kunder av Polysciences.
Til 10 g POG ble det satt 2,28 g glutarsyreannhydr id, dette tilsvarer et ti gangers overskudd i forhold til POG. Blandingen ble omrørt i 2 timer ved 110° C og så avkjølt. Det hele ble oppløst 1 20 ml HCCI3og helt langsomt i 500 ml eter under heftig omrøring. Produktet ble samlet og skyllet med eter for derved å oppnå 90$ POG-glutaratprodukt. Dette produikt ble omsatt med N-hydroksysuksinimid som beskrevet i eksempel I.A, hvorved man oppnådde det aktive ester POG-glutaryl-N-jhydrorksysuksinimid, POG<*>. Det er antatt at det TNF som er beskrevet i eksempel TB kan omsettes med POG<**>ved romtemperatur under betingelser som generelt beskrevet i eksempel IB. Reaksjonsblandingen kan så påføres på en separat kolonne for rensing og fraksjonene kan analyseres på hjomogenitet med SDS-PAGE og på bioaktivitet som beskrevet i eksempel HB.
Som en oppsummering tilveiebringer oppfinnelsen et farmasøy-tisk preparat hvori biologisk aktivt TNF-protein selektivt konjugerer til en polymer av PEG eller en polyoksyetylert polyol.
Claims (10)
1.
Farmasøytisk preparat omfattende et ikke-toksisk, inert, farmasøytisk aksepterbart vandigbærermedium hvori det er oppløst en biologisk aktiv, selektivt konjugert tumornekrosefaktor TNF, karakterisert ved at TNF kovalent er konjugert til en vannoppløselig polymer valgt blant polyetylenglykolpolymerer og polyoksyetylerte polyoler, og at polyetylenglykolpolymeren er usubstituert eller substituert i en ende med en alkylgruppe og atpolyolen er usubstituert.
2.
Preparat iføgle krav 1, karakterisert ved at polymeren er en homopolymer og har en molekylvekt på ca.
300 til 100.000.
3.
Preparat ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at polymeren er konjugert til TNF via 4-hydroksy-3-nitrobenzensulfonatesteren eller N-hydroksysuksinimidesteren av en karboksylsyre av polymeren.
4 .
Preparat ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3, karakterisert ved at homopolymeren enten er en homopolymer valgt blant ikke-substituert polyetylenglykol eller monometylpolyetylenglykol, eller en polyoksyetylert glyserol, og at TNF er human rekombinant TNF eller et mutein derav.
5.
Fremgangsmåte for fremstilling av et farmasøytisk preparat, karakterisert ved at den omfatter:
a) fremstilling av en vannoppløselig polymer med minst én terminal reaktiv gruppe der polymeren er valgt blant poly etylenglykolpolymerer og polyoksyetylerte polyoler, at polyetylenglykolpolymeren er usubstituert eller substituert i en ende med en alkylgruppe og at polyolen er usubstituert;
b) omsetning av biologisk aktiv tumornekrosefaktor TNF med den reaktive gruppe i polymeren for å tilveiebringe et biologisk aktivt, selektivt konjugert TNF, og
c) å formulere dette TNF i et ikke-toksisk, inert, farmasøytisk aksepterbart vandig bærermedium.
6.
Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at polymeren har en molekylvekt på ca. 300 til 100.000 og at nevnte TNF formuleres ved pH 6-8.
7.
Fremgangsmåte ifølge krav 5 edller 6, karakterisert ved at trinn (a) omfatter å omsette polymeren med et syreanhydrid for derved å danne en karboksyl syre, og å omsette karboksylsyren med en forbindelse istand til å reagere med syren for derved å danne den aktiverte polymer med en reaktiv estergruppe.
8.
Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at syreanhydridet er glutarsyreanhydrid og at forbindelsen som er istand til å reagere med syren i nærvær av et karbodiimid er N-hydroksysuksinimid eller 4-hydroksy-3-nitrobenzensulfonsyre.
9.
Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at den reaktive gruppe reagerer med en lysinrest på nevnte TNF og at trinn (b) gjennomføres ved én pH-verdi på ca. 8-10.
10.
Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 5-9, karakterisert ved at nevnte TNF er humanre-kombinant TNF eller et mutein derav, og at polymeren enten er en homopolymer valgt blant usubstituerte polyetylenglykol eller monometylpolyetylenglykol, elelr en polyoksyetylert glyserol.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US86876686A | 1986-05-29 | 1986-05-29 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO872227D0 NO872227D0 (no) | 1987-05-27 |
NO872227L true NO872227L (no) | 1987-11-30 |
Family
ID=25352278
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO872227A NO872227L (no) | 1986-05-29 | 1987-05-27 | Tumornekrosefaktorformulering. |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0247860B1 (no) |
JP (1) | JPS62289522A (no) |
AT (1) | ATE77959T1 (no) |
AU (1) | AU595321B2 (no) |
CA (1) | CA1283046C (no) |
DE (1) | DE3780218T2 (no) |
DK (1) | DK277187A (no) |
FI (1) | FI872393A (no) |
NO (1) | NO872227L (no) |
Families Citing this family (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5091176A (en) * | 1988-11-02 | 1992-02-25 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Polymer-modified peptide drugs having enhanced biological and pharmacological activities |
US5306500A (en) * | 1988-11-21 | 1994-04-26 | Collagen Corporation | Method of augmenting tissue with collagen-polymer conjugates |
US5510418A (en) * | 1988-11-21 | 1996-04-23 | Collagen Corporation | Glycosaminoglycan-synthetic polymer conjugates |
US5565519A (en) * | 1988-11-21 | 1996-10-15 | Collagen Corporation | Clear, chemically modified collagen-synthetic polymer conjugates for ophthalmic applications |
US5162430A (en) * | 1988-11-21 | 1992-11-10 | Collagen Corporation | Collagen-polymer conjugates |
US6166183A (en) * | 1992-11-30 | 2000-12-26 | Kirin-Amgen, Inc. | Chemically-modified G-CSF |
CA2006596C (en) * | 1988-12-22 | 2000-09-05 | Rika Ishikawa | Chemically-modified g-csf |
EP0460101A4 (en) * | 1989-02-24 | 1992-04-15 | Immunotherapeutics, Inc. | Immobilized cytokines |
EP0393438B1 (de) * | 1989-04-21 | 2005-02-16 | Amgen Inc. | TNF-Rezeptor, TNF bindende Proteine und dafür kodierende DNAs |
US5166322A (en) * | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
US6221675B1 (en) | 1989-04-21 | 2001-04-24 | Amgen, Inc. | TNF receptors, TNF binding proteins and DNAs coding for them |
US7264944B1 (en) | 1989-04-21 | 2007-09-04 | Amgen Inc. | TNF receptors, TNF binding proteins and DNAs coding for them |
US6143866A (en) * | 1989-07-18 | 2000-11-07 | Amgen, Inc. | Tumor necrosis factor (TNF) inhibitor and method for obtaining the same |
IL95031A (en) | 1989-07-18 | 2007-03-08 | Amgen Inc | A method of producing a recombinant human necrotic factor absorber |
CA2038935C (en) * | 1989-08-07 | 1998-12-08 | Luciana Sartore | Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same |
DE3936777A1 (de) * | 1989-11-04 | 1991-05-08 | Basf Ag | Quervernetzte tumor-nekrose-faktoren |
JPH04218000A (ja) * | 1990-02-13 | 1992-08-07 | Kirin Amgen Inc | 修飾ポリペプチド |
US6552170B1 (en) | 1990-04-06 | 2003-04-22 | Amgen Inc. | PEGylation reagents and compounds formed therewith |
AU9029591A (en) * | 1990-10-18 | 1992-05-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
US5653974A (en) * | 1990-10-18 | 1997-08-05 | Board Of Regents,The University Of Texas System | Preparation and characterization of liposomal formulations of tumor necrosis factor |
DE69230789T3 (de) * | 1991-01-18 | 2007-10-31 | Amgen Inc., Thousand Oaks | Methoden zur behandlung von durch den tumor nekrose faktor ausgelösten krankheiten |
WO1993012145A1 (en) * | 1991-12-19 | 1993-06-24 | Baylor College Of Medicine | Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression |
US5446090A (en) * | 1993-11-12 | 1995-08-29 | Shearwater Polymers, Inc. | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
US5629384A (en) * | 1994-05-17 | 1997-05-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces |
US20030053982A1 (en) | 1994-09-26 | 2003-03-20 | Kinstler Olaf B. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
TW555765B (en) | 1996-07-09 | 2003-10-01 | Amgen Inc | Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins |
IT1291114B1 (it) * | 1997-03-20 | 1998-12-29 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Varianti del fattore neurotrofico ciliare (cntf) con migliorata selettivita' al recettore, e metodo per la loro selezione |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
DE10144252A1 (de) | 2001-08-31 | 2003-03-27 | Fraunhofer Ges Forschung | Nanopartikel mit daran immobilisiertem biologisch aktivem TNF |
JP4177604B2 (ja) * | 2002-03-25 | 2008-11-05 | 株式会社林原生物化学研究所 | 生理活性複合体 |
US7179891B2 (en) | 2002-03-25 | 2007-02-20 | Tadanori Mayumi | Physiologically active complex |
TW200526780A (en) | 2004-01-06 | 2005-08-16 | Hayashibara Biochem Lab | TNF antagonists and TNF inhibitors comprising the same as the active ingredient |
US20070065514A1 (en) * | 2005-09-22 | 2007-03-22 | Howell Mark D | Method for enhancing immune responses in mammals |
CN101219219B (zh) * | 2007-01-10 | 2013-02-13 | 北京普罗吉生物科技发展有限公司 | 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4414147A (en) * | 1981-04-17 | 1983-11-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods of decreasing the hydrophobicity of fibroblast and other interferons |
DE3380726D1 (en) * | 1982-06-24 | 1989-11-23 | Japan Chem Res | Long-acting composition |
EP0154316B1 (en) * | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
AU580431B2 (en) * | 1985-06-26 | 1989-01-12 | Cetus Corp | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
DE3676670D1 (de) * | 1985-06-26 | 1991-02-07 | Cetus Corp | Solubilisierung von proteinen fuer pharmazeutische zusammensetzungen mittels polymerkonjugierung. |
-
1987
- 1987-03-26 CA CA000533061A patent/CA1283046C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-05-27 NO NO872227A patent/NO872227L/no unknown
- 1987-05-27 AT AT87304703T patent/ATE77959T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-05-27 EP EP87304703A patent/EP0247860B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-27 DE DE8787304703T patent/DE3780218T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-28 AU AU73479/87A patent/AU595321B2/en not_active Ceased
- 1987-05-28 FI FI872393A patent/FI872393A/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-05-29 JP JP62131911A patent/JPS62289522A/ja active Pending
- 1987-05-29 DK DK277187A patent/DK277187A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU7347987A (en) | 1987-12-03 |
DK277187A (da) | 1987-12-01 |
DE3780218D1 (de) | 1992-08-13 |
NO872227D0 (no) | 1987-05-27 |
EP0247860A3 (en) | 1989-10-11 |
EP0247860B1 (en) | 1992-07-08 |
AU595321B2 (en) | 1990-03-29 |
DE3780218T2 (de) | 1992-12-17 |
EP0247860A2 (en) | 1987-12-02 |
FI872393A0 (fi) | 1987-05-28 |
DK277187D0 (da) | 1987-05-29 |
ATE77959T1 (de) | 1992-07-15 |
CA1283046C (en) | 1991-04-16 |
FI872393A (fi) | 1987-11-30 |
JPS62289522A (ja) | 1987-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO872227L (no) | Tumornekrosefaktorformulering. | |
EP2049566B1 (en) | G-csf site-specific mono-conjugates | |
Pasut et al. | Protein, peptide and non-peptide drug PEGylation for therapeutic application | |
US4917888A (en) | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation | |
CA1291708C (en) | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation | |
Pasut et al. | PEGylation of proteins as tailored chemistry for optimized bioconjugates | |
US4766106A (en) | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation | |
EP0305409B1 (en) | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation | |
JP5334347B2 (ja) | 化学的に修飾した新規なエリスロポエチン刺激タンパク質組成物および方法 | |
JP3177449B2 (ja) | 水溶性ポリマーで修飾したコンセンサスインターフェロン | |
US5711944A (en) | Interferon polymer conjugates | |
AU2007207268B2 (en) | Medicament for treatment of tumor and the use thereof | |
KR20060135887A (ko) | 신규의 g-csf 콘쥬게이트 | |
HU221208B1 (en) | Conjugates of a polypeptide and a biocompatible polymer | |
US20070117924A1 (en) | Biologically active material conjugated with biocompatible polymer with 1:1 complex, preparation method thereof and pharmaceutical composition comprising the same | |
Mital | Polysialic acids: A tool for the optimisation of peptide and protein therapeutics | |
AU580431B2 (en) | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation | |
Pasut et al. | Basic strategies for PEGylation of peptide and protein drugs |