NO842501L - PROCEDURE AND METHOD FOR DETECTING ANTIGENS AND / OR ANTIBODIES. - Google Patents

Abstract

Fremgangsmåte for påvisning av flere antigener eller antistoffer i en væske under anvendelse av partikler i form av en partikkelblanding som inneholder populasjoner av partikler som kan sondres fra hverandre på følgende måte: Hver populasjon fremviser en egen spesifikk kombinasjon med følgende trekk: 1) fluorescensstoffer med forskjellige emisjonsspektra, 2) mengde av disse fluorescensstoffer 3) partikkelstørrelse.Kver partikkelpopulasjon fylles videre med en annen. art antistoffer henhv. antigener. Under anvendelse av denne partikkelblanding kan det gjennomføres samtidig undersøkelse på flere antigen- eller antistoff-typer på tids- og utstyrs-sparende måte. Partikkelblandingen blandes med den væske som inneholder de antistoffer eller antigener som skal påvises. De etterfølgende reaksjonstrinn tilsvarer trinnene med en konvensjonell immunfluorescensmetode. Til slutt måles ved hjelp av et måleapparat (f.eks. et gjennomstrømnings-zytometer) hver partikkel med hensyn til sin fluorescens (emisjonsspektrum og intensitet) og størrelse. På grunn av måledata identifiserer en regnemaskin partikkelen og tilordner den målte immunfluorescens en definert spesifitet.Forskjellige slags partikler og deres fremstilling er beskrevet.Method for detecting several antigens or antibodies in a liquid using particles in the form of a particle mixture containing populations of particles that can be distinguished from each other as follows: Each population exhibits its own specific combination with the following features: 1) fluorescent substances with different emission spectra, 2) amount of these fluorescent substances 3) particle size.Each particle population is further filled with another. species antibodies resp. antigens. Using this particle mixture, simultaneous examination of several antigen or antibody types can be carried out in a time- and equipment-saving manner. The particle mixture is mixed with the liquid containing the antibodies or antigens to be detected. The subsequent reaction steps correspond to the steps with a conventional immunofluorescence method. Finally, each particle is measured by means of a measuring device (e.g. a flow cytometer) with respect to its fluorescence (emission spectrum and intensity) and size. Due to measurement data, a calculator identifies the particle and assigns the measured immunofluorescence a defined specificity. Different types of particles and their production are described.

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for påvisning av antigener og/eller antistoffer, og det The present invention relates to a method for detecting antigens and/or antibodies, and that

særegne ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen erpeculiar to the method according to the invention are

at partikler som er forskjellig markert med fluorescerende stoffer eller farvestoffer og/eller med hensyn til deres størrelse fylles med forskjellige antigener og/eller antistoffer, en blanding av partikler fylt på denne måte blandes med en væske som inneholder de antistoffer og/eller antigener som skal undersøkes henhv. påvises og at etter en reaksjonstid hvor de antistoffer eller antigener som skal påvises bindes til de til partiklene fikserte antigener henhv. antistoffer som partiklene er fylt med, identifiseres antistoffene henhv. antigenene ved etterfølgende reaksjonstrinn og målinger. that particles which are differently marked with fluorescent substances or dyes and/or with respect to their size are filled with different antigens and/or antibodies, a mixture of particles filled in this way is mixed with a liquid containing the antibodies and/or antigens to be is examined according to is detected and that after a reaction time during which the antibodies or antigens to be detected are bound to the antigens fixed to the particles or antibodies with which the particles are filled, the antibodies are identified respectively the antigens in subsequent reaction steps and measurements.

Oppfinnelsen vedrører også partikler for utførelse avThe invention also relates to particles for the execution of

den nevnte fremgangsmåte og det særegne ved partiklene i henhold til oppfinnelsen er at de inneholder et eller the mentioned method and the peculiarity of the particles according to the invention is that they contain a or

flere forskjellige markeringsstoffer, foretrukket fluorescerende stoffer eller farvestoffer. several different marking substances, preferably fluorescent substances or dyes.

Disse og andre trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravene. These and other features of the invention appear in the patent claims.

Det er kjent forskjellige metoder for påvisning av antigener eller antistoffer og som beror på prinsippene Different methods are known for the detection of antigens or antibodies and which are based on the principles

med agglutinering, utfelling, komplement-bindingsreaksjon, immunfluorescens, radioimmunreaksjon, enzymimmunreaksjon med flere. For alle disse metoder er det et felles trekk with agglutination, precipitation, complement binding reaction, immunofluorescence, radioimmune reaction, enzyme immunoreaction and more. All these methods have one thing in common

at det for hver av dem i en arbeidsgang bare kan konstateres en type av et antigen eller antistoff. that only one type of antigen or antibody can be determined for each of them in a single procedure.

Det dreier seg imidlertid ofte om flere arter avHowever, it often involves several species of

antigener eller antistoffer, f.eks. for differensial-diagnose av infeksjons- eller andre sykdommer, ved Screening-tester i friske personer, f.eks. ved den serologiske tumordiagnostik (flere tumorantigener), eller ved allergitesting (flere allergener) eller ved bedømmelse av den immunologiske status av organismen. Etter antigens or antibodies, e.g. for differential diagnosis of infectious or other diseases, by screening tests in healthy persons, e.g. in serological tumor diagnostics (several tumor antigens), or in allergy testing (several allergens) or in assessing the immunological status of the organism. After

denne teknikkens stand må det følgelig for hver art av et ettersøkt antigen eller antistoff gjennomføres en separat undersøkelse og dette betyr et stort forbruk av tid og utstyr. in this state of the art, a separate investigation must therefore be carried out for each species of a sought-after antigen or antibody, and this means a large consumption of time and equipment.

Den oppgave som ligger til grunn for oppfinnelsen er å nedsette forbruket av tid og utstyr ved undersøkelse og påvisning av flere arter av antigener eller antistoffer. The task underlying the invention is to reduce the consumption of time and equipment when examining and detecting several types of antigens or antibodies.

Oppfinnelsen løser denne oppgave. På grunn av de forskjellige markeringer kan partiklene i blandingen identifiseres. På grunn av dette faktum kan også den fluorimetrisk målte immunreaksjon mellom antigen henhv. antistoff ved den utførelsesform hvor partiklene er fylt med disse, og antistoffet henhv. antigenet i den undersøkte væske tilordnes en bestemt spesifitet som tilsvarer kombinasjonen av markeringssignalene for partikkelen. The invention solves this task. Due to the different markings, the particles in the mixture can be identified. Due to this fact, the fluorimetrically measured immune reaction between antigen or antibody in the embodiment where the particles are filled with these, and the antibody or the antigen in the examined liquid is assigned a specific specificity that corresponds to the combination of the marking signals for the particle.

Fordelaktige og hensiktsmessige utførelsesformer for partiklene fremgår av det følgende. Advantageous and appropriate embodiments of the particles appear from the following.

Ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er det ved tilordning av de reagerende antigener eller antistoffer til de identifiserbare partikler i blandingen ved måling av fluorescens eller ved deteksjon og analyse av markeringene å påvise antigenene eller antistoffene. In the method according to the invention, it is by assigning the reacting antigens or antibodies to the identifiable particles in the mixture by measuring fluorescence or by detecting and analyzing the markings to detect the antigens or antibodies.

Fordelaktige og hensiktsmessige utførelsesformer av fremgangsmåten fremgår av det følgende. Advantageous and appropriate embodiments of the method appear from the following.

Oppfinnelsen skal nærmere illustreres ved hjelp av etterfølgende eksemplifisering hvor det for tydelig-gjøring vises til den vedføyde tegning. The invention shall be further illustrated by means of subsequent exemplification, where reference is made to the attached drawing for clarification.

Et serum skal undersøkes på antistoffartene 2 henhv. 16 f. eks. Ak^, Ak,,, ..., Akj , ... , Ak^ . Grupper (populasjoner) av små partikler 4, foretrukket i form av kuler med omtrent 10 pm diameter av et egnet bærer- material (syntetisk- eller polysakkarid-polymer, f.eks. agar) fylles hver med en antigenart 6 henhv. 12 enten direkte eller som partikkel-antistoff-antigen. Hver antigenart ble bundet til en separat partikkeltype som først var markert på følgende måte. A serum must be examined for the antibody types 2 or 16 e.g. Ak^, Ak,,, ..., Akj , ... , Ak^ . Groups (populations) of small particles 4, preferably in the form of spheres with approximately 10 pm diameter of a suitable carrier material (synthetic or polysaccharide polymer, e.g. agar) are each filled with an antigen species 6 or 12 either directly or as particle-antibody-antigen. Each antigen species was bound to a separate particle type that was first labeled as follows.

Partiklene 4 markeres med en kombinasjon av stoffer 8The particles 4 are marked with a combination of substances 8

med definert fluorescensspektrum som kan bestemmes fluorimetrisk. Markeringen kan også skje på enkel måte ved at de enkelte partikkelpopulasjoner markeres med bare et fluorescerende markeringsstoff med bestemt, men likevel fra partikkelpopulasjon til partikkelpopulasjon forskjellig konsentrasjon eller med flere markeringsstoffer med bestemt, men likevel fra partikkelpopulasjon til partikkelpopulasjon forskjellige konsentrasjoner. Denne type av markering (markering med forskjellige konsentrasjoner av det samme fluorescerende stoff) kan kombineres med markering ved kombinasjon med fluorescerende stoffer med forskjellige emisjonsspektra. Bedømmelsen skjer da på with a defined fluorescence spectrum that can be determined fluorimetrically. The marking can also take place in a simple way by marking the individual particle populations with only one fluorescent marker with a specific, but still different concentration from particle population to particle population, or with several marker substances with specific, but still different concentrations from particle population to particle population. This type of marking (marking with different concentrations of the same fluorescent substance) can be combined with marking in combination with fluorescent substances with different emission spectra. The assessment then takes place on

basis av spektrum og/eller intensiteten av den emiterte fluorescens. På denne måte kan man med et markeringsstoff, anvendt i to forskjellige konsentrasjoner (0% og 100% basis of spectrum and/or intensity of the emitted fluorescence. In this way, with a marking substance, used in two different concentrations (0% and 100%

av en bestemt konsentrasjon) sondre mellom 2<1>=2 partikkel-populas joner (partikler med stoffet og partikler uten stoffet). Når stoffet ved markeringen anvendes med tre forskjellige konsentrasjoner, f.eks. 0%, 50% og 100% av en gitt konsentrasjon, kan det sondres mellom 3=3 partikkelpopulasjoner. Med n markeringsstoffer med forskjellig emisjonsspektrum, anvendt i det enkelte tilfelle i m forskjellige konsentrasjoner, utgjør tallet av markeringsmuligheter rn<11>, f.eks. med tre markeringsstoffer hvert med ti forskjellige konsentrasjoner kan 10 3= 1000 forskjellige partikkelpopulasjoner karakteriseres og identifiseres. Markeringen av partiklene skjer ved deres fremstilling eller deretter. For hver antigenart of a certain concentration) distinguish between 2<1>=2 particle populations (particles with the substance and particles without the substance). When the substance at the marking is used with three different concentrations, e.g. 0%, 50% and 100% of a given concentration, 3=3 particle populations can be distinguished. With n marking substances with different emission spectrum, used in the individual case in m different concentrations, the number of marking possibilities amounts to rn<11>, e.g. with three marker substances each with ten different concentrations, 10 3= 1000 different particle populations can be characterized and identified. The marking of the particles takes place at the time of their manufacture or afterwards. For each antigen species

(Ag^) anvendes en fluorescens-spektrofotometrisk og/eller(Ag^) a fluorescence spectrophotometric and/or is used

på grunn av dens størrelse definerbar partikkel-due to its size definable particle-

populasjon P^. Antigenet henhv. antistoffet bindes kjemisk eller fysikalsk til partiklene. Dette skjer separat population P^. The antigen or the antibody binds chemically or physically to the particles. This happens separately

for hver antigenart henhv. antistoffart. Deretter sammenblandes alle partiklene i den ønskede sammensetning. Således dannes en blanding av partikler P^, P^,., for each antigen species respectively antibody type. All the particles are then mixed together in the desired composition. Thus a mixture of particles P^, P^,., is formed

P., ..., P , som er ladet med de tilsvarende antigenerP., ..., P , which are charged with the corresponding antigens

j n j n

Ag17Ag2, ..., Ag^, ..., Ag^.Ag17Ag2, ..., Ag^, ..., Ag^.

Denne partikkelblanding sammenblandes med væskenThis particle mixture is mixed with the liquid

(f.eks. blodserum) som inneholder de antistoffer som skal påvises. Etter en reaksjonstid bindes de antistoffer 16 henhv. 2 som skal påvises spesifikt til de tilsvarende antigener 12 henhv. 6. Etter en vasking av partiklene med en vaskevæske for fjernelse av de ikke bundne substanser blandes partiklene med en løsning av fluoresoin-markerte antistoffer 10 som reagerer spesiesspesifikt med de antistoffer som skal påvises. Disse fluoressin- (e.g. blood serum) containing the antibodies to be detected. After a reaction time, the antibodies bind 16 or 2 which must be detected specifically for the corresponding antigens 12 or 6. After washing the particles with a washing liquid to remove the unbound substances, the particles are mixed with a solution of fluorescein-marked antibodies 10 which react species-specifically with the antibodies to be detected. These fluorescein-

markerte antistoffer reagerer med alle antistoffer (enhver antigen-spesifitet) av dyrespesiene hvorfra de antistoffer som skal undersøkes stammer. Etter en reaksjonstid hvor antistoffene 10 bindes til antigenene 16 henhv. 2, vaskes partiklene på nytt for fjernelse av de ikke bundne fluorescin-markerte antistoffer. Deretter måles både fluorescensen av de på hver enkelt partikkel bundne antistoffer 10 (immunfluorescens som måle-parameter for den immunreaksjon som har foregått) såvel som de markeringsfluorescenser som identifiserer partikkelen såvel som størrelsen av partikkelen med en tilsvarende måleinnretning. For dette er et gjennom-strømnings-zytometer som måler fluorescensdata (og også størrelsen) av hver enkelt partikkel. Måledataene behandles i en regnemaskin hvor immunfluorescensene tilordnes de tilsvarende partikkelpopulasjoner. På marked antibodies react with all antibodies (any antigen specificity) of the animal species from which the antibodies to be examined originate. After a reaction time during which the antibodies 10 bind to the antigens 16 or 2, the particles are washed again to remove the unbound fluorescein-labelled antibodies. The fluorescence of the antibodies 10 bound to each individual particle is then measured (immunofluorescence as a measurement parameter for the immune reaction that has taken place) as well as the marker fluorescences that identify the particle as well as the size of the particle with a corresponding measuring device. For this is a flow cytometer that measures the fluorescence data (and also the size) of each individual particle. The measurement data is processed in a calculator where the immunofluorescences are assigned to the corresponding particle populations. On

denne måte oppstilles en profil for de forskjellige antigen-antistoff-reaksjoner Ag.AK-,...., Ag Ak . In this way, a profile is drawn up for the different antigen-antibody reactions Ag.AK-,..., Ag Ak.

^1 1 ^n n^1 1 ^n n

Den ovenfor beskrevne metode er likeledes anvendbar for påvisning av antigener 12 i den væske som undersøkes. Derved tilføres etter den første reaksjon og vaskeprosess en blanding av antistoffer 16 mot alle de antigener som skal undersøkes. Disse antistoffer stammer foretrukket fra en annen dyreart enn antistoffene 14. Etter fornyet reaksjon og vasking tilføres de med antistoffene 16 spesies-spesifikt reagerende fluoresciru*— markerte antistoffer 10. Målingen skjer som ved undersøkelsen på antistoffer. The method described above is also applicable for the detection of antigens 12 in the liquid being examined. Thereby, after the first reaction and washing process, a mixture of antibodies 16 against all the antigens to be examined is added. These antibodies preferably originate from a different animal species than the antibodies 14. After renewed reaction and washing, the species-specifically reacting fluoresciru*- marked antibodies 10 with the antibodies 16 are added. The measurement takes place as in the examination for antibodies.

Fremgangsmåten kan også gjennomføres på følgende måteThe procedure can also be carried out in the following way

som avviker fra gjennomstrømnings-zytometrien. which differs from flow cytometry.

Partikkelblandingen fikseres på en objektbærer, f.eks.The particle mixture is fixed on an object carrier, e.g.

på bunnen av en mikrotiterplate. Det serum som skal undersøkes påføres deretter på denne objektbærer (partikkelmosaikk). Etter en reaksjonstid binder de antistoffer som er tilstede i serumet til de tilsvarende antigener som befinner seg på partiklene. De ikke bundne substanser fjernes ved etterfølgende vasking. on the bottom of a microtiter plate. The serum to be examined is then applied to this object carrier (particle mosaic). After a reaction time, the antibodies present in the serum bind to the corresponding antigens found on the particles. The unbound substances are removed by subsequent washing.

I et annet trinn påføres et fluoressin-markert globulin-antistoff som er spesifikt for den dyreart hvorfra de antistoffer 12 henhv. 16 stammer. Ved denne annen reaksjon bindes de fluorescin-markerte globulin-antistoffer 10 til antistoffene (globulin) 2 henhv. 16 som ble bundet på partiklene 4 i det første reaksjonstrinn. Etter en ytterligere vasking fjernes det ikke-bundne material. In another step, a fluorescein-marked globulin antibody is applied which is specific for the animal species from which the antibodies 12 or 16 strains. In this second reaction, the fluorescein-marked globulin antibodies 10 are bound to the antibodies (globulin) 2 or 16 which was bound to the particles 4 in the first reaction step. After a further wash, the unbound material is removed.

Preparatet undersøkes nå fotometrisk ved hjelp av et fluorescens-fotomikroskop som er utstyrt med filtere slik at det bare kan oppfatte spektrum og intensitet av den fluoressensstråling som emiteres av bare en partikkel og måling av denne. Ved undersøkelsen føres synsflekken av et fluorescensmikroskop hensiktsmessig langs forut gitte baner, f.eks. linjeformet, over den partikkelblanding som skal undersøkes og som befinner seg på en objektbærer. Dette kan også skje automatisk ved hjelp av en tilsvarende innretning. The preparation is now examined photometrically using a fluorescence photomicroscope which is equipped with filters so that it can only perceive the spectrum and intensity of the fluorescence radiation emitted by just one particle and measure this. During the examination, the field of view of a fluorescence microscope is appropriately guided along predetermined paths, e.g. linear, over the particle mixture to be examined and which is on an object carrier. This can also happen automatically using a similar device.

I en regnemaskin bearbeides måledataene. Den undersøkte partikkel identifiseres på grunn av fluoreseens-spektrummét av den i partikkelen inneholdte markør, f.eks. som partikkel . Derved kan den målte fluorescens som stammer fra globulin-antistoffet (immunfluoressens) tilordnes den immunologiske reaksjon Ag^ Ak^. På denne måte opptas automatisk og i rekkefølge emmisjonsdataene for et større antall partikler og bearbeides av regne-maskinen. Ved den statistiske fordeling av partiklene detekteres data for alle partikkelpopulasjoner og bearbeides. Deretter kan det stilles opp en profil for de forskjellige antigen-antistoff-reaksjoner Ag^Ak^, The measurement data is processed in a calculator. The examined particle is identified due to the fluorescence spectrum of the marker contained in the particle, e.g. as a particle. Thereby, the measured fluorescence originating from the globulin antibody (immunofluorescence) can be assigned to the immunological reaction Ag^ Ak^. In this way, the emission data for a larger number of particles is recorded automatically and in sequence and processed by the calculator. In the statistical distribution of the particles, data is detected for all particle populations and processed. A profile can then be set up for the different antigen-antibody reactions Ag^Ak^,

Ag2Ak2, ... AgnAkn-Ag2Ak2, ... AgnAkn-

Emisjons-spektrum henhv. emisj©nspektraene for markeringene av partiklene kan aktiveres ved hjelp av en bred-spektret stråling. En bestemt linje av emisjonspektrummet kan imidlertid også aktiveres ved hjelp av en stråling med en bestemt bølgelengde eller flere separate linjer kan aktiveres ved hjelp av en stråling med flere bestemte bølgelengder. Emission spectrum resp. the emission spectra for the markings of the particles can be activated by means of a broad-spectrum radiation. However, a specific line of the emission spectrum can also be activated by means of a radiation with a specific wavelength or several separate lines can be activated by means of a radiation with several specific wavelengths.

Claims (10)

1. Fremgangsmåte for påvisning av antigener og/eller antistoffer under anvendelse av partikler som er indentifiserbare ved at de er merket med fluoriserende stoffer og/eller har forskjellige partikkelstørrelser, karakterisert ved at partiklene, som er forskjellig markert med et fluoriserende markeringsstoff med en bestemt bølgelengde, enten i forskjellige forut bestemte mengder eller med flere fluoriserende markeringsstoffer med bestemte forskjellige bølgelengder i bestemt mengde eller i forskjellige, forut bestemte mengder fylles med forskjellige antigener (fastfaseantigener) og/eller at en blanding av med denne type fylte partikler blandes med en væske som inneholder de antistoffer og/eller antigener som skal undersøkes henholdsvis påvises (f.eks. blodserum), og at etter en reaksjonstid hvorunder de antistoffer eller antigener som skal påvises bindes til de til partiklene fikserte antigener henholdsvis antistoffer som partiklene er fylt med, og de antistoffer henholdsvis antigener som skal undersøkes påvises og identifiseres ved etterfølgende reaksjonstrinn og målinger.1. Procedure for the detection of antigens and/or antibodies using particles that are identifiable by being labeled with fluorescent substances and/or having different particle sizes, characterized in that the particles, which are differently marked with a fluorescent marker with a certain wavelength, either in different predetermined amounts or with several fluorescent markers with certain different wavelengths in a certain amount or in different, predetermined amounts, are filled with different antigens (solid phase antigens) and/or that a mixture of particles filled with this type is mixed with a liquid containing the antibodies and/or antigens to be examined or detected (e.g. blood serum), and that after a reaction time during which the antibodies or antigens to be detected bind to the antigens fixed to the particles or antibodies with which the particles are filled, and the antibodies or antigens to be examined are detected and identified by subsequent reaction steps and measurements. 2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at for påvisning for identifisering av de bundne antistoffer gjennomføres følgende frem-gangsmåtetrinn: a) vasking av partiklene etter avsluttet reaksjonstid for fjernelse av ikke-bundne substanser. b) tilsetning av en væske med markerte antistoffer som reagerer spesies-spesifikt med de antistoffer som skal påvises eller undersøkes (f.eks. antihumanglobulin ved undersøkelse av humanmaterial), c) vasking for fjernelse av de ikke-bundne substanser etter en bestemt reaksjonstid og d) analyse av markeringene for de enkelte partikler, eller at man for identifisering av de bundne antigener istedet for trinn b) (tilsetning av væsken med markerte antistoffer) tilsetter en væske med en blanding av ikke-markerte antistoffer som reagerer spesifikt med de antigener som skal påvises, etterfulgt av en vaskeprosess etter forløp av en forut bestemt reaksjonstid, og at de anvendte markerte antistoffer reagerer spesies-spesifikt med de anvendte ikke-markerte antistoffer.2. Method as specified in claim 1, characterized in that for detection and identification of the bound antibodies, the following method steps are carried out: a) washing the particles after the end of the reaction time to remove unbound substances. b) addition of a liquid with marked antibodies that react species-specifically with the antibodies to be detected or examined (e.g. antihuman globulin when examining human material), c) washing to remove the unbound substances after a specific reaction time and d) analysis of the markings for the individual particles, or that for the identification of the bound antigens instead of step b) (adding the liquid with marked antibodies) a liquid is added with a mixture of unmarked antibodies that react specifically with the antigens that must be detected, followed by a washing process after a predetermined reaction time, and that the labeled antibodies used react species-specifically with the unlabeled antibodies used. 3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 2, karakterisert ved at de med fluoriserende stoffer markerte antistoffer eller antigener tilsettes samtidig til partiklene med den væske som skal undersøkes eller tilsettes til partiklene etter en bestemt reaksjonstid etter tilsetning av den væske som skal undersøkes uten foregående vasking av partiklene.3. Method as stated in claim 1 or 2, characterized in that the antibodies or antigens marked with fluorescent substances are added to the particles simultaneously with the liquid to be examined or added to the particles after a specific reaction time after adding the liquid to be examined without prior washing of the particles. 4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-3, karakterisert ved at analysen gjennomføres ved hjelp av fluorescens-fotometri ved at partiklene etter å ha gjennomgått fremgangsmåtetrinnene som angitt i det foregående i en konsentrasjon som muliggjør enkeltmålinger føres gjennom et tynt rør og måles (gjennomstrømnings-cytQme.tril/ idet fluorescens-data for hver partikkel detekteres (identifi-serings-fluorescens av partiklene og fluorescens av de markerte antistoffer eller antigener) og bearbeides, idet emisjonsspektrurrimet aktiveres ved hjelp av en bredspektret stråling eller en bestemt linje av emisjon s spektrumet aktiveres ved stråling med en bestemt bølgelengde eller at flere separate linjer aktiveres ved hjelp av en stråling med flere bestemte bølgelengder, idet man for identifisering av partiklene måler og bedømmer fluorescens-spekteret eller spektrene med hensyn til bølgelengde og/eller intensiteter av fluorescens- strålingen av markeringsstoffene og/eller partikkelstørrelsen og at bedømmelsen skjer ut fra tilordning av de immunologiske reaksjoner som har funnet sted til et eller flere antigen/ antikroppsystemer.4. Method as stated in claims 1-3, characterized in that the analysis is carried out by means of fluorescence photometry in that the particles, after having gone through the process steps as stated in the preceding in a concentration that enables individual measurements, are passed through a thin tube and measured (flow -cytQme.tril/ as fluorescence data for each particle is detected (identification-fluorescence of the particles and fluorescence of the marked antibodies or antigens) and processed, as the emission spectrum is activated by means of a broad-spectrum radiation or a specific line of emission in the spectrum is activated by radiation with a specific wavelength or that several separate lines are activated by means of radiation with several specific wavelengths, in order to identify the particles, the fluorescence spectrum or spectra are measured and assessed with regard to the wavelength and/or intensities of the fluorescence radiation of the marking substances and/or the particle size and to mean the reaction takes place based on the assignment of the immunological reactions that have taken place to one or more antigen/antibody systems. 5. Fremgangsmåte som angitt i krav 1-4, karakterisert ved at istedet for gjennom-strømningscytometrien fikseres en blanding av de markerte og fylte partikler på en bærer bestående av et plastmaterial eller glass hvorpå de ytterligere reaksjonstrinn i henhold til krav-ene 1-3 gjennomføres og at bedømmelsen gjennomføres fluorescens-fotometrisk.5. Method as stated in claims 1-4, characterized in that instead of the flow cytometry, a mixture of the marked and filled particles is fixed on a carrier consisting of a plastic material or glass on which the further reaction steps according to claims 1-3 is carried out and that the assessment is carried out fluorescence-photometrically. 6. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, for differensiering av celler (f.eks. laucosyter), karakterisert ved at de med fluoriserende stoffer forskjellig markerte partikler fylles med forskjellige spesifike antistoffer mot antigener i overflaten av celler, en blanding av på denne måte fylte partikler blandes med den cellesuspensjon som skal undersøkes og etter forløp av en bestemt reaksjonstid hvor partiklene bindes til celleoverflaten, detekteres fluorescensen av celle-partikkelkompleksene med et gjennomstrømnings-cytometer som angitt i krav 4 og bedømmes for identifisering av de enkelte celler (f.eks. laucosyt-sub-populasjoner).6. Method as stated in claim 1, for differentiation of cells (e.g. leukocytes), characterized in that the particles differently marked with fluorescent substances are filled with different specific antibodies against antigens on the surface of cells, a mixture of particles filled in this way is mixed with the cell suspension to be examined and after a certain reaction time has elapsed during which the particles are bound to the cell surface, the fluorescence of the cell-particle complexes is detected with a flow cytometer as stated in claim 4 and assessed for identification of the individual cells (e.g. leukocyte sub-populations). 7. Identifiserbare partikler for utførelse av den fremgangsmåte som er angitt i krav 1, karakterisert ved at de forskjellige partikler er forsynt med fluorescerende markeringsstoff med en bestemt bølgelengde, enten i forskjellige forut bestemte mengder eller forsynt med flere fluoriserende markeringsstoffer med bestemte forskjellige bølgelengder i bestemt mengde eller i forskjellige, forut bestemte mengder. —8-. 7. Identifiable particles for carrying out the method specified in claim 1, characterized in that the various particles are provided with fluorescent marker substances with a specific wavelength, either in different predetermined amounts or provided with several fluorescent marker substances with certain different wavelengths in a specific amount or in different, predetermined amounts. -8-. Partikler som angitt i krav 7, karakterisert ved at partiklene er tilnærmet kuleformet og av omtrent lik størrelse eller fremviser flere separate størrelser, idet størrelsen av partiklene ligger i området fra mikrometer- til nanometer-størrelse, og at partiklene når de foreligger i flere separate størrelser etter deres størrelse måleteknisk kan tilordnes partikkelpopulasjoner som kan sondres fra hverandre, idet størrelsen av partiklene tjener som ytterligere markerings- henholdsvis sondringstrekk.Particles as specified in claim 7, characterized in that the particles are approximately spherical and of approximately the same size or exhibit several separate sizes, the size of the particles being in the range from micrometer to nanometer size, and that the particles when they exist in several separate sizes can be assigned to particle populations according to their size which can be distinguished from each other, as the size of the particles serves as a further marking or distinguishing feature. 9. Partikler som angitt i krav 7 eller 8, karakterisert ved at de består av et stoff egnet for fylling (kjemisk eller fysikalsk binding) med antigener eller antistoffer, bestående av plastmaterial, gummi, polysasaccarid-polymer som f.eks. algar eller en annen polymer eller glass, eller at partiklene utgjøres av celler, f.eks. erythrozyter.9. Particles as specified in claim 7 or 8, characterized in that they consist of a substance suitable for filling (chemical or physical binding) with antigens or antibodies, consisting of plastic material, rubber, polysaccharide polymer such as e.g. algae or another polymer or glass, or that the particles are made up of cells, e.g. erythrocytes. 10. Partikler som angitt i krav 7-9, karakterisert ved partiklene i det enkelte tilfelle er fylt direkte med forskjellige antigener eller antistoffer eller med spesifike antikropper hvortil antigenet er bundet ved immunologisk reaksjon (partikkel-antistoff-antigen).10. Particles as stated in claims 7-9, characterized by the particles in each case being filled directly with different antigens or antibodies or with specific antibodies to which the antigen is bound by immunological reaction (particle-antibody-antigen).