NO832407L - Preparat for anvendelse ved diagnose av chlamydiale infeksjoner. - Google Patents
Preparat for anvendelse ved diagnose av chlamydiale infeksjoner.Info
- Publication number
- NO832407L NO832407L NO832407A NO832407A NO832407L NO 832407 L NO832407 L NO 832407L NO 832407 A NO832407 A NO 832407A NO 832407 A NO832407 A NO 832407A NO 832407 L NO832407 L NO 832407L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- lipopolysaccharide
- chlamydial
- group
- detection
- detecting
- Prior art date
Links
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title abstract description 10
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 130
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 130
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 68
- 241000498849 Chlamydiales Species 0.000 claims abstract description 49
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims abstract description 18
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 claims abstract description 4
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 12
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 8
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 claims description 8
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 8
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 4
- -1 KDO oligosaccharide Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 4
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000007190 Chlamydia Infections Diseases 0.000 claims 4
- 208000028512 chlamydia infectious disease Diseases 0.000 claims 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 abstract description 14
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 abstract description 12
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 3
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 23
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 19
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 10
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N keto-3-deoxy-D-manno-octulosonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 230000001358 anti-chlamydial effect Effects 0.000 description 4
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 150000002386 heptoses Chemical class 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 208000000143 urethritis Diseases 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- NNLZBVFSCVTSLA-XMABDTGBSA-N (4r,5r,6r)-6-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]-2,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC(O)(C(O)=O)C[C@@H](O)[C@H]1O NNLZBVFSCVTSLA-XMABDTGBSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- AAXCQFOXUJMCCW-PETQGJDISA-N LPS core Chemical compound O([C@H]1[C@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@H]([C@@H]([C@@H](CO[C@]2(O[C@@H]([C@@H](OC3[C@H]([C@@H](OC4[C@H]([C@@H](OC5[C@@H]([C@@H](O[C@@H]6[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)OC6[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)NC(C)=O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]6[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)O5)O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](O)COC5[C@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]([C@@H](O)CO)O5)O)O4)O)[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCCN)[C@@H]([C@@H](O)CO)O3)O)[C@H](O[C@]3(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@]4(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(=O)OCCN)C4)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C3)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C2)[C@@H](O)CO)C(O)=O)O1)OP(O)(O)=O)OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1O AAXCQFOXUJMCCW-PETQGJDISA-N 0.000 description 2
- PLBVFNYORPRCME-YMDUGQBDSA-N OP(O)(O)=O.OC[C@](O)(N)[C@@H](O)[C@H](O)C=O Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@](O)(N)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PLBVFNYORPRCME-YMDUGQBDSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000008358 core component Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- MQAGWJGGLKPBSC-UHFFFAOYSA-N 3-diazoniobenzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC([N+]#N)=C1 MQAGWJGGLKPBSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 4,5,6,7,8-pentahydroxy-2-oxooctanoic acid Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001185363 Chlamydiae Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 201000000902 chlamydia Diseases 0.000 description 1
- 208000012538 chlamydia trachomatis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 102000007739 porin activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56927—Chlamydia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/295—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Chlamydiales (o)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
- G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- G01N2400/50—Lipopolysaccharides; LPS
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/879—Salmonella
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/823—Immunogenic carrier or carrier per se
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører et nytt preparat for påvisning av chlamydiale infeksjoner ved å bruke lipopolysakarider fra re-lipopolysaccharid mutanter av Gram negative bakterier.
Chlamydier er svært små, obligat intracellular bakterier som infiserer fugler, menneske og andre pattedyr. Chlamydiene klassifiseres i to arter, Chlamydia trachomatis og Chlamydia psittaci. Chlamydia trachomatis har en høy grad av vert-spesifisitet, idet den nesten fullstendig er begrenset til mennesket; den forårsaker infeksjoner av varierende hardhet i øyne og i kjønns- og urinveis-organer. Chlamydia psittaci-stammer er derimot sjeldne hos mennesker, men finnes i fugler og i ville dyr og husdyr. C. psittaci er en årsak til abort og diaré-epidemier hos dyr.
Selv om det finnes antichlamydiale behandlingsmåter med legemidler, passerer mange chlamydiale infeksjoner ubehandlet p.g.a. begrensningene som er forbundet med de tilgjengelige diagnostiseringsfremgangsmåtene. De best kjente serologiske fremgangsmåtene som brukes til diagnose av chlamydia, er komplement fikseringsprøver, anvendelse av chlamydialt glycolipid (også kalt en gruppe antigen), motvirkende immunologiske elektrophorese analyser og immunofluorescens-analyser. Disse fremgangsmåtene er beskrevet i U.S.-patentskrift hr. 4.118.469, E.P.-patentskrift No. 17.460 og GB-patentskrift hr. 2.047.889. Isoleringen av chlamydiale antigener og deres anvendelse som vaksiner er beskrevet i U.S.-patentskrift nr^4.118.469, 4.039.657, 4.096.035, 4.271.146 og 4.267.170.
Et hovedproblem ved diagnostisering av chlamydiale infeksjoner ligger i dyrkingen av chlamydiaen. I egenskap av obligat intracellulære bakterier, må chlamydier dyrkes i levende celler,
f. eks. vevkultur eller eggpreparat, noe som nødvendiggjør laboratorier som har spesialisert seg på cellekultur. Fremgangsmåtene for å dyrke chlamydier er kjennetegnet ved lave utbytter og uunngåelig forurensing med fremmedstoffer, slik som ikke
-chlamydiale proteiner, fra de tilknyttede levende cellene.
Selv om nærværet av forurensende stoffer generelt sett er uten betydning, er slike forurensende stoffer viktige i serologiske fremgangsmåter eftersom selv spornivåer av forurensende stoffer kan frembringe dannelsen av påvisbare mengder antistoff.
Dette problemet har nødvendiggjort behovet for kontroll-anti-
gener til å fastslå ikke spesifikke reaksjoner i chlamydiale serologiske fremgangsmåter.
Fremstillingen av chlamydialt antigen, selv om det er forurenset med fremmedstoffer er tidkrevende, kostbart og til og med muligens risikabelt for helsen til forskeren.
Dersom to forskjellige antigenmolekyler tilfeldigvis har
en eller flere funksjonelle grupper tilfelles, ser man at disse antigenene kryssreagerer. Kryssreaksjonen er et redskap som har vært utnyttet for å klassifisere grupper av nært beslektede bakterier. F.eks. er de 1500 eller flere variantene av salmonella ordnet i serologiske grupper ved hjelp av kryssreaksjoner, det vil si at antiserumet fra en stamme i en bestemt gruppe reagerer på andre stammer i denne gruppen. De felles gruppene^éller antigeniske determinantene som er ansvarlige for disse gruppespesifikke reaksjonene, er korte sekvenser av et bestemt sukker-rester. De kryssreagerende grupper behøver ikke å være identiske, de behøver bare å være tilstrekkelig like. Hvis man for eks. kryssreagerer antistoffer mot m-azobenzensulfonat med m-azobenzenarsonat.
"Røff" (R)-mutanter er en velkjent klasse bakterielle mutanter (Luderitz et al., Comprehensive Biochemistry, Vol. 26A, pp. 105-228, M. Florkin & E.H. Stotz, Eds., Elsevier, Amster-
dam (1968); Makela & Stocker, Annu. Rev. Genetics, Vol.3,
pp. 291-322 (1969); Makela & Stocker in Genetics As a Tool in Microbiology, Glower & Hopwood, Eds.; Soc. Gen. Microbiol.
Symp. 31, Cambridge University Press (1981)) hvor et trinn i biosyntesen av LPS er mangelfull, og derved blokkerer full-førelsen av molekylet. R mutantene klassifiseres i kjemotyper efter deres LPS struktur (Fig. 4 og sidene 156-171 i Luderitz et al. 1968, og Fig. 4 i Luderitz et al., Current Topics In Membranes and Transport, Vol. 17, pp. 79-151 (1982). Idenne klassifiseringen defineres en kjemotype av Re eller en "Re-mutant" som en mutant hvis LPS består av lipid A og KDO (3-deoxy-D-manno-octuloson syre, tidligere kalt 2-keto-3-deoxy-octonat) uten andre monosakkarid substituenter. An denne grunn refereres ofte re-mutanter til som "hepfeosemanglende" eftersom de til og med mangler heptose, monosakkaridet som i de fleste LPS er den neste enheten som er knyttet distalt til KDO. Slike re-mutanter ble først beskrevet i slekten salmonella (både S. typhimurium og S. minnesota) men har senere blitt funnet i andre arter (Escherichia coli og Proteus mirabilis), og kan sannsynligvis isoleres fra mange andre eftersom LPS strukturen i den umiddelbare nærheten av lipid A varierer svært lite blant de gram-negative bakteriene (Luderitz et al. 1982).
Det er et formål ved foreliggende oppfinnelse å påvise antistoffer mot Chlamydier ved å bruke Re-lipopolysakkarid (Re-LPS) fra re-mutanter av gram-negative bakterier.
Et annet formål ved foreliggende oppfinnelse er å påvise chlamydier ved å bruke antistoffer mot Re-LPS fra re-mutanter av gram-negative bakterier.
Det er også et formål ved foreliggende oppfinnelse å eliminere ulempene og problemene beskrevet ovenfor som er forbundet med dyrkingen av chlamydier.
Det er et ytterligere formål ved foreliggende oppfinnelse
å eliminere behovet for kontroll antigener.
Det er funnet at antistoffer mot chlamydiat glycolipid kryss-reagerer med re-lipopolysakkaridet fra re-lipopolysakkarid (Re-LPS) mutanter av gram-negative bakterier og at chlamydialt glycolopid antigen kryssreagerer med anti-re-lipopolysakkarid anti-stoffene. Et preparat ifølge oppfinnelsen ,det såkalte re-LPS, kan brukes ved fremstillingen av gruppespesifikke antistoffer fra chlamydia for diagnostiske formål eller for å påvise antistoffer mot chlamydialt gruppe-anti-gen iprøver, slik som serum, avføring eller slim fra nese, strupehode eller urinveier. Preparatet kan brukes som anti-gen i serologiske fremgangsmåter som vanligvis brukes ved diagnose av chlamydiale infeksjoner, slik som komplement fikseringsprøver,motvirkende immunologiske elektrophorese fremgangsmåter, fremgangsmåter med passiv hemma-glutinering, fremgangsmåter med hemolyser i gel (HIG), fremgangsmåte med enzym immunologisk analyse (EIA), fremgangsmåte med immunologisk fluorisence (FIA) og fremgangsmåte med radioaktiv immunologisk analyse. Bruken av preparatet er ikke begrenset til de ovenfor beskrevne fremgangsmåtene, men•kan i prinsippet brukes ved alle serologiske eller immunologiske fremgangsmåter hvor antistoffer mot gruppespesifikt antigen fra chlamydia skal påvises. Antiserum mot gruppespesifikt chlamydialt antigen kan fremstilles direkte ved immunisering med en re-mutant fra en gram-negativ bakterie uten isolering av re-lipopolysakkaridet.
Re-LPS ifølge foreliggende oppfinnelse er lett og billig
å fremstille. Det egner seg for masseproduksjon og kan brukes ved diagnose og i immunologiske og serologiske fremgangsmåter
på mange forskjellige måter. Eftersom re-LPS ifølge oppfinnelsen er kjemisk rent, trenges ikke kontroll antigener for å bestemme invirkningen av fremmedmateriale fra vevkulturene eller egg-pre-paratene.
Preparatet ifølge foreliggende oppfinnelse inneholder et re-lipopolysakkarid isolert fra re-lipopolysakkarid mutanter av gram-negative bakterier.
Gram-negative bakterier inneholder et lipopolysakkarid med den følgende generelle strukturen:
Lipid A bestanddelene som er inntegnet i (I), inneholder glucosamin disakkarid som er substituert i hydroxyl-gruppen med fettsyrer, 4-aminoarabinosefosfat og diphosphorylethanolamine som er substituert i aminogruppen med fettsyrer. Kjærnebestanddelen er et polysakkarid som er knyttet til lipidet A over en KDO-oligosakkarid bestanddel satt sammen av to eller tre KDO-molekyler, hvorav den ene kan være substituert med en R bestanddel. R er valgt fra gruppen bestående av hydrogen, en phosphat gruppe og en diphosphorylalkanolamin gruppe, og er fortrinnsvis en diphos-phorylethanolamin gruppe. O-polysakkridbestanddelen er et (monosakkarid)n hvor n er et helt tall fra null til uendelig stort. Mens strukturene for lipid A-, kjerne og o-polysakkarid-bestanddelene varierer i forskjellige bakteriestammer, forblir strukturen av KDO-oligosakkarid-bestanddelen som inneholder to eller tre KDO-molekyler, vanligvis ganske konstant. KDO er 3-deoxy-D-manno-octulosonsyre som har følgende struktur:
Representative gram-negative bakterier, f.eks. salmonella-gruppen, inneholder en kjerne med minst bestanddelene glucosamin, glucose, galactose og heptose. Re-LPS-mutanter av slike gram-negative bakterier produserer et re-LPS som mangler kjerne - og o-oligosakkrid-bestanddelene. Re-LPS-N, som har formelen:
hvor lipid A, KDO-oligosakkrid og R har de samme betydningene som ovenfor, kryssreagerer med chlamydiale antistoffer.
Ifølge vanlig brukte kjemiske "analyser er molekylvekten for et re-LPS ca. 3000. Når re-LPS utsettes for elektrophorøse 1 en 15% natrium dodecylsulfat-polyacrylamid gel (SDS-PAGE fremgangsmåten er beskrevet av Laemmli i Nature, Vol. 227, pp. 680-685 (1979)), er forflytningshastigheten for re-LPS (slik som angitt ved sluttstillingen til båndet efter electrophorese) likt med den til glycolipid gruppe antigenet fra chlamydia tracomatis. Forflytningshastigheten til re-LPS er også klart forskjellig
fra forflytningshastigheten til LPS av chemotype Rb2som har en molekylvekt på omtrent 4000 d og som har 6 monosakkarid-enheter i kjernen i tillegg til lipid A-KDO-oligosakkaridet (se LUderitz et al. 1982 som angitt ovenfor for Rb2strukturen). LPS båndene kan synliggjøres i gelen efter farging med sølv-nitrat (Tsai & Frasch, Anal. Biochem., Vol. 119, pp. 115-119 1982)) eller ved hjelp av immunologisk flekking (Towbin et al. Proe. National Acad. Sciences, Vol. 76, pp. 4350-4354 (1979)). En slik gel efter sølvnitrat-farging er vist i fig. 1 hvor felt 1 er Rb2~LPS fra S. typhimurium Rb2mutantstamme SH 5014 (Nurminen et al., J.Bact., Vol. 127, pp. 941-955, (1976)), felt 2 er re-LPS fra S. typhimurium re-mutant stammen SL 1102, og felt 3 er glycolipid fra chlamydia trachomatis. Mens prøvene ble tilført på toppen av gelen, er bare den nedre delen av gelen med båndet for LPS med lav molekylvekt vist.
Mens noen av fettsyrene og 4-aminoarabinosefosfåt kan fjernes fra re-LPS ved behandling med en svak base (0.16 N NaOH,
1 h, 56°C), forblir KDO-bestanddelen knyttet til re-LPS.
Når re-LPS fra (II) behandles med en svak base, beholder det sine immunigene egenskaper og kan derfor med fordel brukes til å påvise antistoffer mot chlamydialt gruppeantigen i forskjellige immunologiske og serologiske fremgangsmåter. Når re-lipopolysakkaridet kokes i svak syre (0.1 N HC1), frigjøres KDO-substitu-entene og ødelegger derved de immunologiske determinantene som
trengs til chlamydial diagnose.
Antiserumet som produseres mot re-lipopolysakkarider eller hele re-mutant bakterier i eksperimentdyr, kryssreagerer med glycolipid antigen isolert fra chlamydia arter.
Re-lipopolysakkaride mutanter (som mangler heptose) brukes til å syntetesere re-LPS angitt i (II). Re-mutantene fremstilles ved hjelp av kjente fremgangsmåter fra gram-negative forldrebakterier som er istand til å syntetisere LPS angitt i (I). Re-mutantene kan avledes fra forskjellige lett tilgjengelige gram-negative bakterier. Re-mutantene som brukes ved denne oppfinnelsen, er de følgende: Salmonella tyhpimurium (re-mutant)
(SL 110.2), Wilkinson et al., Journal of General Microbiol.,
Vol. 70, pp. 527-554 (1972); Salmonella minnesota (re-mutant R595) (SH 320), Luderitz et al., Annals of N.Y. Academy of Sciences, Vol. 133, pp. 374-394 (1966); Escherichia coli K-12 (re-mutant D21f2) (EH 237), Mayer et al., European Journal of Biochem., Vol. 66, pp. 357-368 (1976) og proteus mirabilis (re-mutant R45), Kotelko et al. Journal of Hyg. Epidemiol. Microbiol. Immunol., Vol. 21, pp. 271-284 (1977). Disse re-mutantene er lett tilgjengelige fra forskningsgruppene nevnt i disse publikasjoner eller fra the National Public Health Institute i Helsingfors. Lipopolysakkarid-preparatet ifølge oppfinnelsen kan også fremstilles fra gram-negative bakterier som er forskjellige fra de som er nevnt ovenfor, forutsatt at både de gram-negative bakterier og deres remutanter produserer de ovenfor nevnte, spesifike lipopolysakkaridene.
De gram-negative bakteriene som brukes ifølge foreliggende oppfinnelse, krever ikke spesielle næringsstoffer i kulturmediene. Eftersom bakteriene hvor det har skjedd re-muta-sjon er svært følsomme for detergenter, gallesyrer og giftstoffer utgjør re-mutanter små problemer utenfor laboratoriemiljøer.
Bakteriene som er egnet for bruk ved foreliggende oppfinnelse, kan dyrkes på en rekke medier, slik som anriket Salmonella-agar, beskrevet av Schlecht og Westphal iZentralblatt fxir Bakteriologie,Parasitenkunde, Infectionskrankenheiten und Hygiene, Vol. 1, Orig. 200, pp. 241-259 (1966). Re-mutantene ifølge oppfinnelsen dyrkes over natten på anriket salmonella-agar og samles derefter opp med vann. Derefter sentrifugeres cellene ved 5000 rpm i ca. 10 min. Celle pelleten vaskes med destillert vann og sentrifugeres på nytt ved 5000 rpm i ca. 10 min. Bruken av destillert vann i denne fasen er vesentlig for vellykket isolering av lipopolysakkarid. Selv om isoleringen av lipopolysakkarid fra re-mutanten med fordel kan utføres ifølge fremgangsmåten beskrevet av Galanos et al. i the European Journal of Biochem., Vol 9, pp. 245-249 (1969), kan det også brukes andre vel-kjente fremgangsmåter med gode utbytter, se f.eks. Westphal et al. i Methods in Carbohydrate Chemistry, Editors R.L. Whistler, J.N. BeMiller og M.L. Wolfram, Vol. 5, p. 83. Det isolerte LPS kan behandles med alkali slik som beskrevet i Handbook of Micromethods for the Biological Sciences, Keleti & Lederer, Eds.,
pp. 133-135 (1974).
Den følgende beskrivelse av bestemte prøvefremgangs-måter er illustrerende for oppfinnelsen: Re-mutant R595 av Salmonella minnesota bakteriet (Luderitz et al., 1966 referert til ovenfor)
A. Dyrking av Salmonella minnesota.
Re-mutanten av R 595 av Salmonella minnesota ble dyrket over natten ved 37°C på anriket Salmonella agar plater (Schlecht &.Westphal 1966 referert til ovenfor), fremstilt fra 10 1 anriket Salmonella agar. Bakteriene ble samlet opp med ca.
500 ml destillert vann, overført til en sentrifugeflaske og sentrifugert ved 5000 rpm i ca. 10 min. Celle pelleten ble på nytt suspendert i destillert vann og sentrifugert ved 5000 rpm i ca. 10 min., celle pelleten ble frysetørket. Utbyttet var ca. 30 g.
B. Isolasjon av re-lipopolysakkarid.
(Galanos et al. 1969 referert til ovenfor)
Lipopolysakkaridet ble ekstrahert frå den frysetørkede pellet ved å bruke en phenol:chloroform:petrolether-blanding (2:5:8) ved 0°C. Chloroformen og petroletheren ble fjernet ved fordamping og lipopolysakkaridet ble utfelt med destillert vann. Lipopolysakkaridet ble renset ved å oppløse bunnfallet i destillert vann ved 45°C og sentrifugering ved 100.000 g. Lipopolysakkaridet ble frysetørket og lagret ved værelsetemperatur. Utbyttet av lipopolysakkaridet var ca. 5% av bakterie-tørrvekten.
C. Alkalibehandling av Re-lipopolysakkarider.
10 mg av re-lipopolysakkaridet isolert i avsnitt B
ble opløst i 1 ml 0.25 M natrium hydroxid. Det oppløste re-LPS ble inkubert ved 56°C i 60 min. og hensatt for kjøling til
værelsetemperatur. Derefter ble dette materialet sentrifugert ved 2000 rpm i 15 min. ved 4°C. Den resulterende supernatant ble samlet opp og nøytralisert med 1 N ediksyre. Det nøytra-liserte materiale ble dialysert mot vann over natten og det dialyserte materiale ble frysetørket. D. Immunisering med det isolerte lipopolysakkarid.
Eftersom et rent lipopolysakkarid bringer for dagen svake immunologiske responser, ble lipopolysakkaridet brakt i kompleks med et bærermolekyl, slik som et rpotein, for å øke den immunologiske responsen. For eksempel ble 1 mg av Salmonella-porin-protein (bærer) og 0.1 mg av re-lipopolysakkarid blandet i 5 ml med 0.25%natrium lauryl sulfat (SDS).
Efter at kompleksdannelsen hadde oppstått, ble immunogenet dialysert for å fjerne SDS. Denne fremgangsmåte blebeskrevet av Kuusi et al. i Inf. Imm., Vol. 34, pp. 328-332 (1981).
Antistoffer mot re-lipopolysakkarid ble fremstilt ved hjelp av vanlig kjente immuniseringsfremgangsmåter. Kaniner ble inoculert^medPO.5 ml av det dialyserte immunogen på fire steder av hver kanin. Alle-: injeksjoner var subcutanøse. En hjelpe-innoculering på 0.5 ml av immunogenet ble gitt 14 dager efter den opprinnelige innoculeringen. Serum ble samlet opp fra kaninene 10 dager efter den siste injeksjonen.
E. Immunisering med hele bakterier.
Salmonella minnesota ble dyrket i næringsmedium intil bakteriene nådde den logaritmiske vekstfasen. Bakteriene ble samlet opp ved hjelp av sentrifugering og vasket en gang med physiologisk saltvannsoppløsning. Bakteriene ble suspendert i fysiologisk saltvannsoppløsning ved en konsentrasjon på 10^ bakterier/ml og ble inaktivert ved oppvarming i 1 time ved 100°C og ved å tilsette 0.5% formalin. Kaniner ble innoculert med 0.5 ml av de inaktiverte bakteriene på fire steder på hver kanin. Hjelpeinnoculeringer på 0.5 ml ble gitt 7 ganger med en ukes mellomrom efter den opprinnelige innoculeringen. Serumet ble samlet opp 10 dager efter den siste injeksjonen.
Fremgangsmåten beskrevet i avsnitt A kan anvendes til
å dyrke re-mutanter fremstilt fra andre gram-negative bakterier. Antisera mot disse re-mutanter kan fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåten beskrevet i avsnitt E. Lipopolysakkaridet kan isoleres fra bakterien i overensstemmelse med fremgangsmåten beskrevet i avsnitt B, og antiseraene mot lipopolysakaridet kan
fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåten beskrevet i avsnitt D.
De følgende eksemplene viser anvendeligheten av preparatet ifølge oppfinnelsen ved påvisningen av chlamydier eller chlamydie-antistoffer.
Eksempel 1.
Kryssreaksjonene til antistoffer mot re-mutanter av gram-negative bakterier ble undersøkt ved å bruke den enzymatiske immunologiske analyse fremgangsmåten (EIA) beskrevet av Koskela og Leinonen i Ped. Inf. Dis., Vol. 1, pp. 245-252 (1982). Antigenet som ble anvendt i EIA-fremgangsmåten, var glykolipidet isolert fra chlamydiet. Antiserum mot chlamydialt glycolipid ble fremstilt ved hjelp av immuniseringen av kaniner med Salmonella re-mutant stammer (S.typhimurium, S. minnesota) og re-LPS-porin kompleks. Antistoff titern mot chlamydialt glycolipid i S. typhimurium og S. minnesota re-mutant antisera, slik de ble bestemt ved hjelp av EIA-fremgangsmåten, er vist i tabell 1.
Resultatene gjengitt i tabell 1 indikerer at antisera fremstilt ved hjelp av immuniseringen av kaniner med re-mutant stammer (S. typhimerium og S. minnesota) og re-LPS-porin kompleks inneholder store mengder antistoffer mot chlamydialt glycolipid. Det chlamydiale glycolipidet kryssreagerte ikke med normalt serum eller med antiserum mot S. typhimurium mutanten av chemotype Rd2»som har beholdt en sukker-rest fra LPS kjernen.
<*>En heptoserest fra LPS kjernebestanddelen er tilstede i mutanten i tillegg til lipid A KDO-oligosakkaridet. ;Eksempel 2;Lipopolysakkarid preparater (re-LPS) ifølge oppfinnelsen ble anvendt som antigener for å påvise chlamydiale antistoffer. ;A. Enzymatisk Immunologisk Analysefremgangsmåte og ;andre fastfase-fremgangsmåter.;Microtitre enzymater for enzymatisk immunologisk analyse (A/S Nunc, Roskilde, Danmark) ble belagt ved å anvende de følgende re-LPS konsentrasjonene: 1, 5, 10 og 20 microg/1 ml phosphatbufret saltvannsoppløsning ved pH 7.4. Platene ble inocculert og inkubert ved 37°C over natten. EIA bestemmelsen ble utført og resultatene (EIA titrene) beregnet slik som beskrevet i detalj av Koskela et al. i Journal of Clinical Pathology, Vol. 34, pp. 93-98 (1981) og av Koskela et al., i ;Ped. Inf. Dis., Vol. 1, pp. 245-252 (1982). Alkaliske phosphatase-merkede anti-immunoglobulin conjugatene var kommersielle preparater av anti-menneske IgG, IgM og IgA, anti-kanin IgG og anti-mus IgG, alle levert av Orion Diagnostica, Helsingfors, Finland. ;De optimale konsentrasjonene av re-LPS eller alkali-behandlet re-LPS som gav den høyeste EIA-titer i kanin antiserum mot re-mutant og også et negativt resultat i ikke-immunisert kanin serum, var 10 microg/ml. Denne re-LPS konsentrasjonen ble brukt for å belegge platene i senere undersøkelser. ;Kaniner ble immunisert med chlamydier slik som beskrevet i avsnitt E. Antisera fra disse kaninene ble prøvet mot re-LPS isolert fra fire forskjellige bakterier ved å bruke EIA fremgangs måten. EIA-antistofftiterne mot re-LPS preparater i chlamydiale antisera, eller i kanin antiserum mot S.minnesota re-mutant eller i normalt kaninserum er gjengitt i tabell II. ;
Monoclonale museantistoffer mot chlamydier ble frem-•stilt ved hjelp av hybridoma teknikken beskrevet av Kohler et al. i Nature, Vol. 256, pp. 495-497 (1975). Monoclonale antistoffer reagerer i EIA-prøven med det chlamydiale glycolipidet og reagerer også med re-LPS. EIA-reaktiviteten til monoclonale antistoffer mot chlamydialt glycolipid, mot re-LPS fra S.typhimurium og mot det samme re-LPS efter alkali behandling (slik som beskrevet i C ovenfor) er vist i tabell III. ;
Eftersom monoclonale antistoffer er spesifikke for en antigene determinand, indikerer reaksjonene mellom de monoclonale anti-stoffene og chlamydialt glycolipid og re-LPS en felles antigen struktur i det chlamydiale glycolipidet og re-LPS. ;Immunologiske analyser basert på radioaktivitet og fluorisens (RIA og FIA) kan også brukes istedet for EIA eftersom disse analysene adskiller seg fra EIA bare ved markøren på det andre antistoffet (f.eks. radioisotop i RIA, fluorochrome i FIA ;og enzym i EIA).;B. Motvirkende immunologiske elektrophorese (CIE);Antiserumet fra en kanin immunisert med chlamydia (chlamydia 1 i tabell II) ble prøvet mot re.LPS (fra S. typhimurium SL 1102) og alkalibehandlet re-LPS ved å bruke CIE-fremgangsmåten (Leinonen, Journal of Clinical Microbiology, Vol. 11, ;pp. 135-140 (1980)). Resultatene er vist i fig. 2. Re-LPS (A);og alkali-behandlet re-LPS (B) i tre forskjellige konsentrasjoner 100 microg/ml, 10 microg/ml og 1 microg/ml (1, 2 og 3) danner en tydelig avgrenset precipitin linje med chlamydialt antiserum (C). ;C. Dobbel immunodiffusjon.;Antiserumet fra en kanin immunisert med et chlamydia (chlamydia 1 i tabell II) ble prøvet mot re-LPS (fra S. typhimurium SL 1102) og alkalibehandlet re-LPS ved å bruke dobbel immunodiffusjon (fig. 3)'. Brønnene ble stanset ut i den 0.9% agarose gelen som inneholdt 0.15% deoxycholat (DOC). Brønnene inneholdt 100 microg/ml 0.15% DOC med chlamydialt glycolipid (1,4), re-LPS (2) og alkalibehandlet re-LPS (3). Midtbrønnen inneholdt chlamydialt antiserum. Utfellingslinjen mot re-LPS, alkalibehandlet re-LPS og chlamydialt glycolipid falt sammen hvilket viser ;-identitetsreaksjonen (ih.h.t. Ouchterlony og Nilsson, Handbook of ;I J ;Experimental Immunology, ed. D.M. Weir, Chapter 19, Blackwell Scientific Publications, Oxford (1978)). ;D. Passiv Hemagglutinering.;Røde blodceller fra sauer ble gjort følsomme med re-LPS (fra S. typhimurium SL 1102) eller med det alkalibehandlede re-LPS slik som beskrevet (Handbook of Micromethods for the Biological Sciences, Keleti & Lederer, Eds., pp. 134-135 (1974)). De vaskede cellene ble suspendert i fosfatbufferet saltvannsopp-løsning til en 0.5% suspension. 25 microl av denne suspensionen ble blandet med 75 microl av seriefortynninger av antiseraene som skulle prøves i U-formede brønner på en microtiterplate. Agglutinationen ble avlest visuelt efter inkubering ved 37°C i ;30 min. Positive agglutinationer ble ikke observert med et normalt kaninserum, mens det antichlamydiale kaninserumet (chlamydial i tabell II) agglutinerte disse celler i stor grad (tabell IV). Ubehandlede røde blodceller fra sau ble ikke agglutinert. ;
E. Hemolyse i gel.;Røde blodceller fra kyllinger ble gjort følsomme med det alkalibehandlete re-lipopolysakkaridet fra S. typhimurium SL1102 slik som beskrevet under D ovenfor. De re-LPS behandlete røde blodcellene ble blandet med smeltet agarose og komplement, helt over i plastskåler og hensatt for å størkne til en gelplate slik som beskrevet av Vaananen og Vaheri i the Journal of Medical Virology, Vol. 3, pp. 245-252 (1979) og av Vaananen i the Journal of Virol. Methods, Vol 4, pp. 117-126 (1982). Det ble derefter ;I H ;stanset ut brønner med en diameter på 2 mm i gelene. 6 microl av varme inaktiverte (56°C i 30 min.) menneskesera ble tilført ;brønnene. Platen ble inkubert over natten ved 37°C og dia-meteren til de hemolytiske sonene ble målt. Resultatene ble sammenlignet med resultatene målt ved den antichlamydiale in-direkte fluorisence antistoff prøven (IFAT), beskrevet av Weller og Coons i Proe. Soc. Exp. Biol. Med., Vol. 86, p.789 (1954) ;og i Rapid Virus Diagnosis, Application of Immunofluorescence, Gardner og McQuillan, Eds., Butterworths, London p. 60, som ;er rutinefremgangsmåten for å måle chlamydiale antistoffer i menneskesera. Resultatene som ble erholdt ved hjelp av disse fremgangsmåtene (HIG og IFAT), er i god overensstemmelse slik som det fremgår av tabell V. ; ;
F. Latex-Agglutinering;Covalent fiksering av re-lipopolysakkaridet (fra S. typhimurium SL 1102) og det alkalibehandlete re-lipopolysakkaridet til latex partikler var basert på anvendelsen av vannopp-løselig carbodiimid (CDI) slik som beskrevete av Goodfriend et al. i Science, Vol. 144, pp. 1344-1346 (1964) : (a) 0.5 ml carboxylert polystyren latex partikler (0.8 microm diameter, 100 g/l, Estapor, Rhone-Poulence, Courbevoie, Frankrike) ble vasket to ganger i 5 ml isoton saltvannsoppløsning buffret med borat (20 mmol/1, BBS, pH 8.1), ;<*><16 betyr et negativt resultat
1 5
sentrifugert og pånytt suspendert i 1 ml av denne buffer;
(b) Latexsuspensjonen ble aktivert ved å bli omrørt
i 45 min ved værelsestemperatur med 25 mg 1-ethyl-3-dimethyl-aminopropyl-carbodiimide hydrochloride (Sigma Chemical Co.);
(c) Efter sentrifugering og resuspendering i 1 ml BBS, ble den aktiverte latexen aktivert over natten ved værelsetemperatur med forsiktig omrøring med forskjellige mengder (150 microg, 250 microg, 300 microg og 500 microg) re-LPS og alkalibehandlet re-LPS; (d) Efter inkubering ble 250 microl 1% serum albumin fra kveg i glycinbuffret saltvannsoppløsning (GBS-BSA, pH 8.2) tilsatt og latexen ble sentrifugert, vasket tre ganger med GBS-BSA, resuspendert i 5 ml GBS-BSA og lydbølgebehandlet noen få sekunder ; og (e) Latexreagensen ble lagret ved 4°C. Antichlamydiaserumet fra kanin (chlamydia 1 fra tabell II) ble prøvet for sin evne til å agglutinere latexpartikler. Et normalt kaninserum tjente som en kontroll. Latexprøvene ble utført ved å blande 25 microl av antiserumet eller dets fortynninger og 25 microl av latexreagensen på et objektglass. Efter vipping i 2 min. ble objektglassene undersøkt for agglutinering mot en mørk bakgrunn. Resultatene er vist i tabell VI.
Eksempel 3
Anvendelse av re-LPS preparat ved diagnose av chlamydial infeksjon
A. Urethritis som ikke er forårsaket av gonokokker (NGU)
Antistofftiterne ble bestemt i doble akutt- og rekon-valesent sera erholdt fra 17 pasienter med NGU under anvendelse av EIA fremgangsmåten (Eksempel 2A). Chlamydia isolering var positiv hos alle pasienter. Antistoffresponsen ble ansett som positiv dersom antistofftiteren viste en 2 ganger økning eller minsking mellom de doble seraene, eller dersom IgM og/eller IgA antistoffer ble funnet i serumet fra den akutte fasen, Resultatene for antistoffbestemmelsene i NGU pasientene ved anvendelse av EIA er vist i tabell VII.
Serologiske diagnoser ble utført på alle pasientene hvor chlamydia var blitt isolert, enten ved påvisning av endring i antistofftiter og/eller påvisning av akuttfase antistoffer av immunoglobulinklasse IgM og/eller IgA.
B. Betennelsessykdom i bekken (PID)
Doble serumprøver fra 8 PID pasienter og akutte sera fra 5 PID pasienter med positiv chlamydie dyrking ble prøvet under anvendelse av EIA fremgangsmåten med re-LPS fra S. typhirium SL 1102 som antigenet. I alle tilfellene var en serologisk diagnose mulig enten på basis av antistofftiter endring eller påvisning av akuttfase antistoffer av immunoglobelinklassene IgA og/eller IgM.
Re-lipopolysakkaridmutantene er deponert med stame-numrene SL 1102, SH 320, EH 237 og EH 193 i National Public Health Institute, MAnnerheimin-tie 166, SF-00280 Helsingfors, Finland. S. typhimurium "røff" mutant av chemotyper re (SL 1102) erholdt fra B.A.D. Stocker og beskrevete av Wilkonson et al. i the Journal of General Microbiol., Vol 70, pp. 527-554 (1972),
ble deponert i NPHI i mai 1969. S. minnesotamutant mR595
(SH 320), erholdt fra Luderitz et al. og beskrevete av Luderitz et al. i Annals of N.Y. Academy of Sciences, Vol. 133, pp. 349-374 (1966), ble deponert i NPHI i november 1966. Escherichia coli mutant D21f2 (EH 237) erholdt fra K. Jann og beskrevet av Mayer et al. i the European Journal of Biochem., Vol. 66, pp. 357-368 (1976) ble deponert i NPHI i november 1981. Proteus mirabilis mutant R45 (EH 193) erholdt fra K. Kotelko og beskrevete av Kotelko et al. i the Journal of Hyg. Epidemiol. Microbiol. Immunol., Vol. 21, pp. 271-284 (1977), ble deponert i NPHI i januar 1979.
Claims (20)
1 . Preparat for diagnostisering av chlamydieinfeksjoner, karakterisert ved at det omfatter et re-lipopolysaccharid eller et anti-re-lipopolysaccharid-antistoff idet re-lipopolysaccharidet er isolert fra en re-lipopolysaccharid-mutant av en gram-negativ bakterie, idet anti-re-lipopolysaccharid-antistoffet er produsert ved immunisering av dyr med re-lipopolysaccharid, og hvor re-lipopolysaccharidet er istand til å kryssreagere med chlamydialt gruppespesifikt antigen.
2. Preparat ifølge krav 1, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet omfatter et lipopolysaccharid med en lipid A bestanddel og en KDO-oligosaccharid-bestanddel som inneholder 2 eller 3 KDO-molekyler, idet re-lipopolysaccharidet har strukturen
hvor strukturene til lipid A og R varierer mellom bakteriestammer og hvor strukturen til KDO-oligosaccharidet er ganske konstant.
3. Preparat ifølge krav 2, karakterisert ved at produktet fremstilt som (I) behandles med en svak base og er i stand til å kryssreagere med chlamydialt glycolipid.
4. Fremgangsmåte for å påvise chlamydia infeksjoner, karakterisert ved følgende trinn:
(a) å bringe en gitt mengde av re-lipopolysaccharid-mutant eller et antistoff fra en anti-re-lipopolysacc-haridmutant i kontakt med en prøve som analyseres,
idet re-lipopolysaccharidmutanten er isolert fra gram-negativ bakterier, anti-re-lipopolysaccharid-mutant-antistoffet er produsert ved immunisering av dyr med re-lipopolysaccharid-mutant, og (b) analysere den blandede prøven for å bestemme hvorvidt prøven inneholder chlamydialt gruppespesifikt antistoff som kryssreagerer med re-lipopolysaccharidmutanten eller chlamydialt gruppespesifikt antigen som kryssreagerer med antistoff fra anti-re-lipopolysaccharid-mutant.
5. Fremgangsmåte for å påvise chlamydie-infeksjoner, karakterisert ved at den omfatter følgende trinn:
(a) å bringe en gitt mengde av et re-lipopolysaccharid eller et anti-re-lipopolysaccharid-antistoff i kontakt med en prøve som skal analyseres, idet re-lipopolysaccharidet er isolert fra en re-lipopolysaccharid-mutant av gram-negative bakterier og anti-re-lipopolysaccharid-antistoffet er produsert ved immunisering av dyr med re-lipopolysaccharid, og
(b) analysere den blandede prøven for å bestemme hvorvidt prøven inneholder chlamydialt gruppespesifikt antistoff som kryssreagerer med re-lipopolysaccharidet eller chlamydialt gruppespesifikt antigen som kryss-reagerer med anti-re-lipopolysaccharid-antistoff.
6. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5 karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base.
7. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5 karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppe-spesifikt antistoff ved serologiske og immunologiske fremgangsmåter.
8. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5 karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved serologiske og immunologiske fremgangsmåter.
9. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5 karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved enzymatiske immunologiske analysefremgangsmåter.
10. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved enzymatisk immunologisk analysefremgangsmåter.
11. Fremgangsmåte for påvisning av chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen avchlamydialt gruppespesifikt antistoff ved motvirkende immunologiske eléctrophoresefremgangsmåter.
12. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved motvirkende immunologiske electrophorese fremgangsmåter.
13. Fremgangsmåte for påvisning av chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved doble immunodiffusjonsfremgangsmåter.
14. Fremgangsmåte for påvisning av chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved doble immunodiffusjonsfremgangsmåter.
15. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved passive hemmaglutineringsfremgangsmåter.
16. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved passive hemmaglutineringsfremgangsmåter.
17. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved fremgangsmåter med hemolyser i gel.
18. Fremgangsmåte for påvisning av chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved fremgangsmåter med hemolyser i gel.
19. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved latex agglutineringsfremgangsmåter.
20. Fremgangsmåte for å påvise chlamydieinfeksjoner ifølge krav 5, karakterisert ved at re-lipopolysaccharidet behandles med en svak base og brukes til påvisningen av chlamydialt gruppespesifikt antistoff ved latex agglutineringsfremgangsmåter.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI822348A FI69639C (fi) | 1982-07-02 | 1982-07-02 | Preparat foer anvaendning vid klamydia-diagnostik |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO832407L true NO832407L (no) | 1984-01-03 |
Family
ID=8515769
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO832407A NO832407L (no) | 1982-07-02 | 1983-07-01 | Preparat for anvendelse ved diagnose av chlamydiale infeksjoner. |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4652518A (no) |
EP (1) | EP0098557B1 (no) |
JP (1) | JPS5927261A (no) |
AT (1) | ATE27739T1 (no) |
AU (1) | AU1649283A (no) |
CA (1) | CA1230551A (no) |
DE (2) | DE98557T1 (no) |
DK (1) | DK304483A (no) |
FI (1) | FI69639C (no) |
NO (1) | NO832407L (no) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4818817A (en) * | 1983-11-30 | 1989-04-04 | Petroleum Fermentations N.V. | Enzymatic degradation of lipopolysaccharide bioemulsifiers |
CA1212051A (en) * | 1984-03-02 | 1986-09-30 | John W. Cherwonogrodzky | Identification of brucella abortus and brucellosis infection |
GB8416841D0 (en) * | 1984-07-03 | 1984-08-08 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
GB8426468D0 (en) * | 1984-10-19 | 1984-11-28 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
GB8427006D0 (en) * | 1984-10-25 | 1984-11-28 | Iq Bio Ltd | Determination of chlamydia trachomatis |
US4918163A (en) * | 1985-09-27 | 1990-04-17 | Pfizer Inc. | Monoclonal antibodies specific for lipid-A determinants of gram negative bacteria |
US5179001A (en) * | 1985-09-27 | 1993-01-12 | The Regents Of The University Of California | Detection and monitoring of chronic and gram-negative infection |
ES2009366A6 (es) * | 1986-04-24 | 1989-09-16 | Univ California | Procedimiento de obtencion de anticuerpos monoclonales para bacterias gram-negativas. |
CA1336576C (en) * | 1986-09-26 | 1995-08-08 | Malcolm B. Perry | Immunoassays for discriminating between brucellosis infections and vaccinations |
EP0303515B1 (en) * | 1987-08-13 | 1992-11-11 | Synbiotics Corporation | Improved amphipathic analyte assays using lipophilic surface |
US4916057A (en) * | 1988-02-29 | 1990-04-10 | Kallestad Diagnostics, Inc. | Chlamydia assay employing base treatment |
FR2631125A1 (fr) * | 1988-05-06 | 1989-11-10 | Pasteur Institut | Procede de detection directe de chlamydiae, anticorps monoclonaux anti-chlamydiae et leurs applications au diagnostic des infections chlamydiales |
US5089479A (en) * | 1988-11-28 | 1992-02-18 | Krivan Howard C | Adhesion of mycoplasma pneumoniae and mycoplasma hominus to sulfatide |
US5484706A (en) * | 1993-05-19 | 1996-01-16 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Immunoassay for analytes in samples using alkylating agents |
AU660268B3 (en) * | 1993-07-16 | 1995-06-15 | Deakin University | Bacteria-specific lipopolysaccharide-like molecules |
US5773234A (en) * | 1995-08-07 | 1998-06-30 | Quidel Corporation | Method and device for chlamydia detection |
JPH10339731A (ja) * | 1997-06-06 | 1998-12-22 | Mitsubishi Chem Corp | 腸管出血性大腸菌感染の検出方法 |
CA2328249A1 (en) | 1998-04-15 | 1999-10-21 | Bart C. Weimer | Real time detection of antigens |
US7220596B2 (en) * | 1998-04-15 | 2007-05-22 | Utah State University | Real time detection of antigens |
PT2086582E (pt) * | 2006-10-12 | 2013-01-25 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina compreendendo uma emulsão adjuvante óleo em água |
PE20090146A1 (es) * | 2007-04-20 | 2009-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica contra el virus influenza |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4039657A (en) * | 1975-06-19 | 1977-08-02 | Merck & Co., Inc. | Separating antigen from residual common sensitizing protein |
US4118469A (en) * | 1976-04-27 | 1978-10-03 | Research Corporation | Antigen for trachoma lymphogranuloma venereum (LGV) and non-gonococcal urethritis (NGU) |
US4096035A (en) * | 1977-06-15 | 1978-06-20 | Merck & Co., Inc. | Separation of trachoma agent from growth medium impurities |
GB2047889A (en) * | 1979-04-02 | 1980-12-03 | Research Corp | Detection of antibodies to chlormydia trachomatis having an immunofluorescence test |
DK138080A (da) * | 1979-04-02 | 1980-10-03 | Research Corp | Fremgangsmaade til serologisk undersoegelse af kilder som mistaenkes for at indeholde antistoffer mod chlamydia trachomatis |
US4310455A (en) * | 1979-04-17 | 1982-01-12 | Research Corporation | Antigen for early pregnancy test and contraceptive vaccine |
US4267170A (en) * | 1979-09-06 | 1981-05-12 | Seawell Albert C | Methods of using chlamydia vaccine for preventing and treating bovine diseases |
US4271146A (en) * | 1979-09-06 | 1981-06-02 | Seawell Albert C | Methods of using Chlamydia vaccine for preventing and treating bovine and ovine diseases |
BR8108820A (pt) * | 1980-09-24 | 1982-08-24 | Cetus Corp | Processo e sonda de diagnostico |
US4397959A (en) * | 1980-11-05 | 1983-08-09 | Research Corporation | Forced precipitation method for preparing antigen/antibody particles |
US4497899A (en) * | 1982-04-12 | 1985-02-05 | Abbott Laboratories | Immunoassay for Chlamydia trachomatis antigens |
-
1982
- 1982-07-02 FI FI822348A patent/FI69639C/fi not_active IP Right Cessation
-
1983
- 1983-06-24 US US06/507,788 patent/US4652518A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-07-01 DE DE198383106453T patent/DE98557T1/de active Pending
- 1983-07-01 EP EP83106453A patent/EP0098557B1/en not_active Expired
- 1983-07-01 JP JP58118413A patent/JPS5927261A/ja active Granted
- 1983-07-01 DE DE8383106453T patent/DE3372018D1/de not_active Expired
- 1983-07-01 AT AT83106453T patent/ATE27739T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-07-01 NO NO832407A patent/NO832407L/no unknown
- 1983-07-01 AU AU16492/83A patent/AU1649283A/en not_active Abandoned
- 1983-07-01 DK DK304483A patent/DK304483A/da unknown
- 1983-07-04 CA CA000431720A patent/CA1230551A/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK304483A (da) | 1984-01-03 |
DE98557T1 (de) | 1984-07-05 |
JPS5927261A (ja) | 1984-02-13 |
EP0098557A2 (en) | 1984-01-18 |
ATE27739T1 (de) | 1987-06-15 |
DK304483D0 (da) | 1983-07-01 |
JPH0450531B2 (no) | 1992-08-14 |
US4652518A (en) | 1987-03-24 |
FI822348L (fi) | 1984-01-03 |
FI69639B (fi) | 1985-11-29 |
FI69639C (fi) | 1986-03-10 |
CA1230551A (en) | 1987-12-22 |
EP0098557B1 (en) | 1987-06-10 |
DE3372018D1 (en) | 1987-07-16 |
AU1649283A (en) | 1984-01-05 |
EP0098557A3 (en) | 1984-04-04 |
FI822348A0 (fi) | 1982-07-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO832407L (no) | Preparat for anvendelse ved diagnose av chlamydiale infeksjoner. | |
Caldwell et al. | Monoclonal antibody against a genus-specific antigen of Chlamydia species: location of the epitope on chlamydial lipopolysaccharide | |
Steinmetz et al. | Purification and characterization of an exopolysaccharide of Burkholderia (Pseudomonas) pseudomallei | |
Carlsson et al. | Quantitation of Salmonella O-antibodies in human sera by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) | |
Peterson et al. | Characterization of a neutralizing monoclonal antibody directed at the lipopolysaccharide of Chlamydia pneumoniae | |
Corbel | The serological relationship between Brucella spp., Yersinia enterocolitica serotype IX and Salmonella serotypes of Kauffmann-White group N | |
Velasco et al. | Antibody and delayed-type hypersensitivity responses to Ochrobactrum anthropi cytosolic and outer membrane antigens in infections by smooth and rough Brucella spp | |
Tsang et al. | A murine monoclonal antibody specific for the outer core oligosaccharide of Salmonella lipopolysaccharide | |
Perez-Perez et al. | Clinical and immunologic significance of cholera-like toxin and cytotoxin production by Campylobacter species in patients with acute inflammatory diarrhea in the USA | |
Nalbantsoy et al. | Isolation and purification of O and H antigens from Salmonella Enteritidis as diagnostic tool | |
Brade et al. | Antigenic and immunogenic properties of recombinants from Salmonella typhimurium and Salmonella minnesota rough mutants expressing in their lipopolysaccharide a genus-specific chlamydial epitope | |
Svenungsson et al. | Diagnosis of Salmonella infections: specificity of indirect immunofluorescence for rapid identification of Salmonella enteritidis and usefulness of enzyme-linked immunosorbent assay | |
US4115543A (en) | Identification of Neisseria gonorrhoeae | |
WO1985002685A1 (en) | Method and materials for the identification of lipopolysaccharide producing microorganisms | |
Aleixo et al. | Salmonella detection in foods and feeds in 27 hours by an enzyme immunoassay | |
Luk et al. | Anti-Salmonella lipopolysaccharide monoclonal antibodies: characterization of Salmonella BO-, CO-, DO-, and EO-specific clones and their diagnostic usefulness | |
Svenungsson et al. | Synthetic disaccharide-protein antigens for production of specific 04 and 09 antisera for immunofluorescence diagnosis of Salmonella | |
Ahmed et al. | Structurally defined epitopes of Haemophilus ducreyi lipooligosaccharides recognized by monoclonal antibodies | |
Maeland et al. | Common enterobacterial antigen in Yersinia enterocolitica | |
Lindberg et al. | Shigella flexneri O-antigen specific enzyme immunoassay: lipopolysaccharides and synthetic glycoconjugates as antigens | |
US5653986A (en) | Vibrio cholerae bengal serogroup-O139 capsular polysaccharide and protein conjugates thereof | |
Trautmann et al. | A murine monoclonal antibody defines a unique epitope shared by Klebsiella lipopolysaccharides | |
WO1997010351A1 (en) | Exopolysaccharides of burkholderia pseudomallei and burkholderia mallei | |
Svenungsson et al. | Diagnosis of Salmonella Bacteria: Antibodies Against Synthetic Salmonella O‐Antigen 8 for Immunofluorescence and co‐Agglutination using Sensitized Protein A‐Containing Staphylococci | |
Price et al. | Detection of campylobacter by immunofluorescence in stools and rectal biopsies of patients with diarrhoea. |