NO341868B1 - Framgangsmåte for framstilling av pleuromutiliner - Google Patents

Abstract

Framgangsmåte for framstilling av 14-O-[(N-(3-metyl-2-amino-butyryl-piperidyl)sulanyl)acetyl]mutiliner av formel (I) anvendelig for storskala produksjon av høy-renhets produkter, og hvor karbonatomet ved piperidin-ringen festet til svovelatomet enten er i (S) konfigurasjon eller i (R) konfigurasjon, og en ny krystallinsk form av 14-O-[(N-(3-metyl-2(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid

Description

Den foreliggende oppfinnelsen angår en ny framgangsmåte for framstilling av piperidinylsulfanylacetylmutiliner, slik det framgår av patentkrav 1 og 17, samt forbindelser og salter derav, slik det framgår av patentkravene 10, 13, 14, og farmasøytiske blandinger, slik det framgår av krav 18.

Bakgrunn

Pleuromutilin, en forbindelse av formel

er et naturlig forekommende antibiotikum, for eksempel produsert av basidomycetene Pleurotus mutilus og P.passeckerianus, se for eksempelfor eksempel The Merck Index, 12. utgave, oppføring 7694. Det er utviklet et antall ytterligere pleuromutiliner med den prinsippielle ring-strukturen av pleuromutilin, og som er substituert ved hydroksylgruppen, for eksempel som antimikrobialer. Grunnet deres uttalte antimikrobielle aktivitet, har det vist seg at en gruppe pleuromutilinderivater, valyl-substituerte piperidinylsulfanylacetylmutiliner, som omtalt i WO 02/22580, er av særlig interesse.

Formål

For produksjon av hovedsakelig rene isomere av denne gruppen forbindelser, er det et behov for å utvikle en framgangsmåte som er hensiktsmessig å benytte i industriell skala og som unngår bruk av kostbare utgangsmaterialer, miljøskadelige reagenser og løsningsmidler, ei heller tidskrevende og arbeidsomme rensetrinn.

Oppfinnelsen

Disse formålene oppnås med en framgangsmåte for framstilling av piperidinylsulfanylacetylmutiliner og et salt derav, slik det framgår av patentkravene 1 og 17, forbindelser og salter derav, slik det framgår av patentkravene 10, 13 og 14, og farmasøytiske blandinger, slik det framgår av patentkrav 18. Ytterligere fordelaktige trekk framgår av de respektive uselvstendige kravene.

I et aspekt framskaffer den foreliggende oppfinnelsen en framgangsmåte for framstilling av en forbindelse av formelen

hvor karbonatomet i piperidin-ringen festet til svovelatomet, enten er i (S)-konfigurasjon eller i (R)-konfigurasjonen og 2-amino-3-metyl-butyryl gruppen festet til piperidin-ringen, enten er i (S)-konfigurasjonen eller i (R)-konfigurasjonen, omfattende trinnene for å

a) avbeskytte et N-beskyttet piperidinylsulfanylacetylmutilin med formel

og isolere en forbindelse av formel

idet karbonatomet i piperidin-ringen som er festet til svovelatomet, enten er i (S)-konfigurasjon eller i (R)-konfigurasjon, i fri form eller i form av et surt tilleggs-salt,

b) acylere forbindelsen av formel III med enten (R)- eller (S)-valin beskyttet som en enamin og aktivert som et karbonsyre-blandet anhydrid for å danne en forbindelse av formel

hvor R1og R2er C1-4alkyl, og R3er hydrogen eller C1-4alkyl,

c) avbeskytte forbindelsen av formel IV og isolere forbindelsen av formel I.

I en foretrukket utførelse er forbindelsen av formel I isolert i form av et farmasøytisk akseptabelt salt. I en enda mer foretrukket utførelse er forbindelsen av formel I isolert som et hydroklorid.

I en forbindelse av formel I er et karbonatom av piperidin-ringen bundet til et svovelatom. Denne bindingen kan være i enhver posisjon på piperidin-ringen, for eksempel i α, β eller γ posisjon, fortrinnsvis i β posisjon til nitrogenatom på piperidin-ringen.

Avbeskyttelse av den N-beskyttete forbindelsen av formel II blir utført ved syre-spalting av den beskyttende gruppen for å danne et surt tilsetnings-salt som en isomerisk blanding med hensyn til konfigurasjonen av karbonatomet i piperidin-ringen festet til svovelatomet i en forbindelse av formel II. Konfigurasjonen i mutilinringen av en forbindelse av formel II, er fortrinnsvis den samme som i naturlig produsert mutilin. Den isomeriske blandingen blir hensiktsmessig separert via krystallisering på en slik måte at det oppnås hovedsakelig rene isomere, hvor karbonatomet på piperidin-ringen som er festet til svovelatomet, enten er i (S)-konfigurasjonen eller i (R) konfigurasjon. Krystalliserings-trinnet fører til en høy rense-effekt, og forbindelsen av formel Ill i krystallin-form er derfor svært egnet som et mellomprodukt, særlig også i industriell skala, i framgangsmåten for framstilling av piperidinylsulfanylacetylmutiliner. I tillegg har bruk av forbindelsen av formel III i krystallinsk form den fordelen at andre rense-trinn, så som kromatografi, kan unnværes, ettersom renheten av forbindelsen av formel III i krystallinsk form er fullstendig tilstrekkelig for produksjon av valyl-substituerte piperidinylsulfanylacetylmutiliner.

En mineralsyre eller en organisk syre kan benyttes for å utføre avbeskyttelsen av en forbindelse av formel II. I en foretrukket utførelse blir metansulfonsyre benyttet for å danne det respektive mesylatet som et surt tilsetningssalt. Som en beskyttende gruppe benevnt Prot i en forbindelse av formel II, kan konvensjonelle N-beskyttende grupper benyttes. Fortrinnsvis benyttes en tertbutoksykarbonyl-gruppe.

Det er vist at ved å velge en egnet avbeskyttende forbindelse, kan løselighet av enten (S)-konfigurasjonen eller (R)-konfigurasjonen fremmes selektivt, ved at isomerisk (S)-konfigurasjon kan separeres fra (R)-konfigurasjonen. For eksempel ved å benytte metansulfonsyre som avbeskyttende forbindelse blir det krystalliserte produktet en ren (S)-isomer, mens R)-isomeren forblir i løsning (se eksempel 1F).

I et påfølgende trinn, blir innføringen av valyl-delen til den hovedsakelig rene isomeren av forbindelsen av formel III, utført ved å acylere forbindelsen med enten (R)-eller (S)-valin beskyttet som et enamin, for å danne en forbindelse av IV. Det beskyttete valinet blir produsert ved å reagere enten (R)- eller (S)-valin med en p-keto ester av formel R1-CO-CH(R3)-COOR2hvor R1, R2, og R3er definert ovenfor. Acetoeddiksyre-metylester blir fortrinnsvis benyttet. Valinet blir fortrinnsvis aktivert i samsvar med en blandet karbonsyre-anhydrid-prosedyre. Det blandete anhydridet blir produsert in situ, for eksempel ved tilsats av pivalsyre-klorid. Etter tilsats av forbindelsen av formel III produsert i trinn a) blir det oppnådd en beskyttet forbindelse av formel IV . Disse forbindelsene omfatter overlegne krystalliserings-egenskaper sammenlignet med forbindelser med andre beskyttende grupper for eksempel tertbutoksykarbonyl. Forbindelser som har disse overlegne krystalliserings-egenskapene er lette å håndtere med hensyn til produksjon og isolering og gir bedre muligheter for ytterligere rensing, for eksempel med hensyn til 3-substituert piperidinylsulfanylacetylmutiliner i samsvar med formel I, blir enamin-beskyttet forbindelse i samsvar med formel IV isolert og renset via krystallisering, mens det tilsvarende tert-butoksykarbonyl beskyttete derivatet må renses ved tids- og arbeidskrevende kromatografi-trinn.

Den beskyttende gruppen av forbindelser av formel IV fjernes ved syre-spaltning. Etter fjerning av acetoeddiksyre-esteren og ekstrahering, kan forbindelsen i samsvar med formel I isoleres i fri form, eller etter tilsats av en syre som gir farmasøytisk akseptable salter og etter lyofilisering av den respektive vandige fasen, i en amorf form av et farmasøytisk akseptabelt salt, for eksempel et hydroklorid.

I en foretrukket utførelse er karbonatomet i piperidin-ringen som er bundet til svovelatomet, i βposisjon til nitrogenatomet i piperidin-ringen, dvs. en 3-substituert piperidinylsulfanylacetylmutilin av formel I. Mer foretrukket angår den foreliggende oppfinnelsen 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-aminobutyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid.

Den foreliggende oppfinnelsen angår videre en ny krystallisk form av 14-O-[(N-3-Metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid. Den lyofiliserte amorfe forbindelse av 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilinhydroklorid oppnådd via reaksjons-sekvensen beskrevet ovenfor, blir konvertert til en krystallinsk form ved bruk av en krystalliserings-prosess i et vandig medium. Prosessen kan fremmes og akselereres ved bruk av frø-krystaller. Via rekrystallisering kan krystallin 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid føres til en form med ønsket konsistens og kjemisk og optisk renhet. Hovedsakelig rene isomere har en et diastereometrisk overskudd på ≥97% med hensyn til 3-(S)-posisjonen som oppnås på denne måten.

Krystallinsk 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]-mutilinhydroklorid er karakterisert ved et røntgen pulver-diffraksjonsmønster med topper 2-theta ved 6,2 ±0,2, 10,9 ± 0,2, 12,3 ±0,2, 13,4 ±0,2, 14,1 ±0,2 , 20,8 ±0,2 grader (2-theta, CuK-alpha). Det kan også være karakterisert ved et infrarødt spekter med karakteristiske bånd ved omtrent 2927, 1721, 1645, 1462, 1403, 1142 cm<-1>.

Figur I : Pulver-diffraktogram for 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid.

I en krystallinsk form gir 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid høyere renhet og bedre stabilitet enn den amorfe lyofiliserte formen, hvilket er en fordel i framstillingen av farmasøytiske blandinger som inneholder krystallinsk 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilinhydroklorid som en aktiv ingrediens.

N-beskyttet piperidinylsulfanylacetylmutiliner av formel II kan framstilles ved å reagere et 14-O-merkaptoacetyl-mutilin med et N-beskyttet hydroksypiperidin med en avgående gruppe i α, β eller γ posisjon av nitrogenatomet av piperidin-ringen, for eksempel N-BOC-3(R)-metylsulfonyloksypiperidin, som omtalt i WO 02/22580.

Mer hensiktsmessig, og som et andre aspekt av den foreliggende oppfinnelsen, kan N-beskyttete piperidinylsulfanylacetylmutiliner framstilles ved å reagere et pleuromutilin-22-O-sulfonat (for eksempel mesylat, besylat eller tosylat) med et N-beskyttet piperidin-thiol. Beskyttende grupper inkluderer egnete beskyttende grupper, for eksempel beskyttende grupper som konvensjonelt.

Fortrinnsvis blir en tert-butoksykarbonyl-gruppe benyttet som N-beskyttende gruppe og i en annen foretrukket utførelse blir N-beskyttet piperidin med thiol-gruppen i 3-posisjon på piperidinringen, benyttet. Racemisk eller enantiomerisk rent N-beskyttet piperidin-thiol med enten (R)-eller (S)-konfigurasjon for karbonatomet som bærer thiol-gruppen, kan benyttes.

Fortrinnsvis benyttes N-beskyttet piperidin-thiol som en racemat for å unngå bruk av kostbare kirale utgangsmaterialer. Det N-beskyttete piperidin-thiolet kan framstilles med utgangspunkt i det egnete hydroksypiperidinet ved å sette til en N-beskyttende gruppe (for eksempel tert butoksykarbonyl) og reagere med et sulfonsyre-klorid eller anhydrid (for eksempel metansulfonyl klorid). Thiol-gruppen innføres via reaksjon med en svovelholdig nukleofil, for eksempel et thioacetat, og basisk spalting av den tilsvarende thioesteren (for eksempel N-BOC-3-(R,S)-acetylthiopiperidin).

Dersom hydroksypiperidinet blir benyttet i form av en enkel enantiomer (for eksempel 3-(R)-hydroksypiperidin), skjer reaksjons-sekvensen antydet ovenfor, inkludert nukleofil substitusjon ved bruk av et thioacetat, på en kontrollert måte (Walden inversjon) for å produsere det tilsvarende N-beskyttete piperidin-thiolet, idet karbonatomet på piperidin-ringen festet til svovelatomet enten er i (S)-konfigurasjonen eller i (R)-konfigurasjonen (for eksempel 3-(S)-piperidin thiol).

Ytterligere reaksjon med et pleuromutilin-22-O-sulfonat gir N-beskyttet piperidinyl-sulfanylacetylmutiliner av formel II, hvor karbonatomet på piperidinringen festet til svovelatomet enten er i (S)-konfigurasjonen eller i (R)-konfigurasjon.

I de følgende eksemplene som illustrerer oppfinnelsen, er referanser til temperaturer i grader Celsius.

De følgende forkortningene er brukt:

N-BOC = N-butoksykarbonyl

RT = romtemperatur

MTBE = metyl-tert-butyleter

Nummereringen av mutilinringen som det refereres til i eksemplene er gitt i den følgende formelen:

Eksempler

14-O-[(N-3-Metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid A. N-BOC-3-(R,S)-Hydroksy-piperidin

202,4 g 3-(R,S)-hydroksypiperidin ble løst i 4,5 I deionisert vann i en 10 I reaktor. 336 g natriumhydrogenkarbonat, løst i 1,1 I vann ble tilsatt. Den kraftig rørte løsningen ble tilsatt 534 g di-tertbutyl-dikarbonat ved romtemperatur. Etter røring over natta ble blandingen ekstrahert med CH2Cl2(3x). De kombinerte ekstraktene ble vasket med deionisert vann og løsningsmidlet ble destillert av. Resten ble løst i CH2Cl2igjen og løsningen ble fordampet til tørrhet. Det ble oppnådd 423 g N-BOC-3(R,S)-hydroksy-piperidin, som kan benyttes i det neste trinnet uten ytterligere rensing.

B. N-BOC-3-(R,S)-Metylsulfonyloksy-piperidin

En løsning av 216 g N-B0C-3(R,S)-hydroksypiperidin i 5 I CH2Cl2, ble tilsatt 222 ml trietylamin ved 0-5 °C. 137 g metansulfonyl-klorid i 300 ml CH2Cl2ble dråpevis satt til over en periode på 45 min, mens temperaturen ble holdt ved 0-5 °C. Etter ytterligere røring i 70 minutter, ble 2 I deionisert vann satt til og pH ble justert til 5,9 ved tilsats av omtrent 90 ml 2 n HCI. Den vandige fasen ble separert og den organiske fasen ble vasket med vann. Løsningen ble fordampet til tørrhet og 270 -280 g av en oljeholdig rest ble oppnådd. Etter behandling med 1I n-heptan, forekom krystallisering. Krystallene ble isolert og tørket i vakuum. 250 g N-B0C-3(R,S)-metylsulfonyloksypiperidin ble oppnådd.

Mp.: 69 °C

<1>H NMR(CDCI3): 4,71 (m, 1H, CHOSO2CH3), 3,2-3,6 (m, 4H, CHN), 3,05 (s,3H,CH3SO2), 1,94 (m, 2H, H4), 1,83, 1,54 (2xm, 2H, H5), 1,46 (m, 9H, tert,-butyl).

C. N-B0C-3-(R,S)-Acetylthio-piperidin

2,7 I dimetylformamid ble plassert i en reaktor under inert atmosfære. 251,4 g NBOC-3(R,S)-metylsulfonyloksy-piperidin ble tilsatt med varming. Ved en indre temperatur på 50°C ble 256,8 g kalium-thioacetat straks satt til. Etter røring i 90 min ved 95°C ble reaksjonsblandingen overført til en reaktor fylt med 4 I vann. 4,2 I petroleum-eter ble tilsatt. Etter kraftig røring i 5 minutter ble den vandige fasen fjernet. Etter ny tilførsel av vann, ble pH justert til >8 med natrium-hydroksid. Den organiske fasen ble utskilt, vasket med vann og behandlet med aktivt trekull. Løsningen ble fordampet til tørrhet. Etter flash-kromatografi på silika med petroleum-eter, toluen, og etyl-acetat samt konsentrasjon av produktet inneholdende løsning, forekom krystallisering ved avkjøling og 110 g N-B0C-3(R,S)-acetylthio-piperidin ble oppnådd.

Mp.: 46-48°C (n-heptan)

NMR(CDCI3): 3,79 (dd, 1H, H2), 3,5-3,6 (m, 2H, H3, H6), 3,17-3,27 (m, 2H, H2, H6), 2,32 (s, 3H, CH3SO2), 1,99 (m, 1H, H4), 1,55<,,>1,72 (m, H4, H5), 1,47 (s, 9H, tert-butyl).

D. N-BOC-Piperidin-3-(R,S)-thiol

200 g N-B0C-3(R,S)-acetylthio-piperidin ble plassert i en 10 l reaktor med 3,4 l metanol i en inert atmosfære. Til denne løsningen ble det satt 42 g natrium-metoksid i metanol i løpet av en periode på 15 min. Etter ytterligere røring ble 170 ml 5 n HCI satt til, hvilket førte pH-verdien til 2,6 - 3. Løsningen ble konsentrert i en fordamper. Den resulterende tofase blandingen ble tatt opp med 1,7 l metyl tert-butyleter (MTBE) og 1,7 I vann. Etter risting, utskillelse av den vandige fasen og vasking ble MTBE fasen isolert og fordampet, hvilket ga 170 g av en olje.

<1>H NMR(DMSO-d6): 3,92 (b, 1H, H6), 3,69 (d, 1H, H2), 2,7-2,9 (m, 3H, H2, H3, H6), 2,61 (d, 1H, SH), 2,00 (m, 1H, H4), 1,64 (m, 1H, H5), 1,45-1,31 (m, 2H, H4, H5), 1,39 (s, 9H, tert-butyl).

E.14-O-[(N-BOC-Piperidin-3-(R,S)-yl)-sulfanylacetyl]-mutilin

359,7 g 22-O-pleuromutilintosylat ble suspendert i 3,2 I MTBE. 1350 ml 1n natriumhydroksid og 21,1 g benzyl-tributylammonium-klorid ble tilsatt. Blandingen ble avkjølt til 15 °C og en løsning av 161,6 g N-BOC-piperidin-3(R,S)-thiol i 800 ml MTBE ble dråpevis satt til. Tofasereaksjonsblandingen ble rørt i en time ved 20°C.

Etter komplettering av reaksjonen, ble fasene separert. Den organiske fasen ble tørket og fordampet for å gi 521,5 g 14-O-[(N-BOC-piperidin-3(R,S)-yl)-sulfanylacetyl]-mutilin som en olje som ble benyttet i det neste trinnet uten ytterligere rensing.

'H NMR(CDCI3):6,48 (dd, 1H, H19, J=17,4Hz, J=11,2Hz), 5,77 (d, 1H, H14, J=8,4Hz), 5,34, 5,20 (2xdd, 2H, H20, J=11,2 Hz, J=1,3 Hz; J=17,4 Hz, J=1,3 Hz), 4,0, 3,75, 2,96, 2,01 (b, 6H, piperidin), 3,37 (dd, 1H, H11, J=10,5 Hz, J=6,6 Hz), 3,19 (m, 2H, SCH2), 2,85 (m, 1H, CHS), 2,36 (dq, 1H, H10, J=6,6Hz, J=6,5Hz), 2,11 (b, 1H, H4) 1,47 (s, 12H, (CH3)3,(CH3)15), 1,18 (s, 3H, (CH3)18), 0,89 (d, 3H, (CH3)17, J=6,9Hz), 0,75 (d, 3H, (CH3)16, J=6,5Hz).

F.14-O-[(Piperidin-3-(S)-thioacetyI)]-mutilin metansulfonat

521 g 14-O-[(N-B0C-piperidin-3(R,S)-yl)-sulfanylacetyl]-mutilin ble løst i 4 I 2-propanol og varmet til 55°C. Etter tilsats av 165 ml metansulfonsyre, ble løsningen rørt i 5 timer ved denne temperaturen. Etter spaltingen av BOC-gruppen ble reaksjons-blandingen kjølt til 0°C og rørt i ytterligere 2 timer. Det krystalliserte produktet ble filtrert av, vasket med 2-propanol og tørket i vakuum. 159,8 g 14-O-[(Piperidin-3(S)-thioacetyl)]-mutilin-metansulfonat ble oppnådd.

Mp.: 250-255 °C

<1>H NMR(DMSO-d6): 8,58 (m, 2H, NH2<+>), 6,15 (dd, 1H, H19, J=17,2Hz, J=11,5Hz), 5,57 (d, 1H, H14, J=8,2Hz), 5,07 (m, 2H, H20), 4,5 (b, 1H, OH), 3,41 (s, 2H, SCH2), 2,4 (b, 1H, H4), 2,32 (s, 3H, CH3SO3-), 1,37 (s, 3H, (CH3)15), 1,07 (s, 3H, (CH3)18), 0,83 (d, 3H, (CH3)17, J=7,0Hz), 0,64 (d, 3H, (CH3)16, J=6,6Hz).

G. N-(3-Metoksy-1-metyl-3-okso-1-propenyI)-R-valin, kaliumsalt (R-valin Dane salt)

36,6 g fast KOH ble løst i 1250 ml 2-propanol under forsiktig varming. 65 g R-valin og 65,9 ml metyl-acetoacetat ble tilsatt. Blandingen ble rørt og reflukset i 2 timer. Refluks-kondensatoren var erstattet av en Claisen kondensator og en kort kolonne og vannet som ble dannet under kondensator-reaksjonen ble fjernet ved å destillere bort omtrent 1 I 2-propanol. Deretter ble 500 ml 2-propanol satt til, og igjen ble 500 ml destillert bort. Den varme løsningen ble tømt i 3 I MTBE og rørt med iskjøling i omtrent 3 timer. Den resulterende suspensjonen ble satt over natta ved 4 °C (unntatt fukt), filtrert, vasket med 500 ml MTBE og tørket for å gi N-(3-metoksy-1-metyl-3-okso-1-propeny1)-R-valin-kaliumsalt.

H. 14-O-[(N-(3-Metyl-2-(R)-N-(3-metoksy-1-metyl-3-okso-1-propenyl-amino)-butyryl)-piperidin-3-(S)-yl)-sulfanylacetyl]-mutilin (Dane-forbindelse)

Til en suspensjon av 88,2 g R-valin-Dane-salt i 2175 ml MTBE, ble det tilsatt 14,5 ml vann, og blandingen ble rørt i 10 min ved romtemperatur. Blandingen ble kjølt til 0°C og 3,5 ml 4-metylmorfolin og 41 ml pivaloyl-klorid ble tilsatt og rørt i 1 time. 2175 ml forhandskjølt vann (0-4 °C) og 166,4 g 14-O-[(Piperidin-3(S)-thioacetyI)]-mutilin-metansulfonat ble tilsatt. pH-verdien av blandingen ble holdt ved 7,0 ved tilsats av omtrent 210 ml 2n NaOH. Den avkjølte blandingen (0 °C) ble rørt i 30 min, hvorved krystalliseringen av Dane forbindelsen forekom. For komplettering av reaksjon, ble suspensjonen varmet til 30°C og rørt i 1 time. Deretter ble pH-verdien satt til 9,5 ved tilsats av omtrent 85 ml 2n NaOH. Etter kjøling til 0 °C og røring for ytterligere 2 timer, ble krystallene filtrert av, vasket med avkjølt vann og MTBE og tørket i vakuum. 195,4 g Daneforbindelse ble oppnådd som MTBE-oppløsning.

Mp.: 136-142°C

<1>H NMR (DMSO-d6, 1:1 blanding av to stabile rotamere):

8,87, 8,83 (2xd, 1H, NH, J=9,3Hz), 6,15 (m, 1H, H19), 5,60, 5,56 (2xd, 1H, H14, J=8,3Hz), 5,04 (m, 2H, H20), 4,50 (m, 1H, α -H-Val), 4,37 (s, 1H, CH-enamin), 3,50 (s, 3H, OCH3), 2,42, 2,40 (2xb, 1H, H4), 1,87, 1,85 (2xs, 3H, CH3-enamin), 1,36 (2xs, 3H, (CH3)15), 1,07 (s, 3H, (CH3)18), 0,96-0,77 (m, 9H, (CH3)17, (CH3)2Val), 0,64 (m, 3H, (CH3)16).

I.14-O-[(N-3-Metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3(S)-yl)sulfany)acetyl]mutilin-hydroklorid 145 g Dane-forbindelse ble suspendert i en blanding av 1,8 I MTBE og 1,8 l vann. Blandingen ble varmet til omtrent 50°C, og rørt kraftig. pH-verdien ble holdt ved 1,0 ved dråpevis tilsats av 2n HCI. Kompletteringen av spaltingen av den enamin-beskyttende gruppen ble etterfulgt av HPLC. Den organiske fasen ble utskilt og den vandige fasen ble ekstrahert to ganger med MTBE (1,6 I hver) for å fjerne metyl-acetoacetat. Til den rørte vandige fasen ble det tilsatt 1,6 I MTBE og pH justert til 10 ved tilsats av 10 n NaOH. Fasene ble utskilt og MTBE-fasen ble ekstrahert to ganger med 1,6 I porsjoner av vann. Etter tilsats av 1,5 I vann ble pH justert til 3,2 ved tilsats av omtrent 100 ml 2n HCI. Den vandige fasen ble konsentrert i en rotasjons-fordamper. Lyofilisering av den gjenværende løsningen ga 117,4 g av tittel-forbindelsen

<1>NMR (DMSO-d6,~1:1 blanding av to stabile rotamere):

7,95 (b, 3H, NH3<+>), 6,15 (dd, 1H, H19, J=17,6Hz, J=11,2Hz), 5,6 (d, 1H, H14, J=8,2Hz), 5,05 (m, 2H, H20), 4,53 (m, 1H, OH), 4,24, 4,30 (2xd, 1H, α-H-Val, J=4,8Hz), 4,08 (dd, 0,5H, H2-piperidin, J=13,7Hz, J=3,3Hz), 3,08 (dd, 0,5Hz, H2-piperidin, J=13,7Hz, J=9,8Hz), 3,89 (dd, 0,5H, H2-piperidin, J=13,1 Hz, J=3,2Hz), 3,41 (m, 0,5H, H2-piperidin), AB-System: JA=3,44, JB=3,33 (2H, SCH2, J=14,9Hz), 3,42 (m, 1H, H11), 2,83, 2,96 (2xm, 1H, CHS), 2,4 (b, 1H, H4), 1,34 (s, 3H, (CH3)15), 1,05 (s, 1H, (CH3)18), 0,9, 1,0 (2xm, 6H, (CH3)2Val), 0,81 (d, 3H, (CH3)17, J=6,9Hz), 0,63 (m, 3H, (CH3)16).

Eksempel 2

Krystallinsk form av 14-O-[(N-3-Metyl-2-(R)-amino-butyryl-piperidin-3-(S)-yl)sulfanyl)acetyl]-mutilin-hydroklorid

3,0 I vann ble plassert i en rektor og varmet til 40 °C.1 kg lyofilisert 14-O-[(N-3-metyl-2-(R)-aminobutyryl-piperidin-3(S)-y1)sulfanyl)acetyl]mutilin-hydroklorid ble tilsatt og tilsetnings-anordningen ble renset med 1,0 I vann. Etter omtrent 10 minutter ble det oppnådd en gul løsning. Løsningen ble kimdannet og rørt sakte ved 40°C i 6 timer. Deretter ble varmingen stoppet og krystallsuspensjonen rørt ved omgivende temperatur for ytterligere 64 timer. Produktet ble filtrert, vasket med 1,5 I kaldt vann og rekrystallisert uten tørking eller det våte produktet ble tørket ved 40°C i vakuum, hvilket ga 819 g krystallinsk tittelforbindelse.

Rekrystallisering

15 l vann ble plassert i en reaktor og varmet til 50°C. Det våte produktet av den første krystalliseringen ble tilsatt og tilførselsanordningen ble renset med 1,0 I vann. Suspensjonen ble varmet til 70-75<0>C inntil produktet var løst. Løsningen ble avkjølt, kimdannet og rørt sakte ved 40 °C i 6 timer. Varmingen ble stoppet og krystall-suspensjonene ble rørt ved omgivende temperatur i ytterligere 24 timer. Produktet ble filtrert, vasket med 1,3 I kaldt vann og tørket ved 40°C i vakuum, hvilket ga 765 g krystallinsk tittel-forbindelse. Mp.: 150 155 °C