NO314086B1 - Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til - Google Patents
Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til Download PDFInfo
- Publication number
- NO314086B1 NO314086B1 NO19982098A NO982098A NO314086B1 NO 314086 B1 NO314086 B1 NO 314086B1 NO 19982098 A NO19982098 A NO 19982098A NO 982098 A NO982098 A NO 982098A NO 314086 B1 NO314086 B1 NO 314086B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptides
- disease
- peptide
- mutated
- amino acids
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 134
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 82
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 title claims description 19
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 56
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 51
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 45
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 claims description 44
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 claims description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 26
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 19
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 claims description 3
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 claims description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 3
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 claims description 3
- 241000186781 Listeria Species 0.000 claims description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 claims description 3
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 claims description 3
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 claims description 3
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 3
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 claims description 3
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 claims 1
- 101000772905 Homo sapiens Polyubiquitin-B Proteins 0.000 description 38
- 102100030432 Polyubiquitin-B Human genes 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 19
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 7
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- 210000001682 neurofibril Anatomy 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- -1 Fmoc amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 1
- 101150084044 P gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 1
- 230000006764 neuronal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Description
Sammenfatning av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelsen vedrører peptider og farmasøytiske sammensetninger inneholdende disse for behandling av - og/eller profylakse mot Alzheimers sykdom. Oppfinnelsen angår også nukleinsyresekvenser som koder for peptidene, plasmider og virusvektorer omfattende nukleinsyresekvensene, samt anvendelse av disse for behandling av og/eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Abberante proteiner som stammer fra
leserammeforskyvningsmutasjoner i genene som koder for p-amylloid prekursorporotein (PAPP) og ubiquitin-B (Ubi-B) finnes i intracellulære og ekstracellulære avsetninger av proteiner i floker, nevrofibriller og nevrittplater som er forbundet med utvikling av Alzheimers sykdom. Behandlingen av Alzheimers sykdom er i henhold til denne oppfinnelsen å aktivere immunsystemet til å eliminere celler som produserer slike abberante proteiner og dermed hindre eller bremse utvikling av sykdommen.
Leserammeforskyvningsmutasjonen frembringer PAPP- eller Ubi-B-proteinprodukter som kjennetegnes ved aberrante proteinsekvenser på karboksylenden. Peptider som helt eller delvis dekker de aberrante delene av mutert <p>APP- eller Ubi-B-proteinprodukter igangsetter cellulær immunitet (T-celler) og kan derfor brukes i sammensetninger for behandling av Alzheimers sykdom. Peptidene i den foreliggende oppfinnelsen kan videre brukes som profylaktisk vaksine mot Alzheimers sykdom.
Oppfinnelsen vedrører også nukleinsyrer som koder for peptider som svarer til aberrante pAPP- og Ubi-B-proteinsekvenser hos pasienter med Alzheimers sykdom, og vektorer som omfatter minst ett innføringssted der en DNA sekvens koder minst ett slikt peptid.
Oppfinnelsen vedrører videre metoder for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom ved å administrere minst ett mutert pAPP- og/eller Ubi-B-peptid, eller en rekombinant virusvektor som omfattter minst ett innføringssted som inneholder en DNA sekvens som koder minst ett mutert PAPP- og/eller minst ett mutert Ubi-B-peptid.
Den foreliggende oppfinnelsen representerer utvikling av en behandling av - og/eller profylakse mot Alzheimers sykdom basert på anvendelse av peptider for å aktivere en cellulær del av kroppens eget immunsystem mot celler som produserer mutert PAPP- og Ubi-B-proteinprodukter forbundet med Alzheimers sykdom.
Teknisk bakgrunn
Peptider som svarer til aberrante proteinsekvenser forårsaket av leserammeforskyvningsmutasjoner i
kreftcellegener igangsetter spesifikk T-celle immunitet og kan brukes som vaksiner mot kreft (cf. Norske patentsøknad 19982097 innlevert samme dato som den foreliggende søknaden fra GemVax AS.). På samme måte kan peptider som svarer til aberrante proteinsekvenser fra leserammeforskyvningsmutasjoner og er forbundet med andre sykdommer, brukes til
å utvikle behandlingsmetoder for disse sykdommene basert på å skape spesifikk T-celle immunitet.
Selv om det er kjent at leserammeforskyvningsmutasjoner forekommer og at produktene, de muterte peptider, er av sentral betydning for utvikling av aktuelle sykdommer, deriblant Alzheimers sykdom har disse muterte peptider generelt vært ansett for å være uten biologisk funksjon. Derfor har ikke immunterapi tidligere vært rettet mot slike proteiner. De nye vedlagte data viser at disse muterte peptider forbundet med Alzheimers sykdom setter i gang T-celleresponser mot celler som produserer slike spesifikke muterte protein, og altså er immunogene.
Det er således ikke tidligere vist at slike peptider spesifikke for Alzheimers sykdom er immunogene, dvs frembringer en immunrespons, og derfor kan benyttes i et vaksineprodukt.
Leserammeforskyvningsmutasjoner forårsaker helt nye aminosyresekevenser i C-terminus i proteinene, som termineres for tidlig der hye stopp kodoner dannes. Dette har to viktige konsekvenser: 1) Det trunkerte proteinet frembrakt av leserammeforskyvningsmutasjonen er generelt ikke-funksjonelt, noe som vanligvis "slår ut" en viktig cellefunksjon. Aberrante proteiner kan også få nye funksjoner, som evnen til å akkumulere og danne plakker. I begge tilfeller vil leserammeforskyvningsmutasjonen forårsake sykdom. 2) Den aberrante nye C-terminale aminosyresekvensen frembrakt av leserammeforskyvningsmutasjonen er fremmed for kroppen. Den eksisterer ikke før mutasjonen og kan bare eksistere i celler som har mutasjonen.
Siden den muterte delen av proteinene er helt nye og derfor fremmede for immunsystemet til bæreren, kan de gjenkjennes av bærerens T-celler. Inntil nå har ingen fokusert på denne siden av leserammeforskyvningsmutasjoner. Det finnes ingen rapporter som beskriver leserammeforskyvningsmutasjoner av peptider fra proteiners kodende regioner som antigener. Dette konseptet er derfor nytt og legger grunnlaget for å utvikle vaksiner basert på disse sekvensene. Det følger at slike vaksiner også kan brukes profylaktisk hos personer som arver defekte gener eller på andre måter er disponerte for leserammeforskyvningsmutasjoner. Slike vaksiner vil derfor fylle et tomrom blant de terapeutiske midlene mot arvelige sykdommer.
Det er vist at en enkelt aminosyresubstitusjon i intercellulære "egen"-proteiner kan gi opphav til tumorbekjempende antigener, som består av peptider med en aminosyresekevens som skiller seg fra sekvensen i det normale peptidet. T-cellenene gjenkjenner disse peptidene i sammenheng med MHC-molekyler på overflaten av tumorceller, og er i stand til å drepe tumorceller og slik avstøte tumoren fra verten.
Til forskjell fra antistoffene produsert av B-celler, som typisk gjenkjenner et fritt antigen i sin opprinnelige form og videre gjenkjenner nesten alle eksponerte seter på antigenoverflaten, gjenkjenner T-cellene et antigen bare hvis antigenet er bundet og presentert av et MHC-molekyl. Vanligvis vil dette skje bare etter produksjon av egnete antigener, som omfatter en proteolytisk fragmentering av proteinet, slik at det resulterende peptidfragmentet passer inn i gropen på MHC-molekylet. Dermed settes T-cellene i stand til også å gjenkjenne peptidene som er derivert fra intracellulære proteiner. T-cellene kan slik gjenkjenne aberrante peptider som er derivert fra ethvert sted i cellene, i sammenheng med MHC-molekylene på cellenes overflate, og kan deretter aktiveres for å eliminere celler med aberrante proteiner. M. Barinaga, Science, 257, 880-881, 1992 gir en kort oversikt over hvordan MHC binder peptider. En mer utførlig forklaring av Teknisk Bakgrunn for denne Oppfinnelsen kan finnes i D. Male et al, Advanced Immunology, 1987, J.P.Lippincott Company, Philadelphia. Begge referanser inkluderes med dette i sin helhet.
MHC-molekylene i mennesker betegnes vanligvis som HLA (humant leukocytt antigen). Disse kodes av HLA-området i menneskets kromosom nr. 6.
Det finnes to forskjellige klasser HLA-molekyler avhengig av hvilket område i kromosomet som koder dem og hvilken T-celle subpopulasjon de interagerer med og fortrinnsvis aktiverer. Klasse i-molekyler kodes av HLA A-, B- og C-subloci og aktiverer fortrinnsvis CD8+ cytotoksiske T-celler. HLA klasse II-molekyler kodes av DR-, DP- og DQ-subloci og aktiverer fortrinnsvis CD4+ T-celler, både hjelpeceller og cytotoksiske celler.
Normalt har hvert individ seks HLA klasse I-molekyler, vanligvis to fra hver av de tre gruppene A, B og C. Tilsvarende har alle individer sitt eget utvalg av klasse II, igjen to fra hver av gruppene DP, DQ og DR. Hver av gruppene A, B, C og DP, DQ og DR deles igjen inn i flere undergrupper. I noen tilfeller er antallet forskjellige HLA klasse I- og II-molekyler redusert på grunn av overlapping mellom to HLA-undergrupper.
Alle genprodukter er svært polymorfe. Forskjellige individer har derfor ulike HLA-molekyler som skiller seg fra molekylene hos andre individer. Dette er grunnen til at det er vanskelig å finne organdonorer med passende HLA for transplantasjoner. Betydningen av HLA-molekylenes genetiske variasjon vises ved deres rolle som immunresponsgener. Fordi de har peptidbindende evne, vil nærværet eller fraværet av visse HLA-molekyler styre individets evne til å respondere på peptidepitoper. På grunn av dette vil HLA-molekyler bestemme motstandskraften eller sårbarheten overfor sykdom.
T-celler kan kontrollere utvikling og vekst av celler som produserer aberrante proteiner ved en rekke forskjellige mekanismer. Cytotoksiske T-celler, både HLA-klasse I-begrenset CD8+ og HLA-klasse II-begrenset■CD4+, kan direkte drepe celler som bærer de riktige antigenene. CD4+ hjelpe T-celler er nødvendig for cytotoksisk CD8+-cellerespons og for antistoffresponser, og for å indusere makrofag- og LAK-dreping av celler'.
Det er nødvendig for både HLA-klasse I- og II- binding at peptidene må inneholde et bindingsmotiv, som vanligvis er forskjellig for ulike typer HLA-grupper og -undergrupper. Et bindingsmotiv kjennetegnes ved krav om aminosyrer av en viss type, for eksempel slike som bærer store og hydrofobe eller positivt ladete sidegrupper i bestemte posisjoner av peptidet slik at det passer nøyaktig i HLA-bindingsgropen. Dette, sammen med peptidlengdebegrensningen til 8-10 aminosyrer i bindingsgropen, gjør det usannsynlig at et peptid som binder seg til HLA-klasse I-molekyler også binder seg til en annen type. For eksemel kan det gjerne være slik at et peptid bindingsmotiv for HLA-Al- og HLA-A2-undergruppene, som begge hører til klasse I, er like forskjellige som motivene for HLA-A1- og HLA-Bl-molekylene.
Av de samme grunnene er det ikke sannsynlig at den eksakt samme sekvensen av aminosyrer vil finnes i bindingsgropen til forskjellige klasse II-molekyler. Hva angår HLA-klasse II-molekyler, kan peptidenes bindingssekvens være lengre, og det er vist at de vanligvis inneholder fra 10 til 15 aminosyrer. Noen av disse aminosyrene, på en eller begge terminaler, er ikke en del av bindingsmotivet til HLA-gropen.
Likevel kan det finne sted en overlapping av ulike peptidbindende motiver av flere HLA-klasse I- og klasse II-molekyler. Peptider som har en overlapping i bindingssekvensene for minst to ulike HLA-molekyler sies å inneholde "nested T-celle epitoper". De forskjellige epitopene i en "nested eptiope peptid" kan dannes når peptidet prosesseres av antigenpresenterende celler. Deretter presenteres disse epitopene for T-celler bundet til forskjellige HLA-molekyler. Den individuelle variasjonen av HLA-molekyler i mennesker gjør at peptider med "nested epitoper" er bedre egnet som generelle vaksiner enn peptider som bare er i stand til å binde én type HLA-molekyl.
Et individ kan bare vaksineres effektivt hvis minst en type HLA-klasse I- og/eller klasse II-molekyl i pasienten kan binde et vaksinepeptid i enten dets fulle lengde eller slik det er prosessert og modifisert av pasientens egne antigenpresenterende celler.
Anvendeligheten til et peptid som generell vaksine for størsteparten av befolkningen øker med antallet ulike HLA-molekyler det kan binde seg til, enten i sin fulle lengde eller slik det er prosessert og modifisert av pasientens egne antigenpresenterende celler.
For å anvende peptider derivert fra et aberrant protein som stammer fra mutasjoner i celler som vaksiner eller som terapeutisk midler for å generere CD4+ og/eller CD8+ T-celler, er det nødvendig å utforske det muterte proteinet og identifisere peptider som er i stand til å stimulere T-celler, eventuelt etter prosessering av
antigenpresenterende celler til kortere peptider.
Definisjon av problemet løst ved oppfinnelsen.
Idag finnes det ikke noe medikament og ingen behandling som kan eliminere de celler som produserer aberrante ØAPP-og Ubi-B-proteinene som bidrar til oppbygging av proteinavsetningene som forårsaker de degenerative prosessene i hjernen hos pasienter med Alzheimers sykdom. Det er et vedvarende behov for behandling av - og profylakse mot Alzheimers sykdom. Den foreliggende oppfinnelsen vil bidra til å frembringe nye peptider som kan anvendes ved behandling av - og profylakse mot Alzheimers sykdom. Vår tilnærming sikter mot, ved aktivering av immunsystemet, en direkte eliminering av disse celler som forårsaker den degenerative prosessen.
Definisjon av oppfinnelsen
Et hovedformål med oppfinnelsen er å fremstille peptider som tilsvarer peptidfragmenter av aberrant PAPP- og Ubi-B-proteiner som finnes hos pasienter med Alzheimers sykdom, slik at disse peptidene kan stimulere T-celler.
Et annet hovedformål med oppfinnelsen er å utvikle en farmasøytisk sammensetning og en vaksine for å forbygge at Alzheimers sykdom oppstår, basert helt eller delvis på peptider ifølge den foreliggende oppfinnelse som kan brukes for å generere og aktivere T-celler som produserer cytotoksisk T-celleimmunitet mot celler som produserer muterte PAPP- og Ubi-B-proteiner.
Et tredje hovedmål med oppfinnelsen er å frembringe nukleinsyresekvenser som koder for peptidene ifølge oppfinnelen, plasmider og virusvektorer omfattende slike nukleinsyrer og anvendelse av disse for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Disse og andre formål med oppfinnelsen oppnås ved hjelp av de vedlagte krav.
Leserammeforskyvningsmutasjoner kan oppstå på gennivå, transkripsjonsnivå eller ved posttranskripsjonell forandring av RNA, og forårsaker premature stoppkodoner og derfor tap av noen ganger store deler av proteiner. Aberrante proteiner som stammer fra
leserammeforskyvningsmutasjoner har generelt ikke vært
ansett å være immunogene. Derfor har ikke immunterapi vært rettet mot slike proteiner. Det er nå overraskende blitt oppdaget at en gruppe nye peptider som svarer til aberrante proteiner fra leserammeforskyvningsmutasjoner i forbindelse med Alzheimers sykdom egner seg for å igangsette T-celle responser mot celler som produserer slikt aberrante proteiner.
Gener som inneholder en mono-nukleosidbase repetitiv sekvens, for eksempel av deoksyadenosinbaser, eller en di-nukleosidbase repetitiv sekvens, for eksempel av deoksycytosin-deoksytymidin enheter, er utsatt for leserammeforskyvningsmutasj oner. Leserammeforskyvningsmutasjonene opptrer henholdsvis enten ved insersjon av en eller to av mono-nukleosidbaseresidier eller av en eller to di-nukleosidbaseenheter i den repetitive sekvensen, eller ved delesjon av en eller to mono-nukleosid base residier eller av en eller to av di-nukleosidbaseenheter i den repetitive sekvensen. Et gen med en leserammeforskyvningsmutasjon vil fra mutasjonspunktet kode for et protein med en ny og helt ulik aminosyresekevens sammenlignet med det normale proteinet. Dette muterte proteinet med den nye aminosyresekevensen ved karboksyenden vil være spesifikt for alle celler der slike leserammeforskyvningsmutasjoner forekommer.
I resten av denne spesifikasjonen og disse kravene vil betegnelsen leserammeforskyvningsmuterte peptider omfatte slike proteiner og peptidfragmenter av disse.
Disse peptidene har en lengde på minst 8 aminosyrer og svarer til leserammeforskyvningsmuterte PAPP- og/eller Ubi-B-proteinsekvenser i forbindelse med Alzheimers sykdom. Foreliggende oppfinnelse angår således et peptid til behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom,kjennetegnet ved at peptidet
a) har en lengde på minst 8 aminosyrer og er et fragment av et mutert PAPP- og/eller Ubi-B-protein som stammer fra en
leserammeforskyvningsmutasjon forbundet med Alzheimsers sykdom;
og
b) består av minst en aminosyre fra den muterte delen av det muterte PAPP- og/eller Ubi-B-proteinet;
og
c) omfatter 0-10 aminosyrer som svarer til karboksyterminus på den normale delen av proteinsekvensen forut for aminoterminus på den muterte sekvensen av proteinet og kan utvikdes videre til karboksyterminus på den muterte delen av proteinet slik det er bestemt av det nye stoppkodonet dannet av den relevante leserammeforskyvningsmutasjonen;
og
d) induserer, enten i sin fulle lengde eller etter prosessering av antigenpresenterende celler, T-celle-responser.
Peptidene i denne oppfinnelsen inneholder fortrinnsvis 8-25, 9-20, 9-16, 8-12 eller 20-25 aminosyrer. De kan for eksempel inneholde 9, 12, 13, 16 eller 21 aminosyrer.
Det er helst å foretrekke at peptidene i den foreliggende oppfinnelsen har en lengde på minst 9 aminosyrer, for eksempel at de har en lengde på 9-18 aminosyrer. Men på grunn av antigenenes evne til å prosessere peptider, er også lengre peptider svært godt egnet for denne oppfinnelsen. Slik kan hele den muterte aminosyresekvensen brukes som en leserammeforskyvningsmutasjon av peptidet i henhold til denne oppfinnelsen, hvis det omfatter 8 eller flere aminosyrer.
Oppfinnelsen vedrører videre et peptid ifølge oppfinnelsen kjennetegnet ved at det er valgt ut fra en gruppe peptider som har følgende sekvens identifikasjonsnumre: SEQ ID No. 1 - SEQ ID No. 10 eller et fragment av hvilket som helst av disse.
Oppfinnelsen vedrører også en farmasøytisk sammensetning til behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom, som omfatter et peptid ifølge oppfinnelsen og en farmasøytisk akseptabel bærer eller et fortynningsmiddel.
Oppfinnelsen vedrører også en vaksine mot Alzheimers sykdom som omfatter et peptid ifølge oppfinnelsen og en farmasøytisk akseptabel bærer eller et fortynningsmiddel.
Oppfinnelsen angår også anvendelse av et peptid ifølge oppfinnelsen for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Videre angår oppfinnelsen en isolert nukleinsyresekvens kjennetegnet ved at den omfatter en nukleinsyresekvens eller varianter av den som koder et leserammeforskyvningsmutert peptid ifølge oppfinnelsen.
Videre angår oppfinnelsen en isolert nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen kjennetegnet ved at den koder for peptider omfattende SEQ ID No. 1-10 eller varianter av disse.
Videre angår oppfinnelsen anvendelse av en nukleinsyresekvens ifølge oppfinnelsen for å fremstille en farmasøytisk sammensetning for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Videre angår oppfinnelsen et plasmid eller en virusvektor kjennetegnet ved at den omfatter nukleinsyresekvense ifølge oppfinnelsen som koder et leserammeforskyvningsmutert PAPP-peptid og/eller et Ubi-B-peptid forbundet med Alzheimers sykdom.
Videre angår oppfinnelsen en vektor ifølge oppfinnelsen kjennetegnet ved at vektoren er et E.Coli-plasmid, en Listeria-vektor og rekombinante virusvektorer, der de rekombinante virusvektorer omfatter, men er ikke begrenset til, orthopoxvirus, canaryvirus, capripoxvirus, suipoxvirus, vaccinia, baculovirus humant adenovirus, SV40 eller bovint papillomavirus.
Videre angår oppfinnelsen anvendelse av et plasmid eller en virusvektor ifølge foreliggende oppfinnelse for å fremstille en farmasøytisk sammensetning for behandling av
- eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen.
I den foreliggende beskrivelsen og i kravene, er aminosyrene representert ved sin innarbeidete trebokstavs forkortelse.
Peptidene i den foreliggende oppfinnelsen er eksemplifisert med pAPP- og Ubi-B-leserammeforskyvningsmutasjoner forbundet med Alzheimers sykdom.
Hos pasienter med Alzheimers sykdom, er intracellulære og ekstracellulære avsetninger av proteiner i floker, nevrofibriller og nevrittiske plakk korrelert med nevral dysfunksjon som fører til demens (R.D.Terry et al. in Alzheimer Disease R.D.Terry, R. Katzman, K.L: Bick, Red., Raven, New York, 1994, ss. 179-196). Det er vist at disse proteinsavsetningene inneholder former av p-amyloid forløper-protein (PAPP) og ubiquitin-B (Ubi-B) med aberrasjon i karboksyterminus, og det er videre vist at disse aberrante proteinsekvensene er forårsaket av leserammeforskyvningsmutasjoner som sannsynligvis oppstår på transkripsjonsnivå eller ved posttranskripsjonell endring av RNA (F.W. van LEEUWEN et al, Science, vol 279, ss. 242-247)
Hva angår pAPP, er det observert to
leserammeforskyvningsmutasjoner, en ved delesjon av di-nukleosidenheten deoksyguanosin-deoksyadenosin (GA) fra (ACC) GAGAGAGA (ATG) sekvensen i ekson 9, og en ved delesjon av GA-enheten fra (CAT) GAGAGA (ATG)-sekvensen i ekson 10. De muterte pAPP-peptidene som kommer fra disse leserammeforskyvningsmutasjonene vises i tabell 1. Enbokstavsforkortelsene i tabellen tilsvarer
trebokstavforkortelsene i de respektive sekvens1istene. Peptidene med seq id no 1 og 4 er den muterte delen av pAPP-proteinsekvensen og peptidene med seq id no 2, 3 og 5 representerer muterte peptider som er utvidet til den normale <p>APP-sekvensen ved aminoterminus.
Også når det gjelder Ubi-B er det observert to leserammeforskyvningsmutasjoner, en ved delesjon av di-nukleosidenheten deoksyguanosin-deoksytymidin (GT) fra (TCT) GAGAGGT (GGT) sekvensen i ekson, og en ved delesjon av di-nukleosidsekvensen deoksycytosin-deoksytymidin (CT) i ekson 3. De muterte Ubi-B-proteinene som stammer fra disse leserammeforskyvningsmutasjoner vises i tabell 2. Også her tilsvarer enbokstavsforkortelsene i tabellen trebokstavsforkortelsene i de respektive sekvenslistene. Peptidene med SEQ ID No. 6 og 9 er muterte deler av Ubi-B-proteinsekvensen og peptidene med SEQ ID No. 7, 8 og 10 representerer muterte peptider utvidet til en normal Ubi-B-sekvens ved aminoterminus.
De muterte pAPP- og Ubi-B-proteinene kodes bare av celler der de korresponderende leserammeforskyvningsmutasjonene har forekommet og derfor kan behandles med spesifikk immunoterapi mot Alzheimers sykdom.
I henhold til den foreliggende oppfinnelsen, kan peptider som svarer til muterte pAPP- og Ubi-B-proteiner anvendes for å igangsette T-celleimmunitet og spesifikke drap på celler som produserer muterte pAPP- og Ubi-B-proteiner, som ved Alzheimers sykdom er korrelert med nevronal dysfunksjon og medfører demens.
Andre peptider ifølge oppfinnelsen kan være fragmenter av peptidene som er listet i tabellene 1 og 2 over. Slike fragmenter har fortrinnsvis en lengde på 9-16 aminosyrer og omfatter minst en aminosyre fra den muterte delen av proteinet.
Slik betegnelsen fragment er brukt i denne beskrivelsen og disse kravene, refererer den til en kortere del av et lengre peptid eller protein.
i
Syntese
Peptidene syntetiseres ved å bruke kontinuerlig fastfase peptidsyntese. N-a-Fmoc aminosyrer med den egnete aminosyrekjedebeskyttelsen anvendes. Fmoc-aminosyrer aktiveres for kobling som pentafluorfenylestere ved å anvende enten TBTU eller di-isopropylkarbodi-imid aktivering før kobling. 20% piperidin i DMF anvendes for selektiv fjerning av Fmoc etter hver kobling. Spalting fra resinet og endelig fjerning av sidekjedebeskyttelsen utføres med 95% TFA som inneholder passende "scavengers". Peptidet renses og analyseres av reversert fase (C18) HPLC. Peptidenes identitet bekreftes ved anvendelse av elektrospray massespektroskopi (Finnigan mat SSQ710).
En rekke andre kjente metoder kan brukes av en person som er trenet i peptidsyntese.
Peptidene ifølge oppfinnelsen kan anvendes til fremstilling av en farmasøytisk sammensetning for behandling av pasienter med Alzheimers sykdom som produserer muterte pAPP- og Ubi-B-proteiner. En slik behandling omfatter administrering av en farmasøytisk sammensetning omfattende minst ett peptid i henhold til den foreliggende oppfinnelsen in vivo eller ex vivo til en pasient som trenger slik behandling.
En annen versjon av peptidene ifølge oppfinnelsen er fremstilling av en vaksine for å vaksinere et menneske som er disponert for Alzheimers sykdom ved administrering av en vaksine omfattende minst ett peptid i henhold til den foreliggende oppfinnelsen til dette mennesket.
Det antas videre å være en fordel å administrere til menneske en blanding av peptidene ifølge denne oppfinnelsen, slik at hver av peptidene i oppfinnelsen kan binde ulike typer HLA klasse I- og/eller klasse II-molekyler hos individet.
Det antas at peptidene kan gis sammen, enten samtidig eller hver for seg, med sammensetninger som cytokiner og/eller vekstfaktorer, f.eks. interleukin-2 (IL-2), interleukin-12 (IL-12), granulocytt makrofag koloni stimulerende faktor (GM-CSF), eller lignende for å styrke immunresponsen i henhold til kjente fremgangsmåter.
Peptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan brukes i en vaksine eller i en terapeutisk sammensetning enten alene eller sammen med andre stoffer, som for eksempel standard adjuvanter eller i form av et lipopeptid konjugat som, i henhold til kjente fremgangsmåter, kan indusere høyaffinitet cytotoksiske T-lymfocytter (K.Deres, Nature, vol.342, nov. 1988).
Peptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan egne seg for å inkluderes i enten et peptid eller i en rekombinant fragmentbasert vaksine.
Peptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan inkluderes i farmasøytiske sammensetninger eller i vaksiner sammen med standard adjuvanter, fortynningsmidler, stabilisatorer eller lignende i henhold til kjente fremgangsmåter.
I henhold til denne oppfinnelsen kan en farmasøytisk sammensetning eller vaksine omfatte peptider alene eller sammen med minst en farmasøytisk akseptabel bærer eller et fortynningsmiddel.
Videre kan en terapeutisk sammensetning omfatte et utvalg peptider som er fragmenter av de muterte PAPP- og Ubi-B-proteinene forbundet med Alzheimers sykdom.
Vaksinen i henhold til denne oppfinnelsen kan videre administreres til den alminnelige befolkningen, for eksempel som en blanding av peptider som fører til T-celleimmunitet mot celler der Alzheimers sykdom forbundet med pAPP- og Ubi-B-leserammeforskyvningsmutasjoner kan forekomme.
Peptidene i henhold til denne oppfinnelsen kan administreres som peptider enkeltvis eller som en blanding av peptider. Alternativt kan peptidene være kovalent bundet til hverandre for å danne større polypeptider eller til og med sykliske peptider.
En terapi mot Alzheimers sykdom i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan administreres både in vivo eller ex vivo der hovedformålet er å igangsette spesifikk T-celle-immunitet mot muterte pAPP- og Ubi-B-genprodukter forbundet med Alzheimers sykdom.
Videre kan de leserammeforskyvningsmuterte peptidene ifølge oppfinnelsen administreres til pasienter på forskjellige måter som omfatter, men ikke er begrenset til, subkutan, intramuskulær, intradermal, intraperitonal, intravenøs og lignende måter. I en versjon administreres peptidene ifølge oppfinnelsen intradermalt. Peptidene kan administreres til en pasient på ett enkelt - eller på flere injeksjonssteder i en terapeutisk eller profylaktisk effektiv mengde. Peptidene ifølge oppfinnelsen kan administreres kun én gang eller alternativt flere ganger, for eksempel en gang i uken eller i løpet av 1 til 2 måneder med et tilsvarende regime senere, alt i henhold pasientens behov.
Peptidene ifølge oppfinnelsen kan administreres i en mengde fra 1 mikrogram (lug) til 1 gram (lg) til en human pasient eller et individ som skal vaksineres. Fortrinnsvis anvendes en lavere dose, i størrelsesorden fra 1 mikrogram (lug) til 1 milligram (lmg) per dose.
Oppfinnelsen omfatter videre DNA-sekvenser som koder for et leserammeforskyvningsmutert peptid.
Peptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan administreres til et individ i form av en DNA-vaksine. DNAet som koder disse peptidene kan være i form av klonet plasmid-DNA eller syntetisk oligonukleotid. DNAet kan administreres sammen med cytokiner, som IL-2 og/eller andre ko-stimulerende molekyler. Cytokinene og/eller de co-stimulerende molekylene kan selv administreres i form av plasmid eller oligonukleotid-DNA. Det er vist at responsen på en DNA-vaksine økes ved nærværet av immunstimulerende DNA sekvenser (ISS). Disse kan opptre som heksameriske motiver som inneholder metylert CpG, i henhold til formelen:
5'-purin-purin-CG-pyrimidin-pyrimidin-3'.
Våre DNA-vaksiner kan derfor omfatte disse eller andre ISS i peptidene som koder DNA, i cytokinet som koder DNA eller i begge disse. En oversikt over fordelene ved DNA-vaksinering gis av Tighe et al. (1998, Immunology Today, 19(2), ss 89-97).
I en versjon omfatter DNA sekvensen som koder de muterte PAPP- og Ubi-B-proteinene:
Normal p-gensekvens (ekson 9 og 10)
Mutert pAPP- gensekvens, GA fjernet fra repetitiv sekvens 1.
Mutert PAPP- gensekvens, GA fjernet fra repetitiv sekvens 2.
Normal Ubi- B ( ekson)- sekvens
Delesjonsmotiv Mutert Ubi- B- gensekvens, GT fjernet fra delesjonsmotivet
Normal Ubi- B gen ( ekson)- sekvens.
Mutert Ubi- B- gensekvens, C- TERMINAL fjernet fra CT-repetitiv sekvens.
Oppfinnelsen omfatter videre vektorer og plasmider som inneholder en nukleinsyresekvens som koder for minst ett leserammeforskyvningsmutert pAPP- og/eller Ubi-B-peptid. Vektorene inkluderer, men er ikke begrenset til E. Coli plasmid, en Listeria vektor og rekombinante virale vektorer. Rekombinante virale vektorer inkluderer, men er ikke begrenset orthopox virus, canary virus, capripox virus, suipox virus, vaccinia, baculovirus, human adenovirus, SV40, bovine papilloma virus og liknende som inneholder nukleinsyre-sekvensen som koder for et mutert PAPP- og/eller Ubi-B-peptid.
Det anses at behandling eller profylakse av Alzheimers sykdom, kan oppnås også ved administrering til en pasient, av en effektiv mengde av en rekombinant virusvektor eller plasmid som inneholder minst ett innføyelsessete som inneholder en nukleinsyresekvens som koder for et leserammeforskyvningsmutert peptid, der pasientens antigenpresenterende celler anvendes som vekstceller for vektoren/plasmidet og presentasjon av HLA/leserammeforskyvningsmutert peptidkompleks oppnås, foreliggende krav.
Peptidene i henhold til den foreliggende oppfinnelsen kan fremstilles med konvensjonel-le og kjente prosesser, som kjemisk peptidsyntese, rekombinant DNA-teknologi eller proteasespalting av et protein eller et peptid som er kodet med et leserammeforskyvningsmutert pAPP-gen og et Ubi-B-gen. En metode for kjemisk syntese er forklart i beskrivelsen ovenfor.
Følgende fordeler er oppnådd gjennom den foreliggende oppfinnelsen: Den åpner muligheten for å kunne behandle pasienter som lider av Alzheimers sykdom forbundet med muterte PAPP- og Ubi-B-genprodukter, som etter det man vet i dag ikke har andre gode behandlingsalternativer.
Videre gir den en mulighet til å vaksinere mennesker profylaktisk mot begynnende Alzheimers sykdom.
Claims (19)
1.
Peptid til behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom, karakterisert ved at peptidet a) har en lengde på minst 8 aminosyrer og er et fragment av et mutert APP og/eller Ubi-B protein som stammer fra en leserammeforskyvningsmutasjon forbundet med Alzheimers sykdom;
og b) består av minst en aminosyre fra den muterte delen av det muterte APP og/eller Ubi-B proteinet;
og c) omfatter 0-10 aminosyrer som svarer til karboksyterminus på den normale delen av proteinsekvensen forut for amino terminus på den muterte sekvensen av proteinet og kan utvides videre til karboksyterminus på den muterte delen av proteinet slik det er bestemt av det nye stoppkodonet dannet av den relevante leserammeforskyvningsmutasjonen;
og d) induserer, enten i sin fulle lengde eller etter prosessering av antigenpresenterende celler, T-celle responser.
2 .
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det innholder 8-25 aminosyrer.
3 .
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det inneholder 9-20 aminosyrer.
4.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det inneholder 9-16 aminosyrer.
5.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det inneholder 8-12 aminosyrer.
6.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det inneholder 20-25 aminosyrer.
7.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det inneholder 9 aminosyrer.
8.
Peptid i henhold til krav l, karakterisert ved at det inneholder 12 aminosyrer.
9.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at inneholder 13 aminosyrer.
10.
Peptid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det er valgt ut fra en gruppe peptider som har følgende sekvens identifikasjonsnumre: SEQ ID No. 1 - SEQ ID No. 10 eller et fragment av hvilket som helst av disse.
Farmasøytisk sammensetning til behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom som omfatter et peptid i henhold til ethvert av de ovenstående krav og en . farmasøytisk akseptabel bærer eller et fortynningsmiddel.
12 .
Vaksine mot Alzheimers sykdom som omfatter et peptid i henhold til hvilket som helst av kravene 1-10 og en farmasøytisk akseptabel bærer eller et fortynningsmiddel.
13 .
Anvendelse av et peptid i henhold til ethvert av kravene 1-10 for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
14.
Isolert nukleinsyre-sekvens, karakterisert ved at den omfatter en nukleinsyre-sekvens eller varianter av den som koder et leserammeforskyvningsmutert peptid i henhold til krav 1.
15.
Isolert nukleinsyre-sekvens i henhold til krav 14, karakterisert ved at den koder for peptider omfattende SEQ ID No. 1-10 eller varianter av disse.
16 .
Anvendelse av en nukleinsyre-sekvens i henhold til hvilket som helst av kravene 14-15 for å fremstille en farmasøytisk sammensetning for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
17.
Plasmid eller en virusvektor, karakterisert ved at omfatter nukleinsyre-sekvensen ifølge krav 14 som koder et leserammeforskyvningsmutert APP- peptid og/eller et Ubi-B-peptid forbundet med Alzheimers sykdom.
18.
Vektor i henhold til krav 17, karakterisert ved at vektoren er et B. Coli-plasmid, en Listeria-vektor og rekombinante virusvektorer, der de rekombinante virusvektorer omfatter, men
ikke er begrenset til, orthopoxvirus, canaryvirus, capripoxvirus, suipoxvirus, vaccinia, baculovirus humant adenovirus, SV40 eller bovint papillomavirus.
19.
Anvendelse av et plasmid eller en virusvektor i henhold til krav 17 for å fremstille en farmasøytisk sammensetning for behandling av - eller profylakse mot Alzheimers sykdom.
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO19982098A NO314086B1 (no) | 1998-05-08 | 1998-05-08 | Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til |
| AU54515/99A AU755736B2 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Frameshift mutants of beta-amyloid precursor protein and ubiquitin-B and their use |
| CN99805976A CN1300294A (zh) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | β－淀粉样前体蛋白和泛素－B的移码突变体和它们的用途 |
| PL99344186A PL344186A1 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Frameshift mutants of beta-amyloid precursor protein and ubiquitin-b and their use |
| EP99940721A EP1075490A1 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Frameshift mutants of beta-amyloid precursor protein and ubiquitin-b and their use |
| HU0101734A HUP0101734A2 (hu) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Béta-amiloid prekurzor protein és ubiquitin-B kereteltolódásos mutánsok és alkalmazásuk |
| PCT/NO1999/000141 WO1999058564A1 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Frameshift mutants of beta-amyloid precursor protein and ubiquitin-b and their use |
| CA002327523A CA2327523A1 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Frameshift mutants of beta-amyloid precursor protein and ubiquitin-b and their use |
| US09/674,913 US6861057B2 (en) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | Immunogenic β-amyloid peptide |
| JP2000548366A JP2002514658A (ja) | 1998-05-08 | 1999-04-30 | β−アミロイド前駆体タンパク質およびユビキチンＢのフレームシフト変異体ならびにその使用 |
| ARP990102200A AR018603A1 (es) | 1998-05-08 | 1999-05-10 | Un peptido, util para el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad de alzheimer y el sindrome de down, las composiciones farmaceuticas y vacunas que locontienen, el uso de dicho peptido para la preparacion de las composiciones farmaceuticas, una secuencia de aislado de adn, un plasmido o vector vi |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO19982098A NO314086B1 (no) | 1998-05-08 | 1998-05-08 | Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO982098D0 NO982098D0 (no) | 1998-05-08 |
| NO982098L NO982098L (no) | 1999-11-09 |
| NO314086B1 true NO314086B1 (no) | 2003-01-27 |
Family
ID=19902022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19982098A NO314086B1 (no) | 1998-05-08 | 1998-05-08 | Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6861057B2 (no) |
| EP (1) | EP1075490A1 (no) |
| JP (1) | JP2002514658A (no) |
| CN (1) | CN1300294A (no) |
| AR (1) | AR018603A1 (no) |
| AU (1) | AU755736B2 (no) |
| CA (1) | CA2327523A1 (no) |
| HU (1) | HUP0101734A2 (no) |
| NO (1) | NO314086B1 (no) |
| PL (1) | PL344186A1 (no) |
| WO (1) | WO1999058564A1 (no) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997021728A1 (en) | 1995-12-12 | 1997-06-19 | Karolinska Innovations Ab | PEPTIDE BINDING THE KLVFF-SEQUENCE OF AMYLOID $g(b) |
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US6905686B1 (en) | 1997-12-02 | 2005-06-14 | Neuralab Limited | Active immunization for treatment of alzheimer's disease |
| TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
| US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
| NO315238B1 (no) | 1998-05-08 | 2003-08-04 | Gemvax As | Peptider som stammer fra leserammeforskyvingsmutasjoner i TBF<beta>II- eller BAX-genet, og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse,nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slikenukleinsy |
| US20030147882A1 (en) | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
| US7060670B1 (en) | 1999-05-05 | 2006-06-13 | Neurochem (International) Limited | Stereoselective antifibrillogenic peptides and peptidomimetics thereof |
| US6787637B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
| UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| KR20080059676A (ko) * | 1999-11-29 | 2008-06-30 | 뉴로겜 인터내셔널 리미티드 | 알츠하이머 및 아밀로이드 관련 질병의 예방 및 치료용백신 |
| CN100569797C (zh) * | 2000-04-11 | 2009-12-16 | 首都医科大学宣武医院 | 一种十一肽及其用途 |
| US7034000B2 (en) | 2000-10-27 | 2006-04-25 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Peptides derived from the human amyloid precursor protein |
| US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
| US7622446B2 (en) | 2001-04-18 | 2009-11-24 | The Open University | Polypeptides, derivatives and uses thereof |
| EP1381627B8 (en) * | 2001-04-18 | 2011-01-12 | The Open University | Polypeptides derived from amyloid precursor peptide (app) and their uses |
| US7491702B2 (en) | 2001-04-18 | 2009-02-17 | The Open University | Polypeptides related to amyloid precursor protein, pharmaceutical compositions thereof, and methods of treatment using the same |
| MY144532A (en) | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
| MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7439042B2 (en) * | 2002-12-16 | 2008-10-21 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based therapeutic for chronic hepatitis C infection |
| US8343502B2 (en) * | 2002-12-16 | 2013-01-01 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based vaccines as immunotherapy |
| WO2004058157A2 (en) * | 2002-12-16 | 2004-07-15 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based vaccines as immunotherapy |
| DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| PE20050627A1 (es) | 2003-05-30 | 2005-08-10 | Wyeth Corp | Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido beta amiloideo |
| AU2005293752A1 (en) * | 2004-10-13 | 2006-04-20 | Ablynx N.V. | Single domain camelide anti-amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenarative neural diseases such as Alzheimer's disease |
| AU2005295317B2 (en) | 2004-10-18 | 2011-10-13 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based therapeutic for chronic hepatitis C infection |
| WO2006066089A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-06-22 | Neuralab Limited | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
| BRPI0619249A2 (pt) | 2005-11-30 | 2011-09-20 | Abbott Lab | anticorpos anti-globulÈmeros-aß, frações que se ligam a antìgeno destes, hibridomas correspondentes, ácidos nucléicos, vetores, células hospedeiras, métodos de produzir os ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos de usar os ditos anticorpos |
| CN101506236B (zh) | 2005-11-30 | 2012-12-12 | 雅培制药有限公司 | 抗淀粉样β蛋白的单克隆抗体及其用途 |
| US9732131B2 (en) | 2006-02-27 | 2017-08-15 | Calviri, Inc. | Identification and use of novopeptides for the treatment of cancer |
| US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
| US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
| EP2486928A1 (en) | 2007-02-27 | 2012-08-15 | Abbott GmbH & Co. KG | Method for the treatment of amyloidoses |
| US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
| PL2182983T3 (pl) | 2007-07-27 | 2014-10-31 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Leczenie chorób amyloidowych z wykorzystaniem humanizowanych przeciwciał specyficznych względem Abeta |
| JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
| AT509611B1 (de) * | 2008-06-12 | 2012-04-15 | Affiris Forschungs-Und Entwicklungs Gmbh | Vakzin |
| WO2010033841A1 (en) | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Globeimmune, Inc. | Immunotherapy for chronic hepatitis c virus infection |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| GB0821616D0 (en) | 2008-11-26 | 2008-12-31 | Lytix Biopharma As | Compounds |
| MX360403B (es) | 2010-04-15 | 2018-10-31 | Abbvie Inc | Proteinas de union a amiloide beta. |
| JP6147665B2 (ja) | 2010-08-14 | 2017-06-14 | アッヴィ・インコーポレイテッド | アミロイドベータ結合タンパク質 |
| US10195257B2 (en) | 2013-07-28 | 2019-02-05 | Qantu Therapeutics, Inc. | Vaccine formulations comprising quillaja desacylsaponins and beta amyloid peptides or tau protein to induce a Th2 immune response |
| WO2018213766A1 (en) * | 2017-05-19 | 2018-11-22 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Compositions and methods for improving cognition |
| WO2018223094A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | A method to create personalized canine cancer vaccines |
| US20200209241A1 (en) | 2017-09-15 | 2020-07-02 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Methods of classifying response to immunotherapy for cancer |
| EP4038222A4 (en) | 2019-10-02 | 2023-10-18 | Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University | METHODS AND COMPOSITIONS FOR IDENTIFYING NEOANTIGENS FOR USE IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF CANCER |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5753624A (en) * | 1990-04-27 | 1998-05-19 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Materials and methods for treatment of plaquing disease |
| US5780587A (en) * | 1990-08-24 | 1998-07-14 | President And Fellows Of Harvard College | Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity |
| GB9103974D0 (en) | 1991-02-26 | 1991-04-10 | Norsk Hydro As | Therapeutically useful peptides or peptide fragments |
| GB9410922D0 (en) * | 1994-06-01 | 1994-07-20 | Townsend Alain R M | Vaccines |
| AU7142796A (en) * | 1995-10-02 | 1997-04-28 | Erasmus University Rotterdam | Diagnosis method and reagents |
| AU7071598A (en) * | 1997-04-10 | 1998-10-30 | Erasmus University Rotterdam | Diagnosis method and reagents |
| NO315238B1 (no) | 1998-05-08 | 2003-08-04 | Gemvax As | Peptider som stammer fra leserammeforskyvingsmutasjoner i TBF<beta>II- eller BAX-genet, og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse,nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slikenukleinsy |
| WO2001040804A2 (en) * | 1999-12-03 | 2001-06-07 | Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen | Clearance of aberrant protein in correlation with disease |
| WO2001042306A2 (en) * | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Mindset Biopharmaceuticals (Usa), Inc. | Chimeric peptides (short b-cell epitope joined to a t-cell epitope) and their use for immunization |
-
1998
- 1998-05-08 NO NO19982098A patent/NO314086B1/no unknown
-
1999
- 1999-04-30 WO PCT/NO1999/000141 patent/WO1999058564A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-04-30 EP EP99940721A patent/EP1075490A1/en not_active Withdrawn
- 1999-04-30 US US09/674,913 patent/US6861057B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-30 JP JP2000548366A patent/JP2002514658A/ja not_active Withdrawn
- 1999-04-30 HU HU0101734A patent/HUP0101734A2/hu unknown
- 1999-04-30 PL PL99344186A patent/PL344186A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1999-04-30 AU AU54515/99A patent/AU755736B2/en not_active Ceased
- 1999-04-30 CA CA002327523A patent/CA2327523A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-30 CN CN99805976A patent/CN1300294A/zh active Pending
- 1999-05-10 AR ARP990102200A patent/AR018603A1/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030171266A1 (en) | 2003-09-11 |
| HUP0101734A2 (hu) | 2001-09-28 |
| AU5451599A (en) | 1999-11-29 |
| CA2327523A1 (en) | 1999-11-18 |
| WO1999058564B1 (en) | 2000-01-27 |
| AU755736B2 (en) | 2002-12-19 |
| AR018603A1 (es) | 2001-11-28 |
| EP1075490A1 (en) | 2001-02-14 |
| US6861057B2 (en) | 2005-03-01 |
| CN1300294A (zh) | 2001-06-20 |
| PL344186A1 (en) | 2001-10-08 |
| JP2002514658A (ja) | 2002-05-21 |
| NO982098L (no) | 1999-11-09 |
| WO1999058564A1 (en) | 1999-11-18 |
| NO982098D0 (no) | 1998-05-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO314086B1 (no) | Peptider og farmasöytiske sammensetninger inneholdende disse, nukleinsyresekvenser som koder for slike peptider, plasmider og virusvektoreromfattende slike DNA-sekvenser samt anvendelse av disse for fremstilling avfarmasöytiske preparater til | |
| JP7285279B2 (ja) | 新生物ワクチン用製剤 | |
| US20200157146A1 (en) | Controlled modulation of amino acid side chain length of peptide antigens | |
| US7863244B2 (en) | Peptides | |
| TWI750122B (zh) | 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法 | |
| KR100767554B1 (ko) | 암 억제 유전자 더블유티1의 생산물에 기초한 암항원 | |
| JP2008538901A (ja) | 癌胎児性抗原未熟型ラミニンレセプタータンパク質から誘導されるｈｌａ−２提示ｔ細胞エピトープの同定およびそれらの使用 | |
| WO2000066153A1 (en) | RAS ONCOGEN p21 PEPTIDE VACCINES | |
| US20210154280A1 (en) | Neo-epitope vaccines and methods of treating cancer | |
| WO2020176726A1 (en) | Improved compositions and methods for personalized neoplasia vaccines | |
| US20220362365A1 (en) | Improved compositions and methods for shared neo-epitope vaccines | |
| CN111825760B (zh) | 多肽及其在抗肾小球基底膜病中的用途 | |
| CA3138867A1 (en) | Neoantigens in cancer | |
| WO2002048175A2 (en) | Mhc class i associated peptides for prevention and treatment of tuberculosis | |
| WO2001083689A2 (en) | PEPTIDES FROM FRAMESHIFT MUTATED DNA POLYMERASE δ GENE |