NO177306B - Analogous Process for the Preparation of Therapeutically Active Purine Derivatives - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av nye kjemiske forbindelser og farmasøytisk akseptable salter derav for terapeutisk anvendelse ved behandling og forebyggelse av AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrome) og infeksjoner forårsaket av vira som fordrer revers transkriptase for replikasjon, så som HIV- (human immunodeficiency viruses) og hepatitt-B virus-typer, samt til behandling av andre virussykdommer, f.eks. forårsaket av herpes-virus, sykdommer som innbefatter både vanlige infeksjoner og neoplastiske sykdommer, dvs. cancer. The present invention relates to a method for the production of new chemical compounds and pharmaceutically acceptable salts thereof for therapeutic use in the treatment and prevention of AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrome) and infections caused by viruses that require reverse transcriptase for replication, such as HIV (human immunodeficiency viruses) and hepatitis B virus types, as well as for the treatment of other viral diseases, e.g. caused by the herpes virus, diseases that include both common infections and neoplastic diseases, i.e. cancer.

Bakgrunn for oppfinnelsen Background for the invention

Virkningene av virus på kroppsfunksjoner er sluttresultatet av forandringer som inntrer på de cellulære og subcellulære nivåer. De patogene forandringene på cellenivået er forskjellige for ulike kombinasjoner av virus og vertsceller. Mens enkelte virus forårsaker en generell destruksjon (killing) av enkelte celler, kan andre omdanne celler til en neoplastisk tilstand. The effects of viruses on bodily functions are the end result of changes occurring at the cellular and subcellular levels. The pathogenic changes at the cellular level are different for different combinations of virus and host cells. While some viruses cause a general destruction (killing) of some cells, others can transform cells into a neoplastic state.

Viktige vanlige virale infeksjoner er herpes dermatitis (innbefattet herpes labialis), herpes keratitis, herpes genitalis, herpes zoster, herpes encephalitis, infeksiøs mononukleose og cytomegalovirus-infeksjoner som alle er forårsaket av virus tilhørende herpesvirusgruppen. Andre viktige virale sykdommer er influensa A og B som forårsakes av henholdsvis influensa A- og B-virus. En annen viktig virussykdom er viral hepatitt, og spesielt er hepatitt-B virusinfeksjoner meget utbredt. Det er behov for effektive og selektive antivirale midler for behandling av disse sykdommene såvel som andre sykdommer forårsaket av virus. Flere forskjellige virus av både DNA- og RNA-type har vist seg å kunne gi tumordannelse i dyr. Virkningen av cancerogene kjemikalier kan hos dyr resultere i aktivering av latente tumorvirus. Det er mulig at tumorvirus er involvert i humane tumorer. For tiden er de mest sannsynlige humantilfellene leukemier, sarkomer, brystkarsinomer, "Burkitt lymphomas", nasofaryngeale karsinomer og cervikale cancere hvor RNA-tumorvirus og herpesvirus inngår. Dette gjør forskning på selektive hemmere av tumorogene virus og deres funksjoner til et viktig felt i behandlingsbestrebelsene for cancer. Important common viral infections are herpes dermatitis (including herpes labialis), herpes keratitis, herpes genitalis, herpes zoster, herpes encephalitis, infectious mononucleosis and cytomegalovirus infections, all of which are caused by viruses belonging to the herpes virus group. Other important viral diseases are influenza A and B, which are caused by influenza A and B viruses respectively. Another important viral disease is viral hepatitis, and hepatitis B virus infections in particular are very widespread. There is a need for effective and selective antiviral agents for the treatment of these diseases as well as other diseases caused by viruses. Several different viruses of both DNA and RNA type have been shown to cause tumor formation in animals. In animals, the effect of carcinogenic chemicals can result in the activation of latent tumor viruses. It is possible that tumor viruses are involved in human tumors. Currently, the most likely human cases are leukaemias, sarcomas, breast carcinomas, "Burkitt lymphomas", nasopharyngeal carcinomas and cervical cancers where RNA tumor viruses and herpes viruses are included. This makes research into selective inhibitors of tumorigenic viruses and their functions an important field in the treatment efforts for cancer.

På siste del av 70-tallet ble det rapportert om en ny sykdom som senere har vært omtalt som AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrome). Det er nå generelt akseptert at et retrovirus betegnet HIV (Human Immunodeficiency Virus), tidligere kjent som human T-celle lymfotropisk virus (HTLV-III) eller LAV (Lymphadenopathy Associated Virus) spiller en vesentlig rolle i AIDS-etiologien. Det er funnet forskjellige typer av HIV, så som HIV-1 og HIV-2, og flere kan sannsynligvis forventes å bli isolert. In the latter part of the 70s, a new disease was reported which was later referred to as AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrome). It is now generally accepted that a retrovirus called HIV (Human Immunodeficiency Virus), formerly known as human T-cell lymphotropic virus (HTLV-III) or LAV (Lymphadenopathy Associated Virus) plays a significant role in AIDS etiology. Different types of HIV have been found, such as HIV-1 and HIV-2, and more can probably be expected to be isolated.

AIDS karakteriseres ved en dyptgripende immunsvikt som følge av et lite antall av en undergruppe av lymfocytt-T-hjelperceller, som er et angrepsmål ved HIV-infeksjon. Den dyptgripende immunsvikt hos AIDS-pasienter gjør disse pasientene meget sårbare for en rekke opportunistiske infeksjoner av bakteriell, fungal, protozoal eller viral etiologi. De etiologiske midler blant virale opportunistiske infeksjoner finnes ofte i herpesgruppen, dvs. herpes simplex-virus (HSV), Varicella Zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV) og spesielt cytomegalovirus (CMV). Andre retrovirus som angriper dyr er katteleukemivirus og hesteinfeksiøst anemivirus (equine infectious anaemia virus). Humane sykdommer så som multippel sklerose, psoriasis og Kawasaki-lidelsen er også angitt å være knyttet til retrovirusinfeksjoner. AIDS is characterized by a profound immunodeficiency resulting from a small number of a subset of lymphocyte T-helper cells, which are a target of attack in HIV infection. The profound immunodeficiency in AIDS patients makes these patients very vulnerable to a number of opportunistic infections of bacterial, fungal, protozoal or viral etiology. The etiological agents among viral opportunistic infections are often found in the herpes group, i.e. herpes simplex virus (HSV), Varicella Zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV) and especially cytomegalovirus (CMV). Other retroviruses that attack animals are feline leukemia virus and equine infectious anemia virus. Human diseases such as multiple sclerosis, psoriasis and Kawasaki disease have also been reported to be linked to retrovirus infections.

Hepatitt B virusinfeksjoner forårsaker alvorlige sykdommer så som akutt hepatitt, kronisk hepatitt, fulminant hepatitt hos et betydelig antall personer. Det har vært anslått at det finnes 200 millioner pasienter med kronisk hepatitt-B-infeksjon i verden. Et betydelig antall av de kroniske tilfellene utvikler seg til levercirrhose og levertumorer. I enkelte tilfeller antar hepatittinfeksjonene også et hurtig og alvorlig forløp, som i fulminant hepatitt-B med ca. 90% mortalitet. For øyeblikket er det ingen kjente effektive behandlinger mot hepatitt-B-infeksjoner. Replikasjonen av hepatitt-B-virus ligner på den for retrovirus og inneholder den samme essensielle virale revers-transkriptase-aktivitet Hepatitis B virus infections cause serious diseases such as acute hepatitis, chronic hepatitis, fulminant hepatitis in a significant number of people. It has been estimated that there are 200 million patients with chronic hepatitis B infection in the world. A significant number of the chronic cases progress to liver cirrhosis and liver tumors. In some cases, the hepatitis infections also assume a rapid and serious course, as in fulminant hepatitis B with approx. 90% mortality. Currently, there are no known effective treatments for hepatitis B infections. Hepatitis B virus replication is similar to that of retroviruses and contains the same essential viral reverse transcriptase activity

Generell beskrivelse av oppfinnelsen General description of the invention

Et stort antall nukleosidanaloger oppviser flere anti-metabolske virkninger. Dette gjør de ved å erstatte, eller ved å konkurrere med, de naturlig forekommende nukleosider. Nylig er det beskrevet enkelte nukleosidanaloger som i cellekultur hemmer formeringen av HIV (også betegnet HTLV-III, LAV) det sykdomsforårsakende middel for AIDS og AIDS-beslektede kompleks (ARC). A large number of nucleoside analogues exhibit multiple anti-metabolic effects. They do this by replacing, or by competing with, the naturally occurring nucleosides. Recently, some nucleoside analogues have been described which in cell culture inhibit the propagation of HIV (also called HTLV-III, LAV) the disease-causing agent of AIDS and AIDS-related complex (ARC).

Vi har nå oppdaget at hemmende virkninger av HIV og/eller herpesformering oppvises av nukleosidanaloger hvor nukleosid-basene både er naturlige og modifiserte purinbaser som i N-9-stilling er derivatisert med en acyklisk sidekjede, som er We have now discovered that inhibitory effects of HIV and/or herpes propagation are exhibited by nucleoside analogues where the nucleoside bases are both natural and modified purine bases which, in the N-9 position, are derivatized with an acyclic side chain, which is

forgrenet i 2'-stillingen og inneholder funksjonelle grupper. branched in the 2' position and contains functional groups.

Tidligere kient Previous acquaintance

Purinderivater med antiviral virkning er tidligere omtalt i følgende referanser: Purine derivatives with antiviral action have previously been discussed in the following references:

9-(fosfonylmetoksyalkyl)adeniner er beskrevet i AU-A-56328/86 og AU-A-56468/86; 9-(phosphonylmethoxyalkyl)adenines are described in AU-A-56328/86 and AU-A-56468/86;

9-(1,3-dihydroksy-2-propoksymetyl)puriner og cykliske fosfatestere er beskrevet i US-A-4.565.868, US-A-4.590.269 og EP-A-184 473; og 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)purines and cyclic phosphate esters are described in US-A-4,565,868, US-A-4,590,269 and EP-A-184,473; and

9-(4-hydroksy-3-hydroksymetylbutyl)purinderivater er beskrevet i EP-A-141 927. 9-(4-hydroxy-3-hydroxymethylbutyl)purine derivatives are described in EP-A-141 927.

Dessuten er forbindelsen med formel kjent fra EP-A-186 64 0; og forbindelsene med formel Moreover, the compound of formula is known from EP-A-186 64 0; and the compounds with formula

hvor n=l eller 2, kjent fra EP-A-146 516. where n=1 or 2, known from EP-A-146 516.

Beskrivelse av o<p>pfinnelsen Description of the invention

Det har nå i henhold til foreliggende oppfinnelse vist seg at forbindelsene med formel According to the present invention, it has now been shown that the compounds with formula

hvor: where:

R<1> er hydrogen, hydroksy, merkapto eller amino; R<2> er hydrogen, hydroksy, fluor, klor eller amino; R<3> og R<4>, uavhengig av hverandre, er valgt fra R<1> is hydrogen, hydroxy, mercapto or amino; R<2> is hydrogen, hydroxy, fluorine, chlorine or amino; R<3> and R<4>, independently of each other, are selected from

hydroksy eller en esterrest derav som skriver hydroxy or an ester residue thereof that writes

seg fra en karboksylsyre R<6>COOH, hvor R<6> er hydrogen, C1~6-alkyl eller fenyl, eller from a carboxylic acid R<6>COOH, where R<6> is hydrogen, C1~6-alkyl or phenyl, or

R<3> sammen med R<4> er R<3> together with R<4> are

hvor where

M er hydrogen, C1-C4 alkyl eller et farmasøytisk akseptabelt motion; og n er l eller 2; med det forbehold at når R<3> og R<4> er hydroksy, da er R<1> ikke hydrogen, hydroksy eller klor, og farmasøytisk akseptable salter derav, M is hydrogen, C1-C4 alkyl or a pharmaceutically acceptable counterion; and n is 1 or 2; with the proviso that when R<3> and R<4> are hydroxy, then R<1> is not hydrogen, hydroxy or chlorine, and pharmaceutically acceptable salts thereof,

hemmer formeringen av HIV. Forbindelsene med formel I kan benyttes som terapeutiske og/eller profylaktiske midler ved kontroll og behandling av humane HIV virusinfeksjoner. inhibits the multiplication of HIV. The compounds of formula I can be used as therapeutic and/or prophylactic agents in the control and treatment of human HIV virus infections.

I henhold til et mer generelt aspekt er forbindelsene med formel I egnet som terapeutiske og/eller profylaktiske midler ved kontroll og behandling av infeksjoner forårsaket av retrovirus og hepatitt-B virus i pattedyr innbefattet mennesket. According to a more general aspect, the compounds of formula I are suitable as therapeutic and/or prophylactic agents in the control and treatment of infections caused by retroviruses and hepatitis B viruses in mammals including humans.

Alle retrovirus, inklusiv HIV, fordrer enzymet revers transkriptase i deres naturlige replikasjonscyklus. All retroviruses, including HIV, require the enzyme reverse transcriptase in their natural replication cycle.

Hepatitt-B virus (HBV) er et DNA-virus med et unikt ringformet dobbelttrådet DNA-genom som tildels er enkelt-trådet. Det inneholder en spesifikk DNA-polymerase som trengs for viral replikasjon. Denne DNA-polymerase tjener også som en omvendt transkriptase under replikasjonen av HBV DNA via et RNA-intermediat. Hepatitis B virus (HBV) is a DNA virus with a unique ring-shaped double-stranded DNA genome that is partially single-stranded. It contains a specific DNA polymerase needed for viral replication. This DNA polymerase also serves as a reverse transcriptase during the replication of HBV DNA via an RNA intermediate.

Forbindelsen med formel I hemmer aktiviteten av revers transkriptase hos retrovirus, innbefattet HIV, såvel som aktiviteten av DNA-polymerase i hepatitt-B virus. The compound of formula I inhibits the activity of reverse transcriptase in retroviruses, including HIV, as well as the activity of DNA polymerase in hepatitis B virus.

Et annet viktig område for bruk av forbindelsene med formel I er ved behandling av herpesvirus-infeksjoner. Blant de ulike herpesvirus kan nevnes herpes simplex type 1 og 2, varicella (Herpes Zoster), virus som forårsaker infeksiøs mononukleose (dvs. Epstein-Barr-virus) og cytomegalovirus. Viktige sykdommer forårsaket av herpesvirus er herpes dermatitis (innbefattet herpes labialis), herpes genitalis, herpes keratitis, herpes encephalitis og herpes zoster. Another important area of use of the compounds of formula I is in the treatment of herpes virus infections. Among the various herpes viruses, herpes simplex type 1 and 2, varicella (Herpes Zoster), viruses that cause infectious mononucleosis (ie Epstein-Barr virus) and cytomegalovirus can be mentioned. Important diseases caused by herpes viruses are herpes dermatitis (including herpes labialis), herpes genitalis, herpes keratitis, herpes encephalitis and herpes zoster.

Et annet mulig bruksområde for forbindelsene i henhold til oppfinnelsen er behandling av cancer og tumorer, spesielt slike som er forårsaket av virus. Denne virkning kan oppnås på forskjellige måter, dvs. ved å hemme transformasjonen av virus-infiserte celler til en neoplastisk tilstand, ved å hemme spredningen av virus fra transformerte celler til andre normale celler og ved å stanse veksten av virustransformerte celler. Another possible area of use for the compounds according to the invention is the treatment of cancer and tumors, especially those caused by viruses. This effect can be achieved in different ways, ie by inhibiting the transformation of virus-infected cells into a neoplastic state, by inhibiting the spread of virus from transformed cells to other normal cells and by arresting the growth of virus-transformed cells.

Forbindelsene med denne overstående generelle formel I kan anvendes for fremstilling av et medikament for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av AIDS, samt infeksjoner forårsaket av virus som fordrer revers transkriptase for deres replikasjon. The compounds of the above general formula I can be used for the preparation of a drug for the therapeutic and/or prophylactic treatment of AIDS, as well as infections caused by viruses that require reverse transcriptase for their replication.

Fortrinnsvis kan de benyttes for behandling av infeksjoner forårsaket av HIV-virus eller hepatitt-B-virus. Preferably, they can be used for the treatment of infections caused by the HIV virus or the hepatitis B virus.

Forbindelsene med formel I inneholder ett asymmetrisk sentrum når CH2CH2R<3> og (CH2)nR<4> er forskjellige. De forekommer derfor i to optiske former som utgjør et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen. The compounds of formula I contain one asymmetric center when CH2CH2R<3> and (CH2)nR<4> are different. They therefore occur in two optical forms which constitute a further aspect of the invention.

Foretrukne forbindelser for anvendelse i henhold til oppfinnelsen, er de hvor R<1> og R<2>, uavhengig av hverandre, er hydrogen, hydroksy eller amino og hvor R<3> er Preferred compounds for use according to the invention are those where R<1> and R<2>, independently of each other, are hydrogen, hydroxy or amino and where R<3> is

hydroksy eller et esterderivat derav som skriver seg fra en karboksylsyre R<6>COOH, hvor R<6> er hydrogen, C-^galkyl eller fenyl, og R<4> er OH eller et esterderivat derav, eller hvor R<3 >og R<4> sammen er hydroxy or an ester derivative thereof which is written from a carboxylic acid R<6>COOH, where R<6> is hydrogen, C-6 alkyl or phenyl, and R<4> is OH or an ester derivative thereof, or where R<3 > and R<4> together are

Fortrinnsvis er både R<3> og R<4> hydroksy; med det forbehold at når R<3> og R<4> er hydroksy, da kan R<1> ikke være hydrogen, hydroksy eller klor. Preferably both R<3> and R<4> are hydroxy; with the proviso that when R<3> and R<4> are hydroxy, then R<1> cannot be hydrogen, hydroxy or chlorine.

Eksempler på spesielt foretrukne forbindelser er slike med formel I Examples of particularly preferred compounds are those of formula I

Det er underforstått at eksemplene på farmasøytisk akseptable salter nevnt nedenfor, også gjelder de ulike estere eller derivater av purinbasene fremstilt i henhold til oppfinnelsen. It is understood that the examples of pharmaceutically acceptable salts mentioned below also apply to the various esters or derivatives of the purine bases produced according to the invention.

Eksempler på farmasøytisk akseptable salter av . forbindelsene med formel I innbefatter basesalter, f.eks. oppnådd fra en passende base så som et alkalimetall (f.eks. natrium, kalium), jordalkalimetall (f.eks. magnesium)-salter, ammonium og NX4~ (hvor X er C1_4-alkyl). Fysiologisk akseptable syresalter innbefatter salter av organiske karboksylsyrer så som eddiksyre, melkesyre, glukonsyre, sitronsyre, vinsyre, maleinsyre, eplesyre, pantotensyre, isetionsyre (2-hydroksyetan-sulfonsyre), oksalsyre, laktobionsyre og ravsyre; organiske sulfonsyrer så som metansulfonsyre, etansulfonsyre, benzensulfonsyre, p-klorbenzensulfonsyre og p-toluensulfonsyre, samt uorganiske syrer så som saltsyre, hydrogenjodid-, svovel-, fosfor- og sulfaminsyrer. Examples of pharmaceutically acceptable salts of . the compounds of formula I include base salts, e.g. obtained from a suitable base such as an alkali metal (eg sodium, potassium), alkaline earth metal (eg magnesium) salts, ammonium and NX4~ (where X is C1_4 alkyl). Physiologically acceptable acid salts include salts of organic carboxylic acids such as acetic acid, lactic acid, gluconic acid, citric acid, tartaric acid, maleic acid, malic acid, pantothenic acid, isethionic acid (2-hydroxyethanesulfonic acid), oxalic acid, lactobionic acid and succinic acid; organic sulfonic acids such as methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-chlorobenzenesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid, as well as inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrogen iodide, sulfuric, phosphoric and sulfamic acids.

Fysiologisk akseptable motioner for fosfonatgruppene inkluderer uorganiske og organiske motioner. Uorganiske motioner er for eksempel ammonium, natrium, kalium, litium, magnesium og kalsium. Organiske motioner oppnås fra ugiftige baser, så som primære, sekundære og tertiære aminer, innbefattet naturlig forekommende aminer. Eksempler på slike aminer er dietylamin, trietylamin, isopropylamin, etanolamin, morfolin, 2-dietylaminoetanol, glukosamin, N-metylglukamin, piperazin og dicykloheksylamin. Physiologically acceptable counterions for the phosphonate groups include inorganic and organic counterions. Inorganic sports ions are, for example, ammonium, sodium, potassium, lithium, magnesium and calcium. Organic counterions are obtained from non-toxic bases, such as primary, secondary and tertiary amines, including naturally occurring amines. Examples of such amines are diethylamine, triethylamine, isopropylamine, ethanolamine, morpholine, 2-diethylaminoethanol, glucosamine, N-methylglucamine, piperazine and dicyclohexylamine.

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av nye forbindelser med formel The present invention relates to a method for the production of new compounds with formula

hvor: where:

R<1> er hydrogen, hydroksy, merkapto eller amino; R<1> is hydrogen, hydroxy, mercapto or amino;

R<2> er hydrogen, hydroksy, fluor, klor eller amino; R<2> is hydrogen, hydroxy, fluorine, chlorine or amino;

R<3> og R<4>, uavhengig av hverandre, er valgt fra R<3> and R<4>, independently of each other, are selected from

hydroksy eller en esterrest derav som skriver seg fra en karboksylsyre R<6>COOH, hvor R<6> er hydrogen, C^-g-alkyl eller fenyl, eller R<3> sammen med R<4> er hydroxy or an ester residue thereof which is written from a carboxylic acid R<6>COOH, where R<6> is hydrogen, C^-g-alkyl or phenyl, or R<3> together with R<4> is

, hvor , where

M er hydrogen, C1- C4 alkyl eller et farmasøytisk akseptabelt motion; og n er 1 eller 2; med det forbehold at når R<3> og R<4> er hydroksy, da er R<1> ikke hydrogen, hydroksy eller klor, og farmasøytisk akseptable salter derav. M is hydrogen, C1-C4 alkyl or a pharmaceutically acceptable counterion; and n is 1 or 2; with the proviso that when R<3> and R<4> are hydroxy, then R<1> is not hydrogen, hydroxy or chlorine, and pharmaceutically acceptable salts thereof.

Et farmasøytisk preparat kan omfatte en ny forbindelse med formel I som virkestoff; og kan anvendes for terapeutisk og/eller profylaktisk behandling av virusinfeksjoner i et dyr eller i mennesker som har behov for behandling, som består i å gi en virksom mengde av en ny forbindelse med formel I. A pharmaceutical preparation may comprise a new compound with formula I as active ingredient; and can be used for the therapeutic and/or prophylactic treatment of viral infections in an animal or in humans in need of treatment, which consists in providing an effective amount of a new compound of formula I.

Særlig er det aktuelt å behandle infeksjoner forårsaket av herpesvirus eller et virus som fordrer revers transkriptase for replikasjon, innbefattet human immuno deficiency virus og hepatitt-B-virus. In particular, it is relevant to treat infections caused by herpes virus or a virus that requires reverse transcriptase for replication, including human immunodeficiency virus and hepatitis B virus.

Ved klinisk anvendelse vil purinderivatene med formel I normalt bli administrert oralt, ved injeksjon eller ved infusjon i form av et farmasøytisk preparat som omfatter virkestoffet i form av den opprinnelige forbindelse, eller eventuelt i form av et farmasøytisk akseptabelt bæremiddel som kan være et fast, halv-fast eller flytende fortynningsmiddel eller en svelgbar kapsel. Forbindelsen kan også benyttes uten bærermateriale. Som eksempler på farmasøytiske preparater kan nevnes tabletter, drasjéer, kapsler, granulater, suspensjoner, miksturer, siruper, oppløsninger, etc. Vanligvis vil virkestoffet utgjøre mellom 0,05 og 20% i preparater beregnet for injeksjon, og mellom 10 og 90% for preparater beregnet for oral administrasjon. In clinical use, the purine derivatives of formula I will normally be administered orally, by injection or by infusion in the form of a pharmaceutical preparation comprising the active ingredient in the form of the original compound, or possibly in the form of a pharmaceutically acceptable carrier which can be a solid, half - solid or liquid diluent or a swallowable capsule. The compound can also be used without carrier material. Examples of pharmaceutical preparations include tablets, dragees, capsules, granules, suspensions, mixtures, syrups, solutions, etc. Usually the active substance will make up between 0.05 and 20% in preparations intended for injection, and between 10 and 90% for preparations intended for oral administration.

Ved behandling av pasienter som lider av retrovirus-, spesielt HIV- eller hepatitt-B virus-infeksjoner, foretrekkes å gi forbindelsen oralt, parenteralt, rektalt, nasalt, lokalt eller vaginalt. Den parenterale tilførsel innbefatter subkutan, intramuskulær, intravenøs og sublingval administrasjon. Den lokale administrasjon innbefatter buccal og sublingval administrasjon. Doseringen av virkestoffene kan variere innenfor et bredt område og vil avhenge av forskjellige faktorer så som infeksjonens grad, pasientens alder, etc., og kan måtte tilpasses individuelt. Et passende område for mengden av forbindelsene i henhold til oppfinnelsen, eller et fysiologisk akseptabelt salt derav, for daglig administrasjon, kan være fra ca. 10 mg til 10 000 mg, fortrinnsvis 100-500 mg for intravenøs administrasjon og fortrinnsvis 100-3000 mg for oral administrasjon. When treating patients suffering from retrovirus, especially HIV or hepatitis B virus infections, it is preferred to administer the compound orally, parenterally, rectally, nasally, topically or vaginally. The parenteral administration includes subcutaneous, intramuscular, intravenous and sublingual administration. Local administration includes buccal and sublingual administration. The dosage of the active substances can vary within a wide range and will depend on various factors such as the degree of the infection, the patient's age, etc., and may have to be adapted individually. A suitable range for the amount of the compounds according to the invention, or a physiologically acceptable salt thereof, for daily administration may be from approx. 10 mg to 10,000 mg, preferably 100-500 mg for intravenous administration and preferably 100-3000 mg for oral administration.

Forbindelser med formel I kan virke synergistisk eller additivt med et bredt utvalg av andre terapeutiske midler, hvorved det terapeutiske potensial av begge midler økes uten å øke de toksiske effekter, slik at det terapeutiske forhold økes. Compounds of formula I can act synergistically or additively with a wide variety of other therapeutic agents, whereby the therapeutic potential of both agents is increased without increasing the toxic effects, so that the therapeutic ratio is increased.

En forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt derivat derav, kan benyttes i kombinasjonsterapi, hvor de to virkestoffene forekommer i et forhold som resulterer i et optimalt terapeutisk forhold. Dette kan oppnås enten ved en synergistisk effekt overfor den virale infeksjon, og/eller ved å senke toksisiteten mens en additiv eller synergistisk terapeutisk effekt opprettholdes. A compound of formula I or a pharmaceutically acceptable derivative thereof can be used in combination therapy, where the two active substances occur in a ratio that results in an optimal therapeutic ratio. This can be achieved either by a synergistic effect against the viral infection, and/or by lowering the toxicity while maintaining an additive or synergistic therapeutic effect.

Det optimale terapeutiske forhold observeres når de to midlene forekommer i et forhold på 500:1 til 1:500, fortrinnsvis 100:1 til 1:100, særlig 20:1 til 1:20 og spesielt 10:1 til 1:10. The optimal therapeutic ratio is observed when the two agents occur in a ratio of 500:1 to 1:500, preferably 100:1 to 1:100, especially 20:1 to 1:20 and especially 10:1 to 1:10.

Kombinasjonene kan hensiktsmessig administreres sammen, for eksempel i en enhetlig farmasøytisk formulering, eller separat, for eksempel som en kombinasjon av tabletter og injeksjoner gitt samtidig eller til forskjellige tidspunkter, for å oppnå den nødvendige terapeutiske effekt. The combinations may conveniently be administered together, for example in a unitary pharmaceutical formulation, or separately, for example as a combination of tablets and injections given simultaneously or at different times, to achieve the required therapeutic effect.

Forbindelsene med formel I potensieres av interferoner, andre antivirale midler, så som foscarnet, AZT, HlV-protease-hemmere, immunomodulatorer, interferon-induserende midler og vekstfaktorer. The compounds of formula I are potentiated by interferons, other antiviral agents, such as foscarnet, AZT, HIV protease inhibitors, immunomodulators, interferon-inducing agents and growth factors.

Særlig foretrukne typer av interferon er a, /? og å og interferon-induserende midler så som "Ampligen" (Hem Research). Particularly preferred types of interferon are a, /? and interferon-inducing agents such as "Ampligen" (Hem Research).

Andre kombinasjoner egnet for bruk i henhold til foreliggende oppfinnelse, innbefatter slike hvor det andre midlet for eksempel er interleukin II, suramin, foscarnet eller en ester derav, HPA 23, hemmere av HIV-protease, så som pepstatin, steroider, medikamenter, så som levamisol eller tymosin for å oke lymfocyttantall og/eller -funksjon, eller GM-CSF og andre faktorer som regulerer cellefunksjoner. Other combinations suitable for use according to the present invention include those where the second agent is, for example, interleukin II, suramin, foscarnet or an ester thereof, HPA 23, inhibitors of HIV protease, such as pepstatin, steroids, drugs such as levamisole or thymosin to increase lymphocyte numbers and/or function, or GM-CSF and other factors that regulate cell functions.

Fremstillingsmetoder Manufacturing methods

Forbindelsene med formel I kan i henhold til oppfinnelsen fremstilles etter en av de følgende generelle metoder: According to the invention, the compounds of formula I can be prepared by one of the following general methods:

A. Kondensasjon av en acyklisk sidekjede sammensatt som i formel I, til N-9-stillingen av et purinderivat. Den acykliske sidekjede har en terminalt utgående gruppe og de funksjonelle gruppene kan eventuelt være beskyttet med kjente grupper benyttet for beskyttelse av hydroksy-, amino- eller fosfonat-funksjoner. A. Condensation of an acyclic side chain compound as in formula I, to the N-9 position of a purine derivative. The acyclic side chain has a terminal leaving group and the functional groups can optionally be protected with known groups used for the protection of hydroxy, amino or phosphonate functions.

Eksempler på passende derivater av reaktantene er de hvor R<1>' er Cl, eller R1 som definert ovenfor, R<1>, R<2>, R3, R<4> og n er som definert ovenfor og W er en hensiktsmessig utgående gruppe så som Cl, Br, I, alkyl eller arylsulfonyloksy, trifluormetansulfonyloksy. Kondensasjonsreaksjonen foretas i et organisk oppløsningsmiddel så som dimetylformamid, dimetyl-sulfoksyd, etanol, acetonitril, diklormetan eller lignende, ved en temperatur på mellom 0°C og 150°C i tidsrom fra 1 time til 5 dager, og etter kondensasjonen kan produktene hydrolyseres eller omdannes etter kjente konvensjonelle metoder til forbindelser med formel I. Examples of suitable derivatives of the reactants are those where R<1>' is Cl, or R1 as defined above, R<1>, R<2>, R3, R<4> and n are as defined above and W is an appropriate leaving group such as Cl, Br, I, alkyl or arylsulfonyloxy, trifluoromethanesulfonyloxy. The condensation reaction is carried out in an organic solvent such as dimethylformamide, dimethylsulfoxide, ethanol, acetonitrile, dichloromethane or the like, at a temperature of between 0°C and 150°C for a period of time from 1 hour to 5 days, and after the condensation the products can be hydrolysed or are converted by known conventional methods into compounds of formula I.

Når det er tale om et fosfonat, kan sidekjeden, kondensert til en purinbase, fremstilles på forskjellige måter. Et eksempel er den følgende reaksjonsfølge, hvor utgangsmaterialet 5-(2-brometyl)-2,2-dimetyl-l,3-dioksan er beskrevet (M.R. Harnden & R.L. Jarvest, Tetrahedron Letters, Vol. 26, s. 4265-4268, 1985). In the case of a phosphonate, the side chain, condensed to a purine base, can be prepared in different ways. An example is the following reaction sequence, where the starting material 5-(2-bromomethyl)-2,2-dimethyl-1,3-dioxane is described (M.R. Harnden & R.L. Jarvest, Tetrahedron Letters, Vol. 26, pp. 4265-4268, 1985).

a) P(OMe)3; b) H+, MeOH; c) MeO-; d) N-bromsuccinimid, trifenylfosfin; En forbindelse med formel I hvor R<3> og R<4> sammen er kan underkastes ringspalting for å danne en forbindelse hvor én av R<3> og R<4> er a) P(OMe)3; b) H + , MeOH; c) MeO-; d) N-bromosuccinimide, triphenylphosphine; A compound of formula I where R<3> and R<4> together are can be subjected to ring cleavage to form a compound wherein one of R<3> and R<4> is

og en annen er hydroksy. and another is hydroxy.

Den ovenfor beskrevne metode kan benyttes for å gi blandinger av optiske isomerer eller i passende situasjoner, en enkelt optisk isomer. En forbindelse i henhold til oppfinnelsen i form av en optisk isomer, kan fremstilles dersom det i nevnte metode kondenseres en optisk aktiv acyklisk sidekjede til N-9-stillingen i purinderivatet, eller dersom kondensasjonen rettes mot dannelse av en optisk isomer ved hjelp av en annen optisk aktiv forbindelse. En enkelt optisk isomer kan dessuten oppnås fra de racemiske blandingene etter i og for seg kjente metoder. The method described above can be used to give mixtures of optical isomers or, in appropriate situations, a single optical isomer. A compound according to the invention in the form of an optical isomer can be produced if, in the aforementioned method, an optically active acyclic side chain is condensed to the N-9 position in the purine derivative, or if the condensation is directed towards the formation of an optical isomer using another optically active connection. A single optical isomer can also be obtained from the racemic mixtures by methods known per se.

De etterfølgende eksempler vil illustrere oppfinnelsen ytterligere. The following examples will further illustrate the invention.

Eksempel 1 Example 1

2-( 2- aminopurin- 9- yl) metylbutan- 1. 4- diol- diacetat 2-(2-aminopurin-9-yl)methylbutane-1.4-diol- diacetate

En blanding av 4-acetoksy-2-brommetylbutylacetat A mixture of 4-acetoxy-2-bromomethylbutyl acetate

(0,465 g, 1,74 mmol) , 2-aminopurin (0,282 g, 2,09 mmol) og pulverisert kaliumkarbonat (1,20 g, 8,70 mmol) i N,N-dimetylformamid (20 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 5 dager. Kloroform (40 ml) ble tilsatt, fast materiale fjernet ved filtrering og oppløsningen inndampet i vakuum til et lite volum. Kromatografi på 50 g Si02 med kloroform + metanol (7 + 1) som eluent ga en fraksjon på 70-130 ml som ble inndampet og tørket i vakuum, tilslutt under 0,1 mBar for å gi 0,349 g (62%) 2-(2-aminopurin-9-yl)metylbutan-l,4-diol-diacetat. TLC på silika (kloroform + metanol, 7+1): Rf 0,57. (0.465 g, 1.74 mmol), 2-aminopurine (0.282 g, 2.09 mmol) and powdered potassium carbonate (1.20 g, 8.70 mmol) in N,N-dimethylformamide (20 mL) were stirred at room temperature for 5 days. Chloroform (40 mL) was added, solids removed by filtration and the solution evaporated in vacuo to a small volume. Chromatography on 50 g SiO2 with chloroform + methanol (7 + 1) as eluent gave a fraction of 70-130 ml which was evaporated and dried in vacuo, finally under 0.1 mBar to give 0.349 g (62%) 2-( 2-Aminopurin-9-yl)methylbutane-1,4-diol diacetate. TLC on silica (chloroform + methanol, 7+1): Rf 0.57.

<X>H NMR (CDC13 + CD3OD) : S 8,64 (s, 1H) , H6; 7,92 (s, 1H) H8 ; 5,82 (bred s, 2H) NH2; 4,3-4,15 (m, 4H) 2 CH2OAc; 4,33 (d, 2H) CH2N; 2,50 (m, 1H) CH; 2,06 (s, 6H) 2 CH3COO; 1,75 (q, 2H) CH2CH2OAc; <X>H NMR (CDCl 3 + CD 3 OD) : S 8.64 (s, 1H), H 6 ; 7.92 (s, 1H) H8 ; 5.82 (broad s, 2H) NH 2 ; 4.3-4.15 (m, 4H) 2 CH 2 OAc; 4.33 (d, 2H) CH 2 N; 2.50 (m, 1H) CH; 2.06 (s, 6H) 2 CH 3 COO; 1.75 (q, 2H) CH 2 CH 2 OAc;

<13>C NMR (CDCI3<+> CD3OD): S 170,96, 170,66 (2 C=0); <13>C NMR (CDCl3<+> CD3OD): S 170.96, 170.66 (2 C=0);

159,89 (C2) ; 153,13 (C4); 148,77 (C6); 142,84 (C8); 126,83 (C5); 63,78 (CHCH2-0Ac); 61,47 (CH2CH2OAc); 44,05 (CH2N); 35,15 (CH) ; 27,59 (CH2CH20) ; 20,22, 20,05 (2 CH3) . Utgangsmaterialene ble fremstillet etter følgende reaksjonsfølge (a-e): 159.89 (C2); 153.13 (C4); 148.77 (C6); 142.84 (C8); 126.83 (C5); 63.78 (CHCH 2 -OAc); 61.47 (CH 2 CH 2 OAc); 44.05 (CH 2 N); 35.15 (CH) ; 27.59 (CH 2 CH 2 O); 20.22, 20.05 (2CH3) . The starting materials were prepared according to the following reaction sequence (a-e):

a) a- trityloksymetyl-" Y- butyrolakton a) a- trityloxymethyl-" Y- butyrolactone

En blanding av a-hydroksymetyl-^-butyrolakton (26,83 g, A mixture of α-hydroxymethyl-β-butyrolactone (26.83 g,

0,231 mol) (G. Claeson et H. G. Jonsson, Arkiv for Kemi 28, 167 (1967)), tritylklorid (77,3 g, 0,277 mol) og tørr pyridin (200 ml) ble omrørt ved romtemperatur i noen få timer inntil den var homogen. Etter 10 dager ved romtemperatur ble opp-løsningen helt over i en blanding av 500 ml vann og 500 ml n-heksan. Bunnfallet ble vasket med vann og heksan og tilslutt tørket under 0,1 mBar for å gi 65,60 g (79%) råprodukt som var forurenset med noe tritylalkohol. TLC på silika (etylacetat + n-heksan (1+3)): Rf 0,38. 0.231 mol) (G. Claeson et H. G. Jonsson, Arkiv for Kemi 28, 167 (1967)), trityl chloride (77.3 g, 0.277 mol) and dry pyridine (200 ml) were stirred at room temperature for a few hours until it was homogeneous. After 10 days at room temperature, the solution was poured into a mixture of 500 ml of water and 500 ml of n-hexane. The precipitate was washed with water and hexane and finally dried under 0.1 mBar to give 65.60 g (79%) of crude product which was contaminated with some trityl alcohol. TLC on silica (ethyl acetate + n-hexane (1+3)): Rf 0.38.

<13>C NMR (CDCI3) : S 177,84 (C=0) ; 143,71, 128,68, 127,96 og 127,20 (fenyl); 86,96 (0 CPH3); 67,26 (CH20C0); 62,49 (CH2OTr); 40,31 (CH) ; 26,15 (CH2CH20) . <13>C NMR (CDCl3): S 177.84 (C=O); 143.71, 128.68, 127.96 and 127.20 (phenyl); 86.96 (0 CPH3); 67.26 (CH 2 0 CO); 62.49 (CH 2 OTr ); 40.31 (CH) ; 26.15 (CH 2 CH 2 O) .

b) 2- trityloksvmetyl- l, 4- butandiol b) 2-trityloxymethyl-1,4-butanediol

a-trityloksymetyl-"Y-butyrolakton (60,21 g, 0,168 mol) ble α-Trityloxymethyl-'Y-butyrolactone (60.21 g, 0.168 mol) was

i små porsjoner tilsatt til en omrørt suspensjon av litium-aluminiumhydrid (9,53 g, 0,251 mol) i tørr tetrahydrofuran (300 ml), hvoretter blandingen ble tilbakeløpsbehandlet i 1 time. Langsom tilsetning av 10 ml H20 + 10 ml 15% NaOH og 30 ml H20 førte til et hvitt sandaktig bunnfall, som ble frafiltrert og vasket med 2x50 ml tetrahydrofuran. Filtratet ble inndampet til et lite volum og oppløst i dietyleter (300 ml), tilsatt silikagel (250 g) og forsiktig inndampet til et homogent pulver. Denne råprodukt-silikagelblandingen ble anbragt over et silikagellag (250 g) i n-heksan i en kromatografikolonne. Eluering med etylacetat + n-heksan (1+3), 2200 ml, fjernet tritylalkoholen. Fortsatt eluering med etylacetat + etanol (9+1) ga fraksjoner 2900-3700 (fra start) som etter inndampning i vakuum førte til en krystalliserende olje. Utbytte 52,77 g (87%). TLC på silikagel: etylacetat + n-heksan (1+3), Rf 0,05; etylacetat + etanol (9+1), Rf 0,81. in small portions added to a stirred suspension of lithium aluminum hydride (9.53 g, 0.251 mol) in dry tetrahydrofuran (300 mL), after which the mixture was refluxed for 1 hour. Slow addition of 10 ml H 2 O + 10 ml 15% NaOH and 30 ml H 2 O led to a white sandy precipitate, which was filtered off and washed with 2 x 50 ml tetrahydrofuran. The filtrate was evaporated to a small volume and dissolved in diethyl ether (300 ml), added silica gel (250 g) and carefully evaporated to a homogeneous powder. This crude product-silica gel mixture was placed over a layer of silica gel (250 g) in n-hexane in a chromatography column. Elution with ethyl acetate + n-hexane (1+3), 2200 ml, removed the trityl alcohol. Continued elution with ethyl acetate + ethanol (9+1) gave fractions 2900-3700 (from the start) which after evaporation in vacuum led to a crystallizing oil. Yield 52.77 g (87%). TLC on silica gel: ethyl acetate + n-hexane (1+3), Rf 0.05; ethyl acetate + ethanol (9+1), Rf 0.81.

c) 2- trityloksymetyl- l, 4- butandiol- diacetat c) 2-trityloxymethyl-1,4-butanediol diacetate

Til en omrørt blanding av 2-trityloksymetyl-l,4-butandiol To a stirred mixture of 2-trityloxymethyl-1,4-butanediol

(50,85 g, 0,140 mol) og trietylamin (42,6 g, 0,42 mol) i tørr dietyleter (500 ml) ble det langsomt tilsatt en oppløsning av acetylklorid (27,5 g, 0,35 mol) i eter (25 ml) under utvendig avkjøling med kaldt vann for å holde blandingen ved romtemperatur. Etter 45 minutter ble trietylaminhydrokloridet frafiltrert og vasket med litt eter. De kombinerte filtratene ble vasket med vann (50 ml), 0,5M saltsyre (100 ml) og vann (50 ml), tørket med magnesiumsulfat og inndampet i vakuum, avslutningsvis ved 0,1 mBar for å gi 61,03 g (97%) oljeaktig råprodukt. TLC på silika (etylacetat + n-heksan 1+1): Rf 0,68. (50.85 g, 0.140 mol) and triethylamine (42.6 g, 0.42 mol) in dry diethyl ether (500 mL) was slowly added a solution of acetyl chloride (27.5 g, 0.35 mol) in ether (25 ml) under external cooling with cold water to keep the mixture at room temperature. After 45 minutes, the triethylamine hydrochloride was filtered off and washed with a little ether. The combined filtrates were washed with water (50 mL), 0.5M hydrochloric acid (100 mL) and water (50 mL), dried over magnesium sulfate and evaporated in vacuo, finally at 0.1 mBar to give 61.03 g (97 %) oily crude product. TLC on silica (ethyl acetate + n-hexane 1+1): Rf 0.68.

d) 4- acetoksy- 2- hydroksymetylbutyl- acetat d) 4-acetoxy-2-hydroxymethylbutyl acetate

2-trityloksymetyl-l,4-butandiol-diacetat (60,90 g, 2-trityloxymethyl-1,4-butanediol diacetate (60.90 g,

0,136 mol) ble oppløst i eddiksyre (320 ml) ved 100°C og tilsatt vann (80 ml). Oppløsningen ble holdt ved 100°C i 15 min., inndampet i vakuum til et lite volum og avkjølt til 0°C. 0.136 mol) was dissolved in acetic acid (320 ml) at 100°C and water (80 ml) added. The solution was held at 100°C for 15 min., evaporated in vacuo to a small volume and cooled to 0°C.

Bunnfallet ble frafiltrert og vasket med kald etylacetat for å gi 26,44 g (35,51 g av det teoretiske) tritylalkohol. De kombinerte filtratene ble inndampet til et lite volum. Forbindelsen ble renset på en silikagelkolonne (500 g Si02); eluent 0-2700 ml etylacetat + n-heksan (1+1), 2700-3740 ml etylacetat + n-heksan (2+1) og deretter ufortynnet etylacetat. Fraksjonene 2540-4800 ml ble inndampet for å gi 14,20 g (51%) rent 4-acetoksy-2-hydroksy-metylbutylacetat. TLC på silika (etylacetat + n-heksan 1+1): Rf 0,30. The precipitate was filtered off and washed with cold ethyl acetate to give 26.44 g (35.51 g of theory) of trityl alcohol. The combined filtrates were evaporated to a small volume. The compound was purified on a silica gel column (500 g SiO 2 ); eluent 0-2700 ml ethyl acetate + n-hexane (1+1), 2700-3740 ml ethyl acetate + n-hexane (2+1) and then undiluted ethyl acetate. Fractions 2540-4800 ml were evaporated to give 14.20 g (51%) of pure 4-acetoxy-2-hydroxy-methylbutyl acetate. TLC on silica (ethyl acetate + n-hexane 1+1): Rf 0.30.

<13>C NMR (CDC13): S 171,08, 170,88 (2 C=0); 64,07 (CH2OH); 62,10, 61,45 (2 CH2OAc) ; 37,07 (CH) ; 26,76 (CH2CH2OAc) ; 20,39 (2 CH3). <13>C NMR (CDCl3 ): S 171.08, 170.88 (2 C=0); 64.07 (CH 2 OH); 62.10, 61.45 (2 CH 2 OAc); 37.07 (CH) ; 26.76 (CH 2 CH 2 OAc); 20.39 (2CH3).

e) 4- acetoksy- 2- brommetylbutyl- acetat e) 4-acetoxy-2-bromomethylbutyl acetate

En oppløsning av 4-acetoksy-2-hydroksymetylbutyl-acetat A solution of 4-acetoxy-2-hydroxymethylbutyl acetate

(11,04 g, 0,054 mol) og trifenylfosfin (21,27 g, 0,081 mol) i tørr diklormetan (150 ml) ble omrørt ved 0°C og porsjonsvis tilsatt N-bromsuccinimid (14,43 g, 0,081 mol). Blandingen ble holdt ved 0°C i 20 timer, inndampet til et lite volum og omrørt med 50 ml etylacetat + n-heksan (1+1). Det hvite trifenylfosfinoksydet ble frafiltrert og vasket med litt etylacetat + n-heksan (1+1). De kombinerte filtratene ble inndampet og renset på en 200 g Si02-kolonne med etylacetat + n-heksan (1+1) som eluent. Fraksjonene 250-550 ml ble inndampet i vakuum for å gi 11,90 g (82%) rent 4-acetoksy-2-brommetylbutylacetat. TLC på silika (etylacetat + n-heksan 1+1): Rf 0,59. (11.04 g, 0.054 mol) and triphenylphosphine (21.27 g, 0.081 mol) in dry dichloromethane (150 mL) were stirred at 0°C and N-bromosuccinimide (14.43 g, 0.081 mol) added portionwise. The mixture was kept at 0°C for 20 hours, evaporated to a small volume and stirred with 50 ml of ethyl acetate + n-hexane (1+1). The white triphenylphosphine oxide was filtered off and washed with a little ethyl acetate + n-hexane (1+1). The combined filtrates were evaporated and purified on a 200 g SiO 2 column with ethyl acetate + n-hexane (1+1) as eluent. Fractions 250-550 ml were evaporated in vacuo to give 11.90 g (82%) of pure 4-acetoxy-2-bromomethylbutyl acetate. TLC on silica (ethyl acetate + n-hexane 1+1): Rf 0.59.

<2>H NMR (CDCI3) : <5 4,2-4,0 (m, 4H) , 2 CH20Ac; 3,53 (ABX system, 2H) CH2Br; 2,25-2,1 (m, 1H) CH; 2,08, 2,06 (2 s, 2x3H) 2 C0CH3; <2>H NMR (CDCl3) : <5 4.2-4.0 (m, 4H), 2 CH2OAc; 3.53 (ABX system, 2H) CH 2 Br; 2.25-2.1 (m, 1H) CH; 2.08, 2.06 (2 s, 2x3H) 2 COCH 3 ;

1,79 (m, 2H) CH2CH2OAc. 1.79 (m, 2H) CH 2 CH 2 OAc.

<13>C NMR (CDCI3): 5 170,91, 170,74 (2 C=0); 64,90 (CHCH20Ac); 61,71 (CH2CH2OAc); 36,56 (CH); 34,74 (CH2Br); 28,88 (CH2CH20); 20,95 (2CH3). <13>C NMR (CDCl3): δ 170.91, 170.74 (2 C=0); 64.90 (CHCH 2 0 Ac); 61.71 (CH 2 CH 2 OAc); 36.56 (CH); 34.74 (CH 2 Br); 28.88 (CH 2 CH 2 O); 20.95 (2CH3).

Eksempel 2 9-( 4- acetoksy- 2- acetoksymetylbutyl) guanin-f 2-( guanin- 9- vlmetyl)- 1, 4- butandiol . diacetat] Example 2 9-(4-acetoxy-2-acetoxymethylbutyl)guanine-f 2-(guanine-9-ylmethyl)-1,4-butanediol. diacetate]

En blanding av 9-(4-hydroksy-2-hydroksymetylbutyl)guanin (0,50 g, 2,0 mmol), eddiksyreanhydrid (1,02 g, 10,0 mmol), pyridin (1,11 g, 14,0 mmol) og tørr N,N-dimetylformamid (25 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 13 dager og deretter inndampet til tørrhet i vakuum. Det krystallinske residuet ble oppvarmet med 10 ml vann og lyofilisert og omkrystallisert fra vann for å gi 0,468 g (69%) 9-(4-acetoksy-2-acetoksymetylbutyl)guanin. A mixture of 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)guanine (0.50 g, 2.0 mmol), acetic anhydride (1.02 g, 10.0 mmol), pyridine (1.11 g, 14.0 mmol) and dry N,N-dimethylformamide (25 mL) were stirred at room temperature for 13 days and then evaporated to dryness in vacuo. The crystalline residue was heated with 10 mL of water and lyophilized and recrystallized from water to give 0.468 g (69%) of 9-(4-acetoxy-2-acetoxymethylbutyl)guanine.

<13>C NMR (CDCI3+CD3OD) : S 64,15 (CHCH20) ; 61,98 (CH2CH20); 44,71 (CH2N) ; 35,88 (CH) ; 27,95 (CH2CH20) ; 20,87, 20,68 (2 CH3) <13>C NMR (CDCl3+CD3OD): S 64.15 (CHCH2O); 61.98 (CH 2 CH 2 O); 44.71 (CH2N); 35.88 (CH) ; 27.95 (CH 2 CH 2 O); 20.87, 20.68 (2CH3)

Eksempel 3 9-( 4 propionoksy- 2- propionoksymetylbutyl) guanin f 2-( guanin- 9- vlmetyl)- 1, 4- butandiol dipropionat1 Example 3 9-(4-propionoxy-2-propionoxymethylbutyl)guanine f 2-(guanine-9-ylmethyl)-1,4-butanediol dipropionate1

En blanding av 9-(4-hydroksy-2-hydroksymetylbutyl)guanin (0,50 g, 2,0 mmol), propionsyreanhydrid (1,56 g, 12,0 mmol), pyridin (1,27 g, 16,0 mmol) og tørr N,N-dimetylformamid (25 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 14 dager og deretter inndampet til tørrhet i vakuum. Det krystallinske residuet ble oppvarmet med 10 ml vann og lyofilisert og omkrystallisert fra vann for å gi 0,418 g (57%) 9-(4-propionoksy-2-propionoksymetylbutyl)-guanin. A mixture of 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)guanine (0.50 g, 2.0 mmol), propionic anhydride (1.56 g, 12.0 mmol), pyridine (1.27 g, 16.0 mmol) and dry N,N-dimethylformamide (25 mL) were stirred at room temperature for 14 days and then evaporated to dryness in vacuo. The crystalline residue was heated with 10 mL of water and lyophilized and recrystallized from water to give 0.418 g (57%) of 9-(4-propionoxy-2-propionoxymethylbutyl)-guanine.

<13>C NMR (CDCI3+CD3OD) : S 64,00 (CHCH20); 61,86 CH2CH20); < 13>C NMR (CDCl 3 +CD 3 OD) : S 64.00 (CHCH 2 O); 61.86 CH 2 CH 2 O);

44,78 (CH2N); 35,95 (CH); 28,00 (CH2CH20); 27,56, 44.78 (CH 2 N); 35.95 (CH); 28.00 (CH 2 CH 2 O); 27.56,

27,44 (2 C<H>3CH2CO); 9,00 (2 CH3). 27.44 (2C<H>3CH2CO); 9.00 (2CH3).

Eksempel 4 9-( 4- hydroksy- 2- hvdroksymetylbutyl) adenin Example 4 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)adenine

Dimetyl 2-(adenin-9-ylmetyl)succinat (2,93 g, 0,010 mol) ble under oppvarming oppløst i tert. butanol (120 ml), porsjonsvis tilsatt litiumborhydrid (1,10 g, 0,05 mol) og blandingen omrørt ved romtemperatur i 3 timer, tilsatt vann (10 ml) og omrøringen fortsatt over natten. Uorganisk materiale ble frafiltrert og vasket med tert. butanol, hvorpå filtratet ble inndampet til et lite volum. Kromatografi på silika (etylacetat + metanol + vann 7+2+1) førte til rent 9-(4-hydroksy-2-hydroksymetylbutyl)adenin. Dimethyl 2-(adenin-9-ylmethyl)succinate (2.93 g, 0.010 mol) was dissolved under heating in tert. butanol (120 ml), lithium borohydride (1.10 g, 0.05 mol) added portionwise and the mixture stirred at room temperature for 3 hours, water (10 ml) added and stirring continued overnight. Inorganic material was filtered off and washed with tert. butanol, whereupon the filtrate was evaporated to a small volume. Chromatography on silica (ethyl acetate + methanol + water 7+2+1) led to pure 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)adenine.

<13>C NMR (DMSO-d6): 5 156,24 (C6); 152,67 (C2); 150,14 (C4); 141,84 (C8); 118,88 (C5); 61,18, 58,92 (2 CH2OH) ; 44,81 (CH2N); 38,36 (CH); 32,02 (CH2C<H>2OH). <13>C NMR (DMSO-d 6 ): δ 156.24 (C 6 ); 152.67 (C2); 150.14 (C4); 141.84 (C8); 118.88 (C5); 61.18, 58.92 (2 CH 2 OH); 44.81 (CH 2 N); 38.36 (CH); 32.02 (CH2C<H>2OH).

Utgangsmaterialet ble fremstillet som følger: The starting material was prepared as follows:

Dimetyl 2-( adenin- 9- ylmetyl)- succinat Dimethyl 2-(adenin-9-ylmethyl)-succinate

En blanding av adenin (5,40 g, 0,040 mol), dimetylitaconat (8,00 g, 0,051 mol), natriumhydrid (55% i olje, 0,2 g) og tørr N,N-dimetylformamid (125 ml) ble oppvarmet til 12 0°C og deretter holdt under omrøring ved romtemperatur i 8 dager. Bunnfallet ble frafiltrert, vasket med diklormetan (3x15 ml) og tørket i vakuum for å gi 8,96 g (76 %) dimetyl 2-(adenin-9-ylmetyl)-succinat. A mixture of adenine (5.40 g, 0.040 mol), dimethyl itaconate (8.00 g, 0.051 mol), sodium hydride (55% in oil, 0.2 g) and dry N,N-dimethylformamide (125 mL) was heated to 120°C and then kept under stirring at room temperature for 8 days. The precipitate was filtered off, washed with dichloromethane (3x15 mL) and dried in vacuo to give 8.96 g (76%) of dimethyl 2-(adenin-9-ylmethyl)-succinate.

^■H NMR (CDC13) ; S 8,28 (s, 1H) H2; 7,90 (s, 1H) H8 ; 1 H NMR (CDCl 3 ); S 8.28 (s, 1H) H 2 ; 7.90 (s, 1H) H8 ;

4,54 (ABX system 2H) CH2N; 3,70, 3,69 (2 s, 2x3H) 0CH3; 4.54 (ABX system 2H) CH2N; 3.70, 3.69 (2s, 2x3H) 0CH3;

3,46 (m, 1H) CH; 2,72 (d, 2H) CH2C00. 3.46 (m, 1H) CH; 2.72 (d, 2H)CH2CO0.

<13>C NMR (CDCI3+CD3OD) : S 172,39, 171,42 (2 C=0) ; 155,61 (C6) ; 152,91 (C2); 149,87 (C4); 141,01 (C8); 118,85 (C5); 52,37, 51,94 (OCH3); 44,10 (CH2N); 41,55 (CH); 33,30 (CH2COO). <13>C NMR (CDCl3+CD3OD): S 172.39, 171.42 (2 C=O); 155.61 (C6); 152.91 (C2); 149.87 (C4); 141.01 (C8); 118.85 (C5); 52.37, 51.94 (OCH 3 ); 44.10 (CH 2 N); 41.55 (CH); 33.30 (CH 2 COO).

Eksempel 5 Natrium etyl- 3-( quanin- 9- ylmetyl)- 4-hydroksybutanfosfonat og 7- isomer Example 5 Sodium ethyl 3-(quanin-9-ylmethyl)-4-hydroxybutanephosphonate and 7-isomer

2-amino-6-klor-9-[(2-etoksy-2-okso-l,2-oksafosforinan-5-yl)-metyl]purin (VSC 655) og dens 7-isomer (100 mg, 2-amino-6-chloro-9-[(2-ethoxy-2-oxo-1,2-oxaphosphorinan-5-yl)-methyl]purine (VSC 655) and its 7-isomer (100 mg,

0,29 mmol), oppløst i etanol (4 ml), vann (4 ml) og 2M vandig natriumhydroksyd (0,90 mmol) ble holdt ved 37°C i 18 timer. Oppløsningen ble nøytralisert ved tilsetning av svak sur Amberlite kationbytter-harpiks, filtrert og inndampet til 0.29 mmol), dissolved in ethanol (4 mL), water (4 mL) and 2M aqueous sodium hydroxide (0.90 mmol) was kept at 37°C for 18 hours. The solution was neutralized by the addition of weakly acidic Amberlite cation exchange resin, filtered and evaporated to

tørrhet for å gi 113 mg (kvantitativt utbytte) råprodukt. dryness to give 113 mg (quantitative yield) of crude product.

• XH NMR (D20, tert. BuOH, 200 MHz): S 8,01 og 7,79 (s, 8H, 7 og 9 isomerene); 4,03 (m, CH2N); 3,78 (kvintett, CH2QP); 3,50 (d, CH2OH); 2,05 og 1,6-1,3 (m, PCH2CH2CH); 1,12 (t, CH3C-0-P) . <13>C NMR (D20, tert. BuOH, 50 MHz): S 161,81, 160,47, 154,12, 145,5, 142,13, 114,55, 61,74/61,42 (CH2OP); 45,35 og 45,15 (CH2N); 42,25/41,91 (CH) ; 25,59, 22,89; 16,83 (CH3C-O-P) . Eksempel 6 Dinatrium 3-( guanin- 9- ylmetyl)- 4- hydroksybutanfosfonat • 1 H NMR (D 2 O, tert. BuOH, 200 MHz): S 8.01 and 7.79 (s, 8H, 7 and 9 isomers); 4.03 (m, CH 2 N); 3.78 (quintet, CH2QP); 3.50 (d, CH 2 OH); 2.05 and 1.6-1.3 (m, PCH2CH2CH); 1.12 (t, CH 3 C-O-P) . <13>C NMR (D 2 O, tert. BuOH, 50 MHz): S 161.81, 160.47, 154.12, 145.5, 142.13, 114.55, 61.74/61.42 (CH 2 OP ); 45.35 and 45.15 (CH 2 N); 42.25/41.91 (CH) ; 25.59, 22.89; 16.83 (CH 3 C-O-P) . Example 6 Disodium 3-(guanin-9-ylmethyl)-4- hydroxybutane phosphonate

En oppløsning av 2-amino-6-klor-9-[(2-etoksy-2-okso-l,2-oksafosforinan-5-yl)metyl]purin (VSC 655; 102 mg, 0,295 mmol) i etanol (2 ml), vann (2 ml) og 2M vandig natriumhydroksyd (1,0 ml, 2 mmol) ble holdt ved 80°C i 3 dager, nøytralisert ved tilsetning av svak sur Amberlite kationbytter-harpiks, filtrert og inndampet til tørrhet for å gi dinatrium 3-(guanin-9-ylmetyl)-4-hydroksybutanfosfonat. A solution of 2-amino-6-chloro-9-[(2-ethoxy-2-oxo-1,2-oxaphosphorinan-5-yl)methyl]purine (VSC 655; 102 mg, 0.295 mmol) in ethanol (2 ml), water (2 ml) and 2M aqueous sodium hydroxide (1.0 ml, 2 mmol) were kept at 80°C for 3 days, neutralized by addition of weakly acidic Amberlite cation exchange resin, filtered and evaporated to dryness to give disodium 3-(guanin-9-ylmethyl)-4-hydroxybutanephosphonate.

Utgangsmaterialene for Eksemplene 5 og 6 ble fremstillet som følger (innbefattet eks.7): The starting materials for Examples 5 and 6 were prepared as follows (including example 7):

2-( acetoksymetyl)- 4- brombutyl- acetat 2-(acetoxymethyl)-4-bromobutyl acetate

Dette mellomproduktet ble syntetisert fra 4-(acetoksy)-3-(acetoksymetyl)-butanol i henhold til fremgangsmåter beskrevet i litteraturen. Utbytte 97% etter hurtigkromatografi (flash column chromatography) på silika (etylacetat + n-heksan 1+1). This intermediate was synthesized from 4-(acetoxy)-3-(acetoxymethyl)-butanol according to methods described in the literature. Yield 97% after flash column chromatography on silica (ethyl acetate + n-hexane 1+1).

TLC Rf 0,67 (Si02, etylacetat + n-heksan 1+1). TLC Rf 0.67 (SiO 2 , ethyl acetate + n-hexane 1+1).

<13>C NMR (CDC13, TMS, 50 MHz): S 170,30 (COO); 63,44 (CH20); 36,27 (CH); 31,67 (Br-CH2); 30,29 (Br-C-CH2); 20,51 (CH3). <13>C NMR (CDCl3, TMS, 50 MHz): S 170.30 (COO); 63.44 (CH 2 O); 36.27 (CH); 31.67 (Br-CH 2 ); 30.29 (Br-C-CH 2 ); 20.51 (CH 3 ).

Dietvl 4- acetoksy- 3-( acetoksymetyl) butanfosfonat Diethyl 4-acetoxy-3-(acetoxymethyl)butanephosphonate

Trietylfosfitt (2,70 g, 16,3 mmol) ble under omrøring tilsatt til 2-(acetoksymetyl)-4-brombutylacetat (VSC 647, Triethyl phosphite (2.70 g, 16.3 mmol) was added to 2-(acetoxymethyl)-4-bromobutyl acetate (VSC 647,

3,95 g, 14,8 mmol) ved 180-190°C og omrøringen fortsatt ved 190°C i 0,5 timer. Residuet ble inndampet i vakuum og holdt under ca 0,1 mBar. Hurtigkromatografi på silika med etylacetat + etanol (9+1) førte til 3,36 g (70%) av produktet. 3.95 g, 14.8 mmol) at 180-190°C and stirring continued at 190°C for 0.5 hours. The residue was evaporated in vacuum and kept below about 0.1 mBar. Flash chromatography on silica with ethyl acetate + ethanol (9+1) gave 3.36 g (70%) of the product.

TLC Rf 0,57 (Si02, etylacetat + etanol 9+1). TLC Rf 0.57 (SiO 2 , ethyl acetate + ethanol 9+1).

<13>C NMR (CDCI3, TMSD, 50 MHz): 5 170,37 (COO); 63,22 (CH20Ac); 61,30/61,18 (CH2OP, J 6 Hz); 37,58/37,27 (CH, J 16 Hz); 24,11/21,29 (CH2-C-P, J 142 Hz); 20,97/20,90 (CH2P J 4 Hz); 20,46 (CH3COO); 16,20/16,08 J 6 Hz. <13>C NMR (CDCl3, TMSD, 50 MHz): δ 170.37 (COO); 63.22 (CH 2 0 Ac); 61.30/61.18 (CH 2 OP, J 6 Hz); 37.58/37.27 (CH, J 16 Hz); 24.11/21.29 (CH2-C-P, J 142 Hz); 20.97/20.90 (CH 2 P J 4 Hz); 20.46 (CH 3 COO); 16.20/16.08 J 6 Hz.

( 2- etoksv- 2- okso- l, 2- oksafosforinan- 5- yl) metanol ( racemisk cis- trans- blandinq ( 2- ethoxy- 2- oxo- l, 2- oxaphosphorinan- 5- yl) methanol ( racemic cis- trans- mixture

VSC 648 (1,05 g; 3,24 mmol) ble oppløst i 16 ml av en 0,5 molar oppløsning av natriumetoksyd i etanol. Oppløsningen ble oppvarmet til 50°C og deretter holdt ved 37°C i 2 timer. Etter inndampning til tørrhet i vakuum, ble residuet ekstrahert med etylacetat og renset ved hurtigkromatografi på silika med etylacetat + etanol (9+1) som eluent. Utbytte 0,462 g (74%) VSC 650 i et isomerforhold (cis-trans) på 0,36/1,00. VSC 648 (1.05 g; 3.24 mmol) was dissolved in 16 mL of a 0.5 molar solution of sodium ethoxide in ethanol. The solution was heated to 50°C and then held at 37°C for 2 hours. After evaporation to dryness in vacuo, the residue was extracted with ethyl acetate and purified by flash chromatography on silica with ethyl acetate + ethanol (9+1) as eluent. Yield 0.462 g (74%) VSC 650 in an isomer ratio (cis-trans) of 0.36/1.00.

TLC Rf 0,26 (Si02; etylacetat + etanol 9+1). TLC Rf 0.26 (SiO 2 ; ethyl acetate + ethanol 9+1).

<13>C NMR (CDC13, TMS, 50 MHz); hoved-isomer - mindre isomer): <13>C NMR (CDCl3, TMS, 50 MHz); major isomer - minor isomer):

S 72,22/72,08 - 70,64/70,52 (CH20 i ring, J 6 Hz); 62,18 - 63,64 (CH2OH); 60,81/60,69 - 61,35/61,23 (CH2-0-P, J 6 Hz); 38,87/38,75 - 37,39/37,27 (CH, J 6 Hz); 24,69/24,52 - 23,35/23,18 (CH2-P, J 8 Hz); 23,06/20,48 - 21,38/18,80 (CH2-C-P, J 129 Hz); 16,25/16,15 (CH3-C-O-P, J 5 Hz). 5-( brommetyl)- 2- etoksy- 2- okso- l. 2- oksafosforinan ( racemisk cis- trans- blandinq) S 72.22/72.08 - 70.64/70.52 (CH 2 O in ring, J 6 Hz); 62.18 - 63.64 (CH 2 OH); 60.81/60.69 - 61.35/61.23 (CH 2 -O-P, J 6 Hz); 38.87/38.75 - 37.39/37.27 (CH, J 6 Hz); 24.69/24.52 - 23.35/23.18 (CH 2 -P, J 8 Hz); 23.06/20.48 - 21.38/18.80 (CH 2 -C -P, J 129 Hz); 16.25/16.15 (CH3-C-O-P, J 5 Hz). 5-(bromomethyl)- 2- ethoxy- 2- oxo- l. 2- oxaphosphorinane (racemic cis- trans- mixture)

N-bromsuccinimid (2,67 g, 15 mmol) ble porsjonsvis tilsatt til en omrørt, isavkjølt oppløsning av 2-etoksy-2-okso-l,2-oksafosforinan-5-yl)metanol (VSC 650, 1,944 g, N-Bromosuccinimide (2.67 g, 15 mmol) was added portionwise to a stirred, ice-cooled solution of 2-ethoxy-2-oxo-1,2-oxaphosphorinan-5-yl)methanol (VSC 650, 1.944 g,

10 mmol) og trifenylfosfin (3,97 g, 15 mmol) i 40 ml diklormetan, hvorpå omrøringen ble fortsatt i 16 timer ved 4°C. Etter fordampning i vakuum, ble dietyleter (-50 ml) tilsatt og blandingen ristet og kraftig omrørt. Det utkrystalliserte trifenylfosfinoksyd ble fjernet ved filtrering og vasket med flere porsjoner eter. De kombinerte ekstraktene ble inndampet til tørrhet og renset ved hurtigkromatografi på silika med etylacetat + etanol (9+1). Utbytte 1,569 g (61%) av VSC 654 i et cis-trans-forhold på 0,7/1,0. TLC Rf 0,57 (Si02 etylacetat + etanol 9+1). <13>C NMR (CDC13, TMS, 50 MHz); hoved-isomer - mindre isomere): S 71,76/71,61 (CH20 i ring, J 6 Hz); 60,74/60,62 - 61,20/61,08 (CH2-0-P, J 16 Hz); 37,56/37,44 - 37,10/36,98 (CH, J 6 Hz); 32,13 - 31,67 (CH2Br); 26,66/26,49 - 25,37/25,23 (CH2P, J 7 Hz); 22,60/20,02 - 20,90/18,32 (CH2-C-P, J 129,4 Hz); 16,13/16,01 (CH3-C-O-P, J 6,1 Hz). Eksempel 7 2- amino- 6- klor- 9-\( 2- etoksy- 2- okso- l. 2- oksafosforinan- 5- yl) metylIpurin og 7- isomer 10 mmol) and triphenylphosphine (3.97 g, 15 mmol) in 40 mL of dichloromethane, whereupon stirring was continued for 16 h at 4°C. After evaporation in vacuo, diethyl ether (∼50 mL) was added and the mixture shaken and vigorously stirred. The crystallized triphenylphosphine oxide was removed by filtration and washed with several portions of ether. The combined extracts were evaporated to dryness and purified by flash chromatography on silica with ethyl acetate + ethanol (9+1). Yield 1.569 g (61%) of VSC 654 in a cis-trans ratio of 0.7/1.0. TLC Rf 0.57 (SiO 2 ethyl acetate + ethanol 9+1). <13>C NMR (CDCl3, TMS, 50 MHz); major isomer - minor isomers): S 71.76/71.61 (CH 2 O in ring, J 6 Hz); 60.74/60.62 - 61.20/61.08 (CH 2 -O-P, J 16 Hz); 37.56/37.44 - 37.10/36.98 (CH, J 6 Hz); 32.13 - 31.67 (CH 2 Br); 26.66/26.49 - 25.37/25.23 (CH 2 P, J 7 Hz); 22.60/20.02 - 20.90/18.32 (CH 2 -C -P, J 129.4 Hz); 16.13/16.01 (CH3-C-O-P, J 6.1 Hz). Example 7 2-amino-6-chloro-9-\(2-ethoxy-2-oxo-1.2-oxaphosphorinan-5-yl)methylIpurine and 7-isomer

En blanding av 5-(brommetyl)-2-etoksy-2-okso-l,2-oksafosforinan (VSC 654; 0,353 g, 1,82 mmol), 2-amino-6-klorpurin (0,50 g, 2,95 mmol) vannfritt kaliumkarbonat (0,50 g, A mixture of 5-(bromomethyl)-2-ethoxy-2-oxo-1,2-oxaphosphorinane (VSC 654; 0.353 g, 1.82 mmol), 2-amino-6-chloropurine (0.50 g, 2, 95 mmol) anhydrous potassium carbonate (0.50 g,

3,62 mmol), og DMF (15 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 7 dager. Kloroform (30 ml) ble tilsatt og etter filtrering ble 3.62 mmol), and DMF (15 mL) was stirred at room temperature for 7 days. Chloroform (30 ml) was added and after filtration the

oppløsningen inndampet til et lite volum i vakuum. Residuet ble renset ved hurtigkromatografi på silika (kloroform + metanol 5+1). Utbytte 0,282 g (45%) som en cis-trans- og 7-9-isomerblanding. the solution evaporated to a small volume in vacuo. The residue was purified by flash chromatography on silica (chloroform + methanol 5+1). Yield 0.282 g (45%) as a mixture of cis-trans and 7-9 isomers.

TLC Rf 0,74 og 0,68 for henholdsvis 7- og 9-isomeren (Si02, kloroform + metanol 5+1). TLC Rf 0.74 and 0.68 for the 7- and 9-isomer respectively (SiO 2 , chloroform + methanol 5+1).

<1>H NMR (CDCI3, TMS, 200 MHz); <5 7,80 og 7,76 (s, H8, 7- og 9-isomerene); 5,4 (bred s, NH2); 4,3-4,1 (m, CH20P); 4,02 (d, CH2N); 2,5-2,4 og 2,1-1,7 (m, CHCH2CH2P) ; 1,37 (dt, CH3-COP). <13>C NMR (CDCI3, TMS, 50 MHz); S 159,38 (C2); 153,93 (C4); 143,50 (C8); 70,91/70,79 - 69,94/69,79 (CH20 i ring, J 7 Hz) 61,79 til 61,45 (2 d, CH2-0-P, J 7 Hz); 44,35 og 43,25 (CH2N); 36,68/36,56 - 35,05/34,93 (CH, J, 6 Hz); 25,88/25,74 - 24,18/24,04 (CH2P, J 7 Hz); 22,99/20,41 - 21,16/18,59 (CH2-C-P, J 129 Hz); 16,59/16,47 (CH3-C-O-P, J 6 Hz). <1>H NMR (CDCl 3 , TMS, 200 MHz); <5 7.80 and 7.76 (s, H8, the 7- and 9-isomers); 5.4 (broad s, NH2); 4.3-4.1 (m, CH 2 0 P); 4.02 (d, CH 2 N); 2.5-2.4 and 2.1-1.7 (m, CHCH2CH2P); 1.37 (dt, CH 3 -COP). <13>C NMR (CDCl3, TMS, 50 MHz); S 159.38 (C2); 153.93 (C4); 143.50 (C8); 70.91/70.79 - 69.94/69.79 (CH 2 O in ring, J 7 Hz) 61.79 to 61.45 (2 d, CH 2 -O-P, J 7 Hz); 44.35 and 43.25 (CH 2 N); 36.68/36.56 - 35.05/34.93 (CH, J, 6 Hz); 25.88/25.74 - 24.18/24.04 (CH 2 P, J 7 Hz); 22.99/20.41 - 21.16/18.59 (CH 2 -C -P, J 129 Hz); 16.59/16.47 (CH3-C-O-P, J 6 Hz).

Biologiske undersøkelser Biological investigations

Test I Virknin<g>er av forbindelsene med formel I på HIV i H9- celler Test I Effects of the compounds of formula I on HIV in H9 cells

Materialer og metoder: HIV- infeksion av H9- celler. Materials and methods: HIV infection of H9 cells.

H9-celler, IO<5> celler per brønn i en 24 brønns plate, suspendert i 2 ml RPMI-medium inneholdende 10% føtalt kalveserum, 100 ^ q/ ml penicillin, 10 /xg/ml streptomycinsulfat og 2 /ig/ml polybrene ble eksponert for HIV (HTLV-IIIB) og forskjellige konsentrasjoner av testforbindelsene. Platene ble inkubert ved 37°C i 5% C02 i 6-7 dager. Innholdet i hver brønn ble deretter homogenisert med en pipette og overført til et sentrifugeglass. Etter sentrifugering i 10 min. ved 1500 rpm, ble supernatanten fjernet og den resulterende cellepellet analysert ved fiksering i metanol på glassplater. Human HIV positivt serum fortynnet 1:80 eller 1:160 ble tilsatt og inkubert i 3 0 min. ved 3 7°C. Platen ble deretter vasket med fosfatbuffer-holdig saltoppløsning (PBS) inneholdende Ca<2+> og Mg<2+>. Antihumant konjugat fra sau (FITC) ble tilsatt og etter en ny inkubering ble platen igjen vasket med PBS. Kontrastfarving ble foretatt med Evans-blått og etter tørking ble frekvensen av HIV-antigenholdige celler bestemt mikroskopisk. Testresultatene er vist i tabell 1. H9 cells, 10<5> cells per well in a 24-well plate, suspended in 2 ml RPMI medium containing 10% fetal calf serum, 100 µg/ml penicillin, 10 µg/ml streptomycin sulfate and 2 µg/ml polybrene were exposed to HIV (HTLV-IIIB) and different concentrations of the test compounds. The plates were incubated at 37°C in 5% CO 2 for 6-7 days. The contents of each well were then homogenized with a pipette and transferred to a centrifuge tube. After centrifugation for 10 min. at 1500 rpm, the supernatant was removed and the resulting cell pellet analyzed by fixation in methanol on glass slides. Human HIV positive serum diluted 1:80 or 1:160 was added and incubated for 30 min. at 37°C. The plate was then washed with phosphate-buffered saline (PBS) containing Ca<2+> and Mg<2+>. Antihuman conjugate from sheep (FITC) was added and after a new incubation the plate was again washed with PBS. Contrast staining was done with Evans blue and after drying, the frequency of HIV antigen-containing cells was determined microscopically. The test results are shown in Table 1.

Tabell I viser at testforbindelsene er aktive hemmere av HIV-formeringen. Table I shows that the test compounds are active inhibitors of HIV propagation.

Test II Cellegiftvirkning Test II Cytotoxic effect

H9-celler, 2xl07 celler per plate, ble inkubert i RPMI-1640 medium inneholdende 10% føtalt kalveserum, 70 mg/l penicillin, 100 mg/l streptomycin og 10 mM hepes i eller uten nærvær av testforbindelser. Antall celler per plate ble bestemt etter 48 timer. Celler inkubert uten testforbindelser undergikk deretter to celledelingscykluser. H9 cells, 2x107 cells per plate, were incubated in RPMI-1640 medium containing 10% fetal calf serum, 70 mg/l penicillin, 100 mg/l streptomycin and 10 mM hepes in or without the presence of test compounds. The number of cells per plate was determined after 48 hours. Cells incubated without test compounds then underwent two cycles of cell division.

F5000 celler, som er humane embryo-celler, lxlO<5> celler per plate, ble inkubert i Eagle's minimumsmedium, supplert med Earle's salter, ikke-essensielle aminosyrer, 10% føtalt kalveserum, 10 mM hepes, 70 mg/l penicillin og 100 mg/l streptomycin i eller uten nærvær av testforbindelser. Antall celler per plate ble bestemt etter 48 timer. Celler inkubert uten testforbindelsene undergikk én celledelingscyklus. Resultatene er angitt som prosent hemming av celleformeringen når konsentrasjonen av forbindelsen er 100 fiK eller 250 /xM. F5000 cells, which are human embryo cells, lxl0<5> cells per plate, were incubated in Eagle's minimum medium, supplemented with Earle's salts, non-essential amino acids, 10% fetal calf serum, 10 mM hepes, 70 mg/l penicillin and 100 mg/l streptomycin in or without the presence of test compounds. The number of cells per plate was determined after 48 hours. Cells incubated without the test compounds underwent one cycle of cell division. The results are given as percent inhibition of cell proliferation when the concentration of the compound is 100 µM or 250 µM.

Tabell II viser at de konsentrasjoner hvor forbindelsene oppviser giftighet, langt overskrider de nødvendige konsentrasjoner for 50% hemming av HIV-formeringen angitt i tabell I. Table II shows that the concentrations at which the compounds exhibit toxicity far exceed the concentrations required for 50% inhibition of HIV propagation indicated in Table I.

Test III Oral biotilchenqeliqhet Test III Oral bioavailability

Oral biotilgjengelighet ble bestemt ved at dyrene (cynomologous monkeys and rats) intravenøst eller oralt ble dosert med forbindelsene. Blodprøver ble tatt etter passende tidsrom for bestemmelse av medikamentnivået i plasma. Passende farmakokinetiske beregninger ble deretter foretatt basert på plasmakonsentrasjon i forhold til tiden. Oral bioavailability was determined by dosing the animals (cynomologous monkeys and rats) intravenously or orally with the compounds. Blood samples were taken after appropriate intervals for determining the drug level in plasma. Appropriate pharmacokinetic calculations were then made based on plasma concentration versus time.

Fra tabellen fremgår det hvorledes plasmakonsentrasjonen av VSA 671 er signifikant høyere etter at VSA 671 var gitt som et ester (VSC 600, VSC 641) eller en ester av 6-deoksy-prodrug (VSC 610). The table shows how the plasma concentration of VSA 671 is significantly higher after VSA 671 was given as an ester (VSC 600, VSC 641) or an ester of the 6-deoxy prodrug (VSC 610).

Claims (7)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av en terapeutisk aktiv forbindelse med formel hvor R<1> er hydrogen, hydroksy, merkapto, klor eller amino; R<2> er hydrogen, hydroksy, fluor, klor eller amino; R<3> og R<4>, uavhengig av hverandre, er valgt fra hydroksy eller en esterrest derav som skriver seg fra en karboksylsyre R<6>COOH, hvor R<6> er hydrogen, C-j-g-alkyl eller fenyl, eller R<3> sammen med R<4> er hvor M er hydrogen, Cx- C^ alkyl eller et farmasøytisk akseptabelt motion; og n er 1 eller 2; med det forbehold at når R3 og R<4> er hydroksy, da er R<1> ikke hydrogen, hydroksy eller klor, og farmasøytisk akseptable salter derav, karakterisert vedA. kondensasjon av en acyklisk sidekjede hvor W er en terminalt utgående gruppe, til N-9-stillingen av et purinderivat B. en forbindelse med formel I hvor R<3> og R<4> sammen er underkastes en ringspalting for å danne en forbindelse hvor en av R<3> og R<4> er og den annen er hydroksy.1. Analogy method for the preparation of a therapeutically active compound of formula where R<1> is hydrogen, hydroxy, mercapto, chlorine or amino; R<2> is hydrogen, hydroxy, fluorine, chlorine or amino; R<3> and R<4>, independently of each other, are selected from hydroxy or an ester residue thereof that writes from a carboxylic acid R<6>COOH, where R<6> is hydrogen, C-j-g-alkyl or phenyl, or R<3> together with R<4> are where M is hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or a pharmaceutically acceptable counterion; and n is 1 or 2; with the proviso that when R3 and R<4> are hydroxy, then R<1> is not hydrogen, hydroxy or chlorine, and pharmaceutically acceptable salts thereof, characterized by A. condensation of an acyclic side chain where W is a terminal leaving group, to the N-9 position of a purine derivative B. a compound of formula I where R<3> and R<4> together are is subjected to ring cleavage to form a compound wherein one of R<3> and R<4> is and the other is hydroxy. 2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av en forbindelse med formel I hvor R<2>, R<3> og R<4> er som angitt i krav 1, og R<1> er hydrogen, hydroksy, merkapto eller amino, karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer.2. Process according to claim 1 for the preparation of a compound of formula I where R<2>, R<3> and R<4> are as stated in claim 1, and R<1> is hydrogen, hydroxy, mercapto or amino, characterized by the fact that corresponding starting materials are used. 3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2 for fremstilling av forbindelsen i form av en optisk isomer, karakterisert ved anvendelse av tilsvarende utgangsmaterialer eller separering av produktet.3. Process according to claim 1 or 2 for producing the compound in the form of an optical isomer, characterized by the use of corresponding starting materials or separation of the product. 4. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1-3 for fremstilling av forbindelser hvor R<3> og R<4> begge er hydroksy, karakterisert ved anvendelse av tilsvarende utgangsmaterialer.4. Process according to one of claims 1-3 for the production of compounds where R<3> and R<4> are both hydroxy, characterized by the use of corresponding starting materials. 5. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1-3 for fremstilling av forbindelser hvor R<3> er eller R<3> sammen med R<4> er karakterisert ved anvendelse av tilsvarende utgangsmaterialer.5. Method according to one of claims 1-3 for the production of compounds where R<3> is or R<3> together with R<4> are characterized by the use of corresponding starting materials. 6. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1-4 for fremstilling av 9-(4-hydroksy-2-hydroksymetylbutyl)adenin, karakterisert ved anvendelse av tilsvarende utgangsmaterialer.6. Process according to one of claims 1-4 for the production of 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)adenine, characterized by the use of corresponding starting materials. 7. Fremgangsmåte ifølge krav 3 og 4 for fremstilling av (R)-9-(4-hydroksy-2-hydroksymetylbutyl)adenin, karakterisert ved anvendelse av tilsvarende utgangsmaterialer.7. Process according to claims 3 and 4 for the production of (R)-9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)adenine, characterized by the use of corresponding starting materials.