NO173958B - Fremgangsmaate for paavisning av tilstedevaerelse av antistoff mot hiv-virus - Google Patents
Fremgangsmaate for paavisning av tilstedevaerelse av antistoff mot hiv-virus Download PDFInfo
- Publication number
- NO173958B NO173958B NO87874740A NO874740A NO173958B NO 173958 B NO173958 B NO 173958B NO 87874740 A NO87874740 A NO 87874740A NO 874740 A NO874740 A NO 874740A NO 173958 B NO173958 B NO 173958B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptide
- peptides
- sequence
- complex
- hiv
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 125
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 20
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 2
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 23
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 20
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 3
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 abstract description 2
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 13
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 12
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 5
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 101800001386 Peptide II Proteins 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010013377 Retroviridae Proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 150000002742 methionines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- -1 nitroaryl halides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229920001187 thermosetting polymer Polymers 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKUOJDGRNKVVFF-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O LKUOJDGRNKVVFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHGKQRBLJOZEL-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenecarbodithioic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(S)=S)C=C1 NMHGKQRBLJOZEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 101000906736 Escherichia phage Mu DNA circularization protein N Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical group SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000183024 Populus tremula Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000764570 Streptomyces phage phiC31 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108010053118 myohemerythrin Proteins 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000012106 screening analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/221—Retrovirus related, or human immunodeficiency virus related, or simian immunodeficiency virus related
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for påvisning av tilstedeværelse av antistoff mot HIV-virus.
Med oppdagelsen av at sykdommene kalt lymfadenopatisyndrom og ervervet immundefektsyndrom (AIDS) forårsakes av et infektiøst retrovirus betegnet som lymfadenopativirus (LAV), humant T-celle lymfotropt virus-III (HTLV-III), AIDS-relatert virus (ARV) eller immundefektassosiert virus (IDAV), er det oppstått et øyeblikkelig behov for å være i stand til å påvise potensielle vektorer av sykdommen, slik som blod fra sykdomsangrepne individer som kan anvendes til transfusjoner, eller fra hvilke spesifikke blodfaktorer kan isoleres.
For å påvise potensielle vektorer av sykdommen er
det nødvendig å ha virusproteiner og/eller antistoffer mot slike proteiner. På grunn av de risikoer som er forbundet med dyrkning av LAV/HTLV-III-retroviruset, er det en betydelig interesse for å etablere metoder til oppnåelse av virusproteinene eller deres immunologiske ekvivalenter uten behov for å håndtere store volumer av levende, potensielt infektiøst virus. Ved valg av alternativer må man være oppmerksom på at virusene er blitt rapportert å være sterkt polymorfe, idet de hyppig forandres når retroviruset over-føres .
De forskjellige antigener for retroviruset beskrives av Saxinger et al., Science (1985) 227:1036-1038. Se også Gallo et al., ibid. (1984) 224:500, Sarangadharn et al.,
ibid. 224:506, Barre-Sinoussi et al., ibid. (1983) 220:868, Montagnier et al., in Human T-Cell Leukemia/Lymphoma Virus, Gallo, Essex, Gross, red. (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York), 1984, side 363. Disse kan innbefatte, men er ikke begrenset til, pl3, pl8, p25, p36, gp43, p55, gp65, gpllO, etc, hvor tallene kan avvike fra referent til referent.
Hopp og Woods, Proe. Nati. Acad. Sei. USA (1981) 7_8:3824, beskriver kriterier til utvelgelse av peptider som potensielle epitoper av polypeptider på basis av deres rela-tive hydrofilisitet. Ved en undersøkelse hvor disse kriterier ble anvendt, ble det syntetisert et 12-aminosyre-peptid som binder 9% av antistoffer fremkalt av det natur lige protein (Hopp, Molec. Immunol. (1981) ^8:869). Generelt er Hopp/Woods-kriteriet blitt vist å ikke ha en høy forutsigelsesverdi. Enn videre er det påvist epitoper som ikke er hydrofile (Kazim et al., Biochem. J. (1982) 203:201). Andre undersøkelser av polypeptidantigenisitet innbefatter Green et al., Cell (1982) 2%\ M1, hvor det ble anvendt peptider som fremkalte antistoffer som var i stand til å bindes til det naturlige protein, mens derimot antistoffer som ble fremkalt av det naturlige protein, ikke bandt til peptidene, og Trainer et al., Nature (1984) 312:127, hvis resultater med myohemerythrin var parallelle med de oppnådd av Green et al.
Den fullstendige nucleotidsekvens av LAV ble rapportert av Wain-Hobson et al., Cell (1985) 40:9. Den fullstendige sekvens for HTLV-III ble rapportert av Muesing et al., Nature (1985) 313:450, mens den fullstendige sekvens for ARV ble rapportert av Sanchez-Pescador et al., Science (1985) 227:484. Alle tre virus utviser betydelig nucleotidhomologi og ligner hverandre med hensyn til mor-fologi, cytopatologi, krav til optimal revers transkriptase-aktivitet og i det minste enkelte antigeniske egenskaper (Levy et al., Science (1984) 225:840, Shupbach et al., Science (1984) 224:503) og bør derfor betraktes som isolater av samme virus. Se også Chang et al., Science (1985) 228:93. På basis av disse og andre data har Human Retrovirus Subcommittee under International Committee on the Taxonomy of Viruses foreslått navnet Human Immuno-deficiency Virus eller humant immundefektvirus (HIV) for denne gruppe nært beslektede virus (Science (1986) 232:697). Denne be-tegnelse vil bli anvendt i foreliggende søknad.
Peptidsekvenser som er i stand til immunologisk å etterligne proteiner for hvilke det kodes i HIV retro-virusets pol- og gag-områer, leveres som reagenser til bruk ved screening av blod og blodprodukter for tidligere eksponering for retroviruset. Peptidene er minst 5 aminosyrer lange og kan anvendes ved forskjellige spesifikke bindings-analyser til påvisning av antistoffer mot HIV-virus, til
påvisning av HIV-antigener eller som immunogener.
I foreliggende beskrivelse skal et virus anses for
å være det samme som eller ekvivalent med HIV, hvis det hovedsakelig oppfyller følgende kriterier:
(a) viruset er tropisk for T-lymfocytter, i særdeleshet T-hjelperceller (CD4+, i henhold til den i Bernard et al., red. Leucocyte Typing, New York, Springer Verlag, 1984, definerte, internasjonale nomenklatur), (b) viruset er cytopatisk for infiserte CD4<+->celler (og ikke transformerende slik som HTLV-I og -II), (c) viruset koder for en RNA-avhengig DNA-polymerase 2+
(revers transkriptase) som er Mg -avhengig (optimal konsentrasjon 5mM), har et pH-optimum på 7,8, inhiberes ikke av actinomycin D og kan anvende oligo (dT)^2-18som Pr^-mer for revers transkripsjon fra dets 3' LTR,
(d) viruset danner bånd i en saccharosegradient ved
en densitet på ca. 1,16,
(e) viruset kan merkes med [ 3H]-uridin,
(f) viruset er hovedsakelig immunologisk kryss-reaktivt med de proteiner som kodes av gag-, env- og pol-områdene av HIV, og (g) viruset har betydelig nucleotidhomologi (ca. 75-100%) og aminosyresekvenshomologi (ca. 75-100%) med LAV eller HTLV-III.
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for påvisning av tilstedeværelse av antistoff mot HIV-virus, ved hvilken en prøve kombineres med et preparat med epitope posisjoner som immunologisk konkurrerer med HIV-epitope posisjoner, hvorved antistoffer bindes til et slikt proteinpreparat under dannelse av minst ett spesifikt bindingsparkompleks, og hvor omfanget av kompleksdannelse bestemmes, hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at det som reagens i analysemediet anvendes et preparat inneholdende minst ett peptid med fra 12 til 50 aminosyrer, og med minst tolv på hverandre følgende aminosyrer i en sekvens som forekommer i sekvensen av minst én av følgende peptidsekvenser, hvori angitte peptid har hovedsakelig samme immunoreaktivitet overfor antistoffer mot HIV som angitte sekvens: I (126) Gln-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met-Ala-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-Ile-Val-Asp-Ile-Ile-Ala-Thr-Asp-Ile;
II (123)
Ile-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Glu-Leu-Gln-Lys-Gln-Ile-Thr-Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala; eller
Ila (124)
Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala,
og hvor peptidet er fritt for andre peptider eller er konjugert til et makromolekyl mot hvilket antistoffet i det vesentlige er fraværende i humane sera.
Nye peptider er tilveiebragt som immunologisk etter-ligner proteiner kodet av HIV-retroviruset, i særdeleshet proteiner kodet av virusgenomets pol-område. For å gi plass for variasjoner fra stamme til stamme blant forskjellige isolater kan justeringer for konservative substitusjoner og utvelgelse blant alternativene, hvor ikke-konservative substitusjoner er på tale, foretas. Disse peptider kan anvendes individuelt eller sammen til påvisning av viruset eller antistoffer mot viruset i en fysiologisk prøve. Avhengig av arten av testforskriften kan peptidene være merket eller umerket, bundet til en fast overflate, konjugert til en bærer eller andre forbindelser eller lignende .
De interessante peptider vil være avledet av peptider kodet av pol- og gag-områdene. Disse peptider vil primært være avledet av p31 fra pol-området og p25 fra gag-området. Disse peptider vil i foreliggende søknad bli forsynt med romertall og vil også bli forsynt med numeriske betegnelser som arbitrært er knyttet til den måte hvorpå
de fremstilles. Av særlig interesse er det kodningsområde som strekker seg ca. basepar (bp) 4265 til bp 4519, i særdeleshet fra ca. bp 4265 til bp 4399, og fra bp 4385 til bp 4519, innbefattende et kortere segment fra bp 4430 til bp 4519. Også det kodningsområde som strekker seg fra ca.
bp 897 til bp 986, er av særlig interesse. (Nummerering i henhold til Wain-Hobson et al., supra).
De anvendte peptider vil innbefatte minst 12, vanligvis færre enn ca. 50, mer vanlig færre enn ca. 35 og fortrinnsvis færre enn 25 aminosyrer inkludert i en sekvens, som HIV-retroviruset koder for. I hvert tilfelle er det ønskelig at oligopeptidet er så lite som mulig, samtidig med at det hovedsakelig bibeholder hele det større peptids sensibilitet. I enkelte tilfeller kan det væreønskelig å sammenføye to eller flere oligopeptider som ikke er overlappende, under dannelse av en enkelt peptidstruktur, eller anvende dem på samme tid som individuelle peptider som separat eller sammen gir ekvivalent sensibilitet med opphavet.
Peptidene kan modifiseres ved innføring av konservative eller ikke-konservative substitusjoner i peptidene,
idet vanligvis mindre enn 20 antallprosent, mer alminnelig mindre enn 10 antallsprosent av aminosyrene, utskiftes.
I de situasjoner hvor områder finnes å være polymorfe, kan det være ønskelig å variere én eller flere spesielle aminosyrer for mer effektivt å etterligne de forskjellige retro-virusstammers avvikende epitoper.
Det skal forstås at de i forbindelse med oppfinnelsen, anvendte polypeptider ikke behøver å være identiske med noen spesiell HIV polypeptidsekvens, så lenge de angjeldende forbindelser er i stand til å gi immunologisk konkurranse med proteiner fra i det minste én av HIV retro-virusstammene. Angjeldende polypeptider kan derfor være gjenstand for forskjellige endringer slik som innskudd, utelatelser og substitusjoner, enten konservative eller ikke-konservative, hvor slike endringer kan gi visse fordeler ved deres bruk. Med konservative substitusjoner menes substitusjoner i grupper slik som gly, ala; val, ile, leu;
asp, glu; asn, gin; ser, thr; lys, arg; phe, tyr og norleu, met. Vanligvis vil sekvensen ikke avvike mere enn 20% fra sekvensen for minst én HIV retrovirusstamme, med mindre ytterligere aminosyre kan være tilføyd ved den ene ende eller begge, med det formål å tilveiebringe en "arm" hvormed peptidene ifølge oppfinnelsen lett kan immobiliseres.
Armene vil vanligvis være minst 1 aminosyre lange og kan være 50 eller flere aminosyrer, oftere 1 til 10 aminosyrer lange.
En eller to aminosyrer kan dessuten føyes til
endene på et oligopeptid eller peptid for å lette sammen-kobling av peptider med hverandre, av hensyn til kobling til en bærer eller et større peptid, av grunner som vil bli omtalt senere, for å modifisere de fysiske eller kjemiske egenskaper av peptidet eller oligopeptidet eller lignende.
Aminosyrer slik som tyrosin, cystein, lysin, glutamin- eller asparaginsyre eller lignende, kan innføres ved peptidets eller oligopeptidets C- eller N-ende for å tilveiebringe en verdifull funksjonalitet til sammenkjedning. Cystein foretrekkes spesielt for å lette covalent kobling til andre peptider eller for dannelse av polymerer ved oxydasjon. Kombinasjoner av cystein med mellomliggende aminosyreavstandsstykker er også verdifulle. Eksempelvis kan to cysteinrester adskilles av én eller flere a-amino-syrerester med en enkelt sidekjede med høyst 4 carbonatomer (idet en liten størrelse ønskes for å unngå forstyrrelse
av koblingsreaksjoner). Glycinrester foretrekkes av denne årsak, spesielt en til tre glycinrester mellom aminosyrer tilføyet for å lette kobling. Cysteinrester er spesielt verdifulle ved dannelse av nettverkspolymerer ved oxydasjon.
I slike tilfeller foretrekkes det å ha minst tre cysteinrester i molekylene som sammenkjedes, fortrinnsvis ved anvendelse av cysteinrester tilsatt til peptidenes ende-avsnitt.
Peptid- eller oligopeptidsekvensene kan dessuten avvike fra den naturlige sekvens ved at sekvensen er modi-fisert ved NH2-terminalacylering, f.eks. acetylering eller thioglycolsyreamidering, carboxyterminalamidering, f.eks. med ammoniakk eller methylamin, for å tilveiebringe posisjoner for sammenkjedning med en bærer eller et annet molekyl.
De angjeldende peptider og oligopeptider vil i det etterfølgende omtales. Peptid I (126) som kodes i området bp 4265 til bp 4399, vil ha følgende aminosyresekvens hvori oligopeptider innbefattet i den etterfølgende sekvens, vil innbefatte lineære epitoper innenfor denne sekvens:
Dette peptid vil fortrinnsvis høyst ha ca. 45 aminosyrer kodet av HIV-genomet.
Det neste peptid II (123) vil være kodet av det område som strekker seg fra ca. bp 4385 til bp 4519, og vil ha følgende sekvens hvori oligopeptider innbefattet i den etterfølgende sekvens, vil innbefatte lineære epitoper innenfor denne sekvens:
Av interesse er også olig.opeptidet Ila: gag-oittrådepeptidet III (15 8) vil være kodet av det område som strekker seg fra ca. bp 897 til 986 og vil ha følgende sekvens hvor oligopeptider innbefattet i den etter-følgende sekvens, vil innbefatte lineære epitoper med denne sekvens:
Av særlig interesse er anvendelsen av mercaptan-gruppen i cysteiner eller thioglycolsyrer anvendt til acyler-ing av terminalaminogrupper eller lignende, til sammenkjedning av to av peptidene eller oligopeptidene eller kombinasjoner derav, med en disulfidbinding eller en lengre binding. Til oppnåelse av dette kan det anvendes forbindelser med bis-halogenacetylgrupper, nitroarylhalogenider eller lignende, hvor reagensene er spesifikke for thio-grupper. Sammenkjedning mellom de to mercaptogrupper i de forskjellige peptider eller oligopeptider kan være en enkelt-binding eller en sammenkjedningsgruppe på minst 2, vanligvis minst 4 og høyst ca. 16, vanligvis høyst ca. 14 carbonatomer.
Angjeldende peptider kan anvendes sammenkjedet med en oppløselig makromolekylær (f.eks. ^5kDal) bærer.
Bæreren kan hensiktsmessig være en enten naturlig forekomm-ende eller syntetisk polyaminosyre mot hvilken det er usannsynlig at man vil støte på antistoffer i humant serum. Blant illustrerende polypeptider er poly-L-lysin, kvegserum-albumin, albuskjell hemocyanin, kveggammaglobulin, etc. Valget er primært et spørsmål om bekvemmelighet og til-gjengelighet.
Ved slike konjugater vil det være minst ett molekyl av minst ett foreliggende peptid pr. makromolekyl, og høyst ca. 1 pr. 0,5kDal, vanligvis høyst ca. 1 pr. 2kDal av makro-molekylet. Ett eller flere forskjellige peptider kan
kjedes til det samme molekyl.
Sammenkjedningsmåten er konvensjonell, idet det anvendes slike reagenser som p-maleimidobenzosyre, p-methyl-dithiobenzosyre, maleinsyreanhydrid, ravsyreanhydrid, glutaraldehyd, etc. Bindingen kan forekomme ved N-enden, C-enden eller i en posisjon mellom molekylets ender. Foreliggende peptid kan derivatiseres ved sammenkjedning, kan sammenkjedes mens det er bundet til en bærer eller lignende .
Forbindelsene kan anvendes som merkede eller umerkede forbindelser avhengig av deres anvendelse. (Med markør tenkes det på et molekyl som direkte eller indirekte gir et påviselig signal). Forskjellige markører kan anvendes slik som radionuklider, enzymer, fluorescensfremkallende midler, kjemiluminescensfremkallende midler, enzymsubstrater, cofaktorer eller inhibitorer, partikler, f.eks. magnetiske partikler, kombinasjoner av ligander og reseptorer, f.eks. biotin og avidin eller lignende. Polypeptidene kan dessuten modifiseres på forskjellig måte med henblikk på binding til en overflate, f.eks. mikrotiter-plater, glassperler, kromatografiske overflater, f.eks. papir, cellulose, silicagel eller lignende. Den bestemte måte hvorpå polypeptidene sammenføyes med en annen forbindelse eller overflate, er konvensjonell og er grundig belyst i litteraturen. Se f.eks. US patentskrift 4.371.515, 4.487.715 og de deri siterte patentskrifter.
Forskjellige analyseforskrifter kan anvendes til påvisning av tilstedeværelsen av enten antistoffer mot retrovirusproteiner eller selve retrovirusproteinene. Av særlig interesse er anvendelse av peptidet som det merkede reagens, hvor markøren muliggjør et påviselig signal eller binding av peptidet, enten direkte eller indirekte til en overflate, hvor antistoff mot peptidet i prøven vil bli bundet til peptidet på overflaten. Tilstedeværelsen av humant antistoff bundet til peptidet, kan deretter påvises ved anvendelse av et xenogent antistoff som er spesifikt for humant immunglobulin, normalt både humant IgM og IgG eller et merket protein som er spesifikt for immunkomplekser, f.eks. Rf-faktor eller S. aureus protein A.
Forskjellige heterogene forskrifter kan anvendes såvel konkurrerende som ikke-konkurrerende. Peptid kan bindes til en overflate eller bærer, og merket antistoff gis mulighet til å konkurrere med antistoff i prøven om den begrensede mengde bundet peptid. Mengden av markøren bundet til bæreren, vil stå i relasjon til mengden av konkurrerende antistoff i prøven.
Antistoff vil kunne bindes til bæreren og prøven kombineres med merket peptid. Etter kontakt av reaksjons-blandingen med det bundne antistoff, vil mengden av markør bundet til bæreren, stå i relasjon til mengden av beslektet antistoff i prøven.
Xenogent antihumant antistoff, f.eks. antistoffer mot F av IgG og IgM (immunoglobuliner) vil kunne bindes til en bærer. Prøven bringes i kontakt med immunoglobu-linene og det merkede peptid, hvorved mengden av merket peptid bundet til bæreren, vil være indikativ for tilstedeværelsen av de beslektede antistoffer.
Alternativt kan det anvendes homogene analyser hvor peptidet bindes til et enzym, et fluorescensffemkallende middel eller en annen markør, hvor bindingen av antistoff til peptidet resulterer i at man er i stand til å skjelne mellom markør involvert i et spesifikt bindingsparkompleks og markør som ikke er involvert i komplekset. For analyser omfattende slike teknikker, henvises det eksempelvis til US patentskrifter nr. 3.817.837, 3.850.752, 3.901.654, 3.935.074, 3.984.533, 3.996.345, 4.034.074 og 4.098.876.
Som illustrasjon av foreliggende oppfinnelse kan foreliggende peptider konjugeres til et fluorescerende molekyl slik som fluorescein, rhodamin eller umbelliferon. Forskjellige teknikker kan anvendes til påvisning av kompleksdannelse med antistoffer, f.eks. fluorescenspolarisasjon. Ved denne analyse er det en forskjell i fluorescens-polarisasjonen mellom kompleksbundet og ikke-kompleksbundet peptidkonjugat. Det finnes apparater til måling av forandringer i fluorescenspolarisasjon, f.eks. TDx, som markedsføres av Abbott Laboratories, Chicago, Illinois.
Et eksempel på en analyseteknikk er anvendelsen av
en prøvebeholder, f.eks. mikrotiterplatebrønner, hvor foreliggende peptider eller konjugater derav, adhereres til beholderens bunn og/eller vegger, enten covalent eller ikke-covalent. Prøven, normalt humant blod eller serum fortynnet i et passende, bufret medium, tilsettes til beholderen, og tilstrekkelig tid får forløpe til kompleksdannelse mellom polypeptidet eller polypeptidene og eventuelle beslektede antistoffer i prøven. Supernatanten fjernes, og beholderen vaskes for å fjerne ikke-spesifikt bundne proteiner.
Et merket, spesifikt bindingsprotein som spesifikt bindes til komplekset, anvendes til påvisning. Til beholderen kan tilsettes xenogene antisera til humant immuno-globulin, i særdeleshet anti-humant IgM og IgG i et passende, bufret medium. De xenogene antisera vil normalt bli merket med en påviselig markør, f.eks. et radionuklid eller enzym. Istedenfor antisera kan proteiner som er spesi-
fikke for immunkomplekset, anvendes, f.eks. S. aureus protein A. Markøren kan deretter påvises. Eksempelvis tilsettes det ved et enzym en fremkalleroppløsning etter fjerning av ikke-spesifikt bundet enzyramarkør. Fremkaller-oppløsningen vil inneholde et enzymsubstrat og eventuelt enzymcofaktorer, kromogener, etc, som etter reaksjon gir et farget eller fluorescerende produkt som hhv. kan påvises kolorimetrisk eller fluorimetrisk.
Peptidene kan fremstilles på mange forskjellige måter. Da peptidene er forholdsvis korte, kan de syntetis-eres i oppløsning eller på en fast bærer i henhold til kon vensjonelle teknikker. Forskjellige automatiske synteti-satorer kan fås i handelen i dag og kan anvendes i henhold til kjente metoder. Se f.eks. Stewart og Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. utgave, Pierce Chemical Co., 1984 og Tam et al., J. Am. Chem. Soc. (1983) 105:6442.
Alternativt kan hybrid DNA-teknologi anvendes, hvorved et syntetisk gen kan fremstilles ved anvendelse av enkle strenger som koder for polypeptidet, eller hovedsakelig komplementære strenger dertil, hvor de enkle strenger overlapper og kan bringes sammen i et normaliseringsmedium for å hybridisere. De hybridiserte strenger kan deretter ligeres under dannelse av det komplette gen, og ved valg av passende terminaler kan genet innføres i ekspresjons-vektorer som er lett tilgjengelige i dag. Se f.eks. Maniatis et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, CSH, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. Det område av virusgenomet som koder for peptidet, kan også klones ved konvensjonelle rekombinant DNA-teknikker og uttrykkes (se Maniatis, supra).
Blant DNA kodningssekvenser som kan anvendes til å uttrykke peptidene", er følgende:
Fragmenter av disse sekvenser kan anvendes til ekspresjon av peptidfragmenter, konservative baseforandringer, hvorved det eller de modifiserte kodoner koder for samme aminosyre(r), kan foretas, eller ikke-konservative forandringer, hvorved den resulterende aminosyre kan være en konservativ eller ikke-konservativ forandring i aminosyre-sekvensen som tidligere omtalt, kan foretas.
Kodingssekvensen kan utvides enten ved 5'- eller 3'-enden eller begge for å forlenge peptidet under bibehold-else av dets epitopeposisjon. Utvidelsen eller forlengelsen kan gi en arm til sammenkjedning, f.eks. med en markør slik som et enzym, til sammenføyning av to eller alle peptidene i samme kjede, under tilveiebringelse av antigenisk aktivitet eller lignende.
Med henblikk på ekspresjon vil kodningssekvensen
bli forsynt med start- og stoppkodoner, promotor- og terminatorområder, og vanligvis et replikasjonssystem for tilveiebringelse av en ekspresjonsvektor for ekspresjon i en cellevert, f.eks. en prokaryotisk eller eukaryotisk, bakterie-, gjær-, pattedyr-cellevert.
Selve sekvensene, fragmenter derav eller større sekvenser, vanligvis på minst 15 baser, fortrinnsvis minst 18 baser, kan anvendes som prober til påvisning av retrovirus RNA eller provirus DNA. Tallrike teknikker finnes beskrevet slik som Grunstein-Hogness-teknikken, Southern-teknikken, Northern-teknikken, dot-blot-teknikken, for-bedringer derav samt andre metoder. Se f.eks. WO 83/02277
og Berent et al., Biotechniques (1985) 2:2°É3*
Polypeptidene kan hensiktsmessig fremstilles som fusjonerte proteiner hvor polypeptidet kan være det fusjonerte polypeptids N- eller C-ende. Det resulterende, fusjonerte protein vil i seg selv kunne anvendes direkte som reagens, eller det omhandlede polypeptid kan spaltes fra hele den resterende sekvens av det fusjonerte protein eller en del derav. Med et polypeptid hvor det ikke er noen indre methioniner, kan polypeptidet spaltes ved hjelp av cyanogenbromid ved innføring av et methionin ved fusjons-stedet. Når det er et indre methionin, vil det være nød- vendig å sørge for et proteolytisk spaltningssted, f.eks. polylysin og/eller -arginin eller kombinasjoner derav, eller det indre methionin vil kunne erstattes med en aminosyre slik som leucin og et N-terminalmethion tilsettes for cyanogenbromidspaltning. En lang rekke forskjellige proteaser, herunder dipeptidaser, er velkjente, og det passende behandlingssignal vil kunne innføres på riktig sted.Behandlingsignalet kan ha tandemgjentagelser for å sikre spaltning, da tilstedeværelsen av én eller flere fremmede aminosyrer ikke vil interferere med anvendeligheten av de omhandlede polypeptider.
Avhengig av analysens art kan den fysiolgiske prøve, f.eks. saliva, blod, plasma eller serum, forbehandles ved fortynning i et analysemedium som vanligvis vil være et vandig, bufret medium med en buffer valgt blant forskjellige buffere slik som fosfat, tris eller lignende. Et foretrukket fortynningsmiddel er blotto (2,5 vekt/vol% fettfri tørrmelk, 0,01% thimerosol, 0,05% "Antifoam" A i 0,01 M natriumfosfat, pH 7,2 og 0,15 M NaCl). Vanligvis vil pH-verdien ligge i området fra 6 til 9. Prøven kombineres deretter med reagenset i henhold til den valgte forskrift, og tilstrekkelig tid tillates å forløpe til at binding kan finne sted. Når et heterogent system anvendes, vil bind-ingstrinnene vanligvis bli etterfulgt av vaskninger for å minimere ikke-spesifikk binding. Ved prosedyrens avslutning påvises markøren på konvensjonell måte.
Utover anvendelse av foreliggende peptider og ana-loger derav til analyser, kan peptidene også i seg selv, eller i kombinasjon, finne anvendelse i vaksiner. Peptidene kan formuleres på hensiktsmessig måte, generelt til kon-sentrasjoner i intervallet fra 1 ug til 20 mg/kg vert. Fysiologisk akseptable medier kan anvendes som bærere, slik som sterilt vann, saltvann, fosfatbufret saltvann og lignende. Adjuvanser slik som aluminiumhydroxydgel eller lignende, kan anvendes. Administreringen kan skje ved injek-sjon, f.eks. intramuskulært, peritonealt, subkutant, intra-venøst, etc. Administreringen kan skje én eller flere ganger, vanligvis med 1 til 4 ukers mellomrom.
Oppfinnelsen belyses nærmere i de etterfølgende eksempler.
Forsøk
Peptider ble anbragt på en t-butyloxycarbonyl(BOC)-methylbenzylcysteinfenylacetamidomethyl(PAM)polystyren/di-vinylbenzenharpiks.
Symmetriske anhydridkoblinger ble utført i en syn-tetisator av typen Applied Biosystems 430A. Benzylbasert sidekjedebeskyttelse og BOC-alfa-aminbeskyttelse ble anvendt. Tryptofan ble beskyttet med formylgruppen og methionin med dets sulfoxyd, idet begge beskyttelsesgrupper ble fjernet ved konvensjonelle prosedyrer.
Peptidene ble radiomerket ved innføyelse av en<3>H-glycinrest i sekvensen. Peptidene ble avbeskyttet og spaltet fra harpiksen etter Tam "lav-høy" HF-forskriften (Tam et al., supra). Peptidene ble ekstrahert fra harpiksen i 5% eddiksyre og ble underkastet gelfiltrerings-kromatografi i 5% eddiksyre.
De ovenfor syntetiserte peptider ble enkelte ganger oxydert via cysteinrestene under dannelse av nettverkspolymerer. Dette ble utført ved oppløsning av det lyofiliserte peptid i 0,1 M carbonat/bicarbonat, 6 M guanidin-HCl,
pH 9,0, til en konsentrasjon på 5-10 mg/ml. Den resulterende oppløsnings pH ble regulert og innstilt etter behov til 9,0, og oppløsningen fikk stå under omrøring til romtemperatur over natten. Resulterende oppløsninger ble anvendt som et belegningsantigen ved de nedenfor beskrevne ELISA-analyser.
Analyse ved ELISA
Peptid 123, 124 og 126 ble oppbevart som lager-løsninger på 4 mg/ml i 6 M Gu-HCl eller som de ovenfor beskrevne, oxyderte peptidforråd. Peptid 158 og 158E ble oppbevart ved 4 mg/ml i 0,05 M carbonat/bicarbonatbuffer
(pH 9,6). Peptidene ble fortynnet i 0,05 M carbonat/bi-carbonatbuf f er (pH 9,6) til en sluttkonsentrasjon på
5-800 ug/ml. Porsjoner på 100 ul ble tilsatt til hver mikro-titerbrønn og ble inkubert ved 4°C over natten. Platene ble deretter blokkert med blotto (5 vekt/volum% fettfri
tørrmelk, 0,01% thimerasol, 0,01% "Antifoam" A i 0,01 M natriumfosfat, pH 7,2, 0,15 M natriumklorid) ved 37°C i 1 time. Serum- eller plasmaprøvene ble fortynnet 1:101 eller 1:21 med fortynningsmiddel (2,5 vekt/vol% fettfri tørrmelk, 0,01% thimerasol, 0,005% "Antifoam" A i 20 ni natriumcitrat) og 100 ul fortynnet serum eller plasma ble tilsatt pr. brønn i 1 time ved 37°C. Serumet eller plasmaet ble oppsugd, og platene ble vasket tre ganger i vaskebuffer (0,15 M NaCl, 0,05 vekt/vol% "Tween"-20) før tilsetning av 100 ug geiteanti-humant Ig/pepperrotperoxydasekonjugat (fortynnet 1:10.000 i fortynningsmiddel inneholdende 1% normalt geiteserum i citratbuffer, pH 7,0) ved 37°C i 1 time. Konjugatet ble fjernet, og platene ble vasket igjen tre ganger som ovenfor beskrevet. ELISA-analysen ble fremkalt ved tilsetning av 100 ul/brønn substratoppløsning (80 ug/ml tetramethylbenzidin, 0,0015% hydrogenperoxyd i citrat/fos-fatbuffer, pH 6,0) ved romtemperatur i 30 minutter. Reak-sjonene ble stanset ved tilsetning av 100 ul 3N ^SO^ pr. brønn, og forholdet mellom den optiske densitet ved 450 nm og 630 nm ble bestemt med en automatisert ELISA-avleser.
Peptider fra pol-området ble testet i ELISA-systemet ved erstatning av helt viruslysat i Genetic Systems Corp. LAV EIA-analysen. Sera ble fortynnet 1:101, og peptidene ble anvendt i både oxydert og ikke-oxydert form. Peptid I (123) gjenkjente 30 av 34 positive testsera som positive, og 11 av 11 negative sera som netagive (tabell I). Peptid II gjenkjente 32 av 34 positive sera som positive,
og 11 av 11 negative sera som negative. Fjerning av 12 aminosyrer fra peptid II's aminoende reduserte ikke sekvensens evne til å skjelne HIV-positive sera.
Anvendelse av peptidene i oxydert form, hvilket ikke er nødvendig for at disse spesielle peptider kan fungere ved analysen, øket den samlede signalstørrelse fra hver prøve. Dette kan skyldes en økning i mengden av peptid adsorbert til mikrotiterplaten.
Peptid III (15 8) fra gag-området av det i ELISA-systemet testede HIV-genom ble anvendt, idet det ble an bragt 80 ug/brønn til screening av både plasma- og serum-prøver. De i tabell II angitte data viser at peptid 158 gjenkjenner 13 av 17 p25 positive plasma og sera.
Ved en alternativ analyse av peptid 158E, en modi-fikasjon av peptid 158 hvor methioninene var erstattet med norleucin, ble sera eller plasma fortynnet 1:21 i fortynn-ingsbuffer, inkubasjonstidene med prøven og konjugatet ble redusert til 30 minutter, og antallet av vaskninger mellom trinnene ble øket til seks. Disse forandringer resulterte i at 17 av 17 positive prøver ble gjenkjent.
Resultatene av serumscreeningen er vist i tabell I og summert som følger:
Det fremgår klart fra de foregående resultater at
det ved anvendelse av et av peptidene ifølge oppfinnelsen,
eller en kombinasjon derav, tilveiebringes en følsom, nøy-
aktig test for tilstedeværelse av antistoffer mot AIDS. Foreliggende peptider kan anvendes i seg selv eller i kombinasjon med en screeningsanalyse eller en bekreftelses-analyse, mens det komplette lysat eller komplette antigener kan anvendes som en uavhengig prosedyre. Enn videre vil man på grunn av peptidenes spesifisitet forvente at de DNA-sekvenser som koder for peptidene, også vil finne en lign-
ende spesifisitet ved en DNA-hybridiseringsanalyse. Foreliggende oppfinnelse muliggjør således påvisning av pasi-
enter som har vært utsatt for det retrovirale, etiologiske middel for lymfadenopatisyndrom og/eller AIDS.
Claims (9)
1. Fremgangsmåte for påvisning av tilstedeværelse av antistoff mot HIV-virus, ved hvilken en prøve kombineres med et preparat med epitope posisjoner som immunologisk konkur-
rerer med HIV-epitope posisjoner, hvorved antistoffer bindes til et slikt proteinpreparat under dannelse av minst ett spesifikt bindingsparkompleks, og hvor omfanget av kompleksdannelse bestemmes,karakterisert vedat det som reagens i analysemediet anvendes et preparat inneholdende minst ett peptid med fra 12 til 50 aminosyrer, og med minst tolv på hverandre følgende aminosyrer i en sekvens som forekommer i sekvensen av minst én av følgende peptidsekvenser, hvori angitte peptid har hovedsakelig samme immunoreaktivitet overfor antistoffer mot HIV som angitte sekvens:
og hvor peptidet er fritt for andre peptider eller er konjugert til et makromolekyl mot hvilket antistoffet i det vesentlige er fraværende i humane sera.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert vedat ett av peptidene har én av følgende sekvenser:
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,
karakterisert vedat preparatet er bundet til en fast overflate.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3,karakterisert vedat peptidet er konjugert til et vannoppløselig protein med en molekylvekt på minst 5 kDal som nevnte makromolekyl.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 3,karakterisert vedat to av peptidene er kovalent sammenkjedet via en binding eller brobyggende gruppe.
6. Fremgangsmåte for bestemmelse av tilstedeværelse av antistoffer mot HIV i et fysiologisk fluidum,karakterisert vedat en human fysiologisk fluidumprøve kombineres med minst ett peptid som har fra 12 til 50 aminosyrer og med minst tolv på hverandre følgende aminosyrer i en sekvens som forekommer i sekvensen av minst én av følgende peptidsekvenser, hvori angitte peptid har hovedsakelig samme immunoreaktivitet overfor antistoffer mot HIV som angitte sekvens:
hvori peptidet er fritt for andre peptider eller er konjugert til et makromolekyl mot hvilket antistoffer i det vesentlige er fraværende i humane sera, eller blandingen inkuberes i tilstrekkelig tid til at kompleksdannelse kan finne sted, og dan-
nelsen av kompleks bestemmes under anvendelse av et merket spesifikt bindingsprotein som binder til komplekset og tilveiebringer et påviselig signal.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 6,
karakterisert vedat markøren er et fluorescensfremkallende middel.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 6,
karakterisert vedat markøren er et enzym.
9. Fremgangsmåte for bestemmelse av tilstedeværelse av antistoffer mot HIV i et fysiologisk fluidum,karakterisert vedat en human fysiologisk fluidumprøve kombineres med minst ett peptid med følgende sekvens:
hvor peptidet er fritt for andre peptider eller er konjugert til et makromolekyl mot hvilket antistoffer hovedsakelig er fraværende i humane sera,
blandingen inkuberes i tilstrekkelig tid til at kompleksdannelse kan finne sted, og
dannelsen av kompleks bestemmes under anvendelse av et merket spesifikt bindingsprotein som binder til komplekset og som tilveiebringer et påviselig signal.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/930,785 US5075211A (en) | 1986-03-26 | 1986-11-14 | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO874740D0 NO874740D0 (no) | 1987-11-13 |
| NO874740L NO874740L (no) | 1988-05-16 |
| NO173958B true NO173958B (no) | 1993-11-15 |
| NO173958C NO173958C (no) | 1994-02-23 |
Family
ID=25459766
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO874740A NO173958C (no) | 1986-11-14 | 1987-11-13 | Fremgangsmaate for paavisning av tilstedevaerelse av antistoff mot HIV-virus |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5075211A (no) |
| EP (1) | EP0267802B1 (no) |
| JP (1) | JP2886861B2 (no) |
| AT (1) | ATE163766T1 (no) |
| AU (1) | AU616383B2 (no) |
| CA (1) | CA1340097C (no) |
| DE (1) | DE3752170T2 (no) |
| DK (1) | DK174533B1 (no) |
| ES (1) | ES2115584T3 (no) |
| IE (1) | IE81132B1 (no) |
| NO (1) | NO173958C (no) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7273695B1 (en) * | 1984-10-31 | 2007-09-25 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | HIV immunoassays using synthetic envelope polypeptides |
| US6210873B1 (en) | 1987-08-28 | 2001-04-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the priming of specific cytotoxic T-lymphocyte response |
| US5128319A (en) * | 1987-08-28 | 1992-07-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| FR2632310B1 (fr) * | 1988-06-06 | 1992-04-10 | Pasteur Institut | Peptides ayant des proprietes protectrices d'un virus pathogene du type hiv dans des cellules sensibles |
| ZA896768B (en) * | 1988-09-09 | 1990-06-27 | Akzo Nv | Synthetic polypeptides immunochemically reactive with hiv-antibodies |
| US5439792A (en) * | 1989-06-02 | 1995-08-08 | Genetic Systems Corporation | Cysteine thiol-protected peptides for use in immunoassays |
| US6589734B1 (en) | 1989-07-11 | 2003-07-08 | Gen-Probe Incorporated | Detection of HIV |
| ATE282716T1 (de) * | 1989-07-11 | 2004-12-15 | Gen Probe Inc | Verfahren zur amplifikation von nukleinsäuresequenzen |
| US5627035A (en) * | 1990-08-22 | 1997-05-06 | Syntello Vaccine Development Ab | Peptides that block human immunodeficiency virus and methods of use thereof |
| SE9101863D0 (sv) * | 1991-06-13 | 1991-06-13 | Replico Medical Ab | Peptider, diagnostiskt antigen, vaccinkomposition och foerfarande foer selektering av hiv-stammar |
| AU657590B2 (en) * | 1991-11-04 | 1995-03-16 | Dade International Inc. | Synthetic peptides corresponding to portions of HIV-2 virus and methods of using in an improved assay |
| US6667387B1 (en) * | 1996-09-30 | 2003-12-23 | N.V. Innogenetics S.A. | HCV core peptides |
| US6709828B1 (en) | 1992-03-06 | 2004-03-23 | N.V. Innogenetics S.A. | Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them |
| US6165730A (en) * | 1992-03-06 | 2000-12-26 | N.V. Innogenetics S.A. | Hepatitis C virus peptides obtained from the NS4 coding region and their use in diagnostic assays |
| US6632613B1 (en) * | 1993-06-02 | 2003-10-14 | University Of Utah Research Foundation | Compositions and kits for fluorescence polarization assay of large molecules |
| US6479055B1 (en) * | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
| US5603933A (en) * | 1993-08-31 | 1997-02-18 | Board Of Regents, The University Of Texas | CD4 peptides for binding to viral envelope proteins |
| CA2177976C (en) * | 1993-12-09 | 2007-12-04 | Ai-Ping Wei | Compositions and kits for fluorescence polarization assay of large molecules |
| DE69841664D1 (de) * | 1997-08-01 | 2010-06-24 | Bio Rad Laboratories | Synthetisches Antigen zum Nachweis von HIV-immunreaktiven Antikörpern |
| GB9717652D0 (en) * | 1997-08-20 | 1997-10-22 | Nycomed Imaging As | Method |
| WO2000029008A2 (en) | 1998-11-16 | 2000-05-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hiv-specific t-cell induction |
| ATE456677T1 (de) * | 1999-07-09 | 2010-02-15 | Gen Probe Inc | Hiv-1 detektion mittels nukleinsäureamplifizierung |
| US6582920B2 (en) | 2000-09-01 | 2003-06-24 | Gen-Probe Incorporated | Amplification of HIV-1 RT sequences for detection of sequences associated with drug-resistance mutations |
| KR101933685B1 (ko) * | 2018-06-29 | 2018-12-28 | 주식회사 에스알바이오텍 | 약물이 코팅된 마이크로 니들 및 이의 제조방법 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ207394A (en) * | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
| GB8324800D0 (en) * | 1983-09-15 | 1983-10-19 | Pasteur Institut | Antigens |
| US4716102A (en) * | 1984-08-15 | 1987-12-29 | Regents Of The University Of California | Purified AIDS-associated virus ARV-2 |
| US9328391B1 (en) * | 1984-08-22 | 2016-05-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cloning and expression of HIV-1 DNA |
| ATE92502T1 (de) * | 1984-10-18 | 1993-08-15 | Pasteur Institut | Huellenantigene vom menschlichen immunodefizienz- virus und deren verwendungen. |
| CA1341482C (en) * | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
| JPS61233700A (ja) * | 1984-12-24 | 1986-10-17 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 分子クロ−ンされたエイズ関連ポリペプチド |
| ES8706824A1 (es) * | 1985-04-08 | 1987-07-01 | Genetic Systems Corp | Un metodo para preparar proteinas que son inmunologicamente reactivas con anticuerpos para virus asociados con linfadenopatia. |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| KR910002374B1 (ko) * | 1985-04-29 | 1991-04-20 | 제네틱 시스템즈 코포레이션 | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 |
| US4661445A (en) * | 1985-05-24 | 1987-04-28 | Saxinger W Carl | Competitive ELISA for the detection of HTLV-III antibodies |
| US4704357A (en) * | 1985-09-30 | 1987-11-03 | United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Immortalized T-lymphocyte cell line for testing HTLV-III inactivation |
| CS256960B1 (en) * | 1985-11-16 | 1988-04-15 | Viktor Krchnak | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production |
| AU6713287A (en) * | 1986-01-06 | 1987-07-09 | F. Hoffmann-La Roche & Co. | Expression of htlv-iii gag-gene |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| AU7512287A (en) * | 1986-05-20 | 1987-12-22 | Dana-Farber Cancer Institute | Expression of human t-cell lymphotropic virus (htlv-iii)reve rse transcriptase and uses thereof |
-
1986
- 1986-11-14 US US06/930,785 patent/US5075211A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-11-13 CA CA000551770A patent/CA1340097C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 DK DK198705977A patent/DK174533B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 IE IE307387A patent/IE81132B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 DE DE3752170T patent/DE3752170T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 NO NO874740A patent/NO173958C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 JP JP62287207A patent/JP2886861B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 EP EP87310047A patent/EP0267802B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 AT AT87310047T patent/ATE163766T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 ES ES87310047T patent/ES2115584T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 AU AU81211/87A patent/AU616383B2/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO874740L (no) | 1988-05-16 |
| DK597787A (da) | 1988-05-15 |
| EP0267802A3 (en) | 1991-03-06 |
| ATE163766T1 (de) | 1998-03-15 |
| NO173958C (no) | 1994-02-23 |
| AU616383B2 (en) | 1991-10-31 |
| DK174533B1 (da) | 2003-05-12 |
| IE873073L (en) | 1988-05-14 |
| DE3752170T2 (de) | 1998-10-08 |
| CA1340097C (en) | 1998-10-20 |
| JPS63221247A (ja) | 1988-09-14 |
| IE81132B1 (en) | 2000-03-22 |
| ES2115584T3 (es) | 1998-07-01 |
| DK597787D0 (da) | 1987-11-13 |
| NO874740D0 (no) | 1987-11-13 |
| AU8121187A (en) | 1988-05-19 |
| JP2886861B2 (ja) | 1999-04-26 |
| DE3752170D1 (de) | 1998-04-09 |
| US5075211A (en) | 1991-12-24 |
| EP0267802B1 (en) | 1998-03-04 |
| EP0267802A2 (en) | 1988-05-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6214539B1 (en) | Synthetic antigen the detection of aids-related disease | |
| US4629783A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| NO173958B (no) | Fremgangsmaate for paavisning av tilstedevaerelse av antistoff mot hiv-virus | |
| US6322964B1 (en) | Synthetic HIV-2 gag and env oligopeptides reactive with HIV-2 specific antibodies | |
| EP0284383B2 (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by LAV-2 | |
| JP2005139204A (ja) | Ｈｉｖウイルスに対して免疫反応性である抗体の検出用の合成抗原 | |
| AU627738B2 (en) | Htlv-i / hiv-1 fusion proteins | |
| AU652919B2 (en) | Cysteine thiol-protected peptides for use in immunoassays | |
| US6130314A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| US6149910A (en) | Peptides for the detection of HIV-1 group O | |
| AU597884C (en) | Synthetic antigens for the detection of AIDS-related disease | |
| NO173034B (no) | Fremgangsmaate og peptider for paavisning av aids-relatert sykdom | |
| CA2290217C (en) | Peptides for the detection of hiv-1 group o |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |