NO164479B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive peptidforbindelser. - Google Patents
Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive peptidforbindelser. Download PDFInfo
- Publication number
- NO164479B NO164479B NO883008A NO883008A NO164479B NO 164479 B NO164479 B NO 164479B NO 883008 A NO883008 A NO 883008A NO 883008 A NO883008 A NO 883008A NO 164479 B NO164479 B NO 164479B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- constitutes
- group
- compound
- cys
- asp
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 47
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 14
- -1 amino, hydroxy, protected amino Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- WMMKLGOAKIPZJN-YTFOTSKYSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2s)-3-carboxy-2-[[(2s)-4-carboxy-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]butanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 WMMKLGOAKIPZJN-YTFOTSKYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 28
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- NUBOMXHHTQFVBI-UHFFFAOYSA-N 4-[2-amino-5-[4-amino-3-(3-carboxypropoxy)phenyl]phenoxy]butanoic acid Chemical compound C1=C(OCCCC(O)=O)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(OCCCC(O)=O)=C1 NUBOMXHHTQFVBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003525 myelopoietic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 2,2,5,8-tetramethyl-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical compound C1CC(C)(C)OC2=C1C(C)=C(O)C=C2C MEKOFIRRDATTAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical group OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- ACEDJCOOPZFUBU-CIUDSAMLSA-N Asp-Cys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N ACEDJCOOPZFUBU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100001018 bone marrow damage Toxicity 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000009492 tablet coating Methods 0.000 description 2
- 239000002700 tablet coating Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- FESVUEALWMQZEP-INIZCTEOSA-N (2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) (2s)-4-amino-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxobutanoate Chemical compound O=C([C@@H](NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CC(=O)N)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F FESVUEALWMQZEP-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical class OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIDYQYOPUBOMTR-FQEVSTJZSA-N 5-o-tert-butyl 1-o-(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanedioate Chemical compound O=C([C@@H](NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)CCC(=O)OC(C)(C)C)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F AIDYQYOPUBOMTR-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical group OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229910000528 Na alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910000978 Pb alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920000037 Polyproline Polymers 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 208000015322 bone marrow disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 229940096529 carboxypolymethylene Drugs 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000027288 circadian rhythm Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000013265 extended release Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 125000000538 pentafluorophenyl group Chemical group FC1=C(F)C(F)=C(*)C(F)=C1F 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 108010026466 polyproline Proteins 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 229940075065 polyvinyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000010215 titanium dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for
fremstilling av nye peptider med en stimulerende effekt på bloddannelsen (hemopoiesen).
Benmargcellene skriver seg fra pluripotente stamceller som modner for å danne en kompleks populasjon av morfologisk distinkte celler, nemlig megakariocytter, erytrocytter,
granulocytter og lymfocytter. Bare ca. 10% av stamcellene er under celledeling til enhver tid. I en initial fase av modningen blir hver av de prolifererende stamceller "committed" til bestemt morfologisk distinkt form som tilslutt fører til en av de ovennevnte fire modne celletyper. Mens cellene prolifererer,
taper de gradvis evnen til ytterligere proliferasjon, og de modne cellene, for eksempel erytrocytter eller granulocytter,
kan ikke lenger inngå deling. Siden modne celler kontinuerlig dør, er det følgelig vesentlig at proliferasjonsevnen av de mindre modne celler, særlig stamcellene "committed" for margdannelse, opprettholdes.
Vi har nå funnet en gruppe av nye peptider som er i stand
til å stimulere proliferasjonen av margdannende stamceller.
I henhold til oppfinnelsen, fremstilles således forbindelser
med formel (I):
hvor samtlige aminosyre-enheter har L-konfigurasjon,
A utgjør
eller et hydrogenatom; B utgjør
eller en hydroksygruppe;
n og m utgjør uavhengig av hverandre heltallene 1 eller 2; a og b utgjør uavhengig av hverandre heltallene 0 eller 1; R, R' og R" utgjør uavhengig av hverandre en hydroksygruppe eller en aminogruppe; og de fysiologisk akseptable salter derav under den forutsetning at når A og B utgjør henholdsvis et hydrogenatom og en hydroksygruppe, b ikke kan være 0.
Forbindelsene med formel (I) er således symmetriske dimerer.
Når A utgjør en glutaminrest eller en prolinrest, er det å foretrekke at a=b=l, n=2 m=l, R og R' utgjør hydroksygrupper og B utgjør en lysinrest.
Når B utgjør en argininrest, er det å foretrekke at A utgjør en pyroglutamatrest, a=b=l, n=2, m=l og R og R' utgjør hydroksygrupper.
En foretrukket gruppe av forbindelser er slike hvor b=l, m=l og R, R' og R" utgjør hydroksygrupper.
Spesielt foretrukne forbindelser fremstilt i henhold til oppfinnelsen er som følger (under bruk av konvensjonell biokjemisk notasjon for aminosyrene og ved å lese fra N-enden):
En annen spesielt foretrukket forbindelse er (pGlu-Glu-Asp-Cys-Lys)2 dvs. den forbindelse hvori a=b=l, m=l, n=2, R og R' utgjør hydroksygrupper, A utgjør en pyroglutamatrest og B utgjør en lysinrest.
Fysiologisk akseptable salter av peptidene fremstilt i henhold til oppfinnelsen innbefatter syreaddisjonssalter, så som hydrokloridet, hydrobromidet, sulfatet, etc, samt salter med baser så som alkalimetallsalter, f.eks. natrium- eller kaliumsalter, jordalkalimetallsalter, f.eks. kalsiumsaltet, eller aminsalter.
Noen av forbindelsene med formel (I) er dimerer av forbindelsene beskrevet og krevet beskyttet i vår Europeiske patentsøknad nr. 83.307210.1. Denne siste søknad angår en liten gruppe hemoregulerende peptider som har en hemmende effekt på granulopoiesen.
Som følge av de ytterst små mengder som er tilgjengelig av den naturlige granulopoiese-faktor, har strukturen av den naturlige substans aldri blitt bestemt. Den er aldri oppnådd i krystallinsk eller helt ren form, og det er ikke kjent hvorvidt dette kunne oppnås ved kun å benytte materiale fra naturlige kilder. Det er postulert at faktoren har strukturen pyroGlu-Asp-Asp-Cys-LysOH, men, som meddelt i vår ovennevnte Europeiske patentsøknad, har den syntetiske forbindelse med denne struktur vist seg å være inaktiv. Man har registrert at når den naturlige granulopoiese-hemmende faktor utsettes for oksyderende betingelser, dannes en forbindelse med stimulerende virkning. Dette produkt er imidlertid heller aldri blitt isolert eller bestemt. Peptidene fremstilt i henhold til oppfinnelsen kan derimot oppnås i ren form egnet for farmasøytisk bruk og i relativt store mengder.
Det er også rapportert (Exp. Hematol. 12 7 (1981)) at når én av peptidene i vår ovennevnte Europeiske patentsøknad, nemlig pyroGlu-Glu-Asp-Cys-LysOH, utsettes for frysing og opptining, oppviser det en stimulerende virkning som kan reverseres ved behandling med merkaptoetanol. Det stimulerende produkt er imidlertid aldri oppnådd i ren form og strukturen aldri bestemt.
De nye forbindelsene er testet i kjemisk ren form med henblikk på in vitro og in vivo hemoregulerende virkninger. In vitro undersøkelser av margdannende stamceller fra både menneske og mus, har vist økning på opptil 1500% av koloni-dannelse på agar. Den stimulerende effekt inntrer i konsentrasjonsområdet 10~<13> til 10<-5>M. I in vivo undersøkelsene hos mus, har vi registrert at en enkelt injeksjon kan øke antallet margdannende stamceller med 50% i løpet av 48 timer, og ved kontinuerlig infusjon, ble antallet stamceller fordoblet på 13 dager.
Forbindelsene er spesielt anvendelig for å stimulere margdannelse i pasienter som lider av nedsatt myelopoietisk aktivitet, innbefattet benmargsskade, agranulocytose og aplastisk anemi. Dette innbefatter behandling av pasienter med nedsatt benmargsfunksjon som følge av immunosuppresiv behandling for å undertrykke vevsreaksjoner, f.eks. ved benmargstrans-plantasjon.
Forbindelsene kan også benyttes for å fremme hurtigere regenerering av benmarg etter cytostatisk kjemoterapi og bestrålingsterapi ved neoplastiske og virale sykdommer.
De nye forbindelsene kan dessuten være av spesiell betydning for pasienter som har alvorlige infeksjoner som følge av manglende immunrespons etter benmargslidelse.
En annen klinisk anvendelse vil være i kombinasjon med de korresponderende monomerer eller beslektede myelopoiese-hemmere som beskrevet i vår ovennevnte Europeiske patentsøknad, for å indusere alternerende topper av høy og lav aktivitet i benmargcellene slik at den naturlige cirkadiske rytme av bloddannelsen forsterkes. På denne måte kan cytostatisk terapi gis i perioder med lav benmargsaktivitet og derved redusere risikoen for benmargsskade, mens regenereringen vil bli påskyndet av den påfølgende aktivitetstopp.
Det skal bemerkes at der ikke er noen stimulerende effekt på celler av annet vev, spesielt tumorceller relatert til ikke-myelopoietisk vev. De nye forbindelsene stimulerer således selektivt det myelopoietiske system.
Peptidene har ingen toksisitet av betydning. Dessuten er alle observerte hemotologiske virkninger reversible, og makroskopiske forandringer ble ikke registrert i de øvrige organer hos dyr som fikk peptidene injisert.
For å utøve en stimulerende virkning kan peptidene fremstilt i henhold til oppfinnelsen generelt gis til mennesker ved injeksjon i doseområdet 0,1-10 mg, for eksempel 1-5 mg, per 70 kg legemsvekt per dag. Ved administrasjon ved infusjon eller lignende teknikk, kan dosen ligge i området 30-300 mg per 70 kg legemsvekt, for eksempel ca. 100 mg, over en 6 dagers periode. Prinsipielt er det ønskelig å oppnå en konsentrasjon av
peptidet på ca. 10_<13>M til 10-<5>M i pasientens ekstracellulære væske.
Farmasøytiske preparater kan inneholde én eller flere av
de nye forbindelser med formel (I), eller fysiologisk forlikelige salter derav, som virkestoff sammen med et farmasøytisk bære-eller hjelpestoff. Preparatene kan fremstilles i en form egnet for oral, nasal, parenteral eller rektal administrasjon.
Uttrykket "farmasøytisk" innbefatter i denne sammenheng veterinære anvendelser av oppfinnelsen.
Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan fremstilles i konvensjonelle farmakologiske administrasjonsformer, så som
tabletter, drasjerte tabletter, nasalspray, oppløsninger, emulsjoner, pulvere, kapsler eller retardformer. Konvensjonelle farmasøytiske hjelpestoffer og vanlige produksjonsmetoder kan benyttes for fremstilling av disse formene. Tabletter kan for eksempel fremstilles ved å blande virkestoffet eller virkestoffene med kjente hjelpestoffer, f.eks. med fortynningsmidler, så som kalsiumkarbonat, kalsiumfosfat eller laktose, sprengmidler så som maisstivelse eller alginsyre, bindemidler som stivelse eller gelatin, glattemidler som magnesiumstearat eller talkum, og/eller midler for å oppnå forsinket frigjøring, så som karboksypolymetylen, karboksymetylcellulose, celluloseacetat-ftalat eller polyvinylacetat.
Tablettene kan eventuelt bestå av flere lag. Drasjerte tabletter kan fremstilles ved å overtrekke kjerner oppnådd på lignende måte som tablettene, med midler som vanligvis benyttes for tablettovertrekk, for eksempel polyvinylpyrrolidon eller skjell-lakk, gummi arabicum, talkum, titandioksyd eller sukker. For å oppnå forlenget frigjøring eller unngå uforlikelighet,
kan også kjernen bestå av flere lag. Tablett-overtrekket kan også bestå av flere lag for å oppnå forsinket frigjøring, hvorunder de ovennevnte tablett-hjelpestoffer, kan benyttes.
Organspesifikke bærersystemer kan også anvendes.
Injeksjonsoppløsninger kan for eksempel fremstilles på konvensjonell måte, så som ved tilsetning av konserveringsmidler, f.eks. p-hydroksybenzoater, eller stabilisatorer så som EDTA. Oppløsningene fylles deretter over i hetteglass eller ampuller.
Spray for nasal anvendelse kan på lignende måte tilberedes
i vandig oppløsning og anbringes i spray-beholdere enten med et aerosol-drivmiddel eller utstyres med anordninger for manuell komprimering. Kapsler som inneholder én eller flere virkestoffer kan for eksempel fremstilles ved å blande virkestoffene med inerte bæremidler, så som laktose eller sorbitol, og fylle blandingen over i gelatinkapsler. Egnede suppositorier kan for eksempel fremstilles ved å blande virkestoffet eller virkestoff-kombinasjonene med konvensjonelle bærere for dette formål, så som naturlige fett eller polyetylenglykol eller derivater derav.
Doseringsenheter som inneholder de nye forbindelsene kan fortrinnsvis inneholde 0,1-10 mg, for eksempel .1-5 mg av peptidet (I) eller salter derav.
Man kan stimulere benmargsdannelse ved å gi pasienten en effektiv mengde av et farmasøytisk preparat inneholdende de nye forbindelser.
De nye peptider kan også anvendes for fremstilling av materiale for immunologisk bestemmelsesteknikk. Peptidene kan da kovalent knyttes til en passende høymolekylær bærer, så som albumin, polylysin eller polyprolin for å injiseres i antistoff-produserende dyr (f.eks. kaniner, marsvin eller geiter). In vitro immuniseringsteknikk kan også benyttes. Antisera av høy spesifisitet oppnås ved å benytte velkjent absorbsjonsteknikk under bruk av høymolekylære bærere. Ved å introdusere radio-aktivitet (3H, 14C, <35>S) i peptidmolekylet, kan radioimmuno-assay lett utvikles og benyttes for å bestemme peptidet i forskjellige biologiske væsker som serum (plasma), urin og cerebrospinalvæske.
Peptidene kan i henhold til oppfinnelsen syntetiseres som følger: Generelt, vil forekommende reaktive sidekjede-grupper (amino, tiol og/eller karboksyl) måtte beskyttes under total-syntesens koblingsreaksjoner, og slutt-trinnet vil dermed bestå i å avspalte disse fra et beskyttet derivat med formel (I). Vanligvis vil samtlige -COOH-grupper, samtlige -NH2-grupper og
-NH-grupper av pyroglutamyl- eller prolinresten bli beskyttet. Slike beskyttede former av peptidene har den generelle formel
(II)
hvor A utgjør et hydrogenatom eller en amin-beskyttende gruppe;
en hydroksygruppe eller en karboksyl-blokkerende gruppe;
n og m utgjør uavhengig av hverandre heltallene 1 eller 2;
a og b utgjør uavhengig av hverandre heltallene 0 eller 1;
R1, R<2>, R8 og R<10> er amino, hydroksy, beskyttet amino eller karboksyl-beskyttende grupper;
R3, R4, R5, R6, R<7> og R<9> er hydrogenatomer eller amin-beskyttende grupper;
under den forutsetning at når A utgjør et hydrogenatom eller en amin-beskyttende gruppe og B utgjør en hydroksygruppe eller en karboksyl-blokkerende gruppe, da kan b ikke være 0.
Generelt, kan de beskyttede derivatene med formel (II) fremstilles ved hjelp av teknikk egnet for peptidsyntese.
En mulig syntesevei benytter cystin og kobler dette til de øvrige aminosyrerester slik at de to identiske kjedene av dimeret bygges opp og sammenkobles via den disulfid-binding som allerede forefinnes i cystin. En alternativ strategi består i å syntetisere den korresponderende monomere forbindelse i S-beskyttet form, ved å benytte S-beskyttet cystein, fjerne den S-beskyttende gruppe og foreta dimerisering. Det er mulig å benytte S-beskyttende grupper som kan fjernes ved hjelp av oksydasjonsmidler som danner en disulfid-binding direkte i det trinn hvor beskyttelsesgruppen avspaltes. Således kan for eksempel tritylgrupper fjernes selektivt med jod, fortrinnsvis i et egnet oppløsningsmiddel så som dimetylformamid. Slik dimerisering kan foretas på den C- og N-beskyttede monomer, etterfulgt av fjerning av de C- og N-beskyttende grupper, eller kan utføres som det avsluttende syntesetrinn ved å benytte en monomer med formel (III)
hvor A, B, n, m, a, b, R og R' er som ovenfor definert og R" er et hydrogenatom eller en tiol-beskyttende gruppe som kan fjernes under oksyderende betingelser.
Ved oppbygging av peptidkjedene, kan man prinsipielt
starte i C-enden eller N-enden selv om kun metoder hvor det startes i C-enden er i vanlig bruk.
Man kan således starte i C-enden ved å omsette et passende beskyttet derivat av for eksempel lysin med et passende beskyttet derivat av cystein eller cystin. Lysinderivatet vil ha en fri a-aminogruppe mens den andre reaktanten vil ha enten en fri eller aktivert karboksylgruppe og en beskyttet aminogruppe. Etter kobling kan mellomproduktet renses, for eksempel ved kromatografi, og deretter selektivt befris for N-beskyttelsen for å muliggjøre addisjon av ytterligere en aminosyrerest.
Denne fremgangsmåte fortsettes inntil den nødvendige aminosyre-sekvens er fullført.
Karboksylsyre-aktiverende substituenter som kan benyttes innbefatter for eksempel symmetriske eller blandede anhydrider eller aktiverte estere så som p-nitrofenylester, 2,4,5-triklor-fenylester, N-hydroksybenzotriazolester (OBt) eller N-hydroksy-succinimidylester (OSu).
Koblingen av frie amino- og karboksylgrupper kan for eksempel utføres ved å benytte dicykloheksylkarbodiimid (DCC). Et annet koblingsmiddel som for eksempel kan benyttes er N-etoksykarbonyl-2-etoksy-l,2-dihydrokinolin.
I alminnelighet er det hensiktsmessig å foreta koblings-reaksjonene ved lave temperaturer, for eksempel ved -20°C
opptil romtemperatur, hensiktsmessig i et egnet oppløsnings-middelsystem, for eksempel i tetrahydrofuran, dioksan, dimetylformamid, metylenklorid eller en blanding av disse oppløsnings-midlene.
Det kan være mer hensiktsmessig å foreta syntesen i fast fase på en resin-bærer. Klormetylert polystyren (kryssbundet med 1% divinylbenzen) er en anvendelig bærertype. I dette tilfelle vil syntesen starte i C-enden, for eksempel ved å
koble N-beskyttet lysin til bæreren.
En rekke egnede fastfase-teknikker er beskrevet av Eric Atherton, Christopher J. Logan og Robert C. Sheppard, J. Chem. Soc., Perkin I, 538-46 (1981); James P. Tam, Foe S. Tjoeng og
R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 102. 6117-27 (1980); James P. Tam, Richard D. Dimarchi & R. B. Merrifield, Int. J. Peptide
Protein Res 16, 412-2 5 (1980); Manfred Mutter & Dieter Bellof, Helvetica Chimica Acta, 67, 2009-16 (1984).
Et bredt utvalg av beskyttende grupper for aminosyrer er kjent og eksempler finnes i Schroder E. & Liibke, K. , The Peptides, Vol. 1 og 2, Academic Press, New York og London, 1965 og 1966; Pettit, G.R., Synthetic Peptides, Vol. 1-4, Van Nostrand, Reinhold, New York 1970, 1971, 1975 og 1976; Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Synthese von Peptiden, Bd. 15, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974; Amino Acids, Peptides and Proteins, Vol. 4-8, The Chemical Society, London 1972, 1974, 1975 og 1976; Peptides, Synthesis-physical data 1-6, Wolfgang Voelter, Eric Schmidt-Siegman, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, NY. 1983; The Peptides, Analysis, synthesis, biology 1-7, Ed: Erhard Gross, Johannes Meienhofer, Academic Press, NY. San Fransisco, London; Solid phase peptide synthesis 2.utg. John M. Stewart, Janis D. Young, Pierce Chemical Company.
Amin-beskyttende grupper som kan anvendes innbefatter således for eksempel slike beskyttelsesgrupper som karbobenzoksy (heretter også betegnet Z), t-butoksykarbonyl (heretter også betegnet Boe), 4-metoksy-2,3,6-trimetylbenzensulfonyl (heretter også betegnet (Mtr) og 9-fluorenylmetoksykarbonyl (heretter også betegnet Fmoc). Det er klart at når peptidet bygges opp fra C-enden, vil det være en amin-beskyttende gruppe på a-aminogruppen i hver ny rest som tilkobles og som må fjernes selektivt før det neste koblingstrinn. En spesielt egnet gruppe for denne midlertidige amin-beskyttelse er Fmoc-gruppen som kan fjernes selektivt ved behandling med piperidin i et organisk oppløsningsmiddel.
Karboksyl-beskyttende grupper som for eksempel kan anvendes innbefatter lett avspaltbare estergrupper, så som benzyl (Bzl), p-nitrobenzyl (ONb), pentaklorfenyl (OPC1P), pentafluorfenyl (OPFP) eller t-butyl (OtBu) grupper, samt koblingsgruppene på faste bærere, for eksempel metylgrupper bundet til polystyren.
Tiol-beskyttende grupper innbefatter p-metoksybenzyl (Mob), trityl (Trt) og acetamidometyl (Acm).
Dessuten forekommer et bredt område av andre slike grupper, som for eksempel mer utførlig beskrevet i de ovenfor nevnte litteraturreferanser, og bruken av samtlige slike grupper i de beskrevne fremgangsmåter faller innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse.
Et bredt utvalg av fremgangsmåter for å fjerne amin- og karboksyl-beskyttende grupper foreligger. Disse må imidlertid være i overensstemmelse med den valgte syntetiske strategi. Sidekjede-beskyttende grupper må være stabile overfor de betingelser som benyttes for å fjerne de midlertidge cx-amino-beskyttende grupper før neste koblingstrinn.
Amin-beskyttende grupper så som Boe og karboksyl-beskyttende grupper så som tBu, kan fjernes samtidig ved syrebehandling, for eksempel med trifluoreddiksyre. Tiol-beskyttende grupper så som Trt, kan fjernes selektivt ved bruk av et oksydasjonsmiddel som jod.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen ytterligere.
Oppløsningsmidler ble redestillert fra handelsprodukter og oppbevart på følgende måte: dimetylformamid (DMF) over molekylar-sikt 4Å, diklormetan (DCM) over CaCl2» trietylamin (TEA) over Na/Pb-legering (Baker) og trifluoreddiksyre (TFA) over molekylar-sikt 4Å.
TLC-systemene var som følger:
Sx: silika/CHCl3:MeOH (98:2)
S2: " " " (95:5)
S3: silika RP 8/0,1% TFA i 5% EtOH (aq.).
De rensede sluttproduktene ble analysert ved omvendt-fase høytrykks væskekromatografi (HPLC). HPLC-systemet besto av en HP 1090M kromatograf med innbygget automatisk prøvetaker og en HP 1040 diode-array (Hewlett-Packard, Waldbronn, FRG), og en supelcosil LC-18 kolonne (250 x 4,6 mm, 5 p partikler). Prøver ble oppløst i 0,1% (vol./vol.) TFA (aq.) og eluert med en lineær gradient fra 0 til 30% acetonitril i 0,1% TFA (aq.). Strømningshastigheten var 2 ml/min. Eluenten ble målt ved
214 nm med en båndbredde på 4 nm. Kromatogrammet for oppløsnings-midlet ble subtrahert elektronisk, og resultatene ble presentert i form av arealprosent.
Aminosyre-analyse:
De cystin-holdige peptidene ble oksydert med permaursyre for å omdanne det syrelabile cystin-residuet til den syrestabile cysteinsyre, før sur hydrolyse i 6M HC1 ved 110°C i 16 timer.
De tørre hydrolysatene ble deretter derivatisert ved bruk av fenylisotiocyanat og analysert som beskrevet av Heinrikson (Anal. Bioch. 136. 65-74, 1984).
Eksempel 1
fpGlu- Glu- Asp- Cys- Lys)o
( Fmoc- Cys- Lvs( Nc- Boc)- OtBu)2 ^ :
2 g (2,275 mM) (Fmoc-Cys-OSu)2, 2,18 g (5,0 mM) Lys(Nc-Boc)-OtBu.HCl og 0,58 g (5 mM) N-etyl-morfolin ble oppløst i
7,5 ml DMF og omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Reaksjons-blandingen ble inndampet til tørrhet under redusert trykk. Residuet ble oppløst i 50 ml CHCI3 og vasket med 3 x 12 ml 0,1N HC1 og 3 x 12 ml IM NaCl. Det organiske lag ble filtrert
gjennom et faseseparasjons-papir (Whatman) og inndampet til tørrhet under redusert trykk.
Råproduktet (3,32 g) ble omkrystallisert fra 5 ml varm
MeOH (15 timer), filtrert, vasket med MeOH og eter og lufttørket. Utbytte: 1,75 g (61%). Det hvite faststoff oppviste en hovedflekk (UV254+, Cl2/dikarboksidin+, ninhydrin-) på TLC (S^ Rf=0,667, S2: Rf=0,829).
Cvs- Lys( Nc- Boc)- OtBu)o ( 2):
1,5 g (1,19 mM) av forbindelse (1) ble oppløst i 10 ml 20% piperidin i DMF og omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. TLC (S2) viste at alt utgangsmateriale var oppbrukt og bare ett nytt produkt (U<V>254~, Cl2/dikarbosidin+, ninhydrin+) var dannet. Oppløsningsmidlet ble inndampet under redusert trykk. Residuet ble oppløst i 20 ml eter og vasket med 2 x 3 ml 0,1N HC1 og 3 ml IM NaHCC^. Det organiske lag ble filtrert gjennom et faseseparasjons-papir og inndampet til tørrhet.
Utbytte: 1,2 g. TLC oppviste bare én ninhydrin-positiv komponent (S2: Rf=0,216).
( Fmoc- Asp( P- OtBu)- Cvs- Lvs( Nc- Boc)- OtBu)2 f3^ ;
Ca. 1,19 mM av forbindelsen (2) og 1,32 g (2,6 mM) Fmoc-Asp(P-OtBu)-OSu ble oppløst i 6 ml CH2C12 og omrørt ved romtemperatur i 2 timer. TLC (S^ viste at alt ninhydrin-positivt materiale var oppbrukt og at ett nytt hoved-UV254-positivt produkt var dannet. Etter inndampning ble residuet oppløst i 30 ml EtOAc, vasket med 4 x 10 ml IM NaCl, filtrert og inndampet som beskrevet for (1). Råproduktet ble oppløst i eter (2,5 ml) og utfelt som et halvkrystallinsk faststoff ved tilsetning av 4 ml n-heksan (kjøleskap 16 timer). Oppløsnings-midlet ble fradekantert, produktet vasket med 5 ml n-heksan og tørket under redusert trykk.
Utbytte: 1,272 g (67%). TLC oppviste en hovedflekk (UV254+, Cl2/dikarboksidin+, ninhydrin-, S^ Rf=0,333, S2 :Rf=0 ,658) .
( Asp( P- OtBu)- Cvs- Lys( Nc- Boc)- OtBu)2 ( 4>;
1,0 g (0,62 mM) av forbindelse (3) ble oppløst i 5 ml 20% piperidin i CH2C12 og behandlet som beskrevet for (2). Utbytte: 0,469 g (65%). TLC oppviste bare en ninhydrin-positiv flekk (S2: Rf<=>0,22).
( Fmoc- Glu( - OtBu)- Asp( P- OtBu)- Cys- Lvs( Nc- Boc)- OtBu)2 ( 5): 0,469 g (0,407 mM) av forbindelse (4) og 0,47 g (0,90 mM) Fmoc-Glu( -OtBu)-OSu ble oppløst i 5 ml CH2C12 og omrørt ved romtemperatur i 15 timer. Opparbeidningen var som for (3). Utbytte: 0,62 g (77%). TLC oppviste en hovedflekk (UV254+, Cl2/dikarboksidin+, ninhydrin-, (S^ Rf=0,312, S2: Rf=0,536).
( Glu( - OtBu)- Asp( P- OtBu)- Cys- Lvs( Ne- Boe)- OtBu)3 ( 6):
0,50 g (0,25 mM) av forbindelse (5) ble oppløst i 2,5 ml 2 0% piperidin i CH2C12 og behandlet som beskrevet for (2).
TLC oppviste bare en ninhydrin-positiv flekk (S2: Rf=0,154).
( pGlu- Glu( - OtBu)- Asp( P- OtBu)- Cys- Lvs( Nc- Boc)- OtBu)2 ( 7):
Ca. 0,25 mM av forbindelse (6) og 0,206 g (0,546 mM) pGlu-0PC1P ble oppløst i 2,5 ml DMF og omrørt ved romtemperatur i 15 timer. Opparbeidningen var som for (3).
Utbytte: 0,259 g (59%). TLC oppviste bare en flekk UV254_, ninhydrin- og Cl2/dikarboksidin+ (S2: Rf=0,117) og kun spor av urenheter.
( pGlu- Glu- Asp- Cys- Lys)2 ( 8):
0,110 g (0,063 mM) av forbindelse (7) ble oppløst i 5 ml 80% TFA (CH2C12) og omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fordampet og residuet oppløst i 4 ml H20
+ 2 ml CHCI3. Vannfasen ble vasket med 2 x 3 ml CHCI3 og inndampet til tørrhet under redusert trykk. Råproduktet (0,050 g) ble renset på en Lobar (A) RP 8 kolonne (Merck) under eluering med 0,1% TFA i 7,5 EtOH (aq.). Etter lyofilisering av produktet, ble det rekromatografert på den samme kolonnen under eluering med 0,1% TFA i 5% EtOH (aq.). Produktet ble lyofilisert. Utbytte: 0,016 g. Det ninhydrin*, Cl2/dikarboksidin+ og UV254-produkt var homogent ifølge TLC, (S3: Rf=0,436), og kun spor av urenheter ble påvist ved HPLC.
Aminosyre-analyse: Asp (1,02), Glu (1,91), Cys (1,08), Lys (0,93).
Eksempel 2
(Cys-Lys)2, (9):
Forbindelse (2) fra Eksempel 1 ble oppløst i TFA og omrørt ved romtemperatur i 40 minutter. Oppløsningsmidlet ble fordampet under redusert trykk (30°C), og den vann-oppløselig del av residuet ble kromatografert på en Lobar (B) RP 8 kolonne (Merck) ved bruk av 0,1% TFA (aq.) i 5% EtOH (aq.) som mobil fase med UV220 deteksjon. Fraksjoner inneholdende det rene produkt (TLC) ble samlet og lyofilisert. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,57) og ga positiv reaksjon med ninhydrin-og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 93,5% rent (areal). Aminosyre-analyse: Cys (1,01), Lys (0,99).
Eksempel 3
(Asp-Cys-Lys)2, (10):
Forbindelse (4) behandlet som beskrevet i Eksempel 2 (2% EtOH i mobil fase) ga forbindelse (10). Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,64) og ga positiv reaksjon med ninhydrin-og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 97,9% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (0,99), Cys (1,03), Lys (0,98).
Eksempel 4
(Glu-Asp-Cys-Lys)2, (11) :
Forbindelse (6), behandlet som beskrevet i Eksempel 2, ga forbindelse (11). Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,83) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 100% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,08), Cys (0,97), Glu (0,98), Lys (0,98).
Eksempel 5
(pGlu-Glu-Asp-Cys)2, (12):
Forbindelse (12) ble syntetisert som monomer etter den kontinuerlig fastfase-peptidsyntese ved å benytte en Biolynx 4170 automatisk peptidsyntetisator (LKB) og DMF som oppløsnings-middel.
Reagenser: FMOC-Cys(Trt)-SASRIN-RESIN (Bachem); Fmoc-Asp(P-OtBu)-OPFP; FM0C-Glu( -OtBu)-OPFP; pGlu-OPCLP; HOBT som katalysator. FMOC ble fjernet etter hvert koblingstrinn med 20% piperidin i DMF. Disulfidbroen og dermed dimeren ble dannet ved å behandle det fullstendig beskyttede peptid på den faste bærer med 0,1M jod (2-3 ekv.) i DMF i 15 minutter. Etter vasking med DMF ble peptidet løst fra den faste bærer og gjenværende beskyttelses-grupper fjernet i ett trinn ved behandling med 50% TFA i CH3C1 i 40 minutter. Resinet ble frafiltrert og filtratet inndampet til tørrhet under redusert trykk (30°C). Residuet ble oppløst i 0,1% TFA (aq.) og kromatografert på en Lobar (B) RP 8 kolonne ved bruk av 0,1%
TFA (aq.) i 4% propan-2-ol (aq.) som mobil fase med UV22q deteksjon. Fraksjoner inneholdende rent produkt (HPLC) ble samlet og lyofilisert. Produktet ga ingen reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 96,9% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,15), Cys (0,99), Glu (1,85).
Eksempel 6
(pGlu-Glu-Cys-Lys)2 , (13):
Forbindelse (13) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Reagenser ikke beskrevet tidligere: FMOC-Lys(Nc-BOC)-SASRIN-RESIN; FMOC-Cys(S-Trt)-OPFP. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,49) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 100% rent (areal). Aminosyre-analyse: Cys (1,01), Glu (1,98), Lys (1,01).
Eksempel 7
(pGlu-Asp-Cys-Lys)2, (14) :
Forbindelse (14) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,55) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 97,5% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,04), Cys (0,96), Glu (0,97), Lys (1,02).
Eksempel 8
(pGlu-Asp-Glu-Cys-Lys)2, (15):
Forbindelse (15) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,42) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254~absorbsjon.
HPLC-analyse: Asp (1,03), Cys (0,96), Glu (2,09), Lys (0,94).
Eksempel 9
(pGlu-Asp-Asp-Cys-Lys)2» (16):
Forbindelse (16) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,38) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254~absorbsjon.
HPLC-analyse: 100% rent (areal).
Aminosyre-analyse: Asp (2,06), Cys (0,98), Glu (0,98), Lys (0,98) .
Eksempel 10
(pGlu-Glu-Glu-Cys-Lys)2 , (17):
Forbindelse (17) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,39) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 99,9% rent (areal). Aminosyre-analyse: Cys (0,95), Glu (2 ,90) , Lys (1,15).
Eksempel 11
(pGlu-Glu-Asn-Cys-Lys)2 » (18).
Forbindelse (18) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Reagenser ikke beskrevet tidligere: FMOC-Asn-OPFP. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,42) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 98,2% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asx (1,1), Cys (1,03), Glu (1,9), Lys (0,96).
Eksempel 12
(pGlu-Gln-Asp-Cys-Lys)2, (19:
Forbindelse (19) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de korresponderende aminosyrederivater. Reagenser ikke beskrevet tidligere: FMOC-Gln-OPFP. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,45) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon. HPLC-analyse: 98,3% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,09), Cys (1,06), Glx (1,89), Lys (0,96).
Eksempel 13
(pGlu-Glu-Asp-Cys-Arg)2. (20):
Forbindelse (20) ble syntetiset og renset (5% propan-2-ol
i mobil fase) som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de relevante aminosyrederivater. Den endelige fjerning av beskyttelsesgruppene ble utført i 10% tioanisol i TFA.
Reagenser ikke beskrevet tidligere: FMOC-Arg(Mtr)-SASRIN-RESIN. Produktet ga ingen reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 99,4% rent (areal). Aminosyre-analyse: Arg (0,92), Asp (1,12), Cys (1,00), Glu (1,96).
Eksempel 14
(Gln-Glu-Asp-Cys-Lys)2 , (21):
Forbindelse (21) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de relevante aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,57) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 94,7% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,00), Cys (1,01), Glx (2,02), Lys (0,96).
Eksempel 15
(Pro-Glu-Asp-Cys-Lys)2, (22):
Forbindelse (22) ble syntetisert og renset som beskrevet i Eksempel 5 ved bruk av de relevante aminosyrederivater. Produktet var homogent ifølge TLC (S3: Rf=0,57) og ga positiv reaksjon med ninhydrin og ingen UV254-absorbsjon.
HPLC-analyse: 98,2% rent (areal). Aminosyre-analyse: Asp (1,06), Cys (1,01), Glu (0,99), Lys (0,99), Pro (0,96).
Claims (3)
1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive forbindelser med formel (I):
hvor samtlige aminosyre-enheter har L-konfigurasjon, A utgjør
eller et hydrogenatom;
B utgjør
eller en hydroksygruppe;
n og m utgjør uavhengig av hverandre heltallene 1 eller 2; a og b utgjør uavhengig av hverandre heltallene 0 eller 1; R, R' og
R" utgjer uavhengig av hverandre en hydroksygruppe eller en aminogruppe; og de fysiologisk akseptable salter derav,
under den forutsetning at når A og B utgjør henholdsvis et hydrogenatom og en hydroksygruppe, kan B ikke være 0, karakterisert ved at a) beskyttelsesgruppene fjernes fra en forbindelse med formel (II)
hvor A utgjør
et hydrogenatom eller en amin-beskyttende
gruppe;
B utgjør
en hydroksygruppe eller en karboksyl-blokkerende gruppe;
n og m utgjør uavhengig av hverandre heltallene 1 eller 2; a og b utgjør uavhengig av hverandre heltallene 0 eller 1; R1, R<2>, R<8> og R<10> er amino, hydroksy, beskyttet amino eller karboksyl-beskyttende grupper;
R3, R4, R5, R<6>, R<7> og R<9> er hydrogenatomer eller amin-beskyttende grupper;
under den forutsetning at når A utgjør et hydrogenatom eller en amin-beskyttende gruppe og B utgjør en hydroksygruppe eller en karboksyl-blokkerende gruppe, da kan b ikke være 0, idet fjerningen av beskyttelsesgruppene fortrinnsvis skjer ved sur hydrolyse, ved hydrogenolyse, ammonolyse eller enzymatisk hydrolyse, eller b) en forbindelse med formel (III)
hvor A, B, n, m, a, b, R og R' er som ovenfor definert og R" er et hydrogenatom eller en tiol-beskyttende gruppe som kan fjernes under oksyderende betingelser, dimeriseres, og eventuelt omdannes den fremstilte forbindelse til et fysiologisk akseptabelt salt.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av forbindelser som er
karakterisert ved at dot anvendes tilsvarende utgangsmaterialer.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av forbindelsen (pGlu-Glu-Asp-Cys-Lys)2, karakterisert ved at det anvendes tilsvarende utgangsmaterialer.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB868626539A GB8626539D0 (en) | 1986-11-06 | 1986-11-06 | Peptide compounds |
PCT/GB1987/000784 WO1988003535A1 (en) | 1986-11-06 | 1987-11-05 | Peptide compounds |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO883008L NO883008L (no) | 1988-07-05 |
NO883008D0 NO883008D0 (no) | 1988-07-05 |
NO164479B true NO164479B (no) | 1990-07-02 |
NO164479C NO164479C (no) | 1990-10-10 |
Family
ID=26291505
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO883008A NO164479C (no) | 1986-11-06 | 1988-07-05 | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive peptidforbindelser. |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
DK (1) | DK171992B1 (no) |
NO (1) | NO164479C (no) |
-
1988
- 1988-07-04 DK DK369888A patent/DK171992B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-07-05 NO NO883008A patent/NO164479C/no unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO883008L (no) | 1988-07-05 |
NO883008D0 (no) | 1988-07-05 |
NO164479C (no) | 1990-10-10 |
DK171992B1 (da) | 1997-09-08 |
DK369888A (da) | 1988-07-04 |
DK369888D0 (da) | 1988-07-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5849690A (en) | Anti-aggregatory peptides | |
CA1236786A (en) | Peptide compounds | |
US4987122A (en) | Peptide compounds and medical method of use thereof | |
PT95661B (pt) | Processo de preparacao de peptidos ciclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem | |
US20130310314A1 (en) | Solid phase synthesis of h(gly2)glp-2 | |
CA1339947C (en) | Peptide compounds | |
NO177713B (no) | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av hemoreguleringspeptider | |
NO844123L (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av nonapeptider og dodekopeptider | |
IE47547B1 (en) | Psychopharmacological peptides suitable for therapeutic administration | |
NO164479B (no) | Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive peptidforbindelser. | |
Hardy et al. | Synthesis of [4, 5-dehydroLeu 2]-and [3, 4-dehydropro 6]-locust adipokinetic hormone | |
EP0673388B1 (en) | Double chain peptide compounds having hemoregulatory activity | |
EP0722459B1 (en) | Hemoregulatory penta- or hexapeptides | |
WO1995015336A1 (en) | Double-chain hemoregulatory peptides | |
JPS63258490A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 |