NL9001832A - Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. - Google Patents
Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. Download PDFInfo
- Publication number
- NL9001832A NL9001832A NL9001832A NL9001832A NL9001832A NL 9001832 A NL9001832 A NL 9001832A NL 9001832 A NL9001832 A NL 9001832A NL 9001832 A NL9001832 A NL 9001832A NL 9001832 A NL9001832 A NL 9001832A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- dna
- dna sequence
- infection
- contortus
- haemonchus contortus
- Prior art date
Links
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 title claims abstract description 17
- 241000243974 Haemonchus contortus Species 0.000 claims abstract description 46
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 27
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 15
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims abstract description 6
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims 2
- 241000894007 species Species 0.000 abstract description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 23
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 5
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 5
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 5
- 241000255597 Drosophila hydei Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 3
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 2
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- NVEPPWDVLBMNMB-SNAWJCMRSA-N 1-methyl-2-[(e)-2-(3-methylthiophen-2-yl)ethenyl]-5,6-dihydro-4h-pyrimidine Chemical compound CN1CCCN=C1\C=C\C1=C(C)C=CS1 NVEPPWDVLBMNMB-SNAWJCMRSA-N 0.000 description 1
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005660 Abamectin Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000244036 Brugia Species 0.000 description 1
- 241000243982 Brugia pahangi Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241001126268 Cooperia Species 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102100021238 Dynamin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 201000006353 Filariasis Diseases 0.000 description 1
- 101000817607 Homo sapiens Dynamin-2 Proteins 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 241001137880 Nematodirus battus Species 0.000 description 1
- 241001126259 Nippostrongylus brasiliensis Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000243795 Ostertagia Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 241000191771 Teladorsagia circumcincta Species 0.000 description 1
- 241000243774 Trichinella Species 0.000 description 1
- 241000243776 Trichinella nativa Species 0.000 description 1
- 241000243777 Trichinella spiralis Species 0.000 description 1
- 241000243796 Trichostrongylus colubriformis Species 0.000 description 1
- 241000122858 Trichostrongylus vitrinus Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003455 ganglion stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 244000000050 gastrointestinal parasite Species 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000001153 interneuron Anatomy 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 229960005121 morantel Drugs 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 235000003784 poor nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 229940096911 trichinella spiralis Drugs 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43536—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from worms
- C07K14/4354—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
SPECIFIEKE SEQUENTIES VAN DNA VAN EEN NEMATODE DIE TOEGEPAST KUNNEN WORDEN BIJ DE DIAGNOSTIEK VAN INFEKTIE MET DE NEMATODE.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op specifieke sequenties van DNA van een tubulinegen van Haemonchus contortus en delen ervan, op inserties van de sequenties in vectoren en microorganismen en op de toepassing van genoemde sequenties onder andere bij de diagnostiek van infektie met genoemde nematode.
Parasitaire helminthen (wormen) veroorzaken heamonchosis, een van de meest verbreide en ernstige infectieziekten bij mens en dier. Bij landbouwhuisdieren komen infecties voor op alle leeftijden en bijna in ieder bedrijf.
Het gebruik van anthelmintica is wijd verspreid in de diergeneeskunde. In Nederland werd hieraan in 1987 35 miljoen gulden uitgegeven. In 1985 werd in de hele wereld US$ 540 miljoen besteed aan anthelmintica. De totale kosten van parasitaire wormeninfecties bij runderen (anthelmintica, productieverlies etc.) worden in Nederland geschat op 100 tot 200 miljoen gulden per jaar (proefschrift H.W. Ploeger 1988, LU Wageningen).
Er is weinig bekend over de moleculaire biologie van het werkingsmechanisme van de verschillende bestrijdingsmiddelen. Er zijn drie groepen breedspectrumanthelmintica, die ieder hun eigen werkingsmechanisme hebben. Dit zijn i) de benzimidazolen, die waarschijnlijk werken via de binding aan tubuline en daardoor het transport in de cel en de celdeling remmen (Lacey. E. 1988. The role of the cytoskeletal protein, tubulin, in the mode of action and mechanism of drug resistance to benzimidazoles. Int. J. Parasitol. 18, 885-936).
ii) levamisole en morantel, ganglionstimulantia die leiden tot paralyse van de parasiet, en iii) de avermectines, die het remmende effect van gamma-amino-boterzuur (GABA) versterken. GABA is in nematoden de belangrijkste neurotransmitter voor remmende signalen van interneurons naar motor-neurons (Barragry, T. 1984a. Anthelmintics-A Review. N.Z. Vet. J. 32, l6l-l64; Barragry, T. 1984b. Anthelmintics-review Part II. N.Z. Vet. J. 22, 191-199).
Van deze drie worden de benzimidazolen het meest gebruikt.
Wij hebben onder toepassing van moleculair biologische technieken een van de meest schadelijke schapen maag-darm parasieten onderzocht:
Haemonchus contortus. Deze komt wereldwijd voor, veroorzaakt haemon-chosis, en zorgt voor een schade van 50 miljoen gulden per jaar bij de Nederlandse schapenhouderij.
Met het oog op een doeltreffende bestrijding van dit schadelijke organisme is een gevoelige en betrouwbare methode voor het opsporen van deze worm onontbeerlijk. De infecties met parasitaire wormen bij schapen zijn meestal menginfecties en derhalve is er een methode nodig die H. contortus van de andere aanwezige parasitaire wormen kan onderscheiden. De methoden die nu toegepast worden voor de diagnose van H. contortus zijn: 1) de waarneming van de specifieke ziekteverschijnselen bij het schaap, en 2) de differentiatie van de larvenkweek uit faeces van het schaap.
Een nadeel van 1) is gelegen in het feit dat de klinische diagnose van een infectie met parasitaire maag-darmwormen moeilijk te stellen is, omdat de ziekteverschijnselen niet altijd te onderscheiden zijn van die van andere ziekten of slechte voeding. Bij H. contortus zijn de uiterlijke ziekteverschijnselen (o.a. anemie en oedeem) pas waarneembaar bij een hoge infectiegraad, terwijl er al schade (gewichtsverlies, wolverlies, melkverlies) veroorzaakt wordt bij een infectie zonder deze uiterlijke ziekteverschijnselen.
Een nadeel van methode 2) is gelegen in het feit dat de eieren van diverse nematoden in de faeces van geïnfecteerde dieren erg op elkaar lijken, waardoor het bij eieren niet mogelijk is een diagnose op worm-soort te stellen. Hiertoe moet eerst een larvenkweek worden uitgevoerd, hetgeen ongeveer een week duurt. In de praktijk wordt deze methode weinig toegepast (Janssens, P.G., Vercruysse, J., Jansen, J. uitg.: Wormen en wormziekten bij mens en dier (1989) Samsom Stafleu, Alphen aan de Rijn/Brussel).
Er is dus een nieuwe, snelle en soortspecifieke test nodig om de diagnose van besmetting met H. contortus te kunnen stellen. Bij andere nematoden zijn er een aantal tests die worden toegepast, zoals: a) de dot-blot-assay b) de polymerasekettingreactie (PCR).
De dot-blot-assay is zeer gevoelig en levert snel resultaten, zoals bijvoorbeeld bij de diagnostiek van de humane nematode Brugia, die filariasis veroorzaakt (McReynolds, L.A., deSimone, S.M., Williams, S.A. (1986) Cloning and comparison of repeated DNA sequences from the human filarial parasite Brugia pahangi. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 797-801). Bij deze test wordt totaal DNA van de eieren op een nylon membraan gebracht en wordt het gehybridiseerd met de specifieke DNA-probe.
Bij de PCR kunnen specifieke DNA-sequenties als primer worden toegepast, waardoor een gedeelte van het specifieke gen geamplificeerd wordt. Dit is zichtbaar te maken door het reactiemengsel te analyseren met behulp van een agarosegel, of door een marker (fluorescerend) aan de primer te koppelen (De Bruijn, M.H.L.,(1988) Diagnostic DNA amplification: no respite for the elusive parasite. Parasitol. Today, 4:293-295)♦ Tot dusver is er geen DNA van Haemonchus contortus bekend dat specifiek is voor de soort en derhalve zijn deze tests niet mogelijk voor de diagnose van besmetting met H. contortus. Verrassenderwijs is gevonden dat DNA coderend voor tubuline soortspecifiek is voor H. contortus.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een DNA sequentie van een tubulinegen van H. contortus of een deel daarvan. De DNA-sequen-tie van het tubulinegen of een deel daarvan omvat het alfa-tubulinegen van H. contortus of een deel daarvan of het beta-tubulinegen van H. contortus of een deel daarvan.
Een DNA-sequentie volgens de uitvinding kan als probe worden gebruikt voor het specifiek opsporen van H. contortus, met name ook in menginfecties. Probes die deze sequenties of delen daarvan omvatten reageren specifiek met H. contortus, waarbij een probe die een DNA-sequentie van een beta-tubulinegen of een deel daarvan omvat de voorkeur verdient.
De onderzochte beta-tubulineprobes reageren steeds positief op de aanwezigheid van H. contortus, ook in geval van een menginfectie. De beta-tubulineprobe van H. contortus werd ook op het DNA van andere, veel voorkomende, schapeparasieten uitgetest en het bleek dat deze reactie veel minder sterk was dan met de eigen soort. De soorten die o.a. getest werden zijn: Cooperia circumcincta, Nematodirus battus, Nippostrongylus brasiliensis, Ostertagia circumcincta, Trichostrongylus colubriformis, Trichostrongylus vitrinus, Trichinella spiralis en Trichinella nativa.
Door uit een DNA-sequentie volgens de uitvinding een specifieke sequentie van bijvoorbeeld tenminste 10 nucleotiden te kiezen, die alleen met H. contortus reageert, kan een test opgezet worden, waardoor het, bij een menginfectie met nematoden, mogelijk wordt op het DNA van de eieren een diagnose van besmetting met H. contortus te stellen.
Voorbeelden van tests die kunnen worden toegepast zijn die, die bij andere nematoden zijn toegepast: a) de dot-blot-assay b) de polymerasekettingreactie (PCR).
De onderhavige uitvinding heeft ook betrekking op een werkwijze voor de diagnose van een worminfectie, waarbij men het totaal DNA van de eieren van de nematode brengt op een nylon membraan en hybridiseert met een DNA-probe, welke werkwijze gekenmerkt wordt doordat men een diagnose van infectie met Haemonchus contortus stelt, waarbij men als DNA-probe een sequentie toepast die overeenkomt met een tubulinegen van H. contortus of een deel daarvan. Een voorkeurs werkwijze is die waarbij men specifieke stukken DNA uit het DNA van de eieren amplificeert, bijvoorbeeld door middel van PCR, en deze zichtbaar maakt. De diagnose van een infectie met H. contortus kan gesteld worden doordat de amplificatie van specifieke stukken alleen werkt wanneer er H. contortus DNA in het eieren monster aanwezig is en er primers gebruikt worden die soortspecifiek zijn voor H. contortus, zoals een primer die overeenkomt met ten minste een deel van een tubulinegen van H. contortus. De uitvinding heeft verder betrekking op een kit voor het uitvoeren van een dergelijke werkwijze, welke kit een DNA-sequentie volgens de uitvinding omvat en tevens voorzien is van andere middelen en materialen, die voor een deskundige op dit gebied duidelijk zullen zijn.
De sequenties volgens de uitvinding zijn ook bruikbaar wanneer zij in een vector zijn ingebouwd, waarbij de voorkeur uitgaat naar een expressievector. De uitvinding heeft betrekking op dergelijke vectoren alsmede op recombinant microorganismen die een DNA-sequentie volgens de uitvinding omvatten.
De uitvinding heeft eveneens betrekking op een peptide dat tenminste een gedeelte van de aminozuursequentie, die door een DNA-sequentie volgens de uitvinding wordt gecodeerd, omvat.
Peptiden van bijvoorbeeld tenminste 15 aminozuren zijn geschikt als antigeen, bijvoorbeeld voor het opwekken van specifiek antiserum, of monoclonale antilichamen tegen H. contortus. De uitvinding heeft betrekking op deze antistoffen. Dergelijke antistoffen kunnen eveneens worden toegepast voor het diagnostiseren van een besmetting met Haemonchus contortus. De uitvinding heeft betrekking op deze toepassing, alsmede op de toepassing van de antistoffen in een kit voor de diagnose van besmetting met H. contortus.
VOORBEELD
Constructie van de genenbanken van H. contortus en analyse van de tubu-linekloons
Genomisch DNA werd gemaakt van L3 larven volgens de methode van Coulson et al. (Coulson, A., Sulston, J., Brenner, S. en Karn, J.(1986)
Toward a physical map of the genome of the nematode Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 7821-7825). De grootte van de te kloneren stukken DNA bedroeg 20 kb. Teneinde willekeurige fragmenten van deze grootte te verkrijgen werd een partiële digestie uitgevoerd met een restrictie-enzym dat vaak knipt in genomisch DNA. De concentratie van het enzym werd hiertoe gekozen zoals beschreven wordt in Maniatis et al. (Maniatis. T., Fritsch. T. en Sambrook. J. (1982) Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., USA). Deze stukken werden geïsoleerd en geligeerd in het DNA van de bacteriofaagarmen van EMBL3 volgens de methode van Frischauf et al. (Frischauf, A.M., Lehrach. H., Poustka, A., Murray, N. (1983) Lambda replacement vectors carrying polylinker sequences. J. Mol. Biol, 170, 827-841). Dit DNA-construct werd vervolgens in bacteriofaag eiwitomhul-sel verpakt en toegepast om de bacteriestam Le 392 te infecteren. De geïnfecteerde bacteriën werden uitgeplaat met niet geïnfecteerde bacteriën en na incubatie bij 37 °C was een plaque zichtbaar op de plek waar zich geïnfecteerde bacterie bevond ( Frischauf, A.M., Lehrach, H., Poustka, A., Murray, N. (1983) Lambda replacement vectors carrying polylinker sequences. J. Mol. Biol. 170, 827-841). Vervolgens werd de plaque gescreened volgens de methode van Maniatis et al. (Maniatis. T., Fritsch, T. en Sambrook, J. (1982) Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., USA).
Om de alfa-tubuline-DNA bevattende kloons te isoleren werden als probes voor tubuline kippen alfa-tubuline, [zoals beschreven in Valenzuela et al. (Valenzuela, P., Quiroga, M., Zaldivar, J., Rutter, W.J., Kirshner, M.W. en Cleveland, D.W. (1981) Nucleotide and corresponding amino acid sequences encoded by alfa and beta tubulin mRNA's. Nature 289, 650-655)] en Drosophila hydei alfa-tubuline [een gift van dr R. Brand, van de K.U.N. te Nijmegen (Michiels, F., Falkenburg, D., Muller, A.M., Hinz, U., Otto, U., Bellmann, R., Glazer, K.H., Brand, R., Bialojan, S. en Renkawitz-Pohl, R. (1987) Testis-specific beta2 tubulins are identical in Drosophila melanogaster and D. hydei beta differ from the ubiquitous betal tubulin)] gebruikt.
Om de beta-tubuline-DNA bevattende kloons te isoleren werden als probes voor beta-tubuline een beta-tubulinekloon van Caenorhabditis elegans, Ben-1 [die beschreven wordt in Driscoll et al. (Driscoll, M., Dean, E., . Reilly, E., Bergholz, E. en Chalfie, M. (1989) Genetic and molecular analysis of a Caenorhabditis elegans beta tubulin that conveys benzimidazole sensitivity. J. Cell Biol. 109, 2993-3003.)] en een beta-tubuline kloon van Drosophila hydei pTB5 [een gift van Dr. R. Brand, K.U.N.
Nijmegen (Michiels, F., Falkenburg, D., Muller, A.M., Hinz, Ü., Otto, U., Bellmann, R., Glazer, K.H., Brand, R., Bialojan, S. en Renkawitz-Pohl, R. (1987) Testis-specific beta2 tubulins are identical in Drosophila melanogaster and D. hydei beta differ from the ubiquitous betal tubulin)] gebruikt.
Van de aldus verkregen kloons werden, voor alfa-tubuline, de kloon pEMBL8cA (gedeponeerd bij het CBS te Baarn onder nr. CBS 335*90) en, voor beta-tubuline, de kloon pEMBL7aB (gedeponeerd bij het CBS te Baarn onder nr. CBS 33^.90) verder gekarakteriseerd. Subkloons hiervan, die voor eiwit coderende stukken DNA bevatten, werden in de vectoren Blue-script en M13 geconstrueerd. Het DNA van deze subkloons werd gesequenced met behulp van de dideoxymethode van Sanger et al. (Sanger, F., Nicklen, S. en Coulson, A.R. (1977) DNA sequencing with chain terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA j4, 5463-5467) zoals gemodificeerd in de T7 sequencing kit van Pharmacia en de M13 sequencing kit van Amersham. Er werden standaard primers gebruikt, die bij de kits geleverd werden. De analyse en vergelijking van de aldus verkregen sequenties werden met computerprogramma’s Microgenie ( Beekman) en PC/Gene (Geno-fit, Geneve) uitgevoerd. De sequenties die van deze kloons bepaald zijn, worden weergegeven in respektievelijk figuren 1 en 2.
De voor H. contortus specifieke PCR.
Er werden oligonucleotiden, 20-meren gesynthetiseerd voor de DNA-volgorde van beta-tubuline van H. contortus. De betal primer is gelokaliseerd van aminozuur 223 tot aminozuur 229 en de beta2 primer, op de andere streng, is gelokaliseerd van aminozuur 420 tot aminozuur 427· De methode voor PCR werd toegepast volgens Ehrlich et al. ( Saiki, R.K.,(1989) in: PCR technology, principles and applications for DNA amplification. Erlich, H.A. (ed.), Stockton Press, New York, London, biz 7-16. De in de onderhavige uitvinding toegepaste reactieomstandigheden die gebruikt zijn om het DNA te amplificeren zijn: annealing-temperatuur van 6leC gedurende 30 seconden, elongatie bij 72°C gedurende 2 minuten en denaturatie bij 95°C gedurende 30 seconden. Deze methode amplificeert het beta-tubuline van H. contortus uit het genomisch DNA, hetgeen zichtbaar te maken is door electroforese in een agarosegel. Deze methode werkt niet bij Ostertagia, Trichstrongylus en Trichinella, hetgeen duidelijk maakt dat deze PCR-methode met de boven genoemde primers specifiek is voor Haemonchus contortus.
Claims (16)
1. DNA-sequentie van een tubulinegen van Haemonchus contortus of een deel daarvan.
2. DNA-sequentie van het beta tubuline gen van Haemonchus contortus of een deel daarvan.
3. DNA-sequentie volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat deze de nucleotidevolgorde volgens fig. 2 of een deel daarvan omvat: DNA-sequentie volgens conclusie 3» «et het kenmerk, dat deze verkrijgbaar is uit kloon pEMBL7aB (gedeponeerd bij het CBS te Baarn onder nr.CBS 33^*90).
5. DNA-sequentie volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat deze de nucleotidevolgorde volgens fig. 1 of een deel daarvan omvat:
6. DNA-sequentie volgens conclusie 5* «et het kenmerk, dat deze verkrijgbaar is uit kloon pEMBL8cA (gedeponeerd bij het CBS te Baarn onder nr.CBS 335*90). 7* Werkwijze voor de diagnose van een worminfectie, waarbij men het totaal DNA van de eieren van de nematode op een (nylon) membraan brengt en hybridiseert met een DNA probe, met het kenmerk, dat men een diagnose van infectie met Haemonchus contortus stelt, waarbij men als DNA-probe een sequentie toepast die tenminste een sequentie volgens een van de voorgaande conclusies omvat.
8. Werkwijze voor de diagnose van een worminfectie, waarbij men DNA uit het totaal DNA van de eieren van de nematode amplificeert, met het kenmerk, dat men een diagnose van infectie met Haemonchus contortus stelt, waarbij men als primer een DNA-sequentie toepast die tenminste een DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 omvat.
9. Peptide dat tenminste een gedeelte van de aminozuursequentie die door een DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 gecodeerd wordt omvat.
10. Vector die tenminste een DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 omvat.
11. Vector volgens conclusie 10, met het kenmerk, dat deze een ex-pressievector is die de DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 tot expressie kan brengen.
12. Recombinant microorganisme dat een DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 of een vector volgens conclusie 10 of 11 omvat.
13. Antilichaam dat is opgewekt tegen een peptide volgens conclusie 9*
14. Toepassing van een antilichaam volgens conclusie 13 voor het diagnostiseren van een besmetting met Haemonchus contortus.
15. Vaccin ter bescherming tegen of bestrijding van Haemonchus contortus, dat een peptide volgens conclusie 9 of een vector volgens conclusie 11 of een recombinant microorganisme volgens conclusie 12 omvat.
16. Vaccin ter bestrijding van Haemonchus contortus. dat een antilichaam volgens conclusie 13 omvat.
17. Kit voor het stellen van een diagnose van besmetting met Haemonchus contortus. welke een antilichaam volgens conclusie 13 omvat.
18. Kit voor het stellen van een diagnose van besmetting met Haemonchus contortus, welke een DNA-sequentie volgens een van de conclusies 1-6 omvat.
Priority Applications (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL9001832A NL9001832A (nl) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. |
NZ239411A NZ239411A (en) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Haemonchus contortus tubulin, dna encoding it, dna probes therefrom and |
AU84136/91A AU8413691A (en) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Specific dna sequences of a nematode which can be used for the diagnosis of infection with the nematode |
EP91915017A EP0668908B1 (en) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Specific dna sequences of a nematode which can be used for the diagnosis of infection with the nematode |
PCT/NL1991/000153 WO1992003549A1 (en) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Specific dna sequences of a nematode which can be used for the diagnosis of infection with the nematode |
DE69132173T DE69132173D1 (de) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Dns-sequenzen von einer nematode, verwendbare für diagnose von infektionen |
AT91915017T ATE192491T1 (de) | 1990-08-16 | 1991-08-15 | Dns-sequenzen von einer nematode, verwendbare für diagnose von infektionen |
ZA916512A ZA916512B (en) | 1990-08-16 | 1991-08-16 | Specific dna sequences of a nematode which can be used for the diagnosis of infection with the nematode |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL9001832A NL9001832A (nl) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. |
NL9001832 | 1990-08-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL9001832A true NL9001832A (nl) | 1992-03-16 |
Family
ID=19857554
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL9001832A NL9001832A (nl) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0668908B1 (nl) |
AT (1) | ATE192491T1 (nl) |
AU (1) | AU8413691A (nl) |
DE (1) | DE69132173D1 (nl) |
NL (1) | NL9001832A (nl) |
NZ (1) | NZ239411A (nl) |
WO (1) | WO1992003549A1 (nl) |
ZA (1) | ZA916512B (nl) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9209993D0 (en) * | 1992-05-08 | 1992-06-24 | Munn Edward A | Vaccines |
AU5282193A (en) * | 1992-10-28 | 1994-05-24 | Mcgill University | Peptides and vaccines derived from nematode tubulin |
WO1996032132A1 (en) * | 1995-04-10 | 1996-10-17 | The Upjohn Company | Peptides of nematode tubulin and methods of use |
DE19931883A1 (de) * | 1999-07-09 | 2001-01-11 | Bayer Ag | DNA kodierend für Beta-Tubulin und deren Verwendung |
CN111537716B (zh) * | 2020-06-04 | 2023-06-23 | 南京农业大学 | 一种捻转血矛线虫早期感染诊断试剂盒 |
-
1990
- 1990-08-16 NL NL9001832A patent/NL9001832A/nl not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-08-15 WO PCT/NL1991/000153 patent/WO1992003549A1/en active IP Right Grant
- 1991-08-15 NZ NZ239411A patent/NZ239411A/en unknown
- 1991-08-15 AT AT91915017T patent/ATE192491T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-08-15 DE DE69132173T patent/DE69132173D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-15 EP EP91915017A patent/EP0668908B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-15 AU AU84136/91A patent/AU8413691A/en not_active Abandoned
- 1991-08-16 ZA ZA916512A patent/ZA916512B/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE69132173D1 (de) | 2000-06-08 |
EP0668908B1 (en) | 2000-05-03 |
AU8413691A (en) | 1992-03-17 |
NZ239411A (en) | 1994-02-25 |
ZA916512B (en) | 1992-05-27 |
WO1992003549A1 (en) | 1992-03-05 |
ATE192491T1 (de) | 2000-05-15 |
EP0668908A1 (en) | 1995-08-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Weiss et al. | Molecular biology, molecular phylogeny, and molecular diagnostic approaches to the microsporidia | |
Allsopp | Heartwater-Ehrlichia ruminantium infection | |
EP1497467B1 (fr) | Oligonucleotide issus des sequences codant pour la composante de surface des proteines d'enveloppe des ptlv et leurs utilisations | |
Mitreva et al. | Biology and genome of Trichinella spiralis | |
Paskewitz et al. | The hemolymph proteome of Anopheles gambiae | |
Zhou et al. | A secreted cystatin from the tick Haemaphysalis longicornis and its distinct expression patterns in relation to innate immunity | |
Castillo et al. | Identification and molecular characterization of a complement C3 molecule in a lophotrochozoan, the Hawaiian bobtail squid Euprymna scolopes | |
Simser et al. | Immune-responsive lysozymes from hemocytes of the American dog tick, Dermacentor variabilis and an embryonic cell line of the Rocky Mountain wood tick, D. andersoni | |
Arvidson et al. | Parasitoid Jewel Wasp Mounts Multipronged Neurochemical Attack to Hijack a Host Brain*[S] | |
Lally et al. | Development of a polymerase chain reaction assay for the diagnosis of neosporosis using the Neospora caninum 14-3-3 gene | |
André et al. | Using proteomic approaches to unravel the response of Ctenocephalides felis felis to blood feeding and infection with Bartonella henselae | |
NL9001832A (nl) | Specifieke sequenties van dna van een nematode die toegepast kunnen worden bij de diagnostiek van infektie met de nematode. | |
Russell et al. | Identification and isolation of cDNA clones encoding the abundant secreted proteins in the saliva proteome of Culicoides nubeculosus | |
Moore et al. | Impact of poxvirus lesions on saltwater crocodile (Crocodylus porosus) skins | |
Hayashida et al. | Establishment of a mouse-tick infection model for Theileria orientalis and analysis of its transcriptome | |
Yao et al. | Trichinella spiralis (T1) and Trichinella T5: a comparison using animal infectivity and molecular biology techniques | |
CN113355441B (zh) | 用于住肉孢子虫检测的试剂盒、引物对、探针及方法 | |
CN109097482B (zh) | 细粒棘球绦虫线粒体nd6基因的应用 | |
Govindasamy et al. | A proteomic approach to identify Bacillus subtilis induced defense related proteins in noni challenged with Meloidogyne incognita | |
Shamim et al. | Peptides isolation from crude somatic antigens of Haemonchus contortus through SDS-PAGE | |
Gottsch et al. | Cloning and sequence analysis of human and bovine corneal antigen (CO-Ag) cDNA: identification of host-parasite protein calgranulin C. | |
US6268153B1 (en) | Polymerase chain reaction diagnostic assays for the detection of dirofilaria immitis in blood and mosquitoes | |
CN109777744A (zh) | 一种快速筛选抑制赤霉病菌don毒素合成的化合物的方法 | |
CN109402129B (zh) | 一种广州管圆线虫Acsod3基因及其在治疗或缓解广州管圆线虫病中的应用 | |
Soelistyoadi et al. | Molecular Detection, Histopathology, and Scanning Electron Microscopy of Myxobolus koi Infecting Cyprinus carpio Koi |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A1B | A search report has been drawn up | ||
BV | The patent application has lapsed |