NL8601842A - CEPH-3-EM-CARBONIC ACID DERIVATIVES, PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF, CONTAINING PHARMACEUTICAL PREPARATIONS THEREOF, PROCESS FOR THE PREPARATION OF THE latter, AND PROCESS FOR THE TREATMENT OF PATIENTS LIKING THOSE LIKE THOSE LIKE THIS. - Google Patents

Description

% · NL 33.554 dJ/vdM ^ - 1 -% NL 33,554 dJ / vdM ^ - 1 -

Ceph-3-em-carbonzuurderivaten, werkwijze ter bereiding daarvan, dergelijke verbindingen bevattende farmaceutische preparaten, werkwijze voor de bereiding van deze laatste, alsmede werkwijze voor de behandeling van patiënten, die lijden aan bacteriële ziekten.Ceph-3-em-carboxylic acid derivatives, method for the preparation thereof, pharmaceutical compositions containing such compounds, method for the preparation of the latter, and method for the treatment of patients suffering from bacterial diseases.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een nieuw ceph-3-em-4-carbonzuurderivaat, een werkwijze voor de bereiding daarvan, farmaceutische preparaten die een dergelijke verbinding als werkzaam bestanddeel bevatten, een werk-5 wijze voor de bereiding van dergelijke farmaceutische preparaten, alsmede een werkwijze voor de behandeling van patiënten, die lijden aan bacteriële ziekten.The present invention relates to a new ceph-3-em-4-carboxylic acid derivative, a process for the preparation thereof, pharmaceutical preparations containing such a compound as active ingredient, a process for the preparation of such pharmaceutical preparations, and a method of treating patients suffering from bacterial diseases.

Op het gebied van de semi-synthetische β-lactam-derivaten is een groot aantal proefnemingen uitgevoerd, 10 teneinde verbindingen te bereiden met een breed of speciaal antimicrobiëel spectrum. Een significante groep van deze verbindingen omvat een gesubstitueerde of niet gesubstitueerde isoxazoolgroep, die bevestigd is via een aceetamidogroep aan het koolstofatoom op positie 6 van 6-amino-penicillaanzuur en 15 aan het koolstofatoom op positie 7 van 7-amino - cefalospo-raanzuur, respectievelijk. Verscheidene vertegenwoordigers van deze groep verbindingen vertonen een significante anti-microbiële werking.A large number of experiments have been carried out in the field of the semi-synthetic β-lactam derivatives in order to prepare compounds with a broad or special antimicrobial spectrum. A significant group of these compounds includes a substituted or unsubstituted isoxazole group attached via an acetamido group to the carbon atom at position 6 of 6-amino-penicillanic acid and 15 to the carbon atom at position 7 of 7-amino-cephalosporanoic acid, respectively . Several representatives of this group of compounds exhibit significant anti-microbial activity.

Er zijn werkzame moleculen bekend, die ontwikkeld 20 zijn tot geneesmiddelen en die een gesubstitueerde isoxazool- 4-yl-aceetamidogroep op positie 6 van het penicillinedeel omvatten. Moleculen van dit type zijn beschreven in de Amerikaanse octrooischriften nrs. 2.996.501 en 3.239.507 en in het Franse octrooischrift nr. BSM nr. 6432.Active molecules are known which have been developed into medicaments and which include a substituted isoxazol-4-yl-acetamido group at position 6 of the penicillin moiety. Molecules of this type are described in U.S. Pat. Nos. 2,996,501 and 3,239,507 and in French Pat. No. BSM No. 6432.

25 In het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.394.504 zijn penicilline- en cefalosporinederivaten beschreven, die behalve een 3-amino-isoxazool-5-yl-aceetamidogroep, tevens een alkoxyiminogroep op de α-positie, met betrekking tot de isoxazoolring, bezitten. De in dit Amerikaanse octrooischrift 30 beschreven verbindingen hebben een significante werking ten opzichte van staphylococcusstammen.US Patent No. 4,394,504 describes penicillin and cephalosporin derivatives which, in addition to a 3-amino-isoxazol-5-yl-acetamido group, also have an alkoxyimino group at the α position, with respect to the isoxazole ring. The compounds disclosed in this U.S. Patent 30 have significant activity against staphylococcal strains.

8601342 * % - 2 -8601342 *% - 2 -

In het Duitse Offenlegungsschrift nr. 2.155.081 zijn penicilline- en cefalosporinederivaten beschreven, die (3-gesubstitueerd fenyl)-isoxazool-5-yl-aceetamidogroepen bevatten. Geen van de werkelijk beschreven en beproefde fenyl-5 isoxazoolderivaten vertoont echter enige significante anti-microbiële werking ten opzichte van de gebruikte proefmicro-organismen.German Offenlegungsschrift No. 2,155,081 describes penicillin and cephalosporin derivatives containing (3-substituted phenyl) isoxazol-5-yl acetamido groups. However, none of the actually described and tested phenyl-5 isoxazole derivatives show any significant anti-microbial activity over the test microorganisms used.

Verder zijn uit het Duitse Offenlegungsschrift 2.409.949 isoxazool-5-yl-aceetamidoderivaten bekend. De iso-10 xazoolring van deze derivaten draagt echter andere substitu-enten in plaats van de fenylsubstituent.Furthermore, German Offenlegungsschrift 2,409,949 discloses isoxazol-5-yl-acetamido derivatives. However, the iso-10xazole ring of these derivatives carries other substituents in place of the phenyl substituent.

De chemotherapeutische en farmacologische effecten van een gedeelte van de in dit Duitse Offenlegungsschrift beschreven verbindingen werden bepaald. De beproefde moleculen 15 faalden echter in het bezitten van een uitstekende antibacte-riële werkzaamheid ten opzichte van de gebruikte proefmicro-organismen.The chemotherapeutic and pharmacological effects of a portion of the compounds described in this German Offenlegungsschrift were determined. However, the tested molecules failed to have excellent antibacterial activity over the test microorganisms used.

De MIC-waarden van sommige verbindingen werden eveneens beschreven. Deze waarden bereiken echter niet de 20 werkzaamheid, welke onmisbaar is voor een werkzaam bestanddeel dat wordt geselecteerd om tot een geneesmiddel te worden ontwikkeld.The MIC values of some compounds have also been described. However, these values do not reach the efficacy indispensable for an active ingredient selected to be developed into a drug.

De onderhavige uitvinding beoogt thans nieuwe ceph-3-em-4-carbonzuurderivaten met uitstekende farmacologische 25 eigenschappen te verschaffen.The present invention now aims to provide new ceph-3-em-4-carboxylic acid derivatives with excellent pharmacological properties.

Daartoe worden volgens éên aspect van de onderhavige uitvinding 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 van het formuleblad, alsmede farmaco-30 logisch aanvaardbare zouten daarvan, verschaft.To this end, according to one aspect of the present invention, 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl -ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 1 of the formula sheet, as well as pharmaceutically-logically acceptable salts thereof.

Verrassenderwijs werd gevonden, dat het nieuwe 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-lH-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 en zijn farmacologisch aanvaardbare zouten een zeer hoge en ‘35 bruikbare antibacteriële werking vertonen. Dit is bevestigd door chemotherapeutisch onderzoek en farmacologische proeven. Alhoewel de nieuwe verbinding 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl- 8601842 4 * - 3 - eeph-3-em-4-carbonzuur valt onder de algemene formule van het Duitse Offenlegungsschrift 2.409,949, is zijn bereiding niet beschreven in dit Offenlegungsschrift, noch zijn daarin de fysico-chemische data en karakteristieke constanten en MIC-5 waarden daarvan beschreven.It was surprisingly found that the new 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph -3-em-4-carboxylic acid of formula 1 and its pharmacologically acceptable salts exhibit a very high and useful anti-bacterial activity. This has been confirmed by chemotherapeutic research and pharmacological tests. Although the new compound is 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl- 8601842 4 * - 3 - eeph-3-em-4-carboxylic acid falls under the general formula of German Offenlegungsschrift 2,409,949, its preparation is not described in this Offenlegungsschrift, nor are its physicochemical data and characteristic constants and MIC-5 values described.

Volgens een verder aspect van de onderhavige uitvinding is een werkwijze verschaft voor de bereiding van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 10 1 en zijn farmacologisch aanvaardbare zouten, welke werkwijze wordt gekenmerkt door a) het omzetten van 3-chloor-isoxazool-azijnzuur met formule 2 van het formuleblad, of een reactief derivaat daarvan met 7-amino-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-15 thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 3 van het formuleblad en het isoleren van het aldus verkregen 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool- 5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 van het formuleblad uit het reactiemengsel op een op zichzelf bekende 20 wijze en, desgewenst, het omzetten van de laatst genoemde verbinding in een farmacologisch aanvaardbaar zout daarvan door middel van bekende werkwijzen en het isoleren van het zout uit het reactiemengsel op een op zichzelf bekende wijze; of 25 b) het omzetten van 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool- 5-yl-thiol met formule 4 van het formuleblad met 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-cefalosporaanzuur en het isoleren van het aldus verkregen 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-30 3-em-4-carbonzuur met formule 1 van het formuleblad op een op zichzelf bekende wijze en, desgewenst, het omzetten van de laatst genoemde verbinding in een farmacologisch aanvaardbaar zout daarvan, door middel van bekende werkwijzen en het isoleren van het zout uit het reactiemengsel op een op zichzelf 35 bekende wijze.According to a further aspect of the present invention, there is provided a process for the preparation of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazole -5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 10 1 and its pharmacologically acceptable salts, the process characterized by a) converting 3-chloro-isoxazole-acetic acid of formula 2 of the formula sheet , or a reactive derivative thereof with 7-amino-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -15 thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 3 from the formula sheet and isolating the thus obtained 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) - thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 1 of the formula sheet from the reaction mixture in a manner known per se and, if desired, converting the latter compound into a pharmacologically acceptable salt thereof by known methods and isolating the salt from the reaction mixture o p a manner known per se; or b) reacting 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl-thiol of formula 4 of the formula sheet with 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido -cephalosporanic acid and isolating the 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl thus obtained -ceph-30 3-em-4-carboxylic acid of formula 1 of the formula sheet in a manner known per se and, if desired, converting the latter compound into a pharmacologically acceptable salt thereof, by known methods and isolating the salt from the reaction mixture in a manner known per se.

Volgens trap a) van de werkwijze volgens de uitvinding wordt 3-chloor-isoxazoolazijnzuur met formule 2 of een reactief derivaat daarvan omgezet met 7-amino-3-(1-methyl- δ o ü ί 3 42 Τ ·ν - 4 - 1Η-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 3. De reactie kan worden uitgevoerd in een oplosmiddel , bij voorkeur in een waterig acetonmedium, of in een niet met water mengbaar organisch oplosmiddel. De reactie 5 wordt uitgevoerd onder roeren en de reactieduur bedraagt gewoonlijk 30 minuten tot 3 uur.According to step a) of the process according to the invention, 3-chloro-isoxazole acetic acid of formula 2 or a reactive derivative thereof is reacted with 7-amino-3- (1-methyl-δ o ü ί 3 42 Τ · ν - 4 - 1Η -1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 3. The reaction can be carried out in a solvent, preferably in an aqueous acetone medium, or in a water-immiscible organic solvent. The reaction 5 is carried out with stirring and the reaction time is usually from 30 minutes to 3 hours.

Volgens werkwijzevariant b) van de werkwijze volgens de onderhavige uitvinding wordt 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl-thiol met formule 4 omgezet met 7-(3-chloor-10 isoxazool-5-yl)-aceetamido-cefalosporaanzuur.According to process variant b) of the process of the present invention, 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl-thiol of formula 4 is reacted with 7- (3-chloro-10-isoxazole-5-) yl) -acetamido-cephalosporanic acid.

De reactie wordt uitgevoerd in een oplosmiddel, bij voorkeur in een mengsel van water en aceton, bij 30-90°C, bij voorkeur bij een temperatuur tussen 60-65°C, bij een pH in het gebied van 4,5-6,0. De reactieduur bedraagt gewoonlijk 15 2-10 uur*The reaction is carried out in a solvent, preferably in a mixture of water and acetone, at 30-90 ° C, preferably at a temperature between 60-65 ° C, at a pH in the range of 4.5-6, 0. The reaction time is usually 15 2-10 hours *

De antibacteriële werkzaamheid van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool- 5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur wordt aangetoond door middel van de MIC-waarden van deze verbinding. De verbinding 20 iS' : beproefd ten opzichte van een aantal proefmicroorganismen en als referentieverbindingen zijn . commerciëel verkrijgbare geneesmiddelen gebruikt. De resultaten zijn samengevat in tabel Ά.The antibacterial activity of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3- em-4-carboxylic acid is detected by the MIC values of this compound. The compound 20 iS ': tested against a number of test microorganisms and as reference compounds. use commercially available medicines. The results are summarized in Table Ά.

»»

TABEL ATABLE A

25 proefmicroorganisme verbinding met Cefa- Cefu- Cefoxitin formule 1 lexin roximTest microorganism compound with Cefa-Cefu-Cefoxitin formula 1 lexin roxim

Bordetella bronchiseptica 12,5 500 500 100Bordetella bronchiseptica 12.5 500 500 100

Escherichia 30 coli K 12 0,5 6,2 2 1,6Escherichia 30 coli K 12 0.5 6.2 2 1.6

Escherichia coli 6 R 25 15,6 4 1,6 E. coli poliresistens 100 500 250 100 35 Staphylococcus aureus SMITH 0,06 0,8 0,8 1,2 8601842Escherichia coli 6 R 25 15.6 4 1.6 E. coli poliresistens 100 500 250 100 35 Staphylococcus aureus SMITH 0.06 0.8 0.8 1.2 8601842

Sr 'w - 5 - TABEL A (vervolg) proefmicroorganisme verbinding met Cefa- Cefu- Cefoxitin formule 1 lexin roximSr 'w - 5 - TABLE A (continued) test microorganism compound with Cefa-Cefu-Cefoxitin formula 1 lexin roxim

Staphylococcus 5 epidermidis ATCCStaphylococcus 5 epidermidis ATCC

1-12228 0,03 0,8 0,8 0,6 E. coli R-222 0,5 6,2 4 3,1 E. coli R-15 1,6 6,2 4 3,11-12228 0.03 0.8 0.8 0.6 E. coli R-222 0.5 6.2 4 3.1 E. coli R-15 1.6 6.2 4 3.1

Klebsiella 10 ATCC 10.031 0,16 6,2 0,08 12,5Klebsiella 10 ATCC 10,031 0.16 6.2 0.08 12.5

Proteus vulgaris XL 100 500 62,5 3,1Proteus vulgaris XL 100 500 62.5 3.1

Pseudomonas pyocyanea NTCTPseudomonas pyocyanea NTCT

10.490 100 500 500 100 15 Salmonella typhimurium 0,5 6,2 4 3,110,490 100 500 500 100 15 Salmonella typhimurium 0.5 6.2 4 3.1

Bacillus substilis ATCC 6633 0,015 0,3 0,1 0,1Bacillus substilis ATCC 6633 0.015 0.3 0.1 0.1

Staphylococcus 20 aureus 1110 1,25 62,5 125 25Staphylococcus 20 aureus 1110 1.25 62.5 125 25

Staphylococcus aureus 53 0,25 2,5 1,6 12,5Staphylococcus aureus 53 0.25 2.5 1.6 12.5

Streptococcus faecalis 50 250 500 100 25 Steptococcus haemoliticus Pneumo 0,03 0,31 0,008 0,6Streptococcus faecalis 50 250 500 100 25 Steptococcus haemoliticus Pneumo 0.03 0.31 0.008 0.6

Steptococcus haemoliticus A 118 0,06 0,31 - 0,3Steptococcus haemoliticus A 118 0.06 0.31 - 0.3

Steptococcus 30 haemoliticus Robb 0,03 1,25 0,003 1,2Steptococcus 30 haemoliticus Robb 0.03 1.25 0.003 1.2

Absorptieproeven hebben op zeer verrassende wijze onthuld, dat de verbinding met formule 1, welke kan worden.beschouwd als een cefalosporinederivaat van de tweede generatie in het licht van de MIC-waarden, in tegenstelling 35 tot andere, tot deze groep behorende antibiotica, een absorp-tie-index bezit, die de toepassing van deze verbinding mogelijk maakt voor de bereiding van farmaceutische preparaten, die geschikt zijn voor orale toediening. De resultaten zijn in tabel B uiteengezet.Absorption tests have surprisingly revealed that the compound of formula 1, which can be considered a second generation cephalosporin derivative in view of the MIC values, unlike other antibiotics belonging to this group, is an absorp possesses a index of index which permits the use of this compound for the preparation of pharmaceutical preparations suitable for oral administration. The results are set forth in Table B.

ί 1 *ί λ ' * ^ α v £ * λ y - 6 - ρ·ο.. EDc0 mg/kg absorptie-index = - ,, .. . . s.c. EDca mg/kg (bij muizen p.o.) 50 ^ yί 1 * ί λ '* ^ α v £ * λ y - 6 - ρ · ο .. EDc0 mg / kg absorption index = - ,, ... . s.c. EDca mg / kg (in mice p.o.) 50 µ y

TABEL BTABLE B

absorptie-index 5 werkzaam bestanddeel ^ Proteusabsorption index 5 active ingredient ^ Proteus

Smith typhi XLSmith typhi XL

verbinding met formule t 20 1-2 1-2compound of formula t 20 1-2 1-2

Cefuroxim 30 07001 4 10 Cefoxitin 7-8 0,001 /Cefuroxime 30 07 001 4 10 Cefoxitin 7-8 0.001 /

Cefamandol 5 20 /Cefamandol 5 20 /

Cefalexin 1 1 /Cefalexin 1 1 /

Cefotaxim 0,001 0,001 0,001Cefotaxime 0.001 0.001 0.001

Acute toxicologische proeven tonen aan, dat in 15 de afzonderlijke acute dosis, welke karakteristiek is voor 8-lactamen, de verbinding met formule 1 niet toxisch is. Een i.p. of p.o. dosis van 2500 mg/kg lichaamsgewicht veroorzaakte geen enkele dood bij muizen.Acute toxicological tests show that in the separate acute dose, which is characteristic of 8-lactams, the compound of formula 1 is non-toxic. An i.p. or p.o. dose of 2500 mg / kg body weight did not cause any death in mice.

LD^q - 2500 mg/kg lichaamsgewicht.LD ^ q - 2500 mg / kg body weight.

20 Tevens zijn er farmacokinetische proeven uitge voerd, teneinde de absorptie van de verbinding met formule 1 te bepalen. De proeven zijn uitgevoerd op muizen van een CFLP-stam door middel van i.p. en p.o. toediening. 20 Muizen werden gelijktijdig behandeld met een waterige oplossing van 25 de verbinding met formule 1 in een geschikte concentratie.Pharmacokinetic tests have also been carried out to determine the absorption of the compound of formula 1. The tests were performed on mice of a CFLP strain by i.p. and p.o. administration. 20 mice were treated simultaneously with an aqueous solution of the compound of formula 1 at an appropriate concentration.

Dosis: i.p.: in het geval van 20 mg/kg lichaamsgewicht, 0,1 ml van een oplossing met een concentratie van 4 mg/ml; p.o.: in het geval van 80 mg/kg lichaamsgewicht 0,4 ml van een oplossing met een concentratie van 4 mg/ml. Het gemiddelde 30 gewicht van de muizen bedroeg 20 g. Op een bepaald tijdstip liet men de muizen dood bloeden door onthoofding (de bloed-klontering wordt verhinderd door de toevoeging van heparine).Dose: i.p .: in the case of 20 mg / kg body weight, 0.1 ml of a solution at a concentration of 4 mg / ml; p.o .: in the case of 80 mg / kg body weight, 0.4 ml of a solution with a concentration of 4 mg / ml. The average weight of the mice was 20 g. At some point, the mice were allowed to bleed to death by decapitation (blood clotting is prevented by the addition of heparin).

8601342 . c κ» - 7 -8601342. c κ »- 7 -

Het gehalte aan werkzaam bestanddeel van het bloed is microbiologisch bepaald (proef mieroorganisme:The active substance in the blood is microbiologically determined (test ant organism:

Bacillus subtilis ATCC 6633) . De resultaten zijn samengevat in tabel C.Bacillus subtilis ATCC 6633). The results are summarized in Table C.

5 TABEL C5 TABLE C

a) i.p. toediening (20 mg/kg lichaamsgewicht) tijd (uren) bloedgehalte (mg/1) 0,15 1/23 10 0,30 -2,6 0,45 1,23 1 0 b) p.o. toediening (80 mg/kg lichaamsgewicht) tijd (uren) bloedgehalte 15 (mg/1) 0,15 0,35 0,30 0,70 0,45 0,58 1 0,46 20 1,5 0,22 2 0a) i.p. administration (20 mg / kg body weight) time (hours) blood level (mg / 1) 0.15 1/23 10 0.30 -2.6 0.45 1.23 1 0 b) po administration (80 mg / kg body weight ) time (hours) blood level 15 (mg / 1) 0.15 0.35 0.30 0.70 0.45 0.58 1 0.46 20 1.5 0.22 2 0

De absorptie van de verbinding met formule 1 is tevens onderzocht bij beagle-honden. De proefverbinding werd p.o. en i.m. toegediend (in het geval van i.m. toediening 20 mg/kg lichaamsgewicht, bij p.o. toediening 80 mg/kg li-25 chaamsgewicht). Als proefmicroorganisme werd Bacillus subtilis ATCC 6633 gebruikt. Bloed werd verkregen door een veneuze punctie. De resultaten zijn vermeld in tabel D.The absorption of the compound of formula 1 has also been investigated in beagle dogs. The test compound was administered p.o. and i.m. (in the case of i.m. administration 20 mg / kg body weight, with p.o administration 80 mg / kg body weight). Bacillus subtilis ATCC 6633 was used as the test microorganism. Blood was obtained through a venous puncture. The results are shown in Table D.

BSO1$42 -8-BSO1 $ 42 -8-

TABEL DTABLE D

a) i.m. toediening (20 mg/kg lichaamsgewicht) tijd bloedgehalte (uren) (mg/1) 5 0,5 54,6 - 55,6 1 29,7 - 31,1 1,5 10,6 2 5,0 - 5,1 3 1,82- 1,88 10 5 0,34 b) p.o. toediening (80 mg/kg lichaamsgewicht) tijd bloedgehalte (uren) (mg/1) 0,5 0,63 - 0,645 15 1 0,645- 0,67 1/5 3,1 2 5,7 - 5,8 3 7,5 . 5 ^ 2,78 20 Het in het bloed na p.o. toediening gevormde coneentratieverloop geeft weer, dat de verbinding met formule 1 geschikt is voor de bereiding van farmaceutische preparaten voor orale toediening.a) im administration (20 mg / kg body weight) time blood level (hours) (mg / 1) 5 0.5 54.6 - 55.6 1 29.7 - 31.1 1.5 10.6 2 5.0 - 5.1 3 1.82- 1.88 10 5 0.34 b) po administration (80 mg / kg body weight) time blood level (hours) (mg / 1) 0.5 0.63 - 0.645 15 1 0.645- 0.67 1/5 3.1 2 5.7 - 5.8 3 7.5. 5 ^ 2.78 The concentration course formed in the blood after PO administration shows that the compound of formula 1 is suitable for the preparation of pharmaceutical preparations for oral administration.

Het bindingsvermogen van de verbinding met for-25 mule 1 aan serumeiwit is bepaald. Daarvoor werden twee methoden gebruikt; één van deze methoden is gebaseerd op even-wichtsdialyse /Scholten: Antibiot. Chemother. nr. 12, blz.The binding capacity of the compound of formula 1 to serum protein has been determined. Two methods were used for this; one of these methods is based on equilibrium dialysis / Scholten: Antibiot. Chemother. No. 12, p.

103 (1963)_7 en de andere op de zogenaamde "large plate"-methode /F. Kawanagh: Analytical Microbiol. Acad Press N.Y.103 (1963) _7 and the other on the so-called "large plate" method / F. Kawanagh: Analytical Microbiol. Acad Press N.Y.

30 (1963)_7· De mate van binding aan serumeiwit van de verbinding met formule 1 bedraagt 50-70 %, Deze waarde draagt eveneens bij aan de geschiktheid voor orale toepassing.30 (1963) _7 · The degree of binding to serum protein of the compound of formula 1 is 50-70%. This value also contributes to its suitability for oral use.

8601842 -9-.8601842 -9-.

-- τ- τ

De in vivo werkzaamheid van de verbinding met formule 1 is bepaald op muizen van een CFLP-stam. Teneinde de ED^0-waarde te bepalen werden de muizen i.p. geïnfecteerd met 6-8 uur cultures van het mieroorganisme; de dosis bedraagt 5 10 x LD100. Een uur na de infectie werden de dieren behandeld met de waterige oplossing van de proefverbinding. Als referen-tieverbinding werden commerciëel verkrijgbare geneesmiddelen gebruikt. De resultaten zijn geëvalueerd met behulp van de Litchfield-Wilcoxonmethode. In overeenstemming met de bekende, 10 voor 8-lactarnen karakteristieke gegevens, werd gevonden, dat als resultaat van de behandeling, uitgevoerd met de verbinding met formule 1, in het geval van een infectie met Staphylococcus of Proteus 48 uur na de behandeling het aantal levende dieren nagenoeg onveranderd bleef.The in vivo activity of the compound of formula 1 has been determined on mice of a CFLP strain. In order to determine the ED ^ 0 value, the mice were injected i.p. infected with 6-8 hours of cultures of the ant organism; the dose is 5 x 10 LD100. One hour after the infection, the animals were treated with the aqueous solution of the test compound. Commercially available drugs were used as the reference compound. The results were evaluated using the Litchfield-Wilcoxon method. In accordance with the known data for 8-lactarnen characteristic data, it was found that as a result of the treatment carried out with the compound of formula 1, in the case of an infection with Staphylococcus or Proteus, the number of live animals remained virtually unchanged.

15 Teneinde aan te tonen, dat de verbinding met formule 1 meer werkzaam is dan de verbindingen van het Duitse Offenlegungsschrift nr. 2.409.949 werden de volgende proeven uitgevoerd op praktisch dezelfde wijze als hierboven beschreven.In order to demonstrate that the compound of formula 1 is more active than the compounds of German Offenlegungsschrift No. 2,409,949, the following tests were carried out in substantially the same manner as described above.

20 TABEL E20 TABLE E

Vergelijking van ED^g-waarden, uitgedrukt in mg/kg.Comparison of ED ^ g values, expressed in mg / kg.

Proefdier: muizen van de CFLP-stam van beiderlei kunne met een gemiddeld gewicht 25 van 20 g.Animal: mice of the CFLP strain of both species with an average weight of 20 g.

Voor infectie gebruikte bacteria: zie tabel.Bacteria used for infection: see table.

Wijze van infectie: i.p., in 2,5 % mucine.Infection method: i.p., in 2.5% mucin.

werkzaam behandelings- Staphylococcus aureus SMITHeffective treatment Staphylococcus aureus SMITH

bestanddeel wijze ED50 ^ 30 verbinding met 0,23 formule 1 s‘c* (0,06 - 0,8} p.o. 4,3 (0,6 - 28,0) verbinding H* s.c. (15,9'- 38,2} 35 verbinding F** p.o. (40If'3 142,7) 860.1 342 - 10 - *natrium-7-/ (3-chloorisoxazool-5-yl)aceetamido/cefalospora- naat.constituent mode ED50 ^ 30 compound of 0.23 formula 1 s'c * (0.06 - 0.8} po 4.3 (0.6 - 28.0) compound H * sc (15.9'-38, 2} 35 compound F ** po (40If'3 142.7) 860.1 342-10 * sodium 7- / (3-chloroisoxazol-5-yl) acetamido / cephalosporanate.

**natrium-7-/~(3-chloorisoxazool-5-yl)aceetamido7-3-/ (5-methyl-1,3,4-thiadiazool-2-yl)thiomethyl7-ceph-3-em-4-5 carboxylaat.** sodium-7- / ~ (3-chloroisoxazol-5-yl) acetamido7-3- / (5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl) thiomethyl7-ceph-3-em-4-5 carboxylate.

Als een verder aspect van de onderhavige uitvinding zijn farmaceutische preparaten verschaft, die als .werkzaam bestanddeel de verbinding 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-5-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thio-10 methyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1, of een farmacologisch aanvaardbaar zout daarvan bevat in bijmenging met geschikte inerte vaste of vloeibare farmaceutische dragerstof-fen.As a further aspect of the present invention, there are provided pharmaceutical compositions which, as active ingredient, comprise the compound 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-5- (1-methyl-1H-1,2,3 4-Tetrazol-5-yl) -thio-10 methyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 1, or containing a pharmacologically acceptable salt thereof in admixture with suitable inert solid or liquid pharmaceutical carriers.

De boven genoemde farmaceutische preparaten 15 kunnen worden bereid met behulp van werkwijzen, die in de farmaceutische industrie op zichzelf bekend zijn.The above-mentioned pharmaceutical preparations 15 can be prepared by methods which are known per se in the pharmaceutical industry.

Verdere details van de onderhavige uitvinding kunnen worden gevonden in de volgende voorbeelden, zonder de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding te beperken 20 tot deze voorbeelden.Further details of the present invention can be found in the following examples, without limiting the scope of the present invention to these examples.

VOORBEELD IEXAMPLE I

Bereiding van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-‘ aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5- yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur en zijn 25 natriumzout.Preparation of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em -4-carboxylic acid and its sodium salt.

4,99 g (30,9 mmol) 3-Chloor-isoxazool-5-yl-azijnzuur en 7,07 g (33,99 mmol) fosforpentachloride werden opgelost in 120 ml watervrij benzeen onder voortdurend roeren. Men liet het reactiemengsel gedurende de nacht staan bij 30 kamertemperatuur en vervolgens gedurende een uur bij 60°C.4.99 g (30.9 mmol) of 3-Chloro-isoxazol-5-yl-acetic acid and 7.07 g (33.99 mmol) of phosphorus pentachloride were dissolved in 120 ml of anhydrous benzene with continuous stirring. The reaction mixture was left overnight at room temperature and then at 60 ° C for one hour.

Het benzeen werd afgedestilleerd, het residu werd verscheidene malen opgewerkt met watervrije petroleumether, gedecanteerd en ingedampt, totdat het vrij was van petroleumether. Het residu werd opgelost in 40 ml watervrije aceton en de aldus 35 verkregen oplossing werd toegevoegd bij 0-5°C onder voortdurend roeren gedurende 50 min. aan een oplossing van 6,75 g (20,6 mmol) 7-amino-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)- 8601342 i - 11 - thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur, 5,2 g (61,8 mmol) natriumbicarbonaat, 144 ml water en 103 ml aceton. Nadat de toevoeging was voltooid/ werd het reactiemengsel geroerd bij 0-5°C gedurende een uur en bij kamertemperatuur gedurende 2 uur, 5 terwijl de pH werd ingesteld op 7-8 door toevoeging van een verzadigde natriumbicarbonaatoplossing. Het mengsel werd verzuurd tot een pH-waarde van 1,5-2 door toevoeging van verdund zwavelzuur en vervolgens drie maal geëxtraheerd met telkens 100 ml ethylacetaat. De ethylacetaatextracten werden gedroogd 10 boven magnesiumsulfaat en het oplosmiddel werd verwijderd.The benzene was distilled off, the residue was worked up several times with anhydrous petroleum ether, decanted and evaporated until it was free from petroleum ether. The residue was dissolved in 40 ml of anhydrous acetone and the solution thus obtained was added at 0-5 ° C with continuous stirring for 50 min to a solution of 6.75 g (20.6 mmol) 7-amino-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl - 8601342 i - 11 - thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid, 5.2 g (61.8 mmol) sodium bicarbonate , 144 ml of water and 103 ml of acetone. After the addition was complete, the reaction mixture was stirred at 0-5 ° C for one hour and at room temperature for 2 hours, while the pH was adjusted to 7-8 by addition of a saturated sodium bicarbonate solution. The mixture was acidified to a pH value of 1.5-2 by addition of dilute sulfuric acid and then extracted three times with 100 ml of ethyl acetate each time. The ethyl acetate extracts were dried over magnesium sulfate and the solvent was removed.

Het ingedampte residu werd behandeld met di-ethylether, gefiltreerd, gewassen en gedroogd. Aldus verkreeg men 3,5 g 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur.The evaporated residue was treated with diethyl ether, filtered, washed and dried. There was thus obtained 3.5 g of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph -3-em-4-carboxylic acid.

15 De boven genoemde verbinding werd opgelost in watervrije aceton en een oplossing van een equivalente hoeveelheid watervrij natriumacetaat in 10 % methanol werd toegevoegd. De oplossing werd geroerd bij 20®C gedurende een uur en verdund met een gelijk volume diethylether. Het 20 natriumzout van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4- tetrazool-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em- 4-carbonzuur werd aldus neergeslagen.The above compound was dissolved in anhydrous acetone and a solution of an equivalent amount of anhydrous sodium acetate in 10% methanol was added. The solution was stirred at 20 ° C for an hour and diluted with an equal volume of diethyl ether. The sodium salt of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3- em-4-carboxylic acid was thus precipitated.

Karakteristieke gegevens ï 1H NMR: (DMSO-dg) 25 3,52 (ABq, 2H, H-2), 3,90 (s, 3H, N-CH3) 3.97 (s, 2H, CH2CO) , 4,35 (ABq, 2Ξ, H-10) , 4.97 (d, 1H, H-6), 5,52 (q, 1H, H-7), 6,67 (s, 1H, H-Ar), 9,25 (d, 1H, C7-NH).Characteristic data 1 H NMR: (DMSO-dg) 25 3.52 (ABq, 2H, H-2), 3.90 (s, 3H, N-CH3) 3.97 (s, 2H, CH2CO), 4.35 ( ABq, 2Ξ, H-10), 4.97 (d, 1H, H-6), 5.52 (q, 1H, H-7), 6.67 (s, 1H, H-Ar), 9.25 ( d, 1H, C7-NH).

Smp.: 150-155°C (ontleding).Mp: 150-155 ° C (decompn.).

30 VOORBEELD IIEXAMPLE II

Bereiding van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur en zijn natriumzout.Preparation of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em- 4-carboxylic acid and its sodium salt.

35 10,68 g (0,04 mol) Pentachloorfenol en 8,32 g (0,04 mol) dicyclohexylcarbodiimide werden opgelost in 230 ml watervrij dichloormethaan, waarna 6,4 g (0,04 mol) 3-chloor-isoxazool-5-yl-azijnzuur werd toegevoegd. Het reactiemengsel S301S42 Ό - 12 - werd gedurende een dag geroerd bij kamertemperatuur en het geprecipiteerde dicyclohexylcarbodiimide werd afgefiltreerd. De aldus verkregen oplossing van pentachloorfenylester in dichloormethaan werd toegevoegd bij 0°C onder voortdurend 5 roeren aan een oplossing van 13,2 g (0,04 mol) 7-amino-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur, 16,8 ml (0,12 mol) triethylamine en 120 ml dichloormethaan. Nadat de toevoeging voltooid was, liet men het reactiemengsel opwarmen tot kamertemperatuur en roerde 10 men bij deze temperatuur gedurende een uur. Nadat de reactie was afgelopen, werd het dichloormethaan afgedestilleerd in vacuo, waarna het residu werd opgelost in waterig ethylace-taat, verzuurd met 2 N zwavelzuur tot pH 2, de fasen werden gescheiden, de organische laag werd gedroogd boven magnesium-15 sulfaat en ..verdampt.· Het residu werd gewreven met diethyl-ether, gefiltreerd, gewassen en bij kamertemperatuur gedroogd boven fosforpentoxide in vacuo. Het aldus verkregen produkt werd omgezet in zijn natriumzout, zoals beschreven in voorbeeld I. 12 g Van het natriumzout werd verkregen, in een 20 opbrengst van 61 % (de opbrengst van het vrije zuur bedroeg 63,8 %) .10.68 g (0.04 mol) of pentachlorophenol and 8.32 g (0.04 mol) of dicyclohexylcarbodiimide were dissolved in 230 ml of anhydrous dichloromethane, followed by 6.4 g (0.04 mol) of 3-chloroisoxazole-5 ethyl acetic acid was added. The reaction mixture S301S42 Ό - 12 - was stirred at room temperature for one day and the precipitated dicyclohexylcarbodiimide was filtered off. The solution of pentachlorophenyl ester in dichloromethane thus obtained was added at 0 ° C with continuous stirring to a solution of 13.2 g (0.04 mol) of 7-amino-3- (1-methyl-1H-1,2,3) 4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid, 16.8 ml (0.12 mol) of triethylamine and 120 ml of dichloromethane. After the addition was complete, the reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred at this temperature for one hour. After the reaction was complete, the dichloromethane was distilled off in vacuo, the residue was dissolved in aqueous ethyl acetate, acidified with 2N sulfuric acid to pH 2, the phases were separated, the organic layer was dried over magnesium sulfate and. Evaporated The residue was triturated with diethyl ether, filtered, washed and dried over phosphorus pentoxide in vacuo at room temperature. The product thus obtained was converted into its sodium salt, as described in Example I. 12 g of the sodium salt were obtained, in a yield of 61% (the yield of the free acid was 63.8%).

VOORBEELD IIIEXAMPLE III

Bereiding van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-25 5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur en zijn natriumzout.Preparation of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-25-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em -4-carboxylic acid and its sodium salt.

0,084 g (1 mmol) Natriumbicarbonaat en 0,415 g (1 mmol) 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamidocefalosporaan-zuur werden opgelost in een mengsel van 17 ml water en 8 ml 30 aceton. Aan de oplossing werd 0,14 g (1,2 mmol) 1-methyl-1H- 1,2,3,4-tetrazool-5-yl-thiol toegevoegd, waarna men het reactiemengsel liet staan bij 60-65°C gedurende 8 uur, waarbij de pH werd ingesteld op 5,0-5,5 door toevoeging van een verzadigde natriumbicarbonaatoplossing.0.084 g (1 mmol) of sodium bicarbonate and 0.415 g (1 mmol) of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamidocephalosporanic acid were dissolved in a mixture of 17 ml of water and 8 ml of acetone. 0.14 g (1.2 mmol) of 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl-thiol was added to the solution and the reaction mixture was allowed to stand at 60-65 ° C for 8 hours, adjusting the pH to 5.0-5.5 by adding a saturated sodium bicarbonate solution.

35 Nadat de reactie was voltooid, werd de pH van het reactiemengsel ingesteld op 2 met behulp van 3 N zoutzuur. Het mengsel werd geëxtraheerd met ethylacetaat, de organische fase werd afgedampt en het residu werd gewreven met ether.After the reaction was completed, the pH of the reaction mixture was adjusted to 2 using 3 N hydrochloric acid. The mixture was extracted with ethyl acetate, the organic phase evaporated and the residue triturated with ether.

8601842 *e c - 13 -8601842 * e c - 13 -

Aldus verkreeg men 0,35 g van het gewenste vrije zuur in een opbrengst van 74,5 %.There was thus obtained 0.35 g of the desired free acid in a yield of 74.5%.

Het aldus verkregen vrije zuur werd omgezet in zijn natriumzout volgens de werkwijze beschreven in voorbeeld 5 I.The free acid thus obtained was converted into its sodium salt according to the procedure described in Example 5 I.

10 3 ö013 4 210 3 013 4 2

Claims (4)

1 CH|-CO— NH —1 k=k o' J—nL U— CH-S —C \ O J \7 Cl COOH lH3 2 n; V-ch-cooh xox H2N “I-{ N—N 3 y o I ''Nr COOH I ch3 N—N1 CH 1 -CO-NH-1 k = k o 'J-nL U-CH-S-C \ O J \ 7 Cl COOH 1 H 3 2 n; V-ch-cooh xox H2N “I- {N-N 3 y o I '' Nr COOH I ch3 N-N 2. Werkwijze voor de bereiding van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool- 5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 en zijn farmacologisch aanvaardbare zouten, gekenmerkt 10. o o r a) het omzetten van 3-chloor-isoxazool-azijnzuur met formule 2 van het formuleblad, of een reactief derivaat daarvan met 7-amino~3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl'-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 3 van het for- 15 muleblad en het isoleren van het aldus verkregen 7-(3~chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5 —y1)—thiomethy1—ceph—3 — em—4 —carbonzuur met formule 1 uit het reactiemengsel op een op zichzelf bekende wijze en, desgewenst, het omzetten van de laatst genoemde verbinding in een 20 farmacologisch aanvaardbaar zout ervan met behulp van bekende werkwijzen en het isoleren van het zout uit het reactiemengsel op een op zichzelf bekende wijze; of b) het omzetten van 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetra-zool-5-yl-thiol met formule 4 van het formuleblad, met 25 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-cefalosporaanzuur en het isoleren van het aldus verkregen 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 op een op zichzelf bekende wijze en, desgewenst, het omzetten van de 30 laatst genoemde verbinding in een farmacologisch aanvaardbaar zout ervan met behulp van bekende werkwijzen en het isoleren van het zout uit het reactiemengsel op een op zichzelf bekende wijze.2. Process for the preparation of 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph -3-em-4-carboxylic acid of formula 1 and its pharmacologically acceptable salts, characterized 10.oor a) reacting 3-chloro-isoxazole-acetic acid of formula 2 of the formula sheet, or a reactive derivative thereof with 7-amino-3 - (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl'-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 3 from the formula sheet and isolating the thus obtained 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em-4 - carboxylic acid of formula 1 from the reaction mixture in a manner known per se and, if desired, converting the latter compound into a pharmacologically acceptable salt thereof by known methods and isolating the salt from the reaction mixture in itself known manner; or b) reacting 1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl-thiol of formula 4 of the formula sheet with 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) ) -acetamido-cephalosporanoic acid and isolation of the 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) thus obtained -thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 1 in a manner known per se and, if desired, converting the latter compound into a pharmacologically acceptable salt thereof by known methods and isolating the salt from the reaction mixture in a manner known per se. 3. Werkwijze volgens werkwijzevariant a) van 35 conclusie 2, gekenmerkt door als reactief derivaat van het 3-chloor-isoxazool-azijnzuur met formule 2 het chloride of de pentachloorfenylester daarvan toe te passen.Process according to process variant a) of claim 2, characterized by using as the reactive derivative of the 3-chloroisoxazole acetic acid of the formula II the chloride or the pentachlorophenyl ester thereof. 4. Farmaceutisch preparaat, dat als werkzaam BSO 1342 4S? - 15 - bestanddeel 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceetamido-3-(T-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl-ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 of een farmacologisch aanvaardbaar zout daarvan omvat, in bijmenging met geschikte inerte vaste 5 of vloeibare farmaceutische dragerstoffen.4. Pharmaceutical preparation, which as active BSO 1342 4S? - 15 - component 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (T-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3- em-4-carboxylic acid of formula 1 or a pharmacologically acceptable salt thereof, in admixture with suitable inert solid or liquid pharmaceutical carriers. 5. Werkwijze voor het bereiden van farmaceutische preparaten volgens conclusie 4, gekenmerkt door het mengen van 7-(3-chloor-isoxazool-5-yl)-aceet-amido-3-(1-methyl-1H-1,2,3,4-tetrazool-5-yl)-thiomethyl- 10 ceph-3-em-4-carbonzuur met formule 1 of een farmacologisch aanvaardbaar zout daarvan met geschikte inerte vaste of vloeibare farmaceutische dragerstoffen.Process for the preparation of pharmaceutical preparations according to claim 4, characterized by mixing 7- (3-chloro-isoxazol-5-yl) -acetamido-3- (1-methyl-1H-1,2,3 4-tetrazol-5-yl) -thiomethyl-ceph-3-em-4-carboxylic acid of formula 1 or a pharmacologically acceptable salt thereof with suitable inert solid or liquid pharmaceutical carriers. 6. Werkwijze voor de behandeling van patiënten, die lijden aan bacteriële ziekten, gekenmerkt 15. o o r het toepassen van een preparaat volgens conclusie 4 voor de behandeling. 20 8j* Λ *s -> T Λ 0Λ/1 NL 33554-Kp/cs Behoort bij O.A. t.n.v. Biogal Gyógyszergyar te Debrecen, Hongarije. FORMULEBLAD CLMethod for the treatment of patients suffering from bacterial diseases, characterized by using a composition according to claim 4 for the treatment. 20 8j * Λ * s -> T Λ 0Λ / 1 NL 33554-Kp / cs Belongs to O.A. in the name of Biogal Gyógyszergyar in Debrecen, Hungary. FORMULA SHEET CL 4 HS—^ n' ch3 88018424 HS - n 'ch3 8801842