NL8301996A - Werkwijze ter bereiding van geadjuveerde levende vaccins en aldus verkregen geadjuveerde levende vaccins. - Google Patents

Description

/- <» k * DIR 0343

Werkwijze ter bereiding van geadjuveerde levende vaccins en aldus verkregen geadjuveerde levende vaccins.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter bereiding van levende vaccins en op de aldus verkregen levende vaccins.

Bekend is dat levende geattenueerde virussen 5 over het algemeen minder immunogeen zijn dan het oorspronkelijke virulente virus waar ze van zijn afgeleid. Het attenue-ren is bedoeld om de virulentie op te heffen of in elk geval zo sterk te verminderen, dat het aldus verzwakte virus veilig kan worden toegediend. Echter, dit attenueren heeft door-10 gaans ook een verminderde immunogene werking tot gevolg.

In de regel worden levende virusvaccins gevriesdroogd, teneinde de infectiositeit te stabiliseren, waardoor een dergelijk levend vaccin langer houdbaar is. Vóór toediening wordt een levend vaccin opgelost, bijvoorbeeld in een 15 fysiologische zoutoplossing of soms in een gelnaktiveerd vaccin. Zo’n gelnaktiveerd vaccin is bijna steeds een A1(0H)^ geadsorbeerd vaccin. Alleen op praktische gronden wordt zo’n levend virusvaccin gecombineerd met een gelnaktiveerd vaccin: beide kunnen nu immers gelijktijdig worden toegediend. Van 20 een betere werkzaamheid van de levende component in zo’n combinatie is in de regel geen sprake.

Tot nu toe werd aangenomen dat met levende vaccins een hogere imrauunresponse was te bereiken door bijvoorbeeld het virusgehalte te verhogen, of door een meer immuno-25 gene stam te gebruiken.

Verrassenderwijze werd nu gevonden, dat het gebruik van een olie-in-water (o/w) emulsie als '’oplosmiddel'’ voor levende vaccins een sterk positief effekt heeft op de seroiogische response in de gevaccineerde dieren. Bij deze 30 olie-in-water emulsie bevindt de waterfase zich aan de buitenzijde en hierin kan het gevriesdroogde levende vaccin gemakkelijk worden opgelost.

De oliefase van de volgens de uitvinding te ge-bruiken emulsie is een minerale olie, bijvoorbeeld Marcoltü' 35 of Drakeol®.

De hoeveelheid olie in de emulsie ligt gewoonlijk tussen 15 en 53 voi.%, bij voorkeur 20 - 30 vol.%.

De te gebruiken emulsie kan op gebruikelijke 8301996 y ^ -2- wijze worden verkregen onder toepassing van voor dit doel geschikte emulgatoren.

De uitvinding wordt onderstaand toegelicht aan de hand van enkele experimenten met e.en lévend geattenueerd 5 Aujeszky-vaccin op basis van de Bartha stam. v

Het is bekend dat de Bartha stam niet erg immuno-geen werkzaam is, vooral bij biggen die nog over maternaal verkregen antllichamen beschikken. Ook een verhoogd virusgehalte van dit vaccin bleek niet in staat een voldoende 10 hoge serumtiter te bewerkstelligen.

Door toepassing van een olie-in-water emulsie volgens de uitvinding werd met hetzelfde virusmateriaal een verrassend hogere serologische response verkregen.

VOORBEELD I

15 Aangezien een belangrijk toepassingsgebied van levende

Aujeszky vaccins ligt in de vaccinatie van jonge mestvarkens die nog een maternale antilichaam-titer ten opzichte van de ziekte van Aujeszky bezitten is een vergelijkende serologische proef opgezet met gebruikmaking van deze dieren,. De 20 resultaten hiervan zijn samengevat in tabel A.

25 30 1 8301996 1-1—-1—-1 2' Γ 1 -1

! ο co ο I

1 ,- ! 1 J - I

i 0 o| c- 3 ® ™! •H >T ''s CM CM —

Π I Ο Γ- I oio I

to--- ' c <r.sa·

•H CO I ! I I * 1 U") I

Ü σι ! CM 0--- - o CM I -3 m--—-r gj cö o on in ow 0 3 1—4 co cm - !U vO I 1 ~ ^ 2.5 <- 2 c NOi c υ t—<r ·

5 5 CM- -Η O

o e___ . ®---- ο φ 5 > 0 x oo co — σ\ < « * 5 oirwo con «-* i! Γ! CO - ® *< JO r-i · Ö0 CÖ ..............

^ 0--- O· C M

at cninmcMC— c nntn m λ m ..... c o <r ~ - ~ m c >- — in ο — -η ^ o cm

10 ,_ Q φ CM CM

0----- ® 5 to ----- c * >· M ^ *> toe cconvon ® > m co -H -P cm - S ovovonnvo .c 0 c vo—o 6Q Ο «»«»““ “ -P 0 co 4 5 *

Φ (0 (0 — — — CM M3 1<0 CO

Μ Ό > jj CQ Q* 15 c--- +» ° •H · 4) 3 ο Ο Λ o ® O · c U N r , ¢0 φ Φ (0 -c-6 7 >- '‘z > m .* > ® ® 2 « m Λ η φ co — m in oo ε .£ +j— cn co οί vttli-4 ·? r. --- -- ο ·Η·Η» * * ca ο n O' <r <r <n col ο o j-j l, o md tri·? <d s CM O CM Ή ή I 'O Ü 20 > «J-PÖÜZ'OCÖ jq ω « o co > > 20 a »---2 2 o oo 2 \ * «5 fi υ < \θ o E-ι υ -η----- Ε-ι Ό I i—I C m2 <u > 5¾ to φ ® :>» ®

in -us- >4-. n-H

03 CM S 0 Ό vO 00 00 00 ·£*» 2 c0 Ή 0 f C *Q 0 8301996 2 <xl w ^ -o5~ 2 .η φ ώ -p υ c cm - - ·* jj ΦΦΜΟ0- — — -^ , —--——- Ο -P 0 -34 CÖ 25 ‘ .μ φ (—i 4-» > φ c

_ r- φ φ 2 -H

M 4- ~o SO 0 0 — ° 5 O >0 a M - Ü JO 0 CO « 0 -P _ ----? h 3 -3+J33333 Cw ^

0 ° OH OCM

(J s Ή c COO-f <- Ό o rHC OCM

2 jj-Ί— — — — — 2 20 00 >

•HJ05-iO 43 νΟΛ-ι-8^, 0C

-i Ο ΦΟ O sO> C 0 M0 -T -J" bO 0 30 004)03 > > 2 Zl >

JU 2 — — > 4) 00Ό ‘H

j sn aO οι ~o 3 3 O ----- 2 4-<--- 0— ·Η0ιΗ ® 4 -Q 3-P0 W0£ 5

— 2. 1-1 "H ¢4 Q, MM -HO

6 303 0 MM > -i-> 4-> 4) MMMC — 7 2>> OMMMM>0 l-i-> O > >> 8 2 2 i M z 0 i. " " -4-

Bloedmonsters voor de antilichaamtiter bepaling werden genomen 2 weken vóór vaccinatie, op de dag van vaccinatie en op verschillende weken na vaccinatie zoals vermeld in tabel A.

5 Uit de SN-titers vermeld in tabel A blijkt het volgende: - Het Bartha vaccin in fysiologisch zout is niet in staat een bevredigende serologische response op te wekken zelfs bij dieren die slechts een zeer lage maternale immuniteit 10 bezitten (1,3 - 1,6). Deze dieren waren op het moment van vaccinatie 14 - 18 weken oud.

- Het Bartha vaccin in o/w emulsie daarentegen geeft goede serumtiters, bij toediening aan biggen met een maternale immuniteit van 2,3 of 6,6. Deze dieren waren bij vaccina- 15 tie 11 of 14 weken oud.

VOORBEELD II

Een ander toepassing gebied ligt in de vaccinatie van zeugen. De bruikbaarheid wordt hier in hoofdzaak bepaald door de bereikte titerhoogte in het moederdier omdat alleen dan ga-20 ranties te geven zijn over een voldoende lang aanhoudende maternale immuniteit ten opzichte van de ziekte van Aujeszky bij de nakomelingen.

Uitgaande van maternaal immune dieren is een vergelijking gemaakt tussen het Bartha vaccin, opgelost in fysiologische 25 zoutoplossing en het zelfde vaccin opgelost in 25% o/w emulsie. Beide vaccins werden twee keer toegediend.

TABEL B - zie pagina 3 30 Uit tabel B blijkt opnieuw dat het Bartha vaccin in o/w formulering bij de eerste vaccinatie aanmerkelijk beter door de maternale immuniteit heen breekt en dat het zelfde vaccin opgelost in fysiologische zoutoplossing in deze maternaal immune dieren na één vaccinatie geen enkele 35 serologische response teweeg brengt.

Ook na de tweede vaccinatie is sprake van een duidelijk verschil tussen de beide formuleringen: met het Bartha vaccin-in fysiologische zoutoplossing wordt slechts een 10-voudige 8301996 -5- titerstijging bereikt; met het Bartha vaccin in o/w emulsie bedraagt de titerstijding het 130 tot 200-voudige.

Volgens een tot de uitvinding behorende variant kan men in plaats van het levende vaccin op te nemen in de 5 o/w emulsie als zodanig, dit levende vaccin ook opnemen in een gelnaktiveerd vaccin dat de o/w emulsie bevat. Dit wordt beschreven in voorbeeld III.

VOORBEELD III

Hier is gebruik gemaakt van een gecombineerd Aujeszky-influen-10 za-vaccin.

Het influenza-vaccin voor varkens is een gelnaktiveerd vaccin, gebaseerd op een o/w emulsie. Het gevriesdroogde Bartha vaccin wordt hierin vlak vóór gebruik opgelost.

Voor dit experiment werd gebruik gemaakt van biggen, die geen 15 maternale antilichamen meer hebben ten opzichte van de ziekte van Aujeszky om een mogelijk negatieve invloed van de influenza komponent op het Bartha-vaccin beter te kunnen bestuderen. De hoeveelheid influenzavirus per dosis werd gevarieerd en wordt omschreven als '•hoog", "middel" en "laag".

20

TABEL C

Gemiddelde Aujeszky SN-titers na 1 of 2 maal vaccineren met het Aujeszky-influenza-vaccin op o/w basis.

i influenza j aantal aantal SN-titer 8 wk SN-titer 2wk dosering } vaccinaties dieren na le vaccin, na 2e vaccin "hoog" 2 x 4 195* 3016 _ 1 x__3__159__132 "middel" 2 x 4 116^ 3887 _ 1 x 3 112__58 ^ "laag" | 2 x 4 107^ 3887 S 1 x 3 113 103 ; h deze dieren kregen 3 weken na de eerste vaccinatie, de | tweede vaccinatie toegediend. ________ 35

Uit tabel C blijkt duidelijk dat de aanwezigheid van geïnactiveerd influenza virus in de o/w emulsie geen 8301996 -6- nadelig effect heeft op de resultaten van de levende Aujeszky komponent. Zowel de serologische response na 1- als na 2-maal vaccineren is buitengewoon goed.

In verschillende proeven werd de lichaamstempe-S ratuur van de dieren gemeten van 1 dag vóór tot en met 3 dagen na vaccinatie. Op geen enkel tijdstip na vaccinatie werd bij de dieren, gevaccineerd met de o/w formulering een verhoogde temperatuur waargenomen. Ook werden er geen lokale entreacties geconstateerd. Het levende vaccin in een o/w 10 formulering is derhalve als veilig te beschouwen.

15 20 25 30 1 8301996

Claims (6)

1. Werkwijze ter bereiding van een levend vaccin, met het kenmerk, dat men een geadjuveerd levend vaccin bereidt met behulp van een olie-in-water emulsie.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmer;k, 5 dat men een geadjuveerd levend Aujeszky-vaccin bereidt.

3- Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat men een geadjuveerd levend Aujeszky-vaccin op basis van de 3artha-3tam bereidt.

4. Werkwijze volgens conclusies 1-3, met het ken-10 merk, dat men het levende vaccin opneemt in een geïnaktiveerd vaccin dat de olie-in-water emulsie bevat.

5- Werkwijze volgens conclusie 4, met het kenmerk, dat men het levende vaccin opneemt in een geinaktiveerd influenza vaccin dat de olie-in-water emulsie bevat.

6. Werkwijze voor het vaccineren van dieren met een levend vaccin, met het kenmerk, dat men een vaccin volgens conclusie 1 toepast. 20 25 30 1 8301996