NL8004297A - ANTIGEN PREPARATIONS. - Google Patents
ANTIGEN PREPARATIONS. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8004297A NL8004297A NL8004297A NL8004297A NL8004297A NL 8004297 A NL8004297 A NL 8004297A NL 8004297 A NL8004297 A NL 8004297A NL 8004297 A NL8004297 A NL 8004297A NL 8004297 A NL8004297 A NL 8004297A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- emulsion
- mixture according
- organisms
- oil
- aluminum
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 19
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 61
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 55
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 31
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 28
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 24
- 241000605721 Dichelobacter nodosus Species 0.000 claims description 23
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 21
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 20
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 17
- -1 sorbitan fatty acid ester Chemical class 0.000 claims description 16
- 208000010801 foot rot Diseases 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 10
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 9
- 235000011126 aluminium potassium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940050271 potassium alum Drugs 0.000 claims description 5
- GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate Chemical group [Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GRLPQNLYRHEGIJ-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 claims description 3
- JNYAEWCLZODPBN-KVTDHHQDSA-N (2r,3r,4r)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical group OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 claims description 2
- LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N [(3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] (Z)-octadec-9-enoate Chemical group CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N 0.000 claims description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012875 nonionic emulsifier Substances 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 2
- 230000009974 thixotropic effect Effects 0.000 claims description 2
- 101150000874 11 gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 claims 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 claims 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 claims 1
- 229940009859 aluminum phosphate Drugs 0.000 claims 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 9
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 9
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N (2r,3r,4r,5s)-hexane-1,2,3,4,5,6-hexol;(z)-octadec-9-enoic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N 0.000 description 2
- JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N (3-hydroxy-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan-6-yl) (z)-octadec-9-enoate Chemical compound OC1COC2C(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC21 JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000002989 Euphorbia neriifolia Species 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 241000605952 Fusobacterium necrophorum Species 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N Sorbitan monooleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-AAZCQSIUSA-N 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 241000481723 Thinopyrum caespitosum Species 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N [(2r)-2-[(3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)C1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012874 anionic emulsifier Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 1
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008394 flocculating agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- AQEZCDJYCYMVIB-UHFFFAOYSA-N oxoalumane Chemical compound [AlH]=O AQEZCDJYCYMVIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- VMOXILJFUFEZJL-UHFFFAOYSA-M sodium;ethylmercury;2-sulfanylbenzoate Chemical compound [Na+].CC[Hg].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1S VMOXILJFUFEZJL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 1
- 229960005078 sorbitan sesquioleate Drugs 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 1
- 150000005691 triesters Chemical class 0.000 description 1
- 125000001874 trioxidanyl group Chemical group [*]OOO[H] 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0216—Bacteriodetes, e.g. Bacteroides, Ornithobacter, Porphyromonas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
t _ % -1- i vo 753t-% -1- vo 753
Antige enpr sparat enAntige enpr sparat and
De uitvinding heeft betrekking op ant ig eenpr epar at en, vaccines daarvan en hun bereiding en toepassing voor voorkomen en behandelen van voetrot, in het bijzonder bij schapen.The present invention relates to antigen preparations, vaccines thereof and their preparation and use for the prevention and treatment of foot rot, especially in sheep.
Voetrot bij schapen is een wijd verspreide, besmettelijke ziekte, 5 welke de opperhuidweefseis van de voet aantast en die wordt veroorzaakt door synergistische werking van 2 gramnegatieve anaerobe bacteriën, nl. Bacteroides nodosus (fusifarmis nodosus) en Fusobacterium necronhorum (fusiformis neerophorum). De ziekte treedt alleen op wanneer deze organismen beide aanwezig zijn..Foot rot in sheep is a widespread, contagious disease affecting the epidermal tissue requirement of the foot caused by the synergistic action of 2 gram-negative anaerobic bacteria, Bacteroides nodosus (fusifarmis nodosus) and Fusobacterium necronhorum (fusiformis nootophorum). The disease only occurs when these organisms are both present.
10 F. necronhorum wordt gewoonlijk gevonden in het spijsverterings kanaal en wordt met de uitwerpselen afgescheiden, zodat dit organisme meestal aanwezig is in de onmiddellijke omgeving van de voeten van het schaap en deel kan nemen aan de infectie. B. nodosus is daarentegen niet in staat onder natuurlijke omstandigheden meer dan een paar dagen in 15 leven te blijven buiten de wonden van het voetrot. De geïnfecteerde schapenvoet is de enige natuurlijke woonplaats en daarom wordt B_. nodosus dikwijls beschreven als de veroorzaker van deze ziekte. Verwijderen van B. nodosus uit een kudde schapen, hetgeen uitgevoerd kan worden door alle aanwezige gevallen van voetrot te genezen of door selectieve vernie-20 tiging van het organisme, zou de ziekte uitroeien, omdat F. neer ophorum geen voetrot kan veroorzaken bij afwezigheid van 3. nodosus.10 F. necronhorum is usually found in the digestive tract and is excreted with the feces, so that this organism is usually present in the immediate vicinity of the sheep's feet and can participate in the infection. B. nodosus, on the other hand, is unable to survive outside the wounds of foot rot under natural conditions for more than a few days. The infected sheep foot is the only natural habitat and therefore B_. nodosus has often been described as the causative agent of this disease. Removal of B. nodosus from a herd of sheep, which can be done by curing all existing cases of foot rot or by selective destruction of the organism, would eradicate the disease, because F. down ophorum cannot cause foot rot in the absence of Nodosus.
In de afgelopen jaren werd voetrot bestreden door isoleren van aangetaste dieren, gevolgd door behandelen daarvan, waarbij uitgebreid wegsnijden van aangetaste gedeelten van de poten en uitwendig toepassen van 25 desinfecterende middelen werd toegepast ofook wel uitwendige of parente-rale toediening van geschikte antibiotica. In de laatste tijd werd het door succesvolle kweek op grote schaal van B. nodosus mogelijk, schapen te vaccineren met een emulsie of met door aluminium verjongde vaccines, verkregen volgens bij voorbeeld het Britse octrooi schrift 1.375.5^. Bij 30 toepassing van dergelijke vaccines werd in vele gevallen onvolledig onderstukken van de ziekte verkregen en intensieve pogingen zijn gedaan om de oorzaak van het falen te vinden en de doelmatigheid van de bestaande vaccines te verbeteren.In recent years, foot rot has been controlled by isolation of affected animals followed by treatment thereof, with extensive cutting of affected areas of the legs and external use of disinfectants using either external or parenteral administration of suitable antibiotics. Recently, successful large-scale cultivation of B. nodosus has made it possible to vaccinate sheep with an emulsion or with aluminum-rejuvenated vaccines obtained according to, for example, British Patent 1,375,5. In many cases, when using such vaccines, incomplete underparts of the disease have been obtained and intensive efforts have been made to find the cause of the failure and to improve the effectiveness of the existing vaccines.
Nu is gevonden, dat een antigeenpreparaat volgens de uitvinding -2- een grotere titer aan antilichamen levert en een "betere onderdrukking van de ziekte dan de tot dusver gebruikte JL nodosus-vaccines. De uitvinding verschaft daarom een antigeenpreparaat, dat een tveefasige emulsie van water-in-olie omvat, welke antigeen-materiaal "bevat, dat is afge-5 leid van of "bestaat uit Baeteroides nodosus-arganismen en een aluminium-hulpstof in de waterige fase van de emulsie.It has now been found that an antigen preparation according to the invention -2- provides a greater titer of antibodies and "better suppression of the disease than the JL nodosus vaccines hitherto used. The invention therefore provides an antigen preparation comprising a biphasic emulsion of water -in oil which contains antigenic material "which is derived from or" consists of Baeteroides nodosus organisms and an aluminum excipient in the aqueous phase of the emulsion.
Het antigene materiaal van het preparaat k a een immunogeen extract van de organismen "bevatten, maar "bij voorkeur "bevat het materiaal de gehele gedode organismen in de vorm van een anacultuur of geoogste cel-10 len. Elke immunogene stam kan worden gebruikt of een variant daarvan of een combinatie van stammen en/of varianten, welke representatief zijn voor een of meer van de Baeteroides nodosus-sero-typen. Een bevredigende bescherming is in het bijzonder verkregen door toepassing van organismen, welke gekweekt zijn uit fimbriate kolonies, waarin de organismen sterk 15 gepileerd zijn (zie bij voorbeeld Journal of applied Bacteriology (1976), i+0, blz. 301-315)· Vers geïsoleerde 3* nodosus-organismen, die gekweekt zijn op vaste media zijn sterk gepileerd en bij het uitvoeren van de 'werkwijze volgens de'uitvinding kiest men bij voorkeur de kweekomstandig-heden in een vloeibare cultuur zo, dat een zo groot mogelijke mate van 20 pileren optreedt om de werkzaamheid van de verkregen vaccines te vergroten. Onder sterk gepileerde organismen van B. nodosus worden in deze beschrijving verstaan, organismen met ten minste 20 pili/organisme en bij voorkeur meer dan 100 per organisme. Voor een maximale werkzaamheid bestaan de antigene mengsels en de daarvan afgeleide vaccines bij voor-25 keur geheel uit sterk gepileerde varianten van B. nodosus, maar in de praktijk wordt een doelmatige bescherming reeds verkregen, wanneer 90$ van de organismen bestaan uit sterk gepileerde varianten. De sterk gepileerde varianten van stam CSIR0 nr. 198 (Welcome Laboratories Culture nr. 6kj6) (gedeponeerd bij de ATCC op 19 juli 1979 als nr. 31^5) is bij-30 zonder waardevol. Bij voorkeur kan bescherming worden verschaft tegen homologe besmetting (d.w.z. besmetting met éên of meer sero-typen, die homoloog zijn met de B. nodosus-s er o typ en van het mengsel) omdat bescherming tegen besmetting met heterologe typen minder goed is. Daarom zal men besmetten met organismen van meer dan êén B. nodosus-serotype bij voor-35 keur aanpakken met een preparaat, dat meer dan éên stam omvat, waarbij elke stam representatief is voor ieder serotype, dat aanwezig is in de besmettingshaard.The antigenic material of the composition may contain an immunogenic extract of the organisms ", but" preferably "the material contains the entire killed organisms in the form of an anaculture or harvested cells. Any immunogenic strain may be used or a variant thereof or a combination of strains and / or variants representative of one or more of the Baeteroides nodosus sero-types Satisfactory protection has been obtained in particular by the use of organisms grown from fimbriate colonies in which the organisms strongly pelleted (see for example Journal of applied Bacteriology (1976), i + 0, pp. 301-315) · Freshly isolated 3 * nodosus organisms grown on solid media are strongly pelleted and when performing the The method according to the invention preferably selects the culture conditions in a liquid culture such that the greatest possible amount of pillars occurs in order to determine the effectiveness of the vaccine obtained. es. In this description highly spilled organisms of B. nodosus are understood to mean organisms with at least 20 pili / organism and preferably more than 100 per organism. For maximum efficacy, the antigenic mixtures and the vaccines derived therefrom preferably consist entirely of highly pelleted variants of B. nodosus, but in practice effective protection is already obtained when 90% of the organisms consist of highly pelleted variants . The highly pelleted variants of strain CSIR0 No. 198 (Welcome Laboratories Culture No. 6kj6) (deposited with the ATCC on July 19, 1979 as No. 31 ^ 5) is extremely valuable. Preferably protection against homologous contamination (i.e. contamination with one or more serotypes homologous to the B. nodosus species and of the mixture) can be provided because protection against contamination with heterologous types is less good. Therefore, contamination with organisms of more than one B. nodosus serotype will preferably be addressed with a composition comprising more than one strain, each strain being representative of each serotype present in the source of infection.
De B. nodosus-organismen voor toepassing in de preparaten volgens 800 4 2 97 -3- i * de uitvinding kunnen worden gekweekt volgens elke gebruikelijke methode, bij voorbeeld op de manier, beschreven in het Britse octrooischrift 1.375« of met de methode beschreven in het bovengenoemde artikel in Journal of Applied Bacteriology, welke leidden tot sterk gepileerde orga-5 nismen.The B. nodosus organisms for use in the compositions of the invention may be cultured by any conventional method, for example, in the manner described in British Pat. No. 1,375 or by the method described in the aforementioned article in the Journal of Applied Bacteriology, which led to highly pelleted organisms.
De aluminiumhulpstof is er één, die reeds op zichzelf de anti-" lichaam respons voor het antigene materiaal bevordert en de hulpstof kan worden gekozen uit de reeds bekende, zoals kaliumaluin, aluminiumhydro-xyde en aluminiumfosfaat. Bijzondere voorkeur geeft men aan thixotrope 10 3-type aluminiumhydr oxyd eg elen, welke een positieve lading hebben bij afwezigheid van elektrolyten. Een voorbeeld van een dergelijk gel is "Alkydrogel" (handelsnaam). Bij voorkeur bevatten de mengsels 0,25-^ volΛ van de aluminiumhulpstof.The aluminum excipient is one which already per se promotes the anti-body response to the antigenic material and the excipient can be selected from those already known, such as potassium alum, aluminum hydroxide and aluminum phosphate. Thixotropic 10 3 is particularly preferred. type aluminum hydride oxide gels which have a positive charge in the absence of electrolytes An example of such a gel is "Alkydrogel" (trade name). Preferably, the mixtures contain 0.25% by volume of the aluminum excipient.
De emulsie heeft een enkele continue oliefase en een enkele gedis-15 pergeerde waterige fase (d.w.z. het is een tweefasige emulsie van. water in olie) en de emulsie kan worden bereid onder toepassing, van één of meer emulgatcren en een olie. Natuurlijk mag de emulgator of de emulgatoren, welke in de preparaten worden verwerkt, niet'giftig zijn en verenigbaar met de antigene componenten van het vaccine. Bij voorkeur zijn ze niet 20 ionogeen, zodat ze minder neiging hebben te worden neergeslagen door componenten van het antigeenpreparaat dan een kationogene of een anionogene emulgator. Ook is er minder gevaar door denatureren van het proteïne van het antigeen, wanneer men een niet ionogene emulgator gebruikt. De combinatie, de hoeveelheden en de verhoudingen van de gebruikte emulgator 25 dienen zo te worden gekozen, dat ze bij verwerken in het vaccine een maximale versterking van de antigene eigenschappen opleveren en van de stabiliteit van de emulsie en bij voorkeur bestaan ze uit een lipofiele en een hydrofiele emulgator.The emulsion has a single continuous oil phase and a single dispersed aqueous phase (ie, it is a biphasic emulsion of water in oil) and the emulsion can be prepared using one or more emulsifying oils and an oil. Of course, the emulsifier or emulsifiers incorporated into the compositions must be non-toxic and compatible with the antigenic components of the vaccine. Preferably, they are not ionic, so that they have less tendency to be precipitated by components of the antigen preparation than a cationic or anionic emulsifier. Also, there is less danger of denaturing the protein of the antigen when using a nonionic emulsifier. The combination, amounts and proportions of the emulsifier 25 used should be chosen so that when incorporated into the vaccine they provide maximum enhancement of the antigenic properties and of the stability of the emulsion and preferably consist of a lipophilic and a hydrophilic emulsifier.
De lipofiele enulgatoren zijn bij voorkeur niet ionogene oppervlak-30 actieve stoffen met een kleine hydr of i el-lipof i el-v er houd ing van 8-20.The lipophilic emulsifiers are preferably non-ionic surfactants with a small hydr or i-lipof i el-content of 8-20.
[William C Griffin, ’Calculation of HLB values of non-ionic surfactants', Journal of the Society of Cosmetic Chemists (195^-) volume 5» biz.. 2^9-256; Osipow, 'Surface Chemistry, ACS Monograph 153', biz. 295-31^, Reinhold, 1962]. Dit is de uiterste grens van het gebied van de HLD-waarden van 3-5 saulgatoren, die het meest geschikt zijn voor verwerking in de oliefase en een optimale grens van de HLB-waarden is 2-6. Geschikte lipofiele emulgatoren zijn di- en triësters van meervoudige alcoholen en vetzuren, ge-oxydeerde vette oliën en partiële esters van normale vetzuren, zoals A Λ Λ L O n 7 -k- palmi tine zuur, laurinezuur, stearinezuur en oliezuur met hexitolanhy-driden, afgeleid van sorbitol of mannitol. Voorbeelden van emulgatoren zijn mannitan- en sarbitanvetzuuresters, zoals mannide monooleaat (Arlacel A, HLB U.3), sorbitan monooleaat (Arlacel 80, HLB b-.3) 3 sorbitan 5 monopalmitaat (Arlacel Uo, HLB 6.7), sorbitan monostearaat (Arlacel 60, HLB U.7), en sorbitan sesquioleaat (Arlacel C, HLB 3.7).[William C Griffin, "Calculation of HLB values of non-ionic surfactants," Journal of the Society of Cosmetic Chemists (195 ^ -) volume 5, biz. 2 ^ 9-256; Osipow, 'Surface Chemistry, ACS Monograph 153', biz. 295-31, Reinhold, 1962]. This is the extreme limit of the range of the HLD values of 3-5 solvents, which are best suited for oil phase processing and an optimal limit of the HLB values is 2-6. Suitable lipophilic emulsifiers are di- and triesters of multiple alcohols and fatty acids, oxidized fatty oils and partial esters of normal fatty acids, such as A Λ Λ LO n 7 -k-palmitinic acid, lauric acid, stearic acid and oleic acid with hexitol anhydrides, derived from sorbitol or mannitol. Examples of emulsifiers are mannitan and sarbitan fatty acid esters, such as mannide monooleate (Arlacel A, HLB U.3), sorbitan monooleate (Arlacel 80, HLB b-.3) 3 sorbitan 5 monopalmitate (Arlacel Uo, HLB 6.7), sorbitan monostearate (Arlacel 60, HLB U.7), and sorbitan sesquioleate (Arlacel C, HLB 3.7).
De hydrofiele aaulgator voor toepassing in de preparaten heeft bij voorkeur een ÏÏLB-waarde van 9-20 en liefst van 11-18. Geschikte groepen verbindingen zijn de polyglycolvetzuuresters, de met polyoxyethyleen 10 gemodificeerde vetzuuresters, de polyoxyethyleen-polyolvetzuuresters, polyoxypropyleenvetalcoholethers en polypropyleenglycolvetzuuresters.The hydrophilic agitator for use in the compositions preferably has an ILB value of 9-20 and most preferably of 11-18. Suitable groups of compounds are the polyglycol fatty acid esters, the polyoxyethylene-modified fatty acid esters, the polyoxyethylene-polyol fatty acid esters, polyoxypropylene fatty alcohol ethers and polypropylene glycol fatty acid esters.
Een bijzonder nuttige groep zijn de polyoxyalkyleenderivaten van de vet-zuuresters van meerwaardige alcoholen, zoals de polyoxyethyleenderivaten van de partiele esters van laurinezuur, palmitinezuur, stearinezuur en 15 oliezuur met hexitolanhydriden. Voorbeelden van deze emulgatoren zijn polyoxyethyleen (20) sorbitan monolauraat (Tveen 20, HLB- 16.7)s polyoxyethyleen (20) sorbitan monopalmitaat (Tween ^0, HLB 15.6), polyoxyethyleen (20) sorbitan monosteanaat (Tween 60, HLB 1U.9), polyoxyethyleen (20) sorbitan monooleaat (Tween 80, HLB 15), polyoxyethyleen (20) sorbitan 20 trioleaat (Tween 85, HLB 11.0) en polyoxyethyleen (8) lauraat (G 2127» HLB 12.8).A particularly useful group are the polyoxyalkylene derivatives of the fatty acid esters of polyhydric alcohols, such as the polyoxyethylene derivatives of the partial esters of lauric acid, palmitic acid, stearic acid and oleic acid with hexitol anhydrides. Examples of these emulsifiers are polyoxyethylene (20) sorbitan monolaurate (Tveen 20, HLB-16.7) s polyoxyethylene (20) sorbitan monopalmitate (Tween ^ 0, HLB 15.6), polyoxyethylene (20) sorbitan monosteanate (Tween 60, HLB 1U.9) , polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate (Tween 80, HLB 15), polyoxyethylene (20) sorbitan 20 trioleate (Tween 85, HLB 11.0) and polyoxyethylene (8) laurate (G 2127 »HLB 12.8).
Een niet giftige olie van plantaardige of minerale oorsprong, die verenigbaar is met het antigene materiaal, kan worden gebruikt in de preparaten volgens de uitvinding. Bijzondere voorkeur geeft men aan mine-25 rale olie van farmaceutische kwaliteit, omdat deze in het algemeen een aanzienlijk stabielere emulsie leveren en het weefsel minder irreteren. Lichte, vloeibare paraffine-oliën (Bayol F en Drageol 6fl) blijken bevredigende emulsies en preparaten te leveren.A non-toxic oil of vegetable or mineral origin, which is compatible with the antigenic material, can be used in the compositions of the invention. Particular preference is given to pharmaceutical grade mineral oil, because in general they provide a considerably more stable emulsion and less irritation of the tissue. Light liquid paraffin oils (Bayol F and Drageol 6fl) have been found to provide satisfactory emulsions and preparations.
De vloeistof van de waterige fase kan bestaan uit het cultuur-30 medium, of wanneer de cellen warden geëxtraheerd of geoogst uit water of isotonische zoutoplossing.The aqueous phase fluid may consist of the culture medium, or when the cells have been extracted or harvested from water or isotonic saline.
De preparaten volgens de uitvinding kunnen worden bereid met elke gebruikelijke techniek voor de bereiding van emulsies van biologische materialen en in feite kunnen ze worden verkregen door krachtig roeren 35 van een waterig mengsel van antigeen met aluminiumhulpstof met de olie en de emulgatoren. Het waterige mengsel van antigeen met aluminiumhulpstof wordt verkregen door de organismen van B. nodosus te inactiveren met bij voorbeeld formaline, de cultuur of de anacultuur te concentreren 800 4 2 97 φ * -5- tot ongeveer 30% van het oorspronkelijke cultuurvolume maar hij voorkeur niet verder dan tot 10% met een willekeurige bekende techniek, waarna men de aluminiumhulpstof toevoegt aan het waterige antigeen. De aluminium-hulpstof kan worden toegevoegd na het concentreren of het concentreren 5 kan zelf gebruik maken van de alnminiumhulpstof.. Een voorbeeld van de eerste methode is neerslaan bij het iso-elektrische punt en een voorbeeld van de tweede methode is coprecipiteren met een vlokmiddel.The compositions of the invention can be prepared by any conventional technique for the preparation of emulsions of biological materials and in fact they can be obtained by vigorous stirring of an aqueous mixture of antigen with aluminum excipient with the oil and the emulsifiers. The aqueous mixture of antigen with aluminum excipient is obtained by inactivating the organisms of B. nodosus with, for example, concentrating formalin, culture or anaculture 800 4 2 97 φ * -5- up to about 30% of the original culture volume but preferred no further than 10% by any known technique, after which the aluminum additive is added to the aqueous antigen. The aluminum excipient can be added after concentrating or the concentrating 5 itself can use the aluminum excipient. An example of the first method is precipitation at the isoelectric point and an example of the second method is coprecipitating with a flocculant.
Precipiteren bij het iso-elektrische punt is in het bijzonder doelmatig bij antigeenmateriaal, dat sterk gepileerde B. nodosus-organismen 10 bevat. Bij deze techniek wordt de pH van de cultuur of de anacultuur verlaagd door toevoegen van een zuur tot ongeveer het iso-elektrische punt van de cellen, hoewel men ook een lagere pïï kan gebruiken. Geschikte zuren zijn o.a. minerale- zuren, zoals zoutzuur, fosforznur en in het bijzonder zwavelzuur en. sterke organische zuren, zoals azijnzuur en melk-15 zuur. De pH is doelmatig kleiner dan 6,0 en bij voorkeur kleiner dan 5 >6 en liefst U,8-5,2. Beneden pH 3 is meestal het precipiteren volledig, maar afhankelijk van het gebruikte antigeenmateriaal kan dan schade aan het antigeen optreden. Ha verlagen van de pH verlaagt men bij voorkeur de temperatuur van de cultuur of de anacultuur tot U-12°C.Precipitation at the isoelectric point is especially effective with antigenic material containing highly pelleted B. nodosus organisms. In this technique, the pH of the culture or anaculture is lowered by adding an acid to about the isoelectric point of the cells, although lower pi can also be used. Suitable acids include mineral acids, such as hydrochloric acid, phosphoric acid and in particular sulfuric acid and. strong organic acids, such as acetic acid and lactic acid. The pH is suitably less than 6.0 and preferably less than 5> 6 and most preferably U.8-5.2. Below pH 3, the precipitation is usually complete, but depending on the antigen material used, damage to the antigen may then occur. Decreasing the pH is preferably lowering the temperature of the culture or anaculture to U-12 ° C.
20 Coprecipiteren met een vlokmiddel kan worden uitgevoerd door een steriele oplossing van het vlokmiddel toe te voegen aan de anacultuur, waarna de pH wordt ingesteld bij voorbeeld met alkali tot de precipita-tie optimaal is. Ha koud bezinken (bij voorbeeld 2 dagen of meer) wordt de heldere bovenstaande vloeistof weggeworpen, zodat een concentratie 25 van de cellen en het proteïne-achtige materiaal (met inbegrip van pili) in de anacultuur is verkregen. Hoewel met de bovenstaande vloeistof ook een gedeelte van het vlokmiddel kan worden weggegooid, houdt men toch bij voorkeur de hoeveelheid voor het neerslaan gering, cmdat hoe meer men gebruikt, hoe meer ook aanwezig is in het neerslag (concentraat) en 30 des te meer zal het verkregen Vaccine irriteren. Geschikte vlokmiddelen zijn o.a. de sulfaten, chloriden en de onoplosbare hydroxyden van meerwaardige kationen en polyanionogene polymeren, zoals natriumcarboxymethyl-cellulose en hydroxypropylmethylcellulose. Bijzonder geschikt voor toepassing volgens de uitvinding is kaliumaluin, omdat deze stof tevens 35 dienst kan doen als aluminiumhulpstof. Gevonden is, dat 1 volume 10 gew.% aluinoplossing, toegevoegd aan 7 volume anacultuur (1,25 gew.% aluin in totaal) na instellen van de pH op 5»^ een neerslag levert met geschikte eigenschappen en daarnaast een heldere bovenstaande vloeistof. Hoe hoger 800 4 2 97 -6- de pH is (bij voorbeeld 5»8 of 6,U) des te meer tijd is nodig voor volledig helder worden van de bovenstaande vloeistof. Hoe kleiner de concentratie aan aluin, des te meer tijd. is nodig voor helder worden.Coprecipitating with a flocculant can be performed by adding a sterile solution of the flocculant to the anaculture, after which the pH is adjusted, for example with alkali, until the precipitation is optimal. After cold settling (for example, 2 days or more), the clear supernatant is discarded to give a concentration of the cells and the proteinaceous material (including pili) in the anaculture. Although a part of the flocculant can also be thrown away with the supernatant, the amount of precipitation is preferably kept small, because the more one uses, the more is also present in the precipitate (concentrate) and the more irritate the Vaccine obtained. Suitable flocculants include the sulfates, chlorides and the insoluble hydroxides of polyvalent cations and polyanionic polymers such as sodium carboxymethyl cellulose and hydroxypropyl methyl cellulose. Potassium alum is particularly suitable for use according to the invention, because this material can also serve as aluminum auxiliary material. It has been found that 1 volume of 10 wt% alum solution added to 7 volume of anaculture (1.25 wt% alum in total) after adjusting the pH to 5% provides a precipitate with suitable properties and in addition a clear supernatant. The higher 800 4 2 97 -6- the pH is (eg 5, 8 or 6, U), the more time it takes to completely clear the supernatant. The smaller the concentration of alum, the more time. is necessary for clarity.
Ook het volume van. het neerslag hangt af van de hoeveelheid aan het meng-5 sel toegevoegde aluin. Zo leidt toevoegen van 1 volume 10$'s aluinoplos-sing aan 11 volumes anacultuur (0,83$ aluin in totaal) tot een nauwelijks aanvaardbaar neerslag, bij een ongemakkelijk lange bezinkdunr, terwijl toevoegen van 1 volume aluin aan 4 volumes anac..J.tuur (2,0$ aluin in totaal) leidt tot een zeer volumineus neerslag, dat zonder centrifugeren 10 niet voldoende kan worden verdicht om bruikbaar te zijn bij oogsten van cellen. Op een soortgelijke wijze blijft het gezuiverde aliuminiumhydro-xyde "Alhydrogel" bij toevoegen aan anaeultures van B. nodosus lange tijd in de gedispergeerde fase, zodat oogsten van de geabsorbeerde cellen/proteine moet worden uitgevoerd door centrifugeren.Also the volume of. the precipitate depends on the amount of alum added to the mixture. For example, adding 1 volume of $ 10 alum solution to 11 volumes of anaculture ($ 0.83 alum in total) leads to barely acceptable precipitation, with an uncomfortably long settling time, while adding 1 volume of alum to 4 volumes of anac. Jure (2.0% alum in total) results in a very bulky precipitate, which cannot be compacted sufficiently without centrifugation to be useful in cell harvesting. Similarly, the purified aluminum hydroxide "Alhydrogel" remains in the dispersed phase for a long time when added to anaultures of B. nodosus, so that harvesting of the absorbed cells / protein must be performed by centrifugation.
15 Een andere techniek om de cultuur of anacultuur te concentreren is ultrafiltratie en deze methode of centrifugeren kunnen ook worden toegepast in combinatie met neerslaan bij het iso-elektrische punt of bij co-precipitatie,Another technique for concentrating the culture or anaculture is ultrafiltration and this method or centrifugation can also be used in combination with precipitation at the isoelectric point or at co-precipitation,
In geval meer· dan 1 serotype B_. nodosus in het antigeenmateriaal 20 aanwezig is, wordt een waterig mengsel van antigeen en aluminiumhulpstof bereid, zoals hierboven beschreven is voor elke afzonderlijke stam of variant en daarna worden voor het emulgeren ongeveer gelijie hoeveelheden van elk van deze waterige mengsels samengevoegd. Bij voorkeur wordt de emulsie bereid door de olie te mengen met de lipofiele emulgator, de 25 waterige antigeen/aluminiumccmponent te mengen met de hydrofiele emulgator en daarna de olie- en waterfasen te combineren. Bij voorkeur voegt men de waterige fase langzaam toe aan de oliefase onder krachtig roeren, om de neiging, een olie-in-water-emulsie te vormen te onderdrukken.In case more than 1 serotype B_. nodosus is present in the antigen material 20, an aqueous mixture of antigen and aluminum excipient is prepared, as described above for each individual strain or variant, and then approximately equal amounts of each of these aqueous mixtures are combined for emulsification. Preferably, the emulsion is prepared by mixing the oil with the lipophilic emulsifier, mixing the aqueous antigen / aluminum component with the hydrophilic emulsifier and then combining the oil and water phases. Preferably, the aqueous phase is added slowly to the oil phase with vigorous stirring to suppress the tendency to form an oil-in-water emulsion.
Een fijnere dispersie van de waterige fase kan worden verkregen door 30 homogeniseren of malen in een colloidmolen en dit kan worden voortgezet tot. de deeltjesgrootte niet verder afneemt.A finer dispersion of the aqueous phase can be obtained by homogenizing or milling in a colloid mill and continuing until. the particle size does not decrease further.
De optimale verhouding van olie- tot waterfase in een vaccine hangt af van een reeks van factoren, zoals de concentratie van antigeen-materiaal in de waterfase, de gewenste viscositeit van het vaccine en de 35 mate van antigene eigenschappen in het antigene materiaal. De waterfase vormt bij voorkeur niet meer dan 60$ en niet minder dan 10$ van het totale volume van de emulsie. Een grotere hoeveelheid water is ongewenst, met het oog op de toename van de viscositeit en de instabiliteit van de 800 4 2 97 * i -7- emulsie en een hoeveelheid van minder den 10% waterfase maakt het moeilijk een voldoende hoeveelheid antigeen in het preparaat te verwerken, zonder een onaanvaardbaar groot volume per dosis te krijgen. Gevonden is, dat bevredigende vaccines worden verkregen, wanneer de waterfase 20-50 vol.% 5 uitmaakt van het gehele vaccine. Wanneer een grote hoeveelheid water gewenst is, bij voorbeeld meer dan b0%t dan· moeten voorzorgen, worden genomen om te verhinderen, dat een olie-in-water-emulsie. .ontstaat of een instabiele emulsie. Gevonden is, dat dergelijke emulsies, welke polyoxy-ethyleen (20) sorbitantrioleaat bevatten kunnen worden gestabiliseerd 10 door toevoeging van Falba (een stabilisator, welke bijenwas, paraffine-olie met variërende viscositeit uit lanoline geëxtraheerde oxycholeste-rinen bevat). De hoeveelheid in elke fase benodigde emulgator hangt af van een aantal factoren en in het bijzonder van de HLB-waarden van de emulgatoren en de keus van. de olie en gewoonlijk zal 2,5-15 vol.% van 15 een lipofiele emulgator en 0,5-10,0 vol.% van een hydrofiele emulgator in de betrokken fasen vaccines opleveren met de gewenste eigenschappen.The optimal oil to water phase ratio in a vaccine depends on a variety of factors, such as the concentration of antigenic material in the water phase, the desired viscosity of the vaccine and the degree of antigenic properties in the antigenic material. Preferably, the water phase constitutes not more than 60% and not less than 10% of the total volume of the emulsion. A larger amount of water is undesirable, in view of the increase in viscosity and instability of the 800 4 2 97 * i -7 emulsion and an amount of less than 10% aqueous phase makes it difficult to have a sufficient amount of antigen in the preparation without getting an unacceptably large volume per dose. It has been found that satisfactory vaccines are obtained when the water phase constitutes 20-50% by volume of the entire vaccine. When a large amount of water is desired, for example more than 10% t then precautions should be taken to prevent an oil-in-water emulsion. .or an unstable emulsion. It has been found that such emulsions containing polyoxyethylene (20) sorbitan trioleate can be stabilized by the addition of Falba (a stabilizer which contains beeswax, paraffin oil of varying viscosity from lanolin extracted oxychol esters). The amount of emulsifier required in each phase depends on a number of factors and in particular on the HLB values of the emulsifiers and the choice of. the oil and usually 2.5-15% by volume of a lipophilic emulsifier and 0.5-10.0% by volume of a hydrophilic emulsifier in the involved phases will yield vaccines with the desired properties.
Een aanzienlijke verbetering van de antigene eigenschappen van de anti-genen is verkregen met 5-12 vol.% emulgator in de oliefase en 0,2-7 vol.% in de waterfase.A significant improvement in the antigenic properties of the anti-genes has been obtained with 5-12% by volume emulsifier in the oil phase and 0.2-7% by volume in the water phase.
20 De preparaten volgens de uitvinding kunnen worden geformuleerd tot een vaccine,, dat geschikt is voor toediening door het preparaat in een geschikte concentratie en in steriele vorm te verwerken tot een toedieningsvorm.The compositions of the invention can be formulated into a vaccine suitable for administration by processing the composition in a suitable concentration and in sterile form into a dosage form.
Het is. nodig, na het emulgeren het preparaat te steriliseren of-25 wel ie afzonderlijke componenten tevoren te steriliseren en ze daarna onder steriele omstandigheden te emulgeren- De preparaten volgens de uitvinding kunnen worden gesteriliseerd door toepassing van hitte en filtratie om de componenten te steriliseren of door toepassing van gamma-straling zonder dat daardoor de stabiliteit of de werkzaamheid vermindert.It is. necessary after sterilization to sterilize the composition, or to pre-sterilize individual components and then emulsify them under sterile conditions. The compositions of the invention may be sterilized using heat and filtration to sterilize the components or by use of gamma radiation without thereby impairing stability or efficacy.
30 Het uiteindelijke vaccine wordt in steriele houders gebracht en deze worden gesloten. Het vaccine bevat bij voorkeur een bacteriostaat van een soort, die gewoonlijk wordt gebruikt voor gedode bacterievaccines en 0,01 gew.% thicmersal (natriumethylmercurythiosalicylaat) kan voor dit doel in de waterige fase worden verwerkt. Doelmatig bevat het uiteinde- 7 11 35 lijke vaccinepreparaat m totaal 2,5 x 10 -1 x 10 en liefst tussen 8 9 1 x 10 en 1,25 x 10 gedode organismen per ml preparaat.The final vaccine is placed in sterile containers and these are closed. The vaccine preferably contains a bacteriostat of a kind commonly used for killed bacterial vaccines and 0.01 wt% thicmersal (sodium ethyl mercury thiosalicylate) can be processed in the aqueous phase for this purpose. Advantageously, the final vaccine preparation m contains a total of 2.5 x 10 -1 x 10 and preferably between 8 9 1 x 10 and 1.25 x 10 killed organisms per ml preparation.
De vaccines volgens de uitvinding worden bij voorkeur aan de dieren toegediend door onderhuidse, intramusculaire of intraperitoneale O Π Λ L 9 07 -8- inspuiting. Het is doelmatig, het vaccine toe te dienen op een plaats vaar plaatselijke reactie op de toediening voor de hoer van weinig belang is, hij voorbeeld vooraan de rugkant van de nek of op de onder- δ *| ί kaak. De het liefst gebruikte dosis ligt tussen 1 x 10 en 1 x 10 gedo- ö 10 5 de organismen/dosis en in het bijzonder tussen 1 x 10 en 1 x 10 υ orga-nismen/dosis, waarbij onder dosis wordt verstaan de totale· hoeveelheid antigeenmateriaal, die per keer wordt toegediend aan het dier, zoals een schaap, in een geschikt volume vloeistof,, bij voorbeeld 1-2 ml.The vaccines according to the invention are preferably administered to the animals by subcutaneous, intramuscular or intraperitoneal injection. It is expedient to administer the vaccine at a site where local reaction to the administration is of little importance to the whore, for example at the front of the back of the neck or at the bottom δ * | jaw. The most preferred dose is between 1 x 10 and 1 x 10 by the organisms / dose and in particular between 1 x 10 and 1 x 10 organisms / dose, the dose being the total amount of antigenic material administered at a time to the animal, such as a sheep, in an appropriate volume of liquid, e.g. 1-2 ml.
De dosis vaccine kan aan een dier worden toegediend als één eenheid of 10 als een reeks sub-doses en deze laatste kunnen worden gespreid over een periode of door gelijktijdige inspuiting van da sub-doses op verschillende plaatsen van het lichaam. Een geschikt immunisatieschema kan bestaan uit één enkele injectie van de dosis of uit 2 injecties, die ieder een sub-dosis vormen, en gelijktijdig op verschillende plaatsen van het 15 lichaam worden toegediend. Het optimale dosisschema varieert natuurlijk, afhankelijk, van de als basis voor het vaccine gekozen stam van het organisme, van het totale aantal organismen dat gebruikt wordt, van de aard van de hulpstof en de methode, van toediening. Het is bijzonder gunstigThe dose of vaccine can be administered to an animal as one unit or 10 as a series of sub-doses, and the latter can be spread over a period of time or by simultaneous injection of the sub-doses into different places of the body. A suitable immunization schedule may consist of a single injection of the dose or 2 injections, each of which is a sub-dose, and administered simultaneously at different sites of the body. The optimal dose schedule naturally varies depending on the strain of the organism selected as the basis for the vaccine, the total number of organisms used, the nature of the excipient and the method of administration. It is very beneficial
gebleken, een vaccine toe te dienen, dat 3x10° organismen per ml bevat 20 als een enkele dosis van 1 of 2 ml langs subcutane weg, gevolgd door een tweede injectie van met hetzelfde volume en dezelfde concentratie en langs dezelfde weg na een periode van ten minste 6 weken en bij voorkeur 12 weken. Versterkingsdoses worden bij voorkeur toegediend kort voor het seizoen waarin verspreiding van voetrot wordt verwacht.has been shown to administer a vaccine containing 3 x 10 ° organisms per ml as a single dose of 1 or 2 ml by subcutaneous route, followed by a second injection of the same volume and concentration and by the same route after a period of at least at least 6 weeks and preferably 12 weeks. Reinforcement doses are preferably administered shortly before the season in which spreading foot rot is expected.
25 Haast het antigene materiaal, afgeleid van B. nodosus kan een vaccine volgens de uitvinding ook antigeen materiaal bevatten, dat is afgeleid van andere bacteriën, welke ziekten kunnen veroorzaken, bij voorbeeld bij schapen, in het bijzonder F. necrophorum of clostridia.Almost the antigenic material derived from B. nodosus, a vaccine according to the invention may also contain antigenic material derived from other bacteria, which can cause diseases, for example in sheep, in particular F. necrophorum or clostridia.
Een zeer bij voorkeur gebruikte combinatie is een vaccine met meerdere 30 componenten, dat een preparaat bevat van één of meer clostridiale anti-genen, beschreven in het Britse octrooischrift 1.1^3.5^5, gecombineerd met een antigeenmengsel voor B. nodosus, welk laatste bereid is zoals hiervoor is beschreven.A very preferred combination is a multicomponent vaccine containing a preparation of one or more clostridial anti-genes described in British patent specification 1.1 ^ 3.5 ^ 5, combined with an antigen mixture for B. nodosus, the latter prepared is as described above.
De uitvinding verschaft daarom:The invention therefore provides:
OCTOCT
a) een antigeenpreparaat, dat omvat een water-in-olie-auulsie met antigeenmateriaal, afgeleid van of bestaande uit Bacteroides nodosus-organismen en een aluminiumhulpstof in de waterige fase van de emulsie; b) een werkwijze cm een antigeenpreparaat te bereiden van het type 800 4 2 97 -9- als beschreven onder (a), waarbij men een waterig medium, dat antigeen-materiaal bevat, afgeleid van of bestaat uit B. nodosus-organismen en een aluminiumhulpstof wordt geëmulgeerd in een olie; c) een vaccine, dat een steriel preparaat bevat van een mengsel 5 als amschreven onder (a); d) een werkwijze voor profilaxie of behandeling van voetrotinfec-tie bij schapen, waarbij men aan het echaap een werkzame en- niet giftige dosis toedient van een vaccine van het type, beschreven onder \c),a) an antigen preparation comprising a water-in-oil emulsion with antigenic material derived from or consisting of Bacteroides nodosus organisms and an aluminum excipient in the aqueous phase of the emulsion; b) a method of preparing an antigen preparation of the type 800 4 2 97-9 as described under (a), using an aqueous medium containing antigenic material derived from or consisting of B. nodosus organisms and a aluminum excipient is emulsified in an oil; c) a vaccine containing a sterile preparation of a mixture 5 as described under (a); d) a method for prophylaxis or treatment of foot rot infection in sheep, in which an effective and non-toxic dose of a vaccine of the type described under (c) is administered to the ovum,
De uitvinding wordt toegelicht, maar niet beperkt, door de volgende voorbeelden.The invention is illustrated, but not limited, by the following examples.
10 Vergelijkingsvoorbeeld I10 Comparative Example I
Kweek van het organisme.Culture of the organism.
E. nodosus (stam SCIRO nr. 98) organismen, verkregen uit een ent-cultuur werden geënt op het. medium, beschreven door Thor ley, C.M. (1976) J. Appl. Bact. Uo, 301-309s blz. 302) dat aanwezig was in flessen met 15 schroefdop en de lucht in de flessen werd verdrongen door een mengsel van 10* kooldioxyde en 90* stikstof. De cultures werden op 37°C gehouden gedurende 20-^0 uur en de organismen werden gedood door toevoegen van formaline (0,5 gew.*K Onderzoek van de organismen onder een elektrcnmi-croscoop toonde aan, dat ten minste 90* daarvan sterk gepileerd was 20 (meer dan 100 pili/organisme).E. nodosus (strain SCIRO No. 98) organisms obtained from a seed culture were seeded on the. medium, described by Thor ley, C.M. (1976) J. Appl. Bact. Uo, 301-309s p. 302) which was contained in screw cap bottles and the air in the bottles was displaced by a mixture of 10 * carbon dioxide and 90 * nitrogen. The cultures were kept at 37 ° C for 20-100 hours and the organisms were killed by adding formalin (0.5 wt.%). Examination of the organisms under an electron microscope showed that at least 90% of them Pillated was 20 (more than 100 pili / organism).
Voorbeeld IIExample II
Antigeenmengsel.Antigen mixture.
Een geformaliseerde anacultuur (3200 ml) van sterk gepileerde B. nodosus-organismen, verkregen als in voorbeeld I, werd behandeld met 25 320 ml 10*'s kaliumaluinoplossing en de pH van het mengsel werd op 6,2 gebracht door toevoegen van U0*rs BaCH-oplossing. Uadat het mengsel . . . , o 24 uur was bewaard bij 4 C werd de bovenstaande vloeistof afgegoten, zodat het volume van het neergeslagen organisme 1200 ml werd.A formalized anaculture (3200 ml) of highly pelleted B. nodosus organisms, obtained as in Example 1, was treated with 320 ml of 10 * potassium alum solution and the pH of the mixture was adjusted to 6.2 by adding U0 * rs BaCH solution. After the mixture. . . After 24 hours at 4 ° C, the supernatant was poured off so that the volume of the precipitated organism became 1200 ml.
Aan dit residu werd toegevoegd_ 30 ml Tween 80 (^0 vol.* in water) 30 en 1,2 ml thiomersal (10* oplossing in water) en het mengsel werd geëmulgeerd met een mengsel van 2,8 1 Arlacel A (10 vol.*) en Mar col (90 vol.*).To this residue was added 30 ml of Tween 80 (^ 0 vol. * In water) and 1.2 ml of thiomersal (10 * solution in water) and the mixture was emulsified with a mixture of 2.8 L of Arlacel A (10 vol . *) and Mar col (90 vol. *).
Voorbeelden III-VIExamples III-VI
Antigene mengsels.Antigenic mixtures.
35 Sterk gepileerde B. nodosus-organismen werden verzameld door neerHighly pelleted B. nodosus organisms were collected by down
slaan bij het iso-elektrische punt, waarbij de anacultures werden behandeld met een voldoende hoeveelheid verdund waterig zwavelzuur om de pHbeating at the isoelectric point, the anacultures being treated with a sufficient amount of dilute aqueous sulfuric acid to adjust the pH
enn i ? Q7 -10- te verminderen tot 5,0. Na 3 dagen staan bij 16-20°C werden de organismen 9-10 maal geconcentreerd door 133,7 1 van de bovenstaande vloeistof weg te werpen. De organismen werden gebruikt bij de bereiding van vaccine-formuleringen volgens de voorbeelden III-VI, zoals aangegeven in onder-5 staande tabel A. In elk van de gevallen werd de geconcentreerde anacul-tuur verdund (kolom. 3) met- waterige keukenz out oplossing en aan bet waterige mengsel werd tbiomersal toegevoegd (kolom 7') tot een concentratie van 0,01$ voor de waterige oplossing werd geëmulgeerd in olie (kolom 8).andn i? Q7 -10- to 5.0. After standing for 3 days at 16-20 ° C, the organisms were concentrated 9-10 times by discarding 133.7 L of the supernatant. The organisms were used in the preparation of vaccine formulations according to Examples III-VI, as indicated in Table 5 below. In each case, the concentrated anaculture was diluted (column 3) with aqueous kitchen salt solution and to the aqueous mixture was added tbomersal (column 7 ') until a concentration of 0.01% before the aqueous solution was emulsified in oil (column 8).
In de voorbeelden IY-VI werd na bet toedienen van de hydrofiele emulgator 10 de pH bijgeregeld.In Examples IY-VI, after adjusting the hydrophilic emulsifier 10, the pH was adjusted.
80 0 4297 -11- *b •Η Η ο = Ον Ον <—·. ΙΑ ΙΑ _ Ο SL· J- J· ΙΑ ΙΑ Ο - 00 ë Ο " λλ«" Η 3 -ρ oj cm oj cm c— y.80 0 4297 -11- * b • Η Η ο = Ον Ον <- ·. ΙΑ ΙΑ _ Ο SL · J- J · ΙΑ ΙΑ Ο - 00 ë Ο "λλ« "Η 3 -ρ oj cm oj cm c— y.
1—f 1—I *rH .1-f 1-1 * rH.
ο ο H siο ο H si
M IM I
0) ^ cn _3 ai o H O H U _ „ g n- d s o -i -a· co > CÖ 3 <1> +3 Ά IA C— _ Η -P H -P -H O O tA LA O o OOOtÖH » " " * rX ^ Ϊ4 E-< !> ’ϊ'-' τ- OJ OJ CO ö o 0 ^ ^ "o O Η Η Η H ^ •H -P € S S S ' i0) ^ cn _3 ai o HOHU _ „g n- dso -i -a · co> CÖ 3 <1> +3 Ά IA C— _ Η -PH -P -HOO tA LA O o OOOtÖH» "* * rX ^ Ϊ4 E- <!> 'Ϊ'-' τ- OJ OJ CO ö o 0 ^ ^ "o O Η Η Η H ^ • H -P € SSS 'i
Cm cd H h no o to co co ia la « o L r-f « *"·' y Η H d O OO OCOOOJOOJOA fcoCm cd H h no o to co co ia la «o L r-f« * "· 'y Η H d O OO OCOOOJOOJOA fco
O 5, 3 CQt- COr- CO NO CO NO 00 t- P —' HO 5.3 CQt- COr- CO NO CO NO 00 t- P - 'H
m o w O som o w O so
IP) H O -PIP) HO -P
O ^ i ^ ^ jfg *1 ~ °i - o £ hO ^ i ^ ^ jfg * 1 ~ ° i - o £ h
O NO NO NO NO NO bo H OO NO NO NO NO NO bo H O
O W +3 ‘r1 < iO W +3 "r1 <i
Pi W P) ca Ö w § H -P , 2 d λ λ y—v fl ·« d H es-Pi W P) ca Ö w § H -P, 2 d λ λ y — v fl · «d H es-
cq | Ή Η Η Η ή ρ ί3 Oor | Ή Η Η Η ή ρ ί3 O
g ο s s s a o too §λ, h ~ ~ h +3 ^o-o .HO d H O O O CÖ-H Ο Η ·Η E-I p-p g 3 r; o o 3 H ^ g * h n 3 -—> CM a a p ' - a 5g ο s s a o too §λ, h ~ ~ h +3 ^ o-o .HO d H O O O CÖ-H Ο Η · Η E-I p-p g 3 r; o o 3 H ^ g * h n 3 -—> CM a a p '- a 5
g Ρ) ·Η-ί··^·~- w ' •HOJ'S^.'-'OPg Ρ) · Η-ί ·· ^ · ~ - w '• HOJ'S ^ .'-' OP
H 3 H rl 1AO _ d " ° tL ±1 SH 3 H rl 1AO _ d "° tL ± 1 S
Π -J d ffj t— r— K W Sh Cd *“ 1 Ο Ή « 5 3 5 — co d i=! οι SIH60 Ρ) H 2 § §j Ο Ο Ο P DO 21 ‘ύ Ê 0PSj.pl +3+3 jS Ρ dJ -J d ffj t— r— K W Sh Cd * “1 Ο Ή« 5 3 5 - co d i =! οι SIH60 Ρ) H 2 § §j Ο Ο Ο P DO 21 "ύ Ê 0PSj.pl + 3 + 3 jS Ρ d
Ü (d S M ·—' Η Η ·Η "Η H *rj OÜ (d S M · - 'Η Η · Η "Η H * rj O
cn d > CO'S?, s S Η H - s > rrf O O On I '—' h _cn d> CO'S ?, s S Η H - s> rrf O O On I '-' h _
H d +3 bo Ή r O H" C— A HOH d +3 bo Ή r O H "C— A HO
Ο Ο Ο ·Η P)0 Ο -=f « * -PCdt- w > s h o— t- g e, a ο P) cd II H 1¾ r» nj d ° +3Ο Ο Ο · Η P) 0 Ο - = f «* -PCdt- w> s h o— t- g e, a ο P) cd II H 1¾ r» nj d ° +3
a δ I I Ha δ I I H
0 CO. 0) a d cj oj am0 CO. 0) a d cj oj am
(MOO n« OOÖO(MOO n «OOÖO
Ü >> ω Ο Ο OnOnOO I Pi fi H Ö S ^- - § o 2Ü >> ω Ο Ο OnOnOO I Pi fi H Ö S ^ - - § o 2
ο Ο ·Η *H P u Sο Ο · Η * H P u S
Μ O 4+ H4 O 4+ H
Λ ^ Ό .HOPΛ ^ Ό .HOP
: H y o: H y o
«J h tI S«J h tI S
d O Xi 5 « raps +J O lb| o H g <1) * · «· ·Ηd O Xi 5 «raps + J O lb | o H g <1) * · «· · Η
t— d § +3 O W Ht— d § +3 O W H
δ Η P-. *h CO < Oδ Η P-. * h CO <O
HtdOH Ο OOOH EH = o ö t> s ο ο ο o litfj<s;>S oj oi oo ia noHtdOH Ο OOOH EH = o ö t> s ο ο ο o litfj <s;> S oj oi oo ia no
1 H1 H
P HP H
5 O . Η H5 O. Η H
Ο Ο Ο Η > Η HΟ Ο Ο Η> Η H
>pas H H>>> ο η n l o Q7 -12-> pass H H >>> ο η n l o Q7 -12-
Voor"beeld VIIFor "picture VII
Antigeenmengsel.Antigen mixture.
Op dezelfde wijze als in voorbeeld II werd een ander mengsel bereid onder toepassing van sterk gepileerde B. nodosus-organismen (ver-5 kregen op de manier, beschreven in voorbeeld I), zoals vermeld in tabel A.In the same manner as in Example II, another mixture was prepared using highly pelleted B. nodosus organisms (obtained in the manner described in Example I) as listed in Table A.
Voorbeeld VIIIExample VIII
Vaccines.,Vaccines.,
De mengsels beschreven in de voorbeelden III-VH kunnen worden af-10 gevuld in steriele flesjes van 1,2 of 10 ml en daarna gesloten en gesteriliseerd door gammastraling,The mixtures described in Examples III-VH can be filled into sterile 1.2 or 10 ml vials and then closed and sterilized by gamma radiation,
Voorbeeld IXExample IX
Doelmatigheid.Efficiency.
Bij deze. proef werden k groepen van elk. 5 schapen gevaccineerd, 15 subcutaan op de onderkaak, met 2 ml vaccine, bereid zoals beschreven in voorbeeld II (vaccine A) en met 3 andere vaccinepreparaten' (vaccines B, C en D), Zes weken later werd een tweede dosis vaccine aan elk schaap toegediend, welke voor elk schaap in alle opzichten gelijk was aan de eerste dosis en uit elk van de vaccinegroepen werden 5 schapen besmet 20 met een levende cultuur van de betrokken vaccine stam’, die rechtstreeks op elke voet werd gebracht. Daarna werd elke groep van 5 schapen met tussentijden van 1 maand opnieuw besmet, zodat de laatste besmetting werd uitgevoerd 12 weken na de tweede vaccinatie. Drie weken na elke besmetting werden de poten onderzocht op klinische voetrot. Een. score, waarbij 25 êên of meer van de voeten waren aangetast door voetrot op de zool of 2 of meer voeten waren aangetast door ernstige dermatitis tussen de tenen en dat bij 2 of meer van de 5 dieren, werd geacht te betekenen, dat het vaccine onvoldoende bescherming biedt en verder onderzoek van dat vaccine werd nagelaten.Hereby. K groups of each were tested. 5 sheep vaccinated, 15 subcutaneously on the lower jaw, with 2 ml vaccine, prepared as described in example II (vaccine A) and with 3 other vaccine preparations' (vaccines B, C and D). Six weeks later, a second dose of vaccine was administered to each sheep, which was equal in all respects to the first dose for each sheep, and from each of the vaccine groups, 5 sheep were infected with a live culture of the relevant vaccine strain, which was applied directly to each foot. Thereafter, each group of 5 sheep was re-infected at 1 month intervals, so that the last infection was performed 12 weeks after the second vaccination. The legs were examined for clinical foot rot three weeks after each infection. A. score, where 25 one or more of the feet were affected by foot rot on the sole or 2 or more feet were affected by severe dermatitis between the toes and that in 2 or more of the 5 animals, it was considered that the vaccine was insufficient provides protection and further investigation of that vaccine has been omitted.
30 De ij· onderzochte vaccines (A, B, C en D) werden gelijktijdig onder zocht en vergeleken met een controlegroep van niet gevaccineerde schapen om de virulentie van de besmettingscultuur te controleren. Vijf groepen van U x 5 schapen werden gebruikt. Bloedmonsters werden genomen na 0 weken en na 6 weken en telkens bij het onderzoek van de voeten. In die 35 monsters werd de agglutinatietiter bepaald en het geometrische gemiddelde van de titers werd berekend. De resultaten van de proef zijn samengevat in tabel B.The ij-examined vaccines (A, B, C and D) were simultaneously examined and compared with a control group of unvaccinated sheep to check the virulence of the contamination culture. Five groups of U x 5 sheep were used. Blood samples were taken after 0 weeks and after 6 weeks and each time during the examination of the feet. Agglutination titer was determined in those 35 samples and the geometric mean of the titers was calculated. The results of the test are summarized in Table B.
Daaruit blijkt, dat vaccine A volgens de uitvinding het enige was, 800 4297 -1U- O £ o o oFrom this it appears that vaccine A according to the invention was the only one, 800 4297 -1U- O £ o o o
s, P· 0 VO CU VOs, P0 VO CU VO
O LA O LA COO LA O LA CO
jj fr3yy fr3
H cn ρ c\JH cn ρ c \ J
-=J- Eh <2- = J- Eh <2
W> IW> I
Ö ° •Η O) -P -P -¾ +3 m 0 g .p 0 LA a VO vo 0 S) § ^ ^ VO la pq gi ¢0 u <sj ra i. o o o 9 5 0 vo co ov ~ °°Ö ° • Η O) -P -P -¾ +3 m 0 g .p 0 LA a VO vo 0 S) § ^ ^ VO la pq gi ¢ 0 u <sj ra i. o o o 9 5 0 vo co ov ~ ° °
+3 σ\ CO ~ V7V+3 σ \ CO ~ V7V
5 o on co . *- <n “ -=f ^5 o on co. * - <n “- = f ^
bObO
pq a •Η 0pq a • Η 0
-P -P-P -P
i-Q 4-3 m 0 tfl d 63 £· +3 0 ,- mop. LA LA LA if'iC' pQOhfloJ ^ \ x O' ffl qq OCV1 r- - ~ <5 So <! mi-Q 4-3 m 0 tfl d 63 £ +3 0, - joke. LA LA LA if'iC 'pQOhfloJ ^ \ x O' ffl qq OCV1 r- - ~ <5 So <! m
Eh tj o „ <D o o o C\ o o o o laEh tj o „<D o o o C \ o o o o la
OJ ·η co c\ t— IOJ · η co c \ t— I
e-t j- bQ OJ ¢- oo c— a *- *“ H οe-t j- bQ OJ ¢ - oo c— a * - * “H ο
-p -P-p -P
ο m 0 <d öο m 0 <d ö
imp.: LA LA LA A_LAimp .: LA LA LA A_LA
0 hO ¢0 ^ ^ PT0 hO ¢ 0 ^ ^ PT
PP S'o o o r- T- OJPP S'o o o r- T- OJ
aJ a <q m tj o o o o o 0 CVI 00 co o\ coaJ a <q m tj o o o o o 0 CVI 00 co o \ co
+3 O VO cO CO+3 O VO cO CO
r— ·Ηr— · Η
Eh On oo ^ ^ 60 LA OO v— V~ Ö •Η 0 4-3 +3 -P m Φ a5 ö g -p 0Eh On oo ^ ^ 60 LA OO v— V ~ Ö • Η 0 4-3 +3 -P m Φ a5 ö g -p 0
m a) P LA LA LA LALAm a) P LA LA LA LALA
Obfleö > "!> pq 0Λ O O O O laObfleö> "!> Pq 0Λ O O O O la
si Ο Hsi Ο H
^ 03 Ö.S^ 03 Ö.S
a> Ha> H
HO S I Ö , Ό irt ·Η Η Ή ·Η 0 H ?4 Sö fts μ q d ft 0 0 10 0 00 00 0 Η Ή O bO 5 0 0 d 0 bO 0 (ö H bO bOöHO S I Ö, Ό irt · Η Η Ή · Η 0 H? 4 Sö fts μ q d ft 0 0 10 0 00 00 0 Η Ή O bO 5 0 0 d 0 bO 0 (ö H bO bOö
•Η HÖ S H O Hö "H• Η HÖ S H O Hö "H
3 -Η -H 0 +3 -Η ·Η 0 +3 p H 0 -P o O ft 0 -H 00 Pi 0 H 0 0 2 -jj 5 y ¢0 0ΗΗ ·ΗΗ 000 ·ρ4 0ΗΗ ·Η si > <!bO«30 pqpaJ ObflbOls Q Cl H «J O 0|> 800 4 2 97 -13- dat ook bij de vierde besmetting aan de schapen bescherming bood.3 -Η -H 0 +3 -Η · Η 0 +3 p H 0 -P o O ft 0 -H 00 Pi 0 H 0 0 2 -yy 5 y ¢ 0 0ΗΗ · ΗΗ 000 · ρ4 0ΗΗ · Η si> <! bO «30 pqpaJ ObflbOls Q Cl H« JO 0 |> 800 4 2 97 -13- which also protected the sheep during the fourth infection.
Twee "weken na het voetonderzoek waren bij het ene uit deze vaccinegroep aangetaste schaap de voetwonden genezen, terwijl de wonden bij de 5 schapen uit de controlegroep onverminderd ernstig waren.Two weeks after the foot examination, the foot wounds in one sheep affected in this vaccine group had healed, while the wounds in the 5 sheep in the control group were as serious as possible.
5 Verder werd een duidelijk verschil gevonden in de serumaggluti- natietiters van de schapen die waren geïmmuniseerd met vaccine A en de schapen, welke waren gevaccineerd met de andere vaccines.Furthermore, a clear difference was found in the serum agglutination titres of the sheep immunized with vaccine A and the sheep vaccinated with the other vaccines.
Besmetting nr. 2 was ongeldig, omdat van de controlegroep 3 schapen niet werden aangetast. Besmetting U was zeer ernstig, zodat de scha-10 pen uit de controlegroep reeds ernstig waren aangetast bij een voorlopig onderzoek 10 dagen na de besmetting.Contamination No. 2 was invalid because 3 sheep from the control group were not affected. Contamination You were very serious, so that the sheep from the control group were already seriously affected in a preliminary examination 10 days after the infection.
Deze proef toont voor het eerst aan, dat het mogelijk is door vaccinatie schapen tegen voetrot te beschermen gedurende een periode van 12 weken na de laatste dosis vaccine.This trial demonstrates for the first time that vaccination protects sheep from foot rot for a period of 12 weeks after the last dose of vaccine.
15 Be vaccines B, C en D waren identiek aan vaccine A, behalve: vaccine B: de organismen waren niet virulent en genetisch niet gepileerd, d.w.z. geen daarvan bleek meer dan 20 pili/bacterie te hebben.Vaccines B, C and D were identical to vaccine A, except: vaccine B: the organisms were not virulent and genetically not pelleted, i.e. none were found to have more than 20 pili / bacteria.
Vaccine C: hierbij werd de aluminiumhulpstof weggelaten.Vaccine C: the aluminum excipient was omitted.
««
Vaccine D: de aluminiumhulpstof werd weggelaten en bovendien waren de 20 organismen niet gepileerd, evenmin als bij vaccine B.Vaccine D: The aluminum excipient was omitted and, moreover, the 20 organisms were not pelleted, just like vaccine B.
800 4 2 97 -15-800 4 2 97 -15-
Voorbeeld XExample X.
Werkzaamheid, van de vaccines.Efficacy, of the vaccines.
Bij deze proef werden vaccines, bereid uit de mengsels uit voorbeelden III-VII, vergeleken met vaccines, welke uitsluitend aluin als hulpstof bevatten (vaccines F en G·). Schapen, die vrij waren van voet-rot werden behandeld met ofwel één enkele dosis van een vaccine uit de voorbeelden III-VII ofwel met 2 dosis van vaccines F of G, welke 6 weken uiteen lagen. Ha de vaccinatie werden periodiek groepen van de gevaccineerde schapen vergeleken met niet gevaccineerde controledieren om de bestendigheid tegen infectie te bepalen tegen een kunstmatige besmetting met een levende cultuur van B. nodosus, zoals beschreven in voorbeeld IX. De resultaten zijn samengevat in tabel C.In this test, vaccines prepared from the mixtures of Examples III-VII were compared with vaccines containing only alum as an excipient (vaccines F and G). Sheep free of foot rot were treated with either a single dose of a vaccine from Examples III-VII or with 2 dose of vaccines F or G, 6 weeks apart. After vaccination, groups of the vaccinated sheep were periodically compared to unvaccinated control animals to determine resistance to infection against an artificial contamination with a live culture of B. nodosus, as described in Example IX. The results are summarized in Table C.
TABEL CTABLE C
Vaccine Dosis Besmetting na vaccinatie (aangetaste schapen) vaccine --- (ml) 8 weken 12 weken 15 wekenVaccine Dose Post-vaccination infection (affected sheep) vaccine --- (ml) 8 weeks 12 weeks 15 weeks
Voorbeeld III 1 1/5 0/kExample III 1 1/5 0 / k
Voorbeeld IV 1 0/5 0/5Example IV 1 0/5 0/5
Voorbeeld V 2 - 0/5Example V 2 - 0/5
Voorbeeld VI 1 0/5 - 0/5Example VI 1 0/5 - 0/5
Voorbeeld VII 1 0/5 1/5Example VII 1 0/5 1/5
Voorbeeld VII 2 0A 0/5 F 2x2 k/5 G 2x2 k/5Example VII 2 0A 0/5 F 2x2 k / 5 G 2x2 k / 5
Controle 0 k/5 5/5 k/5 800 Λ 2 97Control 0 k / 5 5/5 k / 5 800 Λ 2 97
Claims (22)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB7926323 | 1979-07-27 | ||
GB7926323 | 1979-07-27 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL8004297A true NL8004297A (en) | 1981-01-29 |
Family
ID=10506837
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL8004297A NL8004297A (en) | 1979-07-27 | 1980-07-25 | ANTIGEN PREPARATIONS. |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
AU (1) | AU529322B2 (en) |
BE (1) | BE884487A (en) |
CA (1) | CA1153310A (en) |
DE (1) | DE3028248A1 (en) |
FR (1) | FR2462166B1 (en) |
IT (1) | IT1128549B (en) |
NL (1) | NL8004297A (en) |
NZ (1) | NZ194448A (en) |
ZA (1) | ZA804525B (en) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IE940698L (en) * | 1984-04-05 | 1985-10-05 | Univ Missouri | Vaccine and serum for endotoxin associated disease and method of preparing same as well as to methods of immunization and treatment of such disease and to a detoxified endotoxin and bacterial mutant |
AU580825B2 (en) * | 1984-12-24 | 1989-02-02 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Bacteroides nodosus vaccine |
AU614754B2 (en) * | 1987-06-05 | 1991-09-12 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Treatment and diagnosis of footrot using the basic protease of b.nodosus. |
ES2105980B1 (en) * | 1995-11-13 | 1998-06-01 | Univ Extremadura | A VACCINE FOR THE PEDERO, PROCEDURE FOR ITS PREPARATION AND APPLICATIONS. |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ZA714355B (en) * | 1970-07-06 | 1972-03-29 | New Zealand Inventions Dev | Improvements in or relating to methods of preparation and use of a vaccine from bacteroides nodosus |
US3843451A (en) * | 1970-08-20 | 1974-10-22 | Burroughs Wellcome Co | Microorganism production |
-
1980
- 1980-07-24 AU AU60749/80A patent/AU529322B2/en not_active Expired
- 1980-07-25 NL NL8004297A patent/NL8004297A/en not_active Application Discontinuation
- 1980-07-25 BE BE0/201537A patent/BE884487A/en not_active IP Right Cessation
- 1980-07-25 IT IT49346/80A patent/IT1128549B/en active
- 1980-07-25 NZ NZ194448A patent/NZ194448A/en unknown
- 1980-07-25 CA CA000357009A patent/CA1153310A/en not_active Expired
- 1980-07-25 FR FR8016442A patent/FR2462166B1/en not_active Expired
- 1980-07-25 DE DE19803028248 patent/DE3028248A1/en not_active Withdrawn
- 1980-07-25 ZA ZA00804525A patent/ZA804525B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2462166B1 (en) | 1985-06-21 |
AU529322B2 (en) | 1983-06-02 |
FR2462166A1 (en) | 1981-02-13 |
DE3028248A1 (en) | 1981-02-19 |
BE884487A (en) | 1981-01-26 |
IT8049346A0 (en) | 1980-07-25 |
ZA804525B (en) | 1982-03-31 |
NZ194448A (en) | 1982-12-07 |
IT1128549B (en) | 1986-05-28 |
AU6074980A (en) | 1981-01-29 |
CA1153310A (en) | 1983-09-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5167469B2 (en) | Adjuvants for use in vaccines | |
ES2398235T3 (en) | Oil emulsions in microfluidized water and vaccine compositions | |
KR101143060B1 (en) | Microfluidized oil-in-water emulsions and vaccine compositions | |
AU633043B2 (en) | Tocols as adjuvant in vaccine | |
US6274149B1 (en) | Therapeutic composition comprising an antigen or an in vivo generator of a compound comprising an amino acid sequence | |
CN110087678B (en) | Combination vaccine for pigs | |
JPH04506521A (en) | Liquid vaccines and active ingredient carriers containing metabolizable oils | |
KR20070122550A (en) | Novel vaccine formulations | |
JP2013504583A (en) | Novel vaccine formulation containing saponin-containing adjuvant | |
KR20040030783A (en) | Mycoplasma bovis vaccine and methods of reducing pneumonia in animals | |
JPH08505866A (en) | Recombinant live subunit vaccine composition and method for producing the same | |
KR100447297B1 (en) | Improved Inactivated Vaccine | |
NL8004297A (en) | ANTIGEN PREPARATIONS. | |
US20080019989A1 (en) | Immunity Adjuvant Containing a Complexed Metal Cation and Vaccine Containing Same | |
US20230052315A1 (en) | Vaccine adjuvant comprising an inverse microlatex | |
JP4842430B2 (en) | Use of novel vaccine compositions and surfactants as adjuvants for immunization | |
DE69711673T2 (en) | ADJUVANS, ESPECIALLY IN THE FORM OF A THREE-VALUE METAL CATION EMULSION, AND THIS VACCINE COMPOSITION CONTAINING IT | |
CN114364398A (en) | Combination vaccine for intradermal administration | |
GB2054376A (en) | Bacteroides nodosus vaccines | |
US6689370B1 (en) | Therapeutic composition comprising an antigen or an in vivo generator of a compound comprising an amino acid sequence | |
CN118450904A (en) | Stable emulsions of antigens |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BT | A notification was added to the application dossier and made available to the public | ||
A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
BV | The patent application has lapsed |