NL8003767A

NL8003767A - Op het centrale zenuwstelsel werkende tripeptideamiden en werkwijze voor de vervaardiging daarvan.

Info

Publication number: NL8003767A
Application number: NL8003767A
Authority: NL
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszet
Priority date: 1979-06-28
Filing date: 1980-06-27
Publication date: 1980-12-30
Also published as: DE3024313C2; SU963463A3; IT1150023B; FR2460292B1; US4299821A; DD151746A5; ATA334680A; SE447261B; AU538100B2; FI74473B; SE8004744L; FR2460292A1; IL60407A; AU5971980A; FI74473C; GB2058080B; DK274680A; GB2058080A; AT373578B; PL225268A1

Description

«» N/29.791-Kp/vdM - - 1 -

Op het centrale zenuwstelsel werkende tripeptideamiden en werkwijze voor de vervaardiging daarvan.

De uitvinding heeft betrekking op de bereiding van nieuwe, op het centrale zenuwstelsel werkende, tripeptideamiden met de algemene formule 1

Glp -X-Y-NH-A

5 waarin X een L-norleucyl-, L-leucyl-, L-norvalyl-, D-leucyl-, L-prolyl-, L-2-aminobutyryl-, L-valyl-, L-threonyl-, L-isoleucyl-, L-2-aminodecanoyl-, L-cyclohecyl-alanyl- of L-tert-butyl-serylgroep en 10 Y een L-prolylgroep, of X een L-histidylgroep en Y een L-homoprolyl- of D-pipecolylgroep is, verder A waterstof of een alkylgroep is met 1-10 koolstof-atomen, of een door een dimethylaminogroep gesubstitueerde 15 alkylgroep met 1-3 koolstofatomen in het alkyldeel, wanneer echter X een L-leucylgroep betekent, dan heeft A een van waterstof verschillende betekenis, alsmede van complexen van deze verbindingen.

De nieuwe tripeptideamiden, die overeenkomen met 20 de boven gedefinieerde algemene formule 1, zijn analogen van het ook als "thyrotropine-vrijmakende hormoon" (TRH) bekende L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamide (Glp-His-Pro-NH^), waarin echter een aminozuur en wel de op de tweede plaats staande L-histidylgroep, of de op de derde plaats staande L-25 prolylgroep is uitgewisseld met een ander in de boven aangegeven definitie aangeduid aminozuur.

Het bestaan van TRH was reeds bekend in de zestiger jaren, maar zijn structuur werd eerst in de jaren 1969, resp. 1970 opgehelderd bijna gelijktijdig door de onderzoeks-30 groepen van R. Guillemin, resp. A. Schally, onafhankelijk van elkaar, verg. C.Y. Bowers enz., Endocrinology 86, 1143 (1970); R. Burgus en medew., C.R. Acad. Sci. (Parijs) 269, 1870 (1969).

Het tripeptide TRH werd oorspronkelijk beschreven als de factor, die vrijmaking van TSH (thyreotroop hormoon) 35 in de hypofyse-van zoogdieren regelde; het onderzoek dat zich 800 3 7 67 - 2 - met dit hormoon bezighield werd echter in een nieuwe richting geleid toen bekend werd dat de biologische functie van dit tripeptide niet beperkt is tot de regulering van de vrijmaking van het thyreotrope hormoon, doch dat ook een werking optreedt 5 op het centrale zenuwstelsel (verg.: N.P. Plotnikoff en medew., Science 178, 417 (1972); A.J. Prange en medew., Lancet 2,999 (1972)). Er werd dan vastgesteld, dat het TRH naast de genoemde hormoonfunctie ook de tijdsduur van de door barbituraten of alcohol veroorzaakte slaap aanzienlijk verlaagt, ver-10 der ook de door verschillende geneesmiddelen veroorzaakte hypothermie vermindert en de locomotorische activiteit vergroot. Een verdere belangrijke factor van de op het centrale zenuwstelsel uitgeoefende werking van TRH is de remming van de door haloperidol veroorzaakte catalepsie. Het scheen derhalve ook 15 gewenst voor de therapeutiscne praktijk dergelijke TRH-analo-gen te vervaardigen, die op de hypofyse slechts zwak werkten, maar daarentegen een werking vertonen op het centrale zenuwstelsel, die die van TRH bereikt of zelfs overtreft. Voor dit doel werden ook dergelijke verbindingen vervaardigd, die be-20 schreven worden in de Duitse Offenlegungsschriften 2.343.035, 2.343.037, 2.449.167, 2.514.381, 2.609.154 en 2.639.393, alsmede in het Belgische octrooischrift 819.198. De desbetreffende onderzoekingen, waarvan de resultaten en ervaringen werden samengevat door A.J. Pranne en medew. /"The Role of 25 Hormones in Depression”, Life Sciences 29_, 1305 (1977)_7 en door A.V. Schally en medew. /"Hypothalamic Regulatory Hormones" Ann. Rev. Biocnem. £7, 89 (1978/7/ konden echter niet voeren tot resultaten, die in elk opzicht bevredigend waren voor de eisen van de therapeutische praktijk.

30 Er werd thans gevonden, dat men door uitwisseling van een aminozuur van het uit drie aminozuren opgebouwde TRH-molecuul kan bereiken, dat de hormoonwerking van het tripeptide aanzienlijk wordt gereduceerd, maar de op het centrale zenuwstelsel uitgeoefende werking behouden blijft of zelfs aan-35 zienlijk wordt verhoogd. Als bijzonder voordelig zijn hierbij die TRH-analogen gebleken, die op de 2-plaats in de plaats van de L-histidylgroep een alifatische aminozuurgroep bevatten met een rechte of vertakte koolstofketen. Dergelijke TRH-analogen 800 3 7 67 « * - 3 - vertonen bij een praktisch volledige afwezigheid van hormoon-werking een werking op het centrale zenuwstelsel, die een dergelijke werking van TRH meervoudig overtreft. Van voordeel zijn verder ook die TRH-analogen, waarin de L-histidylgroep op 5 de 2-plaats onveranderd behouden is, maar waarin op de 3-plaats de L-prolylgroep van TRH is uitgewisseld tegen een L-homoprolyl- of D-pipecolylgroep.

Voor de bereiding van de nieuwe tripeptideamiden met de algemene formule 1 wordtvolgens de uitvinding uitgegaan 10 van een aminozuuramide met de algemene formule Y-NH-A, dat op de plaats van Y de aminozuurgroep van het gewenste eindprodukt bevat, waarin Y en A de bij de algemene formule 1 aangegeven betekenissen hebben; met dit amide worden dan stapsgewijze, volgens de gebruikelijke peptidechemische methoden eerst het 15 op de plaats van Z gewenste L-aminozuur en dan de in het eindprodukt op de 1-plaats staande L-pyroglutamylgroep gekoppeld en eventueel aansluitend de bij de genoemde koppelingsreacties toegepaste beschermende groepen afgesplitst. Bij de bereiding van tripeptideamiden met de algemene formule 1, die op de 20 plaats van X een L-histidylgroep bevatten, kan ook zo worden gehandeld, dat men de uitgangsverbinding met de algemene formule Y-NH-A onmiddellijk acyleert met het beschermde azide, dat bereid is uit het hydrazide A-Gln-His-NH-NH2, waarin Z een benzyloxycarbonyl-beschermende groep betekent en dan het 25 verkregen beschermde tripeptideamide met de algemene formule Z-Gln-His-Y-NH-A onderwerpt aan een katalytische hydrering, de na het affiltreren van de katalysator verkregen oplossing in azijnzuur verwarmt op 60-70°C, waarbij de glutaminylgroep in een reactietijd van ca. 30 minuten wordt gecycliseerd tot de 30 pyroglutaminezuurgroep.

De op de boven aangegeven wijze bereide tripeptideamiden met de algemene formule 1 kunnen door kristalliseren of lyofiliseren geïsoleerd worden uit het reactiemengsel; desgewenst kunnen de verkregen produkten op de gebruikelijke wijze 35 worden overgevoerd in complexen.

Bij de stapsgewijs plaatsvindende opbouw van het tripeptidemolecuul wordt de met voordeel in overmaat toegepaste uitgangsverbinding met de algemene formule Y-NH-A omgezet 8003787 - 4 - met een geactiveerd derivaat, met voordeel met de pentafluor-fenylester of evt. met een gemengd anhydride van een beschermd L-aminozuur met de algemene formule Boc-X-OH. Bij toepassing van pentafluorfenylesters worden de overeenkomstig beschermde 5 dipeptidederivaten met de algemene formule Boc-X-Y-NH-A in een uiterst korte reactietijd, binnen enkele minuten, verkregen, waarbij het produkt gemakkelijk en in een geen verdere reiniging behoevende vorm kan worden geïsoleerd. Uit de op deze wijze verkregen beschermde dipeptidederivaten kunnen dan door 10 acidolyse de overeenkomstige aan hun eindgroep vrije dipepti-den met de algemene formule H-X-Y-A worden verkregen; deze worden dan met pentafluorfenylesters van beschermd L-pyroglu-taminezuur met de algemene formule Z-Glp-OPFP omgezet, waarbij het beschermde tripeptide met de algemene formule Z-Glp-15 X-Y-NH-A wordt verkregen, waaruit de beschermende groep Z met voordeel kan worden verwijderd door katalytisch hydreren.

De op de plaats van Y een L-homoprolyl- of D-pipecolylgroep bevattende vrije amiden met de algemene formule H-Y-NH-A kunnen ook met voordeel worden geacyleerd met aziden, 20 die bereid zijn uit hydraziden met de algemene formule Z-Gln-His-^H^; deze werkwijzeroute geeft het bijzondere voordeel, dat de hydraziden goed kristalliseerbare en dus in zeer zuivere vorm isoleerbare tussenprodukten zijn. In de laatste wer-wijzestap kan de beschermende groep Z ook in dit geval doelma-25 tig worden afgesplitst door katalytische hydrering, waarbij dan de oplossing op 60-7Q°C wordt verwarmd, waardoor de gluta-minylgroep wordt omgezet in een pyroglutamylgroep.

De zuivering van het verkregen eindprodukt kan plaatsvinden door eenvoudig kristalliseren of herhaald neer-30 slaan, indien nodig echter ook door zuilenchromatografie. In enkele gevallen kan het eindprodukt na het verwijderen van de nevenprodukten ook uitgeprepareerd worden door eenvoudig lyofiliseren.

De volgens de uitvinding bereide tripeptiden 35 werden op hun farmacologische werkingen onderzocht volgens de hieronder beschreven biologische methoden.

1. Remming van de haloperidol-catalepsie aan ratten, (verg.: J.Delay en P. Deniker: Compt. Rend. Cong. Med.

800 3767 * w - 5 -

Alenistes Neurologistes, _19, 497, Luxemburg 1952).

De dieren kregen subcutaan toegediend 40 mg/kg haloperidol (4-(p-chloorfenyl)-1-/3-(p-fluorbenzoyl)-propyl/-piperidin-4-ol) en na 120 min. werd het intreden van de cata-5 lepsie gecontroleerd; dan werden de ratten in groepen van elk 10 dieren ingedeeld en benandeld met intraveneus toegediende doseringen van TRH, resp. van de nieuwe THR-analoge tripepti-den. De dieren van de controlegroepen werden behandeld met fysiologische keukenzoutoplossing. De catalepsie-opheffende 10 werking van de afzonderlijke verbindingen werd onderzocht 15, 30, 90 en 120 minuten na de behandeling. Die dieren werden als cataleptisch beschouwd, die, wanneer ze met hun voorpoten op een 7 cm hoge zuil werden geplaatst, hun positie binnen 30 seconden niet hadden gecorrigeerd.

15 Uit het aantal dieren, dat geen catalepsie ver toonde, werd door probietanalyse de overeenkomstige EDj.q-waarde bepaald voor de afzonderlijke grondstoffen.

Deze proeven werden uitgevoerd met mannelijke Wistarratten met een gewicht van 160-180 g.

20 2. Potentiëring van de door L-Dopa veroorzaakte locomotorische activiteit bij muizen.

(Verg.: The Thyroid Axis, Drugs and Behavior, blz. 116, A.J. Prage Jr., Raven Press, New York 1974).

De dieren kregen eerst intraperitoneaal toegediend 25 40 mg/kg N-methyl-N-propargylbenzylamine (pargyline), dan 20 mg/kg TRH, resp. dezelfde dosering van de te onderzoeken nieuwe tripeptiden en tenslotte 100 mg/kg L-Dopa. Na 30, 60 en 90 minuten na de boven genoemde behandeling werd de locomotorische activiteit van de dieren gemeten; de in de onderstaande 30 tabel opgegeven waarden werden aangegeven in procenten, betrokken op de met TRH behandelde dieren. Voor deze proeven werden steeds 15 mannelijke muizen gebruikt met een gewicht van 18-22 g.

3. Reserpinehypothermie-omkerende werking aan mui- 35 zen.

Verg.: B.M. Askew: Life Sci. _2, 725-230 (1963).

De in groepen van 10 dieren ingedeelde mannelijke muizen met een gewicht van 18-22 g elk, kreeg 5 mg/kg reserpi- 800 3767 - 6 - ne intraperitoneaal toegediend; na 16 uur werden de dieren behandeld met doseringen van 20 mg/kg TRH, resp. het te onderzoeken tripeptide.

De rectale temperatuur van de dieren werd vóór de 5 behandeling met reserpine gemeten (in de onderstaande tabel "norm"), na 16 uur na de behandeling met reserpine (in de tabel "res") en na êên, resp. twee uur na de toediening van de te onderzoeken tripeptiden (in de tabel "na behandel."). In de tabel zijn de doorsneewaarden opgegeven van de steeds bij 10 10 muizen gemeten rectale temperaturen.

4. Beïnvloeding van de duur van de door hexobarbi-tal veroorzaakte slaap.

De in groepen van elk 10 dieren ingedeelde mannelijke muizen werden intraveneus behandeld met 60 mg/kg hexo-15 barbital-Na (Evipan , Bayer)? na 10 min. werden de dieren dan met doseringen van 20 mg/kg TRH, resp. van de te onderzoeken tripeptiden intraperitoneaal oehandeld. De slaaptijden werden aangegeven in de onderstaande tabel in procenten, betrokken op de gemeten waarden bij de dieren van de controlegroep (gemid-20 delde waarden van steeds 10 dieren).

5. Ethanolnarcose.

Verg.: J.M. Cott en medew.: J. Pharmacol. Exp.

Ther. 196, 594 (1976).

De in groepen van 20 dieren ingedeelde muizen van 25 gemengd geslacht met een gewicht van 18-22 g elk, kregen 4,5 g ethanol intraperitoneaal toegediend; na 10 min. werden de dieren dan intraperitoneaal behandeld met doseringen van 20 mg/kg van de te onderzoeken tripeptiden. De slaaptijden werden aangegeven in de onderstaande tabel in procenten, betrokken op 30 de oij de dieren van de controlegroep gemeten waarden (gemiddelde waarden van steeds 20 dieren).

6. Hormoonactiviteit (TSH-werking) aan ratten.

Mannelijke Wistarratten met ca. 200 g gewicht elk, werden ingedeeld in groepen van 7-8 dieren en intraveneus be-35 handeld met doseringen van 20 mg/kg TRH, resp. de te onderzoeken tripeptiden. De TRH-reactie van de dieren werd 15 min. na de behandeling met TRH, resp. met de nieuwe TRH-analoge verbindingen, bepaald uit het plasma van de dieren door radio-immune onderzoekingen. De relatieve werkingshoogten werden 800 3767 - 7 - berekend volgens de vierpuntsmethode met behulp van een TOA 101 computer, waarbij de werkingshoogte van TRH als 100 werd beschouwd.

De volgens de boven geschilderde farmacologische 5 methoden bepaalde gegevens van de biologische werkingen van enkele verbindingen met de algemene formule 1 werden samengevat in de volgende tabel.

10 800 37 67 - 8 - o

G

I -H CD CD O O

B ^ - - - -

W P O CO OCOOO

Eh 0) CD O

G

0

P

(1) Ή Ό Ό I -η o) <u r- ui cf oi in Η-ΗΌΗ r- r- ifl H i*) m 0 5 0 p S 8· § is

Λ G > G

5 H 0 d) 01 dP ü

G

1 0)

H P

G 0 5 ·Ρ •P Ό Ό ,Ω·πα)<ϋ ^ r- u) n 'f co

P -P Ό H *1 r» OU CD 00 LD

G 5 Op p

Λ ft G P

0 G G -P

X G > G

0 H 0 £ ra <x> o

H o CM "CP G< G< CM

I U 0 ,G - - - - - 0) O Ό CM cm CM m ld lo o ö C mm mmcMm

•p - G

ft P Λ

i-l 3G 'ffco t^rnCMLO

Φ ~ 3 Λ G -- - - -

M 0 +J t-ι CD Γ- O CO CM LD

di-PGG mm mmcMm P S P G P 0 G 0 ft PI G,GS· σι r- in r- σι H >-P0W -- ---- cq O-P0 cor- ra ra oi ui

<j ölft P CM CM CM CM H CM

tl G >1 0

P Λ H

p G · · ·

0 5 ë cMm CMLomcM GG

^ OM * ·*. * * * * «Η ·Η

a 00 coco co co cD CD ES

0 PG mm mmmm co [-· - m τη *. —

• - CM x-iOCOO *h CM

GP CO *“1 ^""i O P P O ..

GO (Ji CM p CM p p +1+1 > 5 o # G’ σι tJI β - -

ö o - CD CD

pü-PG- co ui o in g* o m ^p

PO -P GO lOO CTl CD p O

!0 ip 0 CD P Ή P ....

-P -P — —

5 G -P

G ft > WH

0 ft -P WW

5 Q 5 - g< σι cm σι t-* o , . . , OIO O 1D G< O O CM O +1+1 ftPIG m cm cm rHCM p |>c|x· w ·*·.✓

| Ό · O O O O in LD

ÖrH Tl G CM CM CO CM P P TS

<ti 0 <D ·Μ «rl ^ «“* ·Γ“ΐ > Ό -P +> S Tj •PM 5 ö> P ft ft ^

C< <u 0 GO

•P ft H O G ΤΊ

§0 G O ,¾ G* 00 CO 1“- 5 -P

H+Jcn'-- - - -- ® 5 0GGQO p CD CD +) O O I ft

ppiOHE pp in H ffl CO -p G

G G

___________________________________________ 5 P

•p tn

*6 5 Λ I

i c a a w a a ph

ώ GO

2 Λ G

I OOG

X 000P0 X G

i tn pp pftpa 05 x ftdi a a ft « a 0 ft r? 2 O G 0 3 UI 2

X > H 0 -P A

___________ g si_w a < I

800 37 67 S ~ - 9 -

Uit de gegevens in deze tabel blijkt, dat door de uitwisseling van His tegen een alifatisch aminozuur met rechte of vertakte koolstofketen in het TRH-molecuul het ophouden wordt veroorzaakt of tenminste een aanzienlijke reductie wordt 5 verkregen van de afscheiding van TSH, waarbij bijv. de door haloperidol veroorzaakte catalepsie 2-7 maal sterker wordt. Enkele nieuwe TRH-analogen vertonen ook een aanzienlijke po-tentiëring van de locomotorische activiteit, resp. een redu-cering van de hexobarbital-, resp. ethanol-slaaptijd. Het is 10 ook opmerkelijk, dat de His-bevattende nieuwe TRH-analogen weliswaar ca. 70 % van de hormoonwerking behouden, doch gelijktijdig een aanzienlijke werking vertonen op het centrale zenuwstelsel.

De volgens de uitvinding te bereiden nieuwe tri-15 peptiden, alsmede ook hun farmaceutisch toepasbare zouten, resp. complexen, kunnen in de vorm van gebruikelijke genees-middelpreparaten in de therapie worden toegepast. Deze genees-middelpreparaten bevatten de grondstoffen volgens de uitvinding te samen met anorganische of organische dragerstoffen, 20 die geschikt zijn voor enterale of parenterale toediening. De geneesmiddelpreparaten kunnen bijv. worden bereid in de vorm van vaste lyofilisaten, waarbij met de peptiden niet reagerende verbindingen, bijv. koolhydraten, als dragerstoffen kunnen worden gebruikt; ze kunnen echter ook worden bereid in de vorm 25 van geconcentreerde of verdunde suspensies of emulsies of als tabletten of injectiepreparaten.

De praktische uitvoering van de werking volgens de uitvinding, resp. de chemische bereiding van de nieuwe TRH-analogen volgens de uitvinding, wordt nader toegelicht door de 30 onderstaande voorbeelden. De in deze voorbeelden gebruikte afkortingen komen overeen met de in de peptidechemie gebruikelijke conventionele afkortingen, verg.: J. Biol. Chem. 247, 977 (1972). Bovendien worden nog de volgende verdere afkortingen gebruikt: 35 Ada L-2-aminodecaanzuur

Abu L-2-aminoboterzuur Cha L-cyclohexylalanine Pip L-pipecolinezuur 800 37 67 - 10 - HPro L-homoproline DAE 2-dimethylaminoethyl-DCC dicyclohexyl-carbodiimide PFPOH pentafluorfenol 5 DCU dicyclohexylureum DMFA dimethylformamide.

De in de voorbeelden aangegeven smeltpunten van de verbindingen werden bepaald met een smeltpuntapparaat volgens dr. Tottoli (Büchi). De optische rotatiewaarden werden 10 bepaald met behulp van een polarimeter van het type Perkin-Elmer 141. In de dunne-laagchromatografische onderzoekingen, resp. scheidingen werden "Kieselgel G volgens Stahl" (E.

Merck, Darmstadt) silicagelplaten gebruikt. Voor de ontwikkeling van de chromatogrammen werden de volgende oplosmiddel-15 mengsels toegepast: (1) chloroform : methanol 9 : 1 (2) ethylacetaat : (pyridine:azijnzuur:water 20 : 6 ï 11) 9 : 1 (3) ethylacetaat : (pyridine:azijnzuur:water 20 : 6 : 11) 8 : 2 20 (4) ethylacetaat : (pyridine:azijnzuur:water 20 : 6 : 11) 3 : 2.

Voor de ontwikkeling van de vlekken werd ninhydri-ne-oplossing gebruikt; na de bespuiting werden de platen ongeveer 5 min. lang bij 105°C gedroogd. Dan werden de chromato-25 grammen in chloorgas gelegd en na beluchting ontwikkeld met o-tolidine-kaliumjodide-oplossing.

Voor de zuilchromatografische zuivering van de produkten werd "Kieselgel G" (E. Merck) silicagel gebruikt met een deeltjesgrootte van 0,062-0,2 mm.

30 Voor het indampen van de oplossingen in vacuum werd een "Rotavapor R" (Büchi) vacuumindamper toegepast, het indampen werd uitgevoerd bij een temperatuur die de 50°C niet overschreed.

De pentafluorfenylester van BOC-beschermde amino-35 zuren werd vervaardigd volgens de methode van Kisfaludy en medew. (Ann. 1973, 1421).

De nadere bijzonderheden van de bereiding van de nieuwe TRH-analogen volgens de onderhavige uitvinding zijn 800 37 67 - 11 - toegelicnt door de onderstaande uitvoeringsvoorbeelden.

VOORBEELD I

L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide.

Stap 1: 5 L-norleucyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 40 ml DMFA werd 2,28 g (10 mmol.) H-Pro-NH2 en 3,97 g (10 mmol.) BOC-Nle-OPFP /verg. Kisfaludy en medew., Hoppe-Sayler's Z, Physiol. Chemie 359, 887 (1978/7 opgelost en na 5 min. staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als 10 residu verkregen olie werd opgelost in 50 ml chloroform, de oplossing werd driemaal uitgeschud met steeds 10 ml N zout-zuuroplossing, dan driemaal steeds met 10 ml N natriumwater-stofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het ver-15 dampingsresidu werd opgelost in 5 ml ethylacetaat en aan de oplossing werd 10 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat toegevoegd. Na 30 min. werd het reactiemengsel met ether verdund, het ontstane neerslag afgefiltreerd en in vacuum boven watervrij natriumhydroxide gedroogd. Op deze wijze werd 2,48 g 20 H-Nle-Pro-NH2.HC1 verkregen (94 % van de theorie, berekend op BOC-Nle-OPFP), = 0,20.

Stap 2: benzyloxyearbonyl-L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide.

In 10 ml DMFA werd 1,05 g (4 mmol.) H-Nle-Pro-25 NH2.HC1 opgelost en aan de oplossing werd onder ijskoeling en roeren 0,56 ml (4 mmol.) triethylamine en 1,89 g (4,4 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 5 min. roeren werd nog eens 0,56 ml (4 mmol.) triethylamine toegevoegd; het mengsel werd dan 20 min. lang verder geroerd en dan in vacuum drooggedampt. Het 30 verdampingsresidu werd opgelost in 40 ml chloroform, de oplossing uitgeschud tweemaal met steeds 10 ml N zoutzuur, driemaal met steeds 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, dan werd gedroogd boven watervrij natriumsulfaat en in vacuum ingedampt. De als residu ver-35 kregen olie werd onder ether tot kristalliseren gebracht en het op deze wijze verkregen ruwe produkt (1,52 g) werd her-kristalliseerd uit 8 ml ethylacetaat. Er werd 1,36 g Z-Glp-Nle-Pro-NH2 verkregen (72 % van de theorie); smp. = 146-148°C; «003767 - 12 - = 0,32; ^ α_/β5 = -79,8° (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C24H32°6N4 (m°l*9ew· 472,55): berekend: C 61,00 %, H 6,83 %, N 11,86 %; gevonden: C 60,90 %, H 7,04 %, N 11,87 %.

5 Stap 3: L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide.

In 25 ml methanol werd 1,16 g (2,46 mmol.) Z-Glp-Nle-Pro-N^ opgelost, aan de oplossing werd 0,2 g 10 % palladium op actieve kool als katalysator toegevoegd en 39 min.

10 lang werd waterstofgas door de oplossing geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd en het filtraat ingedampt. Het vaste amorfe residu werd met ether verwreven en afgefiltreerd. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (0,72 g) werd in water opgelost, de oplossing werd met actieve kool geklaard en 15 de waterheldere oplossing werd gelyofiliseerd. Er werd dan 0,66 g Glp-Nle-Pro-NH2 verkregen (79,5 % van de theorie); = 0,43; = -77,1° (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 0,96 (1,0), Nle 1,00 (1,0), Pro 1,00 (1,0) .

20 VOORBEELD II

L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide.

Stap 1: L-norvalyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 40 ml DMFA werd 2,2 g (20 mmol.) H-Pro-NH2 en 25 3,83 g (10 mmol.) BOC-Nva-OPFP ^verg. L.Kisfaludy en medew., Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chemie 395, 887 (19782.7 opgelost, de oplossing liet men 5 min. staan en dan werd in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 50 ml chloroform, de oplossing werd uitgeschud driemaal steeds met 30 10 ml N zoutzuur, driemaal met steeds 10 ml N natriumwater-stofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, met watervrij natriumsulfaat gedroogd en ingedampt. Het verdamp ingsresidu werd in 5 ml ethylacetaat opgelost en hieraan werd 10 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat toegevoegd.

35 Na 30 min. werd het reactiemengsel met ether verdund, het verkregen neerslag afgefiltreerd en in vacuum boven watervrij natriumhydroxide gedroogd. Er werd op deze wijze 1,83 g H-Nva-Pro-NH2.HC1 verkregen (73 % van de op BOC-Nva-OPFP bere 800 37 67 - 13 - kende theoretische opbrengst); R^= 0,10.

Stap 2;

Benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide.

In 15 ml DMFA werd 1,25 g (5 mmol.) H-Nva-Pro-5 NH2.HC1 opgeslibd en hieraan werd onder ijskoeling en roeren 0,7 ml (5 mmol.) triethylamine en 2,15 g (5 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 0,7 ml (5 mmol.) triethylamine toegevoegd, net mengsel werd nog eens 20 min. geroerd en dan in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd opge-10 lost in 50 ml chloroform, de oplossing werd uitgeschud driemaal met steeds 10 ml N zoutzuur, driemaal met steeds 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd onder ether tot kris-15 talliseren gebracht en het op deze wijze verkregen ruwe pro-dukt (1,80 g) herkristalliseerd uit een mengsel van ethanol en ether. Er werd 1,66 g Z-Glp-Nva-Pro-NH2 verkregen (72 % van de theorie); smp. = 166-167°C; R^3) = 0,29; = -87,5° (c = 1, in azijnzuur).

20 Analyse voor C23H30°6N4 (m°l*9ew* 458,52): berekend: C 60,25 %, H 6,59 %, N 12,22 %; gevonden: C 60,08 %, H 6,70 %, N 12,15 %.

Stap 3: L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide.

25 In 30 ml methanol werd 1,42 g (3,1 mmol.) Z-Glp-

Nva-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,2 g 10 % palladium op actieve kool als katalysator toegevoegd en 30 min. lang werd waterstofgas door de oplossing geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd en het filtraat ingedampt. Het 30 vaste amorfe residu werd met ether verwreven en afgescheiden. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt werd in water opgelost, de oplossing werd met actieve kool geklaard en de waterheldere oplossing gelyofiliseerd. Er werd 0,95 g Glp-Nva-

Pro-NH~ verkregen (94 % van de theorie); = 0,36; - -2s o r 35 i a./D = -87,0 (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 0,97 (1,0), Nva 1,09 (1,0),

Pro 1,00 (1,0).

VOORBEELD III

800 3767 - 14 - L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide.

Stap 1: L-prolyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 40 ml DMFA werd 2,28 g (10 mmol.) H-Pro-NH2 5 ën 3,81 g (10 mmol.) BOOPro-OPFP opgelost, de oplossing werd uitgeschud driemaal met steeds 10 ml N zoutzuur, dan eveneens driemaal met steeds 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het verdampingsresidu werd opge-10 lost in 5 ml ethylacetaat en er werd 10 ml 5 N zoutzuuroplos-sing in ethylacetaat aan toegevoegd. Na 30 min. werd het re-actiemengsel verdund met ether, het ontstane neerslag werd afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Op deze wijze werd 2,06 g H-Pro-NH2.HC1 verkregen 15 (83 % van de op BOC-Pro-OPFP berekende theoretische opbrengst); R^4) = 0,05.

Stap 2: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide.

In 10 ml DMFA werd 0,75 g (3 mmol.) H-Pro-Pro-20 NH2.HC1 opgeslibd en aan het mengsel werd onder ijskoeling en roeren 0,42 ml (3 mmol.) triethylamine en 1,35 g (3,15 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 0,42 ml (3 mmol.) triethylamine toegevoegd en na nog eens 10 min. roeren werd de ontstane dikke suspensie in vacuum ingedampt. Het 25 kristallijne verdampingsresidu werd met 8 ml ethanol verwreven en 3 uur in de koelkast genouden. Het verkregen neerslag werd dan afgefiltreerd en gedroogd. Op deze wijze werd 1,0 g Z-Glp-Pro-Pro-NH2 verkregen (73 % van de theorie); smp. = 247-248°C (ontleding); = 0,19; { “7^5 - ”82,8° (c = 1, in azijn- 30 zuur).

Analyse voor C23H28°6N4 456,50): berekend: C 60,52 %, H 6,18 %, N 12,27 %; gevonden: C 60,03 %, H 6,20 %, N 12,20 %.

Stap 3: 35 L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide.

In 50 ml azijnzuur werd 1,0 g (2,2 mmol.) Z-Glp-Pro-Pro-NH2 opgelost, hieraan werd 0,2 g 10 % palladium-actie-ve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd water- 800 3 7 67 - 15 - stofgas in het mengsel geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd, het filtraat ingedampt en het verdampingsresidu met ether verwreven. Het op deze wijze verkregen amorfe ruwe pro-dukt (0,60 g) werd in water opgelost, de oplossing werd met 5 actieve kool geklaard en de waterheldere oplossing gelyofili-seerd. Er werd 0,50 g Glp-Pro-Pro-NH2 verkregen (70 % van de theorie); = 0,10; ~ -223,1° (c = 1, in azijnzuur).

VOORBEELD IV

L-pyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamide.

10 Stap 1: L-valyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 10 ml DMFA werd 0,49 g (4,2 mmol.) H-Pro-NH2 en 0,82 g (2,14 mmol.) BOC-Val-OPFP opgelost en na 30 min. staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als verdam-15 pingsresidu verkregen olie werd in 10 ml chloroform opgelost, de oplossing werd uitgeschud tweemaal met steeds 3 ml N zoutzuur, driemaal met steeds 3 ml N natriumwaterstofcarbonaatop-lossing en tenslotte eenmaal met 3 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het verdampingsresidu 20 werd in 3 ml ethylacetaat opgelost en hieraan werd 3 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat toegevoegd. Na een uur staan werd het reactiemengsel met ether verdund, het neerslag afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Op deze wijze werd 0,51 g H-Val-Pro-NH2.HC1 verkregen 25 (95 % van de op BOC-VA1-OPFP berekende theoretische opbrengst); Rf4) = 0,10.

Stap 2: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamide.

In 10 ml DMFA werd 0,38 g (1,52 mmol.) H-Val-Pro-30 NH2·HC1 opgeslibd en hieraan werd onder ijskoeling en roeren 0,22 ml (1,52 mmol.) triethylamine en 0,69 g (1,6 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 10 min. werd nog eens 0,22 ml (1,52 mmol.) triethylamine toegevoegd en na een verdere 30 min. roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het verdam-35 pingsresidu werd opgelóst in 15 ml chloroform. De oplossing werd tweemaal uitgeschud met steeds 5 ml N zoutzuur, driemaal met steeds 5 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 5 ml water, gedroogd met watervrij natrium- 80037 67 - 16 - sulfaat en in vacuum ingedampt. Het olie-achtige residu werd met ether tot kristalliseren gebracht; er werd op deze wijze 0,54 g Z-Glp-Val-Pro-Kra^ verkregen (77 % van de theorie); smp. 116-118°C; R^3) = 0,30; ?25 = -100,5° (c = 1, in 5 azijnzuur).

Stap 3: L-pyroglutamyl-L-valyl-L-prolinamide.

In 300 ml water werd 9,65 g (21,2 mmol.) Z-Glp-Val-Pro-JSffi^ opgelost en na toevoeging van 2 g 10 % palladium 10 op actieve kool als katalysator werd waterstofgas 5 uur lang door de oplossing geleid. Dan werd de katalysator afgefiltreerd en het filtraat ingedampt. De als residu verkregen olie werd in ethanol opgelost, de oplossing ingedampt en deze bewerking werd nog tweemaal herhaald. Het tenslotte verkregen amorfe 15 vaste residu werd met ether verwreven; er werd op deze wijze 4,47 g Glp-Val-Pro-NH2 verkregen (65 % van de theorie); = 0,34; ( a_7^ - -104,9° (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 1,03 (1,01), Val 1,00 (1,0), Pro 0,94 (1,0).

20 VOORBEELD V

L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamide.

Stap 1: benzyloxycarbonyl-L-isoleucyl-L-prolinamide.

In 250 ml DMFA werd 51,4 g (0,1 mol.) Z-Ile-OPFP 25 en 12,5 g (0,11 mol.) H-Pro-N^ opgelost en hieraan werd 14,0 ml (0,1 mol.) triethylamine toegevoegd. Het reactiemeng-sel liet men gedurende de nacht staan en de volgende dag werd in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 500 ml chloroform, de oplossing werd uitgeschud 30 achter elkaar tweemaal met telkens 100 ml N zoutzuur, tweemaal met 100 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en eenmaal met 100 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het olie-achtige residu werd met een mengsel van 100 ml ether en 100 ml n-hexaan tot kristalliseren gebracht. Het op 35 deze wijze verkregen ruwe produkt (31,7 g) werd uit een mengsel van 60 ml ethylacetaat en 60 ml n-hexaan herkristalli-seerd. Er werd 30,32 g Z-Ile-Pro-NH^ verkregen (84 % van de theorie); smp. = 127-128°C; R^2^ = 0,54.

800 37 67 - 17 -

Stap 2: L-isoleucyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 470 ral methanol werd 24,0 g (66,5 mraol.) Z-Ile-Pro-NH2 opgelost, waarna 30 ml 2,4 N methanolische zoutzuurop-5 lossing en 4 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator werd toegevoegd en waterstofgas een uur lang door het mengsel werd geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd en het fil-traat ingedampt. Het verdampingsresidu werd met ether verwre-ven en het op deze wijze verkregen ruwe produkt (20 g) her-10 kristalliseerd uit een mengsel van methanol en ether. Op deze wijze werd 16,05 g H-Ile-Pro-NH^.HC1 verkregen (81 % van de theorie); smp. = 135-140°C; R^' = 0,15.

Stap 3: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamide.

15 In 20 ml DMFA werd 0,90 g (3,5 mmol.) H-Ile-Pro- N^.HCl opgeslibd en daaraan werd onder ijskoeling en roeren 0. 49 ml (3,5 mmol.) triethylamine en 1,57 g (3,7 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 0,49 ml (3,5 mmol.) triethylamine toegevoegd en na een verdere 20 min. roeren werd 20 het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd in 30 ml chloroform opgelost, de oplossing werd achtereenvolgens uitgeschud driemaal met steeds 7 ml N zoutzuur, eveneens driemaal met steeds 7 ml N natriumwaterstofcarbonaat-oplossing en tenslotte eenmaal met 7 ml water, gedroogd met 25 watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd meerdere malen met ether behandeld en de ether werd gedecanteerd? tenslotte werd het ruwe produkt onder ether tot kristalliseren gebracht, afgescheiden, in ethylacetaat opgelost en door toevoeging van ether weer neergeslagen. Op deze 30 wijze werd 1,18 g Z-Glp-Ile-Pro-N^ verkregen (71,5 % van de theorie) ? smp. = 87-89°C; = 0,36; (_ α_7^5 = -91,4° (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C24H32^6N4 (ra°l*9ew* 427,55): berekend: C 61,00 %, H 6,83 %, N 11,6 %; 35 gevonden: C 59,19 %, H 6,88 %, N 11,16 %.

Stap 4: L-pyroglutamyl-L-isoleucyl-L-prolinamide.

In 100 ml methanol werd 4,72 g (10 mmol) Z-Glp- 800 3 7 67 - 18 -

Ile-Pro-NH2 opgelost, er werd 1 g 10 % palladium op actieve kool als katalysator aan toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd, het filtraat werd ingedampt en het residu werd 5 met ether verwreven. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (3,22 g) werd in water opgelost en de oplossing werd met actieve kool geklaard. De waterheldere oplossing werd gelyofi-liseerd; er werd 3,03 g Glp-Ile-Pro-NH2 verkregen (98 % van de theorie); = 0,45; /"a.7^5 = -100,7° (c = 1, in azijnzuur).

10 Aminozuuranalyse: Glu 0,95 (1,0), Ile 1,00 (1,0),

Pro 1,02 (1,0) .

VOORBEELD VI

L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinainide.

Stap 1: 15 tert-butyloxycarbonyl-L-a-aminoboterzuur-pentafluorfenylester.

In 60 ml ether werd 7,7 g (20 mmol.) BOC-Abu-OH.DCHA opgeslibd, hieraan werd 10 ml 2 N zwavelzuur toegevoegd en het mengsel werd geschud tot oplossen van de gesuspendeerde stof. Dan werd de etherfase afgescheiden, uitgeschud met 20 ml 20 2 N zwavelzuur en aansluitend met 20 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie (4,14 g) en 3,7 g (20 mmol.) PFPOH werden opgelost in 25 ml ethylacetaat, de oplossing werd tot 5°C afgekoeld en er werd onder roeren 3,92 g (19 mmol.) DCC toegevoegd. Het reac-25 tiemengsel werd een uur lang in een ijsbad geroerd, dan werd het DCU afgefiltreerd en het filtraat ingedampt. De als residu verkregen olie werd in n-hexaan opgelost en de oplossing werd een uur lang in de koelkast bewaard. Het alsnog afgescheiden DCU werd afgefiltreerd en het filtraat werd ingedampt tot op 30 een volume van 20 ml. Na het begin van de kristalafscheiding werd de suspensie in de koelkast gelegd en daar gedurende de nacht gelaten; de volgende dag werden de kristallen door filtreren afgescheiden. Er werd op deze wijze 5,57 g BOC-ABu-OPFP verkregen (76 % van de theorie); smp. = 83-84°C; rI^ = 35 0,86; ^ q_/^ ~ “32,8 (c = 1, in ethylacetaat).

Analyse voor C^H^C^NF^ (mol.gew. 369,29): berekend: C 48,79 %, H 4,37 %, N 3,79 %, F 25,72 % gevonden: C 48,55 %, H 4,28 %, N 3,70 %, F 25,44 %.

800 3 7 67 - 19 -

Stap 2: L-a- aminobutyry1-L-prolinamide-hydrochloride.

In. 60 ml DMFA werd 3,2 g (28 mmol.) H-Pro-NH2 en 5,16 g (14 mmol.) BOC-Abu-QPFP opgelost en na 5 min. laten 5 staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 100 ml chloroform opgelost, de oplossing werd uitgeschud met tweemaal 20 ml N zoutzuur en aansluitend met eveneens tweemaal 20 ml N natriumwaterstofcarbonaat-oplossing, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. 10 De als residu verkregen olie werd in 20 ml ethylacetaat opgelost en er werd 20 ml 6 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat aan toegevoegd. Na een uur werd het reactiemengsel met ether verdund, het verkregen neerslag werd afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Het op deze 15 wijze verkregen ruwe produkt (3,86 g) werd met 20 ml koud DMFA verwreven. Er werd op deze wijze 2,40 g H-Abu-Pro-NH2.HC1 verkregen (73 % van de op BOC-Abu-OPFP berekende theoretische opbrengst) ; = 0,10.

Stap 3: 20 benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinamicfe

In 30 ml DMFA werd 2,13 g (9 mmol.) H-Abu-Pro-NH^.HCl opgeslibd en onder ijskoeling en roeren werd hieraan 1,26 g (9 mmol.) triethylamine en 3,95 g (9,2 mmol.) Z-Glp-OPFP toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 1,26 ml (9 mmol.) 25 triethylamine toegevoegd en na 20 min. verder roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het kristallijne residu werd met 20 ml ethanol verwreven, gedurende de nacht in de koelkast gelaten en dan afgefiltreerd. Op deze wijze werd 3,30 g Z-Glp-Abu-Pro-NH^ verkregen (82 % van de theorie); 30 smp. = 175-176°C; R^3) = 0,28; L\7^ = -99,6° (c = 1, in azijnzuur).

Stap 4: L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinamide.

In 100 ml azijnzuur werd 2,67 g (6 mmol.) Z-Glp-35 Abu-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,5 g 10 % palla-dium-actieve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en het residu 800 3 7 67 - 20 - met ether verwreven. Het op deze wijze verkregen amorfe ruwe produkt (1,82 g) werd in water opgelost, de oplossing met actieve kool geklaard en de waterheldere oplossing gelyofili-seerd. Er werd 1,70 g Glp-Abu-Pro-NH2 verkregen (91 % van de 5 theorie); = 0,24; Z\7q5 = "102,5° (c = 1, in azijnzuur).

VOORBEELD VII

L-pyroglutamyl-L-a-aminodecanoyl-L-prolinamide.

Stap 1: L-a-aminodecanoyl-L-prolinamide-hydrochloride.

10 In 20 ml DMFA werd 1,37 g (12 mmol.) H-Pro-NH2 en 2,72 g (6 mmol.) BOC-Ada-OPFP opgelost en na 5 min. laten staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 50 ml chloroform opgelost, de oplossing uitgeschud driemaal met 10 ml N zoutzuur, dan eveneens drie-15 maal met 20 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte tweemaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natrium-sulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 3 ml ethylacetaat opgelost en aan de oplossing werd 5 ml 6 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat toegevoegd. Na 1 uur staan 20 werd het reactiemengsel met ether verdund, het ontstane neerslag werd afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Op deze wijze werd 1,75 g H-Ada-Pro-NH2.HC1 verkregen (91 % van de op BOC-Ada-OPFP berekende theoretische (3) opbrengst); = 0,11.

25 Stap 2: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-a-aminodecanoyl-L-prolin-amide.

In 30 ml DMFA werd 1,75 g (5,5 mmol.) H.Ada-Pro-NH2.HC1 en 2,58 g (6 mmol.) Z-Glp-OPFP opgelost en aan de op-30 lossing werd 0,77 ml (5,5 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 0,77 g (5,5 mmol.) triethylamine toegevoegd en na 20 min. verder roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd opgelost in 50 ml chloroform, de oplossing werd uitgeschud driemaal met 20 ml 35 n zoutzuuroplossing, eveneens driemaal met N natriumwaterstof-carbonaatoplossing en tenslotte tweemaal met 20 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen opschuimende olie werd met ether verwreven, de ver- 800 3767 - 21 - kregen gelachtige suspensie liet men 2 uur in de koelkast staan en werd het neerslag afgefiltreerd en gedroogd. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (2,61 g) werd herkristalli-seerd uit 20 ml ethylacetaat. Er werd 2,45 g Z-Glp-Ada-Pro-NH2 5 verkregen (84 % van de theorie); smp. = 103-105°C; rP^ = 0,19; “ -25 o ^ = -63,7 (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C28H40°6N4 (mol*9ew* 528,65): berekend: C 63,62 %, H 7,63 %, N 10,60 %; gevonden: C 63,24 %, H 7,81 %, N 10,57 %.

10 Stap 3: L-pyfoglutamyl-L-a-aminodecanoyl - L-prolinamide.

In 40 ml azijnzuur werd 1,9 g (3,6 mmol.) Z-Glp-Ada-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,2 g 10 % palladium- actieve kool als katalysator toegevoegd en 1,5 uur lang 15 werd waterstofgas door het mengsel geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd, het filtraat ingedampt en het verdampings-residu in water opgelost. De waterige oplossing werd met actieve kool geklaard en ingedampt. De als residu verkregen olie ( werd in 30 ml chloroform opgelost, de oplossing gedroogd met 20 watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het opschuimende, amorfe, vaste residu werd met ether verwreven, afgefiltreerd en gedroogd. Op deze wijze werd 1,20 g Glp-Ada-Pro-NH2 verkregen (82 % van de theorie); = 0,55; l = -66,2° (c = 1, in azijnzuur).

25 VOORBEELD VIII

L-pyroglutamyl-L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide. Stap 1: tert-butyloxycarbonyl-L-cyclohexylananine-pentafluorfenyl- ester.

30 In 80 ml ether werd 9,04 g (20 mmol.) BOC-Cha- OH.DCHA opgeslibd en aan de suspensie werd 20 ml 2 N zwavelzuur toegevoegd. Het mengsel werd geschud tot oplossen van de vaste stof, dan werd de etherfase afgescheiden, gewassen met 20 ml 2 N zwavelzuur en aansluitend met 20 ml water, gedroogd 35 met natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie (5,7 g) werd opgelost in 30 ml ethylacetaat, hieraan werd 3,7 g (20 mmol.) PFPOH toegevoegd, het mengsel werd op ten hoogste 5°C afgekoeld en hieraan werd 4,12 g (20 mmol.) DCC toege- 800 3767 - 22 - voegd. Het reactiemengsel werd bij deze temperatuur een uur lang geroerd, dan werd het afgescheiden DCU afgefiltreerd, het filtraat ingedampt en de als residu verkregen olie in 30 ml n-hexaan opgelost. De oplossing werd een uur lang in de koel-5 kast gelaten, de daarbij nog afgescheiden DCU weer afgefiltreerd en het filtraat verdund met 70 ml n-hexaan. De verdunde oplossing werd vijfmaal uitgeschud met 40 ml N natriumwater-stofcarbonaatoplossing en aansluitend tweemaal met 40 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als 10 residu verkregen olie kristalliseerde bij staan. Er werd op deze wijze 8,48 g BOC-Cha-OPFP verkregen (97 % van de theorie); Smp. 75-77°C; R^X) = 0,88.

Analyse voor C20H24°4NF5 (mol*9ew* 437,41): berekend: C 54,92 %, H 5,53 %, N 3,20 %, F 21,72 % 15 gevonden: C 54,67 %, H 5,66 %, N 3,11 %, F 21,43 %.

Stap 2: L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide-hydrochloride.

In 40 ml DMFA werd 2,28 g (20 mmol.) H-Pro-NH2 en 4,37 g (10 mmol.) BO.C-Cha-OPFP opgelost en na 5 min. staan 20 werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 80 ml chloroform, de oplossing werd driemaal uitgschud met 20 ml N zoutzuur, eveneens driemaal met 20 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 20 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en 25 ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 8 ml ethyl-acetaat opgelost, er werd 10 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat aan toegevoegd en na een uur werd het reactiemengsel met ether verdund. Het afgescheiden neerslag werd af-gefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natrium-30 hydroxide. Op deze wijze werd 2,98 g H-Cha-Pro-NH2.HC1 verkregen (97 % van de op BOC-Cha-OPFP berekende theoretische opbrengst) ; = 0,33.

Stap 3: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-cyclohexylalanyl-prolin-35 amide.

In 25 ml DMFA werd 2,43 g (8 mmol.) H-Cha-Pro-NH2.HC1 en 3,60 g (8,4 mmol.) Z-Glp-OPFP opgelost en aan de oplossing werd 1,12 ml (8 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 800 3767 ♦ “· - 23 - 5 min. werd nog eens 1,12 ml (8 mmol.) triethylamine toegevoegd en na nog eens 20 min. roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd opgelost in 80 ml chloroform, de oplossing werd driemaal uitgeschud met 20 ml 5 N zoutzuur, eveneens driemaal met 20 ml N natriumwaterstofcar-bonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 20 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd met ether tot kristalliseren gebracht; het op deze wijze verkregen ruwe produkt (3,88 g) werd uit 30 ml 10 ethylacetaat herkristalliseerd. Er werd 3,32 g Z-Glp-Cha-Pro-NH9 verkregen (81 % van de theorie); smp. = 165-166°C; ^ = 0,17; = -67,3° (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C27H36°öN4 (mol.gew. 512,61); berekend: C 63,26 %, H 7,08 %, N 10,93 %; 15 gevonden: C 63,15 %, H 7,04 %, N 10,91 %.

Stap 4: L-pyroglutamyl-L-cyclohexylalanyl-L-prolinamide.

In 60 ml ethanol werd 3,07 g (6 mmol.) Z-Glp-Cha-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,6 g 10 % palladium op 20 actieve kool als katalysator toegevoegd en 2 uur lang werd waterstofgas door de oplossing geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en het residu met ether verwreven. Op deze wijze werd 2,15 g amorf, vast Glp-Cha-Pro-NH9 verkregen (95 % van de theorie); rI^ = 0,50; 25 £q„7p = -70,9° (c = 1, in azijnzuur).

VOORBEELD IX

L-pyroglutamyl-L-threonyl-L-prolinamide.

Stap 1: O-benzyl-L-threonyl-L-prolinamide-hydrochloride.

30 In 20 ml DMFA werd 1,43 g (12,5 mmol.) H-Pro-NH2 en 2,98 g (6,27 mmol.) BOC-Thr(Bzl)-OPFP opgelost en na 5 min. staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 30 ml chloroform opgelost, de oplossing werd tweemaal uitgeschud met 10 ml N zoutzuur, aansluitend 35 driemaal met 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als verdampingsresidu verkregen olie werd opgelost in 4 ml ethylacetaat en hieraan werd 5 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylace- 800 3 7 67 - 24 - taat toegevoegd. Na een uur staan werd het reactiemengsel verdund met ether, werd het ontstane neerslag afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Op deze wijze werd 2,05 g H-Thr(Bzl)-Pro-NH9.HC1 verkregen (95 % van (4) Δ 5 de theorie); 7 = 0,40.

Stap 2: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-O-benzyl-threonyl-L- prolinamide.

In 21 ml DMFA werd 2,05 g (6 mmol.) H-Thr(Bzl)-10 Pro-NH2.HCl en 2,96 g (6,27 mmol.) Z-Glp-OPFP opgelost, aan de oplossing werd druppelsgewijs 0,84 ml (6 mmol.) triethylamine toegevoegd en na 5 min. staan werd nog eens 0,84 ml (6 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 20 min. roeren werd het reactie-mengsel in vacuum ingedampt, het residu in 50 ml chloroform 15 opgelost, de oplossing tweemaal met 10 ml N zoutzuur uitgeschud en driemaal met 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplos-sing, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd met ether behandeld en afgekoeld, waarbij het produkt in amorfe toestand stolde. Het op 20 deze wijze verkregen ruwe produkt (2,76 g) werd in ethylace-taat opgelost en met actieve kool geklaard. Na het affiltreren werd het filtraat ingedampt en werd het vaste, amorfe, opschuimende residu met ether verwreven. Er werd 2,47 g Z-Glp-Thr(Bzl) - Pro-NH2 verkregen (75 % van de theorie).

25 Stap 3; L-pyroglutamyl-L-threonyl-L-prolinamide.

In 40 ml azijnzuur werd 2,04 g (3,7 mmol.) Z-Glp-Thr(Bzl)-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,4 g 10 % palladium op actieve kool als katalysator toegevoegd en werd 30 gedurende 4 uur waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en het residu met ether verwreven. Het op deze wijze verkregen amorfe ruwe produkt (1,31 g) werd op een 30 g silicagel-bevattende zuil (deeltjesgrootte 0,063-0,2 mm) gebracht en met 35 het oplosmiddelmengsel (3) geëlueerd. De eluaatfracties, die het zuivere produkt bevatten, werden herenigd en ingedampt en het als residu verkregen ruwe produkt werd met ether behandeld. Er werd 0,72 g Glp-Thr-Pro-NH2 verkregen (59,5 % van de 800 3 7 67 - 25 - theorie)? = 0,16? / α.7^ = -90,0° (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 1,00 (1,0), Thr 0,99 (1,0), Pro 1,03 (1,0) .

VOORBEELD X

5 L-pyroglutamyl-O-tert-butyl-L-seryl-L-prolinamide.

Stap 1: O-tert-butyl-L-seryl-L-prolinamide-hemioxalaat.

In 120 ml DMFA werd 8,0 g (70 mmol.) H-Pro-NEL en 16,0 g (34,7 mmol.) Z-Ser( Bu)-OPFP opgelost en de oplossing 10 werd na 5 min. staan in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 300 ml chloroform, de oplossing werd uitgeschud driemaal met 80 ml N zoutzuur, eveneens driemaal met 80 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 80 ml water, gedroogd met watervrij na-15 triumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie (18 g) en 4,37 g (34,7 mmol.) oxaalzuurdihydraat werden opgelost in 300 ml methanol, aan de oplossing werd 3 g 10 % palladium op actieve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van 20 de katalysator werd het filtraat ingedampt, het residu werd met ethylacetaat verwreven en in vacuum gedroogd. Op deze t wijze werd 10,8 g H-Ser( Bu)-Pro-NH2.(COOH)2 verkregen in de vorm van een amorfe, hygroscopische stof (90 % van de op Z- t (4)

Ser( Bu)-0PFP berekende theoretische opbrengst)? = 0,22.

25 Stap 2: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-O-tert-butyl-L-seryl-L- prolinamide.

In 80 ml DMFA werd 6,43 g (18,5 mmol.) H-Ser-(Su)-Pro-NH2.(COOH)2 en 7,95 g (18,5 mmol.) Z-Glp-OPFP opge-30 lost en aan de oplossing werd 5,18 ml (37 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 5 min. staan werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt en het kristallijne residu met ether verwreven. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (9,53 g) werd herkris-talliseerd uit 120 ml methanol. Er werd 7,70 g Z-Glp-Ser-35 (fcBu)-Pro-NH2 verkregen (83 % van de theorie)? smp. = 226-229°C? = 0,40? [ o_7q^ = 71,6° (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C25H34°7N4 (mol.gew. 502,57): berekend: C 59,75 %, H 6,82 %, N 11,15 S? 8003767 - 26 - gevonden: C 59,55 %, H 6,95 %, N 11,09 %.

Stap 3: L-pyroglutamyl-O-tert-butyl-L-seryl-L-prolinamide.

In 160 ml methanol werd 4,02 g (8 mmol.) Z-Glp-5 Ser^Bu)-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,8 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en 30 min. lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt. De als residu verkregen olie kristalliseerde onder ether; de kristal-10 len werden afgefiltreerd en gedroogd. Op deze wijze werd 2,50 g Glp-Ser^Bu)-Pro-NH2 verkregen (85 % van de theorie); smp. = 186-187°C; R^4) = 0,45; faj^5 = -60,8° (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 1,03 (1,0), Ser 1,00 (1,9), 15 Pro 1,00 (1,0) .

Analyse voor (mol.gew. 368,44) : berekend: C 55,42 %, H 7,66 %, N 15,21 %; gevonden: C 55,07 %, H 7,61 %, N 14,94 %.

VOORBEELD XI

20 L-pyroglutamyl-D-leucyl-L-prolinamide.

Stap 1: tert-butyloxycarbonyl-D-leucine-pentafluorfenylester.

In 50 ml ethylacetaat werd 4,62 g (20 mmol.) BOC-D-Leu-OH en 4,23 g (22 mmol.) PFPOH opgelost en aan de oplos-25 sing werd onder ijskoeling en roeren 4,12 g (20 mmol.) DCC

toegevoegd. Het reactiemengsel werd een uur lang in het ijsbad geroerd, dan werd het afgescheiden dicyclohexylureum afgefiltreerd en het filtraat werd ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 100 ml n-hexaan opgelost, de oplossing werd een 30 uur lang in de koelkast gelaten en het alsnog neergeslagen dicyclohexylureum werd weer afgefiltreerd. Het filtraat werd uitgeschud vijfmaal met 50 ml N natriumwaterstofcarbonaatop-lossing en tweemaal met 50 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie 35 kristalliseerde gedurende de nacht. Op deze wijze werd 7,0 g BOC-D-Leu-OPFP (88 % van de theorie) verkregen; smp. =53-55°C; R^ = -31,7° (c = 1, in ethylacetaat).

Analyse voor C^^qO^NF^ (mol.gew. 397,35): 800 37 67 - 27 - berekendï C 51,39 %, H 5,07 %, N 3,53 %, F 23,91 % gevonden: C 51,51 %, H 4,68 %, N 3,66 %, F 23,65 %. Stap 2: D-leucyl-L-prolinamide-hydrochloride.

5 In 60 ml DMFA werd 3,42 g (30 mmol.) H-Pro-N^ en 60,0 g (15 mmol.) BOC-D-Leu-OPFP opgelost en na 5 min. staan werd de oplossing in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd in 100 ml chloroform opgelost, de oplossing werd tweemaal met 20 ml N zoutzuuroplossing uitgeschud, dan driemaal met 20 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 20 ml water, gedroogd boven watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 10 ml ethylacetaat, aan de oplossing werd 15 ml 4 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat toegevoegd; na een uur werd het reactie-15 mengsel met ether verdund, het neerslag afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Op deze wijze werd 3,66 g H-D-Leu-Pro-KTCL,.HC1 verkregen (92,5 % van de Δ (4) op BOC-D-Leu-OPFP berekende theoretische oporengst); - 0,26.

20 Stap 3: benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-D-Leucyl-L-prolinamide.

In 50 ml DMFA werd 3,66 g (13,9 mmol.) H-D-Leu-Pro-NH2.HCl en 6,43 g (15 mmol.) Z-Glp-OPFP opgelost en aan de oplossing werd onder ijskoeling en roeren 1,95 ml (13,9 25 mmol.) triethylamine toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 5 min. geroerd en dan werd nog eens 1,95 ml (13,9 mmol.) triethylamine toegevoegd; na een verder 20 min. roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd opgelost in 120 ml chloroform, de oplossing werd driemaal uit-30 geschud met 30 ml N zoutzuuroplossing, eveneens driemaal met 30 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 30 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd door behandeling met ether tot kristalliseren gebracht. Het op deze wijze ver-35 kregen ruwe produkt (6 g) werd uit 30 ml ethanol herkristalli-seerd. Er werd 5,48 g Z-Glp-D-Leu-Pro-N^ verkregen (77 % van de theorie); smp. = 189-194°C; = 0,48; £ = -33,2° (c = 1, in azijnzuur).

800 3767 - 28 -

Stap 4: L-pyroglutamyl-D-leucyl-L-prolinamide.

In 150 ml methanol werd 3,78 g (8 mmol.) Z-Glp-D-Leu-Pro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,8 g 10 % 5 palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en werd het residu met etner verwreven. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (2,5 g) werd in water opgelost, met actieve kool 10 geklaard en de waterheldere oplossing werd gelyofiliseerd. Er werd 2,35 g Glp-D-Leu-Pro-NH_ verkregen (87 % van de theorie); (λ) — _o q ’ = 0,48; / a_/p = -83,3 (c = 1, in azijnzuur).

VOORBEELD XII

L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-ethylamide.

15 Stap 1: L-leucyl-L-proline-ethylamide-hydrochloride.

In 20 ml ethylacetaat werd 1,67 g (7,2 mmol.) H-Pro-NH-Et.(COOH)2 opgeslibd en aan de suspensie werd 2,0 ml (14,4 mmol.) triethylamine en 2,38 g (6 mmol.) BOC-Leu-OPFP 20 toegevoegd. Na 5 min. werd het reactiemengsel tweemaal uitgeschud met 5 ml N zoutzuuroplossing, dan driemaal met 5 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 5 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd met 10 ml 5 N zout-25 zuuroplossing in ethylacetaat behandeld, na 20 min. werd het mengsel met ether verdund, het neerslag werd afgefiltreerd en in vacuum gedroogd boven watervrij natriumhydroxide. Er werd op deze wijze 1,46 g hygroscopisch H-Leu-Pro-NH-Et.HCl verkregen (83 % van de op BOC-Leu-OPFP berekende theoretische op-30 brengst); R,j^ - 0,43.

Stap 2; benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-prolinamide.

In 15 ml DMFA werd 1,17 g (4 mmol.) H-Leu-Pro-NH-Et.HCl en 1,72 g (4 mmol.) Z-Glp-OPFP opgelost en aan de 35 oplossing werd 0,56 ml (4 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 5 min. werd nog eens 0,56 ml (4 mmol.) triethylamine toegevoegd en werd het mengsel in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 40 ml chloroform, de oplossing 800 3 7 67 - 29 - werd uitgeschud tweemaal met 10 ml N zoutzuur, driemaal met 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het residu werd met n-hexaan verwreven en afgefil-5 treerd. Op deze wijze werd 1,61 g amorf Z-Glp-Leu-Pro-NH-Et verkregen (80,5 % van de theorie); ^ = 0,50; q_7q = -89,0° (c = 1, in azijnzuur).

Stap 3: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-ethylamide.

10 In 30 ml water werd 1,07 g (2,14 mmol.) Z-Glp-

Leu-Pro-NH-Et opgelost, aan de oplossing werd 0,25 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en 1,5 uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt, het 15 olie-achtige residu opgelost in 20 ml chloroform, de oplossing gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het na opschuimen verstarrende residu werd verwreven met een mengsel van ether en n-hexaan. Op deze wijze werd 0,52 g Glp-Leu-Pro- (4) NH-Et verkregen (66 % van de theorie); R' = 0,57; - -25 o ·*- 20 ^ ayD = -94,5 (c = 1, in azijnzuur).

VOORBEELD XIII

L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-n-decylamide. Stap 1: henzyloxycarbonyl-L-proline-n-decylamide.

25 In 50 ml DMFA werd 5,0 g (20 mmol.) Z-Pro-OH opge lost, aan de oplossing werd 2,8 ml (20 mmol.) triethylamine toegevoegd en er werd afgekoeld op -10°C. Bij deze temperatuur werd onder roeren eerst 2,8 ml (21,5 mmol.) chloorkoolzuur-isobutylester en na 10 min. 4,4 ml (22 mmol.) n-decylamine 30 druppelsgewijs toegevoegd. Na de beëindiging van de toevoeging werd het mengsel gedurende 30 min. bij 0°C en aansluitend 2 uur bij kamertemperatuur, geroerd. De verkregen suspensie werd afgefiltreerd, het filtraat ingedampt en het residu opgelost in 100 ml ethylacetaat. De oplossing werd viermaal uitgeschud 35 met 50 ml N zoutzuuroplossing, tweemaal met 50 ml natriumwa-terstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 50 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als verdampingsresidu verkregen olie werd door behandeling met n- 800 37 67 - 30 - hexaan tot kristalliseren gebracht. Er werd op deze wijze 5,43 g Z-Pro-NH-C.qH21 verkregen (70 % van de theorie); smp. = 78-80°C; = 0,75.

Stap 2: 5 L-proline-n-decylamine-hemioxalaat.

In 100 ml methanol werd 5,0 g (12,9 mmol.) Z-Pro-NH-C10H21 en 2,02 g (16 mmol.) oxaalzuur-dihydraat opgelost, aan de oplossing werd 0,8 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en door het mengsel werd 2 uur lang 10 waterstofgas geleid. Na de beëindiging van de hydrering werd het reactiemengsel verwarmd, de katalysator werd door filtreren verwijderd en het filtraat ingedampt. Het kristallijne residu werd met ether verwreven en afgefiltreerd. Op deze wijze werd 3,9 g H-Pro-NH-C1nH9 .(COOH) verkregen (88 % van 15 de theorie); smp. = 152-154°C; ' = 0,16.

Stap 3: L-leucyl-L-proline-n-decylamide-hydrochloride.

In 30 ml DMFA werd 3,44 g (10 mmol.) H-Pro-NH-C10H21*(C00H)2 en mmol.) BOC-Leu-OPFP opgelost en aan 20 de oplossing werd 2,8 ml (20 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na 5 min. staan werd het reactiemengsel ingedampt en de als residu verkregen olie in 50 ml n-hexaan opgelost. De oplossing werd uitgeschud vijfmaal, met 30 ml N zoutzuuroplossing, driemaal met 30 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en 25 tenslotte eenmaal met 30 ml water en ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgelost in 10 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat, de oplossing werd gedurende 30 min. met rust gelaten en aansluitend ingedampt. Het in vacuum opschuimende amorfe residu werd met n-hexaan verwreven, afgefiltreerd en 30 in vacuum boven watervrij natriumhydroxide gedroogd. Op deze wijze werd 1,05 g H-Leu-Pro-NH-C^QH2^.HCl verkregen (60 % van de op BOC-Leu-OPFP berekende theoretische opbrengst);

Rf3) = 0,17.

v Stap 4: 35 benzyloxycarbonyl-L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-n-decyl-amide.

In 10 ml DMFA werd 1,03 g (2,55 mmol.) H-Leu-Pro-NH-C^H^.HCl opgelost en aan de oplossing werd 0,36 ml (2,55 800 37 67 - 31 - mmol.) triethylamine en 1,1 g (2,55 mmol.) Z-Glp-OPPP toege-voegd. Het mengsel werd gedurende 5 min. geroerd, dan werd nog eens 0,36 ml (2,55 mmol.) triethylamine toegevoegd en na 20 min. verder roeren werd het reactiemengsel in vacuum ingedampt. 5 Het residu werd in 20 ml chloroform opgelost, de oplossing werd vijfmaal uitgeschud met 10 ml N zoutzuuroplossing, driemaal met 10 ml N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natrium-sulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd onder 10 ether tot kristalliseren gebracht en afgefiltreerd. Er werd op deze wijze 1,22 g Z-Glp-Leu-Pro-NH-C^gH^ verkregen (78 % van de theorie); smp. = 108-109°C? = 0,50; L ~ “74,5° (c = 1, in azijnzuur).

Analyse voor C34H52°6N4 612,82): 15 berekend: C 66,64 %, H 8,55 %, N 9,14 %; gevonden: C 66,43 %, H 8,34 %, N 9,13 %.

Stap 5: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-n-decylamide.

In 30 ml methanol werd 1,22 g (2 mmol.) Z-Glp-Leu-20 Pro-NH-C^g^^ opgelost, aan de oplossing werd 0,2 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en 30 min. lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en de als residu verkregen olie door behandeling met n-hexaan tot 25 kristalliseren gebracht. Het op deze wijze verkregen ruwe pro-dukt (0,85 g) werd uit 4 ml ethylacetaat herkristalliseerd.

Op deze wijze werd 0,74 g Glp-Leu-Pro-NH-C.,qH21 verkregen (77 % van de theorie); smp. = 140-141°C; rI ^ = 0,76; L o_7q = -71,3° (c = 1, in azijnzuur).

30 Aminozuuranalyse: Glu 0,97 (1,0), Leu 1,00 (1,0),

Pro 1,01 (1,0) .

VOORBEELD XIV

L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-(2-dimethyl-aminoethyl) -ainide.

35 Stap 1: tert-butyloxycarbonyl-L-proline-(2-dimethylaminoethyl)-amide.

In 100 ml ether werd 11,43 g (30 mmol.) BOC-Pro-OPFP opgelost en aan de oplossing werd 6,54 ml (60 mmol.) 800 37 67 -32- Ν,Ν-dimethylaminoethylamine toegevoegd. De oplossing werd 10 min. lang met rust gelaten, dan werd ze driemaal uitgeschud met 30 ml water, de waterige fasen werden verenigd, door toevoeging van vast natriumcarbonaat ingesteld op pH = 10 en 5 viermaal geëxtraheerd met steeds 20 ml ethylacetaat. De afgescheiden organische fasen werden verenigd met de oorspronkelijke organische oplossing, werden gewassen met 20 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie kristalliseerde bij staan. Op deze wijze 10 werd 6,71 g BOC-Pro-NH-CH9-CH9-N(CH,)9 verkregen (78,5 % van de theorie); ' = 0,29.

Stap 2; L-leucyl-L-proline-(2-dimethylaminoethyl)-amide-dihydrochloride.

15 Gedurende 30 min. werd 6,71 g (23,5 mmol.) BOC-

Pro-NH-Ch2-CH2-N(CH3)2 met 30 ml 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat behandeld en dan werd het mengsel ingedampt. De als residu verkregen olie werd opgenomen in 50 ml chloroform en hieraan werd 2,8 ml (20 mmol.) triethylamine toegevoegd.

20 Aan de verkregen heldere oplossing werd 6,74 g (17 mmol.) BOC-Leu-OPFP toegevoegd en na een uur roeren werd nog eens 2,8 ml (20 mmol.) triethylamine druppelsgewijs toegevoegd. Het mengsel liet men gedurende de nacht staan en de volgende dag werd het ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 50 ml 25 water opgelost, de pH-waarde van de oplossing werd door toevoeging van vast natriumcarbonaat ingesteld op 10 en het beschermde dipeptide werd uit de waterige fase geëxtraheerd met ethylacetaat. De afgescheiden ethylacetaatfase werd met watervrij natriumsulfaat gedroogd en ingedampt. De als residu ver-30 kregen olie werd met 5 N zoutzuuroplossing in ethylacetaat een uur lang behandeld, dan werd het reactiemengsel ingedampt en het verdampingsresidu met ether verwreven. Na het affiltreren werd het amorfe, sterk hygroscopische produkt in vacuum boven watervrij natriumhydroxide gedroogd. Op deze wijze werd 35 4,5 g H-Leu-Pro-NH-CH9-CH9-N(CH_)9.2HC1 verkregen (12,1 mmol.); ... z z 3 z

Rf} = 0,05.

Stap 3: L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-(2-dimethylaminoethyl)-amide 800 3767 - 33 -

In 30 ml DMFA werd 2,6 g (7 mmol.) H-Leu-Pro-NH-C^-C^-N (CH^)2-2HC1 opgelost en aan de oplossing werd 1,96 ml (14 mmol.) triethylamine toegevoegd. Het verkregen neerslag werd afgefiltreerd en het filtraat werd onder ijskoeling en 5 roeren druppelsgewijs toegevoegd aan de oplossing van 3,29 g (7,7 mmol.) Z-Glp-OPFP in 10 ml DMFA. Na beëindiging van de toevoeging liet men het reactiemengsel 4 uur staan en dan werd in vacuum ingedampt. De als residu verkregen olie werd in 50 ml water opgelost, de oplossing werd met geconcentreerd zout-10 zuur op pH = 3 aangezuurd en driemaal uitgeschud met 20 ml ethylacetaat. Dan werd de pH-waarde van de waterige oplossing door toevoeging van vast natriumcarbonaat ingesteld op 10 en de alkalisch gemaakte oplossing werd vijfmaal geëxtraheerd met 30 ml ethylacetaat. De organische fasen werden verenigd, ge-15 droogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het op deze wijze verkregen olie-achtige beschermde dipeptide (3,05 g; 5.6 mmol.) werd in 60 ml water opgelost, aan de oplossing werd 5.6 ml N zoutzuur en 0,6 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en gedurende 30 min. werd waterstofgas 20 door het mengsel geleid. Na het affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt, de als residu verkregen olie opgelost in een mengsel van 50 ml chloroform en 20 ml N natrium-waterstofcarbonaatoplossing. De fasen werden gescheiden, de chloroformfase werd met watervrij natriumsulfaat gedroogd en 25 ingedampt. Het verdampingsresidu werd met n-hexaan verwreven en afgefiltreerd. Het op deze wijze verkregen amorfe ruwe produkt (2,0 g) werd in water opgelost, de oplossing met actieve kool geklaard en de waterheldere oplossing gelyofili-seerd. Er werd 1,72 g G^-Leu-Pro-Nfl-C^-aE^-NiCH^) 2 verkregen 30 (60 % van de theorie); = 0,06; = -71,7° (c = 1, in azijnzuur).

Aminozuuranalyse: Glu 1,02 (1,0), Leu 1,00 (1,0), Pro 1,03 (1,0).

VOORBEELD XV

35 L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipecolinezuuramide.

Stap 1; benzyloxycarbonyl-D-pipecolinezuuramide.

In 100 ml ethylacetaat werd 13,15 g (50 mmol.) Z- 8003767 - 34 - D-Pip-OH (verg. L. Balaspiri en medew.: Monatsh. Chem. 101, 1177 (1970)) opgelost en er werd 7,0 ml (50 mmol.) triethyl-amine aan toegevoegd. Het mengsel werd afgekoeld op -20°C en bij deze temperatuur werd onder roeren 6,5 ml (50 mmol.) 5 chloorkoolzure isobutylester druppelsgewijs toegevoegd. Na nog eens 15 min. roeren werd bij -10°C 1,5 uur lang ammoniakgas in het mengsel geleid. Na het affiltreren van het neerslag werd het filtraat uitgeschud met N zoutzuuroplossing, dan met N natriumwaterstofcarbonaatoplossing en tenslotte met water, ge-10 droogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. Het verdam-pingsresidu werd gekristalliseerd uit een mengsel van ethyl-acetaat en ether; op deze wijze werd 11,5 g Z-D-Pip-NH2 verkregen (88 % van de theorie); smp. = 114-115°C; = 0,50; l q_7^ = +32,0° (c = 1, in azijnzuur).

15 Analyse voor ci4H18°3N2 (mol*9ew· 262,30): berekend: N 10,68 %; gevonden: N 10,63 %.

Stap 2: D-pipecolinezuuramide.

20 In 75 ml methanol werd 3,93 g (15 mmol.) Z-D-Pip- NH2 opgelost, aan'de oplossing werd 0,5 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. Na affiltreren van de katalysator werd het filtraat ingedampt en het verdampings-25 residu met ether verwreven. Op deze wijze werd 1,70 g H-D-Pip -NH2 verkregen (90 % van de theorie); smp. = 161-163°C; = 0,10; L <ï.7q5 = +31,0° (c = 1, in methanol).

Stap 3: benzyloxycarbonyl-L-glutaminyl-L-histidine-hydrazide.

30 In 700 ml DMFA werd 71,0 g (0,165 mol.) Z-Gln-His- OME /verg. H. Kappeler: Helv. Chim. Acta 44, 476 (1961/7 opgelost en aan de oplossing werd 33,6 ml (0,495 mol.) hydrazine-hydraat toegevoegd. Het reactiemengsel liet men gedurende drie dagen staan, dan werd het met 600 ml ethylacetaat verdund en 35 gedurende de nacht in de koelkast gelaten. De volgende dag werd het neerslag door filtreren afgescheiden. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (71,65 g) werd herkristalliseerd uit 1800 ml methanol. Op deze wijze werd 55,1 g Z-Gln-His- 800 3 7 67 - 35 - ^H., verkregen (78 % van de theorie) ; snip. = 198-200°C; R^4' = 0,28.

Analyse voor (m°l*9ew· 431,40); berekend: C 52,90 %, H 5,34 %, N 22,72 %; 5 gevonden: C 52,21 %, H 5,73 %, N 22,78 %.

Stap 4: benzyloxycarbonyl-L-glutaminyl-L-histidyl-D-pipecolinezuur-amide.

In 100 ml DMFA werd 5,39 g (12,5 mmol.) Z-Gln-His-10 opgeslibd en aan de suspensie werd 4,6 ml (37,5 mmol.) 8,1 N zoutzuuroplossing in dioxaan toegevoegd. De verkregen oplossing werd afgekoeld op -20°C en dan werd bij -15°C onder roeren druppelsgewijs 1,63 ml (13,7 mmol.) tert-butylnitriet toegevoegd. Het reactiemengsel werd bij -10°C gedurende 20 min. 15 geroerd, en dan werd druppelsgewijs 3,5 ml (25 mmol.) triethyl-amine toegevoegd en aansluitend de oplossing van 1,57 g (12,5 mmol.) H-D-Pip-N^ en tenslotte nog eens 1,75 ml (12,5 mmol.) triethylamine. Na beëindiging van de toevoeging werd het reactiemengsel bij -10°C nog een uur lang geroerd, waarna men 20 het gedurende de nacht in de koelkast bij 2°C liet staan. De volgende dag werd het neerslag afgefiltreerd en het filtraat in vacuum ingedampt. Het amorfe residu werd met ethylacetaat verwreven. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt werd op een silicagel-zuil gebracht en geëlueerd met het oplosmiddel-25 mengsel (2). De fracties, die het zuivere produkt bevatten, werden verenigd en ingedampt, het residu werd met ether ver-wreven en afgefiltreerd. Er werd 2,76 g amorf Z-Gln-His-D-Pip-N^ verkregen (42 % van de theorie); R^4^ = 0,10.

Stap 5: 30 L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipecolinezuuramide.

In 50 ml azijnzuur werd 2,63 g (5 mmol.) Z-Gln-His-D-Pip-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,5 g 10 % palladium-actieve kool als katalysator toegevoegd en werd een uur lang waterstofgas door de oplossing geleid. Na het affil-35 treren van de katalysator werd het filtraat verwarmd tot 60-70°C, 30 min. lang op deze temperatuur gehouden en dan in vacuum ingedampt. Het verdampingsresidu werd in water opgelost, de oplossing werd behandeld met Dowex-2 hars in de OH-cyclus 800 3 7 67 - 36 - en ingedampt. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt werd op een silicagel-zuil gebracht en geelueerd met het oplosmiddel-mengsel (1), De fracties, die het zuivere produkt bevatten, werden verenigd en ingedampt, het residu werd in water opge-5 lost, de oplossing werd met actieve kool geklaard en de waterheldere oplossing werd ingedampt. Het amorfe residu werd in vacuum gedroogd boven fosforpentoxide. Er werd 704 mg Glp-His-D-Pip-NH2 verkregen (51 % van de theorie); R^4) = 0,10; fvjl5 = +16,0° (c = 1, in water).

10 Aminozuuranalyse; Glu 1,03 (1,0) , His 1,00 (1,0) ,

Pip 0,96 (1,0).

VOORBEELD XVI

L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide.

Stap 1: 15 tert-butyloxycarbonyl-L-homoprolinamide.

In 30 ml ethylacetaat werd 2,29 g (10 mmol.) BOC-HPro-OH opgelost, aan de oplossing werd 1,4 ml (10 mmol.) tri-ethylamine toegevoegd en er werd afgekoeld op -10°C. Bij deze temperatuur werd druppelsgewijs 1,3 ml (10 mmol.) chloorkool-20 zure isobutylester toegevoegd. Na 15 min. roeren werd bij -10°C een half uur lang ammoniakgas in het reactiemengsel geleid, waarna het mengsel twee uur lang bij 0-5°C bleef staan. Het neerslag werd dan afgefiltreerd, het filtraat ingedampt en de als residu verkregen olie werd opgelost in 30 ml chloro-25 form. De oplossing werd tweemaal uitgeschud met 10 ml N zout-zuuroplossing, dan eveneens tweemaal met 10 ml N natriumwa-terstofcarbonaatoplossing en tenslotte eenmaal met 10 ml water, gedroogd met watervrij natriumsulfaat en ingedampt. De als residu verkregen olie werd door behandeling met n-hexaan 30 tot kristalliseren gebracht. Het op deze wijze verkregen ruwe produkt (1,96 g) werd herkristalliseerd uit een mengsel van ethylacetaat en ether. Er werd 1,78 g BOC-HPro-NH2 verkregen (78 % van de theorie); smp. = 138-140°C; R.1^ = 0,43; - -25 o r £ a_/ = -24,85 (c = 1, in azijnzuur).

35 Analyse voor chH9q°3N2 (mol.gew. 228,29): berekend: G 57,87 %, H 8,83 %, N 12,27 %; gevonden: C 57,60 %, H 8,89 %, N 12,11 %.

Stap 2: L-homoprolinamide-hydrochloride.

800 3 7 67 - 37 -

In 10 ml ethylacetaat werd 1,6 g (7 mmol.) BOO

HPro-NH onder verwarming opgelost. De oplossing werd op ka-2 mertemperatuur afgekoeld en er werd 10 ml 6 N zoutzuuroplos-sing in ethylacetaat aan toegevoegd. Het reactiemengsel liet 5 men een uur lang staan, dan werd het met ether verdund, het verkregen neerslag werd verwreven en afgefiltreerd. Er werd op deze wijze 1,05 g H-HPro-NH2.HC1 verkregen (91 % van de theorie); smp. = 178-180°C; R^6) = 0,32; l\7^5 = +26,2° (c = 1, in methanol).

10 Stap 3: benzyloxycarbonyl-L-glutaminyl-L-histidyl-L-homoprolinamide.

In 100 ml DMFA werd 5,39 g (12,5 mmol.) Z-Gln-His-^Hg (zie voorbeeld XV, stap 3) opgeslibd en aan de suspensie werd 4,6 ml (37,5 mmol.) 8,1 N zoutzuuroplossing in 15 dioxaan toegevoegd. De verkregen oplossing werd afgekoeld op -20°C en dan werd bij -15°C onder roeren druppelsgewijs 1,63 ml (13,7 mmol.) tert-butylnitriet toegevoegd. Het reactiemengsel werd bij -10°C gedurende 20 min. geroerd, waarna 3,5 ml (25 mmol.) triethylamine werd toegevoegd. Intussen werd 2,07 g 20 (12,5 mmol.) H-HPro-N^.HC1 in 10 ml DMFA opgelost en aan de oplossing 1,75 ml (12,5 mmol.) triethylamine toegevoegd. Na affiltreren van de neerslagen werd de verkregen oplossing bij -10°C druppelsgewijs aan de boven genoemde azide-oplossing toegevoegd en tenslotte werd aan het mengsel nog 1,75 ml 25 (12,5 mmol.) triethylamine toegevoegd. Het reactiemengsel werd aansluitend een uur lang bij -10°C geroerd en dan liet men het gedurende de nacht bij 2°C staan. De volgende dag werd het neerslag afgefiltreerd, het filtraat in vacuum ingedampt en het amorfe residu met ethylacetaat verwreven. Het op deze wij-30 ze verkregen ruwe produkt werd op een silicagel-zuil gebracnt en geëlueerd met het oplosmiddelmengsel (2). De fracties, die het zuivere produkt bevatten, werden verenigd en ingedampt en het verdampingsresidu werd met ether verwreven. Er werd 2,35 g Z-Gln-His-HPro-NH2 verkregen (36 % van de theorie); =0,30. 35 Stap 4: L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide.

In 40 ml azijnzuur werd 2,1 g (4 mmol.) Z-Gln-His-HPro-NH2 opgelost, aan de oplossing werd 0,4 g 10 % palladium- 800 37 67 - 38 - s actieve kool als katalysator toegevoegd en een uur lang werd waterstofgas door het mengsel geleid. De katalysator werd dan afgefiltreerd, het filtraat werd verwarmd op 60-70°C, 30 min.

op deze temperatuur gehouden en dan in vacuum ingedampt. Het 5 als residu verkregen ruwe produkt werd op de in voorbeeld XV, stap 5, beschreven wijze behandeld met ionenuitwisselende hars en gereinigd op een silicagel-zuil. Er werd 618 mg Glp-His- (4) HPro-NH2 verkregen (56 % van de theorie); = 0,08; /~a ~ -24,0° (c = 1, in methanol).

— D

10 Aminozuuranalyse: Glu 0,97 (1,0), His 1,00 (1,0), HPro 0,91 (1,0) .

15 800 37 67

Claims

1. Tripeptideamiden met de algemene formule 1 Glp - X - Y - NH - A, waarin 5. een L-norleucyl-, L-leucyl-, L-norvalyl-, D- leucyl-, L-prolyl-, L-2-aminobutyryl-, L-valyl-, L-threonyl-, L-isoleucyl-, L-2-aminodecanoyl-, L-cyclohexylalanyl- of L-tert-butyl-serylgroep is en Y een L-prolylgroep, of 10. een L-histidylgroep en Y een L-homoprolyl- of D-pipecolylgroep is, verder A waterstof is of een alkylgroep met 1-10 koolstof atomen, of een door een dimethylaminorest gesubstitueerde alkylgroep met 1-3 koolstofatomen in het alkyldeel, wanneer 15 echter X een L-leucylgroep betekent, dan heeft A een van waterstof verschillende betekenis, alsmede de therapeutisch toepasbare complexen van deze tripeptideamiden.

2. L-pyroglutamyl-L-prolyl-L-prolinamide.

3. L-pyroglutamyl-L-norleucyl-L-prolinamide. 20

4. L-pyroglutamyl-L-norvalyl-L-prolinamide.

5. L-pyroglutamyl-L-leucyl-L-proline-ethylamide.

6. L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-homoprolinamide.

7. L-pyroglutamyl-L-a-aminobutyryl-L-prolinamide.

8. L-pyroglutamyl-L-histidyl-D-pipecolinezuuramide.

9. Werkwijze voor de bereiding van tripeptide amiden met de algemene formule Glp - X- Y- NH-A, waarin X een L-norleucyl-, L-leucyl-, L-norvalyl-, D- 30 leucyl-, L-prolyl-, L-2-aminobutyryl-, L-valyl-, L-threonyl-, L-isoleucyl-, L-2-aminodecanoyl-, L-cyclohecylalanyl- of L-tert-butyl-serylgroep is en Y een L-prolylgroep, of X een L-histidylgroep is en 35. een L-homoprolyl- of D-pipecolylgroep, terwijl verder A waterstof is of een alkylgroep met 1-10 kool stofatomen, of een door een dimethylaminorest gesubstitueerde alkylgroep met 1-3 koolstofatomen in het alkyldeel, waarbij 8003767 * - 40 - echter wanneer X een L-leucylgroep betekent, A een van waterstof verschillende betekenis heeft, alsmede van therapeutisch toepasbare complexen van deze verbindingen, met het kenmerk , dat men tripeptiden met de algemene formule 1, 5 waarin X, Y en A de boven aangegeven betekenissen hebben, volgens op zichzelf bekende peptidechemische methoden opbouwt uit de overeenkomstige aminozuren of aminozuurderivaten en evt. het verkregen produkt overvoert in een therapeutisch toepasbaar complex.

10 10, Werkwijze volgens conclusie 9, met het kenmerk , dat men een aminozuuramide met de algemene formule Y-NH-A, waarin Y en A de in conclusie 9 aangegeven betekenissen hebben, met een evt. beschermde L-aminozuurrest X, onder toepassing van de gebruikelijke peptidechemische metho-15 den N-acyleert en het verkregen dipeptide met L-pyroglutamine-zuur, resp. met een beschermd en/of geactiveerd derivaat daarvan, N-acyleert en evt. de aanwezige beschermende groepen afsplitst.

11. Werkwijze volgens conclusie 9, ter bereiding 20 van tripeptideamiden met de algemene formule 1, waarin Y en A de in conclusie 9 aangegeven betekenissen hebben, maar waarbij op de plaats van X een L-histidylgroep staat, met het kenmerk , dat men een aminozuuramide met de algemene formule Y-NH-A, waarin Y en A de in conclusie 9 aangegeven be-25 tekenissen hebben, met de uit het hydrazide Z-Gln-His-NH-NH2, waarin Z een benzyloxycarbonylgroep betekent, bereide beschermde azide acyleert en in het verkregen tripeptideamide na het afsplitsen van de beschermende groep Z de glutaminylgroep door warmtebehandeling cycliseert tot een pyroglutamylgroep.

12. Werkwijze volgens conclusie 10, met het kenmerk , dat men het in de eerste reactietrap verkregen dipeptideamide in plaats van met L-pyroglutaminezuur N-acyleert met L-glutaminezuur en in het verkregen tripeptideamide de glutaminylgroep cycliseert tot de pyroglutamylgroep. 8003767 35