NL195090C - Preparations of water-soluble peptides with a slow release. - Google Patents

Description

1 195090 , Preparaten van in water oplosbare peptiden met een langzame afgifte1 195090, Slow-release water-soluble peptides preparations

Deze uitvinding heeft betrekking op preparaten van geneesmiddelen met een langzame afgifte (depot-preparaten), in het bijzonder van in water oplosbare peptiden, bijvoorbeeld somatostatine of somatostatine 5 analogs, zoals octreotide, in een biologisch afbreekbare en biologische verenigbare, polymere drager, bijvoorbeeld een matrix of een bekleding, bijvoorbeeld in de vorm van een implantaat of bij voorkeur een microdeeltje (eveneens bekend als een microcapsule of een microbol).This invention relates to preparations of slow-release drugs (depot preparations), in particular of water-soluble peptides, for example somatostatin or somatostatin analogs, such as octreotide, in a biodegradable and biocompatible, polymeric carrier, for example a matrix or a coating, for example in the form of an implant or preferably a microparticle (also known as a microcapsule or a microsphere).

De uitvinding heeft eveneens betrekking op dergelijke preparaten die gedurende een speciale tijdsperiode bevredigende peptideafgifte-profielen bezitten.The invention also relates to such compositions which possess satisfactory peptide release profiles for a special period of time.

10 Peptide geneesmiddelen vertonen vaak na orale of parenterale toediening een slechte biologische beschikbaarheid in het bloed, bijvoorbeeld tengevolge van hun korte biologische halfwaardetijden veroorzaakt door hun metabolische instabiliteit. Oraal of via de neus toegediend, vertonen ze vaak een slechte resorptie door de slijmvliesmembranen. Een therapeutisch relevante bloedspiegel gedurende een lange tijdsperiode is moeilijk te verwezenlijken.Peptide drugs often exhibit poor bioavailability in the blood after oral or parenteral administration, for example due to their short biological half-lives caused by their metabolic instability. Orally or administered through the nose, they often exhibit poor resorption through the mucous membranes. A therapeutically relevant blood level over a long period of time is difficult to achieve.

15 De parenterale toediening van peptide geneesmiddelen als depotpreparaat in een biologisch afbreekbaar polymeer, bijvoorbeeld als microdeeltjes of implantaten, is voorgesteld, waardoor ze, na een verblijftijd in het polymeer dat het peptide tegen enzymatische en hydrolytische invloeden van de biologische media beschermt, met vertraagde afgifte kunnen worden vrijgemaakt.The parenteral administration of peptide drugs as a depot preparation in a biodegradable polymer, for example as microparticles or implants, has been proposed, with a delayed release after a residence time in the polymer protecting the peptide against enzymatic and hydrolytic influences of the biological media. can be released.

Hoewel enkele parenterale depotreparaten of peptide geneesmiddelen in een polymeer in de vorm van 20 microdeeltjes of een implantaat bekend zijn, worden slechts in enkele gevallen bevredigende profielen van de peptideafgifte in de praktijk verkregen. Er moeten speciale maatregelen worden getroffen om een continue peptideafgifte voor een serumspiegel van een therapeutisch actief geneesmiddel te geven en desgewenst te hoge serumconcentraties van het geneesmiddel, die ongewenste farmacologische nevenreacties veroorzaken, te vermijden.Although some parenteral depot preparations or peptide drugs are known in a polymer in the form of microparticles or an implant, satisfactory peptide release profiles are only obtained in practice in a few cases. Special measures must be taken to provide a continuous peptide release for a serum level of a therapeutically active medicine and, if desired, to avoid too high serum concentrations of the medicine that cause undesirable pharmacological side reactions.

25 Het afgiftepatroon van een peptidegeneesmiddel hangt van talrijke factoren af, bijvoorbeeld van het type peptide en bijvoorbeeld of het in de vrije vorm of in een andere vorm ervan, bijvoorbeeld in de zoutvorm, die de oplosbaarheid ervan in water kan beïnvloeden, aanwezig is. Een andere belangrijke factor is de keuze van het polymeer, uit een uitgebreide lijst van mogelijkheden die in de literatuur zijn beschreven.The release pattern of a peptide drug depends on numerous factors, for example, the type of peptide and, for example, whether it is present in the free form or in another form thereof, for example in the salt form, which may affect its solubility in water. Another important factor is the choice of the polymer, from an extensive list of possibilities described in the literature.

Elk polymeertype heeft zijn karakteristieke biologische ontledingssnelheid. Er kunnen vrije carboxylgroe-30 pen worden gevormd, die bijdragen tot de pH-waarde in het polymeer en aldus verder de oplosbaarheid in water van het peptide en aldus het afgiftepatroon ervan beïnvloeden.Each polymer type has its characteristic biological decomposition rate. Free carboxyl groups can be formed which contribute to the pH value in the polymer and thus further influence the water solubility of the peptide and thus its release pattern.

Andere factoren die het afgiftepatroon van het depotpreparaat beïnvloeden zijn de geneesmiddelbelading van de polymere drager ervan, de wijze van verdeling ervan in het polymeer, de deeltjesgrootte en, in het geval van een implantaat, bovendien de vorm ervan. Verder is de plaats van het preparaat in het lichaam 35 van invloed.Other factors that influence the release pattern of the depot preparation are the drug loading of its polymeric carrier, its mode of distribution into the polymer, the particle size and, in the case of an implant, moreover its shape. Furthermore, the location of the preparation in the body is of influence.

Tot nog toe is geen somatostatinepreparaat in een vorm met vertraagde afgifte voor parenterale toediening op de markt gekomen, waarschijnlijk omdat geen preparaat dat een bevredigend serumspiegel-profiel vertoont kon worden verkregen.So far, no somatostatin preparation in a sustained-release form for parenteral administration has come onto the market, probably because no preparation showing a satisfactory serum level profile could be obtained.

Polymeerpreparaten met geneesmiddelen die zijn bestemd om een langdurige of vertraagde afgifte van 40 het geneesmiddel te geven, zijn bekend in de stand der techniek.Polymer preparations with drugs intended to provide a sustained or delayed release of the drug are known in the art.

In het Amerikaanse octrooischrift 3.773.919 zijn preparaten waaruit het geneesmiddel met een geregelde snelheid wordt vrijgemaakt beschreven, waarbij het geneesmiddel, bijvoorbeeld een in water oplosbaar peptide geneesmiddel, wordt gedispergeerd in een biologisch afbreekbaar en biologisch verenigbaar lineair polylactide of polylactide-co-glycolide polymeer. Er zijn echter geen patronen voor de afgifte van het 45 geneesmiddel beschreven ën er is geen verwijzing naar een somatostatine. In het Amerikaanse octrooischrift 4.293.539 zijn antibacteriële preparaten in een microbolvorm beschreven.U.S. Pat. No. 3,773,919 describes compositions from which the drug is released at a controlled rate, wherein the drug, e.g., a water-soluble peptide drug, is dispersed in a biodegradable and biocompatible linear polylactide or polylactide-co-glycolide polymer . However, no patterns for the release of the drug have been described and there is no reference to a somatostatin. U.S. Pat. No. 4,293,539 describes antibacterial compositions in a microspherical form.

In het Amerikaanse octrooischrift 4.675.189 zijn preparaten met een vertraagde afgifte van het met LHRH analoge decapeptide nafareline en analoge LHRH-verwanten in polylactide-co-glycolide polymeren beschreven. Er is geen afgiftepatroon beschreven.U.S. Pat. No. 4,675,189 describes sustained-release preparations of the LHRH analog decapeptide nafarelin and analog LHRH relatives in polylactide co-glycolide polymers. No release pattern has been described.

50 T. Chang, J. Bioeng., Vol. 1, blz. 25-32, 1976 beschrijven de langdurige afgifte van biologische materialen, enzymen en vaccins uit microdeeltjes.50, T. Chang, J. Bioeng., Vol. 1, pages 25-32, 1976 describe the sustained release of biological materials, enzymes and vaccines from microparticles.

Polymeren-copolymeren van melkzuur en lactideglycolide copolymeren en verwante preparaten om bij chirurgische toepassingen te worden toegepast en voor de vertraagde vrijmaking en biologische ontleding zijn beschreven in de Amerikaanse octrooischriften 3.991.776; 4.076.798 en 4.118.470.Polymer copolymers of lactic acid and lactide glycolide copolymers and related compositions for use in surgical applications and for delayed release and biological decomposition are described in U.S. Pat. Nos. 3,991,776; 4,076,798 and 4,118,470.

55 In de Europese octrooiaanvrage 0.203.031 is een reeks somatostatine octapeptide analoga beschreven, bijvoorbeeld verbinding RC-160 met formule 195090 2 Λ * * D-Phe-Cys-Tyr-D-T rp-Lys-Val-Cys-T rp-NH2, met een brug tussen de -Cys-gedeelten, in de kolommen 15-16.55 European patent application 0.203.031 describes a series of somatostatin octapeptide analogs, for example compound RC-160 of formula 195090 2 Λ * * D-Phe-Cys-Tyr-DT rp-Lys-Val-Cys-T rp-NH 2, with a bridge between the -Cys sections, in columns 15-16.

De mogelijkheid van de somatostatinen om in microvorm te worden ingekapseld met polylactide-co-5 glycolide polymeer is vermeld in conclusie 18, doch er zijn geen aanwijzingen gegeven hoe een continue therapeutisch actieve serumspiegel kan worden verkregen.The possibility of the somatostatin to be encapsulated in a micro form with polylactide-co-glycolide polymer is stated in claim 18, but no indications are given how a continuous therapeutically active serum level can be obtained.

In het Amerikaanse octrooischrift 4.011.312 is beschreven dat een continue vrijmaking van een antimicrobieel geneesmiddel, bijvoorbeeld het in water oplosbare polymyxine B, uit een polylactide-co-glycolide matrix met een laag molecuulgewicht (lager dan 2000) en een relatief hoog glycolidegehalte in de 10 vorm van een implantaat, kan worden verkregen indien het implantaat wordt ingevoegd in het tepelkanaal van een koe. Het geneesmiddel wordt in een korte tijdsperiode vrijgemaakt, tengevolge van het hoge glycolidegehalte en het lage molecuulgewicht van het polymeer, die beide een snelle biologische ontleding van het polymeer en aldus een overeenkomstige snelle vrijmaking van het geneesmiddel, stimuleren. Een relatief hoge geneesmiddelbelading draagt bovendien bij tot een snelle afgifte van het geneesmiddel. Geen 15 somatostatinen en geen geneesmiddelafgiftepatronen zijn beschreven.U.S. Pat. No. 4,011,312 describes that a continuous release of an antimicrobial drug, for example the water-soluble polymyxin B, from a polylactide-co-glycolide matrix with a low molecular weight (below 2000) and a relatively high glycolid content in the The shape of an implant can be obtained if the implant is inserted into the cow's nipple channel. The drug is released in a short period of time, due to the high glycolid content and the low molecular weight of the polymer, both of which stimulate rapid biological decomposition of the polymer and thus a corresponding rapid release of the drug. Moreover, a relatively high drug load contributes to a rapid release of the drug. No somatostatin and no drug release patterns have been described.

In het Europese octrooischrift 58.481 is beschreven dat een continue vrijmaking van een in water oplosbaar peptide uit een polylactide polymeerimplantaat wordt gestimuleerd door verlaging van het molecuulgewicht van ten minste een gedeelte van de polymeermoleculen, door invoering van glycolide-eenheden in het polymeermolecuul, door vergroting van het blokpolymeerkarakter van het polymeer indien 20 polylactide-coglycolidemoleculen worden toegepast, door toename van de geneesmiddelbelasting van de polymeermatrix en door vergroting van het oppervlak van het implantaat.European patent no. 58,481 describes that continuous release of a water-soluble peptide from a polylactide polymer implant is stimulated by reducing the molecular weight of at least a portion of the polymer molecules, by introducing glycolide units into the polymer molecule, by increasing the block polymer character of the polymer if polylactide-coglycolid molecules are used, by increasing the drug loading of the polymer matrix and by increasing the surface of the implant.

Hoewel somatostatinen als in water oplosbare peptiden zijn genoemd, zijn geen somatostatine afgifte-profielen beschreven en is er evenmin een aanwijzing gegeven hoe al deze parameters kunnen worden gecombineerd ter verkrijging van bijvoorbeeld een continue somatostatine serumspiegel gedurende 25 minstens een week, bijvoorbeeld een maand.Although somatostatin has been mentioned as water-soluble peptides, no somatostatin release profiles have been described, nor has any indication been given as to how all of these parameters can be combined to obtain, for example, a continuous somatostatin serum level for at least a week, for example a month.

In het Europese octrooischrift 92.918 is beschreven dat een continue afgifte van peptiden, bij voorkeur hydrofiele peptiden, gedurende een lange tijdsperiode kan worden verkregen indien het peptide in een gebruikelijke hydrofobe polymeennatrix wordt opgenomen, bijvoorbeeld van een polylactide, dat meer toegankelijk voor water is gemaakt door in het molecuul ervan een hydrofiele eenheid in te voeren, 30 bijvoorbeeld van polyethyleenglycol, polyvinylalcohol, dextran, polymethacrylamide. De hydrofiele bijdrage aan het amphipathische polymeer wordt verleend aan alle ethyleenoxidegroepen in het geval van een polyethyleenglycoleenheid, door de vrije hydroxylgroepen in het geval van een polyvinylalcoholeenheid of van een dextraneenheid en door de amidegroepen in het geval van een polymethylacrylamide-eenheid.European patent specification 92,918 describes that a continuous release of peptides, preferably hydrophilic peptides, can be obtained over a long period of time if the peptide is incorporated into a conventional hydrophobic polymer matrix, for example from a polylactide made more accessible to water by introduce a hydrophilic moiety into its molecule, for example of polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, dextran, polymethacrylamide. The hydrophilic contribution to the amphipathic polymer is given to all ethylene oxide groups in the case of a polyethylene glycol unit, by the free hydroxyl groups in the case of a polyvinyl alcohol unit or of a dextran unit and by the amide groups in the case of a polymethylacrylamide unit.

Door de aanwezigheid van de hydrofiele eenheid in de polymeermoleculen zal het implantaat na de 35 absorptie van water hydrogeleigenschappen verkrijgen. Somatostatine wordt als een hydrofiel peptide genoemd, doch er is geen afgifteprofiel beschreven en evenmin een indicatie gegeven welk polymeertype voor dit peptide wordt aanbevolen en welk molecuulgewicht en hoeveel hydrofiele groepen het zal hebben.Due to the presence of the hydrophilic unit in the polymer molecules, the implant will acquire hydrogel properties after the absorption of water. Somatostatin is mentioned as a hydrophilic peptide, but no release profile has been described nor an indication given which polymer type is recommended for this peptide and what molecular weight and how many hydrophilic groups it will have.

In het Amerikaanse octrooischrift GB 2.145.422 B is beschreven dat een vertraagde afgifte van verschillende typen geneesmiddelen, bijvoorbeeld vitaminen, enzymen, antibiotica en antigenen, gedurende 40 een langdurige tijdsperiode kan worden verkregen indien het geneesmiddel in een implantaat wordt opgenomen, bijvoorbeeld van de afmeting van microdeeltjes, vervaardigd uit een polymeer van een polyol, bijvoorbeeld glucose of mannitol, met één of een aantal, bij voorkeur ten minste 3, polylactide-estergroepen.It is described in U.S. Pat. No. GB 2,145,422 B that a sustained release of various types of drugs, e.g. vitamins, enzymes, antibiotics and antigens, can be obtained over a prolonged period of time if the drug is inserted into an implant, e.g. of the size of microparticles made from a polymer of a polyol, for example glucose or mannitol, with one or more, preferably at least 3, polylactide ester groups.

De polylactide-estergroepen bevatten bij voorkeur bijvoorbeeld glycolide-eenheden. Geen peptiden, bijvoorbeeld somatostatinen, worden als geneesmiddelen genoemd en geen serumgeneesmiddelspiegels 45 zijn beschreven.The polylactide ester groups preferably contain, for example, glycolide units. No peptides, for example somatostatin, are mentioned as drugs and no serum drug levels 45 have been described.

Deze uitvinding heeft betrekking op preparaten met een vertraagde afgifte, bijvoorbeeld preparaten van microdeeltjes van een geneesmiddel, in het bijzonder van een hormonaal actief, in water oplosbaar, somatostatine of een somatostatine analogon, zoals octreotide, onder verschaffing van een bevredigende geneesmiddelplasmaspiegel en, bijvoorbeeld in een biologisch ontleedbaar, biologisch verenigbaar, 50 polymeer, bijvoorbeeld in een inkapselende polymeermatrix. De polymeermatrix kan een synthetisch of een natuurlijk polymeer zijn.This invention relates to sustained-release preparations, for example preparations of microparticles of a medicament, in particular of a hormonally active, water-soluble, somatostatin or a somatostatin analog, such as octreotide, to provide a satisfactory drug plasma level and, for example in a biologically decomposable, biocompatible, polymer, e.g., in an encapsulating polymer matrix. The polymer matrix can be a synthetic or a natural polymer.

De microdeeltjes volgens deze uitvinding kunnen volgens elke gebruikelijke methode worden verkregen, bijvoorbeeld een organische fasenscheidingsmethode, een sproeidroogtechniek of een tripel emulsie-methode, waarbij het polymeer tezamen met het geneesmiddel wordt neergeslagen, gevolgd door harden 55 van het verkregen product, indien de fasenscheidings of tripel emulsiemethode worden toegepast.The microparticles of this invention can be obtained by any conventional method, for example an organic phase separation method, a spray drying technique or a triple emulsion method, wherein the polymer is precipitated together with the drug, followed by curing 55 of the resulting product, if the phase separation or triple emulsion method.

Desgewenst kunnen de preparaten met een vertraagde afgifte de vorm hebben van een implantaat.If desired, the sustained-release preparations may be in the form of an implant.

Gevonden werd nu een bijzonder bruikbare modificatie van de tripel emulsiemethode ter bereiding van 3 195090 , microdeeltjes van elk geneesmiddel.A particularly useful modification of the triple emulsion method for the preparation of 195090 microparticles of each drug has now been found.

De onderhavige uitvinding verschaft dus: een werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes, welke omvat (i) het innig mengen van een water-in-olie emulsie gevormd uit een waterig medium en een niet met water 5 mengbaar, organisch oplosmiddel die in één fase het geneesmiddel en in de andere fase een biologisch ontleedbaar, biologisch verenigbaar polymeer bevat, met een overmaat van een waterig medium dat een emulgerend materiaal of een beschermend colloïde ter vorming van een water-in-olie-in-water emulsie bevat, zonder enig materiaal toe te voegen dat het geneesmiddel bevat aan de water-in-olie emulsie of toepassing van enige, tussentijdse, viscositeit verhogende stap, 10 (ii) het desorberen van het organische oplosmiddel daarvan, (iii) het isoleren en drogen van de verkregen microdeeltjes .The present invention thus provides: a method for preparing microparticles, which comprises (i) intimately mixing a water-in-oil emulsion formed from an aqueous medium and an organic solvent immiscible with water which in one phase drug and in the other phase a biologically decomposable, biocompatible polymer, with an excess of an aqueous medium containing an emulsifying material or a protective colloid to form a water-in-oil-in-water emulsion, without adding any material adding the drug to the water-in-oil emulsion or using any intermediate viscosity-increasing step, (ii) desorbing its organic solvent, (iii) isolating and drying the resulting microparticles.

De onderhavige uitvinding verschaft bovendien de volgens deze werkwijzen verkregen microdeeltjes.The present invention furthermore provides the microparticles obtained by these methods.

Een nieuw zout van octreotide, het pamoaat, is in dergelijke preparaten zeer stabiel.A new salt of octreotide, the pamoate, is very stable in such preparations.

De geneesmiddelen die bij de werkwijze volgens de uitvinding kunnen worden toegepast zijn bij voorkeur 15 in water oplosbaar, bijvoorbeeld peptiden.The drugs that can be used in the method according to the invention are preferably water-soluble, for example peptides.

De peptiden die bij de werkwijzen en in de formuleringen volgens deze uitvinding kunnen worden gebruikt kunnen een calcitonine, zoals zalmcalcitonine, lypressine en in de natuur voorkomend somatosta-tine en synthetische analoga daarvan zijn.The peptides that can be used in the methods and in the formulations of this invention can be a calcitonin, such as salmon calcitonin, lypressin and naturally occurring somatostatin and synthetic analogs thereof.

Het in de natuur voorkomende somatostatine is één van de aanbevolen verbindingen en is een 20 tetradecapeptide met formule Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-T rp IThe naturally occurring somatostatin is one of the recommended compounds and is a tetradecapeptide of the formula Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-T rp I

Cys-Ser-Thr-Phe-Thr-Lys.Cys-Ser-Thr-Phe-Thr-Lys.

Dit hormoon wordt geproduceerd door de hypothalamusklier evenals andere organen, bijvoorbeeld het 25 Gl-stelsel en mediaten, tezamen met GRF, q.v. de neuroregulastelsel en mediaten, tezamen met GRF, q.v. de neuroregulatie van de afgifte van het hypofysaire groeihormoon. Behalve de remming van de vrijmaking van het GH door de hypofyse, is somatostatine een krachtige remmer van een aantal systemen, waaronder de centrale en perifere neurale, gastro-intestinale en vasculaire gladde spier. Het remt eveneens de vrijmaking van insuline en glucagon.This hormone is produced by the hypothalamic gland as well as other organs, for example the 25 Gl system and mediates, together with GRF, q.v. the neuroregula system and mediates, together with GRF, q.v. the neuroregulation of the release of the pituitary growth hormone. In addition to the inhibition of the release of GH by the pituitary gland, somatostatin is a potent inhibitor of a number of systems, including central and peripheral neural, gastrointestinal and vascular smooth muscle. It also inhibits the release of insulin and glucagon.

30 De aanduiding “somatostatine” omvat de analoga of derivaten daarvan. Onder derivaten en analoga wordt verstaan polypeptiden met een rechte keten, een brug of cyclische polypeptiden, waarin één of een aantal van de aminozuureenheden zijn weggelaten en/of zijn vervangen door één of een aantal andere aminogroep(en) en/of waarin één of een aantal van de functionele groepen zijn vervangen door één of een aantal andere functionele groepen en/of één of een aantal groepen zijn vervangen door één of een aantal 35 andere isosterische groepen. In het algemeen omvat de aanduiding alle gemodificeerde derivaten van een biologisch actief peptide dat een kwalitatief overeenkomstig effect met dat van het niet-gemodificeerde somatostatine peptide vertoont.The term "somatostatin" includes the analogs or derivatives thereof. Derivatives and analogues are understood to be polypeptides with a straight chain, bridge or cyclic polypeptides in which one or more of the amino acid units have been omitted and / or have been replaced by one or more other amino group (s) and / or in which one or a some of the functional groups have been replaced by one or more other functional groups and / or one or more groups have been replaced by one or more other isosteric groups. In general, the designation includes all modified derivatives of a biologically active peptide that exhibits a qualitatively similar effect to that of the unmodified somatostatin peptide.

Agonist analoga van somatostatine zijn dus bruikbaar ter vervanging van natuurlijk somatostatine wat betreft het effect ervan op de regulering van fysiologische functies.Agonist analogues of somatostatin are thus useful as substitutes for natural somatostatin in its effect on the regulation of physiological functions.

40 Aanbevolen bekende somatostatinen zijn: * * a) (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol (generieke naam octreotide) * + 45 b) (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 * * c) (D )Phe-Cys-Tys-(D)Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 * * d) (D)Trp-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 50 e) (D)Phe-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 * * f) 3-(2-(naftyl)-(D)-Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 * * 55 g) (D)Phe-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH2 * * h) 3-(2-naftyl)-Ala-Cys-Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH2 1S5090 4 * * i) (D)Phr-Cys-p-Nal-(D)Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2 waarbij er in elk van de verbindingen a) tot i) een brug tussen de aminozuren gemerkt met een * zoals aangegeven de volgende formule is.40 Recommended known somatostatin are: * * a) (D) Phe-Cys-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol (generic name octreotide) * + 45 b) (D) Phe-Cys- Tyr- (D) Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 * * c) (D) Phe-Cys-Tys- (D) Trp-Lys-Val-Cys-TrpNH2 * * d) (D) Trp-Cys- Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 50 e) (D) Phe-Cys-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Cys-ThrNH2 * * f) 3- (2- (naphthyl) - (D) -Ala-Cys-Tyr- (D) Trp-Lys-Val-Cys-ThrNH2 * * 55 g) (D) Phe-Cys-Tyr- (D) Trp-Lys-Val-Cys-p- Nal-NH2 * * h) 3- (2-naphthyl) -Ala-Cys-Tyr- (D) Trp-Lys-Val-Cys-p-Nal-NH2 1S5090 4 * * i) (D) Phr-Cys- p-Nal- (D) Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH 2 wherein in each of the compounds a) to i) there is a bridge between the amino acids labeled with a * as indicated by the following formula.

5 Andere aanbevolen somatostatines zijn:5 Other recommended somatostatin are:

I II I

H-Cys-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-OHH-Cys-Phe-Phe- (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-OH

(zie Vale en med., Metabolism, 27, Supp.1, 139 (1978)).(see Vale and med., Metabolism, 27, Supp. 1, 139 (1978)).

10 *10 *

Asn-Phe-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba (zie Europese octrooipublicatie No. 1295 en aanvraagnr. 78100994.9).Asn-Phe-Phe (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba (see European Patent Publication No. 1295 and Application No. 78100994.9).

* ** *

MeAla- Tyr-(D)Trp-Lys-Val-Phe 15 (zie Verber en med., Life Sciences, 34,1371-1378 (1984) en de Europese octrooiaanvrage 82106205.6 (gepubliceerd als no. 70021)) eveneens bekend als (N-Me-Ala-Tyr-D-T rp-Lys-Val-Phe).MeAla-Tyr- (D) Trp-Lys-Val-Phe 15 (see Verber et al., Life Sciences, 34, 1371-1378 (1984) and European Patent Application 82106205.6 (published as No. 70021)) also known as ( N-Me-Ala-Tyr-DT (Lp-Lys-Val-Phe).

* * NMePhe-His(D)Trp-Lys-Val-Ala 20 (zie R.F. Nutt en med., Klin. Wochenschr. (1986) 64 (suppl.VI!) * ** * NMePhe-His (D) Trp-Lys-Val-Ala 20 (see R. F. Nutt and med., Klin. Wochenschr. (1986) 64 (suppl. VI!) * *

H-Cys-His-His- Phe-Phe(D)Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OHH-Cys-His-His-Phe-Phe (D) Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH

(zie EP-A-200,188).(see EP-A-200,188).

* * 25 X-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys- Thr-NH2 en * * X-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol waarin X een kationogene anker is, in het bijzonder 30* * X-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2 and * * X-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol wherein X is a cationic anchor , in particular 30

Ac-hArg(Eh)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-NH2 (zie EP 0363 589 A2) waarin in de hiervoor genoemde aminozuren er een brug tussen de aminozuren gemerkt met een a * aanwezig is.Ac-hArg (Eh) -Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-NH 2 (see EP 0363 589 A2) in which in the aforementioned amino acids there is a bridge between the amino acids marked with an a * .

35 De aanduiding “derivaat" omvat eveneens de overeenkomstige derivaten met een suikerrest.35 The term "derivative" also includes the corresponding derivatives with a sugar residue.

Indien somatostatinen een suikerrest bevatten, is deze bij voorkeur gekoppeld aan een N-eindstandige aminogroep en/of aan ten minste één aminogroep die in een peptidezijketen aanwezig is, meer in het bijzonder aan een N-eindstandlge aminogroep. Dergelijke verbindingen en hun bereiding zijn beschreven, bijvoorbeeld in WO 88/02756.If somatostatin contains a sugar moiety, it is preferably coupled to an N-terminal amino group and / or to at least one amino group present in a peptide side chain, more particularly to an N-terminal amino group. Such compounds and their preparation are described, for example, in WO 88/02756.

40 Onder de aanduiding octreotidederivaten vallen die derivaten welke een * * -D-Phe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-groep met een brug tussen de Cys-resten bevatten. Bijzonder aanbevolen derivaten zijn N“-[a-glucosyl-(1-4-deoxyfructosyl]-DPhr=-CysPhe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol en N“ -[β-deoxyfructosyl-DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol, elk met een brug tussen de -Cys-gedeelten, in 45 het bijzonder in acetaatzoutvorm en beschreven In respectievelijk de voorbeelden 2 en 1 van de hiervoor genoemde aanvrage.The term octreotide derivatives includes those containing a * * -D-Phe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys group with a bridge between the Cys residues. Particularly recommended derivatives are N "- [α-glucosyl- (1-4-deoxyfructosyl] -DPhr = -CysPhe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol and N" - [β-deoxyfructosyl-DPhe-Cys-Phe -DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol, each with a bridge between the -Cys portions, in particular in acetate salt form and described in Examples 2 and 1 respectively of the aforementioned application.

De somatostatinen kunnen bijvoorbeeld in vrije vorm, zoutvorm of in de vorm van complexen daarvan voorkomen. Zuuradditiezouten kunnen worden gevormd met bijvoorbeeld organische zuren, polymeerzuren en anorganische zuren. Onder zuuradditiezouten vallen bijvoorbeeld het hydrochloride en acetaten.The somatostatin may, for example, exist in free form, salt form or in the form of complexes thereof. Acid addition salts can be formed with, for example, organic acids, polymeric acids and inorganic acids. Acid addition salts include, for example, the hydrochloride and acetates.

50 Complexen worden bijvoorbeeld gevormd uit somatostatinen door toevoeging van anorganische materialen, bijvoorbeeld anorganische zouten of hydroxiden, zoals calcium- en zinkzouten en/of toevoeging van polymere, organische materialen.Complexes are formed, for example, from somatostatin by the addition of inorganic materials, for example inorganic salts or hydroxides, such as calcium and zinc salts and / or addition of polymeric organic materials.

Het acetaatzout is een aanbevolen zout voor dergelijke preparaten, in het bijzonder voor microdeeltjes die leiden tot een verminderde explosie van geneesmiddel bij het begin. Eveneens is het pamoaatzout 55 bruikbaar, in het bijzonder voor implantaten.The acetate salt is a recommended salt for such preparations, in particular for microparticles that lead to a reduced explosion of drug at the start. The pamoate salt 55 is also useful, in particular for implants.

Het pamoaat kan op een gebruikelijke wijze worden verkregen, bijvoorbeeld door emboninezuur (pamoïnezuur) met octreotide te laten reageren, bijvoorbeeld in de vorm van een vrije base. De reactie kan 5 195090 , in een polair oplosmiddel worden uitgevoerd, bijvoorbeeld bij kamertemperatuur.The pamoate can be obtained in a conventional manner, for example by reacting embonic acid (pamoic acid) with octreotide, for example in the form of a free base. The reaction can be carried out in 1950 in a polar solvent, for example at room temperature.

De somatostatinen zijn geïndiceerd voor toepassing bij de behandeling van ziekten waarbij met het langdurig toedienen van het geneesmiddel rekening moet worden gehouden, bijvoorbeeld ziekten met een etiologie omvattende of verbonden met een overmaat aan GH-secretie, bijvoorbeeld behandeling van 5 acromegalie, voor toepassing bij de behandeling van maag-darm-aandoeningen, bijvoorbeeld de behandeling of voorkoming van maagzweren, enterocutane en pancreaticocutane fistels, irriteerbaar ingewandensyndroom, dumping syndroom, waterig diarree-syndroom, acute pancreatitis en gastroenteropathische endocriene tumoren (bijvoorbeeld vipomas, GRFomas, glucagonomas, insulinomas, gastinomas en carcinoïde tumoren), evenals bloedingen in het maag-darm-stelsel, borstkanker en complicaties verbonden 10 met diabetes.The somatostatin are indicated for use in the treatment of diseases where long-term administration of the drug must be taken into account, for example diseases with an etiology comprising or associated with an excess of GH secretion, for example treatment of acromegaly, for use in the treatment of gastrointestinal disorders, for example the treatment or prevention of gastric ulcer, enterocutaneous and pancreaticocutaneous fistulas, irritable gut syndrome, dumping syndrome, aqueous diarrhea syndrome, acute pancreatitis and gastroenteropathic endocrine tumors (e.g. vipomas, GRFomas, glucagonomas, insulinomas, gastinomas and carcinoid tumors), as well as bleeding in the gastrointestinal tract, breast cancer and complications associated with diabetes.

De polymere drager kan worden verkregen uit biologisch verenigbare en biologische ontleedbare polymeren, zoals lineaire polyesters, vertakte polyesters, die lineaire ketens zijn die uitstralen van een polyolgedeelte, bijvoorbeeld glucose. Andere esters zijn die van polymelkzuur, polyglycolzuur, polyhydroxy-boterzuur, polycaprolacton, polyalkyleenoxalaat, polyalkyleenglycolesters van zuren van de Kreb’s cyclus, 15 bijvoorbeeld de citroenzuurcyclus, enz. en copolymeren daarvan.The polymeric carrier can be obtained from biocompatible and biologically decomposable polymers, such as linear polyesters, branched polyesters, which are linear chains that radiate from a polyol portion, e.g., glucose. Other esters are those of polylactic acid, polyglycolic acid, polyhydroxy butyric acid, polycaprolactone, polyalkylene oxalate, polyalkylene glycol esters of acids from the Kreb's cycle, for example the citric acid cycle, etc. and copolymers thereof.

De aanbevolen polymeren volgens deze uitvinding zijn de lineaire polyesters en polyesters met een vertakte keten.The recommended polymers of this invention are the linear polyesters and branched chain polyesters.

De lineaire polyesters kunnen worden bereid uit de α-hydroxycarbonzuren, bijvoorbeeld melkzuur en glycolzuur, door condensatie van de lactondimeren, zie bijvoorbeeld het Amerikaanse octrooischrift 20 3.773.919.The linear polyesters can be prepared from the α-hydroxycarboxylic acids, for example lactic acid and glycolic acid, by condensation of the lactone dimers, see, for example, U.S. Pat. No. 3,773,919.

Lineaire polylactide-co-glycoliden, die bij voorkeur volgens de uitvinding worden toegepast, hebben geschikt een molecuulgewicht tussen 25.000 en 100.000 en een polydispergeerbaarheid Mw/Mn van bijvoorbeeld tussen 1,2 en 2.Linear polylactide co-glycolides, which are preferably used according to the invention, suitably have a molecular weight between 25,000 and 100,000 and a polydispersibility Mw / Mn of, for example, between 1.2 and 2.

De vertakte polyesters die bij voorkeur volgens de uitvinding worden toegepast kunnen worden verkregen 25 onder toepassing van polyhydroxyverbindingen, bijvoorbeeld polyol, bijvoorbeeld glucose of mannitol, als initiator. Deze esters van een polyol zijn bekend en beschreven in het Britse octrooischrift GB 2.145.422 B. De polyol bevat ten minste 3 hydroxylgroepen en heeft een molecuulgewicht van maximaal 20.000, met ten minste 1, bij voorkeur ten minste 2, bijvoorbeeld een gemiddelde van 3 van de hydroxylgroepen van de polyol in de vorm van estergroepen, die polylactide of copolylactide ketens bevatten. Typerend wordt 30 0,2% glucose voor het initiëren van de polymerisatie gebruikt. De structuur van de vertakte polyester is stervormig. De aanbevolen polyesterketens in de lineaire en stervormige polymeerverbindingen die bij voorkeur volgens de uitvinding worden toegepast zijn copolymeren van de α-carbonzuurgedeelten, melkzuur en glycolzuur, of van de lactondimeren. De molverhoudingen van lactide:glycolide is ongeveer 75:25 tot 25:75, bijvoorbeeld 60:40 tot 40:60, waarbij van 55:45 tot 45:55, bijvoorbeeld 55:45 tot 50:50 het meest 35 wordt aanbevolen.The branched polyesters which are preferably used according to the invention can be obtained using polyhydroxy compounds, for example polyol, for example glucose or mannitol, as initiator. These polyol esters are known and described in British Patent Specification GB 2,145,422 B. The polyol contains at least 3 hydroxyl groups and has a molecular weight of at most 20,000, with at least 1, preferably at least 2, for example an average of 3 of the hydroxyl groups of the polyol in the form of ester groups containing polylactide or copolylactide chains. Typically 0.2% glucose is used to initiate the polymerization. The structure of the branched polyester is star-shaped. The preferred polyester chains in the linear and star-shaped polymer compounds that are preferably used according to the invention are copolymers of the alpha-carboxylic acid portions, lactic acid and glycolic acid, or of the lactone dimers. The molar ratios of lactide: glycolide are about 75:25 to 25:75, for example 60:40 to 40:60, with 55:45 to 45:55, for example 55:45 to 50:50, being most recommended.

De stervormige polymeren kunnen worden verkregen door reactie van een polyol met een lactide en bij voorkeur eveneens een glycolide, bij een verhoogde temperatuur en in aanwezigheid van een katalysator, die een polymerisatie onder ringopening uivoerbaar maakt.The star-shaped polymers can be obtained by reacting a polyol with a lactide and preferably also a glycolide, at an elevated temperature and in the presence of a catalyst which makes a ring-opening polymerization practicable.

Gevonden werd dat een voordeel van het polymeer van het stervormige type in de preparaten volgens 40 de onderhavige uitvinding is, dat het molecuulgewicht ervan betrekkelijk hoog kan zijn, waardoor fysische stabiliteit, bijvoorbeeld een bepaalde hardheid, aan implantaten en aan microdeeltjes wordt verleend, waardoor hun aan elkaar kleven wordt vermeden, hoewel betrekkelijk korte polylactide ketens aanwezig zijn, hetgeen leidt tot een regelbare biologische ontledingssnelheid van het polymeer die varieert van enkele weken tot 1 of 2 maanden en tot een overeenkomstige vertraagde afgifte van het peptide, hetgeen een 45 depötpreparaat daarvan bijvoorbeeld geschikt maakt voor een afgifte gedurende een maand.It has been found that an advantage of the star-type polymer in the compositions of the present invention is that its molecular weight can be relatively high, thereby imparting physical stability, e.g., a certain hardness, to implants and microparticles, thereby sticking together is avoided, although relatively short polylactide chains are present, leading to a controllable biological decomposition rate of the polymer ranging from a few weeks to 1 or 2 months and to a correspondingly delayed release of the peptide, resulting in a depot preparation thereof, for example. makes it suitable for a month's release.

De stervormige polymeren hebben bij voorkeur een gemiddeld molecuulgewicht Mw in het traject van ongeveer 10.000 tot 200.000, bij voorkeur 25.000 tot 100.000, in het bijzonder 35.000 tot 60.000 en een polydispergeerbaarheid van bijvoorbeeld 1,7 tot 3,0, bijvoorbeeld 2,0 tot 2,5. De intrinsieke viscositeiten van stervormige polymeren met Mw 35.000 en Mw 60.000 zijn respectievelijk 0,36 en 0,51 dl/g in chloroform.The star-shaped polymers preferably have an average molecular weight Mw in the range of about 10,000 to 200,000, preferably 25,000 to 100,000, in particular 35,000 to 60,000, and a polydispersibility of, for example, 1.7 to 3.0, for example 2.0 to 2 5. The intrinsic viscosities of star-shaped polymers with Mw 35,000 and Mw 60,000 are 0.36 and 0.51 dl / g in chloroform, respectively.

50 Een stervormig polymeer met een Mw 52.000 heeft een viscositeit van 0,474 dl/g in chloroform.A star-shaped polymer with an Mw 52,000 has a viscosity of 0.474 dl / g in chloroform.

De aanduidingen “microsfeer, microcapsule en microdeeltjes” zijn onderling verwisselbaar wat de uitvinding betreft en geven de inkapseling van de peptiden door het polymeer aan, bij voorkeur met het peptide verdeeld door het polymeer, dat dan een matrix voor het peptide is. In dat geval wordt bij voorkeur de aanduiding “microbol” of algemener “microdeeltje” gebruikt.The terms "microsphere, microcapsule, and microparticles" are interchangeable with regard to the invention and indicate the encapsulation of the peptides by the polymer, preferably with the peptide divided by the polymer, which is then a matrix for the peptide. In that case, the term "microsphere" or more generally "microparticle" is preferably used.

55 In terinzagelegging NL9.001.537 worden uitgebreid andere methoden beschreven om preparaten met vertraagde afgifte te bereiden.55 Publication NL9.001.537 extensively describes other methods for preparing sustained-release preparations.

De preparaten volgens de uitvinding kunnen volgens een tripel-emulsie werkwijze worden bereid.The compositions according to the invention can be prepared by a triple-emulsion method.

195090 6195090 6

Volgens een typerende methode wordt peptide, bijvoorbeeld octreotide, opgelost in een geschikt oplosmid- , del, bijvoorbeeld water en intensief in een oplossing van het polymeer, bijvoorbeeld 50/50 poly(D,L-lactide-co-glycolide) glucose in een oplosmiddel, dat geen oplosmiddel voor het peptide is, bijvoorbeeld inmethy-leenchloride, geëmulgeerd. Voorbeelden van het oplosmiddel voor het polymeermatrixmateriaal zijn o.a.According to a typical method, peptide, e.g. octreotide, is dissolved in a suitable solvent, e.g. water, and intensively in a solution of the polymer, e.g. 50/50 poly (D, L-lactide-co-glycolide) glucose in a solvent which is not a solvent for the peptide, for example emulsified in methylene chloride. Examples of the solvent for the polymer matrix material include.

5 methyleenchloride, chloroform, benzeen, ethylacetaat, enz. De verkregen water-olie-(w/o)-emulsie wordt verder in een overmaat water dat een emulgerend materiaal bevat, bijvoorbeeld een anionogeen of niet-ionogeen oppervlakactief middel of lecithine of een beschermend colloïde, bijvoorbeeld gelatine, dextrine, carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidon, polyvinylalcohol, geëmulgeerd, hetgeen een continue vorming van de tripel (w/o/w) emulsie geeft. De microdeeltjes worden gevormd door spontaan neerslaan van 10 het polymeer en gehard door verdamping van het organisch oplosmiddel. Gelatine dient ter verhindering van agglomeratie van de microbolletjes. Na sedimenteren van de microbolletjes wordt de bovenstaande vloeistof afgedecanteerd en worden de microdeeltjes gewassen met water en daarna met acetaatbuffer. Tenslotte worden de microdeeltjes gefiltreerd en gedroogd.Methylene chloride, chloroform, benzene, ethyl acetate, etc. The resulting water-oil (w / o) emulsion is further dissolved in an excess of water containing an emulsifying material, for example an anionic or non-ionic surfactant or lecithin or a protective colloid, for example gelatin, dextrin, carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, emulsified to give continuous formation of the triple (w / o / w) emulsion. The microparticles are formed by spontaneous precipitation of the polymer and cured by evaporation of the organic solvent. Gelatin serves to prevent agglomeration of the microspheres. After sedimentation of the microspheres, the supernatant is decanted off and the microparticles are washed with water and then with acetate buffer. Finally, the microparticles are filtered and dried.

Het peptide kan eveneens direct in de polymeeroplossing worden gedispergeerd, waarna de verkregen 15 suspensie met de gelatine bevattende waterfase wordt gemengd.The peptide can also be dispersed directly in the polymer solution, after which the resulting suspension is mixed with the gelatin-containing aqueous phase.

De tripel emulsiewerkwijze is bekend uit het Amerikaanse octrooischrift 4.652.441. Volgens dit octrooi-schrift wordt in een eerste stap een oplossing van een geneesmiddel (1), bijvoorbeeld somatostine in water (kolom 2, regels 31-32), innig gemengd met een overmaat van een polylactide-co-glycolide-oplossing (2) in een ander oplosmiddel, waarin het eerste oplosmiddel niet oplosbaar is, bijvoorbeeld methyleenchloride, 20 waardoor een water-in-olie-type (w/0) emulsie (3) van fijne, geneesmiddel bevattende druppeltjes van (1) in oplossing (2) wordt verkregen. In oplossing (1) wordt bovendien een zogenaamd geneesmiddel bevatten materiaal (kolom 1, regel 31) bijvoorbeeld gelatine, albumine, pectine of agar, opgelost.The triple emulsion method is known from U.S. Pat. No. 4,652,441. According to this patent, in a first step, a solution of a drug (1), for example somatostin in water (column 2, lines 31-32), is intimately mixed with an excess of a polylactide-co-glycolide solution (2) in another solvent, in which the first solvent is insoluble, for example methylene chloride, whereby a water-in-oil type (w / 0) emulsion (3) of fine, drug-containing droplets of (1) in solution (2) is obtained. In addition, in solution (1), a so-called drug-containing material (column 1, line 31), for example gelatin, albumin, pectin or agar, is dissolved.

Bij een tweede stap wordt de viscositeit van de inwendige fase (1) verhoogd door toepassing van geschikte maatregelen, zoals verhitten, afkoelen, verandering van de pH, toevoeging van metaalionen of 25 verknopen van bijvoorbeeld gelatine met aldehyde.In a second step, the viscosity of the internal phase (1) is increased by applying suitable measures such as heating, cooling, pH change, addition of metal ions or crosslinking of, for example, gelatin with aldehyde.

Volgens een derde stap wordt een overmaat water grondig gemengd met de w/0-emulsie (3) (kolom 7, regels 52-54), hetgeen leidt tot een ternaire-laagemulsie van het w/o/w-type, In de overmaat water kan desgewenst een zogenaamd emulgeermiddel aanwezig zijn (kolom 7, regel 56), gekozen uit de groep van bijvoorbeeld een aniogeen of niet-ionogeen oppervlakteactief middel, of bijvoorbeeld polyvinylpyrrolidon, 30 polyvinylalcohol of gelatine.According to a third step, an excess of water is thoroughly mixed with the w / 0 emulsion (3) (column 7, lines 52-54), which leads to a ternary layer emulsion of the w / o / w type. water may optionally be a so-called emulsifier (column 7, line 56) selected from the group of, for example, an anionic or non-ionic surfactant, or, for example, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol or gelatin.

Volgens een vierde stap wordt de "/^-emulsie onderworpen aan “in-water drogen” (regel 52). Dit betekent dat het organische oplosmiddel in de olielaag wordt gedesorbeerd ter ontwikkeling van microdeeltjes. De desorptie wordt volgens een op zichzelf bekende wijze uitgevoerd (kolom 8, regels 3-5), bijvoorbeeld door verlaging van de druk onder roeren (kolom 8, regels 5-7) of bijvoorbeeld door stikstofgas 35 door de olielaag (bijvoorbeeld methyleenchloride) (regel 19) te blazen.In a fourth step, the "/" emulsion is subjected to "in-water drying" (line 52). This means that the organic solvent is desorbed in the oil layer to develop microparticles. The desorption is carried out in a manner known per se. (column 8, lines 3-5), for example by reducing the pressure with stirring (column 8, lines 5-7) or, for example, by blowing nitrogen gas through the oil layer (for example methylene chloride) (line 19).

De gevormde microdeeltjes worden door centrifugeren of filtreren (regels 26-27) gewonnen en de bestanddelen die niet in het polymeer zijn opgenomen worden verwijderd door te wassen met water (regel 29). Desgewenst worden de microdeeltjes onder verminderde druk verwarmd teneinde een betere verwijdering van water en van oplosmiddel (bijvoorbeeld methyleenchloride uit de wand van microdeeltjes 40 (regel 30-32) te verkrijgen.The formed microparticles are recovered by centrifugation or filtration (lines 26-27) and the components that are not included in the polymer are removed by washing with water (line 29). If desired, the microparticles are heated under reduced pressure to achieve better removal of water and solvent (e.g., methylene chloride from the wall of microparticles 40 (lines 30-32).

Hoewel de hiervoor beschreven werkwijze bevredigend is voor de bereiding van de preparaten volgens de uitvinding, is echter het zogenaamde geneesmiddel bevattende materiaal, hiervoor genoemd, bijvoorbeeld gelatine, albumine, pectine of agar, nog in de verkregen microdeeltjes aanwezig.Although the above-described method is satisfactory for the preparation of the compositions according to the invention, the so-called drug-containing material mentioned above, for example gelatin, albumin, pectin or agar, is still present in the obtained microparticles.

Er werd nu gevonden dat indien het toevoegen van het geneesmiddel bevattende materiaal (=in 45 oplossing (1)) en de stap van het verhogen van de viscositeit van de inwendige fase worden vermeden en in de overmaat aan water van de ternaire "/^-emulsie de maatregel van het toevoegen van een emulgerend materiaal of een beschermend colloïde, zoals gelatine, wordt gehandhaafd, toch bevredigende microdeeltjes kunnen worden verkregen, terwijl bovendien, de microdeeltjes geen geneesmiddel bevattend materiaal meer bevatten en slechts een zeer geringe hoeveelheid methyleenchloride.It has now been found that if the addition of the drug-containing material (= in solution (1)) and the step of increasing the viscosity of the internal phase are avoided and in the excess of the ternary water emulsion the measure of adding an emulsifying material or a protective colloid, such as gelatin, is maintained, yet satisfactory microparticles can be obtained, while, moreover, the microparticles no longer contain any drug-containing material and only a very small amount of methylene chloride.

50 De uitvinding verschaft dus een werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes die worden verkregen door innig mengen van: a) een oplossing van een geneesmiddel, bij voorkeur een somatostine, in het bijzonder octreotide, in een waterig medium, bij voorkeur water of een buffer, bijvoorkeur in een gew./vol. verhouding van 0,8-4,0 g/l-120 ml, in het bijzonder 2,5/10 en in een buffer met pH 3-8, in het bijzonder een acetaatbuffer, 55 en b) een oplossing van een polymeer, bij voorkeur een polylactide-co-glycolide, zoals hiervoor genoemd, in een organisch oplosmiddel dat niet mengbaar is met het waterige medium, bijvoorbeeld methyleenchloride, 7 195090 , bij voorkeur in een gew./vol. verhouding van 40 g/90 tot 400 ml, in het bijzonder 40/100, bij voorkeur op een dusdanige wijze, dat de gew./gew. verhouding van het geneesmiddel tot het polymeer ligt tussen 1/10 tot 50, in het bijzonder is 1/16 en de volume/volume-verhouding van het waterige medium/organisch oplosmiddel 1/1,5 tot 30 is, in het bijzonder 1/10, innig mengen van de w/0-emulsie van a) in b) tezamen met 5 c) een overmaat van een waterig medium, bij voorkeur water of een buffer, bijvoorbeeld een acetaat- of fosfaatbuffer, bij voorkeur bij een pH van 3-8, die een emulgerend materiaal of een beschermend colloïde bevat, bij voorkeur in een concentratie van 0,01 tot 15,0 %, in het bijzonder gelatine, vooral in een concentratie van 0,1 tot 3%, vooral 0,5 gew.%, bij voorkeur in een vol./vol. mengsnelheidsverhouding van ab)/c) van 1/10 tot 100, in het bijzonder 1/40, 10 - zonder toevoeging van enig geneesmiddel bevattend materiaal aan de water-in-olie emulsie of door toepassing van enige tussentijdse, viscositeit verhogende stap, - harden van de embryonale microdeeitjes in de gevormde w/0 /„-emulsie door desorptie, bij voorkeur door verdamping, van het organische oplosmiddel, bij voorkeur methyleenchloride en - door isolatie, desgewenst wassen en drogen van de verkregen microdeeitjes.The invention thus provides a method for preparing microparticles obtained by intimately mixing: a) a solution of a drug, preferably a somatostin, in particular octreotide, in an aqueous medium, preferably water or a buffer, preferably in a weight / volume. ratio of 0.8-4.0 g / l-120 ml, in particular 2.5 / 10 and in a pH 3-8 buffer, in particular an acetate buffer, 55 and b) a solution of a polymer, preferably a polylactide co-glycolide, as mentioned above, in an organic solvent immiscible with the aqueous medium, for example methylene chloride, 7 195090, preferably in a weight / volume. ratio of 40 g / 90 to 400 ml, in particular 40/100, preferably in such a way that the wt / wt. the ratio of the drug to the polymer is between 1/10 to 50, in particular 1/16 and the volume / volume ratio of the aqueous medium / organic solvent is 1 / 1.5 to 30, in particular 1 / 10, intimately mixing the w / 0 emulsion of a) in b) together with c) an excess of an aqueous medium, preferably water or a buffer, for example an acetate or phosphate buffer, preferably at a pH of 3 -8, which contains an emulsifying material or a protective colloid, preferably in a concentration of 0.01 to 15.0%, in particular gelatin, especially in a concentration of 0.1 to 3%, especially 0.5 wt. %, preferably in a vol./vol. mixing speed ratio of ab) / c) from 1/10 to 100, in particular 1/40, 10 - without adding any drug-containing material to the water-in-oil emulsion or by using any intermediate viscosity-increasing step, curing the embryonic microparticles in the formed w / 0 / - emulsion by desorption, preferably by evaporation, of the organic solvent, preferably methylene chloride and - by isolation, optionally washing and drying the resulting microparticles.

15 De uitvinding verschaft eveneens de werkwijzevariant, waarbij het geneesmiddel direct in de polymeer-oplossing wordt gedispergeerd, waarna de verkregen dispersie wordt gemengd met de gelatine bevattende waterfase.The invention also provides the process variant in which the drug is directly dispersed in the polymer solution, after which the resulting dispersion is mixed with the gelatin-containing aqueous phase.

De uitvinding verschaft eveneens de microdeeitjes die volgens deze werkwijzen worden verkregen. Zoals microdeeitjes verkregen volgens de sproeidroogmethode, bevatten ze geen siliconenolie. Vergeleken met de 20 microdeeitjes die volgens het bekende tripel-emulsiewerkwijzetype worden bereid, bevatten ze geen beschermend colloïde.The invention also provides the microparticles obtained by these methods. Like microparticles obtained by the spray-drying method, they do not contain silicone oil. Compared with the 20 microparticles prepared according to the known triple emulsion process type, they do not contain a protective colloid.

Geschikt worden de preparaten volgens de uitvinding onder aseptische omstandigheden bereid of vervaardigd.Suitably the compositions according to the invention are prepared or prepared under aseptic conditions.

De preparaten volgens de uitvinding kunnen in depotvorm worden gebruikt, bijvoorbeeld als injecteerbare 25 microbolletjes of implantaten.The compositions according to the invention can be used in depot form, for example as injectable microspheres or implants.

Ze kunnen op een gebruikelijke wijze worden toegediend, bijvoorbeeld subcutaan of door intramusculaire injectie, bijvoorbeeld voor indicaties die bekend zijn voor het daarin aanwezige geneesmiddel.They can be administered in a conventional manner, for example subcutaneously or by intramuscular injection, for example for indications known for the medicine contained therein.

De preparaten met vertraagde afgifte die octreotide bevatten kunnen voor alle bekende indicaties van het octreotide of derivaten daarvan worden toegediend, bijvoorbeeld die beschreven in het Britse octrooischrift 30 2.199.829 A, de blz. 89-96, evenals voor acromegalie en borstkanker.The sustained-release preparations containing octreotide can be administered for all known indications of the octreotide or derivatives thereof, for example those described in British Pat. No. 2,199,829 A, pp. 89-96, as well as for acromegaly and breast cancer.

De microdeeitjes volgens deze uitvinding kunnen een afmeting hebben die wat diameter betreft varieert van ongeveer 1 tot 250 micron, bij voorkeur van 10 tot 200, vooral 10 tot 130 micron, bijvoorbeeld van 10 tot 90 micron. Implantaten kunnen bijvoorbeeld een afmeting van ongeveer 1 tot 10m3 hebben. De hoeveelheid geneesmiddel, dat wil zeggen peptide die in het preparaat aanwezig is hangt af van de 35 gewenste dagelijkse dosis die wordt afgegeven en dus van de biologische ontledingssnelheid van het inkapselende polymeer. De nauwkeurige hoeveelheid peptide kan door onderzoekingen van de biologische beschikbaarheid worden vastgesteld. De preparaten kunnen peptide in een hoeveelheid van ten minste 0,2, bij voorkeur 0,5 tot 20 gew.%, ten opzichte van de polymeermatrix, bij voorkeur 2,0 tot 10, in het bijzonder 3,0 tot 6 gew.% bevatten.The microparticles of this invention may have a size ranging in diameter from about 1 to 250 microns, preferably from 10 to 200, especially 10 to 130 microns, e.g. from 10 to 90 microns. For example, implants can have a size of about 1 to 10 m3. The amount of drug, i.e., peptide present in the composition, depends on the desired daily dose being delivered and thus on the biological decomposition rate of the encapsulating polymer. The precise amount of peptide can be determined by bioavailability studies. The compositions can be peptide in an amount of at least 0.2, preferably 0.5 to 20% by weight, relative to the polymer matrix, preferably 2.0 to 10, in particular 3.0 to 6,% by weight contain.

40 De afgiftetijd van het peptide uit het microdeeltje kan 1 tot 2 weken tot ongeveer 2 maanden zijn.The release time of the peptide from the microparticle can be 1 to 2 weeks to about 2 months.

Geschikt bevat het preparaat met vertraagde afgifte een somatostatine, bijvoorbeeld octreotide, in een biologische ontleedbare, biologisch verenigbare polymere drager, die, subcutaan in een dosering van 10 mg somatostatine per kg lichaamsgewicht van het dier aan een rat toegediend, een concentratie van een somatostatine in het bloedplasma van ten minste 0,3 ng/ml en bij voorkeur minder dan 20 ng/ml gedurende 45 een periode van 30 dagen of geschikt een periode van 60 dagen, geeft.Suitably, the sustained-release preparation contains a somatostatin, e.g. octreotide, in a biologically decomposable, biocompatible polymeric carrier which, administered subcutaneously at a dose of 10 mg of somatostatin to an animal's body weight, has a concentration of a somatostatin in gives the blood plasma of at least 0.3 ng / ml and preferably less than 20 ng / ml for a period of 30 days or suitably a period of 60 days.

Het is ook mogelijk dat het preparaat met vertraagde afgifte een somatostatine, bijvoorbeeld octreotide, in een biologisch ontleedbare, biologisch verenigbare, polymere drager bevat, dat, intramusculair in een dosis van 5 mg/kg lichaamsgewicht aan een konijn toegediend, een concentratie van somatostatine van ten minste 0,3 ng/ml gedurende een periode van 50 dagen en geschikt een concentratie van ten hoogste 50 20 ng/ml, geeft.It is also possible that the sustained-release preparation contains a somatostatin, e.g. octreotide, in a biologically decomposable, biocompatible, polymeric carrier which, intramuscularly administered to a rabbit at a dose of 5 mg / kg body weight, has a concentration of somatostatin of at least 0.3 ng / ml over a period of 50 days and suitably a concentration of at most 50 ng / ml.

Andere aanbevolen eigenschappen van het verkregen somatostatine, bijvoorbeeld octreotide bevattende depotpreparaten zijn afhankelijk van de toegepaste bereidingsmethoden:Other recommended properties of the somatostatin obtained, for example octreotide-containing depot preparations, depend on the preparation methods used:

Tripel emulsie-methodeTripel emulsion method

Rat 10 mg somatostatine/kg, subcutaan 55 vertraging (0-42 dagen) > 75% gemiddelde plasmaspiegel(Cp. ideaal) (0-42 dagen) 4-6,5 ng/ml 195090 8 AUC (0-42 dagen) 170-230 n g/ml x dagen 1Rat 10 mg somatostatin / kg, subcutaneous 55 delay (0-42 days)> 75% average plasma level (Cp. Ideal) (0-42 days) 4-6.5 ng / ml 195090 8 AUC (0-42 days) 170 -230 ng / ml x days 1

Konijn 5 mg somatostatine/kg, intramusculair vertraging (0-42/43 dagen) > 74% gemiddelde plasmaspiegel(Cp.ideaal) (0-42/43 dagen) 3,5-6,5 ng/ml AUC (0-42/43 dagen) 160-270 ng/ml x dagenRabbit 5 mg somatostatin / kg, intramuscular delay (0-42 / 43 days)> 74% average plasma level (Cp ideal) (0-42 / 43 days) 3.5-6.5 ng / ml AUC (0-42 / 43 days) 160-270 ng / ml x days

De uitvinding verschaft dus somatostatine, bij voorkeur octreotide en octreotideanaloge preparaten, met de 10 volgende eigenschappen: 1. een vertraging van ten minste 70%, bij voorkeur ten minste 74%, bijvoorbeeld ten minste 75%, 80%, 88% of ten minste 89% over een periode van 0 tot 42 of 43 dagen, en/of 2. een gemiddelde plasmaspiegel (CPi ideaal) van 2,5-6,5, bij voorkeur 4-6,5 ng/ml gedurende een periode van 0 tot 42 dagen, bij ratten, indien 10 mg somatostatine subcutaan wordt toegediend en/of een gemid- 15 delde plasmaspiegel van 3,5-6,5, bijvoorbeeld 4-6,5 ng/ml gedurende een periode van 0 tot 42 of 43 dagen bij een konijn indien 5 mg somatostatine intramusculair wordt toegediend, en/of 3. een AUC gedurende een periode van 0 tot 42 dagen van ten minste 160, bij voorkeur van 170-230 ng/ml x dagen voor een rat, indien 10 mg somatostatine subcutaan wordt toegediend en/of een AUC gedurende een periode van 0 tot 42 of 43 dagen van ten minste 160, bij voorkeur van 180-275, 20 bijvoorbeeld van 200 tot 275 ng/ml x dagen voor een konijn, indien 5 mg somatostatine intramusculair wordt toegediend.The invention thus provides somatostatin, preferably octreotide and octreotide analogous compositions, having the following properties: 1. a delay of at least 70%, preferably at least 74%, for example at least 75%, 80%, 88% or at least 89% over a period of 0 to 42 or 43 days, and / or 2. an average plasma level (CPi ideal) of 2.5-6.5, preferably 4-6.5 ng / ml over a period of 0 to 42 days, in rats, if 10 mg of somatostatin is administered subcutaneously and / or an average plasma level of 3.5-6.5, for example 4-6.5 ng / ml over a period of 0 to 42 or 43 days in a rabbit if 5 mg of somatostatin is administered intramuscularly, and / or 3. an AUC over a period of 0 to 42 days of at least 160, preferably of 170-230 ng / ml x days for a rat, if 10 mg of somatostatin administered subcutaneously and / or an AUC over a period of 0 to 42 or 43 days of at least 160, preferably from 180-275, for example from 200 to 275 ng / ml x days for a rabbit, if 5 mg of somatostatin is administered intramuscularly.

Voor de kwantitatieve karakterisering van de hiervoor beschreven preparaten met vertraagde afgifte wordt gebruik gemaakt van de methode van de oppervlakafwijking (AD) van F. Nimmerfall en J. Rosentha-ler; Intem.J.Pharmaceut. 32, 1-6 (1986). In het kort worden volgens de AD-methode de oppervlak-25 afwijkingen van het experimentele plasmaprofiel van een ideaal profiel dat een constant gemiddelde plasmaspiegel (=Cp.ideaai) verkregen door omzetting van het experimentele oppervlak onder de plasmaspiegel-tijdkromme (AUC) in een rechthoek met hetzelfde oppervlak berekend. Uit de procentuele oppervlakafwijking (aangeduid met AUC) wordt het percentage vertraging op de volgende wijze berekend: % vertraging = 100 x (1 - AD/AUC).For the quantitative characterization of the above-described sustained-release preparations, use is made of the method of surface deviation (AD) of F. Nimmerfall and J. Rosenthaler; Int.J.Pharmaceut. 32, 1-6 (1986). Briefly, according to the AD method, the surface deviations of the experimental plasma profile of an ideal profile that a constant average plasma level (= Cp.ideaai) are obtained by converting the experimental surface under the plasma level-time curve (AUC) to a rectangle with the same area. The percentage of delay is calculated from the percentage surface deviation (indicated by AUC) in the following way:% delay = 100 x (1 - AD / AUC).

30 Volgens deze methode wordt het volledige plasmaprofiel bepaald gedurende een van tevoren gekozen tijdsperiode gekenmerkt door een enkele getalindex.According to this method, the complete plasma profile is determined during a preselected period of time characterized by a single number index.

In Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85 (1988) 5688-5692 is in figuur 4 een plasmaspiegelprofiei van het octapeptide analoog aan somatostatine met formule * * 35 D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH2 bij ratten beschreven.In Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85 (1988) 5688-5692, Figure 4 shows a plasma mirror profile of the octapeptide analogous to somatostatin of formula * * D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val- Cys-Trp-NH 2 in rats.

Een duidelijke vergelijking kan echter niet met de plasmaspiegelwaarden van de preparaten volgens de uitvinding bij ratten, zoals hiervoor vermeld, worden gemaakt, aangezien het beschreven plasmaspiegel-profiel op een andere toedieningsmethode is gebaseerd (intramusculaire injectie) en, hetgeen nog 40 belangrijker is, het beladingsgehalte van de microcapsules (tussen 2 en 6%) en de doseringshoeveelheid voor de toediening (25 tot 50 mg porties microcapsules voor 30 dagen, hoewel voor ten minste gedurende 45 dagen bepalingen werden uitgevoerd) niet nauwkeurig zijn aangegeven. Bovendien is het type gebruikt poly(DI-lactide-co-glycolide) niet nauwkeurig beschreven.However, a clear comparison cannot be made with the plasma level values of the compositions according to the invention in rats, as mentioned above, since the plasma level profile described is based on a different method of administration (intramuscular injection) and, more importantly, the the loading content of the microcapsules (between 2 and 6%) and the dosage amount for administration (25 to 50 mg portions of microcapsules for 30 days, although determinations were made for at least 45 days) are not accurately indicated. In addition, the type of poly (DI-lactide-co-glycolide) used is not accurately described.

De beschrijvende waarde van de publicatie is dus te gering om deze als een voorpublicatie, die 45 bezwarend voor de uitvinding is, te beschouwen.The descriptive value of the publication is therefore too low to be regarded as a pre-publication, which adversely affects the invention.

De volgende voorbeelden lichten de uitvinding toe.The following examples illustrate the invention.

Het Mw van de polymeren is het gemiddelde molecuulgewicht bepaald volgens GLPC onder toepassing van polystyreen als standaard.The Mw of the polymers is the average molecular weight determined according to GLPC using polystyrene as standard.

50 Voorbeeld 150 Example 1

Men loste 1 g poly(D,L-lactide-co-glycolide)glucose, molecuulgewicht 46.000 (50:50) molair bereid volgens de werkwijze van het Britse octrooischrift 2.145.422 B, polydispergeerbaarheid ongeveer 1,7, bereid uit 0,2% glucose) onder magnetisch roeren op in 10 ml methyleenchloride, waarna men 75 mg octreotide opgelost in 0,133 ml methanol toevoegde. Het mengsel werd 1 min, innig gemengd, bijvoorbeeld met behulp 55 van een Ultra-Turax met 20.000 omwentelingen per min., waardoor een suspensie van zeer kleine kristallen van octreotide in de polymeeroplossing werd verkregen.1 g of poly (D, L-lactide-co-glycolide) glucose, molecular weight 46,000 (50:50) molar was prepared according to the method of British Patent Specification 2,145,422 B, polydispersibility about 1.7, prepared from 0.2 % glucose) with magnetic stirring in 10 ml of methylene chloride, after which 75 mg of octreotide dissolved in 0.133 ml of methanol were added. The mixture was intimately mixed for 1 minute, for example, with the aid of an Ultra-Turax at 20,000 revolutions per minute, whereby a suspension of very small crystals of octreotide in the polymer solution was obtained.

De suspensie werd met behulp van een met grote snelheid werkende turbine (Niro Atomizer) gesproeid 9 195090 ( en de kleine druppeltjes werden in een stroom warme lucht gedroogd, waardoor microdeeltjes werden verkregen. Deze microdeeltjes werden verzameld met een “zyklon” en een nacht in een vacuümoven bij kamertemperatuur gedroogd.The suspension was sprayed with the aid of a high-speed turbine (Niro Atomizer) 9 195090 (and the small droplets were dried in a stream of warm air, whereby microparticles were obtained. These microparticles were collected with a "zyklon" and overnight in dried in a vacuum oven at room temperature.

De microdeeltjes werden 5 minuten gewassen met 1/15 molair acetaatbuffer, pH 4,0 en werden weer bij 5 kamertemperatuur in een vacuümoven gedroogd, na 72 uur werden de microdeeltjes gezeefd (0,125 mm mesh), waardoor het eindproduct werd verkregen.The microparticles were washed for 5 minutes with 1/15 molar acetate buffer, pH 4.0 and were dried again in a vacuum oven at room temperature, after 72 hours the microparticles were sieved (0.125 mm mesh), whereby the final product was obtained.

De microdeeltjes werden gesuspendeerd in een drager en in een dosis van 5 mg/kg octreotide intramus-culair toegediend aan witte konijnen (chinchilla bastaard) en subcutaan in een dosis van 10 mg/kg aan mannetjesratten. Periodiek werden bloedmonsters genomen, waaruit bleek dat de plasmaspiegels tussen 10 0,3 en 10,0 ng/ml (5 mg dosis) bij konijnen en tussen 0,5 en 7,0 ng/ml gedurende 42 dagen bij ratten lagen, gemeten met radioimmunoassay (RIA) analyse.The microparticles were suspended in a carrier and administered intramuscularly at a dose of 5 mg / kg of octreotide to white rabbits (chinchilla bastard) and subcutaneously at a dose of 10 mg / kg of male rats. Blood samples were taken periodically to show that plasma levels were between 0.3 and 10.0 ng / ml (5 mg dose) in rabbits and between 0.5 and 7.0 ng / ml for 42 days in rats, measured with radioimmunoassay (RIA) analysis.

Voorbeeld 2Example 2

Microdeeltjes werden door sproeidrogen op dezelfde wijze als beschreven voor voorbeeld 1 bereid, met 15 als enige verandering dat octreotide direct in de polymeeroplossing werd gesuspendeerd, zonder toepassing van methanol.Microparticles were prepared by spray drying in the same manner as described for Example 1, with the sole change that octreotide was suspended directly in the polymer solution, without using methanol.

De microdeeltjes werden in een drager gesuspendeerd en subcutaan in een dosis van 10 mg/kg octreotide aan mannetjesratten toegediend. Periodiek werden bloedspiegels genomen waaruit bleek dat de plasmaspiegels gedurende 42 dagen tussen 0,5 en 10,0 ng/ml lagen, gemeten met radioimmunoassay (RIA) 20 analyses.The microparticles were suspended in a carrier and administered subcutaneously to male rats at a dose of 10 mg / kg octreotide. Blood levels were taken periodically, showing that plasma levels were between 0.5 and 10.0 ng / ml for 42 days, measured by radioimmunoassay (RIA) analyzes.

Voorbeeld 3Example 3

Men loste 1 g poly(D,L-lactide-co-glycolide)glucose, molecuulgewicht 46.000 (50:50 molair, bereid volgens de methode van het Britse octrooischrift 2.145.422 B, polydïspergeerbaarheid ongeveer 1,7, bereid 25 uit 0,2% glucose) op in 2,5 ml methyleenchloride, waarna men 75 mg octreotide opgelost in 0,125 ml gedeïoniseerd water toegevoegde. Het mengsel werd 1 min. innig gemengd, bijvoorbeeld met een Ultra-Turax met 20.000 omwentelingen per min. (inwendige W/O-fase).1 g of poly (D, L-lactide-co-glycolide) glucose, molecular weight 46,000 (50:50 molar), prepared according to the method of British Patent Specification 2,145,422 B, polydispersibility about 1.7 prepared from 0 was dissolved 2% glucose) in 2.5 ml of methylene chloride, after which 75 mg of octreotide dissolved in 0.125 ml of deionized water was added. The mixture was intimately mixed for 1 minute, for example with an Ultra-Turax at 20,000 revolutions per minute (internal W / O phase).

Men loste bij 50°C 1 g gelatine A op in 200 ml gedeïoniseerd water en koelde de verkregen oplossing af tot 20° C (buitenste W-fase). De W/O- en de W-fasen werden innig gemengd. Daarbij werd de W/O/-30 binnenfase afgescheiden in kleine druppeltjes, die homogeen werden gedispergeerd in de W-buitenfase. De verkregen tripel-emulsie werd langzaam 1 uur geroerd. Hierbij werd het methyleenchloride verdampt en de microcapsules werden uit de druppeltjes van de binnenfase gehard. Na afzetten van de microdeeltjes werd de bovenstaande vloeistof afgezogen en de microdeeltjes werden door filtreren onder verminderde druk gewonnen en met water gespoeld teneinde gelatine te verwijderen.1 g of gelatin A was dissolved in 200 ml of deionized water at 50 ° C and the resulting solution was cooled to 20 ° C (outer W phase). The W / O and W phases were intimately mixed. Thereby, the W / O / -30 inner phase was separated into small droplets, which were homogeneously dispersed in the W outer phase. The resulting triple emulsion was stirred slowly for 1 hour. The methylene chloride was evaporated and the microcapsules were cured from the droplets of the inner phase. After depositing the microparticles, the supernatant was suctioned off and the microparticles were collected by filtration under reduced pressure and rinsed with water to remove gelatin.

35 Het drogen, zeven, wassen en weer drogen van de microdeeltjes werd uitgevoerd op de wijze als beschreven in voorbeeld 1. De microdeeltjes werden gesuspendeerd in een drager en in een dosis van 5 mg/kg octreotide intramusculair toegediend aan witte konijnen (chinchilla bastaard) en in een dosis van 10 mg/kg subcutaan toegediend aan mannetjesratten. Periodiek werden bloedmonsters genomen, waaruit bleek dat de plasmaspiegels tussen 0,3 en 15,0 ng/ml (dosis van 5 mg) bij konijnen lagen en gedurende 40 42 dagen tussen 0,5 en 8,0 ng/ml in ratten lagen, gemeten met radioimmunoassay (RIA) analyses.The drying, sieving, washing and re-drying of the microparticles was carried out in the manner described in Example 1. The microparticles were suspended in a carrier and administered intramuscularly to white rabbits (chinchilla bastard) at a dose of 5 mg / kg octreotide and administered subcutaneously to male rats at a dose of 10 mg / kg. Blood samples were taken periodically, showing that plasma levels were between 0.3 and 15.0 ng / ml (5 mg dose) in rabbits and between 0.5 and 8.0 ng / ml in rats for 42 days, measured by radioimmunoassay (RIA) analyzes.

Voorbeeld 4Example 4

Microdeeltjes werden bereid met de tripel-emulsie-methode, op dezelfde wijze als beschreven is voor voorbeeld 3 met drie veranderingen: 45 1. men gebruikte 0,25 ml acetaatbuffer, pH 4,0 in plaats van 0,125 ml water ter bereiding van de W/O-binnenfase.Microparticles were prepared by the triple emulsion method, in the same manner as described for Example 3 with three changes: 45 1. 0.25 ml of acetate buffer, pH 4.0 instead of 0.125 ml of water was used to prepare the W / O inner phase.

2. het spoelen na verzameling van de microdeeltjes werd uitgevoerd met een 1/45 molaire acetaatbuffer, pH 4,0 in plaats van met water.2. rinsing after collecting the microparticles was performed with a 1/45 molar acetate buffer, pH 4.0 instead of with water.

3. het verder wassen van de microdeeltjes werd nagelaten.3. the further washing of the microparticles was omitted.

5050

Voorbeeld 5Example 5

Microdeeltjes werden bereid volgens de tripel-emulsiemethode, op dezelfde wijze als beschreven voor voorbeeld 4, met als enige verandering dat de W/O-binnenfase werd verkregen door toepassing van water dat 0,7% (gew./vol.) natriumchloride in plaats van acetaatbuffer bevatte.Microparticles were prepared according to the triple emulsion method, in the same manner as described for Example 4, with the only change that the W / O inner phase was obtained by using water containing 0.7% (w / v) sodium chloride instead of acetate buffer.

Claims (15)

195090 10 Voorbeeld 6 , Microdeeltjes werden op dezelfde wijze bereid als beschreven in voorbeeld 3 met als enig verschil dat de geneesmiddelverbinding direct in de polymeeroplossing werd gesuspendeerd, waarna de verkregen dispersie met de gelatine bevattende waterfase werd gemengd. 5 Voorbeeld 7 Octreotidepamoaat Men loste 10,19 g (10 mM) octreotide vrije base en 3,88 g (10 mM) emboninezuur op in 11 van een mengsel van gelijke delen water en dioxan. Het reactiemengsel werd gefiltreerd en gelyofiliseerd, waardoor 10 een geel poeder [a]20D=+7,5° (C=0,35, in DMF) van octreotidepamoaat.hydraat werd verkregen. De factor is 1,4, waarin factor het gewicht van lyofilisaat-gewicht van het daarin aanwezige octreotide is. Het pamoaat kan het octreotideacetaat dat in de microdeeltjes van de voorbeelden 1-6 aanwezig is vervangen en heeft een uitstekende stabiliteit. 15 Voorbeeld 8 Men voegde een oplossing van 1 g poly(D,L-lactide-co-glycolide) (50:50) molair, molecuulgewicht 36.100) in 20 ml methyleenchloride onder roeren toe aan een oplossing van 100 mg calcitonine in 1,5 ml methanol. De fasenscheiding werd uitgevoerd door toevoeging van 20 ml siliconenvloeistof (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs). Het verkregen mengsel werd toegevoegd aan een geroerde emulsie die bestond uit 100 ml pH 4 20 fosfaatbuffer, 400 ml n-heptaan, 4 ml Span 80 en 40 ml siliconenvloeistof (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs). Na 10 min. roeren werden de microbolletjes verzameld door filtreren onder verminderde druk en een nacht bij 37° C in een vacuümoven gedroogd. De opbrengst bedroeg 1,1 g microbolletjes die 5,9% calcitonine bevatten. 25 Voorbeeld 9 Men voegde een oplossing van 9,9 g poly(D,L-lactide-co-glycolide) (50:50) molair), Mw=44.300) in 140 ml methyleenchloride toe aan 100 mg lypressine. De dispersie werd gedurende een uur magnetisch geroerd, alvorens men 140 ml siliconenvloeistof (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs) en 2,5 ml Span 80 toevoegde. Het mengsel werd toegevoegd aan 2000 ml heptaan en 10 min. geroerd. De verkregen microcapsules werden 30 door filtreren onder verminderde druk verzameld, driemaal gewassen met heptaan en 10 min onder afzuigen gedroogd. De helft van het monster werd gewassen door 10 min. roeren in water en de andere helft werd niet gewassen. Beide monsters werden een nacht in een vacuümoven bij 30°C gedroogd. De totale opbrengst was 10,65 g microcapsules. Analyse van het gewassen monster was 0,5% lypressine en 0,6% voor het monster dat niet met water was gewassen. 35195090 Example 6, Microparticles were prepared in the same manner as described in Example 3 with the only difference that the drug compound was directly suspended in the polymer solution, after which the resulting dispersion was mixed with the gelatin-containing aqueous phase. Example 7 Octreotide pamoate 10.19 g (10 mM) of octreotide free base and 3.88 g (10 mM) of embonic acid were dissolved in 11 of a mixture of equal parts of water and dioxane. The reaction mixture was filtered and lyophilized, whereby a yellow powder [α] 20 D = + 7.5 ° (C = 0.35, in DMF) of octreotide pamoate hydrate was obtained. The factor is 1.4, wherein factor is the weight of lyophilisate weight of the octreotide present therein. The pamoate can replace the octreotide acetate present in the microparticles of Examples 1-6 and has excellent stability. Example 8 A solution of 1 g of poly (D, L-lactide-co-glycolide) (50:50) molar, molecular weight 36,100) in 20 ml of methylene chloride was added with stirring to a solution of 100 mg of calcitonin in 1.5 ml of methanol. The phase separation was performed by adding 20 ml of silicone fluid (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs). The resulting mixture was added to a stirred emulsion consisting of 100 ml of pH 4 phosphate buffer, 400 ml of n-heptane, 4 ml of Span 80 and 40 ml of silicone fluid (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs). After stirring for 10 minutes, the microspheres were collected by filtration under reduced pressure and dried overnight at 37 ° C in a vacuum oven. The yield was 1.1 g of microspheres containing 5.9% calcitonin. Example 9 A solution of 9.9 g of poly (D, L-lactide-co-glycolide) (50:50) molar), Mw = 44,300) in 140 ml of methylene chloride was added to 100 mg of lypressin. The dispersion was magnetically stirred for one hour before 140 ml of silicone fluid (Dow 360 Medical Fluid, 1000 cs) and 2.5 ml of Span 80 were added. The mixture was added to 2000 ml of heptane and stirred for 10 minutes. The resulting microcapsules were collected by filtration under reduced pressure, washed three times with heptane and dried for 10 minutes with suction. Half of the sample was washed by stirring in water for 10 minutes and the other half was not washed. Both samples were dried overnight in a vacuum oven at 30 ° C. The total yield was 10.65 g of microcapsules. Analysis of the washed sample was 0.5% lypressin and 0.6% for the sample that had not been washed with water. 35 1. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes die een geneesmiddel in een biologische ontleedbaar, 40 biologische verenigbare drager bevat, welke omvat: i. innig mengen van een water-in-olie-emulsie gevormd uit een waterig medium en een met water niet mengbaar organisch oplosmiddel die in een fase het geneesmiddel en in de andere fase een biologisch ontleedbaar, biologisch verenigbaar polymeer bevat met een overmaat aan medium, dat een emulgerend materiaal of een beschermend colloïde bevat ter vorming van een water-in-olie-in-water emulsie, zonder 45 toevoegen van enig geneesmiddel bevattend materiaal aan de water-in-olie-emulsie of toepassing van een tussentijdse viscositeit verhogende stap, ii. desorberen van het organische oplosmiddel daaruit, iii. isoleren en drogen van de verkregen micrpdeeltjes.A method for preparing microparticles containing a drug in a biologically decomposable, biologically compatible carrier, comprising: i. intimate mixing of a water-in-oil emulsion formed from an aqueous medium and an organic solvent immiscible with water containing in one phase the drug and in the other phase a biologically decomposable, biocompatible polymer with an excess of medium, which contains an emulsifying material or a protective colloid to form a water-in-oil-in-water emulsion, without adding any drug-containing material to the water-in-oil emulsion or applying an intermediate viscosity-increasing step, ii . desorbing the organic solvent therefrom, iii. isolating and drying the obtained microparticles. 2. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes die een geneesmiddelverbinding in een biologisch 50 ontleedbaar, biologisch verenigbaar polymeer bevat, welke omvat: i) innig mengen van een suspensie van een geneesmiddelverbinding gevormd uit een geneesmiddelverbinding en een niet met water mengbaar, organisch oplosmiddel dat een biologisch ontleedbaar, biologisch verenigbaar polymeer bevat met een overmaat van een waterig medium, dat een emulgerend materiaal of een beschermend colloïde bevat ter vorming van een olie-in-water-emulsie, waarbij de 55 geneesmiddelverbinding in het oliebestanddeel is gedispergeerd, zonder een materiaal toe te voegen dat een geneesmiddel bevat of een tussentijdse, viscoteit verhogende stap toe te passen, ii) desorberen van het organisch oplosmiddel daaruit, en 1 11 195090 iii) isoleren en drogen van de verkregen microdeeltjes.2. A method for preparing microparticles containing a drug compound in a biologically decomposable, biocompatible polymer, which comprises: i) intimately mixing a suspension of a drug compound formed from a drug compound and a water-immiscible, organic solvent containing a biologically decomposable, biocompatible polymer containing an excess of an aqueous medium containing an emulsifying material or a protective colloid to form an oil-in-water emulsion in which the drug compound is dispersed in the oil component without adding a material adding a drug containing or applying an intermediate viscosity-increasing step, ii) desorbing the organic solvent therefrom, and iii) isolating and drying the resulting microparticles. 3. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes die omvat het innig mengen van: a) een oplossing van een geneesmiddel in een waterig medium, en b) een oplossing van een polymeer in een organisch oplosmiddel, die niet mengbaar is met het waterige 5 medium, innig samen mengen van de water-olie-emulsie van a) en b) met c) een overmaat van een waterig medium dat een beschermend colloïde bevat, zonder een materiaal dat een geneesmiddel bevat aan de water-in-olie-emulsie toe te voegen of een tussentijdse, viscositeit verhogende stap toe te passen, harden van de embryonale microdeeltjes in de gevormde ^„-emulsie door desorptie en afscheiding van de verkregen microdeeltjes.3. A method for preparing microparticles comprising intimately mixing: a) a solution of a drug in an aqueous medium, and b) a solution of a polymer in an organic solvent that is immiscible with the aqueous medium, intimately mixing the water-oil emulsion of a) and b) with c) an excess of an aqueous medium containing a protective colloid, without adding a material containing a drug to the water-in-oil emulsion or to apply an intermediate viscosity-increasing step, curing the embryonic microparticles in the formed emulsion by desorption and separation of the resulting microparticles. 4. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het geneesmiddel een somatostatine is.Method according to claim 3, characterized in that the drug is a somatostatin. 5. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het geneesmiddel octreotide is.The method according to claim 3, characterized in that the drug is octreotide. 6. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het geneesmiddel octreotidepamoaatzout is.The method according to claim 3, characterized in that the drug is octreotide pamoate salt. 7. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het polymeer een polylactide-co-glycolide is.The method according to claim 3, characterized in that the polymer is a polylactide co-glycolide. 8. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het waterige medium water of een buffer is.The method according to claim 3, characterized in that the aqueous medium is water or a buffer. 9. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het waterige medium een buffer met een pH 3-8 is.The method according to claim 3, characterized in that the aqueous medium is a pH 3-8 buffer. 10. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat het organische oplosmiddel methyleenchloride is.The method according to claim 3, characterized in that the organic solvent is methylene chloride. 11. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes welke omvat het innig mengen van: a) een oplosmiddel van een somatostatine in water of een buffer in een gewicht volumeverhouding vam 0,8 tot 4,0 g/l tot 120 ml en 20 b) een oplossing van een polylactide-co-glycolide in een organisch oplosmiddel dat niet mengbaar is met het waterige medium, in een gew./vol.-verhouding van 40g/90 tot 400 ml, op een dusdanige wijze, dat de gewVgew.-verhouding van het geneesmiddel tot het polymeer tussen 1/10 tot 50 ligt en de vol./vol.-verhouding van het waterige medium/organische oplosmiddel 1/1,5-3,0 is, het intensief mengen van de water-olie-emulisie van a) en b) tezamen met 25 c) een overmaat aan water of een buffer dat een beschermend colloïde bevat in een volume/volume- mengsnelheidverhouding van ab)/c) van 1/10 tot 100, zonder een materiaal dat een geneesmiddel bevat aan de water-in-olie-emulsie toe te voegen of een tussetijdse, viscositeit verhogende stap toe te passen, het harden van de embryonale microdeeltjes in de gevormde w/0/w-emulsie door verdamping van het organisch oplosmiddel en afscheiding van de verkregen microdeeltjes.A method for preparing microparticles which comprises intimately mixing: a) a solvent of an aqueous somatostatin or a buffer in a weight volume ratio of from 0.8 to 4.0 g / l to 120 ml and b) a solution of a polylactide co-glycolide in an organic solvent immiscible with the aqueous medium, in a weight / volume ratio of 40 g / 90 to 400 ml, in such a way that the weight / weight ratio of the drug to the polymer is between 1/10 to 50 and the volume / volume ratio of the aqueous medium / organic solvent is 1 / 1.5-3.0, intensive mixing of the water-oil emulsion of a) and b) together with c) an excess of water or a buffer containing a protective colloid in a volume / volume mixing speed ratio of ab) / c) from 1/10 to 100, without a material containing a drug on adding the water-in-oil emulsion or applying an intermediate viscosity-increasing step, curing the embryo onal microparticles in the formed w / 0 / w emulsion by evaporation of the organic solvent and separation of the resulting microparticles. 12. Werkwijze volgens conclusie 11, met het kenmerk, dat de beschermende colloïde gelatine is.A method according to claim 11, characterized in that the protective colloid is gelatin. 13. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes, welke omvat het innig mengen van a) een oplossing van een somatostatine in een waterig medium in een gew./vol.-verhouding van 2,5 g/10 ml, en b) een oplossing van een polylactide-co-glycolide in een organisch oplosmiddel, dat niet mengbaar is met 35 het waterige medium in een gew./vol./verhouding van 40g/100 ml, op een dusdanige wijze, dat de gew./gew.-verhouding van het geneesmiddel ten opzichte van het polymeer 1/16 is en de vol./vol.-verhouding van het waterige medium/organische oplosmiddel 1/10 is, innig mengen van de water-olie-emulsie van a) in b) tezamen met, c) een overmaat van een waterig medium dat een beschermend colloïde in een concentratie van 0,01 tot 40 15,0% bevat in een volume-volume-mengselsnelheidsverhouding van ab)/c) van 1/40, zonder toevoeging van een materiaal dat een geneesmiddel bevat aan de water-in-olie-emulsie of toepassing van een tussentijdse, viscositeit verhogende stap, het harden van de embryonale microdeeltjes in de gevormde water/olie/water-emulsïe door verdamping van het organische oplosmiddel en isoleren van de verkregen microdeeltjes.A method for preparing microparticles, which comprises intimately mixing a) a solution of a somatostatin in an aqueous medium in a weight / volume ratio of 2.5 g / 10 ml, and b) a solution of a polylactide co-glycolide in an organic solvent which is immiscible with the aqueous medium in a weight / volume / ratio of 40 g / 100 ml, in such a way that the weight / weight ratio of the drug to the polymer is 1/16 and the volume / volume ratio of the aqueous medium / organic solvent is 1/10, intimately mixing the water-oil emulsion of a) in b) together with, c) an excess of an aqueous medium containing a protective colloid in a concentration of 0.01 to 40 15.0% in a volume-volume mixture speed ratio of ab) / c) of 1/40, without addition of a material which a drug containing the water-in-oil emulsion or application of an intermediate, viscosity-increasing step, curing the embryonal The microparticles in the formed water / oil / water emulsion by evaporating the organic solvent and isolating the resulting microparticles. 14. Werkwijze voor het bereiden van microdeeltjes, welke omvat het innig mengen van: a) een oplossing van octreotide in een gew./vol.-verhouding van 2,5 g per 10 ml in een buffer met een pH van 3-8, en b) een oplossing van een polylactide-co-glycolide in methylchloride in een gew./vol.-verhouding van 40 g/100 ml, op een dusdanige wijze, dat de gew./gew.-verhouding van het geneesmiddel ten opzichte 50 van polymeer 1/16 is en de voIJvol. verhouding van het waterige medium/organisch oplosmiddel 1:10 is, het innig mengen van de water-olie-emulsie van a) in b) tezamen met c) een overmaat van een buffer met een pH van 3-8, bevattende gelatine in een concentratie van 0,5 gew.% bij een vol./vol.-mengsnelheidsverhouding van ab)/c) van 1:40, - zonder een materiaal dat een geneesmiddel bevat aan de water-in-olie-emulsie toe te voegen of een 55 tussentijdse, viscositeit verhogende stap toe te passen, harden van de embryonale microdeeltjes in de 195090 12 ‘ gevormde "'/(/'''-emulsie door verdamping van het methyleenchloride, en - afscheiden, wassen en drogen van de verkregen microdeeltjes.A method for preparing microparticles, which comprises intimately mixing: a) a solution of octreotide in a weight / volume ratio of 2.5 g per 10 ml in a buffer with a pH of 3-8, and b) a solution of a polylactide-co-glycolide in methyl chloride in a weight / volume ratio of 40 g / 100 ml in such a way that the weight / weight ratio of the drug to 50 of polymer is 1/16 and the bulk. ratio of the aqueous medium / organic solvent is 1:10, intimately mixing the water-oil emulsion from a) in b) together with c) an excess of a buffer with a pH of 3-8, containing gelatin in a a concentration of 0.5% by weight at a volume / volume mixing ratio of ab) / c) of 1:40, without adding a material containing a drug to the water-in-oil emulsion or a 55 interim viscosity increasing step, curing the embryonic microparticles in the 195090 12 'formed' '/ (/' '') emulsion by evaporation of the methylene chloride, and - separating, washing and drying the resulting microparticles. 15. Microdeeltjes verkregen volgens conclusie 1.Microparticles obtained according to claim 1.