NL1005028C2 - Werkwijze voor het controleren van een enzymreactie. - Google Patents

Description

Werkwijze voor het controleren van een enzymreactie

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het controleren van een enzymreactie in een polair oplosmiddel.

In het vak wordt de snelheid van een enzymreactie 5 gecontroleerd, meestal versneld, door het toevoegen van co- factoren, zoals calcium- of magnesiumionen, of het wijzigen, meestal verhogen, van de temperatuur.

De onderhavige uitvinding beoogt het aantal wijzen waarop een enzymreactie kan worden gecontroleerd uit te brei-10 den.

Daartoe wordt de werkwijze volgens de uitvinding gekenmerkt doordat dat de enzymreactie wordt uitgevoerd in een met elektromagnetische straling behandeld polair oplosmiddel, waarbij de elektromagnetische straling een frequentie 15 heeft in het bereik van 5*107 tot 1010 Hz.

Verrassenderwijs is gebleken dat de enzymatische activiteit van een enzym kan worden gewijzigd door het gebruik van elektromagnetische straling in het voornoemde bereik. Deze verandering is niet het gevolg van een verhoging 20 van de temperatuur van het polaire oplosmiddel. Zonder aan deze theorie gebonden te zijn, wordt gemeend dat elektromagnetische straling binnen het genoemde frequentiebereik in staat is de structuur van het polaire oplosmiddel te wijzigen. Het is in de stand van de techniek bekend dat vloeistof-25 moleculen zich niet louter chaotisch bewegen, doch dat in een vloeistof enige mate van structuur voorkomt, zoals verschillende soorten clusters. Volgens aanvraagsters kan de verdeling van verschillende in de vloeistof optredende structuren worden beïnvloed door gebruik te maken van elektromagnetische 30 straling in het genoemde frequentiebereik, en kan daarmee de beschikbaarheid van het enzymsubstraat en de enzymactiviteit worden beïnvloed.

Bij voorkeur wordt de enzymreactie uitgevoerd in een waterig oplosmiddel als het polaire oplosmiddel.

1005028 2

Gebleken is dat water, in het bijzonder in de vorm van een buffer, een geschikt oplosmiddel is waarin de enzym-activiteit kan worden beïnvloed.

Aangezien verschillende enzymen verschillend op de 5 behandeling met elektromagnetische straling reageren, is het mogelijk om bij gebruik van meer dan een enzym de enzymacti-viteiten van de enzymen beter op elkaar af te stemmen.

De uitvinding zal thans worden toegelicht aan de hand van het volgende, niet-beperkende voorbeeld.

10 Voorbeeld

Het effect van bestralen op de door D-lactaatdehy-drogenase (D-LDH) gekatalyseerde reactie van D-lactaat met het co-enzym NAD+ tot pyruvaat, NADH en H* werd onderzocht onder gebruikmaking van een commercieel verkrijgbaar testpak-15 ket (Boehringer Mannheim, Duitsland). Het tijdens de door D-LDH gekatalyseerde evenwichtsreactie gevormde pyruvaat wordt, om D-lactaat volledig te laten reageren, met behulp van een tweede enzym (glutamaat-pyruvaat-transaminase (GPT)) en glutamaat omgezet.

20 De helft van de buisjes met D-LDH- en GTP-enzymop- lossingen uit het testpakket werd onder koelen met lucht gedurende 24 uur bij ca. 90 MHz bestraald bij een vermogen van ca. 3 Watt. (De gebruikte inrichting is beschreven door Everaerts F.M. et al in J. Chromatog. Libr., deel 6,: Isota-25 chophoresis, theory, instrumentation and applications, Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam (1976). De enige modificatie was dat de elektronische schakeling was voorzien van een deklaag van goud om aantasting ervan door gevormd ozon te voorkomen). Voor het oplossen van de sub-30 straten werd 50 ml gedeïoniseerd water waaraan 2,2 mg/ml NaCl was toegevoegd gedurende 7 dagen zoals hierboven beschreven behandeld. In tabel I is met een asterisk aangegeven welke oplossingen zijn bestraald.

1005028 3

TABEL I

Voorbeeld Controle

Bufferopl. pH 10 5 14,7 mg/ml L-glutaminezuur (testpakket) 1 ml 1 ml NAD-lyofilisaat1 35 mg/ml 0,2 ml* 0,2 ml GPT ca. 1100 IU 0,02 ml* 0,02 ml

Li-lactaat1 0,186 mg/ml 0,1 ml* 0,1 ml 10 Gedeïoniseerd water met 2,2 mg/ml NaCl 0,9 ml* 0,9 ml D-LDH1 ca. 3800 IU 0,02 ml* 0,02 ml 1 gedeïoniseerd water met 2,2 mg/ml NaCl 15 De omzetting van NAD+ in NADH werd spectrofotometrisch bij 340 nm gevolgd. Hieruit bleek dat de omzetting van lactaat in bestraald water versneld verloopt.

1005028

Claims (2)

1. Werkwijze voor het controleren van een enzymre-actie in een polair oplosmiddel, met het kenmerk, dat de enzymreactie wordt uitgevoerd in een met elektromagnetische straling behandeld polair oplosmiddel, waarbij de elektromag- 5 netische straling een frequentie heeft in het bereik van 5*107 tot 1010 Hz.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de enzymreactie wordt uitgevoerd in een waterig oplosmiddel als het polaire oplosmiddel. 1005028