MXPA03001434A - Metodos y composiciones para el tratamiento de la enfermedad relacionada con la inmunoglobulina e, utilizando inhibidores del factor neutrofico 1 novedoso. - Google Patents

Abstract

La presente invencion describe metodos composiciones novedosas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con IgE utilizando inhibidores de NNT-1. En una modalidad, la presente invencion se refiere a un metodo de tratamiento de las enfermedades relacionadas con IgE utilizando un agente de aglutinacion selectiva a NNT-1. En otra modalidad, la presente invencion se refiere a un metodo de tratamiento de enfermedades relacionadas con IgE utilizando un modulador de la expresion de NNT-1. Tambien se describen metodos de modulacion de los niveles de IgE, y de diagnostico, prevencion y/o tratamiento de ciertos tipos de enfermedades alergicas utilizando los inhibidores de NNT-1.

Description

METODOS Y COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD RELACIONADA CON LA I MUNOGLOBULI A E, UTILIZANDO INHIBIDORES DEL FACTOR NEUROTROFICO 1 NOVEDOSO Antecedentes Campo de la Invención La presente invención se refiere en general a métodos y composiciones novedosas para el tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE utilizando inhibidores de NNT-1. Más particularmente, la presente invención se refiere a métodos y composiciones novedosas para el tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE por la inhibición o reducción de la producción, actividad y/o expresión de un factor neurotrófico, identificado recientemente como el Factor Neurotrófico 1 Novedoso (¾NNT-1" (por sus siglas en inglés)) .

Descripción del Arte Relacionado Los factores neurotróficos son proteínas solubles, endógenas, que pueden estimular o regular la supervivencia, crecimiento, y/o plasticidad morfológica de las neuronas (véase Fallón y Laughlin, Neuroptrophic Factors, Academic Press, San Diego, CA

[1993]) . A causa de este papel fisiológico, los factores neurotróficos ya se sabe que van a ser útiles en el tratamiento de la degeneración de las Ref.145130 células nerviosas y la pérdida de la función diferenciada que resulta del daño de los nervios. Los factores neurotróficos conocidos pertenecen a varias superfamilias de proteínas diferentes de factores de crecimiento de polipéptido basado en su homología de la secuencia de aminoácidos y/o en su estructura tridimensional (MacDonald y Hendrikson, Cell, 73:421-424

[1993]). Una familia de factores neurotróficos es la familia de neurotropina. Esta familia comúnmente consiste de NGF (por sus siglas en inglés) (factor de crecimiento de los nervios), BDNF (por sus siglas en inglés) (factor neurotrófico derivado del cerebro) , MT-3 (por sus siglas en inglés) (neurotrófina-3) NT-4 (por sus siglas en inglés) (neurotrófina- ) , y NT-6 (por sus siglas en inglés) (neurotrófina-6) . El CNTF (por sus siglas en inglés) (factor neurotrófico ciliar) y LIF (por sus siglas en inglés) (factor inhibidor de la leucemia) son polipéptidos de citocina que tienen actividad neurotrófica . En virtud de sus características estructurales y componentes del receptor/ estos polipéptidos están relacionados con una familia de citocinas hematopoyéticas que incluyen la IL-6 (por sus siglas en inglés) (interleucina-6) , IL-11 (por sus siglas en inglés) ( interleucina-11 ) , G-CSF (por sus siglas en inglés) (factor estimulante de la colonia de granulocitos ) , y oncostatina-M.

Recientemente, varios factores neurotróficos que están presentes de manera natural han sido identificados con base en su actividad trófica sobre varias neuronas. Estos polipéptidos novedosos, referidos como "factores neurotróficos novedosos" o "NNT-1", se describen en la Patente U.S. No. 5,741,772 (Chang), la descripción de la cual es incorporada aquí para referencia en su totalidad. El NNT-1, una citocina de la familia IL-6, se encontró que va a ser útil en la promoción de la regeneración de las neuronas y restablecer las funciones neuronales. Además de los polipéptidos de NNT-1 novedosos, la patente de Chang describió, entre otras cosas, fragmentos de polipéptidos activos biológicamente y derivados de los mismos (es decir que tienen actividad neurotrófica) , moléculas novedosas de ácido nucléico que codifican tales polipéptidos, vectores que comprenden estas moléculas de ácido nucléico, células huésped que comprenden los vectores, anticuerpos para NNT-1, métodos de preparación de los polipéptidos de NNT-1, composiciones terapéuticas que contienen polipéptidos de NNT-1, ensayos para separar por exclusión los inhibidores de NNT-1, mamíferos transgénicos en los cuales el (los) gen (es) que codifican el equivalente humano de NNT-1 han sido alterados ("no transgénicos") y métodos de tratamiento de enfermedades y trastornos del sistema nervioso utilizando NNT-1. Además, el uso de NNT-1 para tratar ciertas enfermedades inmunológicas relacionadas con IgG e IgM fue identificado y descrito en el documento PCT WO 98/33922 pendiente, la descripción del cual también es incorporada aqui para referencia en su totalidad. En esta solicitud, fue presentada la evidencia de que los compuestos de NNT-1 pueden tener una actividad biológica de modulación del sistema inmune, y en particular, provocar un incremento en la producción de la célula B y la célula T. Por consiguiente, además de las propiedades neurotróficas, NNT-1 demuestra la actividad de estimulación de la célula B, la cual consiste de la inducción de hiperplasia linfoide y la elevación de IgG e IgM del suero. Véase también Senaldi, et al, Novel Neurotrophin-l/B CelJ-Stimulating Factor-3: A Cytokine Of The IL-6 Family, Proc. Nati. Acad. Sci . , USA, Vol. 96, pp. 11458-11463 (septiembre de 1999) . De interés particular en el área de los trastornos inmunológicos son la alergia y el asma. La alergia y el asma son enfermedades debilitantes que afligen a casi 20 por ciento de la población de los países industrializados. Por razones todavía no bien entendidas, los individuos alérgicos producen cantidades incrementadas de IgE con especificidad de aglutinación hacia los antígenos inocuos, tales como el polen, pelo de los animales, ciertos alimentos, etc., llamados colectivamente "alérgenos". Estas moléculas de IgE circulan en la sangre y se aglutinan a los receptores específicos de IgE sobre la superficie de los basófilos y los mastocitos . En una reacción alérgica, los alérgenos inhalados o ingeridos se aglutinan a IgE sobre estos mastocitos o basófilos/ reticulan las moléculas de IgE, y se agregan a los receptores subyacentes, estimulando por consiguiente a las células para que liberen histamina y otros mediadores farmacológicos de la respuesta alérgica sintomática. La IgE específica para el antígeno por consiguiente se ha mostrado que desempeña un papel clave en la fisiopatología de los trastornos alérgicos. Véase, Arm., Advances In Immunology, 51:323-383 (1992); Rosenwasser, Journal of Allergy and Clinical Immunology, 105 : S586-S591 (2000); Change, Nature Biotechnology, 18:157-162 (2000). Se ha establecido bien que al menos una característica común que distingue a los individuos alérgicos de otros son sus niveles anormalmente elevados de IgE. Actualmente no existe una cura confiable para la alergia y ningún tratamiento aprobado que corrija la sobreproducción de IgE. Los fármacos actuales para las enfermedades alérgicas, tales como antihistaminas, corticosteroides , y broncodilatadores (antagonistas del receptor ß-adrenérgico) , tratan los síntomas alérgicos y las reacciones inflamatorias concomitantes. La inmunización por desensibilización con antígenos (alérgenos), la cual es utilizada principalmente en los Estados Unidos para la rinitis alérgica, no es efectiva para aproximadamente la mitad de los pacientes tratados. Por lo tanto, un tratamiento que ubica como objetivo el proceso alérgico, que prevenga que el mismo ocurra, y que tenga un menor número de efectos laterales que los fármacos actuales, es deseable. En consecuencia, es un objeto de la presente invención proporcionar un método y composición para el tratamiento y/o prevención de las enfermedades relacionadas con IgE tales como la alergia y asma. Es un objeto adicional de la invención proporcionar un uso novedoso para los inhibidores de NNT-1 en el tratamiento de ciertas enfermedades y trastornos inmunológicos relacionados con IgE. Todavía es un objeto adicional de la invención proporcionar un método de inhibición de la producción de IgE especifico para el antígeno por la inhibición de la actividad, producción y/o expresión de NNT-1. Todavía es otro objeto de la presente invención proporcionar un método de tratamiento o prevención de la enfermedad relacionada con IgE utilizando inhibidores de NNT-1. Estos y otros objetos serán evidentes para una persona con experiencia ordinaria en el arte a partir de la presente descripción.

Breve Descripción de la Invención En una modalidad, la presente invención se refiere a un método de tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE que comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de N T-1. En otra modalidad, la presente invención se refiere a un método de tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE que comprende administrar a un paciente un inhibidor de NNT-1 el cual es capaz de inhibir la aglutinación al menos a un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: a) un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 2, 4 ó 5; b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucléico de las SEC ID NOS: 1 ó 3; c) un fragmento activo biológicamente de los polipéptidos de a) o b) ; o d) una variante que está presente de manera natural de a) , b) o c) . En otra modalidad, la presente invención proporciona un método novedoso de modulación de los niveles de IgE en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. En todavía otra modalidad, la presente invención proporciona un método novedoso para el tratamiento de una enfermedad alérgica que comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona un método de uso de un inhibidor de NNT-1 para modular los niveles de IgE en un paciente. En todavía otra modalidad, la presente invención se refiere a un método de diagnóstico de una enfermedad relacionada con IgE o de la susceptibilidad a una enfermedad relacionada con IgE que comprende: a) determinar la presencia o la cantidad de expresión de al menos un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: i) un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 2, 4, ó 5; ii) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucléico de las SEC ID NOS: 1 ó 3; iii) un fragmento del polipéptido de i) o ii) anterior; iv) una variante que esté presente de manera natural de i) , ii) o iii) ; y b) diagnosticar una enfermedad relacionada con IgE o la susceptibilidad a una enfermedad relacionada con IgE con base en la presencia o la cantidad de expresión del polipéptido, utilizando inhibidores de NNT-1.

En todavía otra modalidad, la presente invención se refiere a un método de prevención de una enfermedad relacionada con IgE que comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. En una modalidad todavia adicional/ la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de una enfermedad relacionada con IgE que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra la secuencia de ácidos nucleicos del ADNc que codifica el NNT-1 humano (SEC ID NO : 1 ) . La Figura 2 muestra la secuencia de ácidos nucleicos del ADN genómico humano para NNT-1 (SEC ID NO:3) . La Figura 3 muestra la secuencia de aminoácidos para el NNT-1 humano (SEC ID NO:l) como es traducido desde el ADNc (SEC ID NO:2). Los primeros 27 aminoácidos pueden representar una secuencia del péptido de la señal, de tal modo que la forma madura de NNT-1 empiece en la leucina indicada como el número 1. El * indica el codón de detención. La Figura 4 muestra la secuencia de ácidos nucléicos del ADNc que codifica el NNT-1 de murino (SEC ID NO: ) . La Figura 5 muestra la secuencia de aminoácidos para el NNT-1 de muríno (SEC ID NO: 5) como es traducido desde el ADNc (SEC ID NO : 4 ) . Los primeros 27 aminoácidos pueden representar una secuencia del péptido de la señal, de tal modo que la forma madura de NNT-1 de murino empiece en la leucina, indicada como el número 1. El * indica el codón de detención . La Figura 6 muestra los niveles en el suero de IgE anti-KHL en ratones Balb/c tratados durante siete dias con NNT-1 o solvente de NNT-1 como un control y en los ratones transgénicos de NNT-1 (Tg+) y en controles de la carnada (Tg-) . La Figura 7 muestra los niveles en el suero de IgE anti-KHL en ratones transgénicos de NNT-1 (Tg+) y en controles de la carnada (Tg-) a los que se les extrajo sangre los dias 7, 14 y 21.

Descripción Detallada de la Invención Se ha encontrado sorprendentemente que el NNT-1, un factor neurotrófico novedoso, también es capaz de inducir la elevación del IgE total en el suero y estimular la producción de IgE específica para el antígeno. El descubrimiento de que el NNT-1 es capaz de modular los niveles del IgE del suero fuertemente, sugiere que el NNT-1 puede estar involucrado en la patogénesis de las enfermedades relacionadas con IgE, tales como la alergia y el asma. Atacar o inhibir f rmacológicamente el NNT-1 puede representar un nuevo método terapéutico para el tratamiento y/o prevención de ciertas enfermedades y trastornos relacionados con IgE. En consecuencia, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE por la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1, tal como un anticuerpo antagonista anti-NNT-1. Está incluido específicamente en el alcance de esta invención el uso de agentes que inhiben o reducen la producción, expresión o actividad de NNT-1, incluyendo pero sin estar limitado a anticuerpos, péptidos, péptidos de fusión, oligonucleótidos, moléculas pequeñas, proteínas receptoras solubles, y otros agentes que funcionan para inhibir o reducir la actividad, producción o expresión de NNT-1, y/o los fragmentos, derivados y variantes de los polipéptidos activos biológicamente relacionados con los mismos. También están contemplados los agentes que afectan de manera semejante al receptor de NNT-1 (es decir, agentes que previenen la transducción de la señal en el receptor NNT-1) asi como agentes que modulan la expresión de NNT-1 o su receptor. Los encabezados de la sección utilizados aqui son para propósitos de organización únicamente y no van a ser interpretados como limitativos de la materia objeto descrita. Todas las referencias citadas en esta sección son incorporadas expresamente aquí para referencia.

I. Proteínas/Polipéptidos de NNT-1, Fragmentos Derivados y Variantes de los Mismos El término "proteína de NNT-1" o "polipéptido de NNT-1" como se utiliza aquí se refiere a cualquier proteína o polipéptido descrito o mencionado en, o que tiene las propiedades descritas en la Patente U.S. No. 5,471,772. ? manera de ilustración, la proteína de NNT-1 o el polipéptido de NNT-1 se refiere a: (1) una secuencia de aminoácidos codificada por las moléculas de ácido nucléico de NNT-1 como se define en cualquiera de los siguientes puntos: (a) la molécula de ácido nucléico de la SEC ID N0:1; (b) la molécula de ácido nucléico de la SEC ID NO: 3; (c) una molécula de ácido nucléico que codifica el polipéptido de la SEC ID NO: 2, o un fragmento biológicamente activo del mismo; (d) una molécula de ácido nucléico que codifica un polipéptido que es al menos 70 por ciento idéntico al polipéptido de la SEC ID NO: 2; (e) una molécula de ácido nucléico que se hibridiza bajo condiciones estrictas a cualquiera de (a) - (d) anterior; (f) una molécula de ácido nucléico que es el complemento de cualquiera de (a) - (e) anterior; y (a' ) la molécula de ácido nucléico de la SEC ID NO: 4; (b' ) una molécula de ácido nucléico que codifica el polipéptido de la SEC ID NO: 5 o un fragmento activo biológicamente del mismo; (c' ) una molécula de ácido nucléico que codifica un polipéptido que es al menos 70 por ciento idéntico al polipéptido de la SEC ID NO: 5; (d' ) una molécula de ácido nucléico que se hibridiza bajo condiciones estrictas a cualquiera de (a')~ (c' ) anteriores; y (e' ) una molécula de ácido nucléico que es el complemento de cualquiera de (a' ) - (d' ) anterior; (2) polipéptidos activos biológicamente relacionados y fragmentos y derivados de los mismos; (3) variantes alélicas que están presentes de manera natural del gen NNT-1 que resulta de una o más substituciones, deleciones, y/o inserciones de aminoácidos cuando se compara con el polipéptido de NNT-1 de la SEC ID NO: 2 o la SEC ID NO: 5, y/o (4) derivados modificados químicamente asi como variantes, variantes de empalme, derivados, y ortólogos de la secuencia de ácidos nucléicos y/o aminoácidos. Los polipéptidos de NNT-1 pueden ser polipéptidos de longitud completa que están presentes de manera natural, o polipéptidos truncados o péptidos (es decir, "fragmentos") . Los polipéptidos pueden estar en una forma madura o pueden estar fijados a un péptido de la señal natural o heterogénea. Por ejemplo, el NNT-1 de ser humano y de murino tiene péptidos de la señal de los aminoácidos -27 a -1 de las SEC ID NOS: 2 y 5, respectivamente. Los polipéptidos o fragmentos pueden ser modificados químicamente, es decir, glicosilados, fosforilados , y/o enlazados a un polímero, como se describe posteriormente, y los mismos pueden tener una metionina amino terminal, dependiendo de cómo sean preparados los mismos. Además, los polipéptidos o fragmentos pueden ser variantes del polipéptido de NNT-1 que están presentes de manera natural (es decir, puede contener una o más deleciones, inserciones, y/o substituciones de aminoácidos cuando se compara con el NNT-1 que está presente de manera natural) . Cuando se utilice aquí, el término "fragmento" se refiere a un péptido o polipéptido que es menor que la secuencia de aminoácidos de longitud completa de la proteína de NNT-1 que está presente de manera natural. El mismo puede comprender un truncamiento en la terminación amino (con o sin una secuencia directora) y/o un truncamiento en la terminación de carboxi del polipéptido descrito en la SEC ID NO: 2, variantes alélicas, ortólogos, variantes de empalme y/o variantes que tienen una o más adiciones o substituciones de aminoácidos o deleciones internas (en donde el polipéptido resultante es de al menos 6 aminoácidos o más de longitud) cuando se compara con la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2. Los fragmentos de NNT-1 pueden resultar del empalme de ARN alternativo o de la actividad de la proteasa in vivo e incluye adicionalmente las formas solubles tales como aquellas que carecen de un dominio de aglutinación de la membrana o transmembrana. Además, tales fragmentos pueden ser modificados químicamente y/o pueden ser preparados con o sin una metionina amino terminal. Cuando se utilice, el "fragmento activo biológicamente" se refiere a un fragmento que tiene, cualitativamente un tipo substancialmente semejante de actividad biológica como el polipéptido de NNT-1 maduro, de longitud completa, descrito anteriormente. Preferentemente, la actividad del fragmento es >50 , más preferentemente >65%, aún más preferentemente >80%, de la actividad del polipéptido de longitud completa, como se mide por un ensayo de actividad estándar. Algunos fragmentos ejemplares incluyen los polipéptidos en donde 1 a 20 aminoácidos son removidos ya sea de la terminación C, la terminación N, o ambas terminaciones, del polipéptido de NNT-1. Los ejemplos de la actividad biológica incluyen la capacidad para actuar como un factor de crecimiento para las neuronas {por ejemplo, las neuronas motoras y/o las neuronas del sistema simpático) o de modulación del sistema inmune (por ejemplo, provocando un incremento en la producción de la célula B y/o la célula T) . Los fragmentos y/o derivados de NNT-1 que no son por si mismos activos en los ensayos de actividad pueden ser útiles como moduladores de los receptores de NNT-1 in vitro o in vivo, o para preparar anticuerpos para los polipéptidos de NNT-1. Cuando se utilice aqui, el término "variantes alélicas" se refiere a una de varias formas alternativas posibles que están presentes de manera natural del gen, que ocupan in sitio dado sobre el cromosoma o una población de organismos . Cuando se utilice aqui, el término "derivado" se refiere a un polipéptido de NNT-1, proteína, fragmento, variante alélica, ortólogo, variante de empalme o variante del mismo que; 1) ha sido modificado químicamente, como por ejemplo, por la adición de una o más moléculas de polietilenglicol , azúcares, fosfatos, u otras de tales moléculas no fijadas de manera natural al polipéptido de NNT-1 del tipo silvestre, y/o 2) contiene una o más substituciones, deleciones, y/o inserciones de la secuencia de ácidos nucléicos o aminoácidos cuando se compara con la secuencia de aminoácidos de NNT-1 descrita en la Figura 3 (ser humano) o Figura 5 (raurino) . Cuando se utilice aqui, el término "ortólogo" se refiere a un polipéptido de otras especies que corresponde a la secuencia de aminoácidos del polipéptido de NNT-1 como se describe en la SEC ID NO: 2. Por ejemplo, los polipéptidos de NNT-1 de ratón y de ser humano son considerados ortólogos entre si. Cuando se utilice aqui, el término "variante de empalme" se refiere a una molécula de ácido nucléico, usualmente ARN, la cual es generada por el procesamiento alternativo de las secuencias de intrón en un transcrito de ARN de una secuencia de aminoácidos del polipéptido de NNT-1 como se describe en la SEC ID NO: 2. Cuando se utilice aqui, el término "variante" se refiere a un polipéptido de NNT-1 que comprende las secuencias de aminoácidos que tienen una o más substituciones, deleciones, (tales como deleciones internas y/o fragmentos) , y/o adiciones (tales como adiciones internas y/o polipéptidos de fusión) de NNT-1 cuando se compara con la secuencia de aminoácidos de NNT-1 descrita en la SEC ID NO: 2 (con o sin una secuencia directora) . Las variantes pueden estar presentes de manera natural (por ejemplo, variantes alélicas, ortólogos y variantes de empalme del polipéptido de NNT-1) o construidas artificialmente. Tales variantes de NNT-1 pueden ser preparadas a partir de las moléculas de ácido nucléico correspondientes que tienen una secuencia de ADN que varía en consecuencia de la secuencia de ADN como se describe en la SEC ID NO: 1. Por ejemplo, las variantes de NNT-1 pueden tener desde 1 hasta 100 (o más de 100) substituciones, inserciones, adiciones y/o deleciones de aminoácidos en donde las substituciones pueden ser conservadoras, no conservadoras, o cualquier combinación de las mismas. Las variantes de aminácidos de NNT-1 preferentemente son al menos 70% idénticas a ya sea la SEC ID NO: 2 o la SEC ID NO: 5, más preferentemente al menos aproximadamente 80% idénticas, aún más preferentemente al menos aproximadamente 90% idénticas. El porcentaje de la identidad de la secuencia puede ser determinada por métodos estándares que son utilizados comúnmente para comparar la semejanza en la posición de los aminoácidos de dos polipéptidos . A manera de ejemplo, utilizando un programa de computadora tal como BLAST o FASTA, los dos polipéptidos para los cuales el porcentaje de la identidad de la secuencia va a ser determinada, son alineados para correspondencia óptima de sus aminoácidos respectivos (la "extensión correspondida", la cual puede incluir la longitud completa de una o ambas secuencias, o una porción predeterminada de una o ambas secuencias) . Cada programa de computadora proporciona una penalidad por abertura "de falla" y una penalidad por hueco "de falla", y una matriz de evaluación tal como PAM 250. Una matriz de evaluación estándar (véase Dayhoff et al, en: Atlas cf Protein Sequence and Structure, vol. 5, sup. 3

[1978]) puede ser utilizada en conjunción con el programa de computadora. La identidad porcentual puede ser calculada entonces utilizando un algoritmo contenido en un programa tal como FASTA como: Número total de correspondencias idénticas X 100 [longitud de la secuencia más larga dentro de la extensión correspondiente] + [número de huecos introducidos en la secuencia más larga para alinear las dos secuencias] Los polipéptidos que son al menos 70 por ciento idénticos típicamente tendrán una o más substituciones, deleciones, y/o inserciones de aminoácidos cuando se compara con el NNT-1 del tipo silvestre. Usualmente, las substituciones serán conservadoras porque tienen un efecto pequeño o ningún efecto sobre la carga neta total, la polaridad, o la hidrofobicidad de la proteina pero opcionalmente puede incrementar la actividad de NNT-1. Las substituciones conservadoras son descritas en la Tabla I que se da enseguida.

Tabla I Substituciones de aminoácidos conservadores Básicos : argimna lisina histidina Acidos ácido glutámico ácido aspártico Polares ; glutamina asparagina Hidrofóbicos leucina isoleucina valina Aromáticos fenilalanina triptófano tirosina Pequeños : glicina alanina serina treonina metionina También están contemplados los homólogos u ortólogos de las especies de NNT-1, por ejemplo, los ortólogos de NNT-1 de una especie de mamífero tal como el perro, gato, ratón, rata, mono, caballo, cerdo, cabra, conejo, oveja y semejantes, están contemplados además del ser humano. Las secuencias del ADNc de murino y la proteína son provistos como las SEC ID NOS: 4 y 5. Como se indicó previamente, el polipéptido de NNT-1 referido aquí también incluye derivados modificados químicamente, tales como variantes de glicosilación en donde el número y/o el tipo de sitios de glicosilación ha sido alterado comparado con las secuencias de aminoácidos descritos en la SEC ID NO: 2. Por ejemplo, una variante de NNT-1 puede contener un número más grande o más pequeño de sitios de glicosilación N-enlazados que la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2. Un sitio de glicosilación N-enlazado está caracterizado por la secuencia: Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, en donde el residuo de aminoácidos designado como X puede ser cualquier residuo de aminoácidos diferente de la prolina. Alternativamente, las substituciones que eliminan esta secuencia removerán una cadena de carbohidratos N-enlazados existente. También está contemplado un rrearreglo de cadenas de carbohidratos N-enlazadas en donde uno o más sitios de glicosilación N-enlazados (típicamente aquellos que están presentes de manera natural) son eliminados y uno o más sitios N-enlazados nuevos son creados. Las variantes adicionales incluyen las variantes de cisteína, en donde uno o más residuos de cisteína son delecionados desde, o substituidos por, otro aminoácido (por ejemplo, serina) cuando se compara con la secuencia de aminoácidos descrita en la SEC ID NO: 2.

II . Acidos Nucléicos Cuando se utilice aqui, el término "NNT-1" cuando se utiliza para describir una molécula de ácido nucléico, se refiere a una molécula de ácido nucléico o fragmento del mismo, como se describió anteriormente. El término "secuencia de ácido nucléico" o "molécula de ácido nucléico" se refiere a una secuencia de ADN o ARN. El término abarca las moléculas formadas de cualquiera de los análogos base conocidos del ADN y ARN tales como, pero sin estar limitado a 4-acetilcitosina, 8-hidroxi-N6-metiladenosina, aziridinil-citosina, seudoisocitosina, 5- (carboxihidroxilmetil ) uracilo, 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouracilo, 5-carboxi-metilaminometiluracilo, dihidrouracilo, inosina, N6-iso-penteniladenina, 1-metiladenina, 1-metilseudouracilo, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2 , 2-dimetil-guanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6-metiladenina, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracilo, 5-metoxiamino-metil-2-tiouracilo, beta-D-manosilqueosina, 5' -metoxicarbonil-metiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-N6-isopenteniladenina, éster metílico del ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético, oxibutoxosina, seudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, éster metílico del ácido N-uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético, seudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, y 2, 6-diaminopurina . El término "que está presente de manera natural" o "natural" cuando se utiliza con relación a los materiales biológicos tales como las moléculas de ácido nucléico, polipéptidos, y semejantes, se refiere a materiales los cuales son encontrados en la naturaleza y no son manipulados por el ser humano. De manera semejante, "que no está presente de manera natural" o "no natural" como se utiliza aquí, se refiere a un material que no es encontrado en la naturaleza o que ha sido modificado estructuralmente o sintetizado por el ser humano. El término "condiciones estrictas" se refiere a la hibridación y lavado bajo condiciones que permiten solamente la aglutinación de una molécula de ácido nucléico tal como un oligonucleótido o sonda de la molécula de ADNc, a secuencias altamente homologas. Una solución de lavado de características estrictas es NaCl 0.015 M, Citrato de NA 0.005 M, y SDS al 0.1 por ciento utilizado a una temperatura de 55 °C - 65 °C. Otra solución de lavado de características estrictas es 0.2 X SSC y 0.1 por ciento de SDS utilizado a una temperatura de entre 55 °C - 65 °c . En donde las sondas de oligonucleótidos sean utilizadas para separar por exclusión el ADNc o los bancos genómicos, se pueden utilizar las siguientes condiciones estrictas de lavado. Un protocolo utiliza 6 X SSC con 0.05 por ciento de pirofosfato de sodio a una temperatura de 35 °C - 62 °C, dependiendo de la longitud de la sonda de oligonucleótidos. Por ejemplo, las sondas de 14 pares base son lavadas a 35-40 °C, las sondas de 17 pares base son lavadas a 45-50 °C, las sondas de 20 pares base son lavadas a 52-57 °C, y las sondas de 23 pares base son lavadas a 57-63 °C. La temperatura puede ser incrementada 2-3 °C en donde la aglutinación no especifica del fondo parece elevada. Un segundo protocolo utiliza cloruro de tetrametilamonio (TMAC) para lavar las sondas de oligonucleótidos. Una solución de lavado de condiciones estrictas es TMAC 3 M, Tris-HCl 50 mM, pH 8.0, y 0.2 por ciento de SDS. La temperatura de lavado que utiliza esta solución es una función de la longitud de la sonda. Por ejemplo, una sonda de 17 pares base es lavada a aproximadamente 45-50 °C. Las moléculas de ácidos nucléicos de NNT-1, los fragmentos, y/o los derivados que no codifican por si mismos los polipéptidos que son activos en los ensayos de la actividad, pueden ser útiles como sondas de hibridación en los ensayos de diagnóstico para probar, ya sea cualitativa o cuantitativamente, la presencia del ADN o AR de NNT-1 en el tejido o las muestras de fluido corporal del mamífero.

Las moléculas de ácido nucléico de NNT-1 que codifican los polipéptidos de NNT-1 fijados a los péptidos de la señal natural o heterogénea como se describieron aqui anteriormente también están contempladas.

III . Inhibidores de NNT-1 Cuando se utilice aqui, el término "inhibidor de NNT-1" se refiere a un agente el cual es capaz de inhibir la producción, actividad o expresión de NNT-1 (como se definió anteriormente) o su receptor. Están contemplados específicamente los agentes que se aglutinan, antagonizan, inhiben o modulan el polipéptido de NNT-1 y/o el receptor de NNT-1. También están contemplados los moduladores de la expresión que tienen un efecto ya sea sobre el polipéptido de NNT-1 o su receptor, incluyendo pero sin estar limitado a ribozimas y moléculas pequeñas. Una subclase de tales inhibidores puede ser referida como "agentes de aglutinación selectiva" o "SBAs". Cuando se utilice aqui, "agente de aglutinación selectiva" se refiere a una molécula que es capaz de aglutinarse específicamente a un polipéptido de NNT-1, fragmento, derivado o variante del mismo o al receptor de NNT-1. Los agentes de aglutinación selectiva adecuados incluyen, pero no están limitados a, anticuerpos y derivados de los mismos, polipéptidos, polipéptidos de fusión (es decir, péptidos parciales, anticuerpos parciales) proteínas receptoras solubles, moléculas pequeñas, oligonucleótidos antisentido y otras moléculas que tienen especificidad de aglutinación. Los SBAs pueden aglutinarse a una forma activa o inactiva del polipéptido de NNT-1, a cualquier porción del polipéptido de NNT-1 y/o al receptor de NNT-1. Los SBAs adecuados pueden ser preparados utilizando los métodos conocidos en el arte. Un agente de aglutinación selectiva del polipéptido de NNT-1 ejemplar de la presente invención es un anticuerpo, péptido, péptido de fusión o proteína receptora de NNT-1 soluble que es capaz de aglutinarse a una cierta porción del polipéptido de NNT-1 (como se definió ampliamente antes) y que inhibe parcial o completamente la aglutinación de NNT-1 a su receptor. Están contemplados de manera semejante los agentes de aglutinación selectiva, tales como un anticuerpo, péptido, péptido de fusión, forma inactiva de NNT-1 o una molécula pequeña que se aglutina o previene de otra manera la transducción de la señal en el sitio del receptor de NNT-1. Cuando se utilice aquí, el término "específico" y "especificidad" se refieren a la capacidad de los agentes de aglutinación selectiva para glutinarse a los polipéptidos de NNT-1 y no para aglutinarse a los polipéptidos diferentes de NNT-1. Se apreciará, sin embargo, que los agentes de aglutinación selectiva también se aglutinarán a los ortólogos del polipéptido que se describe en la SEC ID NO: 2 , es decir, las versiones interespecies de los mismos, tales como los péptidos del ratón y de la rata.

A. ANTICUERPOS Y DERIVADOS DE LOS MISMOS Una modalidad preferida de la presente invención involucra el uso de agentes de unión selectiva tales como los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpo, derivados y/o variantes de los mismos que se aglutinan ya sea al propio polipéptido de NNT-1 o su receptor. Los anticuerpos pueden ser policlonales incluyendo policlonales monoespecificos, monoclonales (MAbs) , recombinantes, quiméricos, humanizados, injertados con regiones que determinan la complementariedad ("CDR") , humanos, de cadena sencilla, y/o biespecificos, hetero-anticuerpos, así como fragmentos, variantes y derivados de los mismos que son capaces de aglutinarse a NNT-1 y que neutralizan parcial o totalmente la actividad de N T-1 o la aglutinación al receptor de NNT-1, por lo cual bloquean la transducción de la señal. Los fragmentos del anticuerpo incluyen aquellas porciones del anticuerpo que se aglutinan a un epítope sobre el polipéptido de NNT-1, un fragmento de Fv, Fab, Fab' o F(ab)', u otros fragmentos, variantes, o derivados de los mismos. Los ejemplos de tales fragmentos incluyen los fragmentos Fab y F(ab') generados por segmentación enzimática de los anticuerpos de longitud total. Otros fragmentos de aglutinación incluyen aquellos generados por técnicas de ADN recombinantes, tales como la expresión de plásmidos recombinantes que contienen secuencias de ácido nucléico que codifican regiones variables del anticuerpo. Los anticuerpos policlonales dirigidos hacia un polipéptido de NNT-1 generalmente son producidos en animales (por ejemplo, conejos o ratones) por medio de inyecciones subcutáneas o intraperitoneales múltiples de un polipéptido de NNT-1 y un adyuvante adecuado. Puede ser útil conjugar el polipéptido de NNT-1 con una proteina portadora que es inmunogénica en las especies que van a ser inmunizadas, tales como la hemocianina de lapa marina, el suero, la albúmina, tiroglobulina de bovino, o el inhibidor de tripsina de soya. También, los agentes de agregación tales como el alumbre son utilizados para mejorar la respuesta inmune. Después de la inmunización, a los animales se les extrae sangre y el suero es evaluado para verificar la concentración de los anticuerpos del polipéptido anti-NNT-1. Los anticuerpos monoclonales dirigidos hacia un polipéptido de NNT-1 son producidos utilizando cualquier método el cual proporcione la producción de moléculas de anticuerpo por las lineas celulares continuas en el cultivo. Los ejemplos de los métodos adecuados para preparar anticuerpos monoclonales incluyen los métodos del hibridoma de Kohler et al, Nature, 256: 95-497 (1975) y el método del hlbridoma de la célula B humana, Kozbor, J. Immunol . , 133: 3001 (1984); Brodeur et al, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987). También están contempladas las lineas celulares del hibridoma las cuales producen los anticuerpos monoclonales con polipéptidos de NNT-1. Los anticuerpos monoclonales de la invención pueden ser modificados para su uso como substancias terapéuticas. Una modalidad es un anticuerpo "quimérico" en el cual una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica con, o es homóloga con respecto a una secuencia correspondiente en los anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenece a una clase o subclase de anticuerpos particulares, mientras que el resto de la(s) cadena (s) es idéntico con, u homólogo con respecto a, una secuencia correspondiente en los anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpos. También están incluidos los fragmentos de tales anticuerpos, siempre que los mismos exhiban la actividad biológica deseada. Véase, la Patente U.S. No. 4, 816,567; orrison et al, Proc . Nati. ñcad. Sci.r 81 : 6851-6855 (1985) . También está contemplado el uso de un anticuerpo "humanizado", es decir, preparado para prevenir o minimizar una reacción inmune hacia el anticuerpo cuando es administrado a un paciente. Los métodos para humanizar anticuerpos no humanos son bien conocidos en el arte. Véanse por ejemplo las Patentes U.S. Nos. 5,585,089, y 5,693,762. En general, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácidos introducidos en el mismo desde una fuente que no es humana. La humanización puede ser efectuada, por ejemplo, utilizando los métodos descritos en el arte (Jones et al, Nature 321:522-525 (19869; Riechmann et al, Nature, 332:323-327 (1988) ; Verhoeyen et al, Science 239:1534-1536 (1998)), substituyendo al menos una porción de una CDR de roedor por las regiones correspondientes de un anticuerpo humano. También está abarcado por la invención el uso de anticuerpos humanos que se aglutinan a los polipéptidos de NNT-1. Utilizando animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos en la ausencia de la producción de inmunoglobulina endógena, tales anticuerpos son producidos por inmunización con un antigeno de NNT-1 {es decir, uno que tiene al menos 6 aminoácidos contiguos) , conjugados opcionalmente con un portador. Véase, por ejemplo, Jakobovits et al, Proc. Nati. Aced. Sci., 90:2551-2555 (1993), Jacobovits et al, Nature 362 : 255-258 (1993); Bruggermann et al, Year in Immuno. , 7:33 (1993) . En un método, tales animales transgénicos son producidos por incapacitación de los sitios endógenos que codifican las cadenas de inmunoglobulina pesadas y ligeras en los mismos, e insertando sitos que codifican las proteínas de cadena pesada y ligera en el genoma de los mismos. Los animales modificados parcialmente, es decir aquellos que tienen menos que el complemento total de las modificaciones, son cruzados para obtener un animal que tiene la totalidad de las modificaciones del sistema inmune deseado. Cuando se administra un inmunógeno, estos animales transgénicos producen anticuerpos con secuencias de aminoácidos humanas (en lugar por ejemplo, de murino) , incluyendo regiones variables las cuales sean inmunoespecíficas para estos antigenos. Véanse las solicitudes PCT Nos. PCT/US96/05928 y PCT/US93/06926. Los métodos adicionales son descritos en la Patente U.S. No. 5,545,807, solicitudes PCT Nos. PCT/US91/245, PCT/GB89/01207, y en EP 546073B1 y EP 546073A1. También están contemplados los anticuerpos "totalmente" humanos, en donde no solamente las secuencias de aminoácidos son humanas, sino que la glicosilación u otras modificaciones químicas de los anticuerpos también son humanas. Los anticuerpos humanos también pueden ser producidos por la expresión del ADN recombinante en las células huésped o por la expresión en hibridomas . Tales hibridomas son generados presentando el NNT-1 o un fragmento del mismo como un antígeno para un mamífero seleccionado, seguido por la fusión de las células (por ejemplo, las células del bazo) del mamífero con ciertas células del cáncer para crear líneas celulares inmortalizadas por técnicas conocidas. Los métodos empleados para generar tales líneas celulares y anticuerpos dirigidos contra la totalidad o porciones de un polipéptido de NNT-1 humano, son descritos adicionalmente en Chang (Patente U.S. No. 5,741,772). En una modalidad alternativa/ los anticuerpos humanos pueden ser producidos de bancos de exhibición del fago (Hoogenboom et al, J. Mol. Biol. 2r7:381 (1991); Marks et al, J. Mol. Biol. 222:581 (1991). Estos procesos imitan la selección inmune por medio de la exhibición de repertorios de anticuerpos sobre la superficie del bacteriófago filamentoso, y la selección subsiguiente del fago por su aglutinación a un antígeno de elección. Una de tales técnicas es descrita en la Solicitud PCT No. PCT/US98/17364, la cual describe el aislamiento de anticuerpos agonistas funcionales y de afinidad elevada hacia los receptores MPL- y msk- utilizando tal método. Los anticuerpos quiméricos, injertados con CDR, y humanizados son producidos típicamente por métodos recombínantes . Los ácidos nucleicos que codifican los anticuerpos son introducidos en las células huésped y expresados utilizando materiales y procedimientos descritos aquí. En una modalidad, los anticuerpos son producidos en células huésped de mamífero, tales como las células CHO. Los anticuerpos monoclonales (por ejemplo, humanos) pueden ser producidos por la expresión del ADN recombinante en las células huésped o por la expresión en las células del hibridoma como se describió aqui. Los anticuerpos anti- NT-1 de la invención pueden ser empleados en cualquier método de ensayo conocido, tales como los ensayos se aglutinación competitiva, los ensayos de sánd ich directos e indirectos, y los ensayos de inmunoprecipitación (Sola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp . 147-158 (CRC Press, Inc., 1987)) para la detección y cuantificación de los polipéptidos de NNT-1. Los anticuerpos se aglutinarán a los polipéptidos de NNT-1 con una afinidad la cual es apropiada para el método de ensayo que es empleado. Los agentes de aglutinación selectiva, que incluyen los anticuerpos anti-NNT-1, también son útiles para la formación de imágenes in vivo. Un anticuerpo etiquetado con una porción detectable puede ser administrado a un animal, preferentemente en la corriente sanguínea, y la presencia y localización del anticuerpo etiquetado en el huésped es evaluada. El anticuerpo puede ser etiquetado con cualquier porción que es detectable en un animal, ya sea por resonancia maqnética nuclear, radiología, u otros medios de detección conocidos en el arte. Los agentes de aglutinación selectiva de la invención, incluyendo los anticuerpos, pueden ser utilizados como substancias terapéuticas. En el área de alergia, estos agentes terapéuticos son antagonistas porque los mismos reducen o inhiben al menos una de las actividades biológicas de un polipéptido de NT-1. Por ejemplo, los anticuerpos antagonistas de la invención son anticuerpos (o fragmentos de los mismos) los cuales son capaces de aglutinarse específicamente a un polipéptido de NNT-1 (o su receptor) o que son capaces de inhibir o eliminar una actividad funcional del NNT-1 in vivo o in vitro. En una modalidad preferida, el agente de aglutinación selectiva, por ejemplo, un anticuerpo antagonista, inhibirá la actividad funcional de un polipéptido de NNT-1 en al menos aproximadamente 50%, y preferentemente en al menos aproximadamente 80%. En otra modalidad, el agente de aglutinación selectiva puede ser un anticuerpo del polipéptido de NNT-1 que sea capaz de interactuar con un partícipe de aglutinación de NNT-1 (un ligando o receptor) por lo cual se inhibe o elimina la actividad de NNT-1 in vitro e in vivo. Los agentes de aglutinación selectiva son identificados por ensayos de separación por exclusión los cuales son bien conocidos en el arte .

B. PEPTIDOS Y DERIVADOS DE LOS MISMOS También está contemplado por la presente invención el uso de péptidos, péptidos modificados y péptidos de fusión que sean capaces de aglutinarse específicamente a los polipéptidos de NNT-1, fragmentos, derivados, variantes de los mismos y/o al receptor de NNT-1. Están contemplados específicamente los péptidos que pueden ser fusionados a un polipéptido homólogo para formar un omodímero o a un polipéptido eterólogo para formar un heterodímero . El péptido heterólogo y los polipéptidos incluyen, pero no están limitados a, un polipéptido o péptido que incrementa la estabilidad, tal como una región constante de inmunoglobulina ("el dominio Fe") y que se enlace a polímeros tales como polietilenglicol ("PEG") y dextrano. Cuando se construyen junto con una proteína terapéutica, un dominio de Fe, por ejemplo, puede proporcionar una vida media más prolongada o incorporar funciones tales como la aglutinación de un receptor de Fe. Tales modificaciones son descritas con detalle en una solicitud de patente titulada, "Péptidos Modificados como Agentes Terapéuticos", U.S. No. de Serie 09/428,082, Solic. PCT No. WO.99/25044, la cual es incorporada aquí para referencia en su totalidad.

IV. COMPOSICIONES TERAPEUTICAS Y ADMINISTRACION DE LAS MISMAS Cuando se utilicen aquí, los términos "cantidad efectiva" y "cantidad efectiva terapéuticamente" se refieren a la cantidad de un inhibidor de NNT-1 necesario para soportar una o más actividades biológicas de: 1) inhibición o reducción de la expresión, actividad o producción del NNT-1; 2) inhibir o reducir la capacidad del polipéptido de NNT-1 para aglutinarse a su receptor; 3) antagonizar el polipéptido de NNT-1 y/o su receptor; 4) reducción de los niveles in vivo de NNT-1; y/o 5) reducción del nivel en el suero de IgE. Los métodos de tratamiento de varias enfermedades o trastornos relacionados con IgE que utilizan las composiciones terapéuticas que contienen los inhibidores de NNT-1 están dentro del alcance de la presente invención. Tales composiciones pueden comprender una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1 mezclado con un portador aceptable farmacéuticamente. El material portador puede ser agua para inyección, preferentemente suplementada con otros materiales comunes en soluciones para administración a los mamíferos . Típicamente, un compuesto terapéutico inhibidor de NNT-1 será administrado en la forma de una composición que comprende un inhibidor de NNT-1 purificado en conjunción con uno o más portadores, excipientes, o diluyentes aceptables fisiológicamente. La solución salada amortiguada neutral o la solución salada mezclada con albúmina del suero son portadores apropiados ejemplares. Preferentemente, el producto es formulado como un liofilizado utilizando los excipientes apropiados (por ejemplo, sucrosa) . Otros portadores, diluyentes, y excipientes estándares pueden ser incluidos cuando se desee. Una composición ejemplar comprende el amortiguador de citrato de aproximadamente pH 4.0-4.5, el cual puede incluir además NaCl. Las composiciones de NNT-1 pueden ser administradas sistémicamente de manera parenteral . Alternativamente, las composiciones pueden ser administradas intravenosa o subcutáneamente. Cuando se administran sistémicamente, las composiciones terapéuticas para su uso en esta invención pueden estar en la forma de una solución acuosa aceptable parenteralmente, libre de pirógenos. La preparación de tales soluciones de proteina aceptables farmacéuticamente, con respecto al pH, isotonicidad, estabilidad y semejantes, está dentro de la experiencia en el arte. Las formulaciones terapéuticas de las composiciones del inhibidor de NNT-1 útiles para practicar la presente invención pueden ser preparadas para almacenamiento por el mezclado de la composición seleccionada que tiene el grado deseado de pureza con portadores, excipientes, o estabilizadores aceptables fisiológicamente, opcionales {Remington' e , Pharmaceutical Sciences, 18/a. edición, A. R. Gennaro, ed. , Mack Publishing Company

[1990]) en la forma de una torta liofilizada o una solución acuosa. Los portadores, excipientes, o estabilizadores aceptables no son tóxicos para los receptores o pacientes y son preferentemente inertes a las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen amortiguadores tales como fosfato, citrato, u otros ácidos orgánicos; antioxidantes tales como ácido ascórbico; polipéptidos de peso molecular bajo; proteínas, tales como la albúmina del suero, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; aminoácidos tales como la glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina; monosacáridos , disacáridos, y otros carbohidratos incluyendo glucosa, mañosa, o dextrinas; agentes quelantes tales como EDTA; alcoholes de azúcar tales como manitol o sorbitol; contraiones formadores de sales tales como el sodio; y/o agentes tensioactivos no iónicos tales como Tween, Pluronics o PEG. La composición inhibidora de NNT-1 que va a ser utilizada para la administración in vivo debe ser estéril. Esto es efectuado fácilmente por filtración a través de membranas de filtración estériles. En donde la composición inhibidora de NNT-1 es liofilizada, la esterilización utilizando estos métodos puede ser llevada a cabo ya sea previo a, o a continuación de, la liofilización y reconstitución. La composición para la administración parenteral comúnmente será almacenada en la forma liofilizada o en solución. Las composiciones terapéuticas generalmente son colocadas en un recipiente que tiene una abertura de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o ampolleta de solución intravenosa que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección epidérmica. La ruta de administración de la composición es de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo, oral, inyección o infusión por las rutas intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intraocular, intra-arterial, o intralesional, o por sistemas de liberación sostenida o un dispositivo de implante el cual puede involucrar opcionalmente el uso de un catéter. En donde sea deseable, las composiciones pueden ser administradas de manera continua por infusión, inyección del bolo o por el dispositivo de implante. Alternativa o adicionalmente la composición inhibidora de NNT-1 puede ser administrada localmente por medio de implante en el área afectada de una membrana, esponja, u otro material apropiado sobre el cual la composición ha sido adsorbida. En donde un dispositivo de implante es utilizado, el dispositivo puede ser implantado en cualquier tejido u órgano adecuado, tal como, por ejemplo, en un ventriculo cerebral o en el parénquima del cerebro, y el suministro de una composición inhibidora de NNT-1 puede ser directamente a través del dispositivo por medio del bolo o administración continua, o por medio de un catéter utilizando la infusión continua.

Las composiciones inhibidoras de NNT-1 pueden ser administradas en una formulación o preparación de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de las preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices poliméricas semipermeables en la forma de artículos conformados, por ejemplo películas, o microcápsulas . Las matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles, polilactidas (U.S. 3,773/919, EP 58,481), copolimeros de ácido L-glutámico y gamma etil-L-glutamina (Sidman et al, Biopolymers, 22: 547-556

[1983]), poli (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al, J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277

[1981] y Langer, Chem. Tech., 12: 98-105

[1982]), acetato de vinilo etileno (Langer et al, supra) o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutirico (EP 133,988) . Las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, los cuales pueden ser preparados por cualquiera de los diversos métodos conocidos en el arte (por ejemplo, DE 3,218,121; Epstein et al, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 82: 3688-3692

[1985]; Hwang et al, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 77: 4030-4034

[1980]; EP 52, 322; EP 36,676; EP 88, 046; EP 143, 949) . En algunos casos, puede ser deseable utilizar las composiciones inhibidoras de NNT-1 de una manera ex vivo, es decir, tratar las células o tejidos que han sido removidos del paciente y subsiguientemente son implantados entonces de regreso al paciente.

En otros casos, las composiciones inhibidoras de NNT-1 pueden ser suministradas a través implante en ciertas células de los pacientes que han sido diseñadas genéticamente para expresar y secretar un inhibidor de NNT-1. Tales células pueden ser células animales o humanas, y pueden ser derivadas del propio tejido del paciente o de otra fuente, ya sea humana o no humana. Opcionalmente, las células pueden ser inmortalizadas. Las células pueden ser implantadas en el cerebro, la glándula adrenal o en otros tejidos u órganos del cuerpos adecuados del paciente. En ciertas situaciones, puede ser deseable usar métodos de terapia genética para la administración de inhibidores de NNT-1 a los pacientes que padecen de ciertos trastornos inmunológicos . En estas situaciones, las hebras antisentido del ADN genómico, ADNc, y/o ADN sintético que codifican el inhibidor de NNT-1 o un fragmento o variante del mismo, pueden estar enlazadas operativamente a un promotor constitutivo o inducible que es activo en el tejido en el cual la composición será inyectada. Este oligonucleótido del inhibidor de NNT-1 antisentido, ya sea insertado en un vector, o solo sin un vector, puede ser inyectado directamente. De manera alternativa, una construcción de ADN del inhibidor de NNT-1 antisentido puede ser inyectada directamente en el tejido muscular en donde puede ser recibida en las células y expresada en las células, siempre que el ADN del inhibidor de NNT-1 antisentido esté enlazado operativamente a un promotor que sea activo en el tejido muscular tal como el promotor del citomegalovirus (CMV (por sus siglas en inglés) ) , el promotor del virus de sarcoma de Rous (RSV (por sus siglas en inglés) ) , o el promotor de creatina cinasa del músculo. Típicamente, la construcción de ADN puede incluir (además del ADN del inhibidor de NNT-1 anti-sentido y un promotor) , la secuencia del vector obtenida de los vectores tales como el vector del adenovirus, el vector del virus adeno-asociado, un vector retroviral, y/o un vector del virus del herpes. La construcción de ADN/vector pueden ser mezclada con u (os) portador (es) aceptable (s) f rmacéuticamente para la inyección. Una cantidad efectiva de la(s) composició (es ) del inhibidor de NNT-1 que van a ser empleadas terapéuticamente dependerá, por ejemplo, de los objetivos terapéuticos tales como la indicación para la cual el inhibidor de NNT-1 está siendo utilizado, la ruta de administración, y la condición del paciente. En consecuencia, será necesario para el terapeuta valorar la dosificación y modificar la ruta de administración cuando se requiera para obtener el efecto terapéutico óptimo. Típicamente, el médico administrará la composición inhibidora de NNT-1 hasta que se alcance una dosificación que logre el efecto deseado. La composición inhibidora de NNT-1 pueden ser administrada por lo tanto como una dosis única, o como dos o más dosis (las cuales pueden contener o no la misma cantidad del inhibidor de NNT-1 ) durante el transcurso del tiempo, o como una infusión continua por medio del dispositivo de implante o catéter. Cuando se lleven a cabo estudios adicionales, la información surgiré con respecto a los niveles de dosificación apropiados para el tratamiento de varias condiciones en varios pacientes, y el trabajador con experiencia ordinaria, considerando el contexto terapéutico, el tipo de desorden bajo tratamiento, la edad y la salud general del receptor, será capaz de averiguar la dosificación apropiada .

V. CONDICIONES QUE VAN A SER TRATADAS CON LAS COMPOSICIONES DEL INHIBIDOR DE NNT-1 Puesto que el NNT-1 es expresado en las células del sistema inmune y en las células hematopoyéticas, los inhibidores de NNT-1 pueden ser útiles para tratar enfermedades provocadas por trastornos inmune y/o enfermedades provocadas por trastornos del sistema hematopoyético . Específicamente, los inhibidores de NNT-1 pueden ser utilizados para tratar a los pacientes que sufren de las enfermedades y trastornos inmunes relacionados con IgE. Existen varios trastornos inmune relacionados con IgE primarios que son objetivos potenciales para los inhibidores de NNT-1. Los ejemplos de tales enfermedades incluyen, pero no están limitadas a, las enfermedades alérgicas del Tipo I, rinitis alérgica, eccema, dermatitis, polinosis, dermatitis, choque anafiláctico y asma. Otras enfermedades o trastornos influidos por la disfunción de las respuestas alérgicas están abarcados dentro del alcance de la invención. El descubrimiento de que el NNT-1 estimula la producción de IgE específica para el antígeno sugiere de manera importante que el NNT-1 está involucrado específicamente en la patogénesis de la alergia. Inhibiendo o reduciendo significativamente la actividad, expresión o producción de NNT-1 utilizando los inhibidores de NNT-1, se puede reducir el nivel en el suero del IgE. Una reducción en los niveles de IgE en el suero se ha demostrado que reduce los síntomas de la enfermedad relacionada con IgE. Una lista no exclusiva de las enfermedades relacionadas con IgE agudas y crónicas adicionales, las cuales pueden ser tratadas, diagnosticadas, mejoradas o prevenidas utilizando los inhibidores de NNT-1 incluyen: Enfermedades que involucran la proliferación celular anormal, incluyendo, pero sin estar limitado a, cáncer, arterieesclerosis y restenosis vascular. Otras enfermedades influidas por la proliferación inapropiada de células también están abarcadas dentro del alcance de la invención. Enfermedades y condiciones que se relacionan con la disfunción del sistema inmune, incluyendo, pero sin estar limitado a, artritis reumatoide, artritis psoriática, artritis inflamatoria, osteoartritis, enfermedad inflamatoria de las articulaciones, enfermedad autoinmune, esclerosis múltiple, lupus, diabetes, enfermedad inflamatoria del intestino, rechazo de trasplante, y enfermedad del huésped contra el injerto. Otras enfermedades influidas por la disfunción del sistema inmune están abarcadas dentro del alcance de la invención. Las enfermedades y trastornos reproductivos, incluyen pero no están limitadas a, infertilidad, aborto, parto y expulsión prematuros, y endometriosis . Otras enfermedades del sistema reproductivo están abarcadas dentro del alcance de la invención. Otras enfermedades provocadas o relacionadas por niveles indeseables de IgE están abarcadas dentro del alcance de la invención.

VI. DIAGNOSTICO Y OTROS USOS RELACIONADOS DE LOS INHIBIDORES DE NNT-1 Además de su uso como substancias terapéuticas, las composiciones del inhibidor de NNT-1 descritas aqui pueden tener los usos relacionados con IgE adicionales. Por ejemplo, estas composiciones pueden ser utilizadas adicionalmente para propósitos de diagnóstico in vivo e in vitro, tales como en la forma etiquetada para detectar la presencia de NWT-1 y/o IgE en un fluido corporal . Los inhibidores de NNT-1, particularmente los anticuerpos, también pueden ser empleados en cualquier método de ensayo conocido, tales como los ensayos de aglutinación competitivos, ensayos sandwich directos e indirectos, y los ensayos de inmunoprecipitación (Sola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp . 147 - 158 (CRC Press, Inc., 1987)) para la detección y cuantificación de polipéptidos de NNT-1 como un indicador de los niveles de IgE en el suero. Los anticuerpos se aglutinarán a los polipéptidos de NNT-1 con una afinidad que es apropiada para el método de ensayo que es empleado. Para aplicaciones de diagnóstico, en ciertas modalidades, los inhibidores de NNT-1 pueden ser etiquetados con una porción detectable. La porción detectable puede ser cualquiera que sea capaz de producir, ya sea directa o indirectamente, una señal detectable. Por ejemplo, la porción detectable puede ser un radioisótopo, tal como 3H, 14C, 32P, 3S, o l2íI, un compuesto fluorescente o quimioluminiscente, tal como isotiocianato de fluoresceina, rodamina, o luciferina; o una enzima, tal como fosfatasa alcalina, ß-galactosidasa, o peroxidasa de rábano picante (Bayer et al, Meth. Enz., 184:138-163 (1990)). Los ensayos de aglutinación competitiva están basados en la capacidad de un estándar etiquetado (por ejemplo, un polipéptido de NNT-1, o una porción reactiva inmunológicamente del mismo) para competir con el analito de la muestra de prueba (un polipéptido de NNT-1) para aglutinación con una cantidad limitada del anticuerpo anti NNT-1. La cantidad de un polipéptido de NNT-1 en la muestra de prueba es inversamente proporcional a la cantidad del estándar que llega a ser aglutinada a los anticuerpos. Para facilitar la determinación de la cantidad del estándar que llegó a ser aglutinado, los anticuerpos típicamente son insolubilizados antes o después de la competición, de modo que el estándar y el analito que son aglutinados a los anticuerpos pueden ser separados convenientemente del estándar y el analito el cual permaneció no aglutinado. Los ensayos sándwich típicamente involucran el uso de dos anticuerpos, cada uno capaz de aglutinación a una porción inmunogénica diferente, o epitope, de la resina que va a ser detectada y/o cuantificada . En un ensayo sándwich, el analito de la muestra de prueba es aglutinado típicamente por un primer anticuerpo el cual es inmovilizado sobre un soporte sólido, y después de esto un segundo anticuerpo se aglutina al analito, formando asi un complejo de tres partes insoluble. Véase, por ejemplo, la Patente U.S. No. 4,376,110. El segundo anticuerpo puede ser etiquetado por si mismo con una porción detectable (ensayos sándwich directos) o puede ser medido utilizando un anticuerpo de anti-inmunoglobulina que está etiquetado con una porción detectable (ensayos sándwich indirectos) . Por ejemplo, un tipo de ensayo sándwich es un ensayo inmunosorbente enlazado a la enzima (ELISA (por sus siglas en inglés) ) , en tal caso la porción detectable es una enzima. Los ensayos descritos posteriormente proporcionan ejemplos de los métodos útiles para la identificación de compuestos que podrían inhibir la actividad de N T-1. Para facilidad de lectura, la siguiente definición es utilizada aqui para describir los ensayos: "Molécula (s) de Prueba" se refiere (n) a la(s) molécula (s) que están bajo evaluación como in inhibidor de NNT-1, típicamente en virtud de su capacidad potencial para bloquear la interacción de NNT-1 con su receptor . El receptor NNT-1 puede ser aislado, por ejemplo, por la clonación de expresión utilizando NNT-1 etiquetado (por ejemplo, yodado) . Varios tipos de ensayos in vitro que utilizan la proteina purificada pueden ser llevados a cabo para identificar aquellos compuestos que alteran la actividad de NNT-1. Tal alteración puede ser efectuada por un compuesto que inhibe típicamente la interacción de NNT-1 con su receptor . En un ensayo, la proteina de NNT-1 purificada o un fragmento de la misma (preparada por ejemplo utilizando los métodos descritos anteriormente) puede ser inmovilizada por fijación al fondo de las cavidades de una placa de microtitulación . El receptor de NNT-1 radioetiquetado, asi como la(s) molécula (s) de prueba, pueden ser agregados ya sea uno a la vez o simultáneamente a las cavidades. Después de la incubación, las cavidades pueden ser lavadas y contadas utilizando un contador de centelleos para la radioactividad, para determinar el grado de aglutinación del receptor/NNT-1 en la presencia de la molécula de prueba. Típicamente, la molécula será probada arriba de una gama de concentraciones, y una serie de "cavidades" de control que carecen de uno o más elementos de los ensayos de prueba pueden ser utilizadas para exactitud en la evaluación de los resultados. Una variación de este ensayo involucra la fijación del receptor a las cavidades, y agregar el NNT-1 radioetiquetado en compañía de la molécula de prueba a las cavidades. Después de la incubación y lavado, las cavidades pueden ser contadas para verificar la radioactividad. Varios medios que incluyen radioetiquetación están disponibles para "marcar" el NNT-1. Por ejemplo, la proteina de NNT-1 puede ser radioetiquetada utilizando 125-1 o 35-S.

Alternativamente, una proteina de fusión de NNT-1 en donde el ADN que codifica NNT-1 está fusionado a la secuencia de codificación de un péptido tal como el epitope de c-myc. La proteina de fusión de NNT-l-myc puede ser detectada fácilmente con los anticuerpos disponibles comercialmente dirigidos contra yc. Una alternativa al tipo de ensayos de aglutinación de placa de microtitulación comprende la inmovilización ya sea de NNT-1 o su receptor sobre perlas de agarosa, perlas acrilicas u otros tipos de tales substratos inertes. El substrato inerte que contiene el NNT-1 o su receptor puede ser colocado en una solución que contiene la molécula de prueba en compañía del componente complementario (ya sea el receptor o la proteina de NNT-1) el cual ha sido radioetiquetado o etiquetado fluorescentemente; después de la incubación, el substrato inerte puede ser precipitado por centrifugación, y la cantidad de aglutinación entre NNT-1 y el receptor puede ser evaluada utilizando los métodos descritos anteriormente. De manera alternativa, el complejo de substrato inerte puede ser inmovilizado en una columna y la molécula de prueba y el componente complementario pasados sobre la columna. La formación del complejo del receptor/NNT-1 puede ser evaluada entonces utilizando cualquiera de las técnicas descritas anteriormente, es decir, radioetiquetación, aglutinación del anticuerpo, o semejantes.

Otro tipo de ensayo in vitro que es útil para identificar una molécula para inhibir la actividad de NNT-1 es el sistema de ensayo Biacore (Pharmacia, Piscataway, NJ) utilizando un sistema detector de resonancia del plasmon superficial y siguiendo el protocolo del fabricante. Este ensayo involucra esencialmente la aglutinación covalente de ya sea NNT-1 o su receptor a un chip sensor recubierto con dextrano el cual está localizado en un detector. La molécula de prueba y el componente complementario pueden ser inyectados entonces en la cámara que contiene el chip sensor ya sea simultánea o subsiguientemente, y la cantidad de aglutinación del receptor/NNT~l puede ser evaluada con base en el cambio en la masa molecular la cual está asociada físicamente con el lado recubierto del dextrano del chip sensor; el cambio en la masa molecular puede ser medido por el sistema detector. En algunos casos, puede ser deseable evaluar dos o más moléculas de prueba conjuntamente para su uso en la reducción o inhibición de la actividad de NNT-1. En estos casos, los ensayos descritos anteriormente pueden ser modificados fácilmente agregando tal (es) molécula(s) adicional ( es ) ya sea simultáneamente con, o subsiguientemente a, la primera molécula de prueba. El resto de las etapas en el ensayo puede ser como se describió anteriormente. Los inhibidores de NNT-1 descritos aquí, incluyendo los anticuerpos anti-NNT-1, también pueden ser útiles para la formación de imágenes in vivo. Un anticuerpo etiquetado con una porción detectable puede ser administrada a un animal, preferentemente en la corriente sanguínea, y la presencia y localización del anticuerpo etiquetado en el huésped es evaluada. El anticuerpo puede ser etiquetado con cualquier porción que sea detectable en un animal, ya sea por resonancia magnética nuclear, radiología, u otro medio de detección conocido en el arte.

VI I . Uso de Mamíferos Transgénicos También están incluidos dentro del alcance de la presente invención los métodos de modulación de los niveles de IgE utilizando mamíferos no humanos tales como ratones, ratas, conejos, cabras u ovejas en los cuales el gen (o genes) que codifican el equivalente humano de N T-1 han sido alterados ("no trangénicos") de tal modo que el nivel de expresión de este gen sea reducido significativamente o anulado completamente. Tales mamiferos pueden ser preparados utilizando técnicas y métodos tales como aquellos descritos en la Patente U.S. No. 5,557,032. Los métodos de la presente invención incluyen además la modulación de los niveles de IgE utilizando mamíferos no humanos tales como ratones, ratas, conejos, cabras, u ovejas en los cuales el gen (o genes) que codifican el NNT-1 (ya sea la forma natural de NNT-1 para el mamífero o un gen de NNT-1 heterólogo) es sobre-expresado por el mamífero, por lo cual se crea un animal "transgénico" . Tales mamíferos transgénicos pueden ser preparados utilizando métodos bien conocidos tales como aquellos descritos en la Patente U.S. No. 5,489,743 y la solicitud de patente PCT No. 094/28122, publicada el 8 de diciembre de 1994. Estos animales no humanos pueden ser utilizados para la separación por exclusión del candidato del fármaco. En tal separación por exclusión, el impacto del candidato del fármaco sobre el animal puede ser medido. Por ejemplo, los candidatos del fármaco pueden reducir o incrementar la expresión del gen de NNT-1. En ciertas modalidades, la cantidad del polipéptido de NNT que es producido puede ser medida después de la exposición del animal al candidato del fármaco. Adicionalmente, en ciertas modalidades, se puede detectar el impacto real del candidato del fármaco sobre el animal. Por ejemplo, la sobre-expresión de un gen particular puede conducir a, o estar asociado con, una enfermedad o condición patológica. En tales casos, se puede probar una capacidad del candidato del fármaco par prevenir o inhibir una condición patológica. En otros ejemplos, la sobreproducción de un producto metabólico particular tal como un fragmento de un polipéptido puede conducir a, o estar asociado con, una enfermedad o condición patológica. En tales casos, se puede probar la capacidad de un candidato del fármaco para reducir la producción de tal producto metabólico o su capacidad para prevenir o inhibir una condición patológica. Los siguientes ejemplos están propuestos solamente para propósitos de ilustración, y no deben ser interpretados como limitativos del alcance de la invención de ninguna maner .

EJEMPLOS Los métodos estándar para la preparación del banco, clonación del ADN, y expresión de la proteina son descritos en Sambrook et al. {Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY

[1989]) y en Ausubel et al, eds . {Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, New York, NY

[1995]) .

EJEMPLO I Inducción de hemocianina anti-lapa marina (K H) e IgE total. Para inducir la IgE anti-KLH (es decir, específica para el antígeno) , los ratones (Balb/c hembras de 9-11 semanas y 19-21 g, Charles River Laboratories, ilmington, MA) fueron inmunizados el dia 0 por la inyección subcutánea de 100 ug de KLH (Pierce, Rockford, IL) en el adyuvante de Freund completo (CFA) . Partiendo del día 0, los ratones recibieron 7 inyecciones i.p. diarias consecutivas de 5 mg/kg de NNT-1 o el solvente de NNT-1 solo como un control y entonces se les extrajo sangre en los días 4, 7, y 14. Este experimento anterior fue repetido utilizando 3 mg/kg de NNT-1 y extrayendo sangre a los ratones antes de la inmunización de KLH y 7 y 14 días después. Los niveles detectable de IgE anti-KLH del suero fueron observados en 2/8 ratones tratados con NNT-1 y en 0/10 controles 7 días después de la inmunización con KLH y en 6/8 ratones tratados con NNT-1 y en 2/10 controles 14 días después de la inmunización con KHL. El IgE anti-KLH no fue detectable en ninguno de los ratones 4 días después de la inmunización con KLH. Cuando el experimento fue repetido, los ratones tratados con NNT-1 mostraron niveles más elevados de IgE anti-KLH que los ratones de control 14 días después de la inmunización de KLH (Figura 6) . Los anticuerpos IgE anti-KHL no fueron detectables en ninguno de los ratones antes de la inmunización con KLH y fueron detectables solamente en algunos de los ratones 7 días después de la inmunización con KLH .

EJEMPLO II Ratones transgénicos NNT-1 (Tg+) y las carnadas de control (Tg-1) fueron inmunizadas como anteriormente ¡5 mg/kg) y se les extrajo sangre antes de la inmunización y 7 y 14 días después. Los ratones Tg+ de NNT-1 sobre-expresaron la secuencia de codificación de NNT-1 diseñada en un gen que contiene el promotor apoE específico para el hígado. Para inducir el IgE total, los ratones (Balb/c como anteriormente) recibieron una inyección i.p. diariamente de 5 mg/kg de NNT-1 durante 7 días consecutivos. Los ratones de control recibieron solo el solvente de NNT-1. A los ratones se les extrajo sangre el día siguiente al día de la última inyección . Los ratones Tg+ de NNT-1 mostraron niveles más elevados de anticuerpos IgE anti-KLH que las carnadas de control 14 días después de la inmunización con KLH (Figura 6) . Los anticuerpos de IgE anti-KLH no fueron detectables en ninguno de los ratones Tg+ o Tg- antes de la inmunización con KLH y fueron detectables solo en algunos de ellos 7 días después de la inmunización con KLH. En un experimento de inducción de IgE total, los ratones tratados con NNT-1 mostraron un incremento del 22% del IgE total del suero comparado con los ratones de control.

EJEMPLO III Detección de IgE anti-KLH y del IgE total. Los anticuerpos de IgE anti-KLH fueron medidos en el suero por ELISA. Brevemente, las placas fueron recubiertas con KLH en PBS, se bloquearon, y se agregaron con diluciones de las muestras estándar y de prueba. El IgE anti-KLH capturado fue revelado utilizando un anticuerpo biotinilado de IgE anti-ratón y peroxidasa de rábano picante conjugada con neutravidina . El IgE total también fue medido en el suero por ELISA. En este ensayo, las placas fueron recubiertas con un anticuerpo de IgE anti-ratón en PBS, se bloquearon, y se agregaron con diluciones de las muestras estándares y de prueba. El IgE capturado fue revelado como anteriormente. Los resultados fueron expresados en ug/ml y se analizaron con la prueba t de Student. Aunque la presente invención ha sido descrita en términos de las modalidades preferidas, se entiende que se les ocurrirán variaciones y modificaciones a aquellos expertos en el arte. Por lo tanto, se propuso que las reivindicaciones anexas cubran la totalidad de las variaciones equivalente las cuales podrían llegar a estar dentro del alcance de la invención como se reivindicó.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones . 1. Un método de tratamiento de la enfermedad relacionada con IgE, caracterizado porque comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. 2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor es capaz de inhibir la aglutinación a al menos un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: a) un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 2, 4, ó 5; b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácido nucléico de las SEC ID NOS: 1 ó 3; c) un fragmento activo biológicamente de los polipéptidos de a) o b) ; o d) una variante que está presente de manera natural de a) , b) o c) . 3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor es un agente de aglutinación selectivo. 4. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor es un modulador de la expresión de NNT-1. 5. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo o fragmento del mismo. 6. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo humanizado o fragmento del mismo. 7. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es el anticuerpo o fragmento del mismo que tiene una secuencia de aminoácidos humanos . 8. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es el anticuerpo o fragmento del mismo que tiene una secuencia de aminoácidos humanos y modificaciones químicas humanas. 9. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo. 10. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo policlonal o fragmento del mismo. 11. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo quimérico o fragmento del mismo. 12. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo injertado con CDR o fragmento del mismo. 13. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es una cadena sencilla, biespecifica, o hetero-anticuerpo o un fragmento del mismo. 14. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva comprende además un fragmento de región variable. 15. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva comprende además un fragmento Fab, Fab ' o F(ab) . 16. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva comprende además un fragmento de Fe. 17. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva está aglutinado a una etiqueta detectable. 18. El método de la reivindicación 3, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es producido a partir de un hibridoma. 19. Un método de modulación de los niveles de IgE en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un agente de aglutinación selectiva de NNT-1. 20. El método de la reivindicación 19, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva es un anticuerpo antagonista. 21. El método de la reivindicación 19, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva de NNT-1 reduce o inhibe la expresión, actividad o producción de NNT-1. 22. El método de la reivindicación 19, caracterizado porque el agente de aglutinación selectiva de NNT-1 reduce o inhibe el nivel in vivo de NNT-1. 23. El método de la reivindicación 19, caracterizado porque el nivel de IgE es inhibido, reducido o me orado . 24. Un método de tratamiento de una enfermedad alérgica, caracterizado porque comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. 25. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es una enfermedad alérgica del Tipo I. 26. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es la rinitis alérgica . 21, El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es el eccema. 28. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es la dermatitis. 29. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es la polinosis. 30. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad alérgica es el asma. 31. Un método de uso de un inhibidor de NNT-1, caracterizado porque se utiliza para modular los niveles de IgE en un paciente. 32. Un método de diagnóstico de una enfermedad relacionada con IgE o de la susceptibilidad hacia una enfermedad relacionada con IgE, caracterizado porque comprende : a) determinar la presencia o la cantidad de expresión de al menos un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: i) un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 2, 4, ó 5; ii) un polipéptido codificado por una secuencia de ácidos nucleicos de las SEC ID NOS: 1 ó 3; iii) un fragmento del polipéptido de i) o ii) anterior; iv) una variante que está presente de manera natural de a) , b) o c) ; y b) diagnosticar una enfermedad relacionada con IgE o la susceptibilidad a una enfermedad relacionada con IgE, basado en la presencia o la cantidad de expresión del polipéptido . 33. Un método de prevención de una enfermedad relacionada con IgE, caracterizado porque comprende administrar a un paciente una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de NNT-1. 34. El método de la reivindicación 33, caracterizado porque el inhibidor de NNT-1 es un anticuerpo antagonista. 35. El método de la reivindicación 33, caracterizado porque el inhibidor de NNT-1 es una proteina receptora soluble. 36. El método de la reivindicación 33, caracterizado porque el inhibidor de NNT-1 es un modulador de la expresión. 37. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de una enfermedad relacionada con IgE, caracterizada porque comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de un inhibidor de RNT-1. 38. La composición farmacéutica de la reivindicación 37, caracterizada porque el inhibidor de NNT-1 se aglutina a, o inhibe, al menos un polipéptido seleccionado del grupo que consiste de: a) un polipéptido que comprende las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOS: 2, 4, ó 5; b) un polipéptido codificado por una secuencia de ácidos nucléicos de las SEC ID NOS: 1 ó 3; c) un fragmento de los polipéptidos de a) o b) ; y d) una variante que está presente de manera natural de a) , b) o c) .