MXPA02009539A - Metodo para la prediccion de preeeclampsia y otras enfermedades. - Google Patents

Abstract

La invencion descrita es un proceso para determinar la actividad citoprotectora de plasma que evita la destruccion de celulas endoteliales y anticipa el desarrollo de un numero de enfermedades tales como aterosclerosis, preeclampsia, edema, sindrome nefrotico y apoplejia. La presente invencion incluye un metodo para diagnosticar una tendencia del paciente para desarrollar una enfermedad que tiene una correlacion para una reduccion en la Concentracion de albumina pI 5.6 en el plasma determinando un valor indicativo de la concentrabion de la albumina pI 5.6 que no se une a la VLDL. ("albumina pI 5.6 libre") en el suero sanguineo del paciente. La modalidad preferida del proceso utiliza metodos in v i t r o para obtener un indicador de la albumina pi 5.6 libre en lugar de medir directamente la concentracion de la albumina pI 5.6 libre. El metodo preferido comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra de plasma que contiene albumina libre, trigliceridos, lipoproteinas de densidad muy baja, lipoproteinas de densidad baja y acidos grasos no esterificados unidos a la albumina libre; (b) determinar la Concentracion de la albumina libre; (c) determinar la concentracion de l o s acidos grasos no esterificados unidos a la albumina libre; y (d) calcular un valor indicativo de la capacidad para evitar la toxicidad del plasma comparando la Concentracion de la albumina libre a la concentraci6n, de los acidos grasos no esterificados unidos a la albumina libre. El presente proceso no proporciona mediciones directas de la actividad citoprotectora de plasma, sino mas bien, un valor empirico que tiene relevancia clinica para identificar pacientes con un alto riesgo de desarrollar enfermedades inhibidas por albumina pI 5.6.

Description

MÉTODO PARA LA PREDICCIÓN DE PREECLAMPSIA Y OTRAS ENFERMEDADES DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona a métodos para predecir y seguir enfermedades. Más particularmente, la presente invención se relaciona al diagnóstico de preeclampsia y otras enfermedades. La enfermedad vascular con frecuencia se relaciona a la composición de fluido sanguíneo a través de la misma. En particular, las concentraciones elevadas de lipoproteinas de densidad muy baja (VLDL) en sangre tienen un efecto nocivo en integridad vascular. Las lipoproteinas de densidad muy baja en sangre tienden a destruir las paredes vasculares internas • provocando enfermedades vasculares que incluyen preeclampsia, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, enfermedad vascular diabética, y semejantes. Los métodos que proporcionan detección temprana de enfermedades vasculares, y métodos para diagnosticar una tendencia del paciente a desarrollar una enfermedad vascular en un punto más tarde en su vida son deseables de manera que tal enfermedad pueda controlarse mejor, o aún evitarse. La detección temprana de preeclampsia es particularmente importante . La preeclampsia es una enfermedad vascular tóxica de interés particular. La preeclampsia se desarrolla en el embarazo tardío y se caracteriza por una elevación repentina en la presión sanguínea, incremento excesivo en peso, edema generalizado, albuminuria, dolores de cabeza severos, y disturbios visuales. Los vasos sanguíneos en un útero de mujer embarazada que suministra sangre a su placenta y feto se restringen durante la preeclampsia, por lo que suministran cantidades reducidas de sangre y oxigeno al feto. La preeclampsia se une a un crecimiento fetal deficiente y, en su forma más severa, puede ser fatal tanto para el feto como para la madre. Las defensas naturales sanguíneas humanas contra el efecto destructivo de VLDL en Células endoteliales y Leucocitos han sido cuantificadas por un índice de factores ' conocidos como la "actividad que evita toxicidad" o "TxPA" de la sangre. (Arbogast, B.W., and Dre er, N.J. Coronary Disease Prediction üsing a New Atherogenic Index. Atherosclerosis , Vol. 73 (1988) 259-267). (Chi, D.S., et al. Decreased Lymphocyte Response in Streptozotocin Induced Diabetic Rats: A Fünction of Very Low Density Lipoproteins. Diabetes 31 (1982) 1098-1104). La Patente Norteamericana 4,699,878 describe que la TxPA de una muestra sanguínea puede estimarse en comparación con el crecimiento de un cultivo de células tratadas con una cantidad tóxica de VLDL y diversas cantidades de la muestra sanguínea al crecimiento "cero" de un cultivo de referencia de células que se tratan con la misma cantidad tóxica de VLDL y sin sangre. La relación de VLDL a TxPA determina la citotoxicidad de la sangre in vi tro. La relación de VLDL a TxPA ha sido también efectiva para predecir una enfermedad vascular in vi tro . La presencia de un futuro desarrollo de preeclampsia puede predecirse con un 90° de precisión utilizando la relación de VLDL a TxPA. (Arbogast, B.W., Leeper, S.C., Merrick, R.D., Olive, K.E. and Taylor, R.N. Plasma Factors that Determine Endothelial Cell Lipid Toxici ty in vitro Correctly Identify Women wi th Preeclampsia in Early and Late Pregnancy. Hypertension in Pregnancy Vol. 15 (1996) 263-279) . Una precisión similar ha sido lograda con aterosclerosis. (Arbogast, B.W., Gilí, L.R. and Schwetner, H.A. A New Protective Factor in Coronary Artery Disease: Very-Low-Density Lipoprotein Toxicity-Preventing Activi ty. Atherosclerosis Vol. 57 (1985) 75-86) . (Arbogast, B. . and Dreher, N.J. Coronary Disease Prediction Using a New Atherogenic Index. Atherosclerosis Vol. 66 (1987) 55-62) . Las desventajas de este método de cultivo celular son que éste es un análisis relativamente caro y que requiere tiempo de crecimiento celular. También, el nivel de incertidumbre es aproximadamente 10%, indeseablemente elevado para un análisis médico .

El plasma sanguíneo contiene componentes que incluyen albúmina, ácidos grasos no esterificados (NEFA) , y triglicéridos que se transportan en diversas cantidades en lipoproteínas de densidad muy baja (VLDL), lipoproteínas de baja densidad (LDL), y lipoproteínas de alta densidad (HDL). La albúmina sanguínea humana existe como dos especies que pueden separarse por su migración electroforética a puntos isoeléctricos de pH 4.8 y pH 5.6. (Basu, S.P., Rao, S.N. and Hartsuck, J.A. Influence of Fatty Acid and Time of Focusing on the Isoelectric Focusing of Human Plasma Albumin. Biochim Biphys Acta, Vol. 533 (1978) 66) . Se ha encontrado que la toxicidad que evita la actividad de sangre humana se proporciona principalmente por albúmina pl 5.6. Arbogast • describe que las especies de albúmina pl 5.6 proporcionan el efecto protector contra daño de VLDL a células y leucocitos de vasculatura endotelial. (Arbogast, B.W. Purification and Identification of Very Low Density Lipoprotein Toxicity Preventing Activi ty. Atherosclerosis Vol. 7 (1988) 259-267 and Chi, D.S., Berry, D.L., Dillon, K.A. and Arbogast, B.W. : Decreased Lymphocyte Response in streptozotocin Induced Diabetic Rats: A Function of Very Low Density Lipoproteins. Diabetes 31: 1098-1104, 1982) . Por consiguiente, la determinación de la concentración de albúmina pl 5.6 en sangre sería muy beneficiosa en diagnosticar enfermedades asociadas con leucocitos y vasculares.

La concentración de albúmina pl 5.6 no es determinable a partir de la concentración de albúmina total, debido al hecho que las especies de albúmina pl 5.6 y pl 4.8 existen en plasma humano en relaciones impredecibles . La TxPA de la muestra de plasma puede determinarse separando la albúmina pl 4.8 de la albúmina pl 5.6 a través de la columna isoeléctrica líquida enfocando y determinando la concentración de la fracción de albúmina pl 5.6 a través de espectrometría de absorbancia. La concentración de albúmina pl 5.6 en plasma se compara entonces a una concentración estándar conocida para indicar delineación entre pacientes que han sido diagnosticados con enfermedad arterial y aquellos no diagnosticados con enfermedad arterial (Arbogast, B.W., Leeper, S.C., Merrick, R.D., Olive, K.E. and Taylor, R.N. : Plasma Factors that Determine Endotelial Cell Lipid Toxici ty in vitro Correctly Identify Women with Preeclampsia in ?arly and Late Pregnancy. Hipertensión in Pregnancy 15:263-279, 1996) . El método electroforético descrito por Arbogast es bastante incómodo y caro para operación clínica. El grado de incertidumbre del método de electroforesis es aproximadamente 10%. A la luz de lo anterior, sería deseable tener un proceso sencillo para diagnosticar la presencia de, o la tendencia hacia desarrollar enfermedades sensibles a VLDL de albúmina inhibida, incluyendo enfermedades y condiciones vasculares y no vasculares. Un proceso que no requiere crecimiento de cultivo celular o una separación de enfoque isoeléctrico seria más útil. Es deseable además para tal proceso de diagnóstico nuevo ser más exacto que los procesos previos. La presente invención es un proceso para determinar la capacidad para evitar la toxicidad de plasma contra una enfermedad que tiene una correlación a una reducción en la concentración de albúmina pl 5.6 en el plasma. El proceso presente comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra de plasma que contiene albúmina libre, ácidos grasos no esterificados libres, triglicéridos, lipoproteínas de densidad muy baja, lipoproteínas de baja densidad, y lipoproteínas de alta densidad; (b) determinar la concentración de la albúmina libre; (c) determinar la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres; y (d) calcular un valor indicativo de la capacidad para evitar la toxicidad del plasma comparando la concentración de la albúmina libre con la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres. El valor indicador preferido es una "relación TxPA-S", calculada dividiendo la concentración de la albúmina libre por la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres. La presente invención además incluye un equipo de análisis útil para conducir el presente proceso. El equipo de análisis comprende lo siguiente: (a) un reactivo para precipitar un lípido; (b) un reactivo que despliega un color sobre la unión con la albúmina; y (c) un reactivo que despliega un color sobre la unión con ácidos grasos no esterificados. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIGURA 1 ilustra un diagrama que muestra la falta de separación de diagnóstico que ocurre comparando la concentración de albúmina de plasma de pacientes con preeclampsia severa y pacientes control. Los pacientes control se igualan con los pacientes preeclámpticos en las bases de edad gestacional, edad materna y raza. La FIGURA 2 ilustra un diagrama similar a la FIGURA 1 excepto que la concentración de albúmina es la albúmina encontrada en el sobrenadante de plasma después de remover VLDL y LDL por la precipitación y centrifugación. La FIGURA 3 ilustra un diagrama que muestra que alguna separación de diagnóstico ocurre comparando la concentración NEFA de plasma de varios pacientes con preeclampsia y pacientes control.

La FIGURA 4 ilustra un diagrama similar a la FIGURA 3, excepto que la concentración de NEFA es NEFA encontrado en el sobrenadante de plasma después de la precipitación de VLDL y LDL. La FIGURA 5 ilustra una gráfica que muestra separación de diagnóstico mejorada entre pacientes con preeclampsia y pacientes control cuando se traza una relación de concentración de albúmina de plasma a concentración de NEFA de plasma. La FIGURA 6 ilustra una gráfica que muestra además separación de diagnóstico mejorada entre pacientes con preeclampsia severa y pacientes control cuando se traza una relación de concentración de albúmina sobrenadante a concentración de NEFA sobrenadante (relación TxPA-S) . La FIGURA 7 ilustra un diagrama de correlación lineal entre las relaciones TxPA-S (sobrenadante) y los valores TxPA de columna (a partir del plasma) medidos en el mismo conjunto de muestras sanguíneas. La FIGURA 8 ilustra un diagrama similar a la FIGURA 1, para muestras sanguíneas tomadas a partir de diferentes conjuntos de mujeres que tienen preeclampsia moderada y un conjunto de mujeres control. La FIGURA 9 ilustra un diagrama similar a la FIGURA 6, para muestras sanguíneas tomadas a partir del mismo grupo de muestras de sangre utilizadas en la FIGURA 8.

La FIGURA 10 ilustra un diagrama similar a la FIGURA 9, excepto que un cociente de relación TxPA-S multiplicado por la concentración HDL se trazó en lugar de TxPA-S solo. Este conjunto de muestras sanguíneas fue a partir de un grupo de mujeres quienes estuvieron fuera de los Estados Unidos . La observación que HDL tiene una contribución significativa a la clasificación de estas mujeres que puede ser ya sea una función del área del mundo en donde las muestras se recolectaron o éstas pueden ser una parte integral de la nueva metodología para medir TxPA-S. El solicitante ha descubierto un nuevo proceso para predecir la capacidad del plasma para impedir el daño celular nocivo a partir de las toxinas sanguíneas, particularmente ' contra citotoxicidad por VLDL. El proceso de la presente invención se basa en el descubrimiento de los solicitantes que la capacidad para inhibir la toxicidad de sangre puede indicarse por la albúmina pl 5.6 particular que no se une a VLDL. La albúmina que no se une a VLDL se refiere en la presente como "albúmina libre". Mientras que el Solicitante ha encontrado que las mediciones directas de albúmina pl 6.5 libre proporciona una indicación de la actividad que inhibe la toxicidad baja la presente invención, tal medición directa requerirá separación de la albúmina pl 5.6 de la albúmina pl 4.8 así como separar la' albúmina libre de la albúmina de unión VLDL. En un esfuerzo para encontrar una alternativa para un análisis de enfoque electroforético incómodo para separar albúmina pl 5.6 de albúmina pl 4.8, el solicitante ha encontrado que la concentración de albúmina libre (total) y la concentración de ácidos grasos no esterificados ("NEFA") unidos a la albúmina libre puede compararse para proporcionar una estimación muy buena de la concentración de la albúmina pl 5.6 libre. Esto proporciona un proceso más sencillo ya que ambas de estas cantidades se miden por simples técnicas in vi tro. El solicitante ha encontrado que una relación de la concentración de la albúmina libre a la concentración de NEFA unida a la albúmina libre (mencionada en la presente como "NEFA libre") es un indicador mejorado de la capacidad del plasma para impedir el daño celular a partir de toxinas sanguíneas. Sin embargo, otros valores de diagnóstico calculados en gran medida con base en la albúmina libre y la concentración de NEFA libre se considera que son modificaciones de la presente invención. Se debe notar que la relación de diagnóstico determinada por el presente proceso se basa en los diferentes parámetros diferentes del valor TxPA previamente utilizados para indicar la capacidad para inhibir la toxicidad de sangre en la Patente Norteamericana 4,699,878 o el método de enfogue isoeléctrico usado para aislar albúmina pl 5.6. Por consiguiente, los dos valores no son comparables. Para distinguir claramente la nueva relación de diagnóstico de capacidad para inhibir la toxicidad determinada por la presente invención a partir del valor TxPA previamente usado en la técnica, la relación de diagnóstico determinada por la presente invención se menciona más adelante como la "relación TxPA-S", con la "S" indicando que un. sobrenadante de plasma se analiza. La determinación de la relación TxPA-S y el diagnóstico basado en la misma, de acuerdo con la presente invención, proporciona una indicación exacta del potencial para desarrollar una enfermedad inhibida por albúmina utilizando métodos de análisis mucho más simples que electroforesis y cultivo celular. La presente invención incluye un proceso para determinar una relación TxPA-S para sangre y un método para realizar un diagnóstico médico basado en la relación TxPA-S así determinado. El presente proceso puede conducirse probando una muestra de sangre, suero o plasma. Ya que la sangre se dificulta para analizar debido a coagulación, se prefiere que el suero y el plasma se procesen a partir de sangre total. El tipo específico de análisis usados para conducir el proceso de la presente invención determinará si el" suero o plasma pueden ser la forma sanguínea más preferible. Aunque el plasma es la forma de sangre más preferida para el presente proceso, el término "plasma" es más adelante utilizado para indicar sangre, suero y/o plasma.

Los componentes más pertinentes de plasma analizado en la presente invención son albúmina libre, NEFA que tiene una longitud de cadena de acilo de 6 a 20 carbonos, triglicéridos que tienen una longitud de cadena de acilo de 6 a 20 carbonos, lipoproteínas de baja densidad ("LDL"), lipoproteinas de densidad muy baja ("VLDL") y lipoproteínas de alta densidad ("HDL") . VLDL tiene una densidad menor que aproximadamente 1.006 gm/ml. LDL tiene una densidad de aproximadamente 1.006 a aproximadamente 1.063 gm/ml. HDL tiene una densidad mayor que aproximadamente 1.063 gm/ml. El componente NEFA se hace de NEFA unido a VLDL y NEFA no unido a VLDL. Ya que se ha encontrado que la mayoría arrolladora de NEFA no se une a VLDL es NEFA libre, el término "NEFA libre" es más adelante utilizado intercambiablemente para referirse a ya sea tipo de entidad NEFA, a menos que se especifique de otra manera. El presente proceso comprende determinar la concentración de albúmina libre (ambas albúminas pl 4.8 y pl 5.6)- y la concentración de NEFA libre en una muestra de plasma y calcular la relación de TxPA-S del plasma dividiendo la concentración de albúmina libre por la concentración de NEFA libre. La concentración de NEFA libre se determina preferiblemente después de la remoción de la VLDL a partir del plasma. La concentración de albúmina puede medirse ya sea como la albúmina de plasma total antes de que la VLDL se remueva o como la albúmina libre permaneciendo después de la remoción de VLDL. Sin embargo, una relación de TxPA-S mas exacta se obtiene utilizando la concentración de NEFA libre y la concentración de albúmina libre para calcular la relación TxPA-S . Es más preferible que la albúmina libre y las concentraciones de NEFA libres medidas no incluyan albúmina o NEFA unido a LDL. Por consiguiente, es preferible que la LDL se remueva a partir del plasma junto con la VLDL. La relación de TxPA-S ha sido encontrada por ser exacta cuando la albúmina libre y la NEFA libre medida no incluyen entidades unidas a LDL. Después de determinar la relación de TxPA-S, la TxPA-S se usa preferiblemente para clasificar la capacidad para evitar la toxicidad del plasma para una enfermedad o condición particular tóxica inhibida por albúmina comparando la relación de TxPA-S a una TxPA-S estándar para esa enfermedad específica. La TxPA-S estándar se determina conduciendo el proceso de la presente invención en una pluralidad estadísticamente significativa de muestras de plasma que tienen potenciales conocidos para la supuesta enfermedad o condición inhibida por albúmina. La relación de TxPA-S determinada para cada uno de los estándares de plasma se categoriza de acuerdo a un diagnóstico médico independiente para la supuesta enfermedad inhibida. Un diagnóstico positivo para la supuesta enfermedad de albúmina inhibida se basa normalmente en el actual desarrollo de la enfermedad dentro de un periodo dado. Un diagnóstico negativo para la enfermedad inhibida por albúmina se basa normalmente en el no desarrollo de la enfermedad durante un periodo dado. El estándar puede ser una relación de TxPA-S de punto de referencia único o, preferiblemente, un rango de relaciones de TxPA-S indicativo de un potencial elevado para la enfermedad inhibida por albúmina. El estándar más preferible es un par de rangos de relaciones de TxPA-S, con uno de los rangos que representan las relaciones de TxPA-S que indican un elevado potencial para la enfermedad inhibida por albúmina y el otro rango que indica un potencial bajo para la misma - enfermedad. El proceso de la presente invención proporciona una cantidad inesperadamente elevada de separación entre un par de rangos estándares de relación TxPA-S de alto y bajo potencial. Las relaciones estándares de TxPA-S obtenidas a partir de una población suficientemente amplia de estándares de plasma, de mayor preferencia agregados en dos rangos esencialmente exclusivos, es decir, no traslapantes entre los dos rangos excepto para un número estadísticamente menor de anexos . Así, la precisión en diagnóstico utilizando el presente proceso es más elevado que los procesos previos. Una muestra de relación TxPA-S que cae dentro del rango de estándar más elevado indica que el paciente tiene un potencial significativamente bajo para desarrollar la supuesta enfermedad. Una muestra de relación de TxPA-S que cae dentro del rango de estándar más bajo indica que el paciente tiene un potencial significativamente elevado para desarrollar la enfermedad. Una prueba de relación de TxPA-S que cae dentro de los dos rangos estándares puede ser indeterminada del riesgo de desarrollo de la enfermedad. Una determinación aún más exacta de una tendencia del paciente hacia desarrollar una enfermedad inhibida por albúmina se hace cuando el presente proceso además comprende la etapa de medir la concentración de triglicérido total en ' el plasma e incorporando la concentración de triglicérido en la ecuación de diagnóstico. La concentración de triglicérido puede tomarse en consideración para determinar el potencial de enfermedad del paciente evaluando un diagrama de relación TxPA-S contra la concentración de triglicérido. A partir de tal 'diagrama, puede calcularse una ecuación lineal que separa el plasma de potencial de enfermedad elevado a partir del plasma de potencial de enfermedad bajo. El diagnóstico de una muestra de plasma puede hacerse fácilmente introduciendo tanto la relación TxPA-S como la concentración de triglicéridos dentro de la ecuación. Los rangos estándares de potencial de enfermedad elevado y bajo se contraen además y se separan entre sí cuando el efecto de la concentración de triglicérido se incluye en el diagnóstico. Sin embargo, el mejoramiento severo en la exactitud del diagnóstico utilizando relaciones de TxPA-S en lugar de valores de TxPA se hace evidente además por el hecho que la concentración de triglicérido tiene significativamente menos de un efecto en la cantidad de separación entre los rangos estándares de diagnóstico basados en las relaciones de TxPA-S, comparado a su efecto en los rangos estándares del valor de TxPA. Las enfermedades que pueden diagnosticarse por el presente proceso son enfermedades que tienen una correlación a una reducción en la concentración de albúmina pl 5.6 en el plasma. El proceso es especialmente útil en enfermedades vasculares predichas provocadas por el colapso de células endoteliales debido al ataque de VLDL. El término "enfermedad" se usa en la presente para referirse a enfermedades y otras condiciones médicamente diagnosticables. Ejemplos de tales enfermedades son preeclampsia, ater'osclerosis, apoplejía, síndrome nefrótico (enfermedad del riñon) , enfermedad vascular periférica, y enfermedad vascular diabética. Ejemplos de enfermedades no vasculares y condiciones no reconocidas como enfermedades vasculares, pero que tienen una correlación a la concentración de albúmina son cáncer, mortalidad, morbilidad, sepsis, trauma y envejecimiento.

Los métodos particulares utilizados para remover la VLDL, NEFA libre medida y albúmina medida no son críticos. Varios métodos para conducir cada etapa en el presente proceso se conocen en la técnica. Ejemplos de métodos y reactivos adecuados se proporcionan posteriormente, pero no deben construirse para ser limitantes del alcance de la presente invención. Aunque la concentración de NEFA de interés de la unión de NEFA a albúmina libre, una determinación de concentración de NEFA de unión sin VLDL ha sido encontrada que es una aproximación útil de la unión de NEFA a la albúmina libre, para el presente proceso. Así, cualquier técnica que proporciona diferenciación entre la NEFA de unión con VLDL y la NEFA de unión sin VLDL es adecuada para determinar la concentración de NEFA libre. La NEFA de unión con VLDL puede distinguirse de la NEFA libre después de remover la VLDL a partir del plasma. La VLDL puede removerse de la muestra de plasma por un número de técnicas. Ejemplos de tales medios de separación incluyen cualesquiera técnicas conocidas para remover LDL y/o VLDL incluyendo ultracentrifugación, precipitación por glicanos de sulfato o ácido fosfotúngstico en la presencia de cationes divalentes, inmunoprecipitación, electroforesis, enfoque isoeléctrico, técnicas de separación de carga tales como cromatografía de intercambio iónico, técnicas de separación de tamaño tales como cromatografía de filtración de gel, y similares. La VLDL se remueve de mayor preferencia de la muestra de plasma a manera de precipitación, seguida por filtración, extracción por sifón o decantación del sobrenadante a partir de los sólidos precipitados. La VLDL puede precipitarse por el uso de un reactivo de precipitación de lípido de unión sin albúmina. Un reactivo preferido incluye un glicano de sulfato tal como sulfato de dextrano, y un catión divalente tal como cloruro de magnesio. Un ejemplo de un reactivo de precipitación comercialmente disponible útil para precipitar VLDL es el Reactivo de Precipitación de Colesterol-HDL comprendido de sulfato de dextrano, cloruro de magnesio, cloruro de sodio, y polietilenglicol, disponible comercialmente de RefLab Medical Análisis Systems, Inc. Este reactivo de precipitación preferido es una mezcla de sulfato de dextrano (0.2 mM) , cloruro de magnesio (63.9 mM) , cloruro de sodio (63.3 mM) , y polietilenglicol (3.3 mM) . Es preferible remover LDL de la muestra de plasma junto con VLDL. LDL normalmente precipita fuera de la solución junto con VLDL. Los sólidos de VLDL y LDL precipitados pueden removerse por métodos conocidos tales como por centrifugación de la solución - seguida por decantación del sobrenadante de plasma. Un reactivo de precipitación VLDL y LDL alternativo se compone de 30.3 mM de ácido fosfotúngstico y cloruro de magnesio 100 mM. Esta solución se mezcla en una muestra 1:5 a la relación del reactivo y los sólidos de VLDL y LDL precipitados se remueven como se establece anteriormente para la precipitación de dextrano-magnesio . Después de remover la VLDL, la concentración de NEFA libre puede determinarse a partir del sobrenadante por cualquier método conocido para determinar la concentración de ácido graso. Ejemplos de tales métodos se describen en las Patentes Norteamericanas 4,071,413; 4,360,591; 4,349,625; 4,301,244; y 4,229,538. Métodos adecuados para medir la concentración NEFA incluyen titulación, colorimetría, y métodos de radioisótopo, siendo la colorimetría la preferida.

Los sistemas de solvente apropiados para extraer NEFA se ' describen por Dole, V. P. J. Clin. Invest Vol. 35 (1956) 150. La NEFA extraída puede medirse por titulación con álcali estándar a un punto final indicador de base acida. Los métodos radioquímicos para determinar la concentración de NEFA implican extraer la NEFA en la fase de hept no de un extracto Dove y liberar éste de los fosfolípidos. El extracto es entonces etiquetado con DONi radioactivo mezclándolo con nitrato de niquel radioactivo. Más arriba, la fase orgánica que contiene el complejo de ácido graso de niquel es más tarde analizado para radioactividad. 60Co puede reemplazar a 6oNi, pero es más peligroso debido a que éste es un emisor gamma.

Varios métodos de determinación colorimétrica de concentración NEFA se conocen en la técnica y pueden conducirse en NEFA extraído a partir del sobrenadante o en la NEFA como existe in vi tro en el sobrenadante. Los métodos de extracción se basan normalmente en la formación de sales de cobre o cobalto y la extracción de la sal en un solvente orgánico no polar donde éste está compuesto con un tinte cromógeno para medición colorimétrica. Alternativamente, y de mayor preferencia, la NEFA puede medirse in vi tro utilizando un método colorimétrico enzimático. Uno de tales métodos implica tratar el sobrenadante con Coenzima A acil sintetasa en la presencia de trifosfato de adenosina (ATP) agregada, cationes de magnesio y CoA, para formar los esteres de tiol ' de CoA conocidos como Acil CoA así como los subproductos de monofosfato de adenosina (AMP) y pirofosfato (Ppi) . El Acil CoA consecuentemente producido se oxidiza entonces con Acil CoA Oxidasa, con la generación de peróxido ácido. El peróxido ácido, en la presencia de peroxidasa, permite la condensación oxid tiva de 3-metil-N-etil-N-ß-hidroxietil-anilina con 4- aminoantipirina formando así una aducción color púrpura. La concentración de NEFA en el sobrenadante puede determinarse a partir de la densidad óptica medida en una absorbancia máxima de 550 nm. Se ha encontrado que el ácido ascórbico (Vitamina C) que existe en el plasma con frecuencia provoca interferencia significativa en la determinación de la concentración de NEFA cuando se utiliza este análisis colorimétrico. Esto es en gran medida debido al papel biológico del ácido ascórbico como antioxidante y su capacidad para reaccionar con peróxido ácido. Por lo tanto, cuando se utiliza este tipo de método colorimétrico para determinar la concentración de NEFA, éste es preferible para remover el ácido ascórbico del plasma o el sobrenadante del plasma anterior a la determinación colorimétrica de la concentración NEFA. La adición de oxidasa de ascorbato (AOD) es una forma conveniente de remover ácido ascórbico. En la etapa para determinar la concentración de albúmina, es preferible que la concentración de albúmina ' determinada sea la concentración de albúmina libre. Por consiguiente, la concentración de albúmina se mide preferiblemente a partir del sobrenadante de plasma restante después de la remoción de VLDL, de mayor preferencia después de la remoción de VLDL y LDL. La concentración de albúmina puede medirse por métodos conocidos tales co o un análisis inmunoabsorbente unido a enzima (ELISA) , inmunoensayo, radioinmunoensayo (RÍA) , análisis colorimétrico de unión de tinte, y midiendo completamente la cantidad de proteína o aminoácido después de la purificación de la albúmina utilizando precipitación, electroforesis, electroenfoque, filtración de gel, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad y otros. Un análisis colorimétrico de unión de tinte es la metodología de análisis preferida para determinar la concentración de albúmina ya que ésta es sencilla y se consume en menor tiempo que otros procedimientos. En general, cuando un tinte se une a un sitio en la molécula de albúmina éste se vuelve perceptible debido a la diferencia en el ambiente de pH en la masa de albúmina y en la solución. Ejemplos de tales análisis de albúmina de unión de tinte colorimétrico se describen en las Patentes Norteamericanas 5,182,214; 4,568,647; 3,873,272; 3,884,637; 5,194,390; 4,337,064; y 4,230,456. Un análisis colorimétrico preferido para determinar la concentración de albúmina incluye mezclar aproximadamente 1 a aproximadamente 10 µL de sobrenadante o plasma con aproximadamente 50 a aproximadamente 200 µL de un reactivo de albúmina bromocresol verde de 0.030 mmol/litros (pH 4.2). La concentración de albúmina puede determinarse midiendo la densidad óptica en una absorbancia máxima de 628 nm. Un medio alternativo para determinar un valor indicativo de la concentración de albúmina pl 5.6 libre comprende medir las concentraciones de albúmina y NEFA unidas con VLDL y sustrayendo aquellas concentraciones de las concentraciones totales de albúmina y NEFA en suero, por lo que se obtiene una concentración de albúmina libre y una concentración de NEFA libre. Estas concentraciones pueden ser utilizadas de esta manera para calcular un valor TxPA-S como se proporcionó anteriormente. La relación de TxPA-S para una muestra dada de plasma se calcula de acuerdo con la presente invención dividiendo la concentración de la albúmina libre por la concentración de la NEFA libre. Las unidades de concentración utilizadas no son importantes, con tal de que las mismas unidades se usen para obtener el estándar de relación TxPA-S . Por ejemplo, el valor de TxPA-S puede expresarse como mg de albúmina/mg de NEFA o absorbancia de albúmina/absorbancia de NEFA o como una combinación de las unidades anteriores. Se entenderá que, aunque la modalidad preferida del proceso que incluye la determinación de la relación de TxPA-S se describió anteriormente, la presente invención también incluye un proceso en donde la concentración actual de la albúmina pl 5.6 libre, o de otra manera cualquier otro indicador de tal, se determina y usa como el valor indicativo de la capacidad para evitar la toxicidad de sangre para la enfermedad particular. Tal modalidad de la presente invención comprende las etapas de proporcionar una muestra de plasma como se describió anteriormente, determinando una indicación de la concentración de la albúmina pl 5.6 libre en el plasma, y evaluando la capacidad para evitar la toxicidad del plasma contra la enfermedad comparando la concentración de la albúmina pl 5.6 libre a un estándar obtenido al conducir cada una de las etapas (a) y (b) en una pluralidad de muestras, con cada una de la pluralidad de Las muestras de plasma retirándose de un paciente que tiene un diagnóstico conocido por la presencia de, o el desarrollo de tal enfermedad. Un experto en la técnica comprendería que la medida directa de la concentración de la albúmina pl 5.6 libre no podria ser tan económicamente factible como la medición de la albúmina libre y la NEFA libre debido a la complejidad para conducir un enfoque electroforético para separar la albúmina pl 5.6 de la albúmina pl 4.8. El proceso preferido de la presente invención incluye medir la concentración de triglicérido y factorizar el nivel encontrado en el diagnóstico. La concentración de ' triglicérido puede determinarse conduciendo un análisis de punto final colorimétrico enzimático. La presente invención además incluye un equipo de análisis el cual es una combinación particular de reactivos útiles para conducir el proceso preferido de la presente invención en donde VLDL se elimina a través de la precipitación anterior para determinar la concentración de NEFA y la albúmina restante en el sobrenadante determinado a través de los análisis colorimétricos . El equipo de análisis de la presente invención incluye un reactivo de precipitación de VLDL, un tinte sensible a pH de unión de albúmina, y un ácido graso enzimático, un reactivo colorimétrico. El equipo de análisis de la presente invención preferiblemente incluye un agente de oxidización de ácido ascórbico tal como oxidasa de ascorbato. El equipo de análisis también incluye preferiblemente un reactivo de punto final colorimétrico enzimático de triglicérido. Un reactivo colorimétrico adecuado para la unión con un triglicérido indicativo incluye un compuesto y enzima que trabajan juntos para hidrolizar triglicéridos a glicerol y ácidos grasos. El trifosfato de adenosina (ATP) y el glicerol se hacen reaccionar con glicerocinasa para formar glicerol-1-fosfato y difosfato de adenosina. El glicerol-1-fosfato (G-l-P) puede oxidizarse para producir peróxido ácido, que se mide similarmente al reactivo NEFA. Alternativamente, G-l-P puede hacerse reaccionar con dinucleótido de nicotina adenina (NAD) que produce dinucleótido de nicotina adenina reducido (NADH) . El NADH entonces reduce un tinte que cambia de color hasta la reducción formando formazan. O puede agregarse piruvato en el análisis anterior a NADH en la presencia de lactato deshidrogenasa y la NAD resultante puede determinarse utilizando luz ultravioleta. En un método alternativo, los triglicéridos se hidrolizan con KOH_ alcohólico para formar glicerol y ácidos grasos libres. El glicerol y ATP entonces reaccionan en la presencia de glicerocinasa para formar glicerol-1-fosfato y ADP. En la siguiente etapa el ATP se combina con piruvato de fosfoenol en la presencia de piruvato cinasa para formar piruvato y ATP. El piruvato entonces reacciona con NADH en la presencia de deshidrogenasa láctica para formar lactato y NAD. El NAD se mide entonces con luz ultravioleta. El reactivo de precipitación de VLDL del equipo de prueba de diagnóstico presente preferiblemente incluye tanto sulfato de dextrano como el glicano de sulfato y cloruro de magnesio como el catión divalente o ácido fosfotúngstico y cloruro de magnesio. El tinte de unión de albúmina sensible a pH se selecciona preferiblemente del grupo de tintes que consisten de bromocresol verde, bromocresol púrpura y similares. El reactivo colorimétrico de ácido graso enzimático preferido es una mezcla que incluye coenzima A- de acilo sintetasa, trifosfato de adenosina, y coenzima A. Con respecto a los diversos reactivos en el equipo de la presente invención, un compuesto está considerado en la presente por tener desplegado un color hasta la unión con una entidad de plasma cuando un color se despliega en cualquier tiempo debido a una reacción química que ocurre en la entidad de plasma como un resultado al poner en contacto el reactivo con el plasma. Esta invención puede ilustrarse además por los siguientes ejemplos, ilustrando las modalidades preferidas de la misma. Sin embargo, se debe entender que estos ejemplos se incluyen simplemente para propósitos de ilustración y no pretenden limitar el alcance de la invención a menos que se indique de otra manera específicamente. EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, las muestras sanguíneas se dibujaron a partir de mujeres embarazadas quienes no tuvieron preeclampsia en ese tiempo. El desarrollo de preeclampsia o falta de desarrollo de preeclampsia en estos pacientes se confirmó en el final de los embarazos. Los Ejemplos 1-6 implican muestras sanguíneas dibujadas de mujeres que tienen preeclampsia severa, definidas como mujeres quienes tuvieron hipertensión de embarazo tardío (una presión sanguínea absoluta de por lo menos 140/90 torr o una ' elevación de por lo menos 30 torr sistólico o por lo menos 15 torr diastólico sobre los valores en las primeras 20 semanas) , proteinuria (por lo menos 30 mg de proteína/dL de orina en un espécimen cateterizado o por lo menos 60 mg/dL en orina anulada) , e hiperurice ia (ácido úrico en suero > 1 desviación estándar anterior normal para edad gestacional) y no llegó al término. Los Ejemplos 7-9 implican muestras sanguíneas dibujadas a partir de mujeres que tienen preeclampsias moderadas, definidas como que tienen el mismo criterio como se definió para preeclampsia severa, excepto que fueron capaces para llevar sus embarazos al término. Los siguientes reactivos se usaron en los ejemplos: Reactivo de precipitación- El reactivo de precipitación de colesterol-HDL marca RefLab, disponible de Medical Análisis Systems, Inc, (USA), que contiene 0.2 mM de sulfato de dextrano, 63.9 mM de cloruro de magnesio, 63.3 mM de cloruro de sodio, y 3.3 mM de polietilenglicol . Reactivo de Unión de Albúmina- El equipo de análisis • de albúmina disponible de Wako chemicals USA, Inc, contiene una solución de 0.2 mmol/L a pH 3.8 de bromocresol verde en 50 mmoles/L de regulador de citrato. Reactivo de unión NEFA con removedor de ácido ascórbico- El equipo de análisis disponible de Wako Chemicals USA, Inc, Richmond, VA. El reactivo A se preparó para el propósito de oxidizar ácido ascórbico y acetilar la Coenzima A para la determinación de NEFA. El reactivo B se preparó para el propósito de oxidizar acilo CoA y generar peróxido ácido para la determinación de NEFA. El peróxido ácido entonces reacciona con 3-metil-N-entil-N-ß-hidroxietil-anilina y 4-aminoantipirina para formar un color púrpura. Reactivo A: ACS (Acil Coenzima A Sintetasa) 3 U/frasco AOD (Oxidasa de Ascorbato) 15 U/frasco CoA (Coenzima A) 7 mg/ frasco ATP (Trifosfato de Adenosina) 30 mg/frasco 4-Aminoantipirina 3 mg/frasco Se agregó un diluyente de 10 ml (regulador de fosfato 0.05 M, pH 6.9, 3 mM de cloruro de magnesio, agente tensioactivo y estabilizadores) a cada frasco del reactivo A para hacer la Solución A activa. Reactivo B: ACOD (Acil Coenzima A Oxidasa) 132 U/frasco POD (peroxidasa) 150 U/frasco MEHA (3-metil-N-etil-N-ß-hidroxietil-anilina 4 mg/frasco Se preparó la solución B activa diluyendo el reactivo B con 20 ml de fenoxietanol (0.3% v/v) y un agente tensioactivo. -Ejemplo 1 (comparación) - La Figura 1 ilustra la falta de separación de diagnóstico que ocurre simplemente midiendo la concentración de albúmina total en plasma de 11 mujeres preeclámpticas y 11 comparadas control. Ejemplo 2 -(comparación) El mismo proceso de albúmina medida (total) se condujo como en el Ejemplo 1 en las mismas muestras de plasma, excepto que la VLDL se removió a partir del plasma anterior para medir la concentración de albúmina. La VLDL se precipitó a partir de cada muestra de plasma combinando 100 µL del plasma y 100 µL del reactivo de precipitación en un tubo centrífugo (ya sea la muestra 1:1 o 1:5 a la relación de reactivo es aceptable dependiendo de la concentración del reactivo) . El tubo centrífugo se agitó en un mezclador vortex para obtener una mezcla meticulosa y luego centrifugado durante 10 minutos a 3,000 rpm. El sobrenadante se decantó pipeteando en un tubo de prueba limpio. La concentración de albúmina se determinó utilizando el sobrenadante resultante. Los resultados se mostraron en la Figura 2. La comparación de los datos mostrados en las Figuras 1 y 2 muestra que existe alguna mejora en la separación de la concentración de albúmina entre el grupo de muestras sanguíneas preeclámpticas y las muestras sanguíneas control cuando el ' componente de VLDL se remueve antes de medir la albúmina. Existe menos traslape en la FIGURA 2 que en la FIGURA 1. La concentración de albúmina promedio para las muestras sanguíneas del paciente control es más elevada que la concentración de albúmina promedio para las muestras sanguíneas de un paciente preeclámptico. Ejemplo 3 - (comparación) Este ejemplo ilustra la separación de la concentración NEFA entre las muestras sanguíneas de 11 pacientes preeclámpticos y 11 pacientes control del ejemplo 1. El plasma procesado a partir de las muestras sanguíneas se probaron para concentración NEFA (sin remoción de VLDL) . Para medir la concentración NEFA, cinco µl de plasma se pipeteo en el pozo de una placa microtituladora de fondo plano. La solución activa para el .reactivo A se agregó, (70 µl) la solución se mezcló bien y la placa se incubó a 37 °C durante 10 minutos. La solución activa para el reactivo B se agregó entonces (140 µL, la placa se mezcló bien e incubó a 37 °C durante otros 10 minutos. La densidad óptica se midió en una longitud de onda de 550 nm en un lector de placa microtituladora. La absorbancia a partir de un espacio de agua se sustrajo y la concentración de NEFA se registró como una proporción de la absorbancia resultante cuando se comparó con un estándar conocido . Los resultados se muestran gráficamente en la Figura 3. Ejemplo 4- El Ejemplo 4 ilustra los métodos utilizados para conducir el proceso de la presente invención. Las muestras de plasma 22 se probaron como un ejemplo 3, excepto que la VLDL se removió del plasma para proporcionar una unión de sobrenadante libre de albúmina antes de medir la concentración de NEFA. La VLDL se precipitó de la muestra de plasma combinando 100 µL del plasma y 100 µL del reactivo de precipitación en un tubo centrífugo. El tubo centrífugo se agitó en un mezclador vortex para obtener una mezcla meticulosa y luego centrifugado durante 10 minutos a 3, 000 rpm. El sobrenadante se decantó pipeteando en un tubo de prueba limpio. La concentración NEFA del sobrenadante se midió de acuerdo con el método utilizado en el ejemplo 3. Los resultados se muestran en la Figura 4. La comparación de la Figura 3 a la Figura 4 ilustra que la concentración de NEFA en las muestras del paciente es significativamente separada entre las muestras preeclámpticas y las muestras control cuando la VLDL se remueve primero del plasma. Esto indica que una cantidad significativa de la NEFA en plasma se une a VLDL, además de unirse a la albúmina. Por lo tanto, la remoción de NEFA unida a VLDL y albúmina unida a VLDL permite una medición más precisa de la concentración de NEFA unida a la albúmina libre, que se correlaciona ' fuertemente con la capacidad para evitar la toxicidad de la sangre. Ejemplo 5- Las relaciones de albúmina a NEFA se calcularon para cada una de las 22 muestras de paciente utilizando el resultado de los Ejemplos 1-4. La relación se calculó primero dividiendo la concentración de albúmina determinada en el ejemplo 1 (muestra de plasma) por la concentración de NEFA determinada en el Ejemplo 3 (muestra de plasma). Estos resultados se representan en la Figura 5. Las relaciones TxPA-S se calcularon de acuerdo con la presente invención para cada una de las 22 muestras de paciente dividiendo la concentración de albúmina determinada en el Ejemplo 2 (medición sobrenadante) por la concentración NEFA determinada en el Ejemplo 4 (medición sobrenadante) . Estos resultados se representan en la Figura 6. La comparación de las Figuras 5 y 6 ilustran la cantidad significativa de separación obtenida midiendo la concentración de albúmina y NEFA en el presente proceso únicamente después de que la VLDL ha sido removida. La Figura 6 muestra una separación completa entre las muestras de preeclampsia y las muestras control. El análisis de los resultados mostrados en la Figura 6 indican que una relación TxPA-S que cae entre aproximadamente 1.17 y aproximadamente 1.78 indicaría un ' riesgo normal de preeclampsia, con un grado al 100% aproximadamente de certeza. Una relación TxPA-S que cae entre aproximadamente 0.63 y aproximadamente 0.9 indicaría un alto riesgo de preeclampsia, con un grado al 100% aproximadamente de certeza. Las relaciones TxPA-S que caen entre estos dos rangos serían indeterminadas . El diagrama mostrado en la Figura 6 es un ejemplo de una relación TxPA-S estándar útil en diagnóstico utilizando el presente proceso. Por ejemplo, un valor de corte de' una relación TxPA-S única de 1.0 puede usarse para relaciones TxPA-S de prueba separada para propósitos de diagnóstico, si se desea. Pero el uso de rangos discretos es más preciso, especialmente con una extensa población de muestras de referencia para derivar los rangos estándares TxPA-S . Ejemplo 6- El presente ejemplo ilustra un método previamente utilizado para determinar la columna TxPA y compara los resultados con TxPA-S. La concentración de albúmina (total) de las muestras de plasma obtenida a partir de 11 pacientes embarazadas diagnosticadas con preeclampsia severa y 11 pacientes embarazadas comparadas por edad gestacional, edad materna y raza se midieron directamente a partir de una alícuota (10:1) del plasma (sin remoción de VLDL) por enfoque isoeléctrico, de acuerdo al método descrito por Arbogast en Hipertensión in Pregnancy Vol. 15. Se colocan diez mililitros de plasma en un gradiente de densidad de sacarosa de 10 ml (5%-50%) con 0.25 ml de anfolina de pl 4-6.5. El caudal se aplicó durante 18 horas y la columna se eluyó en placas microtituladoras. Se recolectaron fracciones de una gota. Se mezclan doscientos microlitros del reactivo de albúmina con la muestra eluida y el color medido a aproximadamente 660 nm. El diagrama mostrado en la Figura 7 ilustra la alta correlación entre los resultados mostrados en la Figura 6 para la determinación colorimétrica de TxPA-S en alícuotas de sobrenadante de acuerdo con la presente invención contra la determinación del método de columna de TxPA en alícuotas de plasma a partir de las muestras del mismo paciente de acuerdo al método descrito por Arbogast en Hipertensión in Preganancy Vol. 15. El coeficiente de correlación (R ) encontrado entre los dos conjuntos de resultados fue 0.66. La variación de los duplicados es aproximadamente 10% con el método TxPA de columna, en tanto que el presente método colorimétrico que utiliza sobrenadante tiene aproximadamente una variación de 2%. Los Ejemplos 7-9 ilustran el uso del presente proceso en mujeres diagnosticadas después que tienen preeclampsia moderada. Ejemplo 7 (Comparación) - La Figura 8 muestra niveles de albúmina de suero ' total en 25 mujeres preeclámpticas y 25 mujeres control en el tercer trimestre de embarazo obtenidos conduciendo el mismo método utilizado en el Ejemplo 1. Como puede verse, un número de mujeres preeclámpticas tienen niveles de albúmina total (< 4 g/dl) bajo el rango estándar de los controles. Existe, sin embargo, el traslape significativo entre los grupos que realizan niveles de albúmina de suero total insatisfactorios que predicen preeclampsia. Ejemplo 8- La relación TxPA-S de las mismas 50 muestras sanguíneas analizadas eri el Ejemplo 7 se determinaron a través del mismo procedimiento utilizado en el Ejemplo 5. La Figura 9 muestra que la TxPA-S determinada para estos mismos dos grupos de mujeres resultó en una mejor separación de los grupos que hicieron la medición de los niveles de albúmina de suero total en el Ejemplo 7. Al utilizar la linea horizontal mostrada en la Figura 9 como un punto de referencia, 76% (19 de 25) de los controles pueden separarse de 68% (17 de 25) de los preeclámpticos . Esto es una mejora marcada sobre el Ejemplo 7. Ejemplo 9- En el presente Ejemplo, los datos TxPA-S determinados en el Ejemplo 8 se evaluaron además multiplicando cada relación TxPA-S por la concentración de HDL en el sobrenadante (después de la remoción de VLDL y LDL) . La concentración de colesterol de HDL se midió en el sobrenadante después de la precipitación de VLDL y LDL utilizando ácido fosfotungstato, como se describió en Lopes-Virella MF, Stone P, Ellis S, Colwell JA. Cholesterol Determination in High Density Lipoproteins Separated by Three Different Methods . Clin Chem 23:882-6 (1977), y Allain CA, Poon LS, Chan CSG, Richmond W. Fu PC. Enzymatic Determination of total Serum Cholesterol . Clin Chem 20:470-5 (1974), incorporada en la presente. La Figura 10 muestra la mejora adicional ganada incorporando el nivel de HDL en la ecuación. En este caso 76% (19 de 25) de las mujeres control se separaron del 88% (22 de 25) de las mujeres preeclámpticas. Aunque la presente invención se ha descrito en términos de la modalidad actualmente preferida en la especificación y en los ejemplos, se "debe entender que tal descripción no se interpretará como limitante para la invención descrita en la presente. No hay duda que después de leer la descripción, varias alteraciones y modificaciones se volverán evidentes para aquellos expertos en la técnica a la cual la invención pertenece. Se pretende que las reivindicaciones anexas sean interpretadas como que cubren todas de tales alteraciones y modificaciones que caen dentro del espíritu y alcance de la invención.

Claims (6)

1. REIVINDICACIONES 1. Un proceso para determinar la capacidad para evitar la toxicidad de plasma contra una enfermedad que tiene una correlación a una reducción en la concentración de albúmina pl 5.6 en el plasma, el proceso está caracterizado porque comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra de plasma que contiene albúmina libre, ácidos grasos no esterificados libres que tienen una longitud de cadena de acilo de 6 a 20 carbonos, triglicéridos que tienen longitudes de cadena de acilo de 6 a 20 carbonos, lipoproteínas de densidad muy baja, lipoproteínas de baja densidad, y lipoproteínas de densidad elevada; (b) determinar la concentración de la albúmina libre; (c) determinar la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres; y (d) calcular un valor indicativo de la capacidad para' evitar la toxicidad del plasma comparando la concentración de la albúmina libre a la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres.
2. 2. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de cálculo comprende dividir la concentración de la albúmina libre por la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres, por lo que proporciona una relación de TxPA-S como el valor indicativo.
3. 3. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de determinar la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres se conduce después de una etapa de remover las lipoproteínas de densidad muy baja a partir de la muestra de plasma. . El proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la etapa de determinar la concentración de la albúmina libre se conduje después de la etapa de remoción, removiendo las lipoproteínas de densidad muy baja a partir de la muestra de plasma. 5. El proceso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la etapa para remover las lipoproteínas de densidad baja comprenden además remover las lipoproteínas de densidad baja a partir de la muestra de plasma. 6. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una etapa de determinar la concentración de triglicéridos y HDL, en donde además calcular la etapa (d) incluye factorizar la concentración de los triglicéridos y HDL en el cálculo del valor. 7. El proceso de conformidad con las reivindicaciones 1 y 6, caracterizado porque comprende además una etapa (e) para evaluar la capacidad para evitar la toxicidad del plasma contra tal enfermedad incluyendo comparar el valor calculado en la etapa (d) a un estándar determinado conduciendo cada una de las etapas en una pluralidad de muestras de plasma, con cada una de la pluralidad de muestras de plasma retirándose de un paciente que tiene un diagnóstico conocido por la presencia de, o el desarrollo de tal enfermedad. 8. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque comprende diagnosticar la capacidad para evitar la toxicidad del plasma comparando los factores de diagnóstico que incluyen los valores TxPA-S a un estándar determinado conduciendo el proceso de la reivindicación 1 en una pluralidad de muestras de plasma que tienen una capacidad para evitar la toxicidad conocida para una enfermedad inhibida de albúmina. 9. El proceso de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el estándar es un valor único, un rango único de valores, o una pluralidad de rangos de valores . 10. El proceso de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la pluralidad de rangos son esencialmente exclusivos entre sí. 11. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la enfermedad es preeclampsia, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, enfermedad vascular diabética, síndrome nefrótico, sepsis, trauma, cáncer, envejecimiento, mortalidad o morbilidad. 12. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa (a) se conduce a manera de precipitación, la etapa (b) se conduce realizando un análisis de unión de tinte colorimétrico, ELISA, o un radioinmunoensayo, la etapa (c) se conduce realizando un análisis de titulación, un análisis de radioisótopo o un análisis colorimétrico que incluye un análisis colorimétrico enzimático. 13. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue la muestra de plasma contiene ácido ascórbico y la etapa de determinar la concentración de los ácidos grasos no esterificados libres se conduce después de una etapa para remover el ácido ascórbico a partir de la muestra de plasma. 1 . Un proceso para determinar la capacidad para evitar la toxicidad del plasma contra una enfermedad que tiene una correlación para una reducción en la concentración de albúmina pl 5.6 en el plasma, el proceso comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra de plasma que comprende una concentración de la albúmina libre total que incluye una concentración de albúmina pl 5.6 libre y una concentración de albúmina pl 4.8 libre, triglicéridos que tienen cadenas de acilo que tienen de 6 a 20 carbonos, lipoproteínas de densidad muy baja, lipoproteínas de densidad baja, lipoproteínas de alta densidad, y ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre total, los ácidos grasos no esterificados que tienen una longitud de cadena de acilo de 6 a 20 carbonos; (b) determinar un valor indicativo de la concentración de la albúmina pl 5.6 libre; y (c) evaluar la capacidad para evitar la toxicidad del plasma contra la enfermedad comparando el valor a un valor estándar obtenido conduciendo cada una de las etapas (a) y (b) en una pluralidad de muestras de plasma, con cada una de la pluralidad de las muestras de plasma retirándose de un paciente que tiene un diagnóstico conocido para la enfermedad. 15. El proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la etapa (b) se conduce determinando la concentración de la albúmina libre total y determinando la concentración de los ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre total, y calculando el valor comparando la concentración de la albúmina libre total a la concentración de los ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre total. 16. El proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el valor determinado en la etapa (b) es la concentración de la albúmina pl 5.6 libre en el plasma, en donde tal etapa (b) comprende remover la VLDL y la albúmina pl 4.8 a partir del plasma para proporcionar un sobrenadante de plasma, y después de esto medir la concentración de la albúmina restante en el sobrenadante. 17. El proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la enfermedad es preeclampsia, aterosclerosis, apoplejía, enfermedad vascular periférica, enfermedad vascular diabética, síndrome nefrótico, sepsis, trauma, cáncer, envejecimiento, mortalidad o morbilidad. 18. Un equipo de análisis útil para determinar la capacidad para evitar la toxicidad de sangre está caracterizado porque comprende: (a) un reactivo que precipita lípido; (b) un reactivo que despliega un color sobre la unión con la albúmina pl 5.6, pero no despliega el color sobre la unión con la albúmina pl
4. 4.8; y (c) un reactivo que despliega un color sobre la unión con un ácido graso no esterificado. 19. El equipo de análisis de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el reactivo (a) incluye un glicano de sulfato seleccionado del grupo que consiste de sulfato de dextrano, heparina, sulfatos de condroitina A y B, sulfato de heparina, y combinaciones de los mismos, y una sal de catión divalente seleccionada del grupo que consiste de magnesio, calcio y combinaciones de los mismos; el reactivo (b) se selecciona del grupo que consiste de bromocresol verde, bromocresol púrpura y una combinaciones de los mismos; y el reactivo (c) es una mezcla que contiene compuestos seleccionados del grupo que consiste de acil coenzima A sintetasa, trifosfato de adenosina, y coenzima A y combinaciones de los mismos. 20. El equipo de análisis de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque incluye una enzima que oxidiza el ácido ascórbico tal como oxidasa de ascorbato u otra enzima de oxidización de ascorbato y combinaciones de la misma. RESUMEN La invención descrita es un proceso para determinar la actividad citoprotectora de plasma que evita la destrucción de células endoteliales y anticipa el desarrollo de un número de enfermedades tales como aterosclerosis, preeclampsia, edema, síndrome nefrótico y apoplejía. La presente invención incluye un método para diagnosticar una tendencia del paciente para desarrollar una enfermedad que tiene una correlación para una reducción en la concentración de albúmina pl 5.6 en el plasma determinando un valor indicativo de la concentración de la albúmina pl 5.6 que no se une a la VLDL ("albúmina pl 5.6 libre") en el suero sanguíneo del paciente. La modalidad preferida del proceso utiliza métodos in vitro para obtener un indicador de la albúmina pl 5.6 libre en lugar de medir directamente la concentración de la albúmina pl 5.6 libre. El método preferido comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra de plasma que contiene albúmina libre, triglicéridos, lipoproteínas de densidad muy baja, lipoproteínas de densidad baja y ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre; (b) determinar la concentración de la albúmina libre; (c) determinar la concentración de los ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre; y (d) calcular un valor indicativo de la capacidad para evitar la toxicidad del plasma comparando la concentración de la albúmina libre a la PA/a/ 200 2 \ ^s\3<\ concentración ;de los ácidos grasos no esterificados unidos a la albúmina libre. El presente proceso no proporciona mediciones directas de la actividad citoprotectora de plasma, sino más bien, un valor empírico que tiene relevancia clínica para identificar pacientes con un alto riesgo de desarrollar enfermedades inhibidas por albúmina pl
5. 5.
6. 6. pA/a/ 2002\ ^3i