MXPA01012663A - Uso de interleucina-11 para tratar el shock hemorragico. - Google Patents

Abstract

Se describe el uso de interleucina-11 para tratar el shock hemorragico en un mamifero que necesita de dicho tratamiento.

Description

USO DE INTERLEUCI NA-1 1 PARA TRATAR EL SHOCK HEMORRÁGICO Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reclama el beneficio de la Solicitud Norteamericana Provisional No. 60/138,054 presentada el 8 de junio de 1999 cuyo contenido está incorporado a la presente descripción en su totalidad como referencia . Campo de la Invención La presente invención se refiere al campo de la prevención y tratamiento del shock hemorrág ico utilizando interleucinas-1 1 . Antecedentes de la I nvención El shock hemorrágico se presenta siempre que la pérdida aguda de sangre excede de aproximadamente el 20% del volumen normal de sangre. La característica central del shock hemorrágico es el volumen de sangre en circulación reducido el cual da como resultado la hipoperfusión del sistema de los órganos principales. La hipoperfusión causa la isquemia del tejido local y las deficiencias del substrato nutriente que conduce al daño progresivo de órganos múltiples y a ia disfunción subsecuente (consultar la publicación de Keith , JC, "Efecto del pretratamiento de lidocaína en el shock hemorrág ico ag udo en las ratas" (Effect of lidocaine pretreatment on acute hemorrhag ic shock in the rat), Circulatory Shock 1 9: páginas 283 a 292 (1 986) . Cuando es iniciada la resucitación por medio del reemplazo del volumen intravascular con sangre, o soluciones de fluido fisiológico, ocurre un daño adicional transmitido por la lesión de reperfusión (Keith , mencionado anteriormente). El sistema gastrointestinal es dañado severamente durante el shock hemorrágico y la resucitación . Ocurre la necrosis del intestino delgado y la traslocacion bacterial subsecuente con la liberación de endotoxinas que son observadas comúnmente (consultar la publicación de Tamion, F. et al. , Am. J. Physiol . 273 (2 Pt 1 ): páginas G314 a 321 (1 997)). Esto, frecuentemente da como resultado una regulación ascendente marcada de las citocinas proinflamatorias, las cuales pueden empeorar la disfunción múltiple del órgano. Por lo tanto, debe ser benéfico en el tratamiento del shock hemorrágico, un agente tal como una interleucina-1 1 ("rh l L-H ") humana recombinante, que tiene efectos protectores en el sistema gastrointestinal, y disminuye la secreción de citocina proinflamatoria. Sumario del Invento Los solicitantes han determinado por primera vez, que la interleucina-1 1 ("I L-1 1 ") mejora la supervivencia al shock hemorrágico. Por lo tanto, la presente invención proporciona métodos de tratamiento y prevención del shock hemorrágico utilizando I L-1 1 . De acuerdo con la presente invención , la I L-1 1 , análogos y derivados de la misma, son administrados a los pacientes, ya sea profilácticamente, o después de la presentación de los síntomas asociados con el padecimiento anteriormente mencionado. La I L-1 1 puede ser admin istrada en vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados, ya sea sola o en combinación con otros agentes convencionales útiles para aliviar los síntomas asociados con estos padecimientos. En una modalidad , la invención comprende u n método de prevención del shock hemorrágico, el cual comprende la adm inistración a un mam ífero antes de la presentación de los síntomas, de una cantidad terapéuticamente efectiva de interleucina-1 1 . En otra modalidad , la invención comprende un método para tratar el shock hemorrágico, el cual comprende la administración a un mamífero que está experimentando este padecim iento de una cantidad terapéuticamente efectiva de interleucina-1 1 . En las modalidades preferidas, la dosis terapéutica es efectiva para evitar o tratar el shock hemorrágico. De preferencia, la cantidad terapéuticamente efectiva de interleucina- 1 1 comprende entre aproximadamente 0.1 µ?/kg y aproximadamente 1 00 mg/kg del peso corporal, más preferentemente de aproximadamente 1 µ9/?<9 y aproximadamente 1 0 mg/kg del peso corporal y aún más preferentemente entre aproximadamente 10 µg/kg y aproximadamente 1 mg/kg del peso corporal. Descripción Detallada de la Invención Todas las patentes y literatura citadas como referencia, están incorporadas en su totalidad a la presente descripción como referencia.

La presente invención proporciona métodos de tratamiento y prevención del shock hemorrágico, utilizando IL-1 1 . La IL-1 1 es una citocina multifuncional derivada de una línea celular estromal (ver la publicación de Paul, S. R. , et al., en: Proc Nati. Acad. Sci. EUA, (1990) 87: páginas 7512 a 7512) la cual puede estimular, la producción de megacariocitos y plaquetas (ver la publicación de Bruno, E., et al. , en: Exp. Hematol. (1991 ) 19: páginas 378 a 385), regula la proliferación y diferenciación de precursores del macrófago (ver la publicación de Du, X.X. y D.A. Williams, en: Blood (1994) 83: páginas 2023 a 2030), y estimula la producción de inmunoglobulina de células B por medio de un mecanismo dependiente de los linfocitos T (ver la publicación de Yin, T., et al. , en: J. Exp. Med. (1992) 175: páginas 21 1 a 21 5). Los estudios recientes han mostrado los efectos profilácticos protectores de la IL-1 1 en el daño de la mucosa intestinal debido a la radiación y la quimioterapia (ver publicación de Du, X.X. et al. , en: Blood (1994) 83: páginas 33 a 37) y la necrosis isquémica del intestino delgado (ver publicación de Du, X.X. et al., en: Am. J . Physiol (1997) 272: páginas G545 a G552). Además, el grado de la lesión torácica inducida por radiación (ver la publicación de Redlich, C.A. , et al. , en: J. Immunol. (1996) 157: páginas 1705 a 1710) y la mortalidad debida a la endotoxemia también es reducida mediante la administración de IL-1 1 . Indicando que la IL-1 1 puede actuar como una citocina antiinflamatoria, (ver publicaciones de Barton, B.E. , et al., en: Infect Immun. (1996) 64: páginas 714-718; Castagliuolo, I . , et al. , en: Am.

J. Physiol. (1997) 273: páginas G333 a G341; y Misra, B.R., et al., en: J. Endotoxin Res. (1996) 3: páginas 297 a 305). La IL-11 es descrita en detalle en la Solicitud PCT Internacional /US90/06803, publicada el 30 de mayo de 1991; así como en la Patente Norteamericana No. 5,215,895; emitida el 1° de junio de 1993. Una IL-11 clonada humana fue depositada anteriormente con el ATCC, 10801 University Boulevard, Manassa, VA 20110-2209, el 30 de marzo de 1990 bajo el ATCC No. 68284. Además, tal y como se describe en la Patente Norteamericana No. 5,270,181; emitida el 14 de diciembre de 1993, y en la Patente Norteamericana No. 5,292,646; emitida el 8 de marzo de 1994; la IL-11 puede también ser producida de manera recombinante como una proteína de fusión con otra proteína. La IL-11, puede ser producida en una variedad de células huésped, recurriendo a las técnicas de ingeniería genética que son ahora convencionales. Además, la IL-11 puede ser obtenida de diferentes líneas celulares, por ejemplo, de la línea celular del fibroblasto del pulmón humano, MRC-5 (ATCC Acceso No. CCL 171) y en la línea celular trofoblástica humana TPA30-1 de Paul et al., (ATCC Acceso No. CRL 1583). En la revista Proc. Nati. Acad Sci. EUA 87: página 7512 (1990), se describió la IL-11 humana como codificadora del cADN así como de la secuencia dé aminoácidos deducida (aminoácidos del 1 al 199). La Patente Norteamericana No. 5,292,646 mencionada anteriormente, describe una forma des-Pro de la IL-11 en la cual la prolina de la terminal-N de la forma madura de la IL-11 (aminoácidos 22 a 199) ha sido removida (aminoácidos 23-199). Como lo podrá apreciar un experto en la técnica, cualquier forma de IL-1 1 la cual retiene la actividad de la IL-1 1 es útil de acuerdo con la presente invención. Además de las técnicas recombinantes, la I L-1 1 también puede ser producida mediante la síntesis qu ímica convencional conocida. Los métodos para construir los polipéptidos útiles en la presente invención por medios sintéticos son conocidos para aquellos expertos en la técnica. Estas secuencias de polipéptido de citocina construidos sintéticamente, en virtud de su participación estructural primaria , secundaria o terciaria y las características de conformación con los polipéptidos naturales de citocina, se anticipa q ue poseen actividades biológicas en común con los mismos. Dichas secuencias de polipéptidos de citocina construidos sintéticamente o fragmentos de los mismos, los cuales duplican o duplican parcialmente la funcionalidad de la misma, también pueden ser utilizados en el método de la presente invención . Por lo tanto, ellos pueden ser empleados como substitutos inmunológicos o biológicamente activos de las citocinas naturales purificadas útiles en la presente invención. Las modificaciones en las proteínas, los péptidos o secuencias de ADN de estas citocinas o fragmentos activos de la misma , también pueden producir proteínas las cuales pueden ser empleadas en los métodos de la presente invención . Dichas citocinas modificadas las pueden hacer los expertos en la técnica utilizando técnicas conocidas. Las modificaciones de interés en la secuencia de citocina, por ejemplo, la secuencia I L-1 1 puede incluir el reemplazo, inserción o eliminación de u no o más residuos de aminoácidos seleccionados en la secuencia de codificación . Las técnicas mutagenéticas para dicho reemplazo, inserción o eliminación son bien conocidas para los expertos en la técnica (ver por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 4,51 8,584). Otras m utaciones específicas de las secuencias de los polipéptidos de citocina los cuales pueden ser útiles terapéuticamente, tal y como aq uí se describen , pueden comprender, por ejemplo, la inserción de uno o más sitios de glicosilación . Un sitio de reconocim iento de glicosilación enlazado por asparagina, puede ser insertado dentro de la secuencia mediante la eliminación, substitución o adición de aminoácidos en la secuencia de polipéptidos o nucleótidos en la secuencia de ADN . Dichos cambios se pueden hacer en cualquier sitio de la molécula que es modificada mediante la adición del carboh idrato en lazado-O . La expresión de d icho nucleótido o secuencias de polipéptidos alteradas de este modo produce variantes las cuales pueden ser glicosiladas en dichos sitios. Los análogos y derivados adicionales de la secuencia de la citocina seleccionada que se esperaría que retengan o prolonguen su actividad en su totalidad o en parte, y los cuales se espera que sean útiles en los métodos presentes, también pueden ser hechos fácilmente por un experto en la técnica. Una de dichas modificaciones puede ser la adhesión de polietilenglícol (PEG) en los residuos existentes de lisina en la secuencia de la citocina o la inserción de uno o más residuos de lisina u otros residuos de aminoácidos que pueden reaccionar con el PEG, o derivados de PEG, dentro de la secuencia por técnicas convencionales para hacer posible el enlace de las porciones PEG. Los análogos adicionales a estas citocinas seleccionadas también pueden ser caracterizados por medio de variaciones alélicas en la secuencia de ADN que los codifica, o variaciones inducidas en la secuencia de ADN que las codifica. Se ha anticipado que todos los análogos descritos en las publicaciones anteriormente mencionadas, incluyendo aquellas caracterizadas por las secuencias de ADN con la capacidad de hibridar a las secuencias de citocina descritas bajo condiciones severas de hibridación , o condiciones no severas (ver la publicación de Sambrook, et al. , en: Molecu lar Cloning . A Laboratory Manual, 2da. Edición , Cold Spring Harbor Laboratory, New York, (1989)) serán útiles de una manera similar en esta invención . También se consideran útiles en estos medios , las moléculas de fusión preparadas mediante la fusión de la secuencia o un fragmento biológicamente activo de la secuencia de u na citocina a otra citocina o agente terapéutico proteináceo , por ejemplo, I L-1 1 fusionada a I L-6 (ver por ejemplo, los métodos de fusión descritos en el documento PCT/US91 /06186 (WO 92/04455) , publicada el 1 9 de marzo de 1992) . Alternativamente, se pueden administrar combinaciones de las citocinas juntas de acuerdo con el método presente.

Por lo tanto, en donde se mencionan la I L-1 1 por su nombre en la descripción de los métodos de la presente invención , deberá q uedar entendido por aquellos expertos en la técnica que la I L-1 1 comprende la proteína prod ucida por las secuencias actualmente descritas en la técnica, así como proteínas caracterizadas por las modificaciones descritas anteriormente, siempre que ellas retengan la actividad substancialmente similar. Las composiciones farmacéuticas que contienen IL-1 1 que son útiles en la práctica de los métodos de la presente invención , contienen también veh ículos farmacéuticamente aceptables, diluyentes, rellenadores, sales, reguladores, estabilizadores y/u otros materiales bien conocidos en la técnica. El término "farmacéuticamente aceptable" significa u n material que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica del ingrediente (s) activo (s) , y que no sea tóxico para el huésped al cual es administrado. Las características del vehículo u otro material dependerán de la ruta de administración . La administración se puede llevar a cabo en una variedad de medios convencionales. La inyección intraperitoneal es el método de administración preferido. También se pueden emplear inyecciones intravenosas, cutáneas o subcutáneas. Para la inyección, la I L-1 1 será administrada preferentemente en la forma libre de pirógenos, y soluciones acuosas parenteralmente aceptables. La preparación de dichas soluciones de proteína parenteralmente aceptables que tienen un control adecuado del pH, isotonicidad, estabilidad y similares que se encuentran dentro de los conocimientos de la técnica. La cantidad de IL-1 1 utilizada para el tratamiento dependerá de la celeridad de la condición , la ruta de administración , la reactividad o actividad del ingrediente activo, y finalmente será decidida por quien proporciona el tratamiento. Al practicar estos métodos del tratamiento de la presente invención , se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de I L-1 1 . El término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad total de cada componente activo del método o composición que sea suficiente para mostrar un beneficio significativo en el paciente (por ejemplo, curación , alivio, inh ibición , demora o prevención de la presentación de, prevención de la recurrencia o reincidencia). Una técnica común para determinar una cantidad terapéuticamente efectiva para un paciente determinado, es administrar dosis escaladas periódicamente hasta que se observe un beneficio importante en el paciente, por medio del proveedor del tratamiento. Cuando es aplicado a un individuo, u n ingrediente activo, administrado solo, el término se refiere a ese solo ingrediente. Cuando es aplicado a una combinación , el término se refiere a cantidades combinadas de ing redientes activos que dan como resu ltado el efecto terapéutico ya sea administrado en combinación , en serie o simultáneamente. U na dosis terapéuticamente efectiva de I L-1 1 en esta invención , está contemplada en un rango de aproximadamente 0.1 µ??^ a aproximadamente 1 00 mg/kg del peso corporal, más preferentemente entre aproximadamente 1 Mg kg y aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal y aún más preferentemente entre 10 g/kg y aproximadamente 1 mg/kg del peso corporal. El número de administraciones puede variar, dependiendo del paciente individual, y de la severidad de la enfermedad. Los inventores presentes, han mostrado por primera vez el rol protector de la I L-1 1 en el shock hemorrágico. La I L-1 1 mejora la supervivencia en el shock hemorrágico, inhibiendo la inflamación , evitando la lesión del tejido, facilitando la reparación del tejido y minimizando la traslocación de endotoxinas/bacterial relacionada con el shock proveniente del intestino. La presente invención es ejemplificada adicionalmente, y soportada por la referencia a los resultados experimentales que se describen a contin uación . EJEMPLOS EJEMPLO 1 : Modelos de intesti no corto e isquemia intestinal/repercusión La interleucina-1 1 produce efectos tróficos de la mucosa intestinal en las ratas que tienen el síndrome de intestino delgado corto experimental (ver la publicación de Liu , Q . , et al. , en: J . Pediatr. Surg . (1 996) 31 (8): pág inas 1 047 a 1 050). Después de una resección del 90% del intestino delgado, los grupos de animales fueron tratados con rhl L-1 1 ( 1 25 microgramos/kg dos veces al día , por ruta subcutánea) o albúmina de suero bovino al 0.1 %. los animales fueron pesados diariamente y sacrificados en los días 2, 4, 6 ó 8, el intestino delgado pequeño restante fue evaluado, por la altura de la vellosidad y la mitosis de la célula de la cripta. El peso corporal de los alimentos que recibió I L-1 1 fue sig nificativamente mayor al inicio del día postoperatorio 4 en com paración con los grupos a los que se les administró albúmina de suero bovino ("BSA") . Las ratas q ue recibieron IL-1 1 también tuvieron una altura del vello significativamente mayor, e índices mayores mitóticos de la célula de la cripta. Los efectos de la interleucina-1 1 y el factor de crecimiento epidérmico en el intestino delgado residual fueron comparados después de una resección masiva del intestino delgado en las ratas (ver publicación de Fiore, N .F. et al. , en : J . Pediatr. Surg ( 1998) 33 (1 ) : páginas 24 a 29) . El peso corporal fue sim ilar en el día 4 y el día 8 después de la resección. Los animales tratados con rh lL-1 1 e I L-1 1 -EGF tuvieron una masa de mucosa aumentada en el d ía 4 y 8 comparada con los controles y el EGF. El espesor del músculo fue aumentado de manera importante en el grupo EGF. El I L tuvo un efecto trófico en la enterocitis intestinal del intestino delgado, causando la proliferación celular, y un espesor aumentado de la mucosa. El EGF tuvo un efecto más generalizado en el intestino causando la proliferación tanto de los enterocitos, como de los miocitos. El I L-1 1 , con y sin EGF, puede tener utilidad clínica en casos de síndrome de intestino corto.

Los efectos protectores de la interleucina-1 1 han sido mostrados en modelos múridos de necrosis isquémica del intestino (ver la publicación de Du . , X. , et al. , en: Am . J . Physiol. (1 997) 272 (3 Pt 1 ): páginas G545 a G552). El tratamiento previo con rh l l_-1 1 en los ratones con isquemia intestinal (inducida por la oclusión de la arteria mesentérica superior durante 90 minutos) disminuyeron la morbidad y mortalidad de una manera importante. Los ratones tratados con rh lL-1 1 demostraron una recuperación rápida de la mucosa intestinal, un aumento concurrente en la actividad mitótica , una supresión de la apóptosis en las células de la cripta intestinal, y u n recuento de plaquetas leucocitos periféricos aumentados. Las ratas tratadas con vehículo desarrollaron trombocitopenia después de la isquemia, pero ningún ratón tratado con rh l L-1 1 desarrolló trombocitopenia. EJEMPLO 2: Modelos de Condiciones Inflamatorias Sistémicas La rh l L-1 1 mejora la supervivencia en el modelo de rata neutropénica de Pseudomonas sepsis (Ver por ejemplo, Opal, S. M. , et al., en: Infect. Dis. (1 998) 178: páginas 1205 a 1208). La rhl L-1 1 (150 µ?/?^) fue administrada de manera intravenosa (" IV") , una vez diariamente durante tres días, comenzando en la presentación de fiebre en las ratas tratadas con ciclofosfamida que fueron colonizadas en el aparato gastrointestinal con Pseudomonas aeruginosa 1 2.4.4 al inicio del experimento. Los animales tratados con rh lL-1 1 tuvieron una reducción importante en el nivel cuantitativo de infecciones del pulmón; una reducción en el edema pulmonar y una reducción marcada en las lesiones al epitelio gastrointestinal del intestino grueso y delgado. El cuarenta por ciento de los animales tratados con rhll_-11, con 60% de ciprofloxacina y 100% de rhlL-11-ciprofloxacina sobrevivieron. Estos resultados indican que la rhll_-11 apoya la integridad de la mucosa de la membrana del aparato digestivo, y disminuye la respuesta inflamatoria sistémica a la infección negativa-gram experimental en animales comprometidos inmunológicamente. En los ratones tratados con dosis determinadas de D-galactosamina y enterotoxina B Staphylococcus aureus como modelo del shock tóxico transmitido por la célula T detonada por el superantígeno (ver la publicación Barton, B.F. et al., en: Infect. Immun. (1996) 64: páginas 714 a 718), la rhlL-11 (5 a 500 µg/kg IP), administrada como un tratamiento previo una hora antes de la mortalidad disminuida del superantígeno, en una modalidad dependiente de la dosis en 48 horas. En los animales tratados con 500 µ9^, la mortalidad fue del 55% comparada con el 100% de los animales tratados con BSA. La rhlL-11 ha sido evaluada en un modelo de conejo de endotoxemia (ver la publicación de Misra, B.R., et al., en: J. Endotoxin Res. (1996) 3: páginas 297 a 305). El lipopolisacárido (LPS) fue administrada IV y 30 minutos después se administró el vehículo o la rhlL-11 (100 µ?/kg IV). La presión arterial de promedio del grupo tratado con vehículo, fue del 55% de la línea de base 5 horas después de la administración del LPS, mientras que la de los animales tratados con rhlL-11 fue del 94%. La evaluación histológica del íleon, el ciego y el colon mostraron hemorragias, edema, y daños en la mucosa disminuidos en los animales tratados con el rhll_-11, comparados con los animales tratados con vehículo. Los animales tratados con rhlL-11 mostraron niveles significativamente inferiores en el nitrato/nitrito en el plasma, comparados con los animales tratados con el vehículo. Estos resultados demuestran que la rhlL-11 puede evitar la hipotensión que ocurre como consecuencia de la endotoxemia, y que este efecto está asociado con los niveles disminuidos de ácido nítrico en el plasma. En un modelo múrido de endotoxemia, el efecto de la rhlL-11 en los niveles en el suero de las citocinas proinflamatorias, fue evaluado (ver por ejemplo, Trepicchio, W.L., et al., J. Immunol. (1996) 157: páginas 3627 a 3634). Los ratones hembra C57BL/6J fueron inyectados con PBS o rhlL-11 (500 µg kg IP) y 4 horas después inyectados con PBS o LPS. Los animales tratados con rhlL-11 antes de la administración de LPS tuvieron un pico significativamente inferior en los niveles en el suero de TNF- , IFN-?, e I L-1 p en un rango de 80 a 95% de reducciones, comparados con animales que recibieron solamente LPS. El tratamiento con rhlL-11 no afectó la producción de IL-6 ó IL-10 inducido por LPS, y el tratamiento de rhlL-11 sólo no resultó en niveles detectables en el suero de IL-6 ó IL-10. La rhlL-11, también inhibió la producción de TNF-a inducida por el LPS en los ratones deficientes en IL-6. Por lo tanto, la rhlL-11 puede reducir la producción de citocina proinflamatoria durante la respuesta inflamatoria sistémica in vivo y esta actividad no depende de la inducción de IL-10 ó IL-6. La interleucina-11 mejoró la supervivencia, y redujo la traslocación bacterial y la supresión de médula ósea en los ratones quemados (ver por ejemplo, la publicación de Schindel, D., et al., en: J. Pediatr. Surg. (1997) 32(2): páginas 312 a 315). El efecto de la IL-11 en la supervivencia, la citoarquitectura intestinal, la traslocación bacterial y la eliminación de médula ósea en un modelo múrido quemado, altamente letal, fue evaluada. Los ratones C3H/HeJ, de 8 a 10 semanas de edad, se sometieron a una quemadura de un área de la superficie del cuerpo estandarizado del 32% en total (TBSA), utilizando una plantilla quemada. Los ratones fueron divididos en grupos iguales que recibían IL-11 (125 microgramos/kg, dos veces al día, de manera subcutánea ("SC")) y el control (BSA). La supervivencia fue calculada a los 7 días posteriores a la quemadura. A las 24 horas posteriores a la quemadura, los ratones tratados con IL-11 tuvieron menos bacterias entéricas y linfamesentérica, aumentaron la células de la cripta intestinal, y la altura de la vellosidad intestinal, aumentaron las plaquetas periféricas, y los recuentos de linfocitos y se comparó una supervivencia mejorada con los controles. Estos datos demuestran, que la IL-11 mejoró la supervivencia, la citoarquitectura intestinal redujo la traslocación bacterial, y redujo la eliminación de médula ósea después de una quemadura TBSA del 32% en los ratones.

EJEMPLO 3; Shock hemorrágico Las ratas Spreag ue-Dawley fueron anestesiadas, y se les extrajeron 28 ml/kg de sangre (un volumen de sangre de 35%) durante 1 0 min utos para inducir un shock hemorrágico agudo. Después de 75 minutos del shock, los animales fueron seleccionados al azar en grupos de tratamiento d iferentes. Posteriormente, fueron resucitados durante 60 minutos con una solución lactada de Ringer de 3.1 (flu ido: pérdida sanguínea) IV q ue conten ía rh l L-1 1 (1 00 µ?/kg), anti-I L-1 1 (5.7 mg/kg) o solamente la solución la solución Lactada de Ringer. Las presiones sangu íneas fueron medidas 3 horas después del shock. Posteriormente, los g rupos de animales fueron , ya sea eutanizados a las 3 horas o se permitió q ue despertaran de la anestesia y se observaron a las 72 horas posteriores al choque. El índ ice de mortalidad de las 72 horas fue determinado, y posteriormente los animales fueron eutanizados. En la necropsia, los especímenes del íleon fueron fijados en formalina neutral regulada al 10% , y posteriormente examinados para evaluar el grado de daño en el intestino delgado. Se obtuvieron muestras adicionales del hígado y el íleon para la. cuantificacion de los niveles de citocina en el mARN por medio de RT-PCR. Las secciones del íleon fueron examinadas con un microscopio por un evaluador sin conocimiento del grupo de tratamiento. Los especímenes intestinales fueron calificados por el grado de: atrofia de la vellosidad , atrofia de la cripta, eliminación de la célula Globet, Dilación del Segmento; e infiltrado celular inflamatorio. Una calificación de 0 indicó que no había lesión, mientras que una calificación de 3 indicó un daño severo y necrosis. El 92 por ciento de los animales tratados con rhlL-11 sobrevivieron hasta 72 horas, mientras que solamente el 72% y el 79% de los animales tratados con solución lactada de Ringer sola, y el grupo tratado con solución lactada de Ringer y anti-IL-11 sobrevivieron, respectivamente. Los niveles de factor alfa de necrosis tumoral (TNF-a) se podrán ver a continuación. Tanto en el hígado como en el íleon, el tratamiento con rhlL-11 al momento de la resucitación, redujo de manera importante la expresión del TNF-ct.

Tabla 1. RP-PCR. niveles de mARN específicos de TNF-a a las 72 horas Grupo íleon Hígado LR 3.8 U 0.17 3.7"0.17 LR-Anti-IL-11 4.0"1.0 4.9"0.75 LR-rhlL-11 1.8?.17* 1.6"0.18H *P = 0.0089 HP = 0.0002 Los resultados histológicos se muestran en la tabla 2. La rhlL-11 agregada al fluido de resucitación, redujo las calificaciones de lesión histológca a las 3 y 72 horas. Las diferencias fueron altamente significativas de las 72 horas. Las fotomicrografías representativas de las muestras a las 72 horas se ilustran en la figura 1. Es importante notar, que la destrucción completa de las vellosidades, en los grupos de solución lactada de Ringer, mientras que las vellosidades parecieron relativamente normales en los grupos tratados con rhl L-1 1 . Tabla 2. Efectos de la rhlL-11 y anti-IL-11 en las lesiones histológicales ¡leales a las 3 y 72 horas. I NSERTAR TABLA PÁGI NA 15 No. de Vellosidad Tratamiento de Célula Goblet Célula de ratas inflamatoria la cripta dilatación del Infiltración Atrofia Atrofia Descongestión segmento 3 horas LR 8 2.13n0.34 125*0.23 1.13-0.21 1.94-0.33 1.50-0.25 rhlL-11 7 1.50-0.38 0.71-0.24 0.71-0.21 1.64-0.37 1.36"0.28 anti-IL-11 6 1.83-0.33 1.00-0.39 0.83-0.28 1.50-0.43 1.25-0.23 72 horas LR 7 1.86"0.18 0.93-0.34 0.79"0.18 1.36-0.28 1.43-0.07 rhlL-11 8 1.13-0.16 0.19"0.13 0.19-0.13 1.19-0.25 0.88"0.23 (p=0.005) (p=0.04) (p=0.01) (p=0.33) (p=0.02) anti-IL-11 7 1.83-0.33 1.00-0.39 0.83-0.28 1.50-0.43 1.25"0.21 Como lo muestra la tabla 2 anterior, la rhl L-1 1 ag regada al fluido de resucitación eliminó la expresión de la TN F-a y el íleon , disminuyó el daño intestinal a las 72 horas y mejoró la supervivencia después del shock hemorrágico. Adicionalmente, en experimentos substancialmente similares al descrito anteriormente en el ejemplo 3, la expresión del TN F, IL-6, las citocinas proinflamatorias y las moléculas de adhesión VCAMI-1 , ICAM-1 se red ujo en el hígado y en las células del íleon de las ratas resucitadas con u na solución lactada de Ringer que contenía rh l L-1 1 comparada con la expresión de las mismas moléculas en el h ígado y las células del íleon de las ratas de control resucitadas solamente con la solución lactada de Ringer. Aunque la expresión del nivel de I L-1 0, una citocina anti-inflamatoria del h ígado y las células del íleon de las ratas resucitadas con rh lL-1 1 parece comparable con las de las mismas células de las ratas de control no tratadas. Además, la presión arterial promedio de las ratas resucitadas con rhl L-1 1 es más alta que la de las ratas de control no tratadas. En conclusión , la IL-1 1 mejora la supervivencia en el shock hemorrágico mediante la inactivación de la inflamación , evitando las lesiones del tejido, facilitando la reparación del tejido y minimizando la traslocación bacterial/endotoxina relacionada con el shock del intestino delgado. Aunque la presente invención ha sido descrita en términos de métodos y composiciones específicas, deberá quedar entendido que aquellos expertos en la materia encontrarán variaciones y modificaciones al tomar en consideración la presente invención . Se espera que aquellos expertos en la técnica piensen en numerosas modificaciones y variaciones en la invención tal y como fue descrito en los ejemplos ilustrativos, por consiguiente, sólo se deberán tomar en cuenta las limitaciones que aparecen en las reivindicaciones adjuntas. Por consiguiente, en las siguientes reivindicaciones se pretende cubrir todas las dichas variaciones equivalentes, las cuales se encuentran dentro del alcance de la presente invención, según ha sido reivindicada. REFERENCIAS Keith, JC: Efecto del tratamiento previo de lidocaína en el shock hemorrágico agudo en las ratas, Circulatory Shock 19: páginas 283 a 292 (1986). Tamion, F., Richard V, Lyoumi S, Daveau , Bonmarchand G, Leroy J, Thuillez C, Lebreton JP. Isquemia del intestino y síntesis mesentérica de citocinas inflamatorias después del shock hemorrágico o endotóxico. Am J Physiol 1997; 273 (2 Pt 1): páginas G314 a 21. Liu, Q., Du XX, Schindel DT, Yang ZX, Rescorla FJ, Williams DA, Grosfeld JL, Efectos tróficos de la interleucina-11 en las ratas con síndrome de intestino delgado corto. J. Pediatr. Surg., 1996, Ags 31(8): páginas 1047 a 50. Explicación 1050-1. Fiore, NF, Ledniczky G, Liu Q, Orazi A, Du X, Williams DA, Grosfeld JL., Comparación de la interleucina-11 y el factor de crecimiento de la epidermis en el intestino delgado residual, después de una resección masiva del intestino delgado. J. Pediatr. Surg (1998) Ene 33(1): páginas 24 a 9. Du X, Liu Q, Yang Z, Orazi A, Rescorla FJ, Grosfeld JL, Williams DA. Efectos protectores de la interleucina-11 en un modelo múrido de necrosis por isquemia del intestino delgado. Am J Physiol 1997 Mar; 272 (3 Pt I): páginas G545-52.

Opal SM, Jhung JW, Keith Jr., JC, et al. 1998., lnterleucina-11 humana recombinante en pseudomonas experimentales por aeruginosa sepsis en animales comprometidos inmunoiógicamente. J Infect Dis. 178: páginas 1205 a 1208.

Barton BE, Shortall J, Jackson JV. 1996. Las interleucinas 6 y 11 protegen a los ratones de la mortalidad en un modelo de shock tóxico inducido por la enterotoxina del estafilococus. Infect and Immun.64: páginas 714 a 718. Misra BR, Ferranti TJ, Keith, Jr JC, et al. 1996. lnterleucina-11 recombinante humana evita la hipotensión en los conejos anestesiados tratados con MPS. J. Endotoxin Res 3: páginas 297 a 305. Trepicchio WL, Bozza M, Pedneault G, Dorner AJ. 1996. La interleucina recombinante humana 11 atenúa la respuesta inflamatoria a través de la inactivación de la liberación de citocina proinflamatoria, y la producción de óxido nítrico. J immunol. 157: página 3627 a 3634. Shindel D, Maze R, Liu Q, Williams D, Grosfeld J. La interleucina-11 mejora la supervivencia y reduce la traslocacion bacterial y la eliminación de médula ósea en ratones quemados. J. Pediatr Surg 1997, Feb; 32 (2): páginas 312 a 5.

Claims (1)

REIVINDICACIONES 1 . Un método para el tratamiento del shock hemorrágico en un mamífero , el cual comprende la administración al mam ífero de una cantidad terapéuticamente efectiva de interleucina-1 1 . 2. El método tal y como se describe en la reivindicación 1 , en donde la cantidad terapéuticamente efectiva de interleucina-1 1 comprende de 1 a 1 000 µ /kg de peso corporal. RESUMEN Se describe el uso de interleucina-1 1 para tratar el hemorrágico en u n mamífero que necesita de dicho tratamiento. PCT TRATADO DE COOPERACION EN MATERIA DE PATENTES FASE NACIONAL (MX) DOCUMENTOS PRESENTADOS EN IDIOMA DIFERENTE AL ESPAÑOL, ( ^ - 3. MOD-FICAOONES A LAS REIVINDICACIONES DE ACUERDO AL ART. 19 ( ) 4 DOCUMENTO QUE ACREDITE EL NOMBRAMIENTO DE UN REPRESENTANTE LEGAL EN MEXICO. i DOCUMENTO DE CESION. ( ) ¿ REPORTE DE LA BUSQUEDA IXT 'L NAC.0NAL ORIGINAL ( ) TRADUCCION ( ) CON ANEXOS ( ) SIN ANEXOS ( }

1. REPORTE DE EXAMEN PRELIMINAR ORIGINAL ( ) TRADUCCION ( ) INTERNACIONAL (CAPITULO II) CON ANEXOS ( ) · SIN ANEXOS { ) b S.. COPIA DE LA SOLICITUD INTERNACIONAL ' ORIGINAL ( ) TRADUCCION ( ) . EN CASO DE ENTRADA ANTICIPADA A LA FASE NAQO AL (CAPITULO I). - f. HOJA DE NOTIFICACION DEL NUMERO DE ( ) . " . SOUCnUD Y FECHA DE PRESENTACION ' ' INTERNACIONAL V TRADUCCION 1& DOCUMENTO DE PRIORIDAD: ORIGINAL ( ) TRADUCCION ( ) 1L CERTIFICACION DE PODER ( )