MXPA01004723A - Procedimiento de entrelazamiento de polisacaridos carboxilados - Google Patents

Abstract

Un procedimiento para la preparación de polisacáridos entrelazados que contienen grupos carboxi, permitiendo el control completo del grado de entrelazamiento asícomo una alta reproducibilidad en términos de características constantes del producto final, el procedimiento comprende un primer paso:activación de los grupos carboxi en solvente aprótico anhidro y después la reacción con una poliamina;el polisacárido entrelazado obtenido puede someterse a sulfatación de los cinco grupos hidroxi.

Description

PROCEDIMIENTO DE ENTRELAZAMIENTO DE POLISACARIDOS CARBOXILADOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un procedimiento de entrelazamiento de polisacáridos carboxilados. El procedimiento de la invención provee un alto grado de reproducibilidad de los productos obtenidos, en términos de grado de entrelazamiento, homogeneidad de la distribución de las cadenas de entrelazamiento, y características químico-físicas de los productos y las características tecnológicas de los artículos obtenidos de ellos. La reproducibilidad es particularmente importante para las aplicaciones en los campos médico, farmacéutico y dermocosmético. La invención se refiere además a los productos obtenibles por dicho procedimiento y sus aplicaciones en el campo médico, farmacéutico y dermocosmético.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El uso de macromoléculas en el campo médico/farmacéutico y, muy recientemente, en el campo dermatológico-cosmético, está bien establecido. Las macromoléculas se utilizan en la preparación de formulaciones farmacéuticas como agentes espesantes, lubricantes, agentes de recubrimiento de película gastro-resistente, particularmente en la preparación de cápsulas, gel, coloides y de diferentes dispositivos (por ejemplo lentes de contacto, gasas, etc.). Las macromoléculas también se utilizan en la preparación de formulaciones de liberación controlada de ingredientes activos. La revisión de sus características y usos farmacéuticos se reporta en 1) C. Hansch et Al. Editors - "Comprehensive Medicinal Chemistry" - Pergamon Press, Oxford, 1990 - Vol. 1-6; 2) A. Wade y P.J. Wellers Editors - "Handbook of Pharmaceutical Excipients" - Ed. 1994 - The Pharmaceutical Press. Dichas macromoléculas pertenecen a diferentes familias químicas y pueden ser sintéticas o naturales o semisintéticas. Ejemplos de macromoléculas sintéticas incluyen polivinilpirrolidona, éteres polioxietilenalquílicos, alcoholes polivinílicos, polimetacrilatos. Ejemplos de macromoléculas naturales incluyen ácido hialurónico nativo (HY) y celulosa. Ejemplos de macromoléculas semisintéticas incluyen carboxialquilcelulosas, muy utilizadas en las industrias alimenticias y del cuidado personal. Estas macromoléculas se caracterizan por una estructura lineal o escasamente ramificada.

Una modificación muy importante para incrementar la fuerza química, enzimática y mecánica se provee por el entrelazamiento, que puede realizarse tanto en polímeros sintéticos como naturales (más o menos ya modificada). Ejemplos de polímeros entrelazados incluyen polímeros utilizados para la gastroprotección de tabletas o cápsulas (polimetilacrilatos), así como polímeros utilizados como emulsores, agentes suspensores, endurecedores de tabletas (Carbopol), ácidos hialurónicos entrelazados, discutido más adelante. Para las aplicaciones consideradas, y particularmente para la preparación de dispositivos médicos invasores que tienen que administrarse parenteralmente, estos polímeros deben cumplir con un número de requisitos de tipo técnico y regulatorio. Los requisitos técnicos incluyen: 1 ) alta biocompatibilidad; 2) resistencia a sistemas enzimáticos tanto tisular o plásmico (para composiciones inyectables), como gastrointestinal (para composiciones orales). En algunos casos una degradación gradual, por ejemplo para la liberación controlada de un medicamento, puede ser conveniente. Esta resistencia es particularmente importante cuando la macromolécula está presente en composiciones/artículos que deben durar por mucho tiempo, por ejemplo sustitutos del líquido sinovial, películas, esponjas o geles como antiadhesivos tisulares en diferentes tipos de cirugía; en ingeniería tisular (órganos artificiales); pieles artificiales, en el tratamiento de quemaduras y generalmente en cirugía estética; 3) moldabilidad en diferentes formas (geles, películas, esponjas, etc); 4) posibilidad de esterilizarse químicamente o físicamente sin cambiar la estructura del producto. De acuerdo con los requisitos regulatorios, la composición de los diferentes lotes de producción debe mantenerse constante dentro de límites muy estrechos; esto implica que los métodos de producción se estandaricen y que los componentes básicos tengan una variabilidad intrínseca muy baja. Una causa posible de deshomogeneidad para las macromoléculas deriva de la dispersión de los pesos moleculares. Esta deshomogeneidad se vuelve incluso mayor como consecuencia del entrelazamiento. Este puede ser un inconveniente importante dependiendo del campo de uso y de los fines aplicativos de producto final. El documento EP-A-566118 (Kimberly-Clark) describe polisacáridos entrelazados para utilizarse como super absorbentes para pañales y artículos similares. El procedimiento descrito ahí se basa en el entrelazamiento de celulosa por formación de amidas intermoleculares, esteres o éteres entre poliaminas, polioles o sus mezclas y el grupo carboxi de polisacáridos.

La reacción se realiza por calentamiento aproximadamente a 80°C de la mezcla de polisacárido con el poliol y/o poliamina. Este procedimiento es ciertamente económico y adecuado para la producción a gran escala cuando los requisitos de reproducibilidad son menos estrictos. El documento E.U.A 5465055 describe polisacáridos entrelazados (ácido hialurónico y ácido algínico) obtenidos por esterificación de COOH del polisacárido y grupos OH de otras moléculas, sin inserción de brazos de entrelazamiento. El documento WO 91/9119 describe microcápsulas para islotes de Langerhans como órganos biohíbridos, que consisten de ácido algínico entrelazado con iones de bario. El documento de EP 190215 describe el entrelazamiento de diferentes polímeros (almidones carboxilados, dextrano, celulosa) con epóxidos bi o polifuncionales. Se han propuesto los siguientes agentes de entrelazamiento para ácidos hialurónicos: Epóxidos polifuncionales se describen en E.U.A 4716224, 4772419, 4716154; Polialcoholes se describen en E.U.A 4957744; Divinilsulfona se describe en E.U.A 4605691 , 4636524; Aldehidos se describen en E.U.A 4713448 y 4582865; Carboxamidas se describen en E.U.A 5356833; Ácidos policarboxílicos se describen en EP-A-718312.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a un procedimiento para la preparación de polisacáridos entrelazados que contienen grupos carboxi, permitiendo el control completo del grado de entrelazamiento así como una alta reproducibilidad en términos de características constantes del producto final. El procedimiento de la invención comprende: a) activación de los grupos carboxi del polisacárido por reacción con agentes activadores de carboxi adecuados en solvente aprótico anhidro; b) reacción de polisacárido activado por carboxi con una poliamina. El polisacárido entrelazado obtenido, si se desea, puede someterse a sulfatación o hemisuccínilación de los grupos hidroxi libres. Los productos obtenibles por el procedimiento de la invención también pueden combinarse con iones metálicos como zinc, cobre o iones de hierro. El polisacárido que contiene carboxi que puede utilizarse de conformidad con la invención puede ser de origen natural, sintético o semisintético. Ejemplos de dichos polisacáridos incluyen ácidos hialurónicos (obtenidos de tejidos o bacterias), carboximetildextrano, carboximetilcelulosa, almidón de carboximetilo, ácidos algínicos, ácidos celulósicos, glucanos o quitosanes de N-carboximetilo o butilo; heparinas con diferentes pesos moleculares, opcionalmente desulfatadas y succinilatadas, sulfatos de dermatano, sulfatos de condroitina, sulfatos de heparano, ácidos poliacrílicos. Particularmente se prefieren ácidos hialurónicos, carboximetilcelulosa, heparinas, ácidos algínícos y ácidos poliacríiicos. Dichos polímeros entrelazados, obtenidos por métodos diferentes, son conocidos y han sido propuestos para varios usos (véase, por ejemplo, EP 566118, W091/9119, E.U.A. 5465055, EP 190215, EP 718312, E.U.A. 4716224 antes discutidos). Los agentes activadores de carboxi son generalmente los utilizados en la química de péptidos: ejemplos de agentes adecuados incluyen carbonildiimidazol, carboniltriazol, yoduro de clorometilpiridiüo (CMP-J), hidroxibenzotriazol, p-nitrofeniltrifluoroacetato de p-nitrofenol, N-hidroxisuccinimida y similares. Se prefiere particularmente el uso de clorometilpiridilio. Las poliaminas tienen preferiblemente la siguiente fórmula general: en la cual R1 y R2, que son iguales o diferentes, son hidrógeno, alquilo de d-Cß, grupos fenilo o bencilo, A es una cadena de alquileno de C2-C10, preferiblemente una cadena de alquileno de C?-Cß, opcionalmente sustituido por hidroxi, carboxi, halógeno, alcoxi, grupos amino; una cadena de polioxialquileno de fórmula [(CH2)n-O-(CH2)n]m en la cual n es 2 ó 3 y m es un entero de 2 a 10; un grupo cicloalquilo de C5-C ; un grupo arilo o hetarilo, preferiblemente benceno 1 , 3 ó 1 ,4-disustitu¡do. A es preferiblemente alquileno lineal de C2-C6 o una cadena de la fórmula La reacción de entrelazamiento se realiza preferiblemente en un solvente seleccionado de tetrahidrofurano, dimetilformamida o sulfóxido de dimetilo, y el polisacárido es salificado preferiblemente con un catión lipofílico, por ejemplo tetralquilamonio u otras bases orgánicas lipofílicas. La transformación de sales inorgánicas como sales de sodio, en sales lipofílicas orgánicas puede realizarse por métodos de intercambio iónico conocidos en fase homogénea o por precipitación del componente ácido; seguido por la recuperación del último y salificación con la base orgánica deseada. La reacción de activación de los grupos carboxi se realiza en fase homogénea y en solvente aprótico polar anhidro. La poliamina diluida en el mismo solvente anhidro, se agrega a la solución del éster activado, conservando la temperatura de 0°C a 30°C. Los tiempos de reacción de entrelazamiento varían de 1 a 12 horas, dependiendo también de la presencia opcional de sustancias básicas adecuadas (por ejemplo trietilamina). Generalmente, el producto final se recupera por precipitación de la sal orgánica agregando un solvente diferente al solvente de la reacción o por evaporación del último, seguido por centrifugación, lavado con agua destilada, dispersiones repetidas en las soluciones del álcali deseado (por ejemplo sodio, potasio), lavado subsecuente con agua y secado final de la sal alcalina bajo vacío o por leolifilización. El grado de entrelazamiento (C.L.D) puede variar dentro de amplios límites y puede ajustarse cambiando la cantidad de los agentes activadores de carboxi, ya que la activación y la reacción de entrelazamiento son sustancialmente cuantitativas. Los polisacáridos entrelazados obtenidos de conformidad con la invención pueden someterse a una reacción de sulfatación de los grupos hidroxi posiblemente presentes, generalmente por reacción con el complejo trióxido de piridina-azufre en dimetilformamida. La reacción se realiza en fase heterogénea a una temperatura de 0 a 10°C durante tiempos que varían de aproximadamente 0,5 a cerca de 6 horas. El grado de sulfatación obtenido está comprendido dentro de amplios límites con respecto al total de los grupos hidroxi y puede ajustarse cambiando la temperatura y tiempos de reacción. Generalmente, el grado de sulfatación (definido como equivalentes de grupos sulfato/g) puede variar de 1x10"6 a 6x10"6, preferiblemente es de 2x10"6 eq/g para un grado de entrelazamiento de 0.5. Los polímeros entrelazados obtenidos de conformidad con la invención, opcionalmente sulfatados, son capaces de combinar iones metálicos como zinc, cobre o iones de hierro.

Estos complejos pueden obtenerse disolviendo o dispersando el producto hasta un hinchamiento completo en agua y agregando mientras se agita, preferiblemente a temperatura ambiente, una solución concentrada de una sal metálica orgánica o inorgánica, por ejemplo, CuCI2, ZnCI2, Fe2(S04); después de agitar durante 12 a 24 horas, se recupera el complejo por centrifugación o por precipitación siguiendo la adición de un solvente diferente (por ejemplo etanol o acetona) o evaporación bajo vacío; el producto crudo recuperado se lava a conciencia con agua destilada con el fin de remover el exceso de iones. Los complejos después se liofilizan. El contenido de los iones de metal varían dependiendo de las condiciones operativas utilizadas, particularmente las relaciones molares de polímero a ion; concentración y pH de soluciones; tiempos de reacción y particularmente grado de entrelazamiento. El procedimiento de la invención, ajustando adecuadamente el grado de entrelazamiento y/o sulfatación, permite la preparación de polisacáridos carboxilados entrelazados en una amplia gama de formas, caracterizadas por propiedades diferentes como viscoelasticidad, grado de hidratación, capacidad de formación de complejos hacia iones metálicos, capacidad para formar hidrogeles, moldabilidad en películas o esponjas, fuerza mecánica de los materiales finales. Esto permite su uso en varios campos médicos, en el campo humano y veterinario, y en la dermocosmetología. Los siguientes ejemplos ilustran aún más la invención.

EJEMPLO 1 Gel de carboximetilcelulosa al 100% entrelazado con 1 ,3-diaminopropano. 1 ,2 X 10"3 moles, con respecto a la unidad de disacárido de sal de TBA de carboximetilcelulosa, se disolvieron en 30 ml de DMF bajo N2 y con agitación. 0.32 g de yoduro de clorometilpiridilio (1.2 x 10"3 moles) disuelto en 2 ml de DMF se agregaron gota a gota a la solución mantenida a una temperatura de 0°C con hielo. La relación molar fue de 1 a 1 ya que el carboximetilcelulosa tiene un grupo carboxílico funcional por unidad de disacárido. Después de 20 minutos se agregaron a la solución 2 ml de 1 ,3-diaminopropano de entrelazamiento (0.006 moles), e inmediatamente después también 0.5 ml de trietilamina. Un producto sólido tipo jalea formado que se lavó con DMF se colocó después en H2O para completar el hinchamiento. Después se realizaron lavados alternando con EtOH y H2O. Después del último lavado con EtOH, el producto se secó por congelamiento. - I.R. (película; cm"1): 1650 (-CO-NH-): sin enlace-COO" a 1 ,400 aproximadamente. - SD (grado de hinchamiento, en agua y r.t., después de 15'; determinación gravimétrica; calculado de acuerdo a SD= w.~ d .100, en la Wd cual: Ws= peso de gel hidratado; Wd= peso de gel seco): 7.000 - SEM (Microscopía Electrónica de Exploración): la estructura se ve compacta, con 15-35µ pers. La superficie de producto, por exposición PRP (plasma con alto contenido de plaquetas) de conejo, muestra una presencia muy reducida de plaquetas o agregados en comparación con el producto equivalente obtenido por polipropileno de baja densidad (referencia EC estándar).

EJEMPLO 2 Gel de carboxl metil ceiu losa al 50% entrelazado con 1 ,3-diaminopropano. 1 ,2 x 10"3 moles, con respecto a la unidad de disacárido de carboximetilcelulosa, se disolvieron en 30 ml de DMF bajo N2 y con agitación. 0.24 g de yoduro de clorometilpiridilio (1.2 x 10"3 moles) disueltos en 2 ml de DMF se agregaron gota a gota a la solución conservada a una temperatura de 0°C con hielo. La relación molar fue de 2/1. Después de 20 minutos se agregaron a la solución 2 ml de 1 ,3-diaminopropano de entrelazamiento (3x10"3 moles), e inmediatamente después también 0.5 ml de trietilamina. Un producto sólido tipo jalea formado que se lavó con DMF se colocó después en H2O para completar el hinchamiento. Después se realizaron lavados alternando con EtOH y H20. Después del último lavado con EtOH, el producto se secó por congelamiento.

- I.R. (película; cm"1): 1650 (-CO-NH-); sin enlace-COO" a 1 ,400 aproximadamente. - SD: 8.000 - SEM: presencia de 13-25 µ pers. - Adhesión de plaquetas: como se reportó en el ejemplo 1.

EJEMPLO 3 Gel de ácido algínico al 50% (100% con respecto a las unidades de disacárido) entrelazado con 1 ,3-diaminopropano. La sal de TBA del ácido algínico ha sido preparada de la sal de sodio por intercambio iónico en una resina catiónica fuerte (Doves) en forma H+ (es decir forma acida), seguido por neutralización con hidróxido de tetrabutilamonio (TBA-OH) y liofilización final. 1.2 x 10"3 moles, con respecto a la unidad de monosacárido, se disolvieron en 30 ml de DMF bajo N2 y con agitación. 0.36 g de yoduro de clorometilpiridilio (1.2 x 10"3 moles) disueltos en 2 ml de DMF se agregaron gota a gota a la solución mantenida a una temperatura de 0°C con hielo. La relación molar fue de 1/1. Después de 20 minutos se agregaron a la solución 6x10"3 moles de 1 ,3-diaminopropano de entrelazamiento (0.014 moles), e inmediatamente después también 0.5 ml de trietilamina. Un producto sólido tipo jalea formado que se lavó con DMF se colocó después en H20 para completar el hinchamiento. Después se realizaron lavados alternando con EtOH y H2O. Después del último lavado con EtOH, el producto se secó por congelamiento. - I.R. (película; cm"1): 1635 (amplio) (-CO-NH-); 1 ,400, aproximadamente (-COO). - SD: 5.000 - SEM: la estructura se ve compacta y sin poros.

EJEMPLO 4 Preparación de ácido hialurónico entrelazado con C.L.D.= 0.05 (5% de grupos carboxi disponibles). Agente de entrelazamiento: 1 ,3-propanodiamina. Se transformó una sal de sodio de ácido hialurónico (1 x 10"3 moles, con respecto a la unidad de disacárido) en sal de TBA, de conformidad con uno de los siguientes métodos: a) 1 % de solución acuosa de hialuronato de sodio se transformó en forma H+ por resina fuerte catiónica H+ (Amberiite IR 120); la solución final se trató con una solución al 0.5% de TBA-OH a aproximadamente un pH = 9. b) solución acuosa al 1% de hialuronato de sodio se transformó en solución salina de TBA tratándola con una resina débil catiónica en forma TBA+. (Amberlite IRC 50).

En ambos casos, las soluciones finales se liofilizaron. La sal de TBA se disolvió después en 15 ml de DMF anhidro, bajo N2, y a 0°C, se agregaron 0.02 g de yoduro de clorometilpiridilio (CMPJ) en 2 ml de DMF anhidro, gota a gota a la solución almacenada de sal de TBA. Se agregó a la mezcla de reacción 0.1 ml de trietilamina y, después, gota a gota, una solución de 1 ,3-diaminopropano (d = 0.88, en gran exceso, con el fin de facilitar el entrelazamiento de los grupos carboxi activados) en 2 ml de DMF anhidro. Cuando se terminó la adición, la mezcla de reacción se agitó al menos durante 30' y después se removió el solvente bajo presión reducida, se tomó el residuo con DMF, el cual fue subsecuentemente removido por destilación; el residuo se trató después con etanol, etanol y agua y finalmente con agua. El producto después se liofilizó y el residuo se sometió a análisis. IR (película; cm"1): 1630 (-CO-NH): 1740 (-COOH, polisacárido); 3200 (-NH-). SD (grado de hinchamiento, en agua y r.t., después de 15'; determinación gravimétrica; calculado de conformidad con: $D — — — • 100 Wd en la cual: Ws = peso de gel hidratado; Wd = peso de gel seco: 31.000. Grado de entrelazamiento: 0.05 (5% de grupos carboxi inicialmente disponibles).

EJEMPLO 5 Preparación de ácido hialurónico entrelazado con C.L.D.= 0.05 (5% de los grupos carboxi disponibles). Agente de entrelazamiento: 1 ,6-diaminohexano. Activador: yoduro de clorometilpiridilio. De conformidad con el procedimiento y condiciones reportadas en el ejemplo 4, utilizando el mismo HY y el mismo activador, pero 1 ,6-diaminohexano en lugar de 1 ,3-diaminopropano, se obtuvo el derivado entrelazado. IR (película; crtT1): 1630 (-CO-NH); 1740 (-COOH, polisacárido); 3200 (-NH-).

EJEMPLO 6 Preparación de ácido hialurónico entrelazado con C.L.D.= 0.05 (5% de los grupos carboxi disponibles). Agente de entrelazamiento: 0.0'-b¡s-(2-aminopropilo) PEG500. Activador: yoduro de clorometilpiridilio. De conformidad con el procedimiento y condiciones reportadas en el ejemplo 4, utilizando el mismo activador, pero 0.0'-bis-(2-aminopropilo) PEG500 en lugar de 1 ,3-diaminopropano, se obtuvo el derivado entrelazado. IR (película; cm"1): 1630 (-CO-NH); 1740 (-COOH, polisacárido); 3200 (-NH-).

SD:31.000 EJEMPLO 7 Preparación de ácidos hialurónicos entrelazados con C.L.D.= 0.3 (30% de grupos carboxilo disponibles). Agente de entrelazamiento: 1 ,3-propanodiamina. Activador: yoduro de clorometilpiridilio. Se disolvieron 0.6 g de sal de tributilamonio de ácido hialurónico (1 x 10"3 moles, con respecto a la unidad de disacárido) con agitación en 30 ml de DMF bajo nitrógeno. 0.08 g de yoduro de clorometilpiridilio (3.5 x 10"4 moles) disueltos en 2 ml de DMF se agregaron gota a gota a la solución agitada conservada a 0°C. La relación molar fue por lo tanto de aproximadamente 3/1. Después de 20 minutos se agregaron 2 ml de 1 ,3-diaminopropano (0.024 mol), seguidos inmediatamente por 0.5 ml de trietilamina. Se obtuvo un producto sólido gelatinoso, el producto se hinchó con agua y se lavó otra vez con etanol. El producto final, después de liofilización, muestra en el microscopio de exploración un patrón irregular con zonas lisas alternando con zonas esponjosas. El grado de entrelazamiento fue de 0.3 (30% de grupos carboxi disponibles inicialmente).

IR (película; cm"1): 1740 (-COO-NH); 1630 (-CO-NH). 1610 (-COO-); 1560 (-CO-NH-).

EJEMPLO 8 Preparación de ácidos hialurónicos entrelazados con C.L.D.= 0.3 (30% de grupos carboxilo disponibles). Agente de entrelazamiento: 1 ,3-propanodiamina. Activador: yoduro de clorometilpiridilio. Se disolvieron 0.6 g de sal de tributilamonio de ácido hialurónico (HY TBA) (1 x 10"3 moles, con respecto a la unidad de disacárido) con agitación en 30 ml de DMF bajo nitrógeno. 0.15 g de yoduro de clorometilpiridilio (CMPJ)(6 x 10"6 moles) disueltos en 2 ml de DMF se agregaron gota a gota a la solución agitada conservada a 0°C. La relación molar fue de 2HY.TBA:1 CMPJ. Después de 20 minutos se agregaron 2 ml de 1 ,3-diaminopropano (0.024 mol). 0.5 ml de trietilamina se agregaron después. Se obtuvo un producto sólido, tipo jalea, y se lavó a conciencia con DMF. Después de evaporar el DMF, el producto se hinchó en agua y se lavó con etanol antes de la liofilización. El producto obtenido tuvo un grado de entrelazamiento de 0.5 y mostró en el microscopio de exploración un aspecto granuloso interespaciado con grandes mallas. A magnitudes más altas, las dos morfologías parecen idénticas y muestran prominencias de forma redonda de unas cuantas mieras de diámetro. IR (película; cm"1): 1740 (-COOH); 1630 (-CO-NH-); 1610 (-COO" ); 1560 (-CO-NH-); Los geles se sometieron a hinchamiento en PBS y se evaluó la capacidad máxima de hinchamiento. SD=23.500 RMN=(13 C; ppm): 29.3 Y 39.8 (-CH2-CH2-CH2-enlace de propanodiamina); 172.5 (-C-NH-CH2-CH2-CH2-) ° Las propiedades reológicas evaluadas en el reómetro de Bohlin VOR, a la temperatura de 22±0.1 °C, muestran que el módulo elástico dinámico G' (100Pa a 10Hz) idéntico en las dos concentraciones consideradas (10 y 20 mg/ml) siempre es más alto que el módulo dinámico viscoso (G" 40 Pa para 20 mg a 10Hz y 20 Pa para 10 mg a 10 Hz).

EJEMPLOS 9-12 De acuerdo con los métodos descritos en los ejemplos anteriores, se obtuvieron los derivados de ácido hialurónico entrelazados que tienen las características resumidas en el siguiente cuadro 1 , empezando de 1x10"3 moles (0.6 g) de sal de tributilamonio de ácido hialurónico. Los derivados obtenidos tuvieron las siguientes propiedades: CUADRO 1 O EJEMPLO 13 Sulfatación de 50% de HY entrelazado. El derivado obtenido en el ejemplo 8 se dispersó en 5 ml de DMF bajo una fuerte agitación y atmósfera de nitrógeno. Una solución de 1 g de S?3/piridina en moles de DMF se agregó a 0°C y se agitó durante 3 horas. La reacción se bloqueó agregando un exceso de H20 (50 ml) y el pH se ajustó a 9 con 0.1 M de NaOH. El producto se lavó a conciencia con etanol y H2O y después de liofilizó. El espectro IR muestra, además de las bandas del producto de partida, un pico a 1260 cm"1 y una banda más fuerte a 1025 cm"1. El gel se hincha en PBS con SD=33.000. Un espectro de 13C RMN de resolución más alta muestra los signos en H2O a 37°C reportados en el cuadro 2. La intensidad de las señales de RMN a 29.3 y 38.8 ppm (-CH2-) y la señal a 172.5 ppm (CONH) confirman un grado de entrelazamiento de aproximadamente 50%. Las propiedades reológicas se caracterizan por módulos elásticos dinámicos G' (2500Pa con 20 mg y 1000 Pa con 10 mg a 10Hz) que siempre son mayores que los módulos viscosos dinámicos G" (600Pa con 20 mg y 150 Pa con 10 mg a 10Hz) y mucho mayores que los valores correspondientes obtenidos con HY no sulfatado (13 a 50%, ejemplo 5). Este compuesto tiene un tiempo de trombina (TT) mayor (61 ±5") que el control (14.0") y el no entrelazado correspondiente (14.6"). El compuesto también fue activo en la prueba de PRP utilizando conejos sometidos a tensión ambiental.

CUADRO 2 Cambio Químico de 13 C EJEMPLO 14 Sulfatación de gel de ácido algínico El producto entrelazado después del tratamiento con EtOH se secó por congelamiento para remover completamente la humedad y se sometió a sulfatación de los grupos de alcohol. 100 mg de producto entrelazado disperso en 5 ml de DMF se agregaron con una solución de SO3-piridina de (800 mg en 2 ml de DMF). La reacción debe realizarse a 0°C, bajo nitrógeno y con agitación constante durante 2 horas.

Es obligatorio que el producto no absorba humedad, ya que inhibe la reacción. Después de 2 horas se agregó H2O y se ajustó el pH a 9 por una solución de 1 M de NaOH, liberando así piridina. El producto así sulfatado se purificó en EtOH. El análisis de productos purificados, muestra: - IR (película; cm"1) 1263 (SO de estiramiento) - Equivalentes de gel de grupos S?3/g (por complejo de toluidina): 5% de gel entrelazado: 6X10"5 50% de gel entrelazado: 2x10"5 100% de gel entrelazado: 3x10"5 SD 5% de gel entrelazado: 19X103 50% de gel entrelazado: 9X10"3 100% de gel entrelazado: 7X10"3 EJEMPLO 15 Utilizando la misma metodología, se sintetizaron los derivados sulfatados de los productos 50% entrelazados de conformidad con el ejemplo 10, 11 y 12.

Las características colorimétricas de los derivados sulfatados se reportan en el cuadro 3 junto con las de los productos derivados de los ejemplos 8 y 13.

CUADRO 3 NJ Ul ?Ha [J/g]: entalpia de vaporización de agua Tg [°C]: hentalpia para procedimiento de degradación térmica ?Hb [J/g]: temperatura de transición de vidrio %en peso de agua: % de contenido de agua, con base en ?Ha EJEMPLO 16 Sulfatación de gel de carboximetilcelulosa. Siguiendo el procedimiento y condiciones reportadas en el ejemplo 14, se obtuvo el derivado sulfatado. Equivalentes de grupos SOs/g: a- CMC 5% entrelazado: 8X10"6 b- CMC 50% entrelazado: 7X10"6 c- CMC 100% entrelazado: 4X10"6 SD a: 20X103 b: 12X10"3 c: 9X10"3

Claims (11)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un procedimiento para la preparación de polisacáridos entrelazados que contienen grupos carboxi, que comprenden: a) activación de los grupos carboxi del polisacárido por reacción con grupos activadores de carboxi adecuados en un solvente aprótico anhidro; b) reacción de polisacárido activado por carboxi con una poliamina.

2.- Un procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el polisacárido se selecciona de ácidos hialurónicos (obtenidos de tejidos o bacterias), carboximetildextrano, carboximetilcelulosa, almidón de carboximetilo, ácidos algínicos, ácido celulósico, glucanos o quitosanes de N-carboximetilo o butilo; heparinas con diferentes pesos moleculares, opcionalmente desulfatados y succinilados, sulfatos de dermatano, sulfatos de condroitina, sulfatos de heparano, ácidos poliacrílicos.

3.- Un procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado además porque el agente activador de carboxi se selecciona de carbonildiimidasol, carboniltriazol, yoduro de clorometilpiridilio, (CMP-J), hidroxibenzotriazol, p-nitrofeniltrifluoroacetato de p-nitrofenol, n-hidroxisuccinimida.

4.- Un procedimiento de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque las poliaminas tienen la siguiente fórmula general: RrNH-A-NH-R2 en la cual Ri y R2, que son iguales o diferentes son hidrógeno, alquilo de C-i-Cß, grupos fenilo o bencilo, A es una cadena de alquileno de C2-C?o, preferiblemente una cadena de alquileno de C2-C6, opcionalmente sustituida por hidroxi, carboxi, halógeno, alcoxi, grupos amino, una cadena de polioxialquileno de la fórmula: [(CH2)n-0-(CH2)n]m en la cual n es 2 ó 3 y m es un entero de 2 a 10, un grupo cicloalquilo de Cs-C , un grupo arilo o hetarilo, preferiblemente benceno1 ,3 ó 1 ,4-disustituido

5.- Un procedimiento de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado además porque el polisacárido se salifica con cationes lipofílicos.

6.- Un procedimiento de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque el catión lipofílico es tributilamonio o tetralquilamonio.

7.- Un procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado además porque la reacción de entrelazamiento se realiza en dimetilformamida anhidro o tetrahidrofurano.

8.- Un procedimiento de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque el polisacárido entrelazado obtenido se somete además a sulfatación de los grupos hidroxi por reacción con el complejo de piridina/trióxido de azufre.

9.- Un procedimiento de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque la reacción de sulfatación se realiza en dimetilformamida en fase heterogénea a 0 a 10°C por tiempos de aproximadamente 0.5 a cerca de 6 horas.

10.- Un procedimiento de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque el polisacárido opcionalmente sulfatado, entrelazado, se somete además a una reacción de formación de complejos con soluciones acuosas de cobre, zinc o iones de hierro.

11.- Polisacáridos entrelazados obtenibles por el procedimiento de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 1 a 10.