MXPA00002910A - Compuestos basados en azabencimidazol para modular la funcion de las proteina-cinasas de serina/treonina - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a en parte a métodos para modular la función de la proteína cinasas de serina/treonina con compuestos basados en azabencimidazol. Los métodos incorporan células que expresan una proteìna-cinasa de serina/treonina, tal como RAF. Además, la invención describe métodos para prevenir y tratar las condiciones anormales relacionadas con proteína-cinasa de serina/treonina en organismos con un compuesto identificado por la invención. Adicionalmente, la invención estárelacionada con compuestos de azabencimidazol y composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos.

Description

COMPUESTOS BASADOS EN AZABENCI IDAZQL PARA MODULAR LA FUNCIÓN DE LAS PROTEÍNA-CINASAS DE SERINA/TREONINA Antecedentes de la Invención La siguiente descripción de los antecedentes de la invención se proporciona para ayudar al entendimiento de la invención, pero no se admite que sea la técnica anterior a la invención. La transducción de señales celulares es un mecanismo fundamental por el cual se retrasan hacia el interior de las células los estímulos externos que regulan diversos procesos celulares. Uno de los mecanismos bioquímicos claves de la transducción de señales comprende la fosforilación reversible de proteínas, que permite la regulación de la actividad de las proteínas maduras al alterar su estructura y función. Las proteina-cinasas mejor caracterizadas en las eucariotas son las proteínas de fosforilato en la porción alcohólica de los residuos de serina, treonina y tirosina. Estas cinasas caen grandemente en dos grupos, aquellas especificas para la fosforilación de serina y treonina, y aquellas especificas para la fosforilación de tirosina. Algunas cinasas, también referidas como cinasas de "especificidad dual", son capaces de fosforilar en la tirosina asi como en los residuos de serina/t reonina . Las proteina-cinasas también se pueden caracterizar por su ubicación dentro de las células. Algunas cinasas son proteínas receptoras de transmembrana capaces de la unión a ligandos externos a la membrana celular. La unión de los ligandos altera la actividad catalítica de las proteina-cinasas receptoras. Otras son proteínas no receptoras que carecen de un dominio de transmembrana. Las proteina-cinasas no receptoras se pueden encontrar en una variedad de compartimentos celulares desde la superficie exterior de la membrana celular hacia el núcleo. Muchas cinasas están comprendidas en las cascadas reguladoras donde sus sustratos pueden incluir otras cinasas cuyas actividades se regulen por su estado de fosforilación. Finalmente, la actividad de un efector en la dirección 3 ' se modula por la fosforilación que resulta de- la activación de esta ruta. La familia de la cinasas de serina/t reonina incluyen miembros que regulan muchos pasos de las cascadas de señalización, incluyendo las cascadas que controlan el crecimiento celular, migración, diferenciación, expresión génica, contracción muscular, metabolismo de la glucosa, síntesis de las proteínas celulares, y regulación del ciclo celular . Un ejemplo de una prot eina-cinasa no receptora que fosforila los objetivos proteicos en los residuos de serina y treonina es la RAF. La RAF modula la actividad catalítica de otras proteina-cinasas, tal como la proteina-cinasa que fosforila, y de este modo activa, la proteina-cinasa activada por mitógeno (MAPK) . La RAF por si misma se activa por la proteina RAS fijada en la membrana, que a su vez se activa en respuesta a las proteina-cinasas receptoras de tirosina, activadas, tal como el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) . La importancia biológica de RAF en el control de los eventos celulares se acentúa por el hallazgo que formas alteradas de RAF provocan cáncer en organismos. La evidencia de la importancia de RAF en malignidades se proporciona en Monia et al., 1996, Nature Medicine 2: 668, incorporado en la presente como referencia en su totalidad incluyendo todas las figuras y tablas. En un esfuerzo para descubrir nuevos tratamientos para el cáncer y otras enfermedades, los investigadores biomédicos y químicos han diseñado, sintetizado y probado moléculas que inhiben la función de las proteina-cinasas. Algunas moléculas orgánicas pequeñas forman una clase de compuestos que modulan la función de las proteina-cinasas. Los ejemplos de moléculas que se han reportado que inhiben la función de las proteina-cinasas son compuestos de bis-arilo monociclicos , biciclicos o heterociclicos (PCT WO 92/20642), derivados de vinileno-azaindol (PCT WO 94/14808), 1-ciclopropil- 4 -piridil-quinolonas (Patente de los Estados Unidos No. 5,330,992), compuestos de estirilo (Patente de los Estados Unidos No. 5,217,999), compuestos de piridilo substituidos con estirilo (Patente de los Estados Unidos No. 5,302,606), ciertos derivados de quinazolina (Solicitud EP No. 0 566 266 al), seleoindoles y selenidos (PCT WO 94/03427), compuestos polihidroxilicos , triciclicos (PCT WO 92/21660), y compuestos de ácido bencilfos fónico (PCT WO 91/15495) .

Los compuestos que pueden atravesar las membranas celulares y son resistentes a la hidrólisis acida son productos terapéuticos potencialmente ventajosos puesto que llegan a estar altamente biodisponibles después de que se administran de manera oral a los pacientes. Sin embargo, muchos de estos inhibidores de las proteina-cinasas solo inhiben de manera débil la función de las proteina-cinasas. Además, muchos exhiben una variedad de proteina-cinasas, y por lo tanto, provocarán múltiples efectos laterales como productos terapéuticos para enfermedades.

Breve Descripción de la Invención - La presente invención se dirige en parte hacia métodos para modular la función de las proteina-cinasas de serina/ treonina con compuestos basados en azabencimidazol . Los métodos incorporan células que expresan una proteina-cinasa de serina/treonina, tal como RAF. Además, la invención describe métodos para prevenir y tratar condiciones anormales relacionadas a proteina-cinasas de serina/treonina en organismos con un compuesto identificado por la invención. Adicionalmente, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos identificados por los métodos de la invención .

I. Métodos para Detectar Compuestos que Modulan la Función de las Proteina-cinasas de Serina/Treonina Los métodos de la presente invención proporcionan medios para modular la función de la proteina-cinasas de serina/treonina tanto receptoras como citosólicas. Estos métodos proporcionan medios para modular las enzimas tanto in vitro como in vivo. Para aplicaciones in vitro, los métodos de la invención se refieren en parte a un método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasas de serina/treonina. De esta manera, en un primer aspecto, la invención incorpora un método para modular la función de una proteina-cinasa de serina/treonina con un compuesto basado en azabencimidazol. El compuesto de azabencimidazol está opcionalmente substituido con grupos orgánicos. El método comprende el nuevo contacto células que expresan la proteina-cinasa de serina/treonina en el compuesto. El término "función" se refiere al papel celular de una proteina-cinasa de serina/treonina. La familia de las proteina-cinasas de serina/treonina incluye miembros que regulan muchos pasos en las cascadas de señalización, incluyendo las cascadas que controlan el crecimiento celular, migración, diferenciación, expresión génica, contracción muscular, metabolismo de glucosa, síntesis de proteínas celulares, y regulación del ciclo celular. El término "modula" se refiere a la capacidad de un compuesto para alterar la función de una proteina-cinasa. Un modulador activa de manera preferente la actividad catalítica de una proteina-cinasa, en forma más preferente activa o inhibe la actividad catalítica de una proteina-cinasa dependiendo de la concentración del compuesto expuesto a la proteina-cinasa, o de manera más preferente inhibe la actividad catalítica de una proteina-cinasa. El término "actividad catalítica", en el contexto de la invención, define la velocidad a la cual una proteina-cinasa fosforila un substrato. La actividad catalítica se puede medir, por ejemplo, al determinar la cantidad de substrato convertido a un producto como una función del tiempo. La fosforilación de un substrato se presenta en el sitio activo de una proteina-cinasa. El sitio activo normalmente es una cavidad en la cual el substrato se une a la proteina-cinasa y se fosforila. El término "substrato" como se usa en la presente se refiere a una molécula fosforilada por una proteina-cinasa de serina/treonina. El substrato es preferentemente un péptido y en forma más preferente una proteina. Con relación a la proteina-cinasa, RAF, los substratos preferidos son MEK y el substrato de MEK, MAPK. El término "activa" se refiere al incremento de la función celular de una proteina-cinasa. La función de la proteina-cinasa preferentemente es la interacción con un compañero de unión natural y en forma más preferente la actividad catalítica. El término "inhibe" se refiere a la disminución de la función celular de una proteina-cinasa. La función de la proteina-cinasa es preferentemente la interacción con un compañero de unión natural y en forma más preferente la actividad catalítica. El término "modula" también se refiere a la alteración de la función de una proteina-cinasa al incrementar o disminuir la probabilidad que se pone en complejo entre una proteina-cinasa y un compañero de unión natural. Un modulador incrementa de manera preferente la probabilidad que se forme este complejo entre la proteina-cinasa y el compañero de unión natural, en forma más preferente incrementa o disminuye la probabilidad que un complejo se forme entre la proteina-cinasa y el compañero de unión natural dependiendo de la concentración del compuesto expuesto a la proteina-cinasa, y en forma más preferente disminuye la probabilidad que un complejo se forme entre la proteina-cinasa y el compañero de unión natural. El término "complejo" se refiere a un montaje de al menos dos moléculas unidas entre si. Los complejos de transducción de señales contienen frecuentemente al menos dos moléculas proteicas unidas entre si. Por ejemplo, una tirosina proteica-proteina-cinasa receptora, GRB2, SOS, RAF y RAS se montan para formar un complejo de transducción de señales en respuesta a un ligando mitogénico . El término "compañero de unión natural" se refiere a polipéptidos que se unen a una proteina- cinasa en las células. Los compañeros de unión natural pueden jugar un papel en la propagación de una señal en un proceso de transducción de señales de las proteina-cinasas. Un cambio en la interacción entre una proteina-cinasa y un compañero de unión natural pueden manifestarse por si mismo como una probabilidad incrementada o disminuida que se forma la interacción, o una concentración incrementada o disminuida del complejo de prot eina-cinasa/compañero de unión natural . El compañero de unión natural de la proteina-cinasa puede unirse a la región intracelular de la proteina-cinasa con alta afinidad. Alta afinidad representa una constante de unión en equilibrio en el orden de 10~6 M o menos. Además, un compañero de unión natural también puede interactuar de manera transiente con una región celular de la proteina-cinasa y modificarla químicamente. Los compañeros de unión natural de las proteina-cinasas se eligen a partir de un grupo que incluye, pero no se limita a, dominios de homología 2 (SH2) o 3 (SH3) de SRC otros dominios de unión a fos foril-tirosina (PTB), factores de intercambio de nucleótidos de guanina, proteina-fosfatasas , y otras proteina-cinasas. Los métodos para determinar cambios en las interacciones entre las proteina-cinasas y sus compañeros de unión natural están fácilmente disponibles en la técnica. El término "proteina-cinasa de serina/treonina" se refiere a una enzima con una secuencia de aminoácidos con al menos 10 % de identidad de aminoácidos a otras enzimas que fosforilan proteínas en los residuos de serina y treonina. Una proteina-cinasa de serina/treonina cataliza la adición de fosfato en proteínas en los residuos de serina y treonina. La proteina-cinasas de serina/treonina pueden existir como proteínas unidas a la membrana o proteínas citosólicas. El término "poner en contacto" como se usa en la presente se refiere al mezclado de una solución que comprende un compuesto de azabencimidazol de la invención con un medio liquido que daña las células de los métodos. la solución que comprende el compuesto también puede comprender otro componente, tal como dimetiisulfóxido (DMSO), que facilita la admisión del compuesto o compuestos de azabencimidazol en las células de los métodos. La solución que comprende el compuesto de azabencimidazol se puede adicionar al medio que daña las células al utilizar un aparato de distribución, tal como un dispositivo basado en pipetas o dispositivo basado en jeringas. El término "compuesto basado en azabencimidazol" se refiere a un compuesto orgánico de azabencimidazol substituido por sustituyentes químicos. Los compuestos de azabencimidazol sobre la estructura general: El término "substituido" en referencia a la invención, se refiere al compuesto de azabencimidazol que se derivatiza con cualquier número de sustituyentes químicos. En una modalidad preferida, la invención se refiere al método para modular la función de una proteina-cinasa de serina/treonina, donde la proteina-cinasa es RAF. La proteina-cinasa RAF fosforila los objetivos proteicos en los residuos de serina o treonina. Un objetivo proteico es la proteina- cinasa (MEK) que fosforila y activa en consecuencia la proteina-cinasa activada en mitógeno (MEK) . La RAF por si misma se activa por la guanina-trifosfato unida a membrana que hidroliza la enzima RAS en respuesta a las proteina-t irosina-cinasas receptoras, estimuladas en mitógeno, tal como el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) y el receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) . Los métodos de la presente invención pueden detectar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa RAF en las células. La RAF fosforila una proteina-cinasa (MEK) que a su vez fosforila la proteina-cinasa activada en mitógeno (MAPK) . Los ensayos que monitorean solo la fosforilación de MEK por RAF no son sensibles debido a que no son significativos los niveles de fosforilación de MEK. Para superar este dilema de sensibilidad, la fosforilación tanto de MEK como de MAPK que sigue en los ensayos en la presente invención. La señal de fosforilación de MAPK amplifica la señal de fosforilación de MAPK y permite que se siga en los ensayos la fosforilación dependiente de RAF, tal como los ensayos inmunosorbentes enlazados a enzimas.

Adicionalmente, el ensayo de la invención se realiza en un formato de alto rendimiento tal que se pueden monitorear rápidamente en muchos compuestos en un periodo corto de tiempo. En otro aspecto, la invención describe un método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, que comprende los pasos de poner en contacto las células que expresan la proteina-cinasa de serina/treonina con el compuesto, y monitorear un efecto en las células. El término "monitorear" se refiere a la observación del efecto de adicionar el compuesto a las células del método. El efecto se puede manifestar en un cambio en el fenotipo celular, proliferación celular, actividad catalítica de la proteina-cinasa, o en la interacción entre una proteina-cinasa y un compañero de unión natural. El término "efecto" describe un cambio o una ausencia de un cambio en el fenotipo celular o proliferación celular. "Efecto" también puede describir un cambio o una ausencia de un cambio en la actividad catalítica de la proteina-cinasa. El "efecto" también puede describir un cambio o una ausencia de un cambio en una interacción entre la proteina-cinasa y un compañero de unión natural. Una modalidad preferida de la invención se refiere al método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, donde el efecto es un cambio o una ausencia de un cambio en el fenotipo celular. El término "fenotipo celular" se refiere a la aparición exterior de una célula o tejido o la función de la célula o tejido. Los ejemplos del fenotipo celular son del tamaño celular (reducción o agrandamient o ) , proliferación celular (números incrementados o disminuidos de células), diferenciación celular (un cambio o ausencia de un cambio en la forma celular), supervivencia celular, apoptosis (muerte celular), o la utilización de un nutriente metabólico (por ejemplo, admisión de glucosa) . Los cambios o la ausencia de cambios en el fenotipo celular se miden fácilmente por técnicas conocidas en la técnica. En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, donde el efecto es un cambio o una ausencia de un cambio en la proliferación celular. El término "proliferación celular" se refiere al número en el cual se divide un grupo de células. El número de células que crecen en un recipiente se puede cuantificar por una persona experta en la técnica cuando esa persona cuenta visualmente el número de células en un volumen identificado usando un microscopio de luz común. De manera alternativa, las velocidades de proliferación celular se pueden cuantificar por aparatos de laboratorio que miden de manera óptica o conductiva la densidad celular en un medio apropiado . En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, donde el Afecto es un cambio o una ausencia de un cambio en la interacción entre la proteina-cinasa de serina/treonina con un compañero de unión natural. El término "interacción", en el contexto de la invención, describe un complejo formado entre una región intracelular de la proteina-cinasa y un compañero o compuesto de unión natural. El término "interacción" también puede extenderse a un complejo formado entre un compuesto de la invención con regiones intracelulares y regiones extracelulares de la proteina-cinasa bajo estudio. Aunque una proteina-cinasa citosólica no tendrá región extracelular, una proteina-cinasa receptora tendrá tanto una región extracelular como una intracelular. El término "región intracelular" como se usa en la presente se refiere a la porción de una proteina-cinasa que existe dentro de una célula. El término "región extracelular" como se usa en la presente se refiere a una porción de una proteína-cinasa que existe fuera de la célula. En una modalidad preferida, la invención se refiere al método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina que comprende adicionalmente los siguientes pasos: (a) lisar las células para suministrar un Usado que comprende la proteina-cinasa de serina/treonina; (b) absorber la proteina-cinasa de serina/treonina a un anticuerpo; (c) incubar la proteina-cinasa de serina/treonina absorbida con un substrato o substratos; y (d) absorber el substrato o substratos a un soporte sólido o anticuerpo. El paso de monitorear el efecto en las células comprende medir la concentración de fosfato de substrato o substratos.

El término "lisar" como se usa en la presente se refiere a un método para desorganizar la integridad de una célula tal que se liberen sus contenidos interiores. La lisis celular se logra por muchas técnicas conocidas por una persona experta en la técnica. El método se logra de manera preferente por tratamiento con sonido o técnicas de ceñiduras celular y en forma más preferente por técnicas con detergentes. El término "anticuerpo" como se usa en la presente se refiere a una molécula proteica que se une de manera especifica a la proteina-cinasa. Un anticuerpo se une de manera preferente a una clase de proteina-cinasa y de manera más preferente se une de manera especifica a la proteina-cinasa RAF. El término "se une de manera especifica" como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo que se une a una proteina-cinasa con mayor afinidad que otra proteina-cinasa o proteina celular. Un anticuerpo que se une de manera especifica a una proteina-cinasa se unirá a una mayor concentración de la proteina-cinasa especifica que cualquier otra proteina-cinasa o proteina celular. El término "adsorber" como se usa en la presente se refiere a la unión de una molécula a la superficie y un anticuerpo o soporte sólido. Los ejemplos de soportes sólidos son celulosa químicamente modificada, tal como fosfocelulosa , y nylon. Los anticuerpos se pueden enlazar a soportes sólidos sobre técnicas bien conocidas para expertos en la técnica. Ver, por ejemplo, Harlo & Lañe, Antibodies, A. Laboratory Manual, 1989, Cold Spring Harbor Laboratories . El término "medir la concentración de fosfato" como se usa en la presente se refiere a técnicas comúnmente conocidas para personas expertas en la técnica. Estas técnicas pueden comprender la cuantificación de la concentración de las concentraciones de fosfato dentro de un sustrato o determinar las cantidades relativas de fosfato dentro de un sustrato. Estas técnicas pueden incluir adsorber el substrato a una membrana y detectar la cantidad de fosfato dentro del substrato por mediciones radioactivas. En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina que comprende adicionalmente los siguientes pasos: (a) lisar las células para suministrar un Usado que comprende RAF; (b) adsorber la RAF a un anticuerpo; (c) incubar la RAF absorbida con MEK y MAPK; y (d) adsorber la MEK y MAPK a un soporte sólido o anticuerpo o anticuerpos. El paso de medir el efecto en células comprende monitorear la concentración de fosfato de MEK y MAPK. En una modalidad preferida, la invención se refiere al método de identificar compuestos que modulan la función de proteina-cinasa de serina/treonina, donde el compuesto basado en azabencimidazol tiene una estructura expuesta en la Fórmula I, II, o III como se define en la presente o cualquiera de los subgrupos de las mismas expuestos en la presente. El término "compuesto" se refiere al compuesto o sal, éster, amida, profármaco, isómero o metabolito farmacéuticamente aceptable del mismo. El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a la formulación de un compuesto que no anula la actividad biológica de propiedades del compuesto. Las sales farmacéuticas se pueden obtener al hacer reaccionar un compuesto de la invención con ácidos inorgánicos y orgánicos tal como ácido clorhídrico, ácido bromhidrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metansulfónico , ácido etansulfónico , ácido p-toluensulfónico , ácido salicílico, y similares. El término "profármaco" se refiere a un agente que se convierte en el fármaco de origen in vivo. Los profármacos pueden ser más fáciles de administrar que el fármaco de origen en algunas situaciones. Por ejemplo, el profármaco puede estar bio-disponible para la administración oral, pero el origen no, o el profármaco puede mejorar la solubilidad para permitir la administración intravenosa . En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, donde el compuesto basado en azabencimidazol tiene un estructura expuestas en la fórmula I, II o III, donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos SABI. El término "compuestos SABI" se refiere al grupo de compuestos basados en azabencimidazol que tienen una estructura expuesta en la Fórmula A o B, y numerados A-l hasta A-198 en la siguiente tabla: II. Métodos para Prevenir o Tratar Condiciones Anormales En otro aspecto, la invención incorpora un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismo al administrar un compuesto de la invención, como se especifica en la presente por la Fórmula I, II o II, con cualquiera de las coacciones proporcionadas en la presente, a un organismo. El término "organismo" se refiere a cualquier entidad viviente que comprende al menos una célula. Un organismo puede ser tan simple como una célula eucariótica o tan complejo como un mamífero. En modalidades preferidas, un organismo se refiere a humanos o a mamíferos. El término "prevenir" se refiere al método de la invención que disminuye la probabilidad, o que elimina la posibilidad, de que un organismo contraiga o desarrolle la condición anormal. El término "tratar" se refiere al método de la invención que tiene un efecto terapéutico y al menos que mitiga parcialmente o anula la condición anormal en el organismo. El término "efecto terapéutico" se refiere a la inhibición del crecimiento celular que provoca o que contribuye a una condición anormal. El término "efecto terapéutico" también se refiere a la inhibición de factores de crecimiento que provocan o que contribuyen a la condición anormal (por ejemplo, cáncer) . Un efecto terapéutico alivia en algún grado uno o más de los síntomas de la condición anormal. En referencia al tratamiento de un cáncer, un efecto terapéutico se refiere a uno o más de lo siguiente: (a) una reducción en el tamaño de tumor; (b) inhibición (es decir, la identificación o detención) de la metástasis de tumor; (c) inhibición del crecimiento de tumor; y (d) alivio en algún grado de uno o más de los síntomas asociados con la condición anormal. Los compuestos que demuestran eficacia contra leucemia se pueden identificar como se describe en la presente, excepto que en vez de inhibir la metástasis, los compuestos pueden en realidad alentar o disminuir la proliferación celular o crecimiento celular. El término "condición anormal" se refiere a una función en las células o tejidos de un organismo que se desvia de sus funciones normales en ese organismo. Una condición anormal puede relacionarse a la proliferación celular, diferenciación celular, o supervivencia celular. Las condiciones celulares proliferativas, anormales incluyen cánceres tal como desórdenes fibróticos y mesanguiales , angiogénesis anormal y vasculogénesis , curación de heridas, psoriasis, diabetes mellitus, e inflamación. Las condiciones de diferenciación anormales incluyen pero no se limitan a, desórdenes neurodegenerativos, velocidades lentas de curación de heridas, y técnicas de injerto de tejidos. Las condiciones de supervivencia celular anormales se relacionan a condiciones en las cuales se activa o anulan las rutas de la muerte celular programada (apoptosis) . Un número de proteina-cinasas está asociado con las rutas de la apoptosis. Las aberraciones en la función de cualquiera de las proteina-cinasas podrían conducir a la inmortalidad celular o muerte celular prematura . La proliferación, diferenciación y supervivencia celular son fenómenos medidos simplemente por métodos en la técnica. Estos métodos pueden comprender la observación del número de células o la aparición de células bajo un microscopio con respecto al tiempo (por ejemplo, dias ) . El término "administrar" se refiere ampliamente a la provisión a un organismo y en forma más específica a un método para incorporar un compuesto en células o tejidos de un organismo. La condición anormal se puede prevenir o tratar cuando las células o tejidos del organismo existen dentro del organismo o fuera del organismo. Las células que existen fuera del organismo se pueden mantener o cultivar en cajas de cultivo de tejido. Para las células que están dentro del organismo, existen muchas técnicas para administrar compuestos, incluyendo (pero no limitados a) aplicaciones oral, parenteral, dérmica, inyección y aerosol. Para células fuera del organismo, existen múltiples técnicas, para administrar los compuestos, incluyendo (pero no limitándose a) técnicas de microinyección celular, técnicas de transformación y técnicas con portadores. En una modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismo, donde el compuesto basado en azabencimidazol tiene una estructura expuesta en la Fórmula I, II, o II como se define en la presente o cualquiera de los subgrupos de las mismas expuestos en la presente. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismo, donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos SABI. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir o tratar una condición normal en un organismo, donde el organismo es un mamífero. El término "mamífero" se refiere de manera preferente a organismos tal como ratones, ratas, conejos, cobayos y cabras, en forma más preferente a monos y simios en forma más preferente a humanos. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir y tratar una condición anormal en un organismo, donde la condición anormal es cáncer o un desorden fibrótico . En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismos, donde el cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste de cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de pecho, cáncer de cerebro, cáncer de cerebro intra-axial, cáncer de colon, cáncer de próstata, sarcoma, sarcoma de Kaposi, melanoma y glioma . En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismo, donde el método aplica a una condición anormal asociada con una aberración en la ruta de transducción de señales caracterizada por una interacción entre una proteina-cinasa de serina/treonina y un compañero de unión natural. El término "ruta de transducción de señales" se refiere a la propagación de una señal. En general, se transmite una señal extracelular a través de la membrana celular para llegar a ser una señal intracelular. Esta señal luego puede estimular una respuesta celular. El término también abarca señales que se propagan de manera completa dentro de una célula. Las moléculas polipeptídicas comprendidas en los procesos de transducción de señales son típicamente proteína-cinasas receptoras y no receptoras, proteína-fosfatasas receptoras y no receptoras, factores de intercambio de nucleótidos, y factores de trascripción . El término "aberración", en unión con un proceso de transducción de señales, se refiere a una proteina-cinasa que está sobre- o sub-expresada en un organismo, mutada tal que su actividad catalítica es menor o mayor que la actividad de la proteina-cinasa tipo silvestre, mutada tal que no puede interactuar por más tiempo con un compañero de unión natural, no se modifique por más tiempo por otra proteina-cinasa o proteina-fosfatasa, o no interactúe por más tiempo con un compañero de unión natural . El término "que promueve o que desorganiza la interacción anormal" se refiere a un método que se puede lograr al administrar un compuesto de la invención a células o tejidos en un organismo. Un compuesto puede promover una interacción entre una proteína-cinasa y compañeros de unión natural al formar interacciones favorables con múltiples átomos de la entrecara del complejo. De manera alternativa, un compuesto puede inhibir una interacción entre una proteina-cinasa y compañeros de unión natural al comprometer las interacciones favorables formadas entre átomos en la entrecara del complejo. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para aprender a tratar una condición anormal en un organismo, donde la proteína-cinasa de serina/treonina es RAF.

III. Compuestos y Composiciones Farmacéuticas de la Invención En otro aspecto, la invención incorpora compuestos de azabencimidazol que tienen las estructuras expuestas en la Fórmula I, II o III: donde (a) Ri, R2, R3 y R4 se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de: (i) hidrógeno; (ii) alquilo saturado e insaturado; (iii) NX2X , donde X2 y X3 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas; (iv) halógeno o trihalometilo; (v) una cetona de la fórmula -C0-X4, donde X se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas; (vi) un ácido carboxilico de la fórmula -(X5)n-COOH o éster de la fórmula -(Xe)n-COO-X-7, donde X5, Xß, y X y se seleccionan de manera independiente a partir de alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas y en donde n es 0 o 1; (vii) un alcohol de la fórmula (Xg)n-OH, o una porción alcoxi de la fórmula -(X8)n-0-X9, donde Xs y Xg se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas , en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster, y donde n es 0 o 1; (viii) una amina de la fórmula NHCOXio, donde Xio se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo, hidroxilo, y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster; (ix) -S02NXnX?2, donde Xn y X?2 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas; (x) una porción de anillo homocíclica o heterocí clica sustituida opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones de éster; (xi) un aldehido de la fórmula -CO-H; y (xii) una sulfona de la fórmula -S02-X13, donde X?3 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (b) Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre, oxigeno, NH y NR4, con la condición de que si uno de Zx y Z es nitrógeno, NH, o NR4 entonces el otro de Zx y Z2 es nitrógeno, azufre, oxigeno, NH, o NR ; y (c) Z2 y Xi se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre y oxígeno. El término "alquilo saturado" se refiere a una porción de alquilo que no contiene ninguna porción alqueno o alquino. La porción alquilo puede ser ramificada o no ramificada. El término "alquilo insaturado" se refiere a una porción alquilo que contiene al menos una porción alqueno o alquino. La porción de alquilo puede estar ramificada o no ramificada. El término "amina" se refiere a una porción química de la fórmula NR?R2, donde Ri y R2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que cosiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas, donde el anillo está opcionalmente substituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones éster. El término "arilo" se refiere a un grupo aromático que tiene al menos un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugado e incluye tanto grupos arilo carboxiclicos (por ejemplo, fenilo) y grupos arilo heterociclicos (por ejemplo, piridina) . El término "carbociclico" se refiere al compuesto que contiene una o más estructuras de anillo covalentemente cerradas, y que los átomos que forman la estructura del anillo son todos átomos de carbono. El término distingue de este modo los anillos carboxiclicos de los heterocíclicos en los cuales la estructura de anillo contiene al menos un átomo que es diferente del carbono. El término "heteroarilo" se refiere a un grupo arilo que contiene al menos un anillo heterociclico. El término "halógeno" se refiere a un átomo seleccionado a partir del grupo que consiste de flúor, cloro, bromo y yodo. El término "cetona" se refiere a una porción química con la fórmula -(R)-n-CO-R' , donde R y R' se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo saturada o insaturado y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas y en donde n es 0 ó 1. El término "ácido carboxílico" se refiere a una porción química con la fórmula -(R)n-COOH, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas, en donde n es 0 ó 1. El término "éster" se refiere a una porción química con la fórmula: -(R)n-COOR', donde R y R' se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas y donde n es 0 ó 1. El término "alcohol" se refiere a un sustituyente químico la fórmula: -ROH,, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas, donde la porción de anillo está opcionalmente substituida con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones de éster. El término "amida" se refiere a un sustituyente químico de la fórmula -NHCOR, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, hidroxilo, y porciones de anillo homociclicas y heterociclicas, donde el anillo está opcionalmente substituido con uno o más sustituyentes seleccionados de manera independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, halógeno, t riahalomet ilo , carboxilato, nitro, o éster . El término "porción de alcoxi" se refiere a un sustituyente químico de la fórmula -OR, donde R es hidrógeno o una porción de alquilo saturada o insaturada . El término "aldehido" se refiere a una porción química con la fórmula -(R)n-CHO, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas y donde n es 0 ó 1. El término "sulfona" se refiere a una porción química con la fórmula -S02-R, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno y NH. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Ri, R2, R3 y R se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado opcionalmente substituido con una porción de anillo homociclica o heterociclico, en donde la porción de anillo está opcionalmente substituida con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de manera independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, hidroxi, alcoxi, carboxilato, nitro, y porciones éster, y una porción de anillo homocíclica o heterocí clica substituida opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de manera independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, hidroxi, alcoxi, carboxilato, nitro y porciones de éster . En otras modalidades preferidas, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde R2 y R3 son hidrógeno . En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene la estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Ri es fenilo opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro o porciones de éster . En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Ri se selecciona a partir del grupo que consiste de sustituyentes en SABI. El término "SABI" se refiere a un grupo de sustituyentes que consiste de fenilo, 2-nit rofenilo , 3-nitrofenilo, 4-nitrofenilo, 2-clorof nilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2-met ilfenilo , 3-metilfenilo, 4-metilfenilo, 2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo , 4-fluorofenilo, 2- ( trifluoromet il ) fenilo , 3- ( trifluoromet il ) fenilo ) , 4 -( trifluoromet il ) fenilo, 2 -metoxifenilo , 3-metoxi-fenilo, 4 -metoxifenilo , 2-carboxifenilo , 3-carboxifenilo , y 4 -carboxifenilo . En otras modalidades preferidas, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Xi es azufre. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Xi es oxigeno. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde Z3 es oxigeno. En otra modalidades preferidas, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde R se selecciona a partir del grupo que consiste de metilo y etilo. En otra modalidad preferida, la invención se refiere a un compuesto basado en azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II o III, donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos de SABI . En otro aspecto, la invención incorpora una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención, como se especifica en la presente, o su sal, y un portador o diluyente fisiológicamente aceptable. En otro aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene una estructura en la fórmula I, II o III como se define en la presente o cualquiera de los subgrupos de las mismas expuestos en la presente . En otra modalidad preferida, la invención se refiere a una composición farmacéutica, donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos SABI. El término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto de azabencimidazol de la invención con otros componentes químicos, tal como diluyentes o portadores. La composición farmacéutica facilita la administración del compuesto a un organismo. Múltiples técnicas para administrar un compuesto existen en la técnica incluyendo, pero no limitándose a, administración oral, inyección, aerosol, parenteral, y tópica. Las composiciones farmacéuticas también se pueden obtener al hacer reaccionar los contextos con ácidos inorgánicos tal como ácido clorhídrico, ácido bromhidrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metansul fónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico , ácido salicílico y similares. El término "fisiológicamente aceptable" define un portador o diluyente que no anula la actividad biológica y las propiedades del compuesto . El término "portador" define un compuesto químico que facilita la incorporación de un compuesto en células o tejidos. Por ejemplo, el dimetiisulfóxido (DMSO) es un portador comúnmente utilizado puesto que facilita la admisión de muchos compuestos orgánicos en las células o tejidos de un organismo . El término "diluyente" define compuestos químicos diluidos en agua que se disolverán el compuesto de interés asi como estabilizarán la forma biológicamente activa del compuesto. Las sales disueltas en soluciones amortiguadas se utilizan como diluyentes en la técnica. Una solución amortiguada comúnmente usada es solución salina amortiguada con fosfato debido a que imita las condiciones salinas de la sangre de humano. Puesto que las sales amortiguadoras pueden controlar el pH de una solución a bajas concentraciones, un diluyente amortiguado modificada raramente la actividad biológica de un compuesto .

IV. Métodos de Sintesis de la Invención En otro aspecto, la invención se refiere a un método para sintetizar un compuesto de azabencimidazol de la fórmula I, II o III, que comprende los pasos de: (a) hacer reaccionar la 2-amino- 6-cloro-3-nitropiridina con un segundo reactivo en un solvente para producir el primer compuesto intermedio, donde el segundo reactivo es un anillo de arilo substituido; (b) reducir el primer compuesto intermedio en la presencia de un catalizador y un agente reductor para producir el segundo compuesto intermedio; (c) hacer reaccionar el segundo compuesto intermedio con un tercer reactivo; y (d) purificar los compuestos de la invención. En una modalidad preferida, la invención se refiere al método para sintetizar un compuesto de la invención, donde el anillo de arilo substituido es un fenol sustituido, tiofenol substituido, y anilina sustituida. En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método para sintetizar un compuesto de la invención, donde el fenol sustituido, tiofenol sustituido, y anilina sustituida se seleccionan a partir del grupo que consiste de reactivos SABI. El término "reactivos SABI" se refiere al grupo de reactivos que consiste de sal sódica de fenol, 2-nit rofenol , 3-nitrofenol , 4 -ni trofenol , 2-clorofenol, 3-clorofenol , 4 -clorofenol , 2-cresol, 3-cresol, 4-cresol, 2 - fluorofenol , 3-fluorofenol , 4 -fluorofenol , 2 -( Tri fluorometi 1 ) fenol , 3- ( Trif luoromet il ) fenol , 4 -( Trifluoromet il ) fenol , 2-metoxifenol, 3-metoxi fenol , 4 -metoxifenol , ácido 2-hidroxibenzoico , ácido 3-hidroxibenzoico , ácido 4-hidroxibenzoico , tiofenol, 2 -nit rotiofenol , 3-nitrotiofenol , 4 -nitrotiofenol , 2-clorotiofenol , 3-clorot iofenol , 4 -clorot iofenol , 2-tiocresol, 3-tiocresol, 4-tiocresol, 2-fluorotiofenol, 3-fluorotiofenol, 4 -fluorotiofenol, 2- (Trifluorometil) tiofenol, 3- ( Trifluoromet il ) tiofenol , 4- (Trifluorometil ) tiofenol , 2-metoxibencenot iol , 3-metoxibencenotiol, 4 -metoxibencenot iol , ácido 2-mercaptobenzoico, ácido 3-mercaptobenzoico, ácido 4 -mercaptobenzoico, anilina, 2-nit roanilina , 3-ni t roanilina , 4 -nit roanilina , 2-cloroanilina , 3-cloroanilina, 4 -cloroanilina , 2-toluidina, 3-toluidina, 4-toluidina, 2 -fluoroanilina , 3-f luoroanilina, 4 -fluoroanilina, 2- (Trifluorometil ) anilina, 3- (Trifluorometil) anilina, 4 - (Trifluoromet il ) anilina , 2-anisidina, 3-anisidina, 4-anisidina, ácido 2-aminobenzoico, ácido 3 -aminobenzoico y ácido 4 -aminobenzoico . En una modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención donde el solvente es n-propanol. En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el agente reductor es hidrógeno . En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el catalizador es níquel Raney. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el tercer reactivo es O-met ilisourea . En otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el tercer reactivo es el producto de la reacción de sulfato de S-metilisotiouronio y cloroformiato de alquilo. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el cloroformiato de alquilo es cloroformiato de metilo. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere al método de sintetizar un compuesto de la invención, donde el cloroformiato de alquilo es cloroformiato de etilo. La breve descripción de la invención descrita anteriormente no es limitante y serán evidentes otras características y ventajes de invención a partir de la siguiente descripción de las modalidades preferidas, y a partir de las reivindicaciones .

Descripción de las Modalidades Preferidas La presente invención se dirige en parte hacia métodos para modular la función de las proteina-cinasas de serina/treonina con compuestos basados en azabencimidazol. Además, la invención se refiere en parte a métodos para identificar compuestos que modulan la función de las proteina-cinasas de serina/treonina. Los métodos incorporan células que expresan una prot eína-cinasa de serina/treonina, tal como RAF. La RAF es una proteína-cinasa no receptora que se engancha a la membrana celular cuando se une a la RAS activada, una enzima de hidrolización de trifosfato 'de guanina. La RAS se activa cuando una proteína-tirosina-cinasa receptora, activada, tal - como EGFR o PDGFR, se une a una proteína adaptadora, GRB2, y un factor de intercambio de nucleótidos de guanina, SOS. El SOS remueve el difosfato de guanina del RAS, lo reemplaza con un trifosfato de guanina, y de este modo activa la RAS. La RAS luego se une a RAF y en consecuencia activa la RAF. La RAF luego puede fosforilar otros objetivos proteicos en los residuos de serina y treonina, tal que la cinasa (MEK) que fosforila y activa en consecuencia la proteína-cinasa activada por mitógeno (MAPK) . De esta manera, la RAF sirve como un factor de control intermedio en la transducción de señales activada por mitógeno. Debido al papel regulador importante de RAF en las células, las modificaciones a la secuencia de aminoácidos de RAF pueden alterar su función y en consecuencia modificar el comportamiento celular. El papel de la RAF en la proliferación celular se acentúa por la observación que las mutaciones a la secuencia de aminoácidos de RAF se ha asociado con tumores y cánceres. Debido a que las mutaciones a RAF que ocasionan cáncer en células conducen a moléculas de RAF que exhiben actividad catalítica no regulada, los inhibidores de RAF pueden mitigar o aún anular la proliferación celular que conduce sal cáncer en esta célula. Los métodos de la presente invención pueden detectar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa RAF en las células. La RAF fosforila una proteína-cinasa (MEK) que a su vez fosforila la proteina-cinasa activada por mitógeno (MAPK) . Los ensayos que monitorean solo la fosforilación de MEK por RAF no son sensibles debido a que los niveles de fosforilación MEK no son significati os. Para superar este dilema de sensibilidad, la fosforilación tanto de MEK como de MAPK se siguen en los ensayos de la presente invención. La señal de fosforilación de MAPK amplifica la señal de fosforilación de MEK y permite que se siga la fosforilación dependiente de RAF en ensayos inmunosorbentes enlazados a enzimas. Además, el ensayo de la invención se realiza de manera preferente en un formato de alto tal que se pueden monitorear fácilmente muchos compuestos en un periodo corto de tiempo.

Los métodos de la presente invención han identificado compuestos que inhiben la función de la proteina-cinasa RAF. Estos compuestos son derivados basados en azabencimidazol. Aunque se han probado los derivados basados en azabencimidazol para su capacidad para inhibir enzimas comprendidas con la síntesis de nucleótidos en bacterias, muchos de estos compuestos aún no se han explorado de manera significativa con respecto a la inhibición de la proteina-cinasa. Debido a que la RAF exhibe una homología de aminoácidos significativa a otra proteína-cinasas de serina/treonina, los compuestos basados en azabencimidazol de la invención pueden inhibir igualmente la proteina-cinasas de serina/treonina diferentes de RAF. De esta manera, los métodos de la invención también se relacionan a proteina-cinasas de serina/treonina diferentes de RAF, incluyendo la proteína-cinasas receptoras y no receptoras de serina/treonina. Los métodos de la invención también son apropiados a otros compuestos que modulan la función de RAF en células puesto que el aspecto de alto rendimiento de los métodos permite que se prueben un amplio arreglo de moléculas en un corto periodo de tiempo. Por lo tanto, los métodos de la invención pueden identificar las moléculas existentes, no descritas en la presente invención, que modulan la función de STK.

I . Actividad biológica de compuestos basados en azabencimidazol Los compuestos basados en azabencimidazol de la presente invención se probaron para su capacidad para inhibir la función de la proteina-cinasa RAF. Los ensayos biológicos y los resultados de estos estudios de inhibición se reportan en la presente. Los métodos usados para medir la modulación del compuesto basado en azabencimidazol de la función de la proteína-cinasa son similares a aquellos descritos en la solicitud de patente de los Estados Unidos número de serie 8/702,232, por Tang et al., y titulada "Indolinone Combinatorial Librarles and Related Products and Methods for the Treatment of Disease," (Lyon & Lyon número de documento 221/187), presentada en 23 de agosto de 1996, con respecto al aspecto de alto rendimiento del método. La solicitud 08 /702 , 232 ' se incorpora en la presente como referencia en su totalidad, incluyendo cualquiera de los dibujos. 11 • Enfermedades objetivo que se van a tratar por los compuestos basados en azabencimidazol Los métodos, compuestos, y composiciones farmacéuticas descritas en la presente se diseñan para inhibir los desórdenes de proliferación celular al modular la función de la proteína-cinasa RAF. Los desórdenes proliferativos dan por resultado proliferación celular indeseada de uno o más subconjuntos de células en un organismo multicelular, dando por resultado un daño al organismo. Los métodos, compuestos y composiciones farmacéuticas descritas en la presente también pueden ser útiles para tratar y prevenir otros desórdenes en organismos, tal como los desórdenes relacionados a la muerte celular prematura (es decir, enfermedades neurológicas ) o inflamación. Estos desórdenes pueden ser el resultado de moléculas de RAF que funcionan de manera inapropiada o el resultado de moléculas de proteina-cinasa relacionadas a RAF que funcionan de manera inapropiada. Las alteraciones en la función de la proteína-cinasa RAF o proteína-cinasas relacionadas a RAF pueden conducir a condiciones de proliferación celular, mejoradas o disminuidas, evidentes en ciertas enfermedades. Las condiciones de proliferación celular anormales incluyen cánceres, desórdenes fibróticos, desórdenes mesanguiales , angiogénesis anormal y vasculogénesis, curación de heridas, psoriasis, restenosis e inflamación. Los desórdenes fibróticos están relacionados a la formación anormal de la matriz de extracelular, celular. Un ejemplo de un desorden fibrótico es la cirrosis hepática. La cirrosis hepática se caracteriza por una concentración incrementada de constituyentes de la matriz extracelular dando por resultado la formación de una cicatriz hepática. La cirrosis hepática puede provocar enfermedades tal como la cirrosis del higado . Los desórdenes proliferativos de células mesanguiales ocurren debido a la proliferación anormal de células mesanguiales. Los desórdenes proliferativos mesanguiales incluyen varias enfermedades renales humanas, tal como la glomerulonefritis , nefropatia diabética, nefroésclerosis maligna, síndromes de microangiopat ia trombótica, rechazo de trasplante y glomerulopatias . Los tipos preferidos de cánceres que se pueden tratar por los métodos y compuestos de la invención son cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de pecho, cáncer de cerebro, cáncer de cerebro intra-axial, cáncer de colon, cáncer de próstata, sarcoma de Kaposi, melanoma, y glioma. La evidencia que los compuestos y métodos de la invención se pueden utilizar de manera efectiva para hacer descender e invertir la proliferación de las células de cáncer se proporciona en la presente como referencia. Los desórdenes angiogénicos y vasculogénicos resultan de la proliferación excesiva de vasos sanguíneos. La proliferación de vasos sanguíneos es necesaria en una variedad de procesos fisiológicos normales tal como el desarrollo embriónico, la formación de cuerpos lúteos, curación de heridas y regeneración de órganos. Sin embargo, la proliferación de los vasos sanguíneos también es esencial en el desarrollo de tumores de cáncer. Otros ejemplos de desórdenes proliferativos de vasos sanguíneos incluyen artritis, donde nuevos vasos sanguíneos capilares invaden la articulación y destruyen el cartílago. Además, las enfermedades proliferativas de los vasos sanguíneos incluyen enfermedades oculares, tal como retinopatia diabética, donde nuevos capilares en la retina invaden el cuerpo vitreo, sangran y provocan ceguera. Inversamente, los desórdenes relacionados al encogimiento, contracción o cierre de vasos sanguíneos, tal como restenosis, también están implicados en la regulación adversa de las proteina-cinasas. Además, la vasculogénesis y angiogénesis se asocian con el crecimiento de tumores sólidos, malignos y metástasis. Un tumor de cáncer de crecimiento vigoroso requiere de nutrientes y un suministro sanguíneo rico en oxígeno para continuar creciendo. Como consecuencia, frecuentemente crece un número anormalmente grande de vasos sanguíneos capilares de acuerdo con el tumor y actúa como lineas de suministro al tumor. Además de suministrar nutrientes al tumor, los nuevos vasos sanguíneos incrustados en el tumor proporcionan una compuerta para que las células del tumor entren a la circulación y provoquen metástasis en sitios distantes en el organismo. Folkman, 1990, Na t i . Cán cer Ins t . 82 : 4 - 6 . La actividad inapropiada de RAF puede estimular los desórdenes de proliferación celular. Las moléculas diseñadas específicamente para modular la función de la proteina-cinasa RAF se han mostrado que inhiben la proliferación celular. Específicamente, las moléculas de ácido nucleico, anti-sentido, que se diseñan tanto para unirse al ARN mensajero que codifica para la proteina-cinasa RAF, como para bloquear la traducción de ese mensajero, invirtieron de manera efectiva la transformación de células A549 i n vi t ro . Monia et al., 1996, Na t ure Medi cine 2:688, incorporada en la presente como referencia en su totalidad incluyendo todas las figuras y tablas. Las células A549 son células malignas o malas. Estos estudios anti-sentido dirigidos a RAF proporcionan evidencia que las moléculas de azabencimidazol de la invención, que modulan la función de la proteína-cinasa RAF, pueden hacer descender y probablemente invertir, la proliferación de células malignas en un organismo. Estos compuestos de azabencimidazol se pueden probar en los métodos in vi tro proporcionados en la presente a manera de ejemplo. Adicionalmente, los compuestos de azabencimidazol se pueden probar para su efecto en células de tumor en vivo por los métodos de xenoinjerto también proporcionados en la presente como ejemplos. Existen al menos dos maneras en las cuales la actividad inapropiada de RAF pueden estimular la proliferación celular indeseada de un tipo particular de células: (1) Estimular directamente el crecimiento de la célula particular o (2) incrementar la vascularización de un área particular, tal como tejido de tumor, facilitando de este modo el crecimiento del tejido. El uso de la presente invención se facilita al identificar primero si el desorden de la proliferación celular se impulsa por RAF. Una vez que se identifican estos desórdenes, los pacientes que sufren de este desorden se pueden identificar por análisis de sus síntomas usando los procedimientos bien conocidos para los facultativos o veterinarios de habilidad en la técnica. Estos pacientes luego se pueden tratar como se describe en la presente. La determinación si el desorden de proliferación celular se acciona por RAF se puede lograr al determinar primero el nivel de RAF que se presenta en la célula o en una ubicación particular en el cuerpo de un paciente. Por ejemplo, en el caso de células de cáncer, el nivel de una o más actividades de RAF se puede comparar para cánceres no accionados por RAF de cánceres accionados por RAF. Si las células de cáncer tienen un nivel mayor de actividad de RAF que los cánceres accionados por RAF, de manera preferente igual a o mayor que cánceres accionados por RAF, entonces son candidatos para el tratamiento usando los métodos de modulación de RAF y compuestos de la invención. En el caso de desórdenes de proliferación celular que surgen debido a la proliferación indeseada de células no de cáncer, el nivel de actividad de RAF se compara a aquel del nivel que se presenta en la población general (por ejemplo, el nivel promedio que se presenta en la población general de personas o animales incluyendo aquellas personas o animales que sufren de un desorden proliferativo celular) . Si el desorden de proliferación celular indeseado se caracteriza por un mayor nivel de RAF que se presenta en la población general, entonces el desorden es un candidato para el tratamiento usando los métodos de modulación de RAF descritos y compuestos de la invención .

III . Composiciones farmacéuticas y administración de compuestos basados en azabencimidazol Los métodos para preparar formulaciones farmacéuticas de los compuestos, métodos para determinar las cantidades de los compuestos que se van a administrar a un paciente, y modos de administrar los compuestos a un organismo, se describen en la solicitud de patente de los Estados Unidos número de serie 08/702,232, por Tang et al., y titulada "Indolinone Combinatorial Librarles and Related Products and Methods for the Treatment of Disease," (Lyon & Lyon número de documento 221/187), presentada el 23 de agosto de 1996, la publicación de patente internacional número WO 96/22976 de Buzzetti et al., titulada "Hydrosoluble 3-Arylidene-2-Oxindole Derivatives as Tyrosine Kinase Inhibitors", publicada el 1 de agosto de 1996, ambas de las cuales se incorporan a la presente como referencia en su totalidad, incluyendo cualquiera de los dibujos. Aquellos expertos en la técnica apreciarán que estas descripciones son aplicables a la presente invención y se pueden adaptar fácilmente a ésta.

Ejemplos Los ejemplos a continuación son no limitativos y solo representativos de los varios aspectos y características de la presente invención. Los ejemplos describen métodos para sintetizar compuestos de la invención y métodos para medir el efecto de un compuesto en la función de la proteina-cinasa RAF. Las células usadas en los métodos están comercialmente disponibles. Los vectores de ácido nucleico portados por las células también están comercialmente disponibles y las secuencias de genes para las varias proteína-cinasas son fácilmente accesibles en los bancos de datos de secuencias. De esta manera, una persona experta en la técnica puede recrear fácilmente las líneas celulares de una manera oportuna al combinar las células comercialmente disponibles, los vectores de ácido nucleico comercialmente disponibles y los genes de proteína-cinasa usando técnicas fácilmente disponibles para personas expertas en la técnica.

Ejemplo 1 : Procedimientos para sintetizar compuestos de azabencimidazol de la invención La invención se ilustrará en los siguientes ejemplos no limitativos en los cuales, a menos que se plantee de otro modo: (i) las evaporaciones se llevaron a cabo por una operación giratoria bajo vacío; (ii) las operaciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de gas inerte tal como nitrógeno; (iii) la cromatografia liquida de alto desempeño (HPLC) se realizó en sílice de fase invertida RP-18 Merck LiChrosorb obtenida de E.

Merck, Darmstadt, Alemania. (iv) los rendimientos se dan por ilustración solamente y no son necesariamente el máximo lograble; (v) los puntos de fusión no están corregidos y se determinaron usando el aparato de punto de fusión digital HWS Mainz SG 2000; (vi) las estructuras de todos los compuestos de la fórmula I, II y III de esta invención se confirmaron por la espectroscopia de resonancia magnética de protón en un espectrofotómetro Bruker AMX500-NMR, por análisis elemental y, en ciertos casos, por espectroscopia de masa; (vii) la pureza de las estructuras se realizó por cromatografía de capa delgada (TLC) usando gel de sílice (gel de silice Merck 60 F254) o por HPLC; y (viii) los compuestos intermedios no se caracterizaron de manera completamente general y la pureza se valoró por cromatografía de capa delgada (TLC) o por HPLC.

Procedimientos Sintéticos Compues o A-90 2 -Me oxicarbónilamino- (6-feniÍmercapto-3H-imidazo [ 4 , 5-J ] piridina Se preparó 2 -amino-3 -nit ro- 6- ( fenilmercapto) piridina al calentar 2-amino-6-cloro-3-nit ropiridina (84.0 g, 0.484 mol) y tiofenolato de sodio (Fluka) (72.0 g, 0.545 mol) en 2-propanol (1500 mL) bajo reflujo durante 2 horas. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, la suspensión se diluyó con agua (100 ml), el sólido se recolectó por filtración al vacío, se lavó con agua y 2-propanol, se secó a 50°C bajo vacío para dar 109.1 g (95 % de rendimiento) de 2-amino-3-nitro-6- ( fenilmercapto) piridina, p.f. 148-152 °C) . Se preparó la 2 , 3-diamino-6- ( fenilmercapto ) piridina al hidrogenar 2-amino-3- nitro- 6- ( fenilmercapto ) piridina (107.1 g, 0.433 mol) bajo 5 atmósferas de H2 en la presencia de 30 g de niquel Raney en 1,200 mL de 2-propanol a 70°C. Después de 4 horas (29.1 L de hidrógeno) la mezcla de reacción se enfrió a 4°C mientras se agitó continuamente. El precipitado se recolectó por filtración al vacio, se lavó con 2-propanol y se secó a 50°C bajo vacío. Los filtrados combinados se concentraron bajo presión reducida y se recristalizaron de 2-propanol. Después del lavado del aparato de hidrogenación dos veces con 1,000 mL de THF, la evaporación bajo presión reducida y la recristalización a partir de 2-propanol, el precipitado se recolectó y se secó a 50°C bajo vacio para dar 80.4 g (87.1 % de rendimiento) de 2 , 3-diamino- 6- ( fenilmercapto ) piridina , p.f. 119-122°C) . Se preparó la 2-metoxicarbonilamino- 6-feni Ímercapto- 3 H-imidazo [4, 5-b] piridina al adicionar cloroformiato de metilo (34 mL, 0.44 mol) gota a gota a una solución fria (5-15°C) de sulfato de S-metilisot iouronio (53 g, 0.19 mol) (Aldrich) en 68 L de agua, mientras la temperatura se mantuvo por abajo de 20°C. Posteriormente, se adicionó cuidadosamente hidróxido de sodio acuoso (116 g, NaOH al 25 %) y se presentó un precipitado blanco. Después de 20 minutos, se adicionó agua (210 mL) y el pH se ajustó a 4.0 con ácido acético (glacial, 34 mL ) . A esta mezcla se adicionó gota a gota la solución de 2 , 3-diamino-6- ( fenilmercapto ) piridina (37.8 g, 0.174 mol) en 210 mL de etanol, se calentó a 85-90°C durante dos horas. Después del enfriamiento de la mezcla de reacción durante la noche, el precipitado se aisló por precipitación, se lavó con agua caliente (1000 mL) se secó y se recristalizó a partir de ácido acético y etanol a 4°C. El precipitado se recolectó por filtración, se lavó con metanol y se secó a 50°C bajo vacio para dar 30 g (57.4 % de rendimiento) de 2 -metoxicarbonilamino- 6-fenilmercapto-3ff-imidazo [ 4 , 5 -b] piridina , p.f. 269-274°C (descomposición) .

Compuesto A-3 : 2 -Metoxicarbonilamino- ( 6-fenoxi) -3H-imidazo [ 4-5-J] piridina Al sustituir el fenolato de sodio en lugar de tiofenolato de sodio en el Ejemplo A-90, el proceso idéntico da la 2 -met oxicarbonilamino- ( 6-fenoxi ) -3-7-imidazo [ 4 -5-¿>] piridina , p.f >280 °C (descomposición) .

Compuesto A-4 : 2-Etoxicarbonilamino-6-fenoxi) -3H-imidazo [ 4-5-2?] piridina Al sustituir el cloroformiato de etilo en lugar de cloroformiato de metilo en el Ejemplo A-3, el proceso idéntico da 2-etoxicarbonilamino- ( 6-fenoxi) -3i?-imidazo [4-5-j ] piridina, p.f. >280 °C (descomposición) .

Compuesto A-l : 2 -Oxo-6-fenoxi-35-imidazo [4-5-b] piridina Al hacer reaccionar O-metilisourea directamente con 2, 3 -diamino- 6- ( feni lmercapto ) piridina en lugar del producto de la reacción del sulfato de S-met ilisotiouronio y cloroformiato de metil en el Ejemplo A-3, el proceso idéntico da 2 -oxo- ( 6-fenoxi-3 H-imidazo [ 4 -5-j ]piridina, p.f. 277-278 °C.

Compuesto A-2 : 2-Oxo-6-fenilomercapto-3H-imidazo [4-5-Jb] piridina Al sustituir tiofenolato de sodio en lugar de fenolato de sodio en el Ejemplo A-l, el proceso idéntico da 2 -oxo- ( 6-fenilomercapto-3fí-imidazo [ 4 -5-j jpiridina, p.f. 253-254 °C.

Compuestos A-5 A-25 Al sustituir el fenolato apropiado por fenolato de sodio en el Ejemplo A-l, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-23, A-24, y A-25, los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos.

A-5 2-Oxo-6- (2-nitrof enoxi) — 3H— imidazo [4 , 5-j ] piridina A- 6 2-Oxo-d- (3-nitrofenoxi) -3H- imidazo [4, 5-¿>] piridina A-7 2-Oxo-6- (4 -ni trof enoxi) — 3H— imidazo [4, 5 -b] piridina A- 8 2 -Oxo- 6- (2 -clorof enoxi) - 3 fí- imidazo [4, 5 -b] piridina A-9 2-Oxo-6- (3-clorofenoxi) -3H- imidazo [4, 5-b] piridina A-10 2-Oxo-6- (4-clorofenoxi) -3H- imidazo [4, 5-b] piridina A-ll 2-Oxo-6- (2-metilfenoxi) — 3H— imidazo [4, 5-b] piridina A-12 2-Oxo-6- (3-metilfenoxi) -3H- imidazo [4, 5-b] piridina A- 13 2-0xo-6- ( 4-metilf enoxi) - 3 H- imidazo [4,5- b] piridina A- 14 2-Oxo-6- (2-fluorofenoxi) - 3 H- imidazo [4,5- b] piridina A- 15 2-Oxo-6- (3-fluorofenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- b] piridina A-l 6 2-Oxo-6- (4-fluorofenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- b] piridina A- 17 2-0XO-6- [2- (trifluorometil) fenoxi] - 3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A- 18 2-Oxo-6- [3- (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4 , 5-Jb] piridina A- 19 2-0xo-6- [4- (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-20 2-Oxo-6- (2-metoxifenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- ¿?] piridina A-21 2-Oxo-6- (3-metoxifenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-22 2-Oxo-6- (4-metoxifenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-23 2-Oxo-d- (2-carboxifenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- Jb] piridina A-24 2-Oxo-6- (3-carboxifenoxi) -3 H- imidazo [4, 5- b ] piridina A-25 2-Oxo-6- (4-carboxifenoxi) -3 H- imidazo [4,5- b] piridina Compuestos A-26 A-46 Al sustituir el tiofenolato apropiado por tiofenolato de sodio en el Ejemplo A-2, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-44, A-45, y A-46; los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos.

A-26 2-0xo-6- (2-nitrofenilmercapto) - 3 H- imidazo [4,5- b ] piridina A- 21 2-0xo-6- (3-nitrofenilmercapto) - 3 H- imidazo [4, 5- b] piridina A-28 2-0xo-6- (4-nitrofenilmercapto) -3 H- imidazo [4, 5- b ] iridina A-29 2-Oxo-6- ( 2 -cloro fenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5- b ] piridina A- 3 O 2-Oxo-6- (3-clorofenilmercapto) - 3 H-imidazo [4,5- b ] iridina A- 31 2-Oxo-d- ( 4 -clorofenilmercapto) -3 H-imidazo [4, 5- jb] piridina A-32 2-Oxo-6- ( 2-metilfenumereapto ) -3ií- imidazo [4, 5- £>] piridina A- 33 2-Oxo-6- ( 3-met ilfenilmercapto) - 3H- imida zo [ 4 , 5- jb] piridina A-34 2-Oxo-6- ( 4-metilfenumereapto ) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-35 2-Oxo-6- (2-fluorofenilmercapt o ) - 3 H— imidazo [4, 5-¿>] piridina A-36 2-Oxo-d- ( 3-fluorofenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb]piridina A- 31 2-Oxo-d- (4-fluorofenilmercapto) - 3 H- imidazo [4, 5-£>] piridina A-38 2-Oxo-6- [2- (trifluorometil) fenilmercapto] - 3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A- 39 2-Oxo-6-[3- (trifluorometil) fenilmercapto] — 3 íf— imidazo [4, 5-jb] piridina A-40 2-Oxo-ß- [4- ( trifluorometil ) fenilmercapto ] - 3 H- imidazo [4 , 5 -ib] piridina A-41 2-Oxo-6- ( 2 -metoxi fenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-42 2-Oxo-6- (3 -metoxi feni lmercapto) -3H- imidazo [4, 5 -jb] piridina A-43 2-Oxo-6- ( 4-metoxifenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-44 2-Oxo-6- ( 2 -carboxifenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-45 2-Oxo-6-( 3 -carboxi fenilmercapto ) — 3 H— imidazo [4, 5-jb]piridina A-46 2-Oxo-6- ( 4-carboxifenilmercapto) - 3 H- imidazo [4 , 5 -.ib] piridina Compuestos A-47 A-68 Al sustituir la sal de anilina apropiada por fenolato de sodio en el Ejemplo A-l, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-66, A-67, y A-68, los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo u otro éter adecuado luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos.

A- 47 2 -Oxo- 6- feni lamino-3?- imidazo [4, 5-b] piridina A-48 2-Oxo-6-(2-nitrofenilamino) - 3 H-imidazo [4,5- j ] piridina A- 49 2-Oxo-6- (3-nitrofenilamino) -3 H-imidazo [4, 5- jb] piridina A-50 2-Oxo-6-(4 -nit rofenilamino ) -3 H-imidazo [4, 5- jb] piridina A- 51 2-Oxo-6- (2 -cloro fenilamino) - 3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-52 2 -Oxo- 6- ( 3 -cloro fenilamino ) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-53 2-Oxo-d- (4 -clorofenilamino ) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-54 2-Oxo-d- (2 -metil fenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-55 2-Oxo-6- (3-metilfenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-56 2-Oxo-ß- (4-metilfenilamino) - 3 H- imidazo [4,5- j ] piridina A-57 2-Oxo-6- (2-fluorofenilamino) -3 H-imidazo [4, 5- jb] piridina A-58 2-Oxo-6- ( 3-fluorofenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- 2?] piridina A-59 2-Oxo-d- ( 4-fluorofenilamino ) -3 H- imidazo [4, 5- j ] piridina A- 60 2-Oxo-6- [2- (trifluorometil) fenilamino] -3H- imidazo [4, 5 -jb] piridina A- 61 2-Oxo-6- [3 (trifluorometil) fenilamino ] - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A- 62 2-OXO-6- [4- (trifluorometil) fenilamino-3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A- 63 2-Oxo-6- (2 -metoxi fenilamino) - 3 H- imidazo [4,5- jb] piridina A-64 2-Oxo-6- (3-metoxifenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- jb]'piridina A-65 2-Oxo-6- (4-metoxifenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- b] piridina A-66 2-Oxo-d- (2 -carboxi feni lamino ) -3 H- imidazo [4, 5- £>] piridina A- 61 2-Oxo-d- (3-carboxifenilamino) -3 H- imidazo [4, 5- b] piridina A- 68 2-Oxo-6- (4 -carboxi feni lamino) - 3 H- imidazo [4,5- jb] piridina Compuestos A-69 A-89 Al sustituir el fenolato apropiado para fenolato de sodio en el Ejemplo A-3, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-87, A-88, y A-89, los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos.

A-69 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 2-nitrofenoxi ) — 3 -Tímida z o [4, 5 -b ] piridina A-70 2-Metoxicarbonilamino-ß- ( 3-nitrofenoxi) - 3 H- ímidazo[4,5-jb]piridina A- l 1 2 -Metoxicarbonilamino- 6- (4-nitrofenoxi) -3H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-72 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 2-clorofenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-73 2-Metoxicarbonilamino-ß- ( 3-clorofenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A- l 4 2 -Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -clorofenoxi ) -3H- imidazo [4, 5 -jb] piridina A-75 2 -Metoxicarbonilamino-6- ( 2-metilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5 -jb] piridina A- l 6 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 3-metilfenoxi ) -3ü- imidazo [4,5-jb]piridina A-77 2 -Metoxicarbonilamino- 6 - ( 4-metilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A-78 2-Metoxicarbonilamino-6 - (2-fluorofenoxi) -3ü- imidazo[4, 5-&] piridina A- l 9 2-Met oxicarbonilamino- 6- (3-fluorofenoxi) -3fí- imidazo [4 , 5-jb] piridina A-80 2 -Metoxicarbonilamino- 6 - (4-fluorofenoxi) -3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A-81 2-Metoxicarbonilamino- 6 - 12 - (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4, 5- b ] piridina A-82 2-Metoxicarbonilamino-6 -[3- (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4, 5- b ] piridina A-83 2-Metoxicarbonilamino-6 ~[4- (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4, 5- jb] piridina A-84 2-Metoxicarbonilamino-ß - ( 2-metoxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4,5-jb]piridina A-85 2-Metoxicarbonilamino-6 - ( 3-metoxifenoxi ) -3ü- imidazo [4, 5-jb] piridina A-86 2-Metoxicarbonilamino-6 - ( 4 -metoxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A-87 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 2 -carboxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-88 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 3-carboxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-89 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -carboxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina Compuestos A-91 - A-lll Al sustituir el tiofenolato apropiado por tiofenolato de sodio en el Ejemplo A-90, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-109, A-110, y A-lll, los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos .

A-91 2-Metoxicarbonilamino-6- (2-nitrofenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-92 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 3 -nitrofenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5 -jb] piridina A- 93 2 -Metoxicarbonilamino- 6- (4-nitrofenil- mercapto ) -3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A- 94 2 -Metoxicarbonilamino -6- (2-clorofenil- mercapto) - 3 H- imidazo [4,5-ib]piridina A- 95 2 -Metoxicarbonilamino- 6- (3-clorofenil- mercapto) - 3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina A-96 2 -Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -clorofenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-97 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 2-metil fenilmercapto ) -3?- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-98 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 3-met ilfenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-99 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -met ilfenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-100 2 -Metoxicarbonilamino- 6- (2-f luorofenil- mercapto) -3 fí- imidazo [4, 5 -ib] piridina A- 101 2 -Metoxicarbonilamino- 6- (3-fluorofenil- mercapto) -3 H- imidazo [4, 5-¿>] piridina A-102 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 -fluorofenilmercapto) - 3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-103 2 -Metoxicarbonilamino- 6- [2- ( trifluorometil fenilmercapto] -3 ü- imidazo [4, 5-ib] piridina A-104 2 -Metoxicarbonilamino- 6- [3 (trifluorometil) • fenilmercapto] -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-105 2-Metoxicarbonilamino-6-[4 ( trifluorometil ) • fenilmercapto] - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-106 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 2-metoxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-107 2 -Me toxicarbonilamino- 6- ( 3-metoxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-108 2 -Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -met oxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina A-109 2 -Metoxicarbonilamino- 6- ( 2-carboxifenilmercapto) -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-110 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 3-carboxifenilmercapto) -3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-lll 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 -carboxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina Compuestos A-112 - A-133 Al sustituir la sal de anilina apropiada por fenolato de sodio en el Ejemplo A-3, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-131, A-132, y A-133, los grupos carboxi se protegen por un metilo, etilo, bencilo, t-butilo, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos .

A- 112 2 -Metoxicarbonilamino- 6-fenilamino-3H- i idazo [4, 5-A-112 A- 113 2 -Metoxi carbonilamino- 6- (2-nitrofenilamino) 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-114 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 3 •nitrofenilamino ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb]piridina A-115 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 •nitrofenilamino 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-116 2-Metoxicarbonilamino-6- (2 -clorofeni lamino- 3 H— imidazo [4, 5-ib] piridina A-117 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 3 -clorofenilamino) - 3í- imidazo [4, 5-ib] piridina A-118 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 -clorofenilamino) - 3í- imidazo [4, 5-¿>] piridina A-119 2-Metoxicarbonilamino-6- (2 -metilfenilamino) -3ü imidazo [4, 5-ibJpiridina A-120 2-Metoxicarbonilamino-ß- ( 3 -metilfenilamino ) - 3 íí- imidazo [4, 5-ib]piridina A-121 2 -Met oxicarbonilamino- 6- ( 4 -met ilfenilamino ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-122 2-Metoxicarbonilamino-6- (2 -fluorofenilamino) 3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-123 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 3 -fluorofenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5-ib]piridina A-124 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 -fluorofenilamino) - 3ií- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-125 2-Metoxicarbonilamino-d- [2 - (trifluorometil) fenilamino] -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-126 2-Metoxicarbonilamino-6- [ 3 - (trifluorometil) - fenilamino] -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-127 2-Metoxicarbonilamino-6- [ 4 - (trifluorometilo) - fenilamino] -3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-128 2-Metoxicarbonilamino-6- (2 -metoxifenilamino ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-129 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 3 -metoxifenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5 -b ] piridina A-130 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 4 -metoxifenilamino ) - 3 H- imida zo [4, 5-ib]piridina A-131 2-Metoxicarbonilamino-6- ( 2 -carboxifenilamino ) - 3 H- imidazo [4,5-ib]piridina A-132 2 -Metoxicarbonilamino- 6- ( 3 -carboxi fenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-133 2-Metoxicarbonilamino- 6- ( 4 -carboxifenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5-ib]piridina Compuestos A-134 - A-154 Al sustituir el fenolato apropiado por fenolato de sodio en el Ejemplo A-4, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-152, A-153, y A-154, los grupos carboxi se protegen por un éster metílico, etílico, bencílico, t-butílico, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos A-134 2-Etoxicarbonilamino-6 - (2-nitrofenoxi) - 3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina A-135 2 -Etoxicarbonilamino- 6 - (3-nitrofenoxi) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-136 2 -Etoxicarbonilamino- 6 - (4-nitrofenoxi) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-137 2-Etoxicarbonilamino-6 - (2-clorofenoxi) -3H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-138 2 -Et oxicarbonilamino-6 - (3-clorofenoxi) -3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina A-139 -2-Etoxicarbonilamino- 6 4-clorofenoxi) - 3 H- imidazo [4, 5 -b] piridina A-140 2-Etoxicarbonilamino-6 - ( 2 -met ilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-141 2 -Etoxicarbonilamino- 6 3-met ilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-142 2-Etoxicarbonilamino-6 - ( 4-metilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-143 2-Etoxicarbonilamino-6 - (2-fluorofenoxi) - 3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina A-144 2-Etoxicarbonilamino-6 - (3-fluorofenoxi) - 3H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-145 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (4-fluorofenoxi) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-146 2 -Etoxicarbonilamino- 6- [2- ( trifluromet il ) fenoxi] - 3 H- imidazo [4, 5 - b ] piridina A-147 2-Etoxicarbonilamino- 6- [3- (trifluorometil) fenoxi] -3 H- imidazo [4, 5 - b] piridina A-148 2-Etoxicarbonilamino-6- [ 4 - trifluorometil) fenoxi] - 3H-imidazo [4,5- b ] pi ridina A-149 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 2-metoxifenoxi ) — 3 H- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-150 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 3-metoxifenoxi ) — 3 H— imidazo [4, 5-ib] piridina A-151 2-Etoxicarbonilamino- 6- ( 4 -metoxifenoxi ) -3H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-152 2-Etoxicarbonilamino-ß- ( 2-carboxifenoxi) — 3 if— imidazo [4,5-ib]piridina A-153 2-Etoxicarbonilamino-ß- ( 3-carboxifenoxi ) -3H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-154 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 4-carboxifenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib]piridina Compuestos A-155 - A-176 Al sustituir el tiofenolato apropiado por fenolato de sodio en el Ejemplo A-4, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-174, A-175, y A-176, los grupos carboxi se protegen por un éster metílico, etílico, bencílico, t-butilico, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos .

A-155 2-Etoxicarbonilamino- 6-fenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-156 2 -Etoxicarboni lamino- 6- ( 2 -nitrofenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4,5-ib]piridina A-157 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 3-nitrofenilmercapto ) - 3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-l 58 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (4-nitrofenilmercapto) - 3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-159 2-Etoxicarbonilamino- 6- ( 2 -clorofenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-160 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 3-clorofenilmercapto ) -3ií- imidazo [4, 5-ib] piridina A-l 61 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (4-clorofenil- mercapto) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-162 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (2 -metilfenil- mercapto) -3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-163 2-Etoxicarbonilamino-6-(3-metilfenil- mercapto ) -3 ií- imidazo [4, 5-ib] piridina A-164 2 -Etoxicarbonilamino -6- ( 4-met ilfenoxi ) -3íí- imidazo [4, 5-ib] piridina A-165 2-Etoxicarbonilamino-6-(2-fluorofenil- mercapto) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-166 2-Etoxicarbonilamino-6-(3-fluorofenil- mercapto) - 3ií- imidazo [4, 5-jb]piridina A-167 2-Etoxicarbonilamino-6- (4-fluorofenil- mercapto) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-168 2 -Etoxicarbonilamino- 6- [2- (triflurometil) fenilmercapto] -3 H- imidazo [4, 5- b ] piridina A-169 2 -Etoxicarbonilamino- 6- [ 3 - (trifluorometilo) fenilmercapto] -3H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-170 2 -Etoxicarbonilamino- 6- [ 4- (trifluorometil) fenilmercapto] -3H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-171 2 -Etoxicarbonilamino -6- (2-metoxifenil- ercapto) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-172 2 -Etoxicarbonilamino- 6- ( 3 -metoxi fenilmercapto ) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-173 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 4 -metoxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-174 2 -Etoxicarbonilamino-6- ( 2-carboxifenilmercapto) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-175 2-Etoxicarbonilamino-ß- ( 3-carboxifenilmercapto ) -3 H- imidazo [4, 5-jb] piridina A-176 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (4 -carboxi fenilmercapto) -3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina Compuestos A-177 - A-198 Al sustituir la sal de anilina apropiada por fenolato de sodio en el Ejemplo A-4, el proceso idéntico da los siguientes ejemplos. Para los ejemplos A-196, A-197, y A-198, los grupos carboxi se protegen por un éster metílico, etílico, bencílico, t-butilico, u otro éster adecuado y luego se desprotegen en el último paso para dar los compuestos .

A- l l l 2 -Etoxicarbonilamino- 6-fenilamino-3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-178 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 2-nitrofenilamino-3iT- imidazo [4, 5-ib] piridina A- 179 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (3-nitrofenilamino-3?- imidazo [4, 5-ib] piridina A-180 2 -Etoxicarbonílamino-6- ( 4 -nitrofenilamino-3ií- imidazo [4, 5-ib]piridina A-181 2-Etoxicarbonilamino- 6- ( 2 -clorofenilamino-3i?- imidazo [4,5-ib]piridina A-182 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 3-clorofenilamino-3iT- imidazo [4, 5-ib]piridina A-183 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 4 -clorofenilamino-3íí- i idazo [4, 5-ib]piridina A-184 2 -Etoxicarbonilamino- 6- ( 2 -met ilfenilamino-3íí- imidazo [4 , 5 -ib] piridina A-185 2-Etoxicarbonilamino- 6- ( 3-met ilfenilamino-3íf- imidazo [4, 5 -b ] piridina A-186 2 -Etoxicarbonilamino- 6- ( 4 -met ilfenoxi ) - 3 H- imidazo [4, 5-jb]piridina A-187 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 2-fluorofenilamino-3íí- imidazo [4, 5-ib] piridina A-188 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 3-fluorofenilamino-3ií- imidazo [4, 5-jb]piridina A-189 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 4 -fluorofenilamino-3i?- imidazo [4, 5-ib]piridina A-190 2-Etoxicarbonilamino-6- [2- trifluorometil ) fenilamino] -3ií- imidazo [4, 5- b ] piridina A-191 2-Etoxicarbonilamino-6- [ 3- trifluorometil) fenilamino] -3ü-imidazo [4, 5- b] piridina A-192 2-Etoxicarbonilamino- 6- [ 4 - trifluorometil) fenilamino] - 3 H-imidazo [4,5- b ] piridina A-193 2-Etoxicarbonilamino-6- ( 2 -metoxifenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5-ib] piridina A-194 2 -Etoxicarbonilamino- 6- ( 3-metoxifenilamino ) - 3 H- imidazo [4, 5-ib] piridina A-l 95 2 -Etoxicarbonilamino- 6- (4 -metoxi fenilamino) - 3 H- imidazo [4 , 5-ib] piridina A-196 2-Etoxicarbonilamino- 6- ( 2 -carboxifenilamino ) - 3 H- imidazo [4, 5 -ib] piridina A-197 2-Etoxicarbonilamino-ß- ( 3-carboxifenilamino ) - 3 H-imidazo [4, 5 -ib] piridina A-l 98 2-Etoxicarbonilamino-6- (4 -carboxi fenilamino) - 3 íí- imidazo [4, 5 -ib] piridina Ejemplo 2 : Ensayo que mide la función de fosforilación de RAF El siguiente ensayo reporta la cantidad de fosforilación caracterizada por RAF de su proteina objetivo MEK así como la MAPK objetivo de MEK. La secuencia génica de RAF se describe en Bonner et al., 1985, Mol ec . Cel l . Bi ol . 5 : 1400-1407, y es fácilmente accesible en múltiples bancos de datos de secuencias génicas. La construcción del vector del ácido nucleico y las líneas celulares utilizadas para esta porción de la invención se describen completamente en Morrison et al., 1988, Proc . Na ti . Aca d . Sci . USA 85 : 8855-8859.

Materiales y Reactivos 1. Células Sf9 ( Spodop t era frugiperda ) ; GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD. 2. Amortiguador RIPA. Tris/HCl 20 mM pH 7.4, NaCl 137 mM, glicerol al 10%, PMSF 1 M, Aprotenina 5 mg/L, Tritón X-100 al 0.5 %. 3. Proteina de fusión Tioredoxina-MEK (T- MEX) : La expresión y purificación de T-MEK por cromatografía de afinidad se realizó de acuerdo a los procedimientos del fabricante. Número de catálogo K 350-01 y R 350-40, Invitrogen Corp., San Diego, CA, 4. His-MAPK (ERK 2) : MAPK es marcado con His se expresó en células XL1 Blue transformadas con el vector pUC18 que codifica para His-MAPK. El His-MAPK se purificó por cromatografía de afinidad de Ni. Número de catálogo 27-4949-01, Pharmacia, Alameda, CA, como se describe en la presente. 5. IgG anti-ratón de oveja: Jackson laboratories , West Grove, PA. Número de catálogo 515-006-008, Lote 28563. 6. Anticuerpo especifico de proteina cinasa RAF-1: URP 2653 a partir de UBI. 7. Amortiguador de revestimiento. PBS; solución salina motivada con fosfato, GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD. 8. Amortiguador de lavado: TBST - Tris/HCL 50 mM'pH 7.2, NaCl 150 mM, Tritón X-100 al 0.1 %. 9. Amortiguador de bloque: TBST, etanolamina al 0.1 % pH 7.4 10. DMSO, Sígma, St. Louis, MO 11. Amortiguador de cinasa (KB) : Hepes/HCl mM pH 7.2, NaCl 150 mM, Tritón X-100 al 0.1 %, PMSF 1 mM, Aprotenina 5 mg/L, orto vanadato de sodio 75 mM, DTT 0.5 MM y MgCl2 10 mM . 12. Mezcla ATP: MgCl2 100 mM, ATP 300 mM, g-33P 10 mCi ( Dupont-NEN ) /mL . 13. Solución de detención: ácido fosfórico al 1%; Fisher, Pittsburg, PA . 14. Esterillas de filtro de fosfato de celulosa Wallac, Turku, Finlandia. 15. Solución de lavado de filtro: ácido fosfórico al 1 %; Fisher Pittsburg, PA. 16. Recolector de placa Tomtec, Wallac, Turku, Finlandia. 17. Vector de placa beta # 1205, Wallac, Turku, Finlandia. 18. Placas de polipropileno de fondo en V de 96 pozos NUNC para compuestos de Applied Scientific número de Catálogo AS-72092.

Procedimiento Todos los siguientes pasos se llevaron a cabo a temperatura ambiente a menos que se especifique de otro modo. 1. Revestimiento de placa ELISA: se revistieron pozos de ELISA con 100 Lof de antisuero purificado por afinidad, anti-ratón de oveja (1 mg/100 mL de amortiguador de revestimiento) durante la noche a 4°C. Las placas de ELISA se pueden usar durante dos semanas cuando se almacenan a 4°C. 2. Invertir la placa y remover el liquido. Adicionar 100 mL de solución de bloqueo e incubar durante 30 minutos. 3. Remover la solución de bloqueo y lavar cuatro veces con amortiguador de lavado. Colocar la placa en una toalla de papel para remover el líquido en exceso. 4. Adicionar 1 mg de anticuerpo especifico para RAF-1 a cada pozo y incubar durante 1 hora. Lavar como se describe en el paso 3. 5. Descongelar los Usados de las células Sf9 infectadas con RAS/RAF y diluir con TBST a 10 mg/100 mL . Adicionar 10 mg del Usado diluido a los pozos e incubar durante 1 hora. Agitar la placa durante la incubación. Los controles negativos no reciben el producto Usado. Los Usados de las células de insecto Sf9 infectadas con RAS/RAF se preparan después de que las células se infectan con los baculovirus recombinantes a una MOI de 5 para cada virus, y se recolectan 48 horas después. Las células se lavan una vez con PBS y se lizan en amortiguador RIPA. Se remueve el material insoluble por centrifugación (5 min a 10,000' x g) . Las alícuotas de los Usados se congelan en hielo seco/etanol y se almacenan a -80°C hasta el uso. 6. Remover el material no unido y lavar como se resume con anterioridad (paso 3) . 7. Adicionar 2 mg de T-MEK y 2 mg de His-MAEPK por pozo y ajustar el volumen a 40 mL con amortiguador de cinasa. Los métodos para purificar T-MEK y MAPK y a partir de los extractos celulares se proporcionan en la presente a manera de ejemplo. 8. Pre-diluir los compuestos (solución concentrada 10 mg/mL de DMSO) o extractos 20 veces en TBST más DMSO al 1 %. Adicionar 5 mL de compuestos/extractos pre-diluidos a los pozos descritos en el paso 6. Incubar durante 20 minutos. Los controles no reciben fármaco. 9. Iniciar la reacción de cinasa por la adición de 5 mL de mezcla de ATP; agitar las placas en un agitador de placas de ELISA durante la incubación . 10. Detener la reacción de cinasa después de 60 minutos por la adición de 30 mL de solución y terminación a cada pozo. 11. Colocar la esterilla fosfocelulosa y la placa de ELISA en el recolector de placas Tomtec. Recolectar y lavar el filtro con la solución de lavado de filtro de acuerdo a la recomendación de los fabricantes. Secar las esterillas del filtro. Sellar las esterillas de filtro y colocarlas en el soporte. Insertar el soporte en el aparato de detección radioactivo y cuantificar el fósforo radiactivo en las esterillas de filtro. De manera alternativa, se pueden transferir alícuotas de 40 mL de los pozos individuales de la placa de ensayo a las posiciones correspondientes en las esterillas de filtro de fosfocelulosa . Después del secado con aire de los filtros, poner los filtros en una bandeja. Mecer suavemente la bandeja, cambiando la solución de lavado a intervalos de 15 minutos durante 1 hora. Secar con aire las esterillas de filtro. Sellar las esterillas de filtro y colocarlas en un soporte adecuado para medir el fósforo radioactivo en las muestras. Insertar el soporte en un dispositivo de detección y cuantificar el fósforo radiactivo en las esterillas de filtro. Los valores IC50 se midieron de acuerdo al protocolo para los siguientes compuestos basados en azabencimidazol en el ensayo de ELISA con RAF-1: y Un valor de IC50 es la concentración del inhibidor basado en azabencimidazol requerida para disminuir la cantidad máxima de proteína objetivo fosforilada o crecimiento celular por 50 %. Los valores de IC50 medidos en el ensayo de fosforilación de RAF-1 se representan en la Tabla 1: TABLA 1 Ejemplo 3: Purificación de MAPK y MEK Las proteínas MAPK y MEK se expresan fácilmente en células al subclonar un gen que codifique para estas proteínas en un vector comercialmente disponible que exprese las proteínas con una marca de poli-his t idina . Los genes que codifican para estas proteínas están fácilmente disponibles en laboratorios que trabajan normalmente con estas proteínas o clonar estos genes a partir de células que contienen bibliotecas de ADNc. Las bibliotecas están comercialmente disponibles de manera fácil y una persona experta en la técnica puede diseñar fácilmente sondas de ácido nucleico homologas a las moléculas de ADNc que codifican para MEK o MAPK a partir de las secuencias de ácido nucleico de MEK y MAPK, disponibles en múltiples bases de datos génicas tal como Genbank. La clonación de un gen se puede lograr en un periodo corto de tiempo usando técnicas corrientemente disponibles para personas expertas en la técnica. La purificación de las proteínas de MEK y MAPK a partir de extractos celulares se puede lograr usando el siguiente protocolo, que se adapta a partir de Robbins et al., 1993, J-. Bi ol . . Chem . 268 : 5097-5106. 1. Lisar célula por tratamiento con sonido, tensión osmótica, o técnicas de prensa francesa fácilmente disponibles para personas expertas en la técnica. Un amortiguador apropiado de tratamiento con sonido se proporciona posteriormente. 2. Poner en equilibrio un soporte sólido que se conjuga con níquel y cobalto con el amortiguador de equilibrio descrito posteriormente. La marca de poli-his t idina se une de manera específica a los átomos de niquel y cobalto en el soporte sólido. El equilibrio se puede lograr al lavar la resina tres veces con un volumen del amortiguador de equilibrio igual a diez veces el volumen del soporte sólido. El soporte sólido está fácilmente disponible para personas experta en la técnica . 3. Adicionar el Usado' celular al soporte sólido y pone en equilibrio en un recipiente durante un periodo de tiempo. De manera alternativa, el soporte sólido se puede empacar dentro de una columna de cromatografía de proteínas y -el Usado se puede hacer fluir a través del soporte sólido. 4. Lavar el soporte sólido con el amortiguador de lavado descrito posteriormente. 5. Eluir la proteína de MEK o MAPK a partir del soporte sólido con una cantidad de amortiguador de elusión (proporcionado posteriormente) que remueve una porción significativa de la proteína a partir del soporte sólido.

Amortiguador de Tratamiento Sónico fosfato de sodio 50 mM, pH 8.0 cloruro de sodio 0.3 M ß-mercaptoetanol 10 mM NP-40 al 1 % NaF 10 mM Pefablock 0.5 mM Amortiguador de Equilibrio fosfato de sodio 50 mM, pH cloruro de sodio 0.3 M ß-mercaptoetanol 10 mM NP40 al 1 % NaF 10 mM Imidazol 1 mM Amortiguador de Lavado fosfato de sodio 50 mM, pH 8.0 cloruro de sodio 0.3 M ß-mercaptoetanol 10 mM NP40 al 1 % NaF 10 mM Imidazol 10 mM Amortiguador de Elución fosfato de sodio 50 mM , pH 8.0 cloruro de sodio 0.3 M ß-mercaptoetanol 10 mM NP40 al 1 % NaF 10 mM Imidazol 10 - 500 mM Ejemplo 4: Ensayo que Mide la Función de Fosforilación del Receptor de EGF Se midió la actividad del cinasa receptora de EGF (ensayo EGFR-NIH3T3) en células enteras completas como se describe en detalle en la Publicación de PCT WO9640116, presentada el 5 de Junio de 1996 por Tang et al., y titulada "Indolínone Compounds for the Treatment of Disease," incorporada en la presente por referencia en su totalidad, incluyendo cualquiera de los dibuj os . Los valores de IC50 medidos en el ensayo de fosforilación del receptor de EGF se representan en la Tabla 2: TABLA 2 Ejemplo 5 : Ensayo que Mide el Efecto de los Compues os Basados en Azabencimidazol en el Crecimiento de Células que Expresan Ras El siguiente ensayo mide las velocidades de crecimiento para células NIH-3T3 que expresan Ras. El propósito del ensayo es determinar los efectos de los compuestos en el crecimiento de células NIH 3T3 que sobre-expresan H-Ras.

Materiales placas estériles de fondo plano de 96 pozos placas estériles de fondo redondo de 96 pozos depósito estéril de 25 mL o 100 mL pipetas, pipetman de multicanal puntas de pipeta estériles tubos estériles de 15 mL y 50 mL Reactivos SRB al 0.4 % en ácido acético al 1 % base Tris 10 M TCA al 10% ácido acético al 1 % DMSO estéril (Sigma) compuesto en DMSO (solución concentrada 100 mM o menos ) Tripsina-EDTA (GIBCO BRL) Linea celular : 3T3/H-Ras (células del clon 7 de NIH 3T3 que expresa un fragmento genómico del H-Ras oncogénico ) . Las células se pueden construir usando el siguiente protocolo: 1. Subclonar un fragmento génico que codifica para Ras en un vector comercialmente disponible que transfectará establemente células NIH-3T3. El fragmento es del alelo de transformación genómico de cHa-ras. 2. Transfectar células NIH-3T3 con el vector subclonado por un método de fosfato de calcio. Seleccionar células que expresan la construcción de Ras en un suero al 2 % en DMEM. Se observan focos visibles después de dos semanas. Mezclar las células transformadas para generar una linea celular establemente transformada.

Medio de crecimiento : Suero de becerro al 2 %/DMEM + glutamina 2 mM, Pen/S t rep Protocolo : Día 0 : Colocación en Placa de las Células : Esta parte del ensayo se llevó a cabo en una campana de flujo laminar. 1. Tripsinar células. Transferir 200 mL en la suspensión celular a 10 mL de isotona. Contar las células con un contador Coulter. 2. Diluir las células en medio de crecimiento a 60,000 células/mL. Transferir 100 mL de células a cada pozo en una placa de fondo plano de 96 pozos para dar 6000/pozo. 3. Usar la mitad de la placa (4 filas) para cada compuesto y cuadruplicar los pozos para cada concentración del compuesto, y un conjunto de cuatro pozos para el control del medio. 4. Agitar suavemente las placas para permitir la unión uniforme de las células. 5. Incubar las placas a 37°C en un incubador con C02 al 10 %.

Día 1: Adición del Compuesto: Esta parte del ensayo se lleva a cabo en una campana de flujo laminar. 1. En una placa de fondo redondo de 96 pozos, adicionar 120 mL de medio de crecimiento que contiene DMSO 2X % final encontrado en una concentración de detección mayor del compuesto a las columnas 1 a 11. Por ejemplo, si la concentración mayor es 100 mL, y esto se hace a partir de una solución concentrada 10Q mM, DMSO IX es 0.1 %, de modo que DMSO 2X es 0.2 %. Esta placa se usa para triturar el compuesto, 4 filas por columna . 2. En un tubo estéril de 15 ml , hacer una solución de 2X de la concentración de detección más alta del compuesto en el medio de crecimiento más DMSO 2X. Se necesita 1 mL por linea celular. La concen ración de inicio del compuesto es usualmente 100 mM, pero esta concentración puede variar dependiendo de la solubilidad del compuesto. 3. Transferir 240 mL de la solución de compuesto de inicio 2X para cuadriplicar los pozos en la columna 12 de la placa de fondo redondo de 96 pozos. Hacer diluciones seriales 1:2 a través de la placa desde la izquierda a la derecha al transferir 12 mL de la columna 12 a la columna 11, de la columna 11 a la 10 y asi sucesivamente hasta la columna 2. Transferir 100 mL de las diluciones del compuesto, y 100 mL del medio en la columna 1, sobre 100 L del medio en células en pozos correspondientes de la placa de fondo plano de 96 pozos. El volumen total por pozo debe ser 200 mL . 4. Regresar la placa al incubador e incubar durante 3 di as .

Día 4 : Desarrollo del Ensayo Esta parte del ensayo se lleva a cabo en el banco. 1. Aspirar o vaciar el medio. Adicionar 200 mL de TCA al 10 % frió a cada pozo para fijar las células. Incubar la placa durante al menos 60 minutos a 4 ° c . 2. Descartar el TCA y enjuagar los pozos 5 veces con agua de grifo. Secar las placas hacia arriba en toallas de papel. 3. Teñir las células con 100 mL/pozo de SRB al 0.4 % durante 10 minutos. 4. Vertir el SRB y enjuagar los pozos 5 veces con ácido acético al 1 %. Secar las placas completamente hacia arriba en toallas de papel. 5. Solubilizar el tinte con 100 mL/pozo de base Tris 10 mM durante 5-10 minutos en el agitador . 6. Leer las placas en un lector de placa ELISA Dynatech a 570 nm con referencia a 630 nm. Seleccionar los compuestos que inhibieron la velocidad de crecimiento de las células que sobre expresan Ras como se ilustra en la Tabla 3.

TABLA 3 Ejemplo 6 : Ensayo que Mide el Efecto de los Compuestos Basados en Azabencimidazol en el Crecimiento de Células A549 El siguiente ensayo mide las velocidades de crecimiento para células A549. El propósito del ensayo es determinar los efectos de los compuestos en el crecimiento de células de carcinoma de pulmón, humano, A549. Las células A549 están fácilmente accesibles a partir de fuentes comerciales, tal como ATCC (CCL185) .

Materiales placas estériles de fondo plano de 96 pozos placas estériles de fondo redondo de 96 pozos depósito estéril de 25 mL o 100 mL pipetas, pipetman de multicanal puntas de pipeta estériles tubos estériles de 15 mL y 50 mL Reactivos SRB al 0.4 % en ácido acético al 1 % base Tris 10 mM TCA al 10% ácido acético al 1 % DMSO estéril (Sigma) compuesto en DMSO (solución concentrada 100 mM o menos ) Tripsina-EDTA (GIBCO BRL) Línea celular y medio de crecimiento : Células de carcinoma de pulmón humano A549 (ATCC CCL185) Suero de becerro fetal al 10 % en F12-K de Ham's Protocolo : Día 0 : Colocación en Placa de las Células : Esta parte del ensayo se llevo a cabo en una campana de flujo laminar. 1. Tripsinar células. Transferir 200 µL en la suspensión celular a 10 mL de isotona. Contar las células con un contador Coulter. 2. Diluir las células en medio de crecimiento a 20,000 células/mL. Transferir 100 mL de células a cada pozo en una placa de fondo plano de 96 pozos para dar 2000 células/pozo. 3. Usar la mitad de la placa (4 filas) para cada compuesto y cuadruplicar los pozos para cada concentración del compuesto, y un conjunto de cuatro pozos del control del medio. 4. Agitar suavemente las placas para permitir la unión uniforme de las células. 5. Incubar las placas a 37°C en un incubador de C02 al 10 % .

Día 1: Adición del Compuesto: Esta parte del ensayo se lleva a cabo en una campana de flujo laminar. 1. En una placa de fondo redondeo de 96 pozos, adicionar 120 µL de medio de crecimiento que contiene DMSO 2X % final encontrado en una concentración de detección mayor del compuesto a las columnas 1 a 11. Por ejemplo, si la concentración mayor es 100 µM, y esto se hace a partir de una solución concentrada 100 mM, DMSO IX es 0.1 %, de modo que DMSO 2X es 0.2 %. Esta placa se usa para triturar el compuesto, 4 filas por columna . 2. En un tubo estéril de 15 ml , hacer una solución de 2X de la concentración de detección más alta del compuesto en el medio de crecimiento más DMSO 2X. Se necesita 1 mL por línea celular. La concentración de inicio del compuesto es usualmente 100 µM, pero esta concentración puede variar dependiendo de la solubilidad del compuesto. 3. Transferir 240 µL de la solución de compuesto de inicio 2X para cuadriplicar los pozos en la columna 12 de la placa de fondo redondo de 96 pozos. Hacer diluciones seriales 1:2 a través de la placa desde la izquierda a la derecha al transferir 120 µL de la columna 12 a la columna 11, de la columna 11 a la 10 y así sucesivamente hasta la columna 2. Transferir 100 µL de las diluciones del compuesto, y 100 µL del medio en la columna 1, sobre 100 µL del medio en células en pozos correspondientes de la placa de fondo plano de 96 pozos. El volumen total por pozo debe ser 200 µL . 4. Regresar la placa al incubador e incubar durante 3 dias .

Día 5 : Desarrollo del Ensayo Esta parte del ensayo se lleva a cabo en el banco. 1. Aspirar o vaciar el medio. Adicionar 200 µL de TCA al 10 % frió a cada pozo para fijar las células. Incubar la placa durante al menos 60 minutos a 4°c. 2. Descartar el TCA y enjuagar los pozos 5 veces con agua de grifo. Secar las placas hacia arriba en toallas de papel. 3. Teñir las células con 100 µL/pozo de SRB al 0.4 % durante 10 minutos. 4. Verter. SRB y enjuagar los pozos 5 veces con ácido acético al 1 %. Secar las placas completamente hacia arriba en toallas de papel. 5. Solubilizar el tinte con 100 µL/pozo de base Tris 10 mM durante 5-10 minutos en el agitador . 6. Leer las placas en un lector de placa ELISA Dynatech a 570 nm con referencia a 630 nm . Seleccionar los compuestos que inhibieron la velocidad de crecimiento de las células que sobre expresan Ras como se ilustra en la Tabla 4.

TABLA 4 Ejemplo 7: Método para Determinar la actividad Biológica de los Moduladores de Raf in Vivo Se pueden utilizar estudios de Xenoinjerto para monitorear el efecto de los compuestos de la invención en la inhibición de las células de tumor ováricas, de melanoma, de próstata, pulmón y mamarias. El protocolo para el ensayo se describe en detalle en la publicación de PCT WO9640116 presentada el 5 de Junio de 1996, por Tang et al., y titulada "Indolinone Compounds for the Treatment of Disease," incorporada en la presente como referencia en su totalidad, incluyendo cualquiera de los dibuj os . La invención descrita d manera ilustrativa en la presente se puede practicar en la ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se describan de manera específica en la presente. Los términos y expresiones que se han empleado se usan como términos de descripción y no de limitación, y no hay intención que en el uso de estos términos y expresiones se excluyan cualquiera de los equivalentes de las características mostradas y descritas o porciones de la misma, pero se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención reivindicada. De esta manera, se debe entender que aunque la presente invención se ha descrito específicamente por modalidades preferidas e características opcionales, la modificación y variación de los conceptos en la presente descritos se puede acoger por aquellos expertos en la técnica y que estas modificaciones y variaciones se consideran que están dentro del alcance de esta invención como se define por las reivindicaciones anexas. Un experto en la técnica apreciará fácilmente que la presente invención se adapta bien para llevar a cabo los objetos y para obtener los fines y ventajas mencionados, asi como aquellos inherentes en la presente. Los complejos moleculares y los métodos, procedimientos, tratamientos, moléculas, compuestos específicos descritos en la presente son actualmente representativos de las modalidades preferidas, son de ejemplo y no se proponen como limitaciones del alcance de la invención. Los cambios en la presente y otros usos que se presenten para aquellos expertos en la técnica que de abarcan dentro del espíritu de la invención se definen por el alcance de las reivindicaciones. Será fácilmente evidente para un experto en la técnica que la variación de las sustituciones y modificaciones se puede hacer a la invención descrita en la presente sin que se aparte del alcance y espíritu de la invención Todas las patentes y publicaciones mencionadas en la especificación son representativas de los niveles de aquellos expertos en la técnica a la cual corresponde la invención. Todas las patentes y publicaciones se incorporan en la presente como referencia al mismo grado como si cada publicación individual se indicara de manera específica e individual para ser incorporada como referencia . La invención descrita ilustrativamente en la presente se puede practicar de manera adecuada en la ausencia de cualquier elemento o elementos limitación o limitaciones, que no se describan de manera especifica en la presente. De esta manera, por ejemplo, en cada caso en la presente cualquiera de los términos "que comprende", "que consiste esencialmente de" y "que consiste de" se pueden reemplazar con cualquiera de los otros dos términos. Los términos y expresiones que se han empleado se usan como términos de descripción y no de limitación, y no hay intención que en el uso de estos términos y expresiones de exclusión cualquiera de los equivalentes de las características mostradas y descritas o porciones de la misma, pero se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro de la invención reivindicada. De esta manera, se debe entender que aunque la presente invención se ha descrito de manera especifica por modalidades preferidas y características opcionales, la modificación y variación de los conceptos descritos en la presente se puede acoger por cualquiera de los expertos en la técnica, y que estas modificaciones y variaciones se consideran como que están dentro del alcance de la invención como se define por las reivindicaciones anexas.

Además, donde se describen las características o aspectos de la invención en términos de grupos Markush, aquellos expertos en la técnica reconocerán que la invención también se describe de este modo en términos de cualquier miembro individual o su grupo de miembros del grupo Markush. Por ejemplo, si X se describe como se selecciona a partir del grupo que consiste de bromo, cloro e yodo, las reivindicaciones para X que son bromo y las reivindicaciones para X que son bromo y cloro se describen completamente. Aquellas referencias no incorporadas previamente en la presente como referencia, incluyendo tanto referencias de patente como no de patente, se incorporan expresamente en la presente como referencia para todos los propósitos. Otras modalidades están dentro de las siguientes reivindicaciones .

Claims (37)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para modular la función de una proteína-cinasa de serina/treonina con un compuesto basado en azabencimidazol, que comprende el paso de poner en contacto las células que expresan la proteina-cinasa de serina/treonina con el compuesto .
2. 2. El método según la reivindicación 1, en donde la proteina-cinasa de serina/treonina es RAF.
3. 3. Un método para identificar compuestos que modulan la función de la proteina-cinasa de serina/treonina, que comprende los siguientes pasos : (a) poner en contacto las células que expresan la proteina-cinasa de serina/treonina con el compuesto; y (b) monitorear un efecto en las células.
4. 4. El método según la reivindicación 3, en donde el efecto es un cambio o una ausencia de un cambio en el fenotipo celular.
5. 5. El método según la reivindicación 3, en donde el efecto es un cambio o una ausencia de un cambio en la proliferación celular.
6. 6. El método según la reivindicación 3, en donde el efecto es un cambio o ausencia de un cambio en la actividad catalítica de la proteina-cinasa de serina/treonina.
7. 7. El método según la reivindicación 3, en donde el efecto es un cambio o ausencia de un cambio en la interacción entre la proteina-cinasa de serina/treonina con un compañero de unión natural, como se describe en la presente.
8. 8. El método según la reivindicación 3, que comprende los siguientes pasos: (a) lisar las células para producir un Usado que comprende . la proteina-cinasa de serina/treonina; (b) absorber la proteina-cinasa de serina/treonina a un anticuerpo; (c) incubar la proteina-cinasa de serina/treonina absorbida con un sustrato o sustratos; y (d) absorber el sustrato o sustratos a un soporte sólido o anticuerpo; en donde el paso de monitorear el efecto en las células comprende medir la concentración de un fosfato del sustrato o sustratos.
9. 9. El método según la reivindicación 3, en donde la proteina-cinasa de serina/treonina es RAF y comprende los siguientes pasos: (a) lisar las células para producir un Usado que comprende RAF; (b) absorber el RAF a un anticuerpo; (c) incubar el RAF absorbida con un MEK y MAPK; y (d) absorber el MEK y MAPK a un soporte sólido o anticuerpo o anticuerpos; en donde el paso de medir el efecto en las células comprende monitorear la concentración de fosfato del MEK y MAPK.
10. 10. El método según la reivindicación 1, en donde el compuesto basado en azabencimidazol tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II, o III: en donde (a) Ri, R2 , R3 y R4 se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de: (i) hidrógeno; (ii) alquilo saturado e insaturado; (iii) NX2X3, donde X2 y X3 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (iv) halógeno o trihalometilo; (v) una cetona de la fórmula -CO-X4, donde X se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (vi) un ácido carboxílico de la fórmula -(X5)n-COOH o éster de la fórmula -(X6)n-COO-X7, donde X5, Xß , y X7 y se seleccionan de manera independiente a partir de alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas y en donde n es 0 o 1; (vii) un alcohol de la fórmula (Xe)n-OH, o una porción alcoxi de la fórmula -(XgA-O-Xg, donde X8 y X9 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homociclicas o heterociclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster, y donde n es 0 o 1; (viii) una amida de la fórmula NHCOXio, donde Xio se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo, hidroxilo, y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster; (ix) -S02NXnX?2, donde Xn y Xi2 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homocíclicas y heterocíclicas; (x) una porción de anillo homocíclica o heterocíclica sustituida opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones de éster; (xi) un aldehido de la fórmula -CO-H; y (xii) una sulfona de la fórmula -S02-X?3, donde X13 se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (b) Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre, oxígeno, NH y NR4, con la condición de que si uno de Zi y Z2 es nitrógeno, NH, o NR4 entonces el otro de \ y Z es nitrógeno, azufre, oxígeno, NH, o NR4; y (c) Z y Xi se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre y oxigeno.
11. 11. El método según la reivindicación 10, en donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos SABI, como se define en la presente.
12. 12. Un método para prevenir o tratar una condición anormal en un organismo, que comprende el paso de administrar un compuesto basado en azabencimidazol de la fórmula I, II, o III al organismo . en donde (a) Ri, R2, R3 y R se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de: (i) hidrógeno; (ii) alquilo saturado e insaturado; (iii) NX2X3, donde X2 y X3 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas ; (iv) halógeno o trihalometilo; (v) una cetona de la fórmula -CO-X , donde X4 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (vi) un ácido carboxilico de la fórmula -(X5)n-COOH o éster de la fórmula - (X6) n-COO-X7, donde X5, X6, y X7 y se seleccionan de manera independiente a partir de alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas y en donde n es 0 o 1 ; (vii) un alcohol de la fórmula (X8)n-OH, o una porción alcoxi de la fórmula - (X8 ) n-0-X9, donde X8 y X9 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster, y donde n es 0 o 1; (viii) una amina de la fórmula NHCOXio, donde X?0 se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo, hidroxilo, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes independientemente seleccionados a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster; (ix) -S02NXnXi2, donde Xü y Xi2 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (x) una porción de anillo homocíclica o heterocíclica sustituida opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones de éster; (xi) un aldehido de la fórmula -CO-H; y (xii) una sulfona de la fórmula -S02-X13/ donde X13 se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas; (b) Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre, oxigeno, NH y NR , con la condición de que si uno de Zi y Z2 es nitrógeno, NH, o NR4 entonces el otro de Zi y Z2 es' nitrógeno, azufre, oxigeno, NH, o NR4; y (c) Z3 y Xi se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre y oxígeno.
13. 13. El método según la reivindicación 12, en donde el organismo es un mamífero.
14. 14. El método según la reivindicación 12, en donde la condición anormal es cáncer o un desorden fibrótico.
15. 15. El método según la reivindicación 14, en donde la condición anormal es un cáncer seleccionado a partir del grupo que consiste de cáncer de pulmón, cáncer ovárico, cáncer de pecho, cáncer de cerebro, cáncer de cerebro intra-axial, cáncer de colón, cáncer de próstata, sarcoma, sarcoma de Kaposi, malanoma y glioma.
16. 16. El método según la reivindicación 12, en donde la condición anormal se asocia con una aberración en una ruta de transducción de señales caracterizada por un interacción entre una proteína-cinasa de serina/treonina y un compañero de unión natural.
17. 17. El método según la reivindicación 16, en donde la proteína-cinasa de serina/treonina es RAF.
18. 18. Un compuesto de azabencimidazol que tiene una estructura expuesta en la fórmula I, II, o III: en donde (a) Ri, R2/ R3 y R4 se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de: (i) hidrógeno; (ii) alquilo saturado e insaturado; (iii) NX2X3, donde X2 y X3 se seleccionan independientemente a partir del grupo que " consiste de hidrógeno, alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas; (iv) halógeno o trihalometilo; (v) una cetona de la fórmula -C0-X4, donde X4 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas; (vi) un ácido carboxílico de la fórmula -(X5)n-COOH o éster de la fórmula -(X6)n-COO-X7, donde X5, X6, y X7 y se seleccionan de manera independiente a partir de alquilo y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas y en donde n es 0 o 1; (vii) un alcohol de la fórmula (X8)n-OH, o una porción alcoxi de la fórmula -(X8)n_0-Xg, donde X8 y Xg se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo saturado s insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterocíclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster, y donde n es 0 o 1 ; (viii) una amina de la fórmula NHCOXio, donde Xio se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo, hidroxilo, y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas, en donde el anillo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y éster; (ix) -S02NXnX?2, donde X1X y Xi2 se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y porciones de anillo homociclicas o heterocíclicas; (x) una porción de anillo homociclica o heterociclica sustituida opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro y porciones de éster; (xi) un aldehido de la fórmula -CO-H; y (xii) una sulfona de la fórmula -S02- X%3 , donde X?3 se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo saturado o insaturado, y porciones de anillo homocíclicas o heterociclicas; (b) Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre, oxígeno, NH y NR , con la condición de que si uno de Zi y Z2 es nitrógeno, NH, o NR entonces el otro de Zi y Z2 es nitrógeno, azufre, oxigeno, NH, o NR4; y (c) Z3 y Xi se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno, azufre y oxigeno.
19. 19. El compuesto según la reivindicación 18, en donde Zi y Z2 se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de nitrógeno y NH .
20. 20. El compuesto según la reivindicación 19, en donde Ri, R2 , R3 y R se seleccionan independientemente a partir del grupo que consiste de (i) hidrógeno; (ii) alquilo saturado o insaturado sustituido opcionalmente con una porción de anillo homociclica o heterociclica , o una porción de anillo policíclica, en donde la porción de anillo está opcionalmente sustituida con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, halógeno, trihalometilo, hidroxi, alcoxi, carboxilato, nitro y porciones de éster; y (iii) una porción de anillo homocíclica o heterocí clica, opcionalmente sustituida con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, halógeno, trihalometilo, hidroxi, alcoxi, carboxilato, nitro y porciones de éster.
21. 21. El compuesto según la reivindicación 20, en donde R2, y R3 son hidrógeno.
22. 22. El compuesto según la reivindicación 21, en donde Ri es fenilo opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados independientemente a partir del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, halógeno, trihalometilo, carboxilato, nitro o porciones de éster.
23. 23. El compuesto según la reivindicación 22, en donde Ri se selecciona a partir del grupo que consiste de sustituyentes SABI.
24. 24. El compuesto según la reivindicación 23, en donde Xi se selecciona a partir del grupo que consiste de azufre, oxigeno y NH .
25. 25. El compuesto según la reivindicación 24, en donde la Z3 es oxigeno.
26. 26. El compuesto según la reivindicación 25, en donde el R se selecciona a partir del grupo que consiste de metilo y etilo.
27. 27. El compuesto según la reivindicación 26, en donde el compuesto de azabencimidazol se selecciona a partir del grupo que consiste de compuestos SABI .
28. 28. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de azabencimidazol de cualquiera de las reivindicaciones 18-27, y un portador o diluyente fisiológicamente aceptable.
29. 29. Un método para sintetizar un compuesto de la fórmula (I) de la reivindicación 18, que comprende los pasos de: (a) hacer reaccionar 2-amino-6-cloro-3-nitropiridina en un segundo reactivo en un solvente, produciendo un primer compuesto intermedio, en donde el segundo reactivo es un anillo de arilo sustituido; (b) reducir el primer compuesto intermedio en la presencia de un catalizador y un agente reductor, produciendo un segundo compuesto intermedio; (c) hacer reaccionar el segundo compuesto intermedio con un tercer reactivo; y (d) purificar el compuesto de la reivindicación 18.
30. 30. El método según la reivindicación 29, en donde el solvente es n-propanol.
31. 31. El método según la reivindicación 30, en donde el anillo de arilo sustituido es un fenol sustituido, tiofenilo sustituido, y anilina sustituida.
32. 32. El método según la reivindicación 31, en donde el fenol sustituido, tiofenilo sustituido y anilina sustituida se selecciona a partir del grupo que consiste de reactivos SABI.
33. 33. El método según la reivindicación 29, en donde el agente reductor es hidrógeno.
34. 34. El método según la reivindicación 29, en donde el catalizador es niquel Raney.
35. 35. El método según la reivindicación 29, en donde el tercer reactivo es O-met ilisourea .
36. 36. El método según la reivindicación 29, en donde el tercer reactivo es el producto de la reacción de sulfato de S-met ilisot iouronio y cloroformiato de alquilo.
37. 37. El método según la reivindicación 36, en donde el alquilo es metilo o etilo.