MX2014001551A - Inhibicion de canal ionico del potencial receptor transitorio a1 (trpa1). - Google Patents

Inhibicion de canal ionico del potencial receptor transitorio a1 (trpa1).

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Abstract

La presente invención se relaciona con un nuevo compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)) y composiciones farmacéuticas para inhibir el canal iónico TRPA1 y/o las afecciones médicas relacionadas con TRPA1, tal como el dolor.

Description

INHIBICION DEL CANAL IONICO DEL POTENCIAL RECEPTOR TRANSITORIO Al (TRPA1) CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente descripción se refiere a los compuestos y método para tratar el dolor, por ejemplo, por la inhibición del canal iónico del potencial receptor transitorio Al (TRPA1, por sus siglas) .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN TRPA1 es un canal catiónico no selectivo relacionado con la sensación de dolor en los seres humanos. El TRPA1 se halla en las neuronas sensoriales y actúa como un receptor de transducción de señales que vincula la inflamación al dolor. La activación del TRPA1 puede causar dolor mediante la inducción del disparo de las neuronas nociceptivas y con la conducción de la sensibilización central en la médula espinal. La estimulación de TRPA1 también puede aumentar el disparo de las neuronas sensoriales, que llevan a la liberación de neuropeptidos proinflamatorios tales como NK-A, sustancia P y CGRP (que induce vasodilatación y ayudar a reclutar células inmunológicas) . Una variedad de los compuestos reactivos endógenos producidos durante la inflamación activan el TRPA1 (que incluye 4-hidroxinonenal liberado durante la peroxidación de los lisosomas; prostaglandinas de ciclopentano sintetizadas por las enzimas REF.: 246606 COX; peróxido de hidrógeno producido por el estrés oxidativo) . El TRPA1 también se puede activar por una variedad de estímulos, que incluyen productos naturales (por ejemplo, isotiocianato de alilo, o AITC) , irritantes ambientales (por ejemplo, acroleína) , moléculas antipáticas (por ejemplo, trinitrofenol y clorpromazina) y agentes farmacológicas. La activación de TRPA1 también sensibiliza la TRPA1 al frío. Además, una mutación de aumento de función en TRPA1 causa síndrome doloroso episódico familiar; pacientes que sufren de esta afección tienen dolor episódico que se puede desencadenar por frío. (Kremeyer et al., Neuron. 2010 Jun 10 ; 66 (5) : 671-80) . En consecuencia, se considera que TRPA1 cumple un papel en el dolor, que incluye dolor relacionado con daño nervioso, alodinia al frío y dolor inflamatorio.
Los compuestos inhibidores de TRPA1 se pueden usar para tratar el dolor. Los compuestos que inhiben el canal iónico TRPA1 pueden ser útiles, por ejemplo, para tratar afecciones mejoradas, eliminadas o prevenidas por la inhibición del canal iónico TRPA1 (por ejemplo, afecciones médicas que causan dolor) . Se ha mostrado que la inhibición de TRPA1 (por ejemplo, por ablación genética y antagonismo químico) produce reducción del comportamiento del dolor en ratones y ratas. Los ratones Knockout que carecen de TRPA1 funcional tienen respuestas nociceptivas disminuidas a los activadores de TRPA1 (que incluye AITC, formalina, acroleína, 4- hidroxinonenal ) y, además, han reducido mucho la hipersensibilidad térmica y mecánica en respuesta al mediador inflamatorio bradiquinina (por ejemplo, Kwan, K. Y. et al. Neuron 2006, 50, 277-289; Bautista, D. M. et al. Cell 2006, 124, 1269-1282). En los modelos de dolor animal, la regulación por disminución de la expresión de TRPAl por los oligonucleótidos antisentido específicos del gen previno y revirtió la hiperalgesia por frío inducida por la inflamación y lesión nerviosa (Ver, por ejemplo, Obata, K. et al., Journal of Clinical Investigation 2005, 115, 2393-2401; Jordt, S. E. et al., Nature 2004, 427, 260-265; Katsura, H. et al., Exploratory Neurology 2006, 200, 112-123). Los compuestos inhibidores de TRPAl son también efectivos en una variedad de modelos de dolor de roedores. Se han mostrado inhibidores de TRPAl para reducir hipersensibilidad mecánica y alodinia por frío después de la inflamación inducida por adyuvante de Freund completo (sin alterara la sensación al frío normal en los animales sin exposición previa) y también para mejorar la función en el modelo de osteoartritis por monoyodoacetato de rata. (Ver, del Camino, D. et al. (2010) . TRPAl contribuye a la hipersensibilidad al frío. J" Neurosci 30, 15165-15174; y Chen, J. et al., (2011). El bloqueo selectivo del canal TRPAl atenúa el dolor patológico sin alterar la sensación al frío nocivo o la regulación de la temperatura corporal. Pain 152, 1165-72.) Se ha demostrado que los compuestos inhibidores de TRPA1 redujeron el comportamiento del dolor en roedores inyectados con AITC (aceite de mostaza) , formalina, cinnamaldehído, acroleína y otros activadores de TRPA1. (Ver, Jordt, S. E. et al., Nature 2004, 427, 260-265; Chen, J. et al., (2011). El bloqueo selectivo del canal TRPA1 atenúa el dolor patológico sin alterar la sensación al frío nociva o la regulación de la temperatura corporal. Pain 152, 1165-72).
Recientemente, un compuesto inhibidor de TRPA1 describió como compuesto 1 en la solicitud de patente PCT PCT/US2009/069146 (publicado como WO2010/075353A1 el 1 de julio de 2010) : Sin embargo, aún se necesita identificar los compuestos que modulan seguramente (por ejemplo, inhiben) canales iónicos involucrados en el dolor, que incluye una necesidad de composiciones farmacéuticas que inhiban el canal iónico TRPA1. En particular, se necesita identificar compuestos que inhiben TRPA1 sin biomarcadores séricos de hepatotoxicidad . Tales compuestos son útiles, por ejemplo, como herramientas de investigación y como agentes terapéuticos (por ejemplo, para el tratamiento del dolor) .
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION El compuesto de Fórmula (I) es un nuevo antagonista del canal TRPA1 humano y animal .
Fórmula (I) El compuesto de Fórmula (la) se puede sintetizar de acuerdo con la síntesis de la Figura 1A, como se describe en el Ejemplo 1, y como una sal farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, una sal clorhidrato descrita en el Ejemplo 2) .
Fórmula (la) El compuesto de la Fórmula (la) es una nueva pequeña molécula antagonista del canal TRPA1 humano en la prueba in vitro e in vivo. El compuesto de la Fórmula (la) también es un inhibidor in vitro altamente selectivo de TRPA1. Por ejemplo, el compuesto de la Fórmula (la) bloque hacia dentro las corrientes a través de TRPA1 en TRPA1 de rata, perro y humano (Ejemplo 3) . El efecto antagonista del compuesto de la Fórmula (lia) contra TRPA1 de humano (hTRPAl) se midió en una configuración de parche celular completo (Ejemplo 3) . Además, el compuesto de la Fórmula (la) es altamente selectivo para TRPA1 comparado con los canales de TRP conocido y los canales iónicos de voltaje-compuerta (Ejemplo 3) . El compuesto de la Fórmula (la) puede usarse en pruebas para identificar los compuestos que inhiben TRPA1. Un compuesto de la Fórmula (I) también puede usarse en un método para modular un canal iónico de TRPA1, que comprende poner en contacto una célula con un compuesto que tiene la estructura de la Fórmula I (por ejemplo, un compuesto de la Fórmula (la) ) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El compuesto de la Fórmula (la) es un compuesto farmacéutico activo en múltiples modelos de rata in vivo de dolor, incluyendo el dolor inducido por la activación directa del canal TRPA1 con inyección de formalina (Ejemplo 5), alodinia por frío después de la inflamación crónica inducida por adyuvante de Freund completo (Ejemplo 6) y un modelo quirúrgico de roedor que involucra la incisión de la superficie plantar de la pata trasera (Ejemplo 7) .
El compuesto de Fórmula (Ib) se puede sintetizar de acuerdo con el Ejemplo le, y como una sal farmacéuticamente aceptable.
El compuesto de la Fórmula (Ib) es un segundo estereoisómero de la Fórmula (I) , y es un antagonista de una nueva molécula pequeña del canal de TRPA1 humano en la prueba in vitro. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de la Fórmula (la) ) son útiles para la administración para el tratamiento de dolor. Otras composiciones farmacéuticas pueden incluir un compuesto de la Fórmula (I) que contiene los compuestos de la Fórmula (la) y/o la Fórmula (Ib) . Las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto (s) de la Fórmula (I) (por ejemplo, los compuestos de la Fórmula (la) y/o la Fórmula (Ib)) son útiles en la manufactura de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de dolor.
Un compuesto de la Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la) y/o Fórmula (Ib)) también es útil en la manufactura de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de una afección respiratoria, de preferencia una afección sensible a un inhibidor de TRPA1.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de la Fórmula (I) (por ejemplo, (Fórmula (la) ) , y las sales farmacéuticamente aceptables y formulaciones de los mismos (por ejemplo, composiciones farmacéuticas que incluyen el compuesto de la Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)) combinados con una ciclodextrina) , por ejemplo hidroxipropil-beta-ciclodextrina o el compuesto de sulfobutiléter ß- ciclodextrina disponible bajo la marca comercial Captisol®) son útiles en el tratamiento de dolor, incluyendo dolor inflamatorio y post-operativo. Además, las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de la Fórmula (I) , (por ejemplo, Fórmula (la)) pueden incluir una sal farmacéuticamente aceptable de la Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)) en formulaciones de los mismos que no contienen una ciclodextrina.
El compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)) y sus sales farmacéuticamente aceptables también son útiles como herramientas de investigación, por ejemplo en pruebas que incluyen la modulación del canal iónico TRPA1.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1A es un ejemplo de esquema de reacción para sintetizar un compuesto de Fórmula (la) , como se describe en el Ejemplo 1A.
La Figura IB es un esquema de reacción para sintetizar un compuesto deuterado (12) , un análogo deuterado del compuesto de Fórmula (la), como se describe en el Ejemplo IB. La Figura 2 es un gráfico de barras que demuestra el efecto de administrar una composición farmacéutica que comprende el compuesto de Fórmula (la) a diferentes concentraciones (3, 10, 30, y 50 mg/kg) a roedores antes de realizar una inyección de formalina como se describe en el Ejemplo 5.
La Figura 2 muestra la duración del dolor medida (como el número (n) de segundo para un periodo de observación de 2 minutos) en un modelo de dolor de inyección de formalina en roedores para diversas composiciones farmacéuticas que contienen diferentes cantidades del compuesto de Fórmula (la) , un vehículo administrado por vía intraperitoneal (i.p.), y el compuesto de Fórmula (II) comparador.
La Figura 3 es un gráfico lineal que demuestra las puntuaciones aumentadas de latencia de retirada de la pata (PWL, por sus siglas en inglés) observadas después de la administración i.p. de las composiciones farmacéuticas con concentraciones crecientes del compuesto de Fórmula (la) en el modelo murino de adyuvante de Freund completo (CFA, por sus siglas en inglés) descrito en el Ejemplo 6. La Figura 3 muestra el cambio de la puntuación de PWL en función de la concentración del compuesto de Fórmula (la) , así como las puntuaciones de PWL observadas después de la administración del vehículo solo y una composición farmacéutica comparadora que contiene el compuesto de Fórmula comparador (II) .
La Figura 4 es un gráfico lineal que demuestra la reducción de las puntuaciones de protección observadas después de la administración i.p. de las composiciones farmacéuticas con diversas concentraciones del compuesto de Fórmula (la) en el modelo de incisión de roedores descrito en el Ejemplo 7. La Figura 4 muestra el cambio en la puntuación protectora en función de la concentración administrada del compuesto de Fórmula (la) , asi como las puntuaciones de protección observadas después de la administración del vehículo solo y las composiciones farmacéuticas comparadores que contienen el compuesto de Fórmula (III) comparador o ketoprofeno.
La Figura 5A es un gráfico de barras de datos para la medición de los biomarcadores químicos séricos de hepatotoxicidad medidos en los perros hembra a los dosificó en forma oral con un compuesto de Fórmula (la) . Las figuras a lo largo del eje X son las dosis del compuesto de Fórmula (I) administrado .
La Figura 5B es un gráfico de barras de datos para la medición de los biomarcadores químicos séricos de hepatotoxicidad medidos en los perros macho y hembra a los que se dosificó en forma oral con un compuesto de Fórmula (III) comparador.
La Figura 6 es un gráfico de barras de datos que muestran el efecto de los biomarcadores de hepatotoxicidad en un suero de rata para administrar un compuesto de Fórmula (la) o un compuesto de Fórmula (III) comparador en un estudio de selección de dosis repetida i.p. de 7 días a razón de 50 mg/kg/días durante 7 días consecutivos.
La Figura 7 es el espectro de RMN característico que identificar el compuesto de Fórmula (Ib) .
La Figura 8 es un diagrama de flujo que muestra las etapas en el protocolo experimental para la evaluación del compuesto de la Fórmula (la) en el modelo de asma alérgica.
La Figura 9A es una gráfica lineal de los datos, que muestra los efectos de diferentes dosis del compuesto de la Fórmula (la) sobre la resistencia pulmonar.
La Figura 9B es una gráfica de barras de los datos, que muestra la cuantificación de los efectos de las diferentes dosis del compuesto de la Fórmula (la) durante la respuesta tardía de la resistencia pulmonar.
La Figura 10 es una gráfica de barras de los datos, que muestra los efectos de diferentes dosis de c del compuesto de la Fórmula (la) sobre la hipersensibilidad del conducto aéreo.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la) ) y sus sales farmacéuticamente aceptables, son útiles para la inhibición del canal iónico TRPA1 en composiciones farmacéuticas así como herramientas de investigación.
Fórmula (la) Síntesis del Compuesto de Fórmula (I) y sus sales El compuesto de Fórmula (la) se puede obtener por procesos de síntesis multietapa que se muestra en la Figura 1A, como se describe en el Ejemplo 1A.
Fórmula (la) Brevemente, con referencia a la Figura 1A, el compuesto de Fórmula (la) se ^puede formar por: (1) reacción de (S)-2-metilpirrolidina 02 con 5-bromo-2-cloropirimidina 01 para formar el compuesto intermediario 03, (2) acoplamiento del compuesto 03 intermediario con el compuesto 05 (6-bromo-2-aminopiridina) por una o más reacciones para formar el compuesto intermediario 06, y (3) reacción del compuesto 06 con el compuesto 07 en una reacción de acoplamiento para formar el compuesto de Fórmula (la) . Si bien el acoplamiento del compuesto 03 intermediario con el compuesto 05 se puede realizar por medio del compuesto intermediario 04, como se muestra en la Figura 1A y se describe en el Ejemplo 1A, otros esquemas de reacción también son adecuados para la preparación del compuesto de Fórmula (la) . Como se describe en el Ejemplo 1A y la Figura 1A, el compuesto intermediario 06 se puede formar por la reacción del compuesto 03 con bis (pinacolato) diboro y otros materiales para formar el compuesto intermediario 04, seguido por la reacción del compuesto intermediario 04 con 6-bromo-2-aminopiridina (compuesto 05) para obtener el compuesto intermediario 06.
Cada una de las etapas de reacción se puede realizar con reactivos adecuados con condiciones de reacción adecuadas para obtener los productos indicados en la Figura 1A.
Opcionalmente , el proceso para sintetizar el compuesto de Fórmula (la) también puede incluir etapas para aislar los compuestos intermediarios 03 y el compuesto 06 antes de realizar las posteriores reacciones. Además, el compuesto de Fórmula (la) opcionalmente se puede convertir en una sal farmacéuticamente aceptable. En la Figura 1A, la conversión del compuesto de Fórmula (I) en una sal de HCl farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (la) se muestra de acuerdo con el Ejemplo 2.
El compuesto de la Fórmula (Ib) es un segundo estereoisómero de la Fórmula I.
Fórmula (Ib) El compuesto de la Fórmula (Ib) puede sintetizarse usando un procedimiento similar como se describió anteriormente para la elaboración del compuesto de la Fórmula (la) , sustituyendo el uso de (S) -2 -metilpirrolidina como un material iniciador en la síntesis del compuesto de la Fórmula (la) con (R) -2-metilpirrolidina (es decir, sub-estación del Compuesto 02 en la Figura 1A con (R) -2 -metilpirrolidina) . También puede prepararse un compuesto racémico de la Fórmula (I) , por ejemplo, usando una 2-metilpirrolidina racémica en lugar del Compuesto 02 en el esquema de reacción en la Figura 1A, o combinando un compuesto de la Fórmula (la) con un compuesto de la Fórmula (Ib) . Las composiciones de la Fórmula (I) que comprenden aproximadamente 95% de exceso enantiomérico del compuesto de la Fórmula (la) sobre la Fórmula (Ib) , pueden elaborarse seleccionando el material iniciador de (S) -2-metilpirrolidina con una pureza enantiomérica suficiente (es decir, mayor de 95%) . De manera similar, las composiciones de la fórmula (I) que comprenden aproximadamente 95% de exceso enantiomérico del compuesto de la Fórmula (Ib) sobre la Fórmula (la) , pueden elaborarse seleccionando el material iniciador de (R) -2-metilpirrolidina con una pureza enantiomérica suficiente (es decir, mayor de 95%) . Las composiciones de la Fórmula (I) que tienen cantidades deseadas de ambos estereoisómeros de la Fórmula (la) y la Fórmula (Ib) pueden elaborarse combinando cantidades predeterminadas de las composiciones de la Fórmula (la) con una pureza enantiomérica mayor de 95% con las composiciones de la Fórmula (Ib) con una pureza enantiomérica mayor de 95%, cada una elaborada con el material iniciador 2-metilpirrolidina con la estereoquímica correspondiente.
El término "exceso enantiomérico" un número de 0 a 100, siendo cero racémico y siendo 100 un enantiómero puro, simple. Un compuesto que en el pasado podría haber sido llamado 98% ópticamente puro, se describe en el presente de manera más precisa como 96% ee . ; en otras palabras, un 90% e.e. refleja la presencia de 95% de un enantiómero y 5% del otro en el material en cuestión. Un compuesto de la Fórmula (I) puede obtenerse como una sal farmacéuticamente aceptable.
El término, "sales farmacéuticamente aceptables" del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)), se refiere a las sales preparadas a partir de ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptable que incluyen ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos. Una forma de sal particularmente preferida del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la) ) es la sal clorhidrato descrita en el Ejemplo 2. En general, las sales farmacéuticamente aceptables de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la) ) se pueden preparar para mejorar las propiedades de estabilidad o toxicológicas del compuesto, aumentar o disminuir la solubilidad, humectabilidad, mejorar el desempeño farmacocinético del compuesto (por ejemplo, mediciones de Cmax o AUC) o mejorar las propiedades de conservación (por ejemplo, para reducir la higroscopicidad) de una composición farmacéutica.
Inhibición de TRPA1 con el compuesto de Fórmula (la) El compuesto de Fórmula (la) es un nuevo antagonista de molécula pequeña del canal de TRPA1 como se demuestra por las pruebas in vitro. El compuesto de Fórmula (la) y bloquea las corrientes de entrada a través de TRPA1 en rata, perro y ser humano con una IC50 de aproximadamente 100 nanomolar (Tabla 1, datos obtenidos de acuerdo con el Ejemplo 3) . El efecto antagonista del compuesto de Fórmula (la) contra hTRPAl en una configuración en parche de célula entera se evaluó de acuerdo con el método del Ejemplo 3.
Tabla 1 El compuesto de Fórmula (la) es altamente selectivo para hTRPAl en comparación con los canales de TRP y canales iónicos activados por voltaje. Por ejemplo, cuando se analizan contra ocho canales diferentes que representan la mayor parte de las familias de canal iónico (Tabla 2, Ejemplo 3) , ninguno de los canales analizados fue bloqueado o agonizado de modo reproducible por el compuesto de Fórmula (la) en concentraciones fisiológicamente relevantes (por ejemplo, 1, 3.2, 10 ó 32 micromolar) . Debido a que las concentraciones más altas usadas (32 micromolar) tuvieron poco efecto, no se puede determinar la real IC50 del compuesto de Fórmula (la) para la mayor parte de estos canales. Sin embargo, el compuesto de Fórmula (la) es al menos 100 veces selectivo para el bloqueo de TRPA1 respecto de todos los otros canales analizados (Tabla 2, Ejemplo 3) .
Tabla 2 El compuesto de Fórmula (la) es un nuevo antagonista de molécula pequeña del canal TRPAl humano como se demuestra por la prueba in vivo. Por ejemplo, el compuesto de Fórmula (la) fue activo en modelos de roedores de dolor in vivo inducido por el canal de TRPAl con la inyección de formalina.
La actividad in vivo del compuesto de Fórmula (la) se puede comparar con la actividad de los compuestos comparadores de Fórmula (II), Fórmula (III), y Fórmula (IV).
Fórmula (II) (Compuesto comparador) .
Fórmula (III) (Compuesto comparador) ; y Fórmula (IV) (Compuesto comparador) .
El compuesto de Fórmula (II) es un inhibidor de TRPA1 conocido (ver, por ejemplo, Patente U.S. No. 7.671.061) y en consecuencia se usó como un control positivo. El compuesto de Fórmula (II) y los métodos de preparación y uso de este compuesto se describen como el compuesto inhibidor de TRPA1 200 en la Patente U.S. No. 7.671.061 (presentada el 22 de diciembre de 2006, publicada el 2 de marzo de 2010) .
Fórmula (II) (Compuesto comparador) .
Los datos mostrados en las Tablas 3a, 3b, y 3c y la Figura 2 se obtuvieron por la administración de una composición farmacéutica que comprende el compuesto de Fórmula (la) a los roedores en la duración del dolor inducido por formalina a varias dosis de acuerdo con el Ejemplo 5. En forma específica, los datos de las Tablas 3a, 3b, y 3c y Figura 2 se obtuvieron por administración intraperitoneal (i.p.) de las composiciones que contienen diferentes concentraciones del compuesto de Fórmula (la) , una composición comparadora que contiene las cantidades mencionadas del compuesto comparador (por ejemplo, 150 mg/kg del compuesto comparador de Fórmula (II) en la Tabla 3a) y una composición control que contiene el vehículo (por ejemplo, sin el compuesto de Fórmula (la) o un compuesto comparador) . Como se muestra en las Tablas 3a, 3b, y 3c y la Figura 2, los animales tratados con los compuestos de las fórmulas (la) , (II) , y (III) mostraron duraciones más breves del comportamiento de dolor que los tratados con vehículo. Estos datos demuestran que el compuesto de Fórmula (la) tiene un efecto analgésico sobre el dolor causado por la activación de TRPA1 con formalina.
Tabla 3a Tabla 3b Tabla 3c El compuesto de Fórmula (la) también es activo en los modelos de roedores de dolor in vivo inducido por la alodinia por frío después de la inflamación crónica inducida por adyuvante de Freund completo, como se describe en el Ejemplo 6. Los datos presentados en la Tabla 4 y la Figura 3 demuestran aumento de las puntuaciones de latencia de retirada de la pata (PWL) observadas después de la administración i.p. de las composiciones farmacéuticas con concentraciones crecientes del compuesto de Fórmula (la) en el modelo de roedor de adyuvante de Freund completo (CFA) descrito en el Ejemplo 6. Estos datos se obtuvieron por la medición del cambio en la puntuación de PWL en función de la concentración del compuesto de Fórmula (la) , así como las puntuaciones de PWL observadas después de la administración de una composición que contiene el compuesto comparador de Fórmula (II) y un control con el vehículo que contiene un compuesto de sulfobutiléter ß-ciclodextrina compuesto (disponible con la marca Captisol® de CyDex Pharmaceuticals , Inc, Lenexa, KS) . Los datos muestran que el compuesto de Fórmula (la) tiene un efecto analgésico sobre alodinia por frío.
Tabla 4 El compuesto de Fórmula (la) también es activo en los modelos de roedores de dolor in vivo inducido por la incisión de la superficie plantar de la pata trasera (es decir, el "Modelo quirúrgico de Brennan" ) , como se describe en el Ejemplo 7. La Figura 4 muestra el cambio en la puntuación de protección en función de la concentración administrada del compuesto de Fórmula (la) , así como las puntuaciones de protección observadas después de la administración del vehículo solo y las composiciones farmacéuticas comparadoras que contienen el compuesto comparador de Fórmula (III), o ketoprofeno. Con referencia a la Figura 4 y el Ejemplo 7, 60 mg/kg del compuesto de Fórmula (la) administrado por vía intraperitoneal (2 dosis de 30 mg/kg antes e inmediatamente después de la cirugía) reduce el dolor espontáneo en el modelo de dolor por incisión en roedores descrito en el Ejemplo 7 durante hasta 4 horas después de la cirugía, mejor que el ketoprofeno (2 dosis de 2 mg/kg por vía intraperitoneal ) . Treinta (30) mg/kg del compuesto de Fórmula (la) administrado por vía intraperitoneal (2 dosis de 15 mg/kg antes e inmediatamente después de la cirugía) reduce el dolor espontáneo durante hasta 2 horas después de la cirugía (Figura 4) .
Un inhibidor de TRPA1 comparador de Fórmula (III) también se analizó en el modelo murino de Brennan del Ejemplo 7 (Figura 4) . El compuesto comparador de Fórmula (III) y los métodos de preparación y uso de este compuesto se describen como el Compuesto 1 inhibidor de TRPA1 en la solicitud de patente PCT PCT/US2009/069146 (publicado como WO2010/075353A1 el 1 de julio de 2010) .
(Fórmula (III)) (Compuesto comparador) Se midió la actividad de TRPA1 in vi tro de un compuesto comparador de Fórmula (IV) : Fórmula (IV) .
La estructura química del compuesto comparador de Fórmula (IV) se identificó usando resonancia magnética nuclear RMN. La muestra de RMN se preparó por la disolución de aproximadamente 1.85 mg del metabolito de Fórmula (la) en 50 uL del solvente de RMN. La muestra se sonicó en baño durante 1 min para asegurar la disolución apropiada antes de pipetear en el tubo de RMN. El tubo se selló con una bola de plástico y se conservó a temperatura ambiente antes de los experimentos. Los experimentos de RMN se realizaron en un espectrómetro de RMN 600 MHz Brunker Avance III equipado con una sonda de Cryo-TCI 1.7 nM. La muestra se insertó en el imán usando un accesorio SampleJet . A fin de obtener las conectividades completas para esta molécula, se registraron un espectro """H-RMN estándar, un espectro 1H-13C gHSQC con edición múltiple, y un espectro 1H-13 gHMBC (Figure 7) . El compuesto comparador de Fórmula (IV) tiene una IC50 de TrpAl de 9.8 µ?, y selectividad in vitro caracterizado por TrpV3 > 10 µ?, hERG > 20 µ?, NaVl , 2 > 20 µ? (Tabla 8). Estos datos se recolectaron usando el mismo procedimiento que el del Ejemplo 3.
Los compuestos descritos en la presente (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I) o Fórmula (la) ) se pueden usar en los ensayos para identificar los compuestos que inhiben TRPA1. Por ejemplo, un método de identificar un inhibidor de TRPA1 puede incluir las etapas de: poner un contacto un compuesto de ensayo con un canal iónico TRPAl, que mide la inhibición del canal iónico TRPAl por el compuesto de ensayo (por ejemplo, generar un primer valor de IC5o para el compuesto de ensayo) , que compara la medición de la inhibición del canal iónico TRPAl por el compuesto de ensayo con una segunda medición de un segundo canal iónico TRPAl después del contacto con el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, medir un segundo valor de IC50 para el compuesto de Fórmula (I) o Fórmula (la) ) , y determinar si el compuesto de ensayo es un inhibidor de TRPAl por comparación de la primera y segunda mediciones de la inhibición del canal iónico TRPAl. La inhibición del canal iónico TRPAl por el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, Fórmula (la)) (o compuestos de Fórmula (II), (III), o (IV) ) se puede usar como un comparador para el compuesto de ensayo. La medición de inhibición del canal iónico TRPAl se puede realizar por cualquier ensayo adecuado, que incluye el ensayo del Ejemplo 3 (por ejemplo, protocolo de pinzamiento zonal) . En una modalidad, un método para identificar un compuesto inhibidor del canal iónico TRPAl comprende poner en contacto una proteína de TRPAl en un ensayo basado en células, con un agente de ensayo para a analizar la actividad potencial como un inhibidor de TRPAl; determinar si el agente de ensayo aumenta o disminuye la actividad de la proteína de TRPAl; seleccionar el agente que disminuye la actividad de la proteína de TRPAl; determinar el grado de inhibición de TRPAl del agente que disminuye la actividad de la proteína de TRPAl; y comparar el grado de inhibición de TRPAl del agente que disminuye la actividad de la proteína de TRPAl con respecto al grado de inhibición de TRPAl observado por un agente de referencia, a través de lo cual una disminución del grado de inhibición de TRPAl del agente con respecto al grado de inhibición de TRPAl por el agente de referencia de este modo se identifica el agente de ensayo como un inhibidor de TRPAl. El agente de referencia puede ser (por ejemplo) una compuesto de Fórmula (la) , (II) , (III) , o (IV) .
El compuesto de la Fórmula (Ib) es un segundo estereoisómero de la Fórmula (I) .
Fórmula (Ib) El compuesto de la Fórmula (Ib) puede sintetizarse de acuerdo con el Ejemplo le, y como una sal farmacéuticamente aceptable. El compuesto de la Fórmula (Ib) es un antagonista de una nueva molécula pequeña del canal de TRPAl humano en la prueba in vitro. Se midió la actividad de TRPAl in vitro del compuesto de la Fórmula (Ib) mostrado a continuación, teniendo una IC50 contra hTRPAl entre 50 y 100 nM, como se proporciona en la siguiente Tabla 6.
Tabla 6 Además, IC50 para hTrpAl medido en RSA al 1% (albúmina de suero de rata) fue de 15.2 uM para el compuesto de la Fórmula (Ib), comparado con 5.3 uM para el compuesto de la Fórmula (la) .
Composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de Fórmula (I) El compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) o una sal farmacéuticamente aceptable de este se puede usar en la fabricación de composiciones farmacéuticas. Las Composiciones farmacéuticas se puede formar por la combinación del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) , o una sal farmacéuticamente aceptable de este. La composición farmacéutica se puede formular con un portador farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración a un sujeto receptor (por ejemplo, un ser humano) de acuerdo con un método deseado de la administración del fármaco. Las composiciones farmacéuticas, particularmente las formuladas para administración ora, con preferencia comprenden el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) , o una sal del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) , en una cantidad suficiente para obtener el fin deseado (por ejemplo, el tratamiento o prevención del dolor u otras afecciones que responden a la inhibición o antagonismo del canal iónico TRPA1) y uno o más portadores adicionales tales como agentes de solubilización (por ejemplo, ciclodextrina y/o derivados de ciclodextrina), agentes amortiguadores, conservadores y similares (ver, por ejemplo, Ejemplo 10) . La cantidad y concentración del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) en la composición farmacéutica, así como la cantidad de la composición farmacéutica administrada a un sujeto, se puede seleccionar sobre la base factores clínicamente relevantes, tales como características médicamente relevantes del sujeto (por ejemplo, edad, peso, género, otras afecciones médicas, y similares) , la solubilidad del compuesto en la composición farmacéutica, la potencia y actividad del compuesto, y la manera de administración de la composición farmacéutica. Por ejemplo, una composición farmacéutica se puede formular para la administración oral del compuesto de Fórmula (I) disuelto en una cantidad clínicamente tolerada de una hidroxipropil-beta-ciclodextrina (por ejemplo, Fórmula (la) como se muestra en el Ejemplo 10) .
Las composiciones farmacéuticas se pueden formular para una vía de administración adecuada para proporcionar al paciente una dosis efectiva de un compuesto de la presente invención. Por ejemplo, se puede emplear administración oral. Las formas de dosis incluyen comprimidos, pastillas, dispersiones, suspensiones, soluciones, cápsulas, parches, y similares. La formulación más adecuada de una composición que contiene el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) en cualquier caso dado puede depender de la gravedad de la afección que se está tratando. Las composiciones se pueden presentar de modo conveniente en una forma de dosis unitaria y preparar por alguno de los métodos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Los compuestos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) también se puede administrar por medios de liberación controlada y/o dispositivos de administración.
Las preparaciones farmacéuticas se pueden preparar de acuerdo con procedimientos estándares seleccionados para tratar una afección que se alivia, elimina, previene o trata de otro modo por la administración de un compuesto para inhibir el canal iónico TRPA1 (ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA and Goodman, y Gilman's "The Pharmaceutical Basis of Therapeutics , " Pergamon Press, New York, NY, cuyos contenidos se incorporan en la presente por referencia, para una descripción general de los métodos para administrar varios agentes terapéuticos para la terapia humana) . Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas se pueden formular para una vía de administración deseada, tal como administración oral. En particular, un medicamento que comprende un compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) se puede formular para la administración oral del tratamiento terapéutico de afecciones médicas, tales como dolor crónico o agudo .
En la preparación de las composiciones en formas de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos usuales como portadores, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes , conservantes, agentes colorantes, y similares en el caso de preparaciones líquidas orales (tales como suspensiones, soluciones y elixires) o aerosoles; o se pueden usar portadores tales como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes, y similares en el caso de preparaciones sólidas orales tales como, por ejemplo, polvos, cápsulas, y comprimidos, se prefieren las preparaciones orales sólidas respecto de las preparaciones líquidas. Un ejemplo de portador es una ciclodextrina, por ejemplo el compuesto de sulfobutiléter ß-ciclodextrina disponible con la marca Captisol® (CyDex Pharmaceuticals , Inc, Lenexa, KS) . Un ejemplo de una preparación oral sólida es comprimidos o cápsulas que contienen el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) . Si se desea, los comprimidos se pueden recubrir mediante técnicas acuosas o no acuosas estándares.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se puede esterilizar, por ejemplo, por filtración a través de un filtro retenedor de bacterias, o por la incorporación de agentes esterilizantes en la forma de composiciones sólidas estériles, que se pueden disolver o dispersar en agua estéril u otro medio estéril inyectable inmediatamente antes de usar.
Un compuesto de la Fórmula (I) descrito en la presente, puede administrarse por inhalación. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la Fórmula (I) puede proporcionarse en un repartidor en aerosol de dosis medida, que contiene una composición farmacéutica en aerosol para la liberación pulmonar o nasal, que comprende un agente que inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una IC50 de 1 micromolar o menos. Por ejemplo, puede ser un inhalador de dosis medida, un inhalador de polvo seco o un nebulizador de chorro de aire.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula (I) también pueden mezclarse con vehículos no tóxicos farmacéuticamente aceptables sólidos o líquidos, diluyentes y adyuvantes, incluyendo tensioactivos apropiados, para preparar la composición para usar y para ayudar a la administración al paciente por inhalación. Tales vehículos farmacéuticos puede ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético. El agua es un vehículo preferido. Las soluciones salinas también pueden emplearse como vehículo líquidos. Por ejemplo, una cantidad de dosis apropiada de un compuesto de la Fórmula (I) puede disolverse en solución salina a una concentración deseada, para formar una composición farmacéutica apropiada para la administración por la ruta de inhalación. Pueden emplearse tensioactivos, por ejemplo, tales como ésteres de ácido graso de polioxietileno, ésteres de ácidos grasos de polioxietilensorbitán o ésteres de glicerilo. Otros vehículos farmacéuticos apropiados se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences por E. W. Martin. Se prefiere un pH en el intervalo de aproximadamente 4.5 a 5.5. El pH puede ajustarse con un amortiguador farmacéuticamente aceptable convencional .
La composición farmacéutica inhalada que comprende un compuesto de la fórmula (I) puede administrarse al paciente por medio de un sistema de liberación farmacéutico para la ruta de inhalación. El sistema de liberación farmacéutico es una que es apropiado para la terapia respiratoria por administración tópica de la imidazolina a los recubrimientos de la mucosa del árbol traqueobronquial . Por ejemplo, esta invención puede usar un sistema que depende de la potencia de un gas comprimido a expeler la imidazolina de un recipiente. Ver Sciarra et al. Theory and Practice of Industrial Pharmacy, 1976: 270-295, que se dependen y se incorporan en la presente por referencia. Puede emplearse para este propósito un aerosol o empaque presurizado.
Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la Fórmula (I) también pueden llevarse a cabo con un nebulizador, el cual es un instrumento que genera partículas líquidas muy finas de tamaño sustancialmente uniforme en un gas. De preferencia, un líquido que contiene la imidazolina se dispersa como gotas de aproximadamente 5 mm de diámetro o menos, en la forma de una niebla. Las pequeñas gotas pueden transportarse por una corriente de aire u oxígeno a través de un tubo de entrada del nebulizador. La niebla resultante penetra en el tracto respiratorio del paciente.
Una composición en polvo que contiene un compuesto de la Fórmula (I) , con o sin un lubricante, vehículo o propulsor, pueden administrarse a un paciente en necesidad de la terapia. Esta modalidad puede llevarse a cabo con un dispositivo convencional para administrar una composición farmacéutica en polvo por inhalación.
Administración de composiciones que comprenden el compuesto de Fórmula (I) Las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) o sales farmacéuticamente aceptables de este se pueden usar para tratar o mejorar afecciones médicas que responden a la inhibición del canal iónico TRPA1 en los sujetos (por ejemplo, seres humanos y animales). Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)), o una sal farmacéuticamente aceptable de este, son útiles como analgésico perioperatorio, por ejemplo en el tratamiento del dolor agudo postoperatorio leve a moderado y el tratamiento del dolor agudo moderado a grave como un adyuvante a los analgésicos opioides . Por ejemplo, un compuesto de la fórmula (la) puede usarse en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor. Opcionalmente, el medicamento también puede incluir o ser indicado para el uso en combinación con un segundo compuesto seleccionado del grupo que consiste opioides, agentes anti-inflamatorios no esteroides, antagonistas peptídicos relacionados con el gen de calcitonina (CGRP, por sus siglas en inglés) y esteroides.
Los compuestos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) también se puede usar en combinación con la administración de tratamiento del dolor agudo grave como un adyuvante a los analgésicos. Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) , o una sal farmacéuticamente aceptable de este, son útiles como analgésico perioperatorio, dado en combinación con un analgésico opioide, por ejemplo, en el tratamiento del dolor agudo postoperatorio leve a moderado y el tratamiento del dolor agudo moderado a grave como un adyuvante a los analgésicos opioides.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden una dosis terapéuticamente efectiva del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se puede administrar a un paciente para el tratamiento de dolor de una manera clínicamente segura y efectiva, que incluye una o más administraciones separadas de las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)). Por ejemplo, una composición farmacéutica, cuando se administra a un sujeto, produce un nivel de alanina aminotransferasa (ALT) y/o aspartato aminotransferasa (AST) menor de aproximadamente 250 mg/dL (por ejemplo, aproximadamente 200 mg/dL, 150 mg/dL, 100 mg/dL o 50 mg/dL) tres después de la administración.
La cantidad de ingredientes activos que se pueden combinar con un material portador para producir una forma de dosis única variará de acuerdo con el huésped tratado, el modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una forma de dosis única generalmente será esta cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. Generalmente, en un cien por ciento, esta cantidad variará de aproximadamente 1 por ciento a aproximadamente cincuenta por ciento de ingrediente activo. En una modalidad, esta cantidad es 1.6% (peso en peso) . En otra modalidad, esta cantidad es 40% (peso en volumen) . Las composiciones farmacéuticas pueden contener, por ejemplo, 1 a 50% de un compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.
Las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) o sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden usar para tratar o mejorar el dolor. Los métodos de tratar las condiciones médicas que responden a la inhibición del canal iónico TRPA1 en los sujetos (por ejemplo, seres humanos y animales) pueden incluir la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. El dolor puede ser crónico o agudo. Los métodos de tratamiento pueden incluir administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables en una o más dosis durante un curso de tratamiento. Las composiciones farmacéuticas que comprende una dosis terapéuticamente efectiva del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se pueden administrar a un paciente para el tratamiento del dolor de una manera clínicamente segura y efectiva, que incluye una o más administraciones separadas de las composiciones farmacéuticas que comprenden uno o más compuestos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) . Por ejemplo, una composición farmacéutica, cuando se administra a un sujeto, produce un nivel de ALT y/o AST menor de aproximadamente 250 mg/dL (por ejemplo, aproximadamente 200 mg/dL, 150 mg/dL, 100 mg/dL o 50 mg/dL) tres días después de la administración.
De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento o mejora del dolor o proporción de analgesia.
De acuerdo con un aspecto adicional, la invención proporciona el compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, como un medicamento.
En un ejemplo, el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se puede administrar por vía oral a un sujeto humano. La dosis diaria total de un compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) pude ser aproximadamente 0.1 mg/kg/día a aproximadamente 100 mg/kg/día del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se administra por vía oral una a cuatro veces por día (por ejemplo, QD, BID, TID, o QID) (por ejemplo, 0.1 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día) . La dosis diaria total administrada a un ser humano también puede ser de aproximadamente 1 mg/kg/día a aproximadamente 25 mg/kg/día, o aproximadamente 3 mg/kg/día a aproximadamente 10 mg/kg/día. La cantidad por dosis administrada o la cantidad total administrada dependerán de factores tales como naturaleza y gravedad del dolor, la edad y salud general del paciente y la tolerancia del paciente al compuesto .
Un producto f rmacológico que comprende el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) se puede preparar por un proceso de formulación adecuada, por ejemplo, granulación húmeda (ver Remmington Pharmaceutical Sciences) . La composición farmacéutica puede ser una dosis unitaria en una forma para facilitar la deglución (por ejemplo, una cápsula de tamaño 0 o 00) . La dosis unitaria puede tener una cantidad de la composición farmacéutica que varía de 100 a 800 mg en una cápsula de tamaño "00" o tamaño de cápsula equivalente. Si se obtienen 500 mg de dosis activa/unitaria luego el desarrollo se dirigirá a la dosis alcanzable más alta.
Por ejemplo, una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables se puede administrar (por ejemplo, en forma oral) a un sujeto que lo necesita múltiples veces por día (por ejemplo, BID) durante un período de tratamiento de uno o más días para tratar el dolor en el paciente.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de la fórmula (la), un compuesto de la fórmula (Ib) y/o una combinación de los compuestos de la fórmula (la) y (Ib)) son útiles para la administración para el tratamiento de afecciones respiratorias, tales como enfermedades obstructivas, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD, por sus siglas en inglés) , asma (por ejemplo, asma inducida por el frío, asma inducida por el ejercicio, asma inducida por alergias y asma ocupacional) y tos .
Un método para el tratamiento o mejoramiento del asma en un animal o un humano, que comprende administrar al animal o humano, una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (la), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, por inhalación. En un ejemplo de este método, el compuesto de la fórmula (la) está en la forma de una sal de clorhidrato. El asma puede ser asma alérgica. La composición farmacéutica puede administrarse como un aerosol. La composición farmacéutica se administra usando un nebulizador médico. El compuesto de la fórmula (la) puede administrarse en la forma de una sal de clorhidrato. La composición farmacéutica puede administrarse a una dosis de aproximadamente 0.5-25 mg/kg.
EJEMPLOS Ciertos ejemplos siguientes ilustran la síntesis del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la)) y una de sus sales farmacéuticamente aceptables. Además, la descripción incluye las variaciones de los métodos descritos en la presente para producir los compuestos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) que puede entendido considerado por los expertos en la técnica sobre la base de la presente descripción .
Ejemplo 1A: Síntesis del compuesto de Fórmula (la) Etapa 1: ,µa Un matraz de fondo redondo de 1 litro, seco, cargado con (5) -2-metilpirrolidina (compuesto 02) (44.2 mi, 465 mmol) se enfrió a 0 °C. El Compuesto 01 (60 g, 310 mmol) se añadió al compuesto de amina enfriado 02 durante 2 minutes (se observa la exoterma extrema) . Después de completar la adición, los reactivos se calentaron a temperatura ambiente y continuaron agitando durante 1 hora. Se continuó con espectrometría de masa y cromatografía líquida (LCMS, por sus siglas en inglés) y cromatografía líquida de ultra-rendimiento (UPLC, por sus siglas en inglés) .
Los sólidos anaranjados resultantes se disolvieron en (9:1 DCM : MeOH, 200 mi), se lavó con 150 mi de bicarbonato de sodio saturado y agua (3x 100 mi) . Las fases acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con (9:1 DCM: MeOH) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en MgS04 , y se concentraron en sílice. La columna se purificó usando una columna de 400 g de sílice con el sistema solvente (Hex:EtOAc) (0% 4CV; 0-30% 6CV; 30% 6CV) . El producto eluyó entre 20-30% EtOAc . Las fracciones que contienen el producto se combinaron y secaron al vacío, el aceite transparente resultante se trató con hexanos, se agitó y luego se evaporó. Se observó la formación de un cristal fino. La formación de cristal fino se dejó estacionar a 0°C para ayudar a los sólidos cristalinos blancos del compuesto 03. compuesto 03 de la Etapa 1, Ejempl R Reennddiimmiieennttoo AAiissllaaddoo:: 6677..22 gg ((8899%%)) ccoommoo ssóólliiddooss ccrriissttaalliinnooss bbllaannccooss,, ((mm//zz MM++ == 224411));; XXHH RRMMNN ((330000 MMHHzz ,, DDMMSSOO)) dd 99..0011 ((ss,, 11HH)) ,, 88..4422 ((ss,, 22HH)) ,, 44..2200 -- 44..0066 ((mm,, 11HH)) ,, 33..5566 -- 33..3344 ((mm,, 22HH)) ,, 22..1122 -- 11..8811 ((mm,, 33HH)) ,, 11..6688 ((ss,, 11HH)) ,, 11..1166 ((dd,, JJ == 66..33 HHzz,, 33HH)) ..
E Ettaappaa 22:: Un matraz de fondo redondo de tres bocas de 2 litros se cargó con el compuesto 03 (45 g, 186 mmol) , bis (pinacolato) diboro (65.2 g, 257 mmol), cloruro de bis (trifenilfosfino) paladio (13.05 g, 18.59 mmol), acetato de potasio (36.5 g, 372 mmol) y se suspendió en 1,4-dioxano anhidro (Volumen: 929 mi) . El matraz se lavó con nitrógeno y los sólidos se colocaron en un condensador de reflujo y se calentaron a 90 °C durante la noche.
Se extrajo 1,4-dioxano in vacuo. El material bruto se disolvió en DCM (200 mi) y se lavó con agua (3 x 100 mi) . Las fases acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con EtOAc . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en MgS04, y se concentraron sobre sílice. El material se dividió en dos lotes y se purificó en columna usando 200 g de columna de sílice con el sistema solvente Hex: EtOAc (0% CV; 3% 8CV; 5-20% 10CV; 20-50% 5CV) . El material de partida eluyó con 3% de EtOAc mientras que el producto deseado eluyó entre 5-40% de EtOAc. Las fracciones que contienen producto se combinaron y se extrajo el solvente in vacuo para proporcionar el compuesto 04. compuesto 04 en la Etapa 2, Ejempl Rendimiento aislado: 23.0 g (42%) como sólidos blancuzcos. [ (m/z = M+ 289.20 (ácido borónico se observa a m/z 207.12)); XH RMN (300 MHz , DMSO) d 8.45 (s, 2H) , 4.31 - 4.17 (m, 1H) , 3.62 - 3.38 (m, 2H) , 2.12 - 1.81 (m, 3H) , 1.73 -1.61 (m, 1H) , 1.27 (s, 12H) , 1.17 (d, J = 6.3 Hz, 3H) .
Etapa 3 : Un matraz de fondo redondo de 1 litro se cargó con el compuesto 05 (15.14 g, 87 mmol), compuesto 04 (23.00 g, 80 mmol), se purgó con nitrógeno, y siguió con una adición de Pd(PPh3) (9.19 g, 7.95 mmol). Los sólidos se suspendieron en una mezcla de 1,4-dioxano anhidro (398 mi) y carbonato de sodio 2 M acuoso (119 mi, 239 mmol) . La reacción se calentó a 95°C durante 13 horas.
Las fases orgánicas separaron de las sales por la transferencia de la fase líquida al matraz de fondo redondo de 2 litros. Las sales se lavaron con 1,4-dioxano y se combinaron con solución de 1,4-dioxano previamente separado. Se extrajo 1,4-dioxano al vacío. El residuo bruto amarillo se disolvió en DCM y se lavó con agua (3 x 100 mi), salmuera, y se secó con MgS04 luego se concentró en sílice. La columna se purificó usando una columna de 200 g de sílice con el sistema de solventes DCM : EtOAc (0% 20CV; 20% 10 CV; 50-80% 10CV; 80% 5CV) . El producto deseado eluyó entre 50- 80% EtOAc . Las fracciones que contienen el producto se concentraron para aislar el compuesto 06.
Para el compuesto 06 de la Etapa 3, Ejemplo 1: Rendimiento aislado: 13.7 g (67%) como sólidos amarillo claro, (m/z = M+ = 255.15); XH R N (300 MHz, DMSO) d 8.88 (s, 2H) , 7.40 (t, J = 7.8 Hz , 1H) , 6.95 (d, J = 7.1 Hz , 1H) , 6.35 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 5.96 (s, 2H) , 4.31 - 4.19 (m, 1H) , 3.66 - 3.41 (m, 2H) , 2.13 - 1.84 (m, 3H) , 1.75 -1.65 (m, 1H) , 1.22 (d, J = 6.3 Hz , 3H) .
Etapa 4 : Un matraz de fondo redondo de 200 mi seco se cargó con el compuesto 07 (12.17 g, 51.1 mmol), compuesto 06 (13.7 g, 53.7 mmol), EDC (19.59 g, 102 mmol) se lavó con nitrógeno seguido por la adición de piridina anhidra (128 mi) (no se observó exoterma) . La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 1 h.
La mezcla de reacción se diluyó con 100 mi de agua. Se observó una precipitación blancuzca. La suspensión se transfirió a un matraz de 500 mi cargado con barra agitadora y se diluyó con 150 mi HC1 0.1 M mientras se agita. El precipitado se tornó de color rojo, formando un sólido amorfo. La formulación acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 100 mi) . La fase orgánica se lavó con HCl 0.1 M (3 x 50 mi) , agua, salmuera, y se secó en MgS04 luego se concentró sobre sílice. La columna se purificó usando el sistema de solventes DCM :MeOH (0% 5CV; 0-3% 10CV; 3-4% 4CV; 4% 10CV) . El producto eluyó entre 3-4% de MeOH. Las fracciones apropiadas se mezclaron, y los solventes se extrajeron in vacuo, y se colocó en alto vacío para proporcionar el compuesto de Fórmula (la) .
Para el compuesto de Fórmula (la) de la Etapa 4, Ejemplo 1: Rendimiento aislado: 20.7 g (85%) como sólidos blancuzcos. El compuesto Fórmula (I) (m/z = M+ = 475), XK RMN (300 MHz, DMSO) d 10.95 (s, 1H) , 9.01 (s, 2H) , 8.09 (s, 1H) , 7.82 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 5.32 (s, 2H) , 4.33 -4.23 (m, 1H) , 3.71 - 3.49 (m, 2H) , 3.47 (s, 3H) , 3.20 (s, 2H) , 2.18 - 1.84 (m, 3H) , 1.70 (m, 1H) , 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H) .
Ejemplo IB: Síntesis del Compuesto de Fórmula (la) deuterado Un compuesto deuterado (12) se preparó como se describe en la Figura IB. El Compuesto 10 se preparó a partir de un material de partida comercial de compuesto 08 de acuerdo con el siguiente procedimiento: Teofilina-d6 (0.480 g, 2.58 mmol) y carbonato de potasio (0.392 g, 2.84 mmol), se suspendieron en DMF (12.89 mi), seguido por la adición de 2-cloroacetato de etilo (0.275 mi, 2.58 mmol) y se calentó a 90 °C durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó en 15 mi de solución de agua agitada a temperatura ambiente. A la solución acuosa, se añadió hidróxido de litio (0.123 g, 5.16 mmol) en 10 mi agua y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 1 hora. La solución se tituló a pH 4 con HCl ac . 5 M. Los sólidos blancos resultantes se recolectaron por medio de filtración al vacío para proporcionar el compuesto 10 (0.510 g, 81%) ESI- S (EI+, m/z) : 244.11.
El compuesto deuterado 12 se sintetizó de la misma manera que la Fórmula (la) usando el compuesto 06 (0.150 g, 0.609 mmol) , y compuesto 10 (0.163 g, 0.640 mmol). Los sólidos brutos resultantes se recolectaron por medio de filtración al vacío. La columna se purificó por cromatografía en gel de sílice para proporcionar el compuesto deuterado 12 (0.135 g, 46%) ESI-MS (EI+ , m/z): 481.25. H RMN (300 MHz, DMSO) d 10.95 (s, 1H) , 9.01 (s, 2H) , 8.08 (s, 1H) , 7.82 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 5.76 (s, 1H) , 5.32 (s, 2H) , 4.29 (s, 1H) , 3.69 - 3.56 (m, 1H) , 3.53 (s, 1H) , 2.13 - 1.85 (m, 3H) , 1.71 (d, J = 2.3 Hz, 1H) , 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H) .
Además del compuesto 12, los compuestos descritos en la presente también incluyen isótopos del compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) . Por ejemplo, los isótopos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) se puede formar como moléculas formadas por la sustitución de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen el compuesto de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) . Por ejemplo, los isótopos de Fórmula (I) se pueden radiomarcar con isótopos radiactivos.
Los isótopos de Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) incluyen compuestos formados por la sustitución de hidrógeno en la Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) con deuterio (2H) , o tritio (3H) , o sustitución de uno o más átomos de carbono de la Fórmula (I) (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) con carbono-13 (13C) o carbono-14 (14C) . Los isótopos de Fórmula (I) preferidos (por ejemplo, un compuesto de Fórmula (la) ) inhiben el TRPA1 en seres humanos o animales. Todas las variaciones isotópicas de los compuestos descritos en la presente, sean radiactivos o no, se consideran abarcados dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, los compuestos deuterados o compuestos que contienen 13C se consideran comprendidos dentro del alcance de la invención.
Ejemplo 1C: Síntesis del compuesto de Fórmula (Ib) (el enantiómero de Fórmula (la) ) Fórmula (Ib) El compuesto de Fórmula (Ib) (enantiómero de Fórmula la) se sintetizó usando un procedimiento idéntico que se describió anteriormente, con la diferencia de usar (R) -2-metilpirrolidina como un material de partida de la etapa 1 en vez de (S) -2-metilpirrolidina (Compuesto 02 en la Figura 1A) . El rendimiento en la última etapa es 92%, como un polvo blanco. ?? RMN (300 MHz , DMSO-d6) d 10.95 (s, 1H) , 9.01 (s, 2H) , 8.09 (s, 1H) , 7.82 (t, J = 7.7 Hz, 2H) , 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 5.32 (s, 2H) , 4.47 - 4.13 (m, 1H) , 3.72 - 3.58 (m, 2H) , 3.27 (s, 3H) , 3.20 (s, 3H) , 2.17 - 1.86 (m, 3H) , 1.71 (s, 1H) , 1.24 (d, J = 6.3 Hz , 3H) . LCMS (m/z = M+H = 476).
La IC50 para hTrpAl medida en 1% de RSA fue 15.2 uM para la fórmula (Ib), en comparación con 5.3 uM para el compuesto de Fórmula (la) .
Ejemplo 2: Formación de la sal HCl de un Compuesto de Fórmula (la) HCl 1 M en EtOH: Un matraz de fondo redondo de 500 mi se cargó con barra agitadora y 185 mi 200 de EtOH de prueba a 0 °C. Luego se añadió cloruro de acetilo (14.20 mi, 200 mmol) y se agitó a 0 °C durante cinco minutos, luego a temperatura ambiente durante 10 minutos.
Precipitación de sal HCl: Un matraz de fondo redondo de 1 litro se cargó con el compuesto de Fórmula (I) seco (20.5 g, 43.1 mmol) y se añadieron 200 mi de HCl 1 M en EtOH (recién preparado) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La suspensión pasó de un amarillo transparente principalmente homogéneo a una suspensión sólida blanca en solvente amarillo claro. Después de 1 hora, los sólidos se recolectaron por medio de filtración al vacío con la ayuda de EtOH, luego se lavaron con EtOH (3 x 100 mi) y se colocaron en alto vacío durante la noche. Después de 18 horas, el material se extrajo del alto vacío y se transfirió a frasco ámbar .
Para el ejemplo 2, Rendimiento aislado de la sal de HC1 : 22.6 g (> 100%) como un sólido blancuzco. (I) sal (m/z = M+ = 475), XH RMN (300 MHz , DMSO) d 10.95 (s, 1H) , 9.01 (s, 2H) , 8.09 (s, 1H) , 7.82 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 5.32 (s, 2H) , 4.33 - 4.23 (m, 1H) , 3.71 - 3.49 (m, 2H) , 3.47 (s, 3H) , 3.20 (s, 2H) , 2.18 - 1.84 (m, 3H) , 1.70 (m, 1H) , 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H) . Análisis elemental: C, 50.54 (cal. 53.96); H, 5.34 (cal. 5.12); Cl , 6.34 (cal. 6.92); N, 22.69 (cal. 24.62); 0, 9.38.
Ejemplo 3: Medición de la inhibición de TRPA1 in vi tro La inhibición de TRPA1 in vi tro del compuesto de Fórmula (la) se analizó usando el procedimiento descrito en del Camino et al., J. Neurosci., 30 (45) : 15165-15174 , incorporado en la presente por referencia y descrito a continuación. Los datos para la inhibición de TRPA1 y la selectividad de la inhibición de TRPA1 se obtuvieron por este método para el compuesto de Fórmula (la) y se incluyeron en la Tabla 1 y Tabla 2. Todas las corrientes se registraron en configuración de célula entera usando amplificadores EPC-9 y EPC-10 y programa de computación Patchmaster (HEKA) . Las pipetas del parche presentaron una resistencia de 1.5-3 ?O y se compensó 60-75% de la resistencia en serie. La solución de pipeta estándar consistía en 140 mM de CsAsp, 10 mM de EGTA, 10 mM de HEPES, 2.27 mM de MgCl2, 1.91 mM de CaCl2, 4 mM de MgATP, y 0.1-0.3 mM de Na2GTP, con pH ajustado a 7.2 con CsOH. Además, se puede usar una solución que contiene 145 mM de CsCl, 10 mM de HEPES, 10 mM de EGTA y 1 mM de MgCl2 (pH 7.2 ajustado con CsOH) La solución del baño estándar contenía 150 mM de NaCl, 10 mM de HEPES, 10 mM de glucosa, 4.5 mM de KC1 , 1 mM de EGTA, 3 mM de MgCl2, con pH ajustado a 7.4 con NaOH. En algunos casos, se añadió 2 mM de CaCl2 en lugar de EGTA y la concentración de MgCl2 se redujo a 1 mM.
Los datos se recolectaron por registros continuos a -60 mV o por aplicación de rampas de voltaje desde un potencial basal de 0 mV cada 4 s. Se recolectaron registros continuos a 400 Hz y se filtraron en forma digital fuera de línea a 10 Hz para la presentación. Las rampas de voltaje se aplicaron desde -100 mV a 100 mV durante el período de 400 ms, y se recolectaron los datos a 10 kHz y se filtraron a 2.9 kHz. Las corrientes de entrada y salida se analizaron a partir de las rampas a -80 y 80 mV, respectivamente. No se usó una corrección del potencial de unión líquida.
Las soluciones se cambiaron usando un sistema de perfusión focal continua alimentado por gravedad. Para obtener cambios de temperatura rápidos, se emplearon dos sistemas de control de temperatura y perfusión en forma simultánea. Para las temperaturas = 22 °C, se usaron un controlador de temperatura bipolar Warner Instruments (TC-344B) y calentador en línea (SHM-8) . Para las temperaturas menores de 22 °C se usaron un controlador de temperatura Warner (CL-100) y un módulo de enfriamiento térmico (TCM-1) . Las temperaturas se confirmaron usando un termistor (Warner Instruments, TA-29) , con temperaturas en la celda registrada estimados dentro +/- 2°C de los informados.
Se estimó la IC50 de los compuestos por el análisis de cada compuesto a 5 micromolar y 500 nanomolar. Cuando el compuesto 5 micromolar no mostró bloqueo, IC50 se estimó como > 10 micromolar. Cuando el compuesto 5 micromolar mostró 50% o menos de bloqueo, se puede realizar una estimación aproximada de la IC50 en el rango de 5-10 micromolar. La IC50 para los compuestos entre 500 nanomolar y 5 micromolar se estimó de modo similar. Los compuestos que bloquean 50% o más a 500 nanomolar se analizan de nuevo a concentraciones múltiples, y el % de bloqueo en cada uno se ajusta mediante ecuaciones estándares para determinar la IC50 con exactitud usando un experimento de concentración/respuesta de 5-6 puntos .
Ejemplo 4: Evaluación de la eficacia in vivo de los Compuestos inhibidores de TRPA1 Se evaluó la actividad del compuesto de Fórmula (la) in vivo. En algunos ejemplos, los Compuestos inhibidores de TRPAl comparadores de Fórmula (II) o Fórmula (III) también se evaluaron como se describe en los siguientes ejemplos.
El compuesto comparador de Fórmula (II) y los métodos de preparar y usar este compuesto se describe como el Compuesto inhibidor de TRPAl 200 en la Patente U.S. No. 7.671.061 (presentada el 22 de diciembre de 2006, expedida el 2 de marzo de 2010) y se incorporan en la presente por referencia en su totalidad.
El compuesto comparador de Fórmula (III) y los métodos de preparar y usar este compuesto se describen en la Figura 1C y se describen como el Compuesto inhibidor de TRPAl de Fórmula (I) en la solicitud de patente PCT PCT/US2009/069146 (publicada como WO2010/075353A1 el 1 de julio de 2010) y se incorporan en la presente por referencia en su totalidad.
Se evaluaron la potencia y propiedades farmacocinéticas (PK) de (a) el compuesto de Fórmula (la) ; y (b) compuesto comparador de Fórmula (III) . También se midió la biodisponibilidad. Se realizó un estudio farmacocinético para un gráfico de concentración del fármaco en plasma versus tiempo para el fármaco después de la administración tanto intravenosa (IV) como oral (PO) . La biodisponibilidad absoluta es el área bajo la curva corregida por la dosis (AUC) no intravenosa dividida por la AUC intravenosa. La fórmula para calcular F para un fármaco administrado por la vía oral (PO) se da a continuación.
La biodisponibilidad se calculó mediante la ecuación que se muestra a continuación: %F = AUC PO x Dosis IV / AUC IV x Dosis PO Unión a la proteína de plasma humano La cantidad de compuesto en el amortiguador (fracción libre) y la cantidad de compuesto asociada con la fracción en plasma se determina por diálisis en equilibrio; la cantidad de compuesto unido se expresa como porcentaje. (Banker et al., Journal of Pharmaceutical Sciences (2003) 92(5): 967-74) .
En la Tabla 6, una "A" indica una IC50 de menos de 25 nanomolar; una "B" indica una IC50 de 25 nanomolar a menos de 50 nanomolar; una "C" indica una IC50 de 50 nanomolar a menos de 100 nanomolar; una "D" indica una IC50 de 100 nanomolar o mayor.
Mientras que el compuesto de la Fórmula (III) fue más potente in vitro, el compuesto de la Fórmula (la) tiene propiedades in vivo que lo hacen ventajoso sobre el compuesto de la Fórmula (III) . Se observó una unión proteínica mayor para el compuesto de la fórmula (III) que el compuesto de la fórmula (la) . La IC50 para el compuesto de Fórmula (la) , cuando se analizó contra hTRPAl , fue entre 50 y 100 nanomolar. El compuesto de Fórmula (la) fue menor de 99% unido a proteína y la biodisponibilidad para las ratas alimentadas fue mayor de 50%. La IC50 para el compuesto de Fórmula (III) , cuando se analizó contra hTRPAl , fue entre 50 y 100 nanomolar. El compuesto de Fórmula (III) fue mayor de 99% unido a proteína y la biodisponibilidad para las ratas alimentadas fue entre 1 y 25%.
Tabla 6 Como se muestra en la Tabla 6 anterior, el compuesto de Fórmula (la) demuestra menos de un efecto alimentado/ayunas. Los compuestos con efectos efecto alimentado/ayunas reducidos en los seres humanos pueden llevar al aumento del cumplimiento del paciente. Además, el compuesto de Fórmula (la) está menos unido a proteína que el compuesto de Fórmula (III) . Como consecuencia, más del compuesto está disponible para los tejidos blanco después de la administración.
Ejemplo 5: Comportamiento de dolor inducido por formalina in vivo en modelo de roedores El compuesto de Fórmula (la) y el compuesto comparador de Fórmula (II) se analizaron en la prueba de dolor inducido por formalina informada por Dubuisson et al., Pain 1977 Dec; 4(2):161-74 (incorporada en la presente por referencia en su totalidad). Dubuisson et al. (1977) describen un método para evaluar dolor y analgesia en ratas y gatos. En breves palabras, se inyecta formalina diluida (50 il¡ de formalina 3%) en la superficie plantar de la pata trasera. El animal retorna rápidamente a una pista de observación (jaula de rata de plexiglás estándar) , en este momento un observador entrenado registra el tiempo que el animal pasa mostrando comportamientos de dolor (sacudidas, lamido, mordida de la pata/pierna inyectada) durante un período de 5 minutos. El individuo responsable de contar los comportamientos de dolor en un estudio particular está ciego para los grupos de tratamiento .
Las ratas se trataron con la sal HC1 del Compuesto (la) a varias dosis (3, 10, 30, y 50 mg/kg, IP) o con el vehículo (IP) . Los animales tratados con vehículo mostraron un promedio de aproximadamente 85 segundos exhibiendo comportamientos de dolor (por ejemplo, lamida de la pata) . Los animales tratados mostraron un promedio de aproximadamente 38 segundos exhibiendo comportamientos de dolor. Los resultados se muestran en la Figura 2 y Tabla 3a. Los animales tratados con la Fórmula (la) mostraron un intervalo de 5.9 a 85.8 segundos, exhibiendo comportamientos de dolor. Los resultados se muestran en la Figura 2 y la Tabla 3a. Los resultados de los efectos de la Fórmula (II) sobre las respuestas inducidas por formalina se muestran en las Tablas 3a y 3c. Los animales tratados con la Fórmula (III) exhibieron comportamientos de dolor durante 44.3 segundos, comparado con el vehículo a 77.2 segundos. Los resultados se muestran en la Tabla 3b.
Ejemplo 6: Modelo de dolor inflamatorio in vivo con adyuvante de Freund completo (CFA) El compuesto de Fórmula (la) , el compuesto comparador de Fórmula (II) y ketoprofeno se analizaron por el método de ensayo de dolor inducido por CFA informado en del Camino et al., J. Neurosci., 30 (45 ): 15165-15174 , incorporado en la presente por referencia en su totalidad.
En breves palabras, la pata trasera se sensibiliza a temperatura fría (alodínica) , por la administración de 0.1 mi de adyuvante de Freund completo (CFA) que se aplica en la pata trasera izquierda. Después de 2-3 días, se registra el tiempo que tarda el animal en levantar su pata inyectada con CFA en comparación con su pata trasera derecha normal no inyectada. Los animales se colocan en la superficie de la placa fría (1 °C) y el operador detiene la prueba en el momento en que el animal exhibe molestia al sacudir o levantar la pata de la placa (latencia de retirada de la pata, o PWL) . Para evitar el daño tisular el tiempo límite máximo es 5 minutos. Los animales que son alodínicos (PWL promedio en los primeros tres comportamientos de dolor <150 segundos para la pata trasera inyectada con CFA: ~ =50% de diferencia entre la pata normal y la inyectada con CFA) se incluyen en el estudio y posteriormente se aleatorizan en todos los grupos de tratamiento. Al día siguiente, se dosifica a los animales en condiciones de cegamiento. Después de 1-2 horas de tiempo de pre-tratamiento, se toman de nuevo las lecturas de PWL pos-dosis. La eficacia del tratamiento con el fármaco se evalúa por la comparación de la PWL en los animales con tratamiento farmacológico con los animales que reciben el vehículo.
Ejemplo 7: Comportamiento de dolor in vivo por incisión quirúrgica en modelo de roedores (Figura 4) El compuesto de Fórmula (la) , el compuesto comparador de Fórmula (III) y ketoprofeno se analizaron por el método de ensayo de dolor inducido por formalina informado en Brennan et al., Pain, 1996 Mar ; 64 (3 ): 493-501 incorporado en la presente por referencia en su totalidad. En breves palabras, en ratas bajo anestesia, se realizar una incisión de 1 cm a través de la piel y músculo subyacente en la parte inferior de una pata trasera. La incisión se cierra con sutura y los animales se dejan retornar a la conciencia en su jaula antes de colocarse en una rejilla de malla especial. El observador cegado evalúa subjetivamente y registra la puntuación de dolor de cada animal cada 5 minutos durante 1 hora. Las puntuaciones de dolor se asignan de la siguiente manera: Puntuación de O = la pata lesionada se mantiene plana sobre la rejilla y está soportando peso (= pata no lesionada); 1 = la pata lesionada está ligeramente levantada de la rejilla pero aún está soportando algún peso; 2 = la pata lesionada está plana pero no está soportando peso, o el talón se levanta alto fuera de la rejilla, solo tocando con los dedos. Al final de cada hora, se suman las puntuaciones de dolor y se registra la puntuación final (puntuación máxima = 39) . En un estudio típico se determina la eficacia del tratamiento farmacológico por la comparación de las puntuaciones de protección acumulativas a 1-2 y 3-4 horas después de la lesión quirúrgica con las puntuaciones de protección acumulativas de los animales que recibieron el vehículo.
Sesenta (60) mg/kg administrados por vía intraperitoneal (2 dosis de 30 mg/kg antes e inmediatamente después de la cirugía) redujeron el dolor espontáneo durante hasta 4 horas después de la cirugía, equivalente al ketoprofeno (2 dosis de 2 mg/kg por vía intraperitoneal) . Treinta (30) mg/kg compuesto de Fórmula (la) por vía intraperitoneal (2 dosis de 15 mg/kg antes e inmediatamente después de la cirugía) solo redujeron el dolor espontáneo durante hasta 2 horas después de la cirugía.
Ejemplo 8: Estudio del biomarcador sérico de hepatotoxicidad del compuesto de Fórmula (I) y un compuesto comparador de Fórmula (III) El compuesto de Fórmula (la) se administró por vía oral a perros hembra a niveles de dosis de 5 , 15 o 50 mg/kg usando 30% de sulfobutiléter ß-ciclodextrina como el vehículo para la evaluación de seguridad medida por medio los biomarcadores químicos séricos de hepatotoxicidad o lesión del conducto biliar de 1 Figura 5A, que muestra las mediciones de alanina aminotranferasa [ALT] , aspartato aminotranfereasa [AST] , fosfatasa alcalina [ALP] y gamma-glutamil transferasa [GGT] en los perros en cada nivel de dosis (cada barra representa una medición de 1 perro en el estudio) . Los datos de la Figura 5A muestran que el compuesto de Fórmula (la) no elevaron los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad o respuesta de la fase aguda cuando se administra a 50 mg/kg PO (oral) .
En contraste, los datos de la Figura 5B muestran que el compuesto comparador de Fórmula (III) elevó los biomarcadores séricos de hepatotoxicidad. Por ejemplo, los niveles de ALT se elevaron hasta aproximadamente 60 veces en perros macho y hasta aproximadamente 130 veces en perros beagle hembra después de una dosis PO única de 50 mg/kg.
Ejemplo 9: Estudios de toxicidad de dosis repetida en roedores, intraperitoneal (i.p.) El compuesto de Fórmula (la) se evaluó en un estudio de toxicidad de selección de dosis repetida 7 días en ratas hembra. A fin de maximizar la exposición sistémica, las ratas se administraron el compuesto de Fórmula (la) i.p. a razón de 50 mg/kg/día durante 7 días consecutivos, para obtener los resultados mostrados en la Figura 6. Los parámetros químicos clínicos se evaluaron en los Días 3 y 8. La histopatología se realizó sobre los órganos seleccionados que incluyen el hígado, riñon, bazo y pulmón. Después de la administración del compuesto de Fórmula (la) a la dosis IP de 50 mg/kg, no se observaron signos clínicos adversos, cambios en peso corporal, o cambios en parámetros químicos clínicos. No se observaron hallazgos histopatológicos en el hígado, riñon, bazo, o pulmón después de la administración del compuesto de Fórmula (la) .
De acuerdo con el informe del patólogo, no se identificaron eventos adversos relacionados con el compuesto de Fórmula (la) en secciones de hígado recolectadas en el estudio días 3 y 8 o bazo, riñon y pulmón recolectado en el día de estudio 8.
En contraste, los datos de la Figura 6 para los compuestos de Fórmula (III) muestran que el compuesto comparador de Fórmula (III) elevó los biomarcadores de hepatotoxicidad en comparación con la Fórmula (la) después de la dosis repetida de 7 días de 50 mg/kg/día durante 7 días consecutivos .
Ejemplo 10: Composición farmacéutica que contiene el compuesto de Fórmula (la) Los componentes de una formulación farmacéuticamente aceptable pueden incluir un compuesto de Fórmula (la) como el ingrediente activo, hidroxipropil-^-ciclodextrina (HPBCD) como un agente de solubilización y estabilización y HCl como el agente de ajuste de pH . La solución de dosificación formulada puede comprender 10 mg/ml del compuesto de Fórmula (la) y 25% (p/v) de HPBCD disuelto en el ácido clorhídrico 0.1 N (HCl), pH 2.0. La formulación se puede convertir a una forma de dosis liofilizada para la reconstitución antes de la dosificación en el sitio clínico.
Un producto farmacológico que comprende el compuesto de Fórmula (la) se puede preparar por la disolución del compuesto de Fórmula (la) como la sustancia farmacológica (DS) en 25% p/v HPBCD en una solución HCl 0.1 M a un pH blanco final de 2 (+ 0.5). La solución compuesta se puede llenar en viales para posterior liofilización.
Opcionalmente , las composiciones farmacéuticas que comprende un compuesto de Fórmula (I) se pueden formar como nanosuspensiones , cocristales, dispersiones secas por aspersión y extrusiones de fundido en caliente. Estas tecnologías se pueden seleccionar sobre la base de su utilización y demostraron éxito para los compuestos del fármaco de clase II BCS . La evaluación de factibilidad de las tecnologías de administración de fármaco selectivo se puede realizar usando la forma de sal HCl del compuesto de Fórmula (la) del Ejemplo 2.
La composición farmacéutica puede ser una dosis unitaria que varía de 200 a 500 mg en una cápsula de tamaño "00" o tamaño de comprimido equivalente. Si se obtienen 500 mg de dosis activa/unitaria, luego se dirigirá el desarrollo de esta tecnología a la dosis alcanzable más alta.
Con preferencia, las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de Fórmula (la) se puede formular para proporcionar una reducción del dolor después de la cirugía (por ejemplo, tratamiento del dolor después de la cirugía en comparación con el placebo para obtener aproximadamente 50-100% de reducción del uso de opiáceos dentro de las primeras 24 horas después de la cirugía) . Las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de Fórmula (la) se pueden indicar para usar como un agente terapéutico analgésico y/o antiinflamatorio (por ejemplo, para bloquear el dolor agudo y evitar o reducir la inflamación en un sitio de la herida y prevenir la sensibilización central) . En una modalidad, las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto de Fórmula (la) se pueden administrar BID durante un período de tiempo adecuado (por ejemplo, 7-14 días) y proporcionar analgesia dentro de aproximadamente 30 minutos de administración. Con preferencia, la composición farmacéutica que comprende el compuesto de Fórmula (la) puede proporcionar disminuciones clínicamente medibles de las puntuaciones del dolor, sin depresión respiratoria y/o efectos sobre el SNC inducidos por fármacos.
Ejemplo 11: Estudio de Fase 1A de dosis ascendente única Se realizó un estudio de seguridad, tolerabilidad y farmacocinético aleatori zado , doble ciego, controlado por placebo, cruzado, de dosis única de 6 dosis ascendentes del Compuesto de Fórmula (la) en dos cohortes de voluntarios masculinos sanos. Se reclutó un total de dieciocho voluntarios masculinos sanos elegibles utilizando un diseño de panel alternativo. La primera cohorte de nueve sujetos (Cohorte 1) se enroló sucesivamente en 3 de 6 períodos de dosificación (Niveles de dosis 1, 3, y 5) . La cohorte restante de nueve sujetos (Cohorte 2) se enroló en los otros 3 períodos de dosificación (Niveles de dosis 2, 4, y 6) . En cada período de dosificación, los sujetos se asignaron aleatoriamente 2:1 al compuesto de Fórmula (I) (n=6) o placebo (n=3) . Cada sujeto recibió una dosis de placebo y dos dosis diferentes del compuesto de Fórmula (I) durante el período de su participación en los tres períodos de dosificación. Los sujetos se aleatorizaron de igual modo a una de 3 secuencias posibles, a saber 1) placebo, activo, activo, 2) activo, placebo, activo, y 3) activo, activo, placebo.
El estudio de Fase 1A de dosis ascendente única se completó con éxito sin observar señales de seguridad que fueran atribuibles al compuesto de Fórmula (la) .
Ejemplo 12: Evaluación de la eficacia de un compuesto de a fórmula (la) en un modelo de asma alérgico Materiales y métodos Preparación del animal : Los compuestos se probaron en el modelo de oveja de asma experimental reportado en Abraham M. Asthma & Rhinitis, 2000: 1205-1227 incorporado en la presente por referencia en su totalidad. Todos los animales se demostró que tenían respuestas de los conductos aéreos temprano y tardío a la estimulación de inhalación con el antígeno de Ascaris suum.
Medición de la mecánica del conducto aéreo: Las ovejas sin sedar se encerraron en una carro en la posición boca abajo con sus cabezas inmovilizadas. Después de la anestesia tópica de los pasajes nasales con una solución de lidocaína al 20%, se introdujo un catéter de balón a través de una ventanilla en el esófago inferior. Las ovejas se intubaron con un tubo endotraqueal del manguito a través de la otra ventanilla. Se estimó la presión pleural con el catéter de balón esofágico. La presión lateral en la traquea se midió con un catéter de orificio lateral (dimensión interna, 2.5 mm) , se avanzó y se colocó en la posición distal a la punta del tubo endotraqueal. La presión transpulmonar , la diferencia entre la presión traqueal y pleural, se midió con un sistema de catéter de transductor de presión diferencial. Para la medición de la resistencia pulmonar (RL) , el extremo proximal del tubo endotraqueal se conectó a un neumotacógrafo . Las señales de flujo y la presión transpulmonar se enviaron a una computadora para un cálculo en línea de RL de la presión transpulmonar, el volumen respiratorio (obtenido por integración digital) y el flujo. El análisis de 5-10 respiraciones se usó para la determinación de RL en L x cm H20/L/S.
Sistemas de liberación de aerosol: Los aerosoles de extracto de Ascaris suum (diluidos 20:1 con solución salina amortiguada con fosfato; 82,000 PNU/ml) se generaron usando un nebulizador médico desechable (Raindrop®, Puritan Bennett) . La salida del nebulizador se dirigió en la pieza t de plástico, un lado de la cual se conectó al puerto inspirador de un respirador Harvard. Para controlar mejor la liberación de aerosol, se activó un dosímetro que consiste de una válvula solenoide y una fuente de aire comprimido (20 psi, 137.8 kPa) al comienzo del ciclo inspirador del sistema respirador Harvard durante 1 segundo. El aerosol se liberó a un volumen de ventilación pulmonar de 500 mi y una velocidad de 20 respiraciones por minuto. También se generaron aerosoles de Carbacol con el sistema nebulizador descrito anteriormente.
Datos de respuesta de la resistencia pulmonar: Los datos de la resistencia pulmonar para el compuesto de la Fórmula (la) se colectaron de acuerdo con el diagrama de flujo mostrado en la Figura 8. Se obtuvieron curvas de la respuesta de la concentración de la línea base al aerosol Carbacol, 1 a 3 días antes del comienzo del tratamiento del fármaco/vehículo. Con referencia a la Figura 8, las ovejas (n=3/grupo) recibieron diariamente la administración del compuesto de la Fórmula (la) a 3, 5 ó 10 mg/kg per os (PO) o el vehículo a 5 mL/kg PO durante 4 días consecutivos. Las ovejas se sometieron a ayuno cada noche antes de la dosificación a la siguiente mañana. En el día de estimulación, el cual fue el cuarto día consecutivo de administración, las ovejas se trataron con el compuesto de la Fórmula (la) o vehículo, oralmente, 2 horas antes de la estimulación del antígeno. Los valores de la línea base de la resistencia pulmonar (RL) se obtuvieron dentro de 30 minutos de tratamiento y luego se volvieron a medir 30 minutos antes de la estimulación del antígeno. Las mediciones de RL se obtuvieron inmediatamente después de que las ovejas se estimularon con el antígeno de Ascaris suum, cada hora a partir de 1-6 horas después de la estimulación y a media hora desde 6½ a 8 horas después de la estimulación. Se realizó la determinación de la curva de respuesta de la concentración post-estimulación de 24 horas.
La Figura 9A muestra los datos calculados de la medición de la resistencia pulmonar (RL) como una función del tiempo (horas) . La Figura 9B muestra la cuantificación de la respuesta de la fase tardía del compuesto de la fórmula (la) observada en la Figura 9A. Con referencia a la Figura 9A, la respuesta pulmonar alcanzó el pico pronto después de que se administró Ascaris suum, y después la RL disminuyó hasta el tiempo de 4 horas. El aumento de la fase tardía en RL se observó comenzando a las 4 horas de la estimulación de post-antígeno en la línea base y el vehículo. También se observaron efectos similares a una dosis de 3 mg/kg del compuesto de la Fórmula (la) . Sin embargo, las dosis de 5 y 10 mg/kg fueron efectivas para disminuir la resistencia pulmonar en la fase tardía del transcurso del tiempo. A una dosis de 5 mg/kg del compuesto de la fórmula (la) , la dosificación de 5 mg/kg mostró una inhibición aproximada de 45%, mientras que a una dosis de 10 mg/kg, el % de inhibición se cuantificó como aproximadamente 75% (Figura 9B) .
Datos de hipersensibilidad del conducto aéreo (?0400) : Las mediciones de RL se repitieron inmediatamente después de la inhalación del amortiguador y después de cada administración de 10 respiraciones para aumentar las concentraciones de solución de Carbacol (0.25%, 0.5%, 1.0%, 2.0% y 4.0% p/v) . Para valorar la sensibilidad del conducto aéreo, se calculó la dosis de Carbacol acumulada en las unidades de respiración (BU, por sus siglas en inglés) que aumentaron RL 400% sobre el calor de post-amortiguador (es decir, PC400) de la curva de respuesta de la dosis (Figura 10) . Una unidad de respiración se define como una respiración de una solución de Carbacol al 1% p/v. Con referencia a la Figura 10, las dosis de 5 y 10 mg/kg de un compuesto de la Fórmula (la) mostraron un aumento de 100% en la línea base, que indica que la RL regresó a los niveles antes de la estimulación del antígeno.
Incorporación por referencia Todas las publicaciones y patentes mencionadas en la presente se incorporaron en la presente por referencia en su totalidad como si cada publicación o patente individual fuera indicada en forma específica e individual para ser incorporada por referencia.
Equivalentes Los experimentados en la técnica reconocerán o podrán establecer usando no más que experimentación de rutina, muchos equivalentes para las modalidades específicas de la invención descritas en la presente. Tales equivalentes se consideran comprendidos por las siguientes reivindicaciones.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (41)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un compuesto de Fórmula (I) , o una de sus sales farmacéuticamente aceptables: (I)
2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque está enla forma de su sal clorhidrato.
3. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de Fórmula (la) , o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de Fórmula (la) : (la) .
4. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque comprende una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de Fórmula (la) .
5. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque comprende la sal clorhidrato del compuesto de Fórmula (la) .
6. La composición de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque además comprende un portador farmacéuticamente aceptable.
7. La composición de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque el portador comprende un compuesto sulfobutiléter ß-ciclodextrina .
8. La composición de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque se formula para administración oral.
9. Uso de un compuesto de la fórmula (la), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: <Ia> en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o mejoramiento de dolor o proporcionar analgesia en un animal o humano .
10. El uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde el compuesto de Fórmula (la) está en la forma de una sal clorhidrato.
11. El uso de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, en donde el dolor es dolor agudo.
12. El uso de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, en donde el dolor es dolor crónico.
13. El uso de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, en donde el dolor es dolor posquirúrgico .
14. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, en donde el dolor es dolor inflamatorio .
15. El uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde el compuesto o composición se administra por vía oral.
16. El uso de un compuesto de la Fórmula (la), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo: (¾) en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o mejoramiento de asma en un animal o humano.
17. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el compuesto de la fórmula (la) está en la forma de una sal de clorhidrato.
18. El uso de conformidad con la reivindicación 16, que comprende tratar o mejorar asma en un humano.
19. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el compuesto o composición se administra oralmente.
20. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde la composición se formula para la liberación oral por inhalación .
21. Un compuesto de la fórmula (la), (la) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es para el tratamiento o mejoramiento de dolor o proporcionar analgesia.
22. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el dolor es dolor agudo, dolor crónico, dolor post-quirúrgico o dolor inflamatorio.
23. Un compuesto de la fórmula (la), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es para el tratamiento o mejoramiento de asma .
24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque comprende tratar o mejorar el asma en un humano .
25. Un compuesto de la fórmula (la), (la) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usarse como un medicamento.
26. El compuesto de conformidad con la reivindicación 21, 22, 23, 24 ó 25, caracterizado porque está en la forma de una sal de clorhidrato.
27. Método de manufactura de un compuesto de Fórmula (la) , caracterizado porque comprende las etapas de: a) hacer reaccionar (S) -2-metilpirrolidina con 5-bromo-2-cloropirimidina para formar el compuesto intermediario 03, b) acoplar el compuesto intermediario 03 con el compuesto 05 (6-bromo-2-aminopiridina) por una o más reacciones para formar el compuesto intermediario 06, y c) hace reaccionar el compuesto 06 con el compuesto 07 en una reacción de acoplamiento para formar el compuesto de Fórmula (I) .
28. Producto de la Fórmula (la) obtenido por un proceso, caracterizado porque comprende las etapas de: a) hacer reaccionar (S) -2-metilpirrolidina con 5-bromo- 2-cloropirimidina para formar el compuesto intermediario 03, b) acoplar el compuesto intermediario 03 con el compuesto 05 (6-bromo-2-aminopiridina) por una o más reacciones para formar el compuesto intermediario 06, y c) hacer reaccionar el compuesto 06 con el compuesto 07 en una reacción de acoplamiento para formar el compuesto de Fórmula (I) .
29. Método para inhibir o antagonizar TRPA1, caracterizado porque comprende poner en contacto una composición que comprende el compuesto de Fórmula (la) con un canal iónico TRPA1.
30. Método para identificar un compuesto inhibidor del canal iónico TRPA1 , caracterizado porque comprende: (a) obtener un valor IC50 estándar para un agente de referencia seleccionado del grupo que consiste de un compuesto de la fórmula (I) , (II), (III) y (IV) cuando se prueba contra TRPA1 ; (b) obtener un valor IC50 para un compuesto de prueba cuando se prueba contra TRPA1 ; y (c) comparar el valor IC50 contra el valor IC50 estándar; en donde un compuesto de prueba que tiene un valor IC50 igual o menor que el valor IC50 estándar se identifica como el compuesto inhibidor del canal iónico de TRPAl.
31. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque TRPAl es hTRPAl .
32. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente de referencia se evalúa para inhibir el flujo iónico específico de TRPAl.
33. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el agente de referencia se evalúa para inhibir la corriente iónica específica de TRPAl.
34. El método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (I) es el estereoisómero de la fórmula (la) : 0»).
35. Producto de la fórmula (la), caracterizado porque se obtiene por un proceso que comprende las etapas de: a) hacer reaccionar (S) -2-metilpirrolidina con 5-bromo- 2-cloropirimidina para formar el compuesto intermediario 03, b) acoplar el compuesto intermediario 03 con el compuesto 05 (6-bromo-2-aminopiridina) por una o más reacciones para formar el compuesto intermediario 06, y c) hacer reaccionar el compuesto 06 con el compuesto 07 en una reacción de acoplamiento para formar el compuesto de Fórmula (I) .
36. Producto de la Fórmula (Ib), <ib) caracterizado porque se obtiene por un proceso que comprende las etapas de : a) hacer reaccionar (R) -2-metilpirrolidina con 5-bromo-2-cloropirimidina para formar el compuesto intermediario 03, b) acoplar el compuesto intermediario 03 con el compuesto 05 (6-bromo-2-aminopiridina) por una o más reacciones para formar el compuesto intermediario 06, y c) hacer reaccionar el compuesto 06 con el compuesto 07 en una reacción de acoplamiento para formar el compuesto de Fórmula (Ib) .
37. Método para inhibir o antagonizar TRPA1, caracterizado porque comprende poner en contacto una composición que comprende el compuesto de la Fórmula (I) , con un canal iónico de TRPA1.
38. El método de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (I) es el estereoisomero de la Fórmula (la) : (fe).
39. Compuesto de la fórmula (Ib), Fórmula (Ib) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es para el tratamiento o mejoramiento del dolor o proporcionar analgesia.
40. Compuesto de la fórmula (Ib), Fórmula (Ib) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque es para el tratamiento o mejoramiento de asma .
41. El compuesto de conformidad con la reivindicación 39 ó 40, caracterizado porque está en la forma de una sal de clorhidrato .
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