MX2012013892A - Producto farmaceutico que comprende extractos de alergeno de acaro y metodo para la elaboracion del mismo. - Google Patents

Producto farmaceutico que comprende extractos de alergeno de acaro y metodo para la elaboracion del mismo.

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Jason Daniel Frey
Trena Larissa Repp
Craig T Grass
Heather Michelle Webster
David Rowles
Gary Steven Smith
Fernando Juan Vidales
Carmen Arteaga Vazquez
Juan Carlos Moreno Segura
Maria Jose Chamorro Salillas
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Abstract

La invención se relaciona con un producto farmacéutico que comprende un extracto de alergeno o un alergoide del mismo para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros del polvo casero, extracto el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro que se selecciona de los siguientes grupos a) -b): a) un extracto de cuerpos de ácaro Der p, y b) un extracto de cuerpos de ácaro Der f y por lo menos un extracto de cultivos de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos c) -g): c) un extracto de partículas fecales Der p, d) un extracto de partículas fecales Der f, e) un extracto de cultivo de ácaro completo Der f, f) un extracto de un cultivo de ácaro completo Der p, y g) una combinación de extractos c) a f).

Description

PRODUCTO FARMACEUTICO QUE COMPRENDE EXTRACTOS DE ALERGENO DE ACARO Y METODO PARA LA ELABORACION DEL MISMO CAMPO DE LA INVENCION La invención se relaciona con un producto farmacéutico adecuado para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico por ácaros del polvo casero causado por los ácaros de polvo casero que comprende alérgeno de ácaro y un método para la elaboración del mismo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION La alergia es un problema de salud mayor en países con un estilo de vida Occidental. Además, la prevalencia de enfermedad alérgica se encuentra en aumento en estos países. Aunque la alergia en general no se puede considerar una enfermedad que ponga en peligro la vida, el asma anualmente genera un número significativo de muertes. Una prevalencia excepcional es aproximadamente 30% de jóvenes que presenta una pérdida sustancial en la calidad de vida, días laborables y dinero y garantiza una clasificación entre los problemas de salud principales en el mundo Occidental.
La manifestación y síntomas de alergia clínica en si mismos se manifiestan de diversas maneras y varían dependiendo del individuo sensibilizado y la alergia que adquiere. Los síntomas comunes son edema, prurito, enrojecimiento y escurrimiento de los ojos y la nariz Ref: 237263 (rinitis y conjuntivitis) y síntomas de las vías respiratorias superiores e inferiores tales como estertores secos, tos, disnea, condiciones cutáneas como eczema, urticaria y prurito. También se experimentan otros síntomas como fatiga o insomnio. El tratamiento sintomático tiene como objetivo reducir o alterar la gravedad de los síntomas o reducir la necesidad de otros medicamentos suministrados en paralelo. Los medicamentos sintomáticos incluyen antihistamínicos como antagonistas de los receptores Hx y H2, corticosteroides intranasales y sistémicos, medicamentos anti- inflamatorios no esteroideos, descongestionantes nasales como agonistas adrenoceptores . El tratamiento y alivio de uno o más síntomas alérgicos y/o la reducción en la necesidad de otro medicamento es un objetivo adicional de esta invención.
La inmunoterapia específica de alérgeno (también denominada como inmunoterapia de alérgeno, inmunoterapia de alergia, vacunación contra alergia específica (SAV, por sus siglas en inglés) , la hiposensibilización o desensibilización) son un tratamiento causal de la enfermedad alérgica. Interfiere con mecanismos inmunológicos básicos lo que resulta en mejora persistente o a largo plazo del estado inmunitario de los pacientes. De esta manera, el efecto protector de la vacunación contra alergia específica se extiende sobrepasando el período de tratamiento en contraste con el tratamiento con medicamento sintomático.
Algunos pacientes que reciben el tratamiento se curan y, además, la mayor parte de los pacientes experimenta un alivio en la gravedad de la enfermedad y los síntomas experimentados o por lo menos una supresión en el agravamiento de la enfermedad. La inmunoterapia de alérgeno también tiene efectos de prevención que reducen el riesgo de desarrollo de fiebre de heno en asma y reducen el riesgo de desarrollar sensibilidades nuevas.
La inmunoterapia convencional de alérgeno se lleva a cabo utilizando administración múltiple de alérgeno aplicado durante un período de tiempo prolongado.
El uso de larga duración de inmunoterapia de alérgeno es por medio de la vía de inyección (también denominada SCIT, SIT o inmunoterapia subcutánea) . Comúnmente, el alérgeno se administra vía la ruta subcutánea en dosis cada vez mayores hasta que se alcanza la dosis de mantenimiento pero también se utilizan regímenes de tratamiento con administración en grupo o sin dosis en ¦ aumento se utilizan. El alérgeno se puede administrar por un período de hasta 3 años o más antes de que el tratamiento se complete o se suspenda, dependiendo del protocolo de tratamiento aplicado.
Una vía de administración alternativa es administración sublingual (SLIT, por sus siglas en inglés) la cual es más conveniente para pacientes dado que la administración se puede llevar a cabo en casa.
Los productos de inmunoterapia para uso en inmunoterapia típicamente comprenden el alérgeno que provoca la alergia en el paciente o derivados del mismo como el ingrediente activo, el cual se puede formular de diversas maneras de acuerdo con la vía de administración seleccionada tales como formulaciones acuosas, suspensiones en hidróxido de aluminio o alergoides. El ingrediente activo puede ser, por ejemplo, un extracto acuoso de polen que contenga alérgenos de polen y/o un extracto acuoso de ácaros que contenga alérgenos de ácaro.
Los ácaros de polvo casero más importantes que pertenecen a la familia Pyroglyphidae incluyen Euroglyphus maynei, Dermatophagoides pteronyssinus y Dermatophagoides farinae. Estos se encuentran en la mayor parte del mundo incluyendo Europa, Estados Unidos, China y muchos otros países y la alergia y el asma alérgico causados por los ácaros del polvo casero es una enfermedad común que, afecta a 25% de la población.
Algunos pacientes son sensibilizados a Euroglyphus maynei, Dermatophagoides pteronyssinus, algunos otros a Dermatophagoides farinae y otros a todas las especies.
Los pacientes normalmente son sensibilizados (aunque en un grado variable) a los dos alérgenos principales en los ácaros del polvo casero, específicamente alérgeno del grupo 1 y/o alérgeno del grupo 2.
Los ácaros del polvo casero contienen más de 20 alérgenos diferentes. No obstante, los dos alérgenos principales, el del grupo 1 y el del grupo 2 son los alérgenos más importantes debido a la frecuencia de pacientes sensibilizados a estos dos alérgenos, la cantidad de IgE producida en respuesta a estos alérgenos y al contenido de la misma en extractos naturales.
En inmunoterapia de alérgeno, los pacientes son tratados con alérgenos a los que son sensibilizados. La capacidad de los alérgenos a inducir respuestas inmunológicamente mediadas por IgE los vuelve importantes para controlar el contenido de alérgeno especialmente los alérgenos de grupo 1 y de grupo 2 en los extractos de alérgeno administrados a pacientes alérgicos para evitar efectos secundarios.
Los alérgenos del grupo 1 y 2 a partir de Der f y Der p están relacionados estrechamente pero no son idénticos, véase Allergens and Allergen Immunotherapy, Clinical Allergy and Immunology Series 21, Lockey and Ledfors, 4a ed. , páginas 162-164) .
Todos los productos en el mercado hoy en día para inmunoterapia de pacientes con alergia a ácaros del polvo casero comprenden extractos de alérgeno acuosos que contienen alérgenos de los ácaros del grupo 1 y. grupo 2. Muchos productos contienen extractos tanto de Dermatophagoid.es pteronyssinus, como de Dermatophagoid.es farinae .
Los extractos de alérgeno de acaro habitualmente se preparan por cultivo de ácaros en un medio de ácaro adecuado seguido por extracción del cultivo de ácaro completo o extracción de una fracción de cuerpo de ácaro del mismo, Allergens and Allergy Immunotherapy, Cuarta edición, Clinical Allergy and Immunotherapy series 21, Ed. R. F. Lockey and D.K. Ledfors, página 286.
En la elaboración de un extracto de alérgeno es importante controlar la variabilidad y obtener consistencia y reproducibilidad para seguridad óptima y eficacia en un ámbito clínico subsecuente. La estandarización de extracto de alérgeno es una materia más compleja y en principio involucra la cadena de producción completa del proceso que incluye el establecimiento de procedimientos de manufactura robustos y reproducibles , véase Allergy Methods and Protocols, Jones and Lympany (2008), capítulo 12 y 13. Debido a que la capacidad de unión de igE de un extracto de alérgeno se relaciona con el contenido de uno o de algunos alérgenos mayores, la estrategia de estandarización general normalmente involucra estandarizar el extracto respecto al contenido de una selección de estos alérgenos mayores adicionalmente respecto a la potencia de unión de IgE general y la composición. El método relevante para los análisis para tener acceso a los extractos de alérgeno son bien conocidos en el ámbito e incluyen análisis de inmunoelectroforesis tales como CIE, CRIE, FRIE, CLIE, métodos de cuantificación utilizando anticuerpos monoespecíficos o poliespecíficos tales como SRID, RIS, QIE así como métodos de elaboración de referencias de estandarización. Los estándares internacionales existen en grado limitado, un ejemplo son FDA; la referencia CBER proporcionada para fabricantes de extracto para estandarizar contra y marcar su producto con el resultado en una etiqueta de biopotencia de AI o BAU (siglas en inglés para unidades de alergia o unidades de alergia bioequivalentes , respectivamente) .
Existe considerable variación de un lote a otro en la cantidad en peso de los alérgenos de grupo 1 y de grupo 2 en los extractos de alérgeno y la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 en estos extractos de alérgeno típicamente es mayor que la cantidad de alérgenos del grupo 2, en peso.
Es bien sabido que los alérgenos de grupo 1 y de grupo 2 de acaro de polvo casero se encuentran tanto en los cuerpos del ácaro como en las partículas fecales producidas por los ácaros durante el cultivo. También se sabe que el alérgeno del grupo 1 se asocia con las partículas fecales y el alérgeno del grupo 2 se asocia con los cuerpos del ácaro; véase Batard et al., Int Aren Allergy Immunol 2006, 140, p. 295-305.
Como se menciona en lo anterior existe una variación considerable de un lote a otro en el contenido de alérgenos de ácaro del grupo 1 y ácaros del grupo 2 en lotes de extractos de cultivo de ácaro completo, que incluyen extractos de los cuerpos de ácaro, o que vuelve muy difícil preparar extractos de ácaro con un nivel constante y predeterminado de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2. Por supuesto, este es un problema grave en la producción industrial o a gran escala de un producto farmacéutico el cual debe contener tan cercanamente como se pueda la misma cantidad de uno o varios ingredientes activos en cada lote.
Por lo tanto, un procedimiento y productos mejorados son importantes para maximizar la eficiencia de producción así como proporcionar productos de alta calidad para eficacia y seguridad del usuario final.
SUMARIO DE LA INVENCION En consecuencia, la presente invención se relaciona con un producto farmacéutico que comprende un extracto de alérgeno o un alergoide del mismo, el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos a) -b) : a) Un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) Un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y por lo menos un extracto de cultivos de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos c) -g) : c) Un extracto de partículas fecales de Der p, d) Un extracto de partículas fecales de Der f, e) Un extracto de cultivo de ácaro completo de Der f, extracto de cultivo de ácaro completo Der p, g) una combinación de los extractos c) a f ) .
La presente invención también se relaciona con un producto farmacéutico que comprende un extracto de alérgeno o un alergoide del mismo, el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpo de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos a) -b) : a) Un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) Un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos c) -d) : c) Un extracto de partículas fecales de Der p, d) Un extracto de partículas fecales de Der f.
La invención también se relaciona con una fracción de cuerpo de ácaro que comprende más de 70%, v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 75%, v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80%, v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85%, v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90%, v/v de cuerpos de ácaro, de modo más preferido, más de 95% v/v de cuerpos de ácaro y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro .
La invención también se relaciona con una fracción de partícula fecal de ácaro que comprende más de 70%, v/v de partículas fecales , preferiblemente más de 75%, v/v de partículas fecales , preferiblemente más de 80%, v/V de partículas fecales , preferiblemente más de 85%, v/v de partículas fecales , preferiblemente más de 90%, v/v de partículas fecales, de manera más preferida más de 95% v/v de partículas fecales, y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales.
La invención también se relaciona con un método para la manufactura de un extracto de alérgeno de ácaro que comprende los alérgenos Der p 1 y Der p 2, método el cual comprende las siguientes etapas: a) aislar una o varias fracciones de los cuerpos de ácaro Der p de los cultivos de ácaros Der p, en donde una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferible, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho - li ¬ mas preferida más de 98% v/v de cuerpos de acaro Der p; b) opcionalmente , combinar varias de una o varias o de las fracciones de cuerpos de acaro Der p; y c) extraer alérgenos de una o varias de las fracciones de cuerpo de acaro Der p, obtenidas en una etapa a) o en una etapa b) como en lo anterior para obtener extracto de alérgeno de ácaro.
La invención también se relaciona con un método para la manufactura de un extracto de alérgeno de ácaro que comprende alérgenos Der f 1 y Der f 2, método el cual comprende las siguientes etapas: a) aislar una o varias fracciones de los cuerpos de ácaro Der f a partir de cultivos de ácaros Der f, en donde una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferible, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f ; b) opcionalmente, combinar varias de las fracciones de cuerpos de ácaro Der f; y c) extraer alérgenos de una o varias de las fracciones de cuerpo de ácaro Der f, obtenidas en una etapa a) o en una etapa b) como en lo anterior para obtener el extracto de alérgeno de ácaro.
La invención también se relaciona con un método para la manufactura de una composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de alergia o asma alérgico causada por ácaros de polvo casero el cual comprende un extracto de alérgeno o alergoides de los mismos que tienen un contenido predeterminado y controlado de alérgenos que se seleccionan de los alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 que comprende las siguientes etapas : a) fracciones de los cuerpos de ácaro Der p y/o fracciones de partículas fecales de ácaro Der p se aislan a partir de cultivos Der p de ácaros, y/o fracciones de cuerpos de ácaro Der f y/o fracciones de partículas fecales de ácaro Der f se aislan de cultivo Der f; opcionalmente b) combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der f y opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de Der f; c) extraer alérgenos de una o varias fracciones de cuerpo de ácaro obtenidas en la etapa a) o la etapa b) como en lo anterior y/o extracción de alérgenos de una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa a) o en una etapa b) como en lo anterior; y posteriormente d) medir la concentración (p/v) del alérgeno del grupo 1 y grupo 2 en extractos de alérgeno de ácaro obtenidos en una etapa c) como en lo anterior; y opcionalmente e) mezclar uno o más extractos de cuerpos de ácaro con uno o más extractos de partículas fecales como se obtuvieron en una etapa c) como en lo anterior para obtener una mezcla de extractos de alérgeno con una concentración predeterminada (p/v) de alérgeno del grupo 1 respecto al grupo 2, y opcionalmente f) convertir el extracto a alergoides de extracto .
La invención también se relaciona con un extracto de alérgeno o una serie de extractos de alérgeno para uso en un producto de alérgeno farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro, o un extracto de cuerpo de ácaro a partir de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro o un extracto de cultivo de ácaro completo, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 y en donde el coeficiente de varianza de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 o 7.5% para la serie de extractos.
La invención también se relaciona con un extracto de alérgeno de una serie de extractos de alérgenos para el uso en un producto de alérgeno farmacéutico para el diagnóstico de alergia causada por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de caro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro, o un extracto de cuerpo de ácaro a partir de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro o un extracto de cultivo de ácaro total, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2, y en donde el coeficiente de variación de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 ó 7.5% para la serie de extractos.
BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra una configuración como se describe adicionalmente en el ejemplo 2.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones .
Como se utiliza en la presente, "ácaro" se refiere a ácaros de polvo casero. Los ejemplos de estos ácaros son Dermatophagoides farinae y/o Dermatophagoides pteronyssinus y/o Euroglyphus maynei u otras especies importantes que pertenecen a la familia de Pyroglyphidae .
Como se utiliza en la presente, "Der p" significa "Dermatophagoides pteronyssínus" , "Der ? 1" significa alérgeno del grupo 1 de Der p" y "Der p 2" significa "alérgeno del grupo 2 de Der p" .
Como se utiliza en la presente, "Der f" significa Dermatophagoides farinae" , "Der f 1" significa "alérgeno del grupo 1 de Der f" y "Der f 2" significa "alérgeno del grupo 2 de Der f " .
Los alérgenos del grupo 1 y los alérgenos del grupo 2 de las dos especies de ácaros Der f y Der p existen de modo natural en numerosas isoformas, véase, por ejemplo, www.allergen.org bajo las fuentes de alérgeno (Animalia Anthropoda/Astigmata/Dermatophagoides farinae o Dermatophagoides farinae) . Como se utiliza en la presente "alérgeno del grupo 1", "grupo 1", "alérgeno del grupo 2" y "grupo 2" incluyen a todas las isoformas que se encuentran de modo natural de cada uno de los alérgenos de grupo 1 y de grupo 2 que incluyen los mencionados en www.allergen.org.
Como se utiliza en la presente "cultivo de ácaros" o "cultivo de ácaro", "cultivo de acaro total" y "cultivo total", "cultivo de ácaro Der p" y "cultivo de ácaro Der f", o "cultivos de ácaros Der p" y "cultivos de ácaros Der f" significan el material que se obtiene después del crecimiento de Der p o Der f sobre un medio adecuado y que contiene el cultivo completo que incluye los ácaros, partes de los ácaros, partículas fecales, huevos, componentes de medio de ácaros, etc.
Como se utiliza en la presente, un "media o medio de cultivo de ácaros" o "media o medio de ácaro" significa una dieta adecuada para el crecimiento de ácaros de polvo casero.
Como se utiliza en la presente el "extracto de cuerpos de ácaros", "extracto de cuerpos de ácaro Der p" y "extracto de cuerpos de ácaro Der f" significa "extracto de una fracción o más fracciones combinadas de cuerpos de ácaros", "extracto de una fracción o más fracciones combinadas de cuerpos de ácaro Der p" y "extracto de una fracción o más fracciones combinadas de cuerpos de ácaro Der f", respectivamente.
Como se utiliza en la presente, "extracto de partículas fecales de ácaros", ""extracto de partículas fecales ", "extracto de partículas fecales de Der p" y "extracto de partículas fecales de Der f" significa "extracto de una o más fracciones combinadas de partículas fecales de ácaros", "extracto de una fracción o más fracciones combinadas de partículas fecales", "extracto de una o más fracciones combinadas de partículas fecales de Der p" y "extracto de una o más fracciones combinadas de partículas fecales de Der f", respectivamente.
Como se utiliza en la presente, "extracto de alérgeno" y "extracto de alérgeno (I) " se utilizan de manera intercambiable y significan un extracto de por lo menos un extracto de cuerpo de ácaro" o "extracto de partícula fecal" opcionalmente combinado con extractos de ácaro adicionales y en cualquier combinación.
Como se utiliza en la presente "una o varias fracciones de cuerpos de ácaro" significan uno o más fracciones combinadas de cultivos de ácaro que contienen más de 50% v/v de cuerpos de ácaro, "una o varias fracciones de cuerpos de ácaro Der p" significa una o más fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der p que contiene más de 50% v/v de cuerpos de ácaros Der p y "una o varias fracciones de cuerpos Der f" significa una o más fracciones combinadas de cultivo de ácaro Der f que contienen más de 50% v/v de cuerpos Der f .
Como se utiliza en la presente "una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro" y "una o varias fracciones de partículas fecales" significa una o más fracciones combinadas de cultivos de ácaro que contienen más de 50% v/v de partículas fecales de ácaro, "una o varias fracciones de partículas fecales Der p" significa una o más fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der p que contienen más de 50% v/v de partículas fecales Der p y "una o varias fracciones de partículas fecales Der f" significa una o más fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der f que contienen más de 50% v/v de partículas fecales Der f .
Como se utiliza en la presente " (s) " como parte de una palabra significa que la palabra se encuentra en su forma singular o plural.
Como se utiliza en la presente, el "tratamiento" significa "curar o aliviar los síntomas alérgicos".
Como se utiliza en la presente, "tableta sublingual que se disuelve rápido" se refiere a formas de dosificación comprimidas y no comprimidas las cuales se desintegran en menos de aproximadamente 90 segundos, preferiblemente en menos de aproximadamente 60 segundos, preferiblemente en menos de aproximadamente 30 segundos, de manera más preferible en menos de aproximadamente 20, incluso de manera más preferible en menos de aproximadamente 10 segundos en la cavidad bucal, incluso de manera más preferida en menos de aproximadamente 5 segundos y de manera mucho más preferible en menos de aproximadamente 2 segundos después de ser recibida debajo de la lengua en la cavidad bucal. Tales tabletas sublinguales de disolución rápida se describen en el documento WO 04/77994.
Como se utiliza en la presente, "CV" significará el coeficiente de variación expresado en porcentaje.
Los productos farmacéuticos de la invención son adecuados para el tratamiento y/o prevención de alergia a ácaro de polvo casero y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
Como se menciona en lo anterior existe una variación considerable de lote a lote en el contenido de alérgenos de ácaro del grupo 1 y alérgenos de ácaro del grupo 2 en lotes de extractos de cultivo de ácaro total, que incluye extractos de cuerpos de ácaro lo que vuelve muy difícil preparar extractos de ácaro con un nivel constante y predeterminado de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
Ahora se ha encontrado que al preparar varios extractos, por ejemplo dos, para cada lote de cultivo de ácaros, por ejemplo al aislar una fracción del cultivo de ácaros que contiene principalmente cuerpos de ácaro y una fracción del cultivo de ácaros que comprende principalmente partículas fecales de ácaro seguido por extracción separada de la fracción de cuerpo de ácaro y la fracción de partículas fecales de ácaro se proporciona la capacidad para controlar la relación de alérgeno de grupo 1 respecto a grupo 2 en el extracto de alérgeno final al mezclar el extracto de cuerpo de ácaro con el extracto de partículas fecales de ácaro hasta que se alcanza la relación en peso que se desea.
También se ha encontrado que si el cultivo de ácaro obtenido por cultivo de ácaros se purifica para producir una fracción de cuerpo de ácaro que contiene más de 70% v/v, o de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, la extracción de esta fracción de cuerpo de ácaro purificada normalmente producirá un extracto de cuerpo de ácaro el cual contiene una cantidad igual en peso de alérgeno del grupo 1 y grupo 2 o más alérgenos del grupo 2 que alérgeno del grupo 1.
Un extracto de cuerpo de ácaro con más alérgeno del grupo 2 que del grupo 1, en peso, se puede suplementar con extracto de partículas fecales de ácaro las cuales normalmente contienen más alérgeno del grupo 1 que alérgeno del grupo 2, en peso, para crear una mezcla de extractos con cantidades predeterminadas, y si se desea, más iguales en peso, de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
Los ejemplos de extractos los cuales normalmente contienen más alérgeno del grupo 1 que alérgeno del grupo 2, en peso y los cuales se pueden utilizar para suplementar con, es un extracto de un cultivo de ácaro total o una o varias fracciones de cuerpo que tienen menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro.
Un extracto de cuerpo de ácaro con más alérgeno de grupo 2 que del grupo 1 en peso también se puede suplementar con extracto de cultivo de ácaro total o una fracción de cuerpo de ácaro que tenga menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro, ambos los cuales normalmente contienen más alérgenos del grupo 1 que alérgenos del grupo 2 en peso para crear una mezcla de extractos con cantidades predeterminadas y, si se desea, más iguales en peso de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
Es posible mezclar extractos de cuerpos de ácaro y otra fracción, preferiblemente partículas fecales para obtener una mezcla de extractos la cual contiene una gama amplia de relaciones en peso de grupo 1 a grupo 2 tales como desde 1:0.6 a 1:1.6, 1:0.7 a 1:1.5, 1:0.8 a 1:1.4, 1:09 a 1:1.3, 1:0.95 a 1:1.2, 1:0.98 a 1:1.15, que incluye una mezcla la cual contiene cantidades iguales en peso de alérgenos de grupo 1 y de grupo 2, es decir, una mezcla 1:1:1:1 de Der p 1, Der p 2, Der f 1 y Der f 2.
En un aspecto, la invención se relaciona con un método para la manufactura de una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro para un producto farmacéutico que tiene una cantidad predeterminada y controlada en peso de alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2.
La invención también se relaciona con un producto farmacéutico que comprende extractos de alérgeno que se seleccionan de por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y opcionalmente por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro que se selecciona de: a) un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) un extracto de partículas fecales de Der p, c) un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y d) un extracto de partículas fecales de Der f en donde los alérgenos mayores Der p 1, Der p 2, Der f 1 y/o Der f 2 están presentes en cantidades controladas predeterminadas.
En algunas modalidades los extractos de la invención se caracterizan por contener más alérgeno de grupo 2 en peso, en comparación con los productos en el mercado. Los inventores de la presente solicitud han proporcionado procesos industriales o a gran escala para producir extractos de alérgeno de ácaro con esta relación en peso alterada entre alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
Se ha encontrado que si extractos separados tanto de cuerpos de ácaro como de partículas fecales de ácaro se preparan para cada una de las dos especies de ácaro y se utiliza suficiente fracción de cuerpo de ácaro puro (y fracción de partículas fecales de ácaro) para extracción, es posible crear extractos de ácaro con una relación en peso de alérgeno de grupo 1 respecto a grupo 2 que está entre 1:0.6 a 1:1.6 para cada una de las especies de ácaros .
Al combinar los extractos de ambas especies se puede obtener una relación en peso entre Der p 1, Der p 2, Der f 1 y Der f 2 que es 1:1:1:1.
Estos productos son útiles debido a que el contenido de alérgenos en los productos farmacéuticos está bien controlado.
Los extractos de alérgeno de ácaro previamente contenían, de manera típica, más alérgeno del grupo 1 que alérgeno del grupo 2 en peso lo cual puede haber causado un tratamiento pobre de pacientes alérgicos que están sensibilizados particularmente al alérgeno del grupo 2.
De acuerdo con la invención, se ha proporcionado un proceso industrial para la preparación de extractos con una cantidad mayor en peso de alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1 que el encontrado normalmente en extractos .
De manera adecuada, el producto farmacéutico como en lo anterior comprende por lo menos un extracto de cuerpos de acaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de caro que se seleccionan de los grupos a) - d) anteriores.
Preferiblemente, el extracto de alérgeno de ácaro comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p, un extracto de partículas fecales, Der p, un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f .
De acuerdo con modalidades adicionales de la invención, el extracto de alérgeno comprende: un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de partículas fecales de Der p y opcionalmente sin extractos de cuerpo de ácaro Der f y sin extractos de partículas fecales de Der f; o un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f y opcionalmente sin extractos de cuerpos de ácaro Der p y sin extractos de partículas fecales de Der p; o un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de cuerpos de ácaro Der f y opcionalmente sin extracto de partículas fecales de ácaro; o un extracto de cuerpos de ácaro Der p y sin extracto de cuerpos de ácaro Der f y opcionalraente sin extracto de partículas fecales de ácaro; o un extracto de cuerpos de ácaro Der f y sin un extracto de cuerpos de ácaro Der p y opcionalmente sin extracto de partículas fecales de ácaro.
En una modalidad preferida de la invención, el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una o más fracciones de cuerpos de ácaro Der p en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro Der p resulta en un extracto que comprende cantidades iguales en peso de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 o más alérgenos de grupo 2 que alérgeno de grupo 1 en peso y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una o más fracciones de cuerpos de ácaro Der f y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro Der f resulta en un extracto que comprende cantidades iguales en peso de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 o más alérgeno de grupo 2 que alérgeno de grupo 1, en peso.
En una modalidad preferida el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara adecuadamente a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der p, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de - - cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der p, y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f adecuadamente se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der f, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f, y/o el extracto de partículas fecales de Der p se prepara adecuadamente a partir de una fracción o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro Der p, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente, más de 75% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales Der p, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales Der p, de manera más preferida más de 95% v/v de partículas fecales Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der p, y/o el extracto de partículas fecales de Der f se prepara adecuadamente a partir de una fracción o varias fracciones combinadas de cultivos de acaro Der f, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 75% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 80% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales de Der f, de manera más preferida más de 95% v/v, y de manera preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der f .
En una modalidad de la invención, la fracción fecal no es tan pura como la fracción corporal.
En una modalidad preferida, cada una de las fracciones o fracciones combinadas anteriores comprende menos de 10% v/v de partículas de medio de cultivo de ácaro .
La fracción corporal de ácaro o las fracciones corporales de ácaro combinadas pueden contener hasta 20% v/v de partes de ácaro (patas, huevos, etc.), medio y partículas fecales (es decir, cualquier cosa que no sean cuerpos de ácaro o contaminantes) , con la condición de que la cantidad de partículas de medio sea inferior a 10% v/v.
La fracción de partículas fecales de acaro o las fracciones de partículas fecales de acaro combinadas pueden contener hasta 20% v/v de partes de acaro (patas, huevos, etc.) y partículas de medio (es decir, cualquier cosa que no sean partículas fecales o contaminantes) , con la condición de que la cantidad de partículas de medio sea inferior a 10% v/v .
En una modalidad adicional, cada una de las fracciones o fracciones combinadas está comprendida de un máximo que un total de 1.0% p/p de materiales extraños detectables . Las partículas fecales de acaro, partes de ácaro, cuerpos de ácaro o medios de ácaro no se consideran como materiales extraños.
Los porcentajes volumétricos de cuerpos de ácaro y partículas fecales de ácaro en el cuerpo de ácaro y las fracciones fecales de partículas se determinan por microscopía. El número de partículas (por ejemplo, el cuerpo de ácaro o la partícula fecal) se cuenta y expresa como % v/v por multiplicación con una cantidad la cual es el volumen promedio para la partícula en cuestión (por ejemplo, cuerpo de ácaro o partícula fecal) .
CUENTA MICROSCOPICA REALIZADA SOBRE FRACCIONES DE CUERPO DE ACARO : Una muestra se pesa y suspende en una solución que contiene glicerol (glicerol 25%, Igepal 5%) . La muestra se vierte en un filtro en rejilla bajo vacío con el fin de eliminar el líquido e inmovilizar las partículas sobre el filtro. El filtro después se seca para incrementar la visibilidad cuando se utiliza el microscopio. Las rejillas que se van a contar se seleccionan aleatoreamente y se cuentan todas las partículas dentro de una rejilla seleccionada. Se seleccionan rejillas hasta que se han contado por lo menos 800 partículas. El procedimiento anterior se puede realizar en varias muestras, por ejemplo, dos, tres, cuatro o cinco muestras independientes. Cuando se calculan los resultados, la variación entre las muestras debe satisfacer un criterio de aceptación deseado (tal como, por ejemplo, más de 80% vol/vol de cuerpos de ácaro totales y/o menos de 10% vol/vol de partículas de medio) para el análisis con el fin de asegurar consistencia entre las muestras. Si los resultados de las muestras son consistentes, entonces las cuentas se promedian proporcionando el resultado del análisis .
Las cuentas no volumétricas se traducen a volumen mediante la utilización de volúmenes asignados predeterminados para cuerpos de ácaro, materiales fecales y partículas de medio.
CUENTA MICROSCOPICA REALIZADA SOBRE FRACCIONES FECALES Una muestra se pesa, se coloca sobre una cámara de conteo de rejilla y se mezcla con aceite de parafina para proporcionar una capa uniforme. Las rejillas que se van a contar se seleccionan aleatoriamente y todas las partículas dentro de una rejilla seleccionada se cuentan. Las rejillas se seleccionan hasta que se han contado por lo menos 800 partículas. El procedimiento anterior se puede realizar en varias muestras tales como dos, tres, cuatro o cinco muestras independientes. Cuando se calculan los resultados, la variación entre las muestras debe satisfacer un criterio de aceptación (tal como por ejemplo, más de 80% volumen/volumen de cuerpos de ácaros totales, y/o menos de 10% volumen/volumen de partículas de medio) para el análisis con el fin de asegurar consistencia entre las muestras. Si los resultados de las muestras no son consistentes, entonces las cuentas se promedian lo que proporciona el resultado del análisis. Las cuentas no volumétricas se traducen en volúmenes mediante la utilización de los volúmenes asignados predeterminados para cuerpos de ácaro, material fecal y partículas de medio.
Los volúmenes asignados a los cuerpos de ácaro, partículas fecales, partículas de medio de ácaro son las siguientes : Cuerpos de ácaro Der f: 21132000 micrómetros al cubo cuerpos de ácaro Der p: 12926000 micrómetros al cubo Partículas de medio de ácaro en fracciones de cuerpo: 6721000 micrómetros cúbicos Partículas de medio de ácaro en fracciones fecales: 10000 micrómetros cúbicos Partículas fecales: 19000 micrómetros cúbicos Como se menciona en lo anterior, la presente invención se basa en el hallazgo de que mediante purificación de una o varias de las fracciones de cuerpo de ácaro de manera que contengan más de 70% v/v de cuerpos de ácaro, o de manera más preferida más de 80% v/v es posible preparar un extracto de cuerpo de ácaro de manera tal que la fracción de cuerpo de ácaro o las fracciones combinadas en donde la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 en el extracto es menor que la cantidad de alérgeno del grupo 2 en peso o la concentración de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 en peso es igual .
De acuerdo con una modalidad preferida, la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 es menor que la cantidad en peso de alérgeno del grupo 2 en una o varios de los extractos de cuerpo de ácaro y la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 es mucho mayor que el peso del alérgeno del grupo 2 en los extractos de partículas fecales de ácaro.
De manera adecuada, la relación en peso de alérgeno de grupo 1 respecto al grupo 2 en el extracto de alérgeno más cercano a la relación en peso de alérgeno de grupo 1 respecto a alérgeno de grupo 2 en los extractos de cuerpo de acaro en comparación con la relación en peso de alérgeno de grupo 1 respecto al grupo 2 en los extractos de partículas fecales de acaro las cuales se utilizan para la preparación de las mismas .
De acuerdo con la invención, es posible alterar la relación en peso de alérgeno del grupo 1 respecto al grupo 2 a cantidades más iguales en peso en el extracto en comparación con el extracto de cuerpos de acaro y partículas fecales de ácaro de las cuales se han preparado. Esto no era posible previamente en donde lotes típicos de ambos cuerpos de ácaro y las partículas fecales contenían más alérgeno del grupo 1 que alérgeno del grupo 2 en peso.
Se proporciona un producto farmacéutico de la invención que comprende extracto de alérgeno, el cual comprende los alérgenos que se seleccionan de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 en donde el alérgeno presente en la concentración más baja (p/v) en el extracto de alérgeno está presente en una concentración la cual es superior a 50% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 60% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 70% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida, más de 80% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 85% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida, más del 90% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 95% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera preferida más de 98% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , o de manera más preferida más de 99% de la concentración del alérgeno que se selecciona dé Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) .
Una dosis diaria de un producto de la invención adecuadamente contiene de 2 a 10 pg o de manera más preferida de 3 a 8 pg de Der p 1, de 3 a 8 pg de Der p 2, de 3 a 8 pg de Der f 1 y de 3 a 8 pg de Der f 2.
En una modalidad preferida, la dosis diaria de los alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 en un producto sublingual de la invención adecuadamente está entre 3 y 4 g, de manera más preferida aproximadamente 3.6 pg de Der p 1, Der p 2, Der f 1 y/o Der f 2.
En otra modalidad, la dosis diaria de los alérgenos del grupo 1 y del grupo 2 en un producto sublingual de la invención adecuadamente está entre 6 y 8 g, de manera más preferida en aproximadamente 7.2 \iq de Der p 1, Der p 2, Der f 1 y Der f 2.
El producto farmacéutico como en lo anterior se puede formular como una tableta sublingual comprimida o no comprimida (por ejemplo, como se indica en WO 04/77994), un producto sublingual líquido (por ejemplo, como se indica en el documento WO 07/051476) o un producto líquido para inyección opcionalmente con adyuvante de hidróxido de aluminio (por ejemplo, como se indica en WO 10/043675) . Preferiblemente, el producto farmacéutico es una tableta sublingual que se disuelve rápidamente. De manera adecuada, las tabletas están en forma de tabletas, cápsulas, grageas o capletas .
El extracto de alérgeno puede estar presente en forma de alergoides en los productos farmacéuticos que se describen en lo anterior.
La presente invención también se relaciona con un método para la elaboración de un extracto de alérgeno de acaro para un producto farmacéutico, el extracto tiene una relación en peso predeterminada, controlada y, si se desea, más igual de alérgeno Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2.
La invención también se relaciona con un método para la manufactura de un extracto de alérgeno de acaro o alergoides del mismo para un producto farmacéutico como se describe en lo anterior en donde el extracto de alérgeno tiene una cantidad predeterminada y controlada en peso de alérgenos que se seleccionan de los alérgenos de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y que comprende las siguientes etapas a) y c)-d) y opcionalmente b) , e) y/o f ) : a) fracciones de cuerpo de ácaro Der p y/o fracciones de partículas fecales de ácaro se aislan de cultivos de ácaros Der p y/o fracciones de cuerpos de ácaro Der f y/o fracciones de partículas fecales de ácaro de Der f se aislan de cultivos de ácaro Der f : b) opcionalmente' combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der p, opcionalmente, combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der f y opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der f ,- c) extraer alérgenos de una o varias fracciones de cuerpo de ácaro obtenidas en una etapa a) o una etapa b) como en lo anterior y/o extracción de alérgenos a partir de una o varias fracciones de partículas fecales obtenidas en una etapa a) o en una etapa b) como en lo anterior; y posteriormente d) medir la concentración (p/v) de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 en extractos de alérgeno de ácaro obtenidos en una etapa c) como en lo anterior; y opcionalmente e) mezclar uno o más extractos de cuerpos de ácaro con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro como se obtienen en una etapa c) como en lo anterior para obtener una mezcla de extractos de alérgeno con una cantidad predeterminada y una relación en peso de alérgeno del grupo 1 respecto al grupo 2 y opcionalmente f) convertir el extracto de alérgeno a un alergoide del mismo.
De acuerdo con la invención, los extractos o fracciones de cuerpos de ácaro y los extractos o fracciones de partículas fecales de ácaro se pueden combinar o se pueden mezclar, no obstante, una o varias fracciones de los cuerpos de ácaro nunca se combinan con una o varias fracciones de partículas fecales.
De manera adecuada, uno o más extractos de cuerpos de ácaro y uno más extractos de partículas fecales se mezclan para obtener una mezcla de extractos de alérgeno.
Preferiblemente, la mezcla de extracto de alérgeno de ácaro comprende uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der p, uno o varios extractos de partículas fecales de Der p, uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der f y uno o varios extractos de partículas fecales de Der f 2.
Para preparar el extracto se pueden combinar más de una fracción de cuerpos de ácaro de acuerdo con la etapa b) seguido por extracción de acuerdo con la etapa c) .
Además, más de una fracción de partículas fecales de ácaro se pueden combinar de acuerdo con la etapa b) seguido por extracción de acuerdo con la etapa c) .
De manera alternativa, una fracción de cuerpos de ácaro obtenidos en la etapa a) se somete a extracción y/o una fracción de partículas fecales de ácaro obtenida en la etapa a) se somete a extracción.
De manera adecuada, uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en una etapa c) se mezclan en una etapa e) con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
Adecuadamente, un extracto de cuerpos de ácaro obtenido en una etapa c) se mezcla en una etapa e) con un extracto de partículas fecales de ácaro que se obtiene en una etapa c) .
En el método como en lo anterior, uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en una etapa c) se pueden mezclar en la etapa e) con un extracto de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
De manera alternativa, un extracto de cuerpos de ácaro obtenidos en una etapa c) se pueden mezclar en una etapa e) con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
Como se utiliza en la presente, el "mezclado de extractos" incluyen mezclado tanto de lotes completos de extractos así como partes de lotes completos.
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención, uno o varios de los extractos de cuerpos de ácaro se suplementan con una cantidad de extracto de partículas fecales la cual es suficiente para obtener la relación en peso deseada de alérgeno de grupo 1 respecto a alérgeno de grupo 2 en la mezcla de extractos de alérgeno de ácaro.
En otra modalidad preferida de la invención, el extracto de cuerpo de ácaro de antemano tiene una cantidad casi igual de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 en peso y no necesita mezclarse con extracto de partículas fecales de ácaro.
El coeficiente de variación (CV, por sus siglas en inglés) se calcula como la relación de la desviación estándar s respecto a la media µ: \ñ Algunas veces se expresa como porcentaje, en cuyo caso la CV se multiplica por 100. La CV se utiliza para describir la consistencia lote a lote mejorada del extracto y los productos farmacéuticos (terapéuticos o de diagnóstico) de acuerdo con la invención.
Se puede utilizar intervalos de confianza (CI, por sus siglas en inglés) tal como 95%.
CULTIVO DE ACAROS: Se conocen muchas dietas adecuadas para el crecimiento de ácaros y han existido numeroso estudios respecto a la eficacia de diferentes ingredientes de medio de cultivo tales como levaduras, albúminas, pienso para animales, pienso para peces (tetramina) , derivados de escamas de la piel humana cizalladas, piel de puerco, huevos de camarón en salmuera, germen de trigo, alimento de ratas, alimento de perros, hígado de animales pulverizado, hidrolizado de proteínas de leche, vitaminas, minerales, hidrolizado de proteínas y harina de soja.
Las dietas de los ácaros se describen, por ejemplo, en el International Journal of Acarology, vol . 8, número 3 (1982) , p. 189-192, Rodriques, . Recent Advances in Acarology, Vol. 11 (1979), 211-216, Batard et al., Int Arch Allergy Immunol. 140 (2006) p. 295-305, Yi et al.; Asían Pacific Journal of Allergy and Immunology, 17 (1999), p. 189-194, Arlian et al., J. Allergy. Clin. Immunol, No. 3 (1987), p. 457-66, y la patente EP No, 1236394.
Un ejemplo de un medio para criar ácaros comprende una mezcla 1:1 de levadura y Daphnia secada se describe en Dust Mites by Matthew Colloff (2009), p. 270. Otro ejemplo de un medio para criar ácaros se describe en la patente de EP No. 1236394.
Se prefiere utilizar un hidrolizado de proteína así como otros ingredientes que son de bajo riesgo alergénico con el fin de reducir la posibilidad de reacciones anafiláticas en pacientes sensibilizados a alérgeno. Se prefiere adicionalmente utilizar medio de ácaro que no contenga proteína animal o humana.
Adecuadamente, el medio de ácaro se utiliza en forma de partículas las cuales son de tamaño e integridad suficientes para resistir los rigores del procesamiento posterior y que pueden ser eliminadas fácilmente a través de un proceso de cribado primario.
Las dos especies de ácaros, Der p y Der f, siempre se hacen crecer en recipientes separados pero se pueden hacer crecer en el mismo medio de ácaros. Los ejemplos de recipientes incluyen recipientes de vidrio o plástico de tamaño y forma adecuados tales como las botellas para moscas. Los recipientes desechables para cultivo de ácaros se describen, por ejemplo, en O2008/119762.
Los ácaros se cultivan en recipientes con medio de cultivo y se colocan en un ambiente controlado controlando la temperatura y humedad del ambiente circundante a los cultivos de ácaros en crecimiento. Las condiciones adecuadas para Der p y Der f se describen, por ejemplo, en numerosos artículos tales como en Fain et al (ISBN 90-71868-12-5) y por Crowther: Exp Appl Acarol. 2007; 41 (1-2): 61-86.
Un conjunto adecuado de parámetros para condiciones de cultivo para cada una de las especies de ácaros se proporciona en la tabla la a continuación.
TABLA la Las cuentas microscópicas para crecimiento y viabilidad se realizan durante el cultivo con el fin de identificar el tiempo óptimo para cosechar los ácaros.
Las destrucción del cultivo se puede realizar por congelamiento. Los ácaros también pueden ser destruidos, por ejemplo, por sofocación, por ejemplo, con acetona. Los recipientes de almacenamiento con el cultivo de ácaros destruidos se almacena a -20°C hasta procesamiento adicional .
PURIFICACION DEL CULTIVO DE ACAROS: Los cultivos de ácaros se recalientan y se secan y tamizan para obtener fracciones del cultivo de acaro que contiene componentes de tamaños diferentes. El secado se puede llevar a cabo por flujo de aire hasta que la humedad sea menos de 20%, de manera más preferida 15%.
El cultivo de ácaros puede purificarse adicionalmente y el cuerpo de ácaro o las fracciones fecales aisladas utilizando técnica de separación que incluyen tamizado (por ejemplo, utilizando tamices de 1 mm, 500 µ??, 250 µ?t?, 100 µ?? en un agitador de tamizado) , suspensiones saturadas de cloruro de sodio y suspensión de etanol, véase, por ejemplo, Dust Mites by Matthew Colloff (2009) , p. 271.
En una modalidad, una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaros y/o una o varias de las fracciones de partículas fecales de ácaros se pueden preparar por tamizado del cultivo de ácaros para producir cuatro fracciones: a) partículas grandes medias > 350 µp? b) fracción de cuerpo de ácaro 350-90 µp? c) aglomerados fecales y partes de ácaro 90-50 µp? d) partículas fecales < 50 µ?t? Está dentro de estos intervalos de tamaño los diferentes componentes del cultivo de ácaros, tal como los cuerpos de ácaro, las partículas fecales y partículas de medio, etc. se encuentran habitualmente . Las fracciones de cultivo de ácaro aisladas dentro de un intervalo de tamaño que difieren de los intervalos de tamaño anteriores también pueden ser útiles de acuerdo con la invención en la medida en que es posible preparar fracciones de cuerpo de ácaro y partículas fecales que sean suficientemente puras y en cantidad suficiente.
Las fracciones a) y c) se desechan. La fracción d) se puede utilizar directamente en el proceso de extracción y la fracción b) se somete a purificación adicional antes de extracción .
PURIFICACION DE LA FRACCION DE CUERPO DE ACAROS : Un método para purificación de cuerpos de ácaro de partículas de medio por flotación en un líquido adecuado ha sido descrita previamente, patente GB No. 1318560 en la página 3. J. Med. Entomol. (1979). Vol . 16, No. 2, p. 129-132 describe flotación en alcohol (etanol) para la separación de cuerpos de ácaro de partículas de medio de ácaro.
Se ha demostrado que la centrifugación por densidad repetidá de la fracción de cuerpo de ácaros en un líquido adecuado produce una fracción de cuerpos de ácaro de alta pureza la cual, cuando se extrae produce un extracto con más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1 en peso, o una cantidad igual en peso de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
De esta manera, la presente invención también se relaciona con un método para el aislamiento y purificación de cuerpos de ácaro que comprende las etapas de : i) aislar una o varias de las fracciones de cuerpo de ácaro de uno o varios cultivos de ácaro Der p y/o Der f y ii) someter una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der p o una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f a centrifugación de densidad en un primer medio líquido que tiene iia) una densidad mayor que la de los cuerpos de ácaro y una densidad menor que el medio de cultivo a la temperatura utilizada durante la centrifugación; y iii) recolectar los cuerpos de ácaro de la superficie del primer medio líquido y repetir la etapa ii) y iii) hasta que se ha obtenido la pureza deseada de los cuerpos de ácaro, seguido opcionalmente por iv) lavado de los cuerpos de ácaro para eliminar el primer líquido con un segundo líquido que no extrae el alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 de los cuerpos de ácaro a la temperatura utilizada durante la etapa de lavado.
Preferiblemente, el primero y el segundo líquido en el proceso anterior no contienen agua (son anhidros) para limitar la extracción de alérgenos del material fuente en la etapa de purificación del material fuente actual. En una modalidad, el método para el aislamiento y purificación de cuerpos de ácaro de la etapa ii) de someter una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der p o una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f a centrifugación por densidad en un primer medio líquido se realiza con un primer líquido que tiene iia) una densidad mayor que los cuerpos de ácaro y una densidad menor que las partículas de medio de cultivo, y iib) no extrae alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 de los cuerpos de ácaro a la temperatura utilizada durante la centrifugación; los líquidos adecuados comprenden derivados de ácido metrizoico (como iohexol, NycodenzMR (N-2,3-dihidroxipropilacetamido-2 , 4 , 6-tri-yodo-N-N-bis (2,3-dihidroxipropil ) ) , polipropilenglicoles (tales como ARCOLMR (polipropilenglicol 4000) , composiciones basadas en sílice (como RediGradMR) .
Es difícil evitar completamente cierta extracción de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 de los cuerpos de ácaro durante el proceso de centrifugación anterior. De acuerdo con la invención, los líquidos que no extraen alérgenos de grupo 1 y de grupo 2 de los cuerpos de ácaro son líquidos que no extraen alérgeno de grupo 1 y alérgeno de grupo 2 de los cuerpos de ácaro a la temperatura utilizada en la etapa ii) y iv) anterior en una cantidad que afecte gravemente el rendimiento final y la relación de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
La extracción de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 de los cuerpos de ácaro durante el proceso de centrifugación se puede reducir al llevar a cabo la centrifugación a una temperatura baja, por ejemplo, temperatura de congelamiento.
En una modalidad preferida, el líquido que tiene la densidad mayor que los cuerpos de ácaros y menor que las partículas de medio de cultivo es un líquido anhidro, por ejemplo glicerol anhidro.
El glicerol se puede separar de los cuerpos de acaro mediante lavado con etanol, preferiblemente etanol anhidro .
De manera adecuada, la etapa ii) y iii) se repiten una vez o la centrifugación en glicerol se repite hasta que la fracción de cuerpo de ácaro obtenida está constituida de por lo menos 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro, y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro, y la fracción de cuerpo de ácaro que contiene menos de 20% v/v partes de ácaro, partículas fecales y partículas de medio, y menos de 10% v/v de partículas de medio.
En vez de centrifugación de densidad con glicerol como se describe en la etapa ii) y iii) , la fracción de cuerpos de ácaros se puede purificar por separación con NaCl saturado como el primer líquido hasta que la fracción de cuerpo de ácaro está constituida de por menos 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferible más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro, y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro, y contiene menos de 20% v/v de partes de ácaro, partículas fecales y partículas de medio, y menos de 10% v/v de partículas de medio sin la necesidad para aplicar la etapa iv) .
En vez de la centrifugación de densidad, la fracción de cuerpo de ácaro se puede purificar por tamizado hasta que la fracción de cuerpo de ácaro esté constituida de por menos 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro, y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro, y que contiene menos de 20% v/v de partes de ácaro, partículas fecales y partículas de medio, y menos de 10% v/v de partículas de medio.
Los cuerpos de ácaro pueden en una dimensión ser mayores de 400 µp? de largo pero no obstante pueden ser capaces de pasar a través de un tamiz de 300 µp? y 400 µt? cuando se secan, antes del tamizado.
Los cuerpos de acaro tienen patas y pelo y se pueden separar de las partículas de medios de ácaros en un agitador de tamiz con movimiento circular horizontal. El método aprovecha la capacidad de los ácaros para formar grupos conformados con su pelo y sus patas cuando se mueven horizontalmente en el tamiz . En una torre de tamizado la cual se mueve horizontalmente en círculos los cuerpos de acaro son captados en la parte superior de los tamices de malla 200, 300 y/o 400 y de esta manera se separan de otras partículas de cultivo de acaro con un tamaño entre 150 y 300 µ??.
De esta manera, en una alternativa al método de centrifugación, la fracción rica en cuerpos de ácaros de entre 90 y 350 µt? aislada en el proceso de tamizado anterior se puede purificar por el siguiente método: 1) se tamizan cultivos de ácaro Der f o Der p en un agitador de tamiz vibratorio con una torre de un tamiz de 300, uno de 150 y uno de malla 80 µ?? seguido por aislamiento de una fracción rica en cuerpo de ácaros de entre 150 µ??? y 300 µ?? y una fracción rica en partículas fecales de ácaro inferior a 80 µp?, seguido por 2) tamizado de la fracción rica en cuerpo de ácaro (150 µp? y 300 µp?) en un agitador de tamiz con un movimiento horizontal y circular y con una torre con tamices de malla 200, 300 y/o 400 µp? y se aisla una o varias de las fracciones ricas en cuerpo capturadas por los tamices de malla de 200, 300 y/o 400 µtt?, seguido por 3) tamizado de la fracción rica en cuerpos en un agitador de tamiz que tiene un movimiento pasante 3D y un tamiz de malla 300, 200, 150 y 100 para producir una fracción de ácaro de malla entre 150 y 300 µt? y un extracto de partículas fecales de ácaro inferior a 100 µp?; y opcionalmente combinar la fracción de partículas fecales por debajo de 80 µp? desde el tamiz vibratorio y la fracción de partículas fecales por debajo de 10 µp? desde el tamiz dentro del movimiento pasante 3D y someter la fracción fecal combinada a tamizado en el tamiz con el movimiento pasante 3D y una torre de tamices de malla 100, 80 y 50 µt?.
Las fracciones de cuerpo de ácaro b) obtenidas en lo anterior también se pueden purificar por las etapas 2 y 3 en los procesos anteriores.
EXTRACCION Las fracciones de cuerpos de ácaro y partículas fecales de ácaro se extraen más o menos de la misma manera pero en procesos separados debido a las condiciones óptimas para extracción de cuerpos de ácaro no es la misma que para las partículas fecales de ácaro.
Con el fin de extraer alérgeno de los cuerpos de ácaro y las partículas fecales de estos, los cuerpos necesitan ser fracturados para liberar los alérgenos. El fracturado se puede obtener al aplicar una fuerza externa a una suspensión de cuerpos de ácaro.
De acuerdo con la invención, se ha encontrado que un mezclador de alto cizallamiento es particularmente eficaz para fracturar y liberar los alérgenos de los cuerpos de ácaro y las partículas fecales.
Así, de acuerdo con una modalidad de la invención, la extracción de alérgenos se lleva a cabo al suspender los cuerpos de ácaro o las partículas fecales de ácaro en un amortiguador con un mezclador de alto cizallamiento (típicamente, durante 15 a 30 minutos) y después permitir que se lleve a cabo la extracción sin mezclado (típicamente, durante 1-6 horas) .
La liberación de estos alérgenos es diferente para los cuerpos de ácaro y las partículas fecales . Los alérgenos de las partículas fecales se extraen después de 1 hora de extracción mientras que se necesitan por lo menos 3 horas para extraer alérgenos de los cuerpos de ácaro.
Los amortiguadores para extracción de alérgenos de ácaro son bien conocidos en el ámbito.
El material de fuente alergénico (cuerpo de ácaro y/o partículas fecales de ácaro) se pueden extraer, por ejemplo, utilizando un amortiguador de extracción que comprende NaCl 0.15 M, NaHC03 0.012 M y NaOH/HCl/agua para ajustar el pH. La extracción adecuadamente se lleva a cabo utilizando una relación entre el amortiguador de extracción respecto al material de fuente alergénica de 1:10 (p/p) un pH de 7-8, una temperatura entre 4-12°C y un tiempo de extracción de entre 1-6 horas.
Estos extractos se pueden someter a purificación adicional antes de que se utilicen en un producto farmacéutico.
El material insoluble remanente puede ser separado, por ejemplo, del extracto de partículas fecales de ácaro por centrifugación y clarificación. El extracto de partículas fecales de ácaro posteriormente se puede someter a un ultrafiltración realizada en tres etapas: primera concentración por eliminación de agua y otras partículas pequeñas mediante filtración en flujo tangencial, seguido por diafiltración para eliminar moléculas pequeñas y sales y posteriormente ajuste de materia seca.
El extracto de alérgeno posteriormente se puede clarificar por filtración de clarificación.
La purificación adicional de los extractos de cuerpos de ácaro adecuadamente involucran los siguientes procesos: separación utilizando diafiltración dejando material insolubles sobre la membrana y agregando continuamente agua al extracto sobre el otro lado de la membrana. El extracto posteriormente se somete a ultrafiltración y clarificación como se describe en lo anterior .
Los extractos se pueden estabilizar al formar esferas congeladas de extractos (criogránulos) como se describe en O 05/058474.
La concentración del alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 en los extractos de cuerpos de acaro y partículas fecales de acaro se puede medir por numerosos métodos utilizados habitualmente para la medición de contenido de alérgeno que incluyen, por ejemplo, ELISA, RID/SRID (siglas en inglés para inmunodifusión radial única) o por MS (siglas en inglés para espectrometría de masas, por ejemplo, como se describe en WO 2007/031080) véase también lo anterior.
El principio del procedimiento RID es que las proteínas (antígenos) aplicados en un pozo circular difunde hacia fuera formando un gradiente de concentración en un gel de agarosa que contiene el anticuerpo correspondiente. El anticuerpo usado en este procedimiento es monoespecífico (es decir, generado contra un antígeno específico) y policlonal lo que vuelve posible formar precipitados de complejos de antígeno-anticuerpo . El anticuerpo está presente en exceso y la difusión del antígeno continuará hasta que se alcance el punto de equivalencia y se forme un anillo de precipitados de antígeno-anticuerpo . Subsecuentemente, se tiñen los anillos de precipitación. El área del precipitado se mide y se puede interpolar la concentración de antígeno en muestra conocidas a partir de la curva de calibración generada con un estándar de referencia. El contenido mayor de alérgeno se determina en relación a la referencia estándar (véase, por ejemplo Allergy Methods and protocols, Jones and Lympany (2008), p. 138-141, p. 152-153 y p. 159-161).
Se pueden utilizar diferentes métodos de emparedado-ELISA (siglas en inglés para análisis inmunosorbente unido a enzima) para determinación del contenido de alérgeno mayor en Der p y Der far. Uno para determinación de Der f 1, uno para la determinación de Der p 1 y uno para la determinación del grupo 2 de Der puesto que los 2 alérgenos mayores del grupo 2 son inmunoquímicamente idénticos .
Los anticuerpos monoclonales específicos para el alérgeno mayor (Der f 1, Der p 1, Der grupo 2) se absorben en los pozos de una placa de microtitulación de 96 pozos. Los mAb reconocen epítopos sobre el alérgeno mayor y se unen al alérgeno presente en la muestra. El anticuerpo-antígeno unido se lava y se agrega un anticuerpo IgG anti-alérgeno mayor, de conejo, marcado con peroxidasa. Mediante la adición de un sustrato de enzima se desarrollará una reacción de color la cual es directamente proporcionada al contenido de alérgeno mayor unido. También se puede analizar una curva estándar en una corrida analítica y la actividad . de alérgeno mayor se interpola sobre la curva de calibración. Además del uso de un estándar interno, el Center for Biologics Evaluation and Research, bajo la FDA, utiliza una prueba de ELISA de competencia como se describe en "Potency Limits for Standardized Dust Mite and Grass Allergen Vaccines: A revised protocol. 2000 (http : //www . fda . gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceCompliance Regulatoryinformation/Guidances/Allergenics/ucm071931. htm) para el marcado de potencia de productos de alérgeno.
En otra modalidad preferida la concentración del alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 se mide por MS (siglas en inglés para espectrometría de masas) como se describe en WO 2007/031080 utilizando los siguientes péptidos estándar de calibración .
TNACSINGNAPAEIDLR (Der p 1) SEC ID NO : 1, NSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYWIM (Der f 1) SEC ID NO: 2, VLVPGCHGSEPCIIHR (Der p 2) SEC ID NO : 3, GKPFTLEALFDANQNTK (Der f 2) SEC ID NO : 4, y GIEYIQQNGWEER (Der f 1) SEC ID NO : 5.
Cuando la concentración del alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 se ha determinado para varios extractos de ácaro, los extractos de cuerpo de ácaro y extractos de partículas fecales se mezclan para obtener la relación en peso deseada entre el alérgeno del grupo 1 y del grupo 2.
La determinación de cual extracto y el peso del extracto que se va a mezclar es un proceso repetitivo en donde las cantidades en el peso de los extractos de diferentes lotes que se van a utilizar se determinan y se suministran como relleno de la siguiente fórmula para Der f hasta que se alcanza la relación deseada: relación de alérgeno mayor = total del grupo 1/total del grupo 2 = mfl x Cflgrpl + mbl x Cblgrpl + mf2 x Cf2grpl + /mfl x Cflgrp2 + mbl x Cblgrp2 + mf2 x Cf2grp2 + En donde mfl es una masa del primer extracto de partículas fecales Der f utilizadas, mf2 es la masa del segundo extracto fecal Der f usado, etc.. Cflgrpl es la concentración de alérgeno de grupo 1 en mfl, Cf2grpl es la concentración de alérgeno de grupo 1 en los segundos extractos fecales utilizados, mbl es el primer extracto de cuerpo de ácaro utilizado y Cblgrpl es la concentración de alérgeno grupo 1 en mbl. Cflgrp2 es la concentración de alérgeno del grupo 2 en mfl, Cblgrp2 es la concentración de alérgeno en mbl y Cf2grp2 es lá concentración de alérgeno del grupo 2 en mf2, etc...
Se utiliza una fórmula similar para Der p o para determinar cual y cuanto extracto mezclar para formar un extracto con la relación deseada de alérgeno de grupo 1 y grupo 2.
Los extractos individuales se recalientan y se mezclan de acuerdo con la fórmula anterior.
La mezcla de extractos de alérgeno se puede estabilizar y almacenar como gotitas congeladas, como se describe en el documento WO 05/0058474 o se utilizan directamente en una formulación.
Los extractos normalmente se someten a otros procesos de estandarización que involucran varias pruebas, por ejemplo, una prueba de potencia antes de que se liberen para la formulación.
La mezcla de extractos de alérgeno de ácaro se puede utilizar como el ingrediente activo en una formulación de dosis sólida para administración sublingual, como se describe en el documento WO 04/77994.
De manera alternativa, la mezcla de extractos de alérgeno se puede formular como una formulación líquida para administración sublingual como gotas. Tal formulación típicamente comprende aproximadamente 50% de glicerol, NaCl y NaOH.
La mezcla también se puede formular como una formulación líquida para inyección subcutánea. El extracto se puede administrar como una formulación líquida acuosa sin adyuvantes o con un adyuvante tal como hidróxido de aluminio.
Se pueden preparar alergoides mediante extractos reticulados con un agente de reticulación el cual típicamente es un aldehido, tal como glutaraldehído . Los procesos para la preparación de alergoides se conocen en el ámbito.
Modalidades adicionales de acuerdo con la invención : Modalidad 1. Un producto farmacéutico que comprende un extracto de alérgeno o un alergoide del mismo, el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpos de acaro que se seleccionan de los siguientes grupos a) -b) : a) un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y por lo menos un extracto de cultivos de ácaro que se seleccionan de los siguiente sgrupos c) -g) : c) un extracto de partículas fecales de Der p, d) un extracto de partículas fecales de Der f, e) un extracto de cultivo de ácaro completo Der f , f) un extracto de un cultivo de ácaro completo Der p, g) una combinación de extractos c) a f) .
Modalidad 2. Un producto farmacéutico que comprende un extracto de alérgeno o un alergoide del mismo, el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos a) -b) : a) un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro que se seleccionan de los siguiente sgrupos c)-d): c) un extracto de partículas fecales de Der p, d) un extracto de partículas fecales de Der f. Modalidad 3. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2, en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der p, y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f .
Modalidad 4. Un producto farmacéutico que comprende extracto de alérgeno, el cual comprende alérgenos que se seleccionan de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y en donde el alérgeno presente en la concentración más baja (p/v) en el extracto de alérgeno está presente en una concentración la cual es superior a 50% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 60% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 70% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 80% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 85% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 90% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 95% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera preferida más de 98% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , o de manera más preferida más de 99% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) .
Modalidad 5. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-4 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de partículas fecales de Der p.
Modalidad 6. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-4 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f.
Modalidad 7. El producto farmacéutico de acuerdo Con cualquiera de las modalidades 1-4 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de cuerpos de ácaro Der f .
Modalidad 8. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 7 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p, un extracto de partículas fecales Der , un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales Der f 2.
Modalidad 9. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 4-8, en donde el extracto de los cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der p, y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f.
Modalidad 10. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-9, en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der p o fracciones de cuerpo de ácaro Der p combinadas y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro resulta en un extracto que comprende, en peso, cantidades iguales de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 o más alérgeno de grupo 2 que alérgeno de grupo 1 y/o el extracto de los cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der f o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f combinadas y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro resulta en un extracto que comprende en peso cantidades iguales en peso de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 o más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1.
Modalidad 11. El. producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-10, en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der , y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f .
Modalidad 12. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-11, en donde el extracto de partículas fecales de Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de partículas fecales de Der p, de manera preferida más de 95% v/v de partículas fecales de Der p, de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der p, y/o el extracto de partículas fecales de Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de acaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f, de modo preferido más de 75% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 80% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 95% v/v, de manera más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der f .
Modalidad 13. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 12, en donde una fracción o las fracciones combinadas de cuerpos de ácaro y/o en donde una fracción o las fracciones combinadas de partículas fecales de ácaro comprenden cada una menos de 10% v/v de medio de cultivo de ácaros .
Modalidad 14. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 13, en donde la fracción de cuerpo de ácaro o las fracciones de cuerpo combinadas comprenden hasta 20% v/v de las partes de ácaro (por ejemplo, las patas) , partículas fecales y medio de ácaros.
Modalidad 15. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 12-14, en donde la fracción fecal de ácaro o las fracciones fecales combinadas comprenden hasta 20% v/v de partes de ácaros (por ejemplo, patas) , y medio de ácaros .
Modalidad 16. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-15, en donde la cantidad en peso de alérgeno de grupo 1 es menor que la cantidad en peso de alérgeno de grupo 2 en los extractos de cuerpo de ácaro y la cantidad en peso de alérgeno de grupo 1 es mayor que la cantidad en peso de alérgeno de grupo 2 en los extractos de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 17. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-16 que comprende extracto de alérgeno, el cual comprende alérgenos que se seleccionan de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y en donde el alérgeno presente en la concentración más baja (p/v) en el extracto de alérgeno está presente en una concentración la cual es superior a 50% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 60% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 70% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 80% de la concentración de alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 85% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 90% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 95% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera preferida más de 98% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , o de manera más preferida más de 99% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) .
Modalidad 18. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-17, en donde el producto farmacéutico es una o varias tabletas sublinguales comprimidas o no comprimidas que comprenden uno o varios extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos, y un producto sublingual líquido que comprende a uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos o un producto líquido para inyección que comprende uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos .
Modalidad 19. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 18, en donde el producto farmacéutico es una tableta sublingual de disolución rápida la cual incorpora un extracto .
Modalidad 20. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-19, que comprende además un extracto de un cultivo de ácaro completo o una o varias fracciones de cuerpo que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro .
Modalidad 21. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-20, para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero y/o para el diagnóstico de alergia.
Modalidad 22. El uso del producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-21, para la preparación de un producto médico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero y/o para el diagnóstico de alergia.
Modalidad 23. Una fracción de cuerpo de ácaro que comprende más de 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de acaro y de manera más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro .
Modalidad 24. La fracción de cuerpo de ácaro de acuerdo con la modalidad 23, en donde los cuerpos de ácaro son cuerpos de ácaro Der p o cuerpos de ácaro Der f .
Modalidad 25. La fracción de cuerpo de ácaro con cualquiera de las modalidades 23-24 que contienen menos de 10% v/v de partículas de medio de cultivo.
Modalidad 26. La fracción de cuerpo de ácaro con cualquiera de las modalidades 23-25 que comprende menos de 20% v/v de partes de ácaro, partículas fecales y medio de ácaros .
Modalidad 27. Un extracto de una fracción de cuerpo de ácaro como se define en cualquiera de las modalidades 23-26 para uso en un producto farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
Modalidad 28. Una fracción de partícula fecal de ácaro que comprende más de 70% v/v de partículas fecales, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales, de manera más preferida más de 80% v/v de partículas fecales, preferiblemente, más de 85% v/v de partículas fecales, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales, de manera preferida más de 95% v/v de partículas fecales, de manera más preferida más de 98% v/v de partículas fecales.
Modalidad 29. La fracción de partícula fecal de caro de acuerdo con la modalidad 28, en donde las partículas fecales son partículas fecales de Der p o partículas fecales de Der f .
Modalidad 30. La fracción de partículas fecales de ácaro de acuerdo con cualquiera de las modalidades 28-29 que comprende hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) y medio de ácaros .
Modalidad 31. Un extracto de una fracción de partículas fecales de ácaro como se define en cualquiera de las modalidades 28-30 para uso en un producto farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
Modalidad 32. El uso de un extracto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 27 y 31 para la preparación de un producto farmacéutico para uso en un producto farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
Modalidad 33. Un método para manufactura de un extracto de alérgeno de ácaro que comprende el alérgeno Der p 1 y Der p 2, método el cual comprende las siguientes etapas: a. aislar una o varias fracciones de los cuerpos de ácaro Der p de cultivos de ácaros Der p, en donde una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de acaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de acaro Der p, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de acaro Der p, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der p; b. opcionalmente combinar varias de las fracciones de cuerpos de ácaro Der p; y c . extraer alérgenos de una o varias de las fracciones de cuerpo de ácaro Der p obtenidas en la etapa a) o en etapa b) como en lo anterior para obtener el extracto de alérgeno de ácaro.
Modalidad 34. Un método para la manufactura de un extracto de alérgeno de ácaro que comprende los alérgeno Der f 1 y Der f 2, método el cual comprende las siguientes etapas : a. aislamiento de una o varias fracciones de cuerpos de ácaro Der f a partir de cultivos de ácaros Der f, en donde una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f , de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f; b. opcionalmente combinar varias de las fracciones de cuerpos de ácaro Der f; y c . extraer alérgenos de una o varias de las fracciones de cuerpo de ácaro Der f obtenidas en la etapa a) o en etapa b) como en lo anterior para obtener el extracto de alérgeno de ácaro.
Modalidad 35. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-34, método el cual comprende además la siguiente etapa: mezclar uno o más extractos de alérgeno de ácaro de la modalidad 33 con uno o más extractos de alérgeno de ácaro de la modalidad 34 para obtener una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro que comprende los alérgenos Der p 1, Der p 2, Der f 1 y Der f 2.
Modalidad 36. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-35, método el cual comprende además las siguientes etapas: a. aislar una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der p de cultivos de ácaros Der p; b. opcionalmente combinar varias de las fracciones de las partículas fecales de ácaro Der p; c . extraer alérgeno de una o varias de las fracciones de partículas fecales de ácaro Der p obtenidas en la etapa a) o la etapa b) como en lo anterior; y d. mezclar uno o más extractos de alérgeno de ácaro de cualquiera de las modalidades 33-35 con uno o más extractos de partículas fecales como se obtienen en la etapa c) anterior para obtener una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro.
Modalidad 37. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-36, método el cual comprende además las siguientes etapas: a. aislar una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der f del cultivo de ácaros Der f ; b. opcionalmente combinar varias de las fracciones de las partículas fecales de ácaro Der f; c. extraer alérgeno de una o varias de fracciones de partículas fecales de ácaro Der f obtenidas en la etapa a) o la etapa b) como en lo anterior; y d. mezclar uno o más extractos de alérgeno de ácaro de cualquiera de las modalidades 33-35 con uno o más extractos de partículas fecales como se obtienen en la etapa c) anterior para obtener una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro.
Modalidad 38. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-37, método el cual comprende además la siguiente etapa: mezclar uno o más extractos de alérgeno de ácaro de la modalidad 33 y la modalidad 34 con uno o más extractos de alérgeno de ácaro de la etapa c en la modalidad 36 y de la etapa c en la modalidad 37 para obtener una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro que comprenden los alérgenos Der p 1, Der p 2, Der f 1 y Der f 2.
Modalidad 39. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-38, en donde el extracto de alérgeno de ácaro obtenido se convierte a un alergoide del mismo.
Modalidad 40. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-39, método el cual comprende una etapa adicional de a. medir la concentración (p/v) de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 en los extractos de alérgeno de ácaro de la etapa c) de cualquiera de las modalidades 33-34 y 36-37.
Modalidad 41. El método de acuerdo con la modalidad 40, método el cual comprende una etapa adicional de e) mezclar uno o más extractos de cuerpos de ácaro de la etapa c) de cualquiera de las modalidades 33-34 con uno o más extractos de partículas fecales de la etapa c) de cualquiera de las modalidades 36-37 para obtener una mezcla de extractos de alérgeno de ácaro con una cantidad predeterminada en peso de alérgeno de grupo 1 a grupo 2.
Modalidad 42. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-41, en donde la mezcla de extracto de alérgeno de ácaro comprende uno o varios extractos de los cuerpos de ácaro Der p, uno o varios extractos de partículas fecales de Der p, uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der f y uno o varios extractos de partículas fecales de Der f 2.
Modalidad 43. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-42, en donde más de una de las fracciones de cuerpos de ácaro se combinan de acuerdo con la etapa b) seguido por extracción de acuerdo con. la etapa c) de la modalidad 33 y/o 34.
Modalidad 44. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-43, en donde más de una fracción de partículas fecales se combinan de acuerdo con la etapa b) seguido por la extracción de acuerdo con la etapa c) de la modalidad 36 y/o 37.
Modalidad 45. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-44, en donde uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en la etapa c) de la modalidad 33 y/o 34 se mezclan en una etapa e) con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) de la modalidad 36 y/ 37.
Modalidad 46. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-45, en donde uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en la etapa c) de la modalidad 33 y/o 34 se mezclan en una etapa e) con un extracto de partículas fecales de ácaro obtenido en una etapa c) de la modalidad 36 y/o 37.
Modalidad 47. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-46, en donde un extracto de cuerpos de ácaro obtenido en una etapa c) de la modalidad 33 y/o 34 se mezcla en una etapa con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) de la modalidad 36 y/ 37.
Modalidad 48. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-47, en donde uno o varios de los extractos de cuerpo de ácaro se suplementa con una cantidad en peso de extracto de partículas fecales, un extracto de cuerpo de una fracción de cuerpo de menos de 70% v/v o un extracto de cultivo total, el cual es suficiente para obtener una relación en peso deseada de alérgeno grupo 1 respecto a grupo 2 en la mezcla de extractos de alérgeno de ácaro.
Modalidad 49. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-48, en donde el extracto de partículas fecales Der p en la etapa c) de la modalidad 36 se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales Der p, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales Der p, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales Der p, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales Der p, de manera más preferida más de 95% v/v de partículas fecales Der p, de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales Der p y/o el extracto de partículas fecales Der f en la etapa c) de la modalidad 37 se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de acaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales Der f, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales Der f, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales Der f, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales Der f, de manera preferida más de 95% v/v, de manera más preferida más de 98% v/v de partículas fecales Der f.
Modalidad 50. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-49, en donde una fracción de los cuerpos de ácaro en la etapa a) o las fracciones combinadas de cuerpos de ácaro en la etapa b) de la modalidad 33 y/o 34 y/o en donde una fracción de las partículas fecales en la etapa a) o las fracciones combinadas de partículas fecales de ácaro en la etapa b) de la modalidad 36 y/o 37 comprende, cada uno, menos de 10% v/v de medio de cultivo de ácaros .
Modalidad 51. El método de acuerdo con la modalidad 50, en donde la fracción de cuerpo de ácaro en la etapa a) o las fracciones de cuerpo combinadas en la etapa b) de la modalidad 33 y/o 34 comprende hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) , partículas fecales y medio de ácaros .
Modalidad 52. El método de acuerdo con la modalidad 50, en donde la fracción fecal de acaro en la etapa a) o las fracciones fecales combinadas en la etapa b) de la modalidad 36 y/o 37 comprende hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) y medio de ácaros .
Modalidad 53. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-52, en donde una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro de la modalidad 33 y/o 34 y una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro en la etapa a) de la modalidad 36 y/o 37 se aislan de uno o varios cultivos de ácaro por tamizado de uno o varios cultivos de caro Der p y/o Der f para producir una fracción de cuerpo de ácaro b) y una fracción de partículas fecales de ácaro d) .
Modalidad 54. El método de acuerdo con la modalidad 33-53, en donde una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro y una o varias de las fracciones de las partículas fecales de ácaro se obtienen por tamizado de uno o varios de los cultivos de ácaro Der p y/o Der f para producir cuatro fracciones: a. partículas grandes y medias > 350 µt? b. fracción de cuerpo de ácaro 350-90 µp? c. aglomerados fecales y partes de ácaro 90-50 µt? d. partículas fecales < 50 µp? e. la fracción a) y c) se desechan, la fracción d) y b) opcionalmente se somete a purificación adicional o se utiliza directamente para extracción.
Modalidad 55. El método de acuerdo con la modalidad 54, en donde la fracción de cuerpo de ácaro b) es: ii) sometida a centrifugación de densidad en un primer medio líquido que tiene una densidad mayor que los cuerpos de ácaro y una densidad menor que las partículas de medio de cultivo; seguido por iii) recolección de los cuerpos de ácaro del primer medio líquido y repetir la etapa ii) y iii) hasta que se haya alcanzado la pureza deseada de los cuerpos de ácaro, seguido opcionalmente por iv) lavado de los cuerpos de ácaro para remover el primer líquido con un segundo líquido.
Modalidad 56. Un método para el aislamiento y purificación de los cuerpos de ácaro, que comprende las etapas de : i) aislar una o varias fracciones de cuerpo de ácaro de uno o varios cultivos de ácaro Der p o Der f y ii) someter una o más de las fracciones de cuerpo de ácaro Der p o una o más de las fracciones de cuerpo de ácaro Der f a centrifugación de densidad en un primer medio líquido que tiene una densidad mayor que la de los cuerpos de ácaro y una densidad menor que la de las partículas de medio de cultivo; y iii) recolectar los cuerpos de ácaro del primer medio líquido y repetir la etapa ii) y iii) hasta que se haya obtenido la pureza deseada de los cuerpos de acaro, opcionalmente seguido por iv) lavado de los cuerpos de acaro para eliminar el primer líquido con un segundo líquido.
Modalidad 57. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-56, en donde el primero y segundo líquidos son anhidros, preferiblemente líquidos farmacéuticamente aceptables.
Modalidad 58. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-57, en donde el primer líquido es glicerol anhidro.
Modalidad 59. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-58, en donde el segundo líquido es etanol anhidro .
Modalidad 60. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-59, en donde la etapa ii) y iii) se repiten una vez.
Modalidad 61. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-60, en donde la etapa ii) y iii) se repiten hasta que la fracción de cuerpo de caro obtenido comprende por lo menos 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de acaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro.
Modalidad 62. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 55-61, en donde la purificación de la fracción de cuerpo de ácaro continúa hasta que la fracción de cuerpo de ácaro contiene menos de 10% v/v de partículas de medio de cultivo.
Modalidad 63. El método de la modalidad 62, en donde la purificación del cuerpo de ácaro continúa hasta que está presente menos de 20% v/v de partes de ácaro, partículas fecales y medio de ácaro.
Modalidad 64. El método de cualquiera de las modalidades 33-63, en donde las fracciones de cuerpos de ácaro Der f, fracciones de cuerpos de ácaro Der p, una o varias fracciones de partículas fecales Der p y/o fracciones de partículas fecales Der f en la etapa a) de cualquiera de la modalidad 33-34 y 36-37 se aisla por un proceso de tamizado que comprende: 1) tamizar cultivos de ácaro Der f o Der p en un agitador de tamiz vibratorio con una torre de un tamiz de malla de 300, uno de 150 y uno de 80 µp? seguido por aislamiento de una fracción rica en cuerpo de ácaro entre 150 µ?t? y 300 µp? y una fracción rica en partículas fecales de acaro inferior a 80 µp?, seguido por 2) tamizado de la fracción rica en cuerpos de ácaro (150 µ?t? y 300 µ??) en un agitador se tamiza con un movimiento horizontal y circular y con una torre de tamices 5 de malla 200, 300 y/o 400 µp? y aislar una o varias de las fracciones de cuerpo retenidas por los tamices de malla de 200, 300 y/o 400 µ??, .seguido por 3) tamizado de la fracción rica en cuerpo en un agitador de tamiz que tiene un movimiento de lanzamiento 3D y 10 un tamiz de malla 300, 200, 150 y 100 para producir una fracción de cuerpos de ácaro entre la malla 150 y 300 µp? y un extracto de partículas fecales de ácaro inferior a 100 µt?; y 4) opcionalmente combinar la fracción de I_b_ partículas fecales inferiores a 80 µ?? desde el tamiz vibratorio y la fracción de partículas fecales inferiores a 100 µp? desde el tamiz con el movimiento de lanzamiento 3D y someter la fracción fecal combinada a tamizado en el tamiz con el movimiento de lanzamiento 3D y una torre de tamices de 20 malla 100, 80, 50 µp? y aislar la fracción rica en partículas fecales inferior a 50 µ??.
Modalidad 65. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33-64, en donde los extractos o mezcla de extractos obtenidos se formulan en un producto farmacéutico 25 tal como una o varias tabletas sublinguales comprimidas o no comprimidas que comprenden uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos, un producto sublingual líquido que comprende uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos, o un producto líquido para inyección que comprende uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos .
Modalidad 66. El método de acuerdo con la modalidad 65, en donde el producto farmacéutico es una tableta sublingual que se disuelve rápidamente la cual comprende un extracto.
Modalidad 67. Un producto farmacéutico preparado por un método como se define en cualquiera de las modalidades 33.67.
Modalidad 68. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 67 para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
Modalidad 69. Un extracto de alérgeno de una serie de extractos de alérgeno para uso en un producto de alérgeno farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de acaro, y por lo menos un extracto de partículas fecales de acaro, o un extracto de cuerpo de acaro a partir de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro o un extracto de cultivo de ácaro total, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y grupo 2, y en donde el coeficiente de varianza de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 o 7.5% para la serie de extractos.
Modalidad 70. Un extracto de alérgeno de una serie de extractos de alérgeno para uso en un producto de alérgeno farmacéutico para el diagnóstico de alergia causada por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro, o un extracto de cuerpo de ácaro a partir de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro o un extracto de cultivo de ácaro total, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y grupo 2, y en donde el coeficiente de varianza de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 o 7.5% para la serie de extractos .
Modalidad 71. El extracto de alérgeno de acuerdo con cualquiera de las modalidades 69-70, en donde la cantidad en peso de alérgeno de grupo 1 es menor que la cantidad en peso de alérgeno de grupo 2 en los extractos de cuerpo de ácaro y la cantidad en peso de alérgeno de grupo 1 es mayor que la cantidad en peso de alérgeno de grupo 2 en los extractos de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 72. El extracto de alérgeno de acuerdo con cualquiera de las modalidades 69-71, en donde el extracto de alérgeno es como se define en cualquiera de las modalidades 1-32.
Modalidad 73. El extracto de alérgeno de acuerdo con cualquiera de las modalidades 69-71, en donde el extracto de alérgeno se prepara como se define en cualquiera de las modalidades 33-66.
Modalidades adicionales de acuerdo con la invención: Modalidad 1. Un producto farmacéutico que comprende un extracto (I) de alérgeno o un alergoide del mismo para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero que comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y opcionalmente por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro que se selecciona de los siguientes grupos a) -d) : a) un extracto de cuerpos de ácaro Der p, b) un extracto de partículas fecales de Der p, c) un extracto de cuerpos de ácaro Der f, y d) un extracto de partículas fecales Der f .
Modalidad 2. Un producto farmacéutico que comprende extracto (I) de alérgeno para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero que comprende alérgenos que se seleccionan de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y en donde el alérgeno presente en la concentración más baja (p/v) en el extracto (I) de alérgeno está presente en una concentración la cual está por encima de 50% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 60% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 70% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida por encima de 80% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 85% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 90% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida más de 95% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera preferida más de 98% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , o de manera más preferida más de 99% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) .
Modalidad 3. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro.
Modalidad . El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 3 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p, un extracto de partículas fecales de Der p, un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales Der f 2.
Modalidad 5. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de partículas fecales de Der p y sin extractos de cuerpos de ácaro Der f y sin extractos de partículas fecales de Der f .
Modalidad 6. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f y sin extractos de cuerpos de ácaro Der p y sin extractos de partículas fecales de Der p.
Modalidad 7. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de cuerpos de ácaro Der f y sin extractos de partículas fecales de ácaro .
Modalidad 8. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y sin extracto de cuerpos de ácaro Der f y sin extracto de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 9. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-2 que comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der f y sin extracto de extracto de cuerpos de ácaro Der p y sin extractos de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 10. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-9, en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der p o fracciones de cuerpo de ácaro Der p combinadas y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro resulta en un extracto que comprende, en peso, cantidades iguales de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 o más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1 y/o el extracto de los cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der f o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f combinadas y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de cuerpos de acaro resulta en un extracto que comprende en peso cantidades iguales en peso de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 o más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1.
Modalidad 11. Un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-10, en donde el extracto de cuerpos de acaro Der p se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de acaro Der p, el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f, el extracto de partículas fecales de Der p se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de caro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de partículas fecales de Der p, de manera preferida más de 95% v/v de partículas fecales de Der p, de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der p, y/o el extracto de partículas fecales de Der f se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f, de modo preferido más de 75% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 80% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 95% v/v, de manera más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der f .
Modalidad 12. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 11, en donde una fracción o las fracciones combinadas de cuerpos de ácaro y/o en donde una fracción o las fracciones combinadas de partículas fecales de ácaro comprenden, cada una, menos de 10% v/v del medio de cultivo de ácaro .
Modalidad 13. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 12, en donde la fracción de cuerpo de ácaro o las fracciones de cuerpo combinadas comprenden hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) , partículas fecales y medio de ácaro.
Modalidad 14. El producto farmacéutico de acuerdo con la modalidad 12, en donde la fracción fecal de ácaro o las fracciones fecales combinadas comprenden hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) y medio de ácaro.
Modalidad 15. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-14, en donde la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 es menor que la cantidad en peso de alérgeno del grupo 2 en los extractos de cuerpo de ácaro y la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 es mayor que la cantidad en peso de alérgeno del grupo 2 en los extractos de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 16. El producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1, 3, 15, que comprende extracto de alérgeno (I) , para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero que comprende alérgenos que se seleccionan de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y en donde el alérgeno presente en la concentración más baja (p/v) en el extracto de alérgeno (I) , está presente en una concentración la cual es superior a 50% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 60% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2, presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 70% de la concentración del alérgeno seleccionado de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 80% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 85% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 90% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera más preferida superior a 95% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , de manera preferida superior a 98% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) , o de manera más preferida superior a 99% de la concentración del alérgeno que se selecciona de Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 presente en la concentración más alta (p/v) .
Modalidad 17. El producto farmacéutico de acuerdo con las modalidades 1-16, en donde el producto farmacéutico es una o varias tabletas sublinguales comprimidas o no comprimidas que comprenden el extracto (I) o alergoides preparados a partir de un extracto (I) en una forma sólida, un producto sublingual líquido o un producto líquido para inyección que comprende el extracto (I) o alergoides preparados a partir del extracto (I) , preferiblemente el producto farmacéutico es una tableta sublingual que se disuelve rápidamente la cual comprende un extracto (I) en forma sólida.
Modalidad 18. Un método para la manufactura de un alérgeno de ácaro de extracto de alérgeno (I) o alergoides del mismo para un producto farmacéutico de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1-10 y 15-16, el extracto de alérgeno (I) tiene una cantidad predeterminada y controlada en peso de alérgenos que se seleccionan de alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y que comprende las siguientes etapas : a) las fracciones de los cuerpos de ácaro Der p y/o fracciones de partículas fecales de ácaro Der p se aislan de cultivos Der p, o ácaros, y/o fracciones de cuerpos de ácaro Der f y/o fracciones de partículas fecales de ácaro Der f se aislan de cultivos de ácaro Der f; b) opcionalmente combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der f y opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der f; c) extraer alérgenos de una o varias fracciones de cuerpo de ácaro obtenidas en la etapa a) o en la etapa b) como en lo anterior y/o extracción de alérgenos de una o varias fracciones de partícula fecal de ácaro obtenidas en la etapa a) o la etapa b) como en lo anterior; y posteriormente d) medir la concentración (p/v) de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 en extractos de alérgeno de ácaro obtenidos en la etapa c) como en lo anterior; y opcionalmente e) mezclar uno o más extractos de cuerpos de ácaro con uno o más extractos de partículas fecales como se obtienen en la etapa c) como en lo anterior para obtener una mezcla de extractos de alérgeno (I) con una cantidad predeterminada en peso de alérgeno del grupo 1 respecto al grupo 2, y opcionalmente f) convertir el extracto (I) a un alergoide del mismo .
Modalidad 19. El método de acuerdo con la modalidad 18, en donde uno o más extractos de cuerpo de ácaro y uno o más extractos de partículas fecales se muestran para obtener una mezcla de extractos de alérgeno (I) .
Modalidad 20. El método de acuerdo con las modalidades 18-19, en donde la mezcla de extracto de alérgeno de ácaro (I) comprende uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der p, uno o varios extractos de partículas fecales de Der p, extractos de cuerpos de ácaro Der f y uno o varios extractos de partículas fecales de Der f 2.
Modalidad 21. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-20, en donde más de una de las fracciones de cuerpos de ácaro se combinan de acuerdo con la etapa b) seguido por extracción de acuerdo con la etapa c) .
Modalidad 22. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-21, en donde más de una fracción de partículas fecales se combinan de acuerdo con la etapa b) seguido por extracción de acuerdo con la etapa c) .
Modalidad 23. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-22, en donde uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en una etapa c) se mezclan en una etapa e) con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
Modalidad 24. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-23, en donde uno o más extractos de cuerpos de ácaro obtenidos en una etapa c) se mezclan en una etapa e) con un extracto de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
Modalidad 25. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-24, en donde un extracto de cuerpos de ácaro obtenido en una etapa c) se mezcla en una etapa e) con uno o más extractos de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa c) .
Modalidad 26. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-25, en donde uno o varios de los extractos de cuerpo de ácaro se suplementa con una cantidad en peso de extracto de partículas fecales la cual es suficiente para obtener la relación en peso deseada de alérgeno del grupo 1 respecto a alérgeno del grupo 2 en la mezcla de extractos de alérgeno de ácaro (I) .
Modalidad 27. Un método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 14-26, en donde el extracto de los cuerpos de ácaro Der p en la etapa c) se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más del 70% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der p, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der p, de modo preferido, más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der p, el extracto de cuerpos de ácaro Der f en la etapa c) se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivo de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 75% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 80% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro Der f, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro Der f, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f y preferiblemente más de 98% v/v de cuerpos de ácaro Der f, el extracto de partículas fecales de Der p en la etapa c) se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales de Der p, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales de Der p, de manera más preferida más de 95% v/v de partículas fecales de Der p y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der p y/o el extracto de partículas fecales de Der f en la etapa c) se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 85% v/v de partículas fecales de Der f, preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales de Der f, de manera preferida más de 95% v/v, de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales de Der f.
Modalidad 28. El método de acuerdo con la modalidad 27, en donde una fracción de los cuerpos de ácaro en la etapa a) o las fracciones combinadas de cuerpos de ácaro en la etapa b) y/o en donde una fracción de las partículas fecales en la etapa a) o las fracciones combinadas de las partículas fecales de ácaro en la etapa b) comprenden cada una menos de 10% v/v de medio de cultivo de ácaro.
Modalidad 29. El método de acuerdo con la modalidad 28, en donde la fracción de cuerpo de ácaro en la etapa a) o las fracciones de cuerpo combinadas en la etapa b) comprenden hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas), partículas fecales y medio de ácaro.
Modalidad 30. El método de acuerdo con la modalidad 29, en donde la fracción fecal de ácaro en la etapa a) o las fracciones fecales combinadas en la etapa b) comprenden hasta 20% v/v de partes de ácaro (por ejemplo, patas) y medio de ácaro.
Modalidad 31. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-30, en donde una o varias de las fracciones de cuerpos de ácaro y las fracciones de partículas fecales de ácaro en la etapa a) de la modalidad 18 se aislan de uno o varios cultivos de ácaro por tamizado de los cultivos de ácaro Der p y/o Der f para producir una fracción de cuerpo de ácaro b) y una fracción d) de partículas fecales de ácaro.
Modalidad 32. El método de acuerdo con la modalidad 31, en donde una o varias de las fracciones de los cuerpos de ácaro y una o varias de las fracciones de partículas fecales de ácaro se obtienen por tamizado de uno o varios de los cultivos de ácaro Der p y/o Der f para producir cuatro fracciones: a) partículas grandes medias > 350 m b) fracción de cuerpo de ácaro 350-90 µ?t? c) aglomerados fecales y partes de ácaro 90-50 pm preparadas d) partículas fecales < 50 m la fracción a) y c) se desechan, la fracción d) se utiliza directamente para extracción y la fracción b) se somete a purificación adicional. Modalidad 33. Un método para el aislamiento y purificación de cuerpos de acaro, que comprende las etapas de: i) aislar una o varias fracciones de cuerpo de ácaro a partir de uno o varios cultivos de acaro Der p o Der f y ii) someter una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der p o una o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f a centrifugación de densidad en un primer medio líquido que tiene iia) una densidad mayor que los cuerpos de ácaro y una densidad menor que las partículas de medio de cultivo, y iib) no extraen alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 de los cuerpos de ácaro ; y iii) recolectar los cuerpos de ácaro de la superficie del primer medio líquido y repetir la etapa ii) y iii) hasta que se ha obtenido la pureza deseada de los cuerpos de ácaro, opcionalmente seguido por iv) lavado de los cuerpos de ácaro para eliminar el primer líquido con un segundo líquido que no extrae alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 de los cuerpos de ácaro.
Modalidad 34. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 31-32, en donde la fracción de cuerpo de ácaro b) es: ii) sometida a centrifugación de densidad en un primer medio líquido que tiene iia) una densidad mayor que los cuerpos de ácaro y una densidad menor que las partículas de medio de cultivo, y iib) que no extrae alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 de los cuerpos de ácaro; seguido por iii) recolección de los cuerpos de ácaro de la superficie del primer medio líquido y repetir la etapa ii) y iii) hasta que se ha obtenido la pureza deseada de los cuerpos de ácaro, opcionalmente seguido por iv) lavado de los cuerpos de ácaro para eliminar el primer líquido con un segundo líquido que no extrae alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 de los cuerpos de ácaro.
Modalidad 35. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 33 ó 34, en donde el primero y segundo líquidos son anhidros, preferiblemente líquidos farmacéuticamente aceptables .
Modalidad 36. Un método de acuerdo con la modalidad 35, en donde el primer líquido es glicerol anhidro.
Modalidad 37. Un método de acuerdo con la modalidad 36, en donde el segundo líquido es etanol anhidro.
Modalidad 38. El método de acuerdo con la modalidad 33-37, en donde la etapa ii) y iii) se repite una vez .
Modalidad 39. El método de cualquiera de las modalidades 33-37 en donde la etapa ii) y iii) se repiten hasta que la fracción de cuerpo de ácaro obtenida comprende por lo menos 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida, más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente, más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida, más de 95% v/v de cuerpos de ácaro y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro.
Modalidad 40. El método de la modalidad 31-33 y 38-39, en donde la purificación de la fracción de cuerpo de ácaro continúa hasta que la fracción de cuerpo de ácaro contiene menos de 10% v/v de partículas de medio de ácaros .
Modalidad 41. El método de la modalidad 40, en donde la purificación del cuerpo de ácaro continúa hasta que menos de 20% v/v de partes de ácaro, partículas fecales y medio de ácaro está presente.
Modalidad 42. Una fracción de cuerpo de ácaro que comprende más de 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro.
Modalidad 43. Una fracción de cuerpo de ácaro de acuerdo con la modalidad 42, que contiene menos de 10% v/v de partículas de medio de cultivo.
Modalidad 44. Una fracción de cuerpo de ácaro de acuerdo con la modalidad 43, que comprende menos de 20% v/v de partes de caro, partículas fecales y medio de acaro.
Modalidad 45. El método de cualquiera de las modalidades 18-30, en donde las fracciones de cuerpos de ácaro Der f, fracciones de cuerpos de ácaro Der p 1, una o varias fracciones de partículas fecales de Der p y/o fracciones de partículas fecales de Der f en la etapa 18a) se aislan por un proceso de tamizado que comprende: 1) Tamizar cultivos de ácaros Der f o Der p en un agitador de tamiz vibratorio con una torre de un tamiz de malla 300, uno de 150 y uno de 80 pm seguido por aislamiento de una fracción rica en cuerpo de ácaros entre 150 pm y 300 pm y una fracción rica en partículas fecales de ácaro inferior a 80 pm, seguido por 2) tamizado de la fracción rica en cuerpo de ácaros (150 pm y 300 pm) en un agitador de tamiz con un movimiento horizontal y circular y con una torre de tamices de malla 200, 300 y/o 400 pm y aislar una o varias fracciones del cuerpo aisladas por los tamices de malla 200, 300 y/o 400 pm, seguido por 3) tamizado de la fracción rica en cuerpo en un agitador de tamiz que tiene un movimiento de lanzamiento 3D y un tamiz de malla 300, 200, 150 y 100 para producir una fracción de cuerpo de ácaro en malla en 350 y 300 pm y un extracto de partículas fetales de ácaro inferior a 100 pm; y 4) opcionalmente combinar la fracción de partículas fecales inferiores a 80 ym del tamiz vibratorio y la fracción de partículas fecales inferior a 100 ym del tamiz con el movimiento de lanzamiento 3D y someter la fracción fecal combinada a tamizado en un tamiz con el movimiento de lanzamiento 3D y una torre de tamices de malla de 100, 80, 50 ym y aislar la fracción rica en partículas fecales soplada de 50 ym.
Modalidad 46. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 18-41 y 45, en donde la mezcla de extractos (I) obtenida se formula como una o varias tabletas sublinguales comprimidas o no comprimidas que comprenden el extracto (I) o alergoides preparados del extracto (I) en una forma sólida, un producto sublingual líquido o un producto líquido para inyección que comprende el extracto (I) o alergoides preparados a partir del extracto (I) , preferiblemente el producto farmacéutico es una tableta sublingual que se disuelve rápido la cual comprende un extracto (I) en forma sólida.
SECCION EXPERIMENTAL EJEMPLO 1: 1.0 Cultivo de ácaros Los ácaros Der p y Der f se cultivan por separado en un medio adecuado con partículas de medio las cuales son de tamaño e integridad suficientes para resistir los rigores de procesamiento posterior y pueden ser eliminadas fácilmente a través del proceso de cribado primario. El medio de ácaro adecuadamente contiene una fuente de proteínas, carbohidratos, minerales, aceite, vitaminas y un conservador.
Los ácaros se matan al congelarlos a -20 °C ± 5°C cuando se ha alcanzado el crecimiento óptimo. 1.1 Purificación de los cuerpos de ácaros y partículas fecales de ácaro.
El cultivo de ácaro (Der p o Der f) se seca hasta un contenido de humedad inferior a 15% y se tamiza para producir cuatro fracciones : 1) partículas grandes -medias > 350 µp? 2) fracción de cuerpo de ácaro 350-90 im 3) aglomerados fecales y partes de ácaro 90-50 \im 4) partículas fecales < 50 µ?a Se utiliza una unidad de tamizado automatizada para el cribado del cultivo de ácaros seco. El tamizado utiliza una rotación en ángulos y velocidad establecidos para obtener fracciones. El cribado que produce las fracciones 1, 2 y 3 anterior puede ser deslindado durante el tamizado. Los finos (fracción 4) se recolectan en la bandeja del fondo de la unidad de tamizado.
Las partículas grandes y medias en la fracción 1 y los aglomerados fecales en las partes de ácaros en la fracción 3 se desechan.
Se prueba la calidad de las partículas fecales en la fracción 4 (para asegurar que la fracción contiene la mayor parte de las partículas fecales y satisface las especificaciones de liberación) y se decide si la fracción es adecuada para extracción de alérgenos de Der p o Der f .
El v/v % de la totalidad de los cuerpos de acaro, las partes de cuerpo de ácaro, las partículas fecales, los medios de ácaro y los contaminantes se miden por microscopía de muestras, véanse páginas 13-14.
Se pueden combinar antes de la extracción varias fracciones fecales de ácaros . 1.2 Purificación de la fracción 2 de cuerpos de ácaro por centrifugación con glicerol.
Se lleva a cabo la centrifugación de la fracción 2 en un equipo (centrífuga Beckman J6MI) .
Se agregan lentamente un máximo de 900 gramos de fracción 2 a glicerina anhidra USP (99.0-101.0% pura) en una cantidad que es cinco veces el peso de la fracción 2.
El cultivo de ácaros mixtos con glicerina anhidra se vierte en recipientes de centrifugación de manera que la totalidad de los recipientes contiene el mismo volumen. Los recipientes se colocan en el rotor y se centrifugan los recipientes a 3000 rpm durante 7 minutos a -5°C. El sedimento de cuerpo de ácaros formado se extrae de la superficie de la glicerina anhidra y se pesa. Los cuerpos de ácaros se mezclan con una cantidad de glicerina anhidra 3 veces, se repite el peso de la fracción de cuerpo de ácaros y la centrifugación.
El sedimento de cuerpo de ácaros se extrae cuidadosamente de la superficie de la glicerina anhidra y se pesa. El peso de los cuerpos de ácaros se multiplica por 2.5 para determinar la cantidad mínima de peso de etanol anhidro necesario de una suspensión. El cuerpo de ácaro y la suspensión de etanol se mezcla durante 5 minutos en un recipiente de mezclado equipado con una cuchilla de bajo cizallamiento . La suspensión se vierte en dos tamices de 106 micrómetros con una recolección y una bandeja de recolección .
Se raspan los cuerpos de ácaros de los tamices y se registra el peso de los ácaros. Se repite la última etapa de purificación con etanol una o más veces y se secan los cuerpos de ácaros utilizando vacío o se permite que sequen sobre el tamiz 106 en una campana de extracción.
Se miden el v/v % de los cuerpos de ácaros totales, las partes de cuerpo de ácaro, las partículas fecales, los medios de ácaros y los contaminantes mediante microscopía de muestras, véanse las páginas 13-14. La fracción de cuerpo de ácaros obtenida típicamente comprende 98-99 vol/vol % de la totalidad de los cuerpos de ácaros.
Se pueden mezclar las fracciones de cuerpos de ácaros de cultivos de ácaros diferentes. 1.3 Purificación de la fracción 2 de cuerpos de ácaro por centrifugación con NaCl saturado.
La fracción 2 de cuerpo de ácaros se mezcla con NaCl saturado (en una cantidad que es cinco veces el peso de la fracción 2) a una suspensión. La suspensión se centrifuga a 3,000 rpm durante 7 min (15°C en una centrífuga Sorvall) . El tapón de cuerpo de ácaros se separa cuidadosamente de la superficie y se resuspende en una cantidad de NaCl que es cinco veces el peso y se repite la centrifugación. El v/v % de los cuerpos de ácaros totales, las partes de cuerpo de ácaros, las partículas fecales, el medio de ácaros y los contaminantes se miden por microscopía de las muestras, véase la página 13-14.
La fracción de cuerpo de ácaros obtenida típicamente comprende 98-99 vol/vol % de los cuerpos de ácaros totales.
TABLA Ib: # 1 y # 2 son agua salada saturada 1 giro, # 3 y # 4 es agua salada saturada 2 giros .
EJEMPLO 2 2.0 Purificación de cuerpos de ácaros y partículas fecales de ácaro Los cultivos congelados en el lugar sobre las bandejas dentro del cuarto de purificación. Se asegura que el cultivo se disemine en una capa uniforme de las bandejas y se deja el cultivo que se recaliente y se seque en condiciones ambiente durante 4-14 días.
El cultivo después se fluidiza para secarlo y separarlo en dos fracciones, véase la figura 1. Se aplica un flujo de aire que conecta una bomba de vacío en un lado y una entrada de aire en el otro.
Los recipientes de vidrio en la figura 1 se denominan de izquierda a derecha "A" con la totalidad del cultivo de ácaro "B" es rica en partículas corporales y "C" son partículas fecales.
Las dos fracciones (B) y (C) se aislan y se someten a tamizado. 2.1 Purificación de cuerpos de ácaros 2.1.1. Tamiz grande Las fracciones B se agregan a un agitador de tamiz Filtra FT 500 vibratorio industrial de carga continua. El tamiz tiene una torre de tres mallas: 300, 150 y 80 ym y funciona a 1500 rpm.
El material superior a 300 ym es principalmente partículas de elemento y se desecha.
El material inferior a 80 ym se purifica adicionalmente en un tamiz pequeño para aislar la fracción fecal .
El material inferior a 300 ym y superior a 150 ym se aisla como una fracción rica en cuerpo y se tamiza en el tamiz de medio más adelante. 2.1.2 Tamiz de medio Los ácaros tienen una forma la cual no es regular y pueden alcanzar 400 ym en una dimensión pero habitualmente son más pequeños en forma seca. Los ácaros tienen patas y pelo y cuando se utiliza movimiento circular horizontal durante el tamizado los cuerpos de acaro se orientan horizontalmente obligando a la formación de marañas. Solo algunas partículas desorientadas o partículas más pequeñas que no forman parte de la maraña entran a la malla y el tamiz no se bloquea tan rápidamente.
El tamiz utilizado es un agitador de tamiz Retsch AS 400 con una torre de mallas de 400, 300 y 200 ym. Se utiliza un modo de tamizado circular horizontal y el proceso de tamizado aprovecha la formación de marañas de ácaros que tienen un tamaño mayor de 200, 300 y/o 400 ym.
El material del tamiz grande se divide en porciones de 150-200 g y se agrega al segundo (tamiz medio) .
El tamiz funciona a una velocidad entre 210 y 240 rpm y cada lote se tamiza durante 1-2 minutos.
Las fracciones superiores a 200 y 300 pm se reprocesan 2-6 veces.
El contenido de cuerpos de ácaros retenidos en los tamices de malla 200, 300 y/o 400 µp? se determina por inspección microscópica de las fracciones y la fracción rica en cuerpo se aisla y se somete al tamizado adicional como se describe más adelante. 2.1.3 Tamiz pequeño La fracción rica en cuerpo recuperada del tamiz medio después se somete a tamizado en un tamiz pequeño (Retsch AS 200) utilizando un movimiento de lanzamiento 3-D. La media de cantidad de fracción rica en cuerpo cargada en el tamiz es 60 g y se utiliza la torre A de malla 300, 200, 150 y 100.
La velocidad se establece a 240-260 rpm, la amplitud se establece a 30 segundos y cada carga se tamiza durante 5-15 minutos. Cada carga es reprocesada 1-6 veces.
En controles de proceso: durante el proceso de tamizado se prueba la pureza de la fracción utilizando un microscopio .
La fracción inferior a 100 µp\ se aisla como la fracción de partículas fecales las cuales se purifican como se describe más adelante.
Las fracciones superiores a 100 µp? y 150 pm se aislan como fracciones de cuerpo de ácaro. 2.2 Purificación de la fracción fecal Las fracciones ricas fecales obtenidas en etapas previas (fracción C de la etapa de pretratamiento , fracción <80 µp\ del agitador de tamiz grande y la fracción <100 µp? del agitador de tamiz pequeño) se combinan.
El agitador de tamiz pequeño (Retsch AS 200) se utiliza con una torre de malla de 100, 80 y 50 µp? y las condiciones de operación son las mismas a las mencionadas antes para este tamiz.
La fracción inferior a 50 µ?? se aisla como la fracción fecal.
En controles de proceso: Durante el proceso de tamizado el grado de pureza de las fracciones se estima utilizando un microscopio.
EJEMPLO 3 3.0 Extracción de cuerpos de ácaro Los cuerpos de ácaro se suspenden utilizando un mezclador de alto cizallamiento (20 min) . La extracción se lleva a cabo en un amortiguador que contiene NaHC03 0.012 M, NaCl 0.154 M a un pH de 7.5 durante 3 horas a una temperatura de 8°C. El cuerpo de ácaro para amortiguar es 1+10 (p/p) . 3.0.1 Separación El material de fuente insoluble remanente se separa de la solución de extracto por centrifugación.
Después de la centrifugación el centrifugado resultante se decanta de la fracción sólida y se clarifica a través de un filtro dentro de una solución de filtrado. Después de la filtración del extracto de alérgeno el filtro se lava con amortiguador de extracción y se acumula para incrementar el rendimiento. 3.0.2 Ultrafiltración La ultrafiltración se realiza en tres etapas: etapa de concentración, etapa de diafiltración y etapa de ajuste de materia seca. En primer lugar, la solución de filtrado se concentra al eliminar el agua y otras moléculas pequeñas mediante filtración de flujo tangencial. En segundo lugar, las moléculas pequeñas y las sales se separan de la solución de extracto de alérgeno por diafiltración contra agua purificada. En tercer lugar, la concentración de materia seca (DM, por sus siglas en inglés) del extracto alergénico se ajustan mediante concentración adicional o adición de agua purificada. Durante la ultrafiltración la temperatura y la presión transmembranal (TMP, por sus siglas en inglés) se vigilan y se mantienen dentro de los criterios de aceptación.
En control de proceso: Temperatura: 3-15°C Presión transmembranal : = 3 bares Concentración DM: 40-60 mg/ml 3.0.3 Filtración de clarificación La solución de extracto de alérgeno se clarifica a través de un filtro de 0.2 µp?. 3.04 Estabilización Después de filtración el extracto se suministra como gotitas que caen libremente en un recipiente rellenado con nitrógeno líquido en donde las gotitas se congelan de inmediato. Después se permite que el nitrógeno líquido se evapore. Durante el proceso de estabilización se controla el flujo de alimentación (flujo de producto) para que se encuentre dentro de los criterios aceptables .
En control de proceso: Flujo de producto: 8-12 ml/min/orificio de suministro. 3.1 Partículas fecales Las partículas fecales de acaro se suspenden utilizando un mezclador de alto cizallamiento (20 min) . La extracción se lleva a cabo en un amortiguador que contiene NaHC03 0.012 M, NaCl 0.154 M a un pH de 7.5 durante 1 hora a una temperatura de 8°C. La relación de cuerpo de acaro respecto a amortiguador es 1+10 (p/p) . 3.1.1. Separación Después de la extracción el material fuente insoluble se separa de la solución de alérgeno por una etapa de diafiltración . La diafiltración se realiza utilizando un sistema de filtración de membrana vibratoria (técnica TFF) . El extracto de alérgeno pasa a través de la membrana como permeado, mientras que el material fuente insoluble será retenido por la membrana. Durante el proceso de diafiltración se agrega continuamente un volumen predefinido de agua purificada a la solución de extracto recirculante a la misma velocidad a la que se recolecta el extracto de alérgeno (permeado) desde el otro lado de la membrana.
En el control de proceso: Flujo de permeado: 18-22 litros/m2/hora Temperatura: 4-12°C 3.1.2 Ultrafiltración La ultrafiltración se realiza en tres etapas: etapa de concentración, etapa de diafiltración y etapa de ajuste de materia seca. En primer lugar, la solución de filtrado se concentra al quitar agua y otras moléculas pequeñas por filtración en flujo tangencial. En segundo lugar las moléculas pequeñas y sales se retiran de la solución de extracto de alérgeno por diafiltración contra agua purificada. En tercer lugar se ajusta la concentración de materia seca (DM, por sus siglas en inglés) de la solución alergénica mediante concentración adicional o adición de agua purificada. Durante la ultrafiltración la temperatura y la presión transmembrana (TMP, por sus siglas en inglés) se monitorean en controles en proceso y se mantienen dentro de los criterios aceptables .
En control de proceso: Temperatura: 3-15°C Presión transmembrana: 3 bares Concentración DM: 40-60 mg/ml 3.1.3 Filtración de clarificación La solución alergénica es clarificada a través de un filtro de 0.2 m. 3.1.4 Estabilización Después de filtración el extracto alergénico se suministra como gotitas que caen libremente dentro de un recipiente rellenado con nitrógeno líquido en donde las gotitas se congelan de inmediato. El nitrógeno líquido después se permite que se evapore. Durante el proceso de estabilización el flujo de alimentación (flujo de producto) es controlado para que se encuentre dentro de criterios de aceptación.
En control de proceso: Flujo de producto: 8-12 ml/min/orificio de suministro EJEMPLO 4 El contenido de los alérgenos del grupo 1 y del grupo 2 se mide por MS (siglas en inglés para espectrometría de masas como se describe en WO 2007/031080 utilizando los siguientes péptidos estándar de calibración: TNACSINGNAPAEIDLR (Der p 1) SEC ID NO: 1, NSWDTTWGDSGYGYFQAGN LMMIEQYPYWIM (Der f 1) SEC ID NO: 2, VLVPGCHGSEPCIIHR (Der p 2) SEC ID NO : 3, GKPFTLEALFDANQNTK (Der f 2) SEC ID NO: 4, y GIEYIQQNGWEER (Der f 1) SEC ID NO : 5 EJEMPLO 5 5.0 Mezclado de extractos Se agregan esferas congeladas de extracto de cuerpo de ácaro a esferas congeladas de extracto de partículas fecales para obtener la relación deseada de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2.
La determinación de cuales de esferas congeladas se van a utilizar así como el número de esferas congeladas que se van a utilizar es un proceso repetitivo.
La mezcla con la relación deseada se genera al calcular la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 que resulta del mezclado de varias de las esferas a partir de por lo menos un lote de extractos de cuerpo de ácaro y por lo menos un lote de partículas fecales de ácaro. La cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 se calcula como la cantidad en peso de cualquier lote multiplicado por la concentración de alérgeno de grupo 1 en ése lote. La cantidad en peso de alérgeno del grupo 2 resulta de mezclar los mismos lotes y se calcula de la misma manera.
Se agregan o retiran más lotes o partes de lotes del cálculo, como se describe en la página 27 anterior hasta que se obtiene la relación deseada.
La cantidad de extractos de cada lote se calcula para que sea de 140 gramos mfl y 966 gramos mbl Relación de alérgeno mayor = 1 Grupo total 1/grupo total 2 = mfl x Cflgrpl + mbl x Cblgrpl / mfl x Cflgrp2 + mbl x Cblgrp2 = 2393-140 + 991-966/ 792-140 + 1223. · 966 = 1 Las esferas congeladas requeridas posteriormente se recalientan y mezclan y opcionalmente se congelan nuevamente como esferas. Las mezclas recalentadas se pueden utilizar en el proceso de formulación.
EJEMPLO 6 Los alérgenos del grupo 1 y del grupo 2 se determinan como se describe en el Ejemplo *CV = desviación estándar relativa (SD/media) , con 95% de CI EJEMPLO 7 6.1 Preparación de una composición farmacéutica de disolución rápida que contiene un extracto Composición de una tableta de acaro de polvo casero antes de sublimación de agua durante liofilización: TABLA 3 de acaro Der p Extracto de partículas fecales de Der p Extracto de cuerpo de ácaro Der f Extracto de partículas fecales de Der f Otros ingredientes Gelatina (pescado) 15 mg Antes de liofilizado de estructura de tableta Manitol 12.7 mg Anterior a liofilizado de estructura de tableta Hidróxido de sodio c . s . Ajuste de pH a pH 7.5 Agua purificada c . s . a 250 mg Vehículo Total de peso de 250 mg dosificación en húmedo Preparación de la tableta: Se mezclan gelatina, manitol y agua purificada y la premezcla resultante se calienta a temperatura apropiada. Después de enfriamiento el pH de la solución se ajusta utilizando una solución de hidróxido de sodio (-6% p/p) . Las sustancias de medicamento se agregan a la premezcla como gotitas congeladas. El pH de la mezcla se prueba y se ajusta, si es necesario. Cantidades adicionales de agua purificada se requieren para completar la formulación y se calculan utilizando la fórmula de manufactura y se transfieren a la solución de mezcla. La solución se dosifica en bandejas tipo ampolla preformadas. Después de la dosificación, los paquetes tipo ampolla rellenados se hacen pasar a través de un túnel de congelamiento de nitrógeno líquido. Todos los productos congelados de inmediato se colocan en un gabinete refrigerado para almacenamiento congelado antes de liofilización . Las unidades son liofilizadas y almacenadas en un gabinete de almacenamiento seco en un ambiente de humedad controlada hasta su sellado. Las unidades liofilizadas después se sellan con una lámina delgada.
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (28)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:
1. Un producto farmacéutico caracterizado porque comprende un extracto de alérgeno o un alergoide del mismo, el cual comprende por lo menos un extracto de cuerpos de acaro que se selecciona de los siguientes grupos a) -b) : a) un extracto de cuerpos de acaro Der p en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una de las fracciones comprende más de 70% v/v de cuerpo de ácaro Der p, b) un extracto de cuerpo de ácaro Der f, en donde el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprende más de 70% v/v de cuerpos de ácaro Der f, y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro que se seleccionan de los siguientes grupos c) -d) : c) un extracto de partículas fecales de Der p, en donde el extracto de partículas fecales se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der p, d) un extracto de partículas fecales de Der f, en donde el extracto de partículas fecales de Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 70% v/v de partículas fecales de Der f.
2. El producto farmacéutico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p y un extracto de partículas fecales de Der p.
3. El producto farmacéutico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f .
4. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque comprende un extracto de cuerpos de ácaro Der p, un extracto de partículas fecales de Der p, un extracto de cuerpos de ácaro Der f y un extracto de partículas fecales de Der f 2.
5. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivo de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p; y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, las fracciones comprenden más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f; y/o el extracto de partículas fecales de Der p se prepara a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 95% v/v de partículas fecales de Der p; y/o el extracto de partículas fecales de Der f se preparan a partir de una fracción o una o varias fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias fracciones comprenden más de 95% v/v de partículas fecales de Der f .
6. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der p o fracciones de cuerpo de ácaro combinadas de Der p y en donde la extracción de una o varias de las fracciones de los cuerpos de ácaro resulta en un extracto que comprende, en peso, cantidades iguales de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 o más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1 y/o el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción de cuerpo de ácaro Der f o más fracciones de cuerpo de ácaro Der f combinadas y en donde la extracción de una o varias fracciones de cuerpos de ácaro resulta en un extracto que comprende en peso cantidades iguales en peso de alérgeno del grupo 1 y del grupo 2 o más alérgeno del grupo 2 que alérgeno del grupo 1.
7. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el extracto de cuerpos de ácaro Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der p; el extracto de cuerpos de ácaro Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivo de ácaro, las fracciones comprenden más de 95% v/v de cuerpos de ácaro Der f ; el extracto de partículas fecales de Der p se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 95% v/v de partículas fecales de Der p; el extracto de partículas fecales de Der f se prepara a partir de una fracción o fracciones combinadas de cultivos de ácaro, una o varias de las fracciones comprenden más de 95% v/v de partículas fecales de Der f.
8. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque es una o varias tabletas sublinguales comprimidas o no comprimidas que comprenden uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos, un producto sublingual líquido comprende uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos, o un producto líquido para inyección que comprende uno o varios de los extractos o alergoides preparados a partir de uno o varios de los extractos .
9. El producto farmacéutico de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque es una tableta sublingual que se disuelve rápidamente la cual comprende un extracto .
10. El producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque es para el tratamiento y/o prevención de alergia o asma alérgico causado por ácaros de polvo casero y/o para el diagnóstico de alergia.
11. El uso de producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, para la preparación de un producto médico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero y/o para el diagnóstico de alergia.
12. Una fracción de cuerpo de ácaro caracterizada porque comprende más de 70% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 75% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 80% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 85% v/v de cuerpos de ácaro, preferiblemente más de 90% v/v de cuerpos de ácaro, de manera más preferida más de 95% v/v de cuerpos de ácaro y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de cuerpos de ácaro.
13. La fracción de cuerpo de ácaro de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque los cuerpos de ácaro son cuerpos de ácaro Der p o cuerpos de ácaro Der f .
14. Un extracto de una fracción de cuerpo de ácaro de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 13, para usarse en un producto farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia, y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero .
15. Una fracción de partícula fecal de ácaro caracterizada porque comprenden más de 70% v/v de partículas fecales, preferiblemente más de 75% v/v de partículas fecales, preferiblemente más de 80% v/v de partículas fecales, preferiblemente más de 80% v/v de partículas ' fecales , preferiblemente más de 90% v/v de partículas fecales , de manera más preferida más de 95% v/v de partículas fecales y de manera mucho más preferida más de 98% v/v de partículas fecales.
16. La fracción de partícula fecal de ácaro de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque las partículas fecales son partículas fecales de Der p o partículas fecales de Der f.
17. Un extracto de una fracción de partícula fecal de ácaro de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16, para usarse en un producto farmacéutico para el tratamiento' y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
18. El uso de un extracto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 y 17, para la preparación de un producto farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros en polvo casero.
19. Un método para la manufactura de un extracto (I) de alérgeno de ácaro o alergoide del mismo para un producto farmacéutico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque el extracto (I) de alérgeno tiene una cantidad predeterminada y controlada en peso de alérgenos que se seleccionan de alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 y Der p 2 y que comprende las siguientes etapas : a) las fracciones de cuerpo de ácaro Der p y/o las fracciones de partículas fecales de ácaro de Der p se aislan de cultivos de Der p de ácaros y/o fracciones de cuerpos de ácaro Der f y/o fracciones de partículas fecales de ácaro de Der f se aislan de cultivos de ácaro de Der f; b) opcionalmente combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der p, opcionalmente combinar varias fracciones de cuerpos de ácaro Der f y opcionalmente combinar varias fracciones de partículas fecales de ácaro Der f; c) extraer alérgenos de una o varias fracciones de cuerpo de ácaro obtenidas en una etapa a) o una etapa b) como en lo anterior y/o extracción de alérgenos de una o varias fracciones de partículas fecales de ácaro obtenidas en una etapa a) o una etapa b) como en lo anterior; y posteriormente d) medir la concentración (p/v) de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2 en los extractos de alérgeno de ácaro obtenidos en una etapa c) como en lo anterior; y opcionalmente e) mezclar uno o más extractos de cuerpos de ácaro con uno o más extractos de partículas fecales como se obtienen en una etapa c) como en lo anterior para obtener una mezcla de extractos (1) de alérgeno con una cantidad predeterminada en peso de alérgeno de grupo 1 respecto a grupo 2, y opcionalmente f) convertir el extracto (I) o un alergoide del mismo .
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque uno o más extractos de cuerpos de ácaro y uno o más extractos de partículas fecales se mezclan para obtener una mezcla de extractos (I) de alérgeno.
21. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 y 20, caracterizado porque la mezcla de extracto (I) de alérgeno de ácaro comprende uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der p, uno o varios extractos de partículas fecales de Der p, uno o varios extractos de cuerpos de ácaro Der f y uno o varios extractos de partículas fecales de Der f 2.
22. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porque el producto farmacéutico es una tableta sublingual que se disuelve rápidamente la cual comprende un extracto.
23. Un producto farmacéutico caracterizado porque se prepara por un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22.
24. El producto farmacéutico de conformidad con la reivindicación 23, para usarse en el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero.
25. Un extracto de alérgeno de una serie de extractos de alérgenos para usarse en un producto de alérgeno farmacéutico para el tratamiento y/o prevención de alergia y asma alérgico causado por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro, o un extracto de cuerpo de ácaro de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro y un extracto de cultivo de ácaro total, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y grupo 2 y en donde el coeficiente de varianza de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 o 7.5% para la serie de extractos.
26. Un extracto de alérgeno de una serie de extractos alérgeno para usarse en un producto de alérgeno farmacéutico para el diagnóstico de alergia causada por ácaros de polvo casero, cada extracto de alérgeno comprende por lo menos un extracto de cuerpos de ácaro y por lo menos un extracto de partículas fecales de ácaro o un extracto de cuerpo de ácaro a partir de una fracción de cuerpos de ácaro que tiene menos de 70% v/v de cuerpos de ácaro o un extracto de cultivo de ácaro total, en donde el extracto de alérgeno tiene una relación predeterminada de alérgeno de grupo 1 y de grupo 2, en donde el coeficiente de varianza de la relación es no mayor de 25, 20, 15, 10 ó 7.5% para la serie de extractos .
27. El extracto de alérgeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 26, caracterizado porque la cantidad en peso de alérgeno del grupo 1 es menor que la cantidad en peso de alérgeno del grupo 2 en los extractos de cuerpo de ácaro y la cantidad en peso de alérgeno de grupo 1 es mayor que la cantidad en peso de alérgeno de grupo 2 en los extractos de partículas fecales de acaro .
28. El extracto de alérgeno de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, caracterizado porque el extracto de alérgeno es de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y/o en donde el extracto de alérgeno se prepara de conformidad con cualquiera las reivindicaciones 19 a 22.
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