MX2010013248A - Composiciones y metodos para mejorar plantas. - Google Patents

Abstract

La invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido con la secuencia de SEQ ID NO: 1 o una variante del mismo, en donde la variante es un polipéptido capaz de modular en una planta al menos uno de: i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés ambiental que se selecciona de sequía, frío, congelamiento, calor y salinidad. La invención también proporciona un constructo, vectores, células hospederas, células vegetales y plantas genéticamente modificados para comprender el polinucleótido. La invención también proporciona métodos para producir y seleccionar plantas en las que se altera al menos uno de: i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés ambiental que se selecciona de sequía, frío, congelamiento, calor y salinidad, mediante el uso de los polinucleótidos de la invención.

Description

COMPOSICIONES Y METODOS PARA MEJORAR PLANTAS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones producir plantas con un rendimiento de biomasa y/o d una tolerancia al estrés mejorados.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN A medida que la población del mundo aumenta, u cipales objetivos de la investigación agrícola es m imiento de biomasa y el rendimiento de semilla de tales de cultivos y forrajes.

Hasta hace poco, las mejoras dependían del ctivo de plantas para obtener características desea rgo, para muchas plantas, los complementos rogéneos producidos en la descendencia no result os rasgos deseables que los de sus progenitores, rancia al estrés y plantas que expresan otro ficiosos .

Si bien se sabe en la técnica que pueden aplicars ores de crecimiento para mejorar el tamaño de las licación de los factores de crecimiento es costosa ume mucho tiempo. Por lo tanto, existe la necesidad d tas con una biomasa mejorada con respecto a sus equi ivados .

Las mejoras en el rendimiento de granos de las p ivo puede alcanzarse mediante el desarrollo de pl uzcan más semillas o granos que las plantas equiva silvestre.

Por lo tanto, existe la necesidad de obtener pí rendimiento de semilla aumentado con respect rapartes normalmente cultivadas.

Los estreses abióticos ambientales, incluidos ncial de reducir o solucionar al menos algunos lemas . El uso de estrategias de cultivo de icionales para producir nuevas líneas vegetales qu rancia a estos tipos de estreses ha sido lento. La rsos de germoplasma suficientes y la incompatibili cies vegetales con una relación lejana presentan rtantes para el cultivo convencional. Adem s , los lares que conducen a la tolerancia a los estr lejos e implican múltiples mecanismos de adaptació erosas vías metabólicas. Esto limita el éxito de o del cultivo tradicional como de ingeniería gené de desarrollar plantas tolerantes al estré ficioso identificar genes y proteínas que partici rol de los complejos procesos que conducen a la t strés .

Los reguladores de la expresión de genes, como los scripción At CBF/DREB 1 (Kasuga et al . , 1999 Natur 87-91) y la pirofosfatasa vacuolar AVPl (Gaxiola et 98:11444-19) .

Si bien se han identificado algunos genes potenc es, la identificación y clonación de genes veget ieran una tolerancia al estrés aún es fragm npleta. Si bien se presume que las proteínas induc strés pueden participar en la tolerancia al estrés, a bas y se desconoce la función de muchos de los g onden al estrés.

Sería beneficioso identificar genes que t cidad de conferir tolerancia al estrés en especies eptibles al estrés. El desarrollo de cosechas tole és brindaría muchas ventajas, tales como un aumen asa y la producción de plantas que podrían culti iciones ambientales anteriormente inadecuadas. De e BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCION Polinucleótidos que codifican polipéptidos En un aspecto la invención proporciona un polinu ado que codifica un polipéptido con la secuencia 1 o una variante del mismo, en donde la varian péptido capaz de modular en una planta al menos u i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés ambienta selecciona de sequía, frío, congelamiento, salinidad.

Preferiblemente, el polipéptido es capaz de modu iomasa como el rendimiento de semilla.

Preferiblemente, el polipéptido es capaz de modu iomasa como la tolerancia a al menos uno de los entales mencionados. 1 o una variante del mismo, en donde la varian éptido capaz de modular el rendimiento de semill ta .

En otro aspecto la invención proporciona un polinu do que codifica un polipéptido con la secuencia 1 o una variante del mismo, en donde la varian éptido capaz de modular en una planta la toleran s un estrés ambiental que se selecciona de sequí lamiento, calor y salinidad.

Preferiblemente, el polipéptido es capaz de mo s dos, preferiblemente al menos tres, más preferibl cuatro y más preferiblemente los cinco estreses amb onados .

En una modalidad de cada uno de los tres dentes, el polinucleótido aislado codifica un pol l menos un 70% de identidad con la secuencia de SEQ Preferiblemente el dominio tipo AN1 tiene la ral: C-X2-C-X (9-12) -C-X (1-2) -C-X4 -C-X2 -H-X5 -H-X e X puede ser cualquier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo A20 comprende la s EQ ID NO: 17.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 17.

Preferiblemente el dominio tipo A20 consist encia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo AN1 tiene al men entidad con la secuencia de SEQ ID NO: 18.

Preferiblemente el dominio tipo AN1 comprende la S EQ ID NO: 19.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec encía codificadora de SEQ ID NO: 7.

En otra modalidad el polinucleótido aislado comp encia capaz de hibridarse en condiciones rigurosa encía codificadora de SEQ ID NO: 7.

En otra modalidad el polinucleótido aislado com encia codificadora de SEQ ID NO: 7.

Polinucleótidos En otro aspecto la invención proporciona un polinu ado que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 7 o una ismo, en donde la variante codifica un polipéptido lar en una planta al menos uno de : i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés ambienta selecciona de sequía, frío, congelamiento, salinidad. ado que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 7 o una nismo, en donde la variante codifica un polipéptido lar la biomasa en una planta.

En otro aspecto la invención proporciona un polinu ado que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 7 o una ismo, en donde la variante codifica un polipéptido lar el rendimiento de semilla en una planta.

En otro aspecto la invención proporciona un polinu do que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 7 o una ismo, en donde la variante codifica un polipéptido lar en una planta la tolerancia a al menos un estrés a se selecciona de sequía, frío, congelamiento, idad .

Preferiblemente, el polipéptido es capaz de mo s dos, generalmente al menos tres, más preferible s cuatro y aun más preferiblemente los cinco Preferiblemente el dominio tipo A 1 se encuent d del extremo C-terminal del polipéptido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene la ral: X3-C-X(2~4) -C-X11-C-X2-C-X2 , en donde X p quier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo AN1 tiene la ral: C-X2-C-X (9-12) -C-X (1-2) -C-X4-C-X2 -H-X5-H-X e X puede ser cualquier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo A20 comprende la s EQ ID NO: 17.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 17.

Preferiblemente el dominio tipo A20 consist encia de SEQ ID NO: 16. ncia capaz de hibridarse en condiciones rigurosa encia codificadora de SEQ ID NO: 7.

En otra modalidad el polinucleótido aislado com encia codificadora de SEQ ID NO: 7.

Polipéptidos En otro aspecto la invención proporciona un pol ado con la secuencia de SEQ ID NO: lo una variante d onde la variante es un polipéptido capaz de modul ta al menos uno de: i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés ambienta selecciona de sequía, frío, congelamiento, salinidad.

Preferiblemente el péptido es capaz de modular asa como el rendimiento de semilla. na planta.

En otro aspecto la invención proporciona un pol ado con la secuencia de SEQ ID NO: lo una variante d onde la variante es un polipéptido capaz de mo imiento de semilla en una planta.

En otro aspecto la invención proporciona un pol do con la secuencia de SEQ ID NO: lo una variante d nde la variante es un polipéptido capaz de modula ta la tolerancia a al menos un estrés ambienta ciona de sequía, frío, congelamiento, calor y sa Preferiblemente, el polipéptido es capaz de mo s dos, generalmente al menos tres, más preferible s cuatro y aun más preferiblemente los cinco entales mencionados.

En una modalidad de cada uno de los tres dentes, el polipéptido aislado tiene al menos u quier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A 1 tiene la ral: C-X2-C-X { 9-12 ) -C-X (1-2) -C-X4 -C-X2 -H-X5 -H-X X puede ser cualquier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene al men entidad con la secuencia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo A20 comprende la s EQ ID NO: 17.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 17.

Preferiblemente el dominio tipo A20 consist ncia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo AN1 tiene al men entidad con la secuencia de SEQ ID NO: 18.

Preferiblemente el dominio tipo AN1 comprende la s Q ID NO: 19.

En una modalidad el estrés ambiental es sequía.

En otra modalidad el estrés ambiental es frío.

En otra modalidad el estrés ambiental es congel En otra modalidad el estrés ambiental es calor.

En otra modalidad el estrés ambiental es salin En otro aspecto la invención proporciona un co tico que comprende un polinucleótido de la invenc En una modalidad el constructo genético es un co presión.

En otro aspecto la invención proporciona un ve rende un polinucleótido, un constructo genéti tructo de expresión de la invención.

En otro aspecto la invención proporciona un edera que comprende un polinucleótido, un c tico o un constructo de expresión de la invención En otro aspecto la invención proporciona un rende una célula vegetal de la invención.

Métodos que utilizan polinucleotidos En otro aspecto la invención proporciona un mét ucir una planta con al menos uno de: i) biomasa alterada, ii) rendimiento de semilla alterado, y iii) tolerancia alterada a al menos un estrés a se selecciona de seguía, frío, congelamiento, nidad, comprendiendo el método la transformació ia vegetal o planta con: a) un polinucleótido que comprende la secu eótidos de SEQ ID NO: 7, o una variante del mismo en ante codifica un polipéptido capaz de alterar la bi olerancia a al menos uno de los estreses amb ionados en una planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de na planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de ucleótidos de longitud del polinucleótido de a) ; c) un polinucleótido que comprende un complem nucleótido de a) o b) , En otro aspecto la invención proporciona un mét ucir una planta con rendimiento de semilla a rendiendo el método la transformación de una célul anta con: a) un polinucleótido que comprende la secu eótidos de SEQ ID NO: 7, o una variante del mismo, ariante codifica un polipéptido capaz de al imiento de semilla en una planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de ucleótidos de longitud del polinucleótido de a) ; c) un polinucleótido que comprende un complem rancia a al menos uno de los estreses ambientales men na planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de cleótidos de longitud del polinucleótido de a) ; c) un polinucleótido que comprende un complem nucleótido de a) o b) .

"Alterada" puede referirse a una reducción o a un Preferiblemente "alterada" se refiere a un aum Preferiblemente, el polipéptido es capaz de mo s dos, generalmente al menos tres, más preferible s cuatro y aun más preferiblemente los cinco entales mencionados .

En una modalidad de cada uno de los tres aspe ucleótido aislado codifica un polipéptido con al e identidad con la secuencia de SEQ ID N0:1.

En otra modalidad el polipéptido comprende un d ral: C-X2-C-X (9-12) -C-X (1-2) -C-X -C-X2 -H-X5-H-X e X puede ser cualquier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo A20 comprende la s EQ ID NO: 17.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 17.

Preferiblemente el dominio tipo A20 consist encia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo ANl tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 18.

Preferiblemente el dominio tipo ANl comprende la s EQ ID NO: 19.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 19.

En otra modalidad el estrés ambiental es calor.

En otra modalidad el estrés ambiental es salin En otra modalidad la variante comprende la secu quiera de las SEQ ID NO: 8 a 12.

En otra modalidad el polinucleótido de a) comp encía de SEQ ID N0:1.

Métodos -uso de polinucleotidos que c éptidos En otro aspecto la invención proporciona un mét cir una planta con al menos uno de: i) biomasa alterada, ii) rendimiento de semilla alterado, y iii) tolerancia alterada a al menos un estrés que se selecciona de sequía, frío, congel calor y salinidad, comprendiendo el m transformación de una planta con: En otro aspecto la invención proporciona un mé ucir una planta con biomasa alterada, comprendiendo ransformación de una planta con: a) un polinucleótido que codifica un polipépti encia de aminoácidos de SEQ ID N0:1 o una vari péptido, en donde la variante es capaz de alterar l na planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de ucleótidos de longitud del polinucleótido de a) ; c) un polinucleótido que comprende un complem nucleótido de a) o b) .

En otro aspecto la invención proporciona un mé ucir una planta con rendimiento de semilla rendiendo el método la transformación de una plan a) un polinucleótido que codifica un polipépti encia de aminoácidos de SEQ ID NO:l o una vari elamiento, calor y salinidad, comprendiendo el m sformación de una planta con: a) un polinucleótido que codifica un polipépti encía de aminoácidos de SEQ ID N0:1 o una vari péptido, en donde la variante es capaz de al rancia a al menos uno de los estreses ambientales men na planta; b) un polinucleótido que comprende un fragmento de ucleótidos de longitud del polinucleótido de a) ; c) un polinucleótido que comprende un complem nucleótido de a) o b) .

En una modalidad de cada uno de los tres edentes, el polinucleótido aislado codifica un pol * l menos un 70% de identidad con la secuencia de SEQ En otra modalidad el polipéptido comprende un d de zinc tipo A20 y un dominio de dedo de zinc ti e X puede ser cualquier aminoácido.

Preferiblemente el dominio tipo A20 tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo A20 comprende la s EQ ID NO: 17.

Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec D NO: 17. Preferiblemente el dominio tipo A20 consi encia de SEQ ID NO: 16.

Preferiblemente el dominio tipo ANl tiene al men dentidad con la secuencia de SEQ ID NO: 18. Preferi ominio tipo ANl comprende la secuencia de SEQ ID Preferiblemente, el polipéptido comprende la sec ID NO: 19. Preferiblemente el dominio tipo ANl co ecuencia de SEQ ID NO: 18.

Preferiblemente, el polipéptido es capaz de mo s dos, generalmente al menos tres, más preferible En otra modalidad el estrés ambiental es salin En una modalidad más preferida el polinucleóti fica un polipéptido con la secuencia de aminoácido 0: 1.

Métodos -selección En otro aspecto la invención proporciona un met ceionar una planta con al menos uno de: i) biomasa alterada, ii) rendimiento de semilla alterado, y iii) tolerancia alterada a al menos un estrés a que se selecciona de sequía, frío, congel calor y salinidad, con respecto a una plant adecuada, comprendiendo el método la evalu una planta para verificar la expresión alt un polinucleótido o polipéptido de la inv En otro aspecto la invención proporciona un mét En otro aspecto la invención proporciona un met ccionar una planta con tolerancia aumentada a al és ambiental que se selecciona de sequía elamiento, calor y salinidad, con respecto a un igo adecuada, comprendiendo el método la evaluaci ta para verificar la expresión alterada de un polinu lipéptido de la invención.

Plantas En otro aspecto la invención proporciona un tal o planta producida mediante el método de la i En otro aspecto la invención proporciona un ación, de plantas seleccionadas mediante el méto nción.

Fuente de polinucleótidos de la invención Los polinucleótidos y variantes de polinucleóti nción pueden derivarse de cualquier especie y/ En otra modalidad el polinucleótido o variante na especie vegetal monocotiledónea .

Fuente de células vegetales y plantas de la in Las células vegetales y plantas de la invenció varse de cualquier especie.

En una modalidad la célula vegetal o planta se especie vegetal gimnosperma.

En otra modalidad la célula vegetal o planta se especie vegetal angiosperma.

En otra modalidad la célula vegetal o planta se especie vegetal dicotiledónea.

En otra modalidad la célula vegetal o planta se especie vegetal monocotiledónea.

Los . géneros dicotiledóneos preferidos i dalus, Anacardium, Anemone, Arachis, Brassica, abis, Cartha us, Carya, Ceiba, Cicer, Claytonia, Co one occidentalis , Arachis hypogaea, Arachis ica napus Rape, Brassica nigra, Brassica cam ñus cajan, Cajanus indicus, Cannabis sativa, torius, Carya illinoinensis, Ceiba pentandra tinum, Claytonia exigua, Claytonia megarhiza, Co vum, Coronilla varia, Corydalis flavula, ervirens, Crotalaria júncea, Cyclamen coum, niata, Dicentra eximia, Dicentra formosa, Dolicho this hyemalis , Gossypium arboreum, Gossypium ypium barbadense , Gossypium herbaceum, Gossypium h ine max, Glycine ussuriensis, Glycine gracilis, He s, Lupinus angustifolius, Lupinus luteus, Lupinus m edeza sericea, Lespedeza striata, Lotus uliginosus, vus, Lens culinaris, Lespedeza stipulacea, atissimum, Lotus corniculatus, Lupinus albus, rea, Medicago fálcate, Medicago hispida, niaca, Pueraria thunbergiana, Ribes nigrum, Ribes s grossularia, Ricinus cowmunis, Sesamum indicum, Th cu , Thalictrum flavum, Thalictru thalictroides, o, Trifolium augustifolium, Trifolium diffusum, idum, Trifolium incarnatum, Trifolium ingrescens, ense, Trifolium repens, Trifolium resupinatum, erraneum, Trifolium alexandrinum, Trigonella foenum a angustifolia, Vicia atropurpúrea, Vicia calcara carpa, Vicia ervilia, Vaccinium oxycoccos, Vicia pa a sesquipedalis, Vigna sinensis, Vicia villosa, Vi a sative y Vigna angularis .

Los géneros monocotiledóneos preferidos i yron, Allium, Alopecurus, Andropogon, Arrhe ragus, Avena, Bambusa, Bellavalia, Brimeura, B ocodium, Bothrichloa, Bouteloua, Bromus, Cala ssia, Cenchrus, Chionodoxa, Chloris, Colchicum, Las especies monocotiledóneas preferidas i yron cristatu , Agropyron desertorum, Agropyron el yron intermedi m, Agropyron smithii, Agropyron s yron trachycaulu , Agropyron trichophorum, lonicum, Allium cepa, Allium chínense , Allíum iaea calífornica, Brodiaea coronaría, Brodíaea ocodíum versicolor, Bothrichloa barbinodis, Bot aemum, Bothrichloa saccharoide , Bouteloua curí eloua eriopoda, Bouteloua gracilis, Bro us erectu is, Bromus riparius, Cala ovilfa longifilia, loides, Cenchrus ciliaris, Chionodoxa forbesii, a, Colchicum autumnale , Crocus sativus, Cymbopogo don dactylon, Cypripedium acaule, Dactylis gl anthium annulatu , Dichanthium aristatum, Di ceu , Digitaria decumbens, Digitaria s utsii, eensis, Elaeis oleífera, Eleusine coracan, Elymus iflorum, Lolium multiflorum, Lolium perenne, ata, Míscanthis sinensis , Miscanthus x giganteus, niacum, Muscari macrocarpum, Narcissus pseudona thogalu montanum, Oryza sativa, Panicu italicium, um, Panicum miliaceum, Panicu purpurascens, atu , Paspalum dilatatum, Paspalum notatum, Pe destinum, Pennisetu glaucum, Pennisetum pu lsetu spicatum, Phalaris arundinacea, Phleum ber um pratense, Poa fendleriana, Poa pratensis, Poa ne kinia scilloides, Saccharum officinarum, S stum, Saccharum sinense, Saccharum spontaneum, nalis, Scilla peruviana, Sécale cereale, Setaria ria sphacelata, Sorghastru nutans, Sorghum bicolor, a, Sorghum halepense, Sorghum sudanense, Th icum, Trillium grandiflorum, Triticum aestivum, ccum, Triticum durum, Triticum monococcum, Tulipa ba olium. Particularmente preferidas son las especie ne y Trifolium repens . Mayormente preferida es l um perenne.

El término "planta" pretende incluir la totalid ta, cualquier parte de una planta, propágulos y pr planta.

El término "propágulo" significa cualquier par ta que pueda utilizarse en la reproducción o propag sexuada o asexuada, inclusive semillas y esquejes Las plantas de la invención pueden culti fecundarse o cruzarse con una cepa vegetal diferente tificarse los híbridos resultantes, con las caract típicas deseadas. Pueden cultivarse dos o más gen asegurar que las características fenotípicas del ienen y heredan establemente. Las plantas que result dajes de cultivo estándares también constituyen u ente memoria descriptiva y reivindicaciones signif iste(n) en al menos en una parte de", es decir, c rpretan afirmaciones en la presente memoria descr indicaciones que incluyen "que comprende (n) " , t terísticas que se presentan mediante este término ación deben estar presentes pero también pued ntes otras características. Los términos relaciona "comprender" y "comprendido/a (s) " deben interpre a similar.

El término "estrés ambiental" incluye al menos u entes estreses: sequía, frío, congelamiento, idad .

El término "tolerancia o tolerante al estrés po nde describir una planta o plantas que se compo rablemente en cualquier aspecto de su crecim rollo en, o después de, condiciones de hid elamiento" pretende describir una planta o planta ortan más favorablemente en cualquier aspecto imiento y desarrollo en, o después de, condic ratura menores o iguales a 0°C que las plantas adas en las mismas condiciones.

El término "tolerancia o tolerante al estrés po nde describir una planta o plantas que se compo rablemente en cualquier aspecto de su crecim rrollo en, o después de, condiciones de temperatur timas que las plantas testigo adecuadas en la iciones .

El término "tolerancia o tolerante a la sa ende describir una planta o plantas que se compo rablemente en cualquier aspecto de sus creci rrollo en, o después de, condiciones de salinidad timas que las plantas testigo adecuadas en la inar el estrés ambiental/ es decir, mejor recu ués de un período de estrés ambiental.

El término "biomasa" se refiere al tamaño y/o ro de órganos vegetativos de la planta a una edad o rrollo particular. De este modo, una planta con má e mayor tamaño y/o masa y/o número de órganos vegeta planta testigo adecuada de la misma edad o en una rrollo equivalente. A la inversa, una planta c asa tiene menor tamaño y/o masa y/o número de tativos que un testigo apropiado. La biomasa alterad e implicar una alteración en índice de crecimiento y rmación de órganos vegetativos durante algunos o odos del ciclo de vida de una planta con relación a u piado. De este modo, la biomasa alterada puede re vance o un retraso en el tiempo que demora la p zar una determinada etapa de desarrollo.

El término "alterado" con respecto al rendim lia pretende abarcar tanto una disminución como u 1 rendimiento de semilla.

El término "modulador" con respecto al rendim lia pretende abarcar una disminución o un aumen imiento de semilla.

Plantas testigo adecuadas pueden incluir pí sformadas de la misma especie o variedad o plantas de cía o variedad transformadas con un constructo te Polinucleótidos y fragmentos El término "polinucleótido (s) " como se utili ente, significa un polímero desoxirribonucle nucleótido de una hebra o de dos hebras de cualqui preferentemente al menos 15 nucleótidos, e incl plos no taxativos, secuencias codificadoras ficación de un gen, complementos de secuencias S eotidos de largo. Los fragmentos de la invención co ucleótidos , preferentemente al menos 20 nucleóti erentemente al menos 30 nucleótidos, más preferent s 50 nucleótidos, más preferentemente al m eotidos, más preferentemente al menos 60 nucleóti erentemente al menos 70 nucleótidos, más preferent s 80 nucleótidos, más preferentemente al m eotidos, más preferentemente al menos 100 nucleóti erentemente al menos 150 nucleótidos, más preferent s 200 nucleótidos, más preferentemente al me eotidos, más preferentemente al menos 300 nucleóti erentemente al menos 350 nucleótidos, más preferent s 400 nucleótidos, más preferentemente al me eotidos de nucleótidos contiguos de un polinucleót nción. Un fragmento de una secuencia de polinucle e utilizar en tecnología antisentido, de silencia es complementaria a la sonda, en un ensayo en idación. La sonda puede consistir en un "fragment nucleótido como se define en la presente.

Polipéptidos y fragmentos El término "polipéptido", como se utiliza, abarc inoácidos de cualquier largo pero preferentemente aminoácidos, incluidas proteínas de largo complet es los residuos de aminoácidos se unen mediante ídicos covalentes. Los polipéptidos de la presente i en ser productos naturales purificados, o se pueden ial o totalmente utilizando técnicas recombi éticas. El término se puede referir a un polipép gado de un polipéptido como un dímero u otro multi éptido de fusión, un fragmento de polipéptido, una lipéptido, o derivado del mismo.

Un "fragmento" de un polipéptido es una subsecu lar natural. Una molécula aislada se puede obtener quier método o combinación de métodos incluidas uímicas, recombinantes y sintéticas.

El término "recombinante" se refiere a una secu nucleótidos que sé retira de secuencias que la rod exto natural y/o se recombina con secuencias que entes en su contexto natural .

Una secuencia "recombinante" de polipéptidos se ante la traducción de una secuencia "recombin nucleótidos .

El término "derivado/a (s) de" con res nucleótidos o polipéptidos de la invención que de ros o especies particulares, significa que el polinu lipéptido tiene la misma secuencia que el polinucl éptidó que se halla naturalmente en los géneros o e linucleótido o polipéptido, derivado de géneros o otra especie y pueden abarcar homólogos, par logos . En determinadas modalidades, las variante péptidos innovadores y polipéptidos poseen act ógicas que son las mismas o similares a las péptidos innovadores o polipéptidos. El término " referencia a polipéptidos y polipéptidos abarca t as de polipéptidos y polipéptidos como se defi ente .

Variantes de polinucleótidos Las Secuencias de polinucleótidos erentemente exhiben al menos 50%, más preferente s 51%, más preferentemente al menos 52%, más prefere menos 53%, más preferentemente al menos 5 erentemente al menos 55%, más preferentemente al m referentemente al menos 57%, más preferentemente más preferentemente al menos 59%, más preferente más preferentemente al menos 77%, más preferente s 78%, más preferentemente al menos 79%, más prefere menos 80%, más preferentemente al menos 8 erentemente al menos 82%, más preferentemente al m referentemente al menos 84%, más preferentemente más preferentemente al menos 86%, más preferente s 87%, más preferentemente al menos 88%, más prefere menos 89%, más preferentemente al menos 9 erentemente al menos 91%, más preferentemente al m referentemente al menos 93%, más preferentemente más preferentemente al menos 95%, más preferente s 96%, más preferentemente al menos 97%, más prefere nos 98%, y aun más preferentemente al menos 99% de i na secuencia de polinucleótidos específica. La ide a en una ventana de comparación de al menos 20 posi eótidos, preferentemente al menos 50 posici eótido sequences", FEMS Microbiol Lett. 174:247- está disponible públicamente de .· //ftp. nebí . nih. gov/blast/) . Se utilizan los parám cto de bl2seq salvo que deba desactivarse el fil es de baja complejidad.

La identidad de secuencias de polinucleótidos inar utilizando los siguientes parámetros de l ndos unix: bl2seq -i nucleotidseql -j nucleotidseq2 -F F - El parámetro -F F desactiva el filtrado de secc complejidad. El parámetro -p selecciona el a piado para el par de secuencias. El programa bl2se tidad de secuencias como el número y porce eótidos idénticos en una línea "Identidades = ".

La identidad de secuencias de polinucleótidos e calcularse en todo el largo de la superposici ituto Europeo de Bioinformática también propor cidad de realizar alineaciones global de aguja d e dos secuencias en línea : /www. ebi . ac . uk/emboss/align/ .

Alternativamente, se puede utilizar el program uta una alineación global óptima de dos secuen lizar intervalos terminales. GAP se describe en el s a : Huang, X. (1994) On Global Sequence Alignment. ications in the Biosciences 10, 227-235.

Las variantes de polinucleótidos de la presente i ién abarcan aquellas que exhiben una similitud de encias identificadas específicamente que puedan pre valencia funcional de las secuencias y que pueda e nablemente que hayan ocurrido por probabilidad alea litud de secuencias con respecto a polipéptidos rminar utilizando el programa disponible al públic iado para el par de secuencias. Este programa halla militud entre las secuencias para cada una de las ta un "valor E" que es el número esperado de vece ede esperar ver una coincidencia tal al azar en un s de un tamaño de referencia fijo que contiene se torias. El tamaño de esta base de datos se fija por programa bl2seq. Para valores E pequeños, de muc o, el valor E es aproximadamente la probabilid cidencia aleatoria .

Las secuencias de polinucleótidos v rentemente exhiben un valor E de menos de 1 x -20 rentemente menos de 1 x 10 , más preferentemente -30 10 , más preferentemente menos de 1 x 10 -50 rentemente menos de 1 x 10 , más preferentemente 10"60, más preferentemente menos de 1 x 10 - iciones rigurosas.

El término "hibridarse en condiciones rigur valentes gramaticales del mismo, se refiere a la e a molécula de polinucleótido de hibridarse con una polinucleótido objetivo (tal como una molé nucleótido objetivo inmovilizada en un blot de ADN o un Southern blot o Northern blot) en condiciones mperatura y concentración de sal. La capacidad de hi condiciones rigurosas puede determinarse hib ialmente en condiciones menos rigurosas, aumentando rosidad hasta el punto deseado.

Con respecto a moléculas de polinucleótidos con r a 100 bases, las condiciones de hibridación de ri ca son de no más de 25 a 30°C (por ejemplo, 10°C) p a temperatura de fusión (Tf) del dúplex nativo ral, Sambrook et al, Eds, 1987, Molecular Cí prelavado en una solución de 6X SSC, 0,2% SDS; hib °C, 6X SSC, 0,2% SDS toda la noche; seguido de dos 0 minutos cada uno IX SSC, 0,1% SDS a 65°C y dos la minutos cada uno en 0,2X SSC, 0,1% SDS a 65°C.

Con respecto a moléculas de polinucleótidos que de menos de 100 bases, condiciones de hibridación r 5 a 10 °C por debajo de la Tf . Como promedio, la T ula de polinucleótido con un largo de menos de 1 e en aproximadamente (largo de 500/oligonucleóti Con respecto a imitaciones de ADN conocidas com eicos peptidicos (ANPs) (Nielsen et al . , Science. Di 4(5037) : 1497-500) los valores de Tf son superiores íbridos ADN-ADN o ADN-ARN, y se pueden calcular ut rmula descrita en Giesen et al., Nucleic Acids Re 1 ; 26 (21) : 5004-6. Las condiciones rigurosas de hib lares para un híbrido ADN-APN que tiene un largo en cambiar otros codones para el mismo aminoácido eas reconocidas en la técnica, por ejemplo, para o xpresion de codones en un organismo hospedero par Las alteraciones de las secuencias de polinucleó ltan en sustituciones conservadoras de uno o oácidos en la secuencia de polipéptidos codifi rar considerablemente su actividad biológica se ién en la invención. Un experto en la técnica cono dos para realizar sustituciones de ami típicamente silenciosas (Ver por ejemplo, Bowie et nce 247, 1306) .

Los polinucleótidos variantes debido a var nciosas y sustituciones conservadoras en la secu péptidos codificada puede determinarse utiliz rama bl2seq disponible públicamente de la serie de p T (versión 2.2.5 [nov de 2002]) d isis del comportamiento de la planta transfo ración con una planta testigo, en o después de co trés ambiental; y en condiciones sin estrés para e asa alterada. Otros protocolos de trasformación veg as especies son conocidos por un experto en la téc resente se proporciona una lista de los protocolo Variantes de polipéptidos El término "variante" con referencia a polipéptid péptidos naturales y producidos recombin éticamente. Secuencias de polipéptidos erentemente exhiben al menos 50%, más preferente s 51%, más preferentemente al menos 52%, más prefere menos 53%, más preferentemente al menos 5 erentemente al menos 55%, más preferentemente al m referentemente al menos 57%, más preferentemente más preferentemente al menos 59%, más preferente más preferentemente al menos 77%, más preferente s 78%, más preferentemente al menos 79%, más prefere menos 80%, más preferentemente al menos 8 erentemente al menos 82%, más preferentemente al me referentemente al menos 84%, más preferentemente más preferentemente al menos 86%, más preferente s 87%, más preferentemente al menos 88%, más prefere menos 89%, más preferentemente al menos 9 erentemente al menos 91%, más preferentemente al m referentemente al menos 93%, más preferentemente más preferentemente al menos 95%, más preferente s 96%, más preferentemente al menos 97%, más prefere eños 98%, y aun más preferentemente al preferente s 50 posiciones de aminoácidos, más preferentemente osiciones de aminoácidos, y aun más preferentement argo de un polipéptido de la invención. e calcular en todo el largo de la superposici encías de polinucleótidos candidatas y sujeto ut ramas de alineación de secuencia global. Aguja d ponible en htt : /www. ebi . ac . uk/emboss/align/) y GA 994) On Global Sequence Alignment. Computer Applic iosciences 10, 227-235.) como se indicó anterior en programas de alineación de secuencia global a calcular la identidad de secuencias de polipépti Se prefiere el uso de BLASTP como se d riormente para utilizar en la determinación de var péptidos de acuerdo con la presente invención.

Las variantes de polipéptidos de la presente i ién abarcan aquellas que exhiben similitud con una secuencias identificadas específicamente que ervar la equivalencia funcional de las secuencias y rarse razonablemente que hayan ocurrido por prob -20 - x 10 , más preferentemente menos de 1 x 10 erentemente menos de 1 x~40 , más preferentemente m 50 -60 , más preferentemente menos de 1 x 10 , más prefere -70 s de 1 x 10 , más preferentemente menos 1 erentemente menos de 1 x"90 , más preferentemente m -100 -0 , más preferentemente menos de 1 x 10 -120 erentemente menos de 1 x 10 y aun más preferenteme xlO"123 al compararlas con cualquiera de las se tificadas específicamente.

El parámetro -F F desactiva el filtrado de sec complejidad. El parámetro -p selecciona el piado para el par de secuencias. Este programa halla militud entre las secuencias para cada una de las rta un "valor E" que es el número esperado de vec ede esperar ver una coincidencia tal al azar en un nciosas (Ver por ejemplo, Bowie et al, 1990, Scie ) .

Constructos, vectores y componentes de los mis El término "constructo genético" se refiere a una olinucleótido, generalmente ADN de dos hebras, q r insertado en la misma otra molécula de polinucle cula de polinucleótido insertada) tal como, a tivo, una molécula de ADNc . Un constructo genéti ener los elementos necesarios que permitan transc cula de polinucleótido insertada, y, opcionalmente, ranscrito en un polipéptido. La molécula de polinu rtada puede derivar de la célula hospedera, o pued una célula u organismo diferente y/o puede nucleótido recombinante . Una vez dentro de l edera, el constructo genético puede integrarse e osomal hospedero. El constructo genético puede un onalmente, traducir el transcrito en un polipép tructo de expresión generalmente comprende en dire 3' : a) un promotor funcional en la célula hospedera e onstructo se transformará, b) el polinucleótido a expresar, y c) un terminador funcional en la célula hospede el constructo se transformará.

El término "región codificadora" o "marco de rta" (ORF) se refiere a la hebra de sentido de una s N genómico o una secuencia de ADNc que es capaz de oducto de transcripción y/o un polipéptido bajo e cuencias reguladoras apropiadas. La secuencia codi dentifica mediante la presencia de un codón de i cción 51 y un codón de finalización de traducción 31 inserta en un constructo genético, una us o de inicio de traducción y en dirección descendente inalización de traducción. Se hace referencia encías respectivamente con la UTR 5' y la UTR 3 ones incluyen elementos requeridos para la inic inación de la transcripción y para la regulaci iencia de la traducción.

Los terminadores son secuencias, que final scripción, y se hallan en los extremos de genes no tr n dirección descendente de la secuencia traduc inadores son determinantes importantes de estábi y en algunos casos se ha encontrado que tienen f ladoras espaciales .

El término "promotor" se refiere a e reguladores no transcriptos en dirección ascenden ón codificadora que regulan la transcripción de g otores comprenden elementos de cis -iniciador que esp e la segunda mitad de la repetición está en lementaria, por ejemplo ( 5 ' ) GATCTA TAGATC (3 ' ) ( 3 ' ) CTAGAT ATCTAG ( 5 ' ) Una transcripción ultralectura producirá un tr oporta una formación de pares de bases complementa ar una estructura de horquilla siempre que haya un e -5 bp entre las regiones repetidas.

Una "planta transgénica" se refiere a una pí iene material genético nuevo como resultado de mani ansformación genética. El nuevo material genéti ar de una planta de la misma especie como l sgénica resultante o formar una especie diferente Los términos "alterar la expresión de" y "e rada" de un polinucleótido o polipéptido de la i enden abarcar la situación en la que el ADN gen nodula biomasa y/o tolerancia a al menos un estrés a ccionado de sequía, frío, congelamiento, calor ,y s lantas . Los solicitantes también han identificado v linucleótidos de SEQ ID NO: 7 (SEQ ID NO: 8-12) que c antes de polipéptidos de SEQ ID NO:l (SEQ ID NO: lan biomasa y tolerancia a al menos un estrés ccionado de sequía, frío, congelamiento, calor y s lantas .

Los solicitantes han identificado la presencia otivo de dedo de zinc tipo A20 como de un dedo de n el polipéptido de SEQ ID N0:1, y cada una de las olipéptidos. Los solicitantes también han ide vos de secuencia que se conservan completamente en os motivos de dedos de zinc, en todas las secu antes de polipéptidos.

La invención proporciona plantas alteradas, con rtos en la técnica. A modo de ejemplo, los polinuc ueden aislar mediante el uso de la reacción en c merasa (RCP) descrita en Mullís et al, Eds . nerase Chain Reaction, Birkhauser, incorporad ente a modo de referencia. Los polipéptidos de la i ueden amplificar utilizando cebadores, como se de ente, derivados de secuencias de polinucleótid nción.

Otros métodos para aislar polinucleótidos, de la i les en los métodos de la invención, incluyen el uso rciones de, los polinucleótidos que se establec enté como sondas de hibridación. La técnica de as de polinucleótidos etiquetadas con polinuc vilizados en soportes sólidos tales como fi ocelulosa o membranas de nailon, se pueden utili orar las bibliotecas de ADN genómico o ADNc . Co Los fragmentos de polinucleotidos de la inve en producir mediante técnicas que se conocen bi ica tales como restricción de digestión de endonu esis de oligonucleótidos .

Se puede utilizar una secuencia de polinuc ial, en métodos que se conocen bien en la técn tificar la secuencia de polinucleotidos de largo espondiente . Los métodos incluyen métodos basados o basado en 5' RACE (Frohman MA, 1993, Methods Enzy 56) e hibridación, métodos basados en bas tadora/base de datos. Además, a modo de ejemplo rsa permite la adquisición de secuencias desco ueando las secuencias de polinucleotidos revelad ente, comenzando con cebadores con base en un cida (Triglia et al, 1998, Nucleic Acids Res 1 rporada en la presente a modo de . referencia) . E articular, puede ser beneficioso transformar la pí ecuencia o secuencias derivadas de la especie. El b e ser aliviar las preocupaciones públicas con re Sformación de especies cruzadas en la gener nismos transgénicos . Adem s, cuando el resultado d ubregulación de un gen, puede ser necesario util encia idéntica (o al menos muy similar) a aquel ta, para la cual se desea expresión reducida. Debid es, entre otras, es deseable ser capaz de ident ar ortólogos de un gen particular en varias rentes de plantas. Las variantes (incluidos ortól en identificar mediante los métodos descritos.

Métodos para identificar variantes Métodos físicos Los polinucleótidos variantes se pueden id izando métodos basados en RCP (Mullís et al, Eds . antes de la secuencia de cebador, la rigurosid idación y/o lavado generalmente se reducirá relati do se busquen coincidencias de secuencias exactas Las variantes de polipéptidos también se tificar mediante métodos físicos, por ejemplo med oración de bibliotecas de expresión utilizando ant ados contra polipéptidos de la invención (Sambroo cular Cloning: A Laboratory Manual, 2da Ed. Cold Métodos basados en computadora Las variantes de polinucleótidos y polipéptidos tificar también mediante métodos basados en computa cidos por los expertos en la técnica, utilizando al ecuencia de dominio público y herramientas de bus litud de secuencias para buscar bases de datos de se bases de datos de dominio público incluyen Genba s-Prot, PIR y otros) . Ver, por ejemplo, Nucleic Ac TX, tBLASTN y tBLASTX, que están disponibles public : //ftp. ncbi . nih.gov/blast/) o en el National Ce echnology Information (NCBI) , National Library of M icio 38A, Oficina 8N805, Bethesda, MD 20894 Estado rvidor de NCBI también proporciona la capacidad de ramas para explorar una serie de bases de datos de se onibles públicamente. BLASTN compara una secu eótidos de consulta contra una base de datos secue eótidos. BLASTP compara una secuencia de aminoá lta contra una base de datos de secuencias de pr TX compara una secuencia de nucleótidos de consulta odos los marcos de lectura contra una base de encías de proteínas . tBLASTN compara una secu eínas de consulta contra una base de datos de sec eótidos dinámicamente traducida en todos los m ra, tBLASTX compara las traducciones de seis marc una secuencia consultada producida por BLASTN, TX, tBLASTN, tBLASTX, o un algoritmo similar, a tifican porciones similares de secuencias. Los aci onen en el orden de similitud y largo de superpos Los algoritmos BLASTN, BLASTP, BLASTX, tBLASTN ién producen valores "esperados" para alineaciones. rado (E) indica el número de aciertos que se puede " al azar cuando se busca una base de datos del mism ontiene secuencias contiguas aleatorias. El valor iliza como un umbral de significación para determi rto con una base de datos indica verdadera simili plo, se interpreta que un valor E de 071 asignado a u linucleótidos significa que en un base de datos d a base de datos explorada, se podría esperar cidencias en la porción alineada de la secuencia con lar simplemente al azar. Para secuencias que tienen tit matrix choice. Nucleic Acids Research, 22:4 : //ww -igbmc .ustrasbg . fr/BioInfo/ClustalW/To . html) o ic Notredame, DesmondG. Higgins, Jaap Heringa, T-Coffe d for fast and accurate múltiple sequence alignment, . (2000) 302: 205-217)) o PILEUP, que utiliza ali esivas de pares . (Feng y Doolittle, 1987, J. Mol. Evol.

Las aplicaciones de software de reconocimi nes están disponibles para encontrar motivos o se irma. Por ejemplo, MEME (Múltiple Em para incit vos) encuentra motivos y secuencias de firma en un cuencias, y MAST (herramienta de alineación y bús vos) utiliza estos motivos para identificar lares o iguales en secuencias de consulta. Los re ST se proporcionan como una serie de alineaciones dísticos apropiados y una presentación visual vos encontrados. , MEME y MAST se desarrollaro cida de proteínas o determinar cuál (es) do cidos están presentes en la secuencia (Falquet et eic Acids Res. 30, 235) . Prosearch es una herrami e buscar bases de datos de SWISS-PROT y EMBL con u rma de secuencias dado.

Métodos para aislar polipéptidos Los polipéptidos de la invención, inclui péptidos variantes, se pueden preparar utilizando íntesis de péptidos que se conocen bien en la técn síntesis directa de péptidos utilizando técnicas da (por ejemplo, Stewart et al., 1969, in Sol ide Synthesis, WH Freeman Co, San Francisco Calif esis automatizadas, por ejemplo utilizando un Sint Péptidos 431A de Biosistemas Aplicado (Foste fornia) . Las formas mutadas de los polipéptidos t en producir durante las síntesis.

Métodos para producir constructos y vectores Los constructos genéticos de. la presente i renden una o más secuencias de polinucleótido nción y/o polinucleótidos que codifican polipépti nción, y pueden ser útiles para transformar, por ismos bacteriales, micóticos, insectos, mamí tales . Los constructos genéticos de la invención p uir constructos de expresión como se definen en la p Los métodos para producir y utilizar constructos g tores se conocen bien en la técnica y se describen e ambrook et al, Molecular Cloning: A Laboratory Ma Cold Spring Harbor Press, 1987 ; Ausubel et al, ocols in Molecular Biology, Greene Publishing, 19 Métodos para producir células hospederas que c tructos y vectores La invención proporciona una célula hospe ucción recombinante de polipéptidos de la invenc dos pueden implicar el cultivo de células hospeder o apropiado en condiciones adecuadas para o conduce esión de un polipéptido de la invención. El pol binante expresado; que puede ser opcionalmente s a el cultivo, luego puede separarse del medio, ederas o medio de cultivo mediante métodos que se con a técnica (por ejemplo, Deutscher, Ed, 1990, Me ology, Vol 182, Guide to Protein Purification) .

Las células hospederas de la invención también p es en métodos para la producción de un producto en rado por un polipéptido expresado de la invenc dos pueden implicar el cultivo de células hospede nción en un medio adecuado para la expresión de un pol binante de la invención, opcionalmente en pres rato enzimático adicional para el polipéptido exp renden las células también forman un aspecto de la i La producción de plantas alteradas en bio rancia al estrés ambiental se puede alcanzar a t dos de la invención. Los métodos pueden imp sformación de células vegetales y plantas con un c ñado para alterar la expresión de un polinucl péptido capaz de modular la biomasa y/o la toler és ambiental en las células vegetales y plantas . Lo ién incluyen la transformación de células vegetales una combinación de constructos diseñados para al esión de uno o más polipéptidos o polipéptidos c lar la biomasa y/o la tolerancia al estrés ambient las vegetales y plantas.

Los métodos para transformar células vegetales, rciones de las mimas con polinucleótidos se desc er et al, 1988, Plant Genetic Transformation ticamente plantas (por ejemplo, Birch, 1997, Ann Plant Mol Biol, 48, 297) . Por ejemplo, se pueden ategias para aumentar la expresión nucleótido/polipéptido en una célula vegetal, órga etapa de desarrollo vegetal donde normalmente se expresar ectópicamente un polinucleótido/polipépti la, tejido, órgano y/o en una etapa de desarrollo pa cual normalmente se expresa. El polinucleótido/pol esado puede derivar de la especie vegetal a trans e derivar de una especie vegetal diferente.

Se pueden diseñar estrategias de transformac cir la expresión de un polinucleótido/polipéptid ia vegetal, tejido, órgano o en una etapa de de icular en la cual normalmente se expresa. Las estra cen como estrategias de silenciamiento de genes.

Los constructos genéticos para la expresión de íficos de ciclo celular, promotores temporales, pr ibles, promotores constitutivos que son activo ía de los tejidos vegetales, y promotores recombina ión de promotor dependerá de la expresión te ial del polinucleótido clonado, si así se dé tores pueden ser aquellos normalmente asociados gén de interés, o promotores que derivan de genes as, virus, y bacterias y hongos patogénicos vegeta ialistas en la técnica podrán, sin imentación, seleccionar promotores que son adecua izar en rasgos vegetales de modificación y mo zando constructos genéticos que comprenden las se olinucleótidos de la invención. Ejemplos de pr ales constitutivos incluyen el promotor CaMV tor de sintasa de nopalina y el promotor de si ina, y el promotor Ubi 1 de maíz. Los promotores v pina de Agrobacterium tumefaciens , el terminador de zein, el terminador de pirofosforilasa de ADP-gl a sativa y el terminador Solanum tuberosum PI-PII Los marcadores seleccionables comúnmente utili sformación vegetal incluyen el gen de fofotransf icina II (NPT II) que confiere resistencia a la kan en aadA, que confiere resistencia a la espectino eptomicina, el gen de transíerasa de ace inotricina (gen bar) para resistencia a Ignite (A a (Hoechst) , y el gen de fosfotransferasa de hig ) para resistencia a la higromicina.

También se contempla el uso de constructos gené renden genes informantes (secuencias codificad esan una actividad que es extraña para el ho raímente una actividad enzimática y/o una señal vis ?1?, luciferasa, GUS, GFP) que se pueden utili uye otros genes que interactúan con el gen de int Los constructos genéticos diseñados para dis nciar la expresión de un polinucleótido/polipépti nción pueden incluir una copia antisentido nucleótido de la invención. En los constru nucleótido se coloca en una orientación antisen ecto al promotor y terminador.

Un polinucleótido "antisentido" se obtiene med rsión de un polinucleótido o un segmento del polin odo en que el transcrito producido sea complemen scrito de AR m del gen, por ejemplo, 51 GATCTA 31 (hebra codificadora) 3 * CTAGAT 5 sentido) 3'CUAGAU5' ARNm 5 ' GAUCUCG3 ' ARN antisentido Los constructos genéticos diseñados para silenc enes también pueden incluir una repetición invert sentido pequeño apuntado al transcrito equivalente a ve et al., 2002, Science 297, 2053). Se c esamente el uso del ARN antisentido pequeña corresp olinucleótido de la invención.

La expresión constructo genético, tal como se u ésente, también incluye ARNs antisentido pequeño nucleótidos útiles para lograr el silenciamiento La transformación con un constructo de expresión, define en la presente, también puede resu nciamiento de genes a través de un proceso conoc esión de sentido (por ejemplo, Napoli et'al . , 1990, P 9; de Carvalho Niebel et al., 1995, Plant Cell, 7, nos casos, la supresión de sentido puede imp eexpresión de la totalidad o de una parte de la s ficadora pero también puede implicar la expresi ón no codificadora del gen, tal como un intrón o u ? y/o secuencia de RNT de 51 o 3 ' , o el gen corresp Otras estrategias de silenciamiento de genes dajes de dominantes negativos y el uso de constr zimas (Mclntyre, 1996, Transgenic Res, 5, 257).

El silenciamiento pre-transcripcional puede pro és de la mutación del gen en sí mismo o sus ladores. Las mutaciones pueden incluir mutaciones p lazamientos del marco de lectura, inserciones, elimi stituciones .

Las siguientes son publicaciones representat lan protocolos de transformación genética qu izarse para transformar genéticamente las s cies vegetales: arroz (Alam et al., 1999, Plant Cell ; maíz (Patente de los Estados Unidos No. de Serie 5 81.840); trigo (Ortiz et al., 1996, Plant Cell Rep . ; tomate (Patente de los Estados Unidos No. 2.935) ; soya (Patentes de los Estados Unidos No. 5. 9.834; 5.824.877; 5.563.04455 y 5. 68.830) ; ananá os Estados Unidos No. de Serie 5.952.543) ; álamo (P Estados Unidos No. 4.795.855); monocotiledóneas e entes de los Estados Unidos No. 5.591.616 y 6.0 tales del género brassica (Patentes de los Estados U 8.958; 5.463.174 y 5.750.871); cereales (Patent dos Unidos No. 6.074.877); y ballico (Bajaj et al t Cell Reports, 25: 651-659) . Se contemplan otras encuentran disponibles otros métodos y protocolos bibliografía científica para uso por parte de los a técnica.

Pueden emplearse otros métodos conocidos en la alterar la expresión de un nucleótido y/o polipépt nción. Los métodos incluyen, a modo no taxativo, 1 et al., 2003, Methods Mol Biol, 2%, 205), la d interactúan con un polipéptido de la invención a t ologías tales como exhibición de fase (Dyax Corpo s péptidos interactuantes pueden expresarse en una carse a la misma para afectar la actividad de un pol invención. Se contempla específicamente el uso de s abordajes mencionados anteriormente para la alte presión de un nucleótido y/o polipéptido de la i Métodos para la selección de plantas También se proporcionan métodos para selecciona biomasa y/o tolerancia al estrés ambiental altera dos implican la evaluación de una planta para veri esión alterada de un polinucleótido o polipépti ción. Los métodos pueden aplicarse a una edad temp etapa temprana de desarrollo cuando no necesaria le la biomasa y/o tolerancia al estrés ambiental acelerar los programas de cultivo dirigidos a me nción son útiles como sondas o cebadores, tal como a presente, en métodos para la identificación de pl rancia al estrés ambiental alterada. Los polipépti ción pueden utilizarse como sondas en experim idación o como cebadores en experimentos basado ñados para identificar las plantas.

Alternativamente, pueden generarse anticuerpo péptidos de la invención. Los métodos pare generar y cuerpos son convencionales en la técnica (ver, por bodies, A Laboratory Manual, Harlow A Lañe, Eds, Co Our Laboratory, 1998) . Los anticuerpos pueden util dos para detectar la expresión alterada de polipép ian la tolerancia al estrés ambiental en plantas. Lo en incluir ELISA (Kemeny, 1991, A Practical Guide rgamon Press) y análisis por Western (Towbin & Gord mmo1 Methods, 72, 313) . típicas deseadas. Pueden cultivarse dos o más gene asegurar que las características fenotípicas del ienen y heredan establemente. Las plantas que result dajes de cultivo estándares también constituyen u a invención.

Puede decirse en términos generales que esta i iste en las partes, elementos y características a l referencia o que se indican en la memoria descript citud, individual o colectivamente, y toda combinaci s partes, elementos o características cualquier líos casos en los que se mencionan en la presente ros específicos que tienen equivalentes conocid ica con la que se relaciona, los equivalentes con ideran para ser incorporados en la presente d vidual en lo siguiente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS encía de la región no traducida (RNT) aparece sub La Figura 4 muestra la secuencia del vector entado en la Figura 2. La secuencia codificadora ece en negrita. El promotor similar a la dehidrin rsiva. La secuencia de la región no traducida (RNT) ayada .

La Figura 5 muestra la alineación del polipépti variantes del mismo. Los residuos conservados compl ecen resaltados con asteriscos. También se mu ción del motivo del dedo de zinc ti ANRCGFPGNPATQNLCQNCFL (SEQ ID NO: 16) en ORF136. T tra la posición del motivo del dedo de zinc KRVGLTGFRCRCGELFCGAHRYSDRHGC (SEQ ID NO: 18) en ién esta resaltado un motivo (CGFPGNPAT -SEQ ID NO: 1 otivo tipo A20 que se conserva completamente en encias. También está resaltado un motivo (RVGLTGF 1 o) al final de los 10 días de estrés por sequía y peraeion.

La Figura 9 muestra una gráfica que representa l rada en las plantas transgénicas en comparació igo no-transgénico durante la recuperación despu ía. Las líneas vegetales 7ael a 7ael7, también se DORF136-1 a DORF136-17 respectivamente; y la l ién se describe como la línea que expresa D35S:: eriano uidA) , el cual sirvió como testigo transgé co".

La Figura 10 muestra una gráfica que representa l rada en las plantas transgénicas en comparació igo no-transgénico durante condiciones de hidrataci líneas, vegetales 7ael a 7ael7 también se descri 36-l a DORF136-17, respectivamente.

La Figura 11 muestra el análisis de southern-blo Ejemplo 1: Identificación de polinucleótidos que m cción de biomasa y la tolerancia a los estreses am Introducción: El ballico perenne (Lolium perenne L. es una p ra de clima frío de la familia Gramineae y la tribu Fes generar un perfil de patrones relativos de expresión ballico, se extrajo A N de las muestras obtenidas d crecieron a temperatura ambiente, cultivadas tadas, deshidratadas y rehidratadas o deshidratad -pastoreo durante el otoño, verano, primavera e invi n para construir una biblioteca SAGE (análisis s sión génica) (Velculescu et al. 1995, Science 270: Materiales y métodos En este estudio se utilizó el ballico perenne (Loliu cv. Bronsyn. Se tomaron muestras cultivadas en zales activos en Dexcel, Hamilton, Nueva Zelanda d altivo durante 15 meses a 85% HR, 20°C/18°C y 16h/8 noche; testigo hidratado cultivado durante 55 días 18°C y 16h/8h régimen día/noche; 6 días a 70% HR, 22 h régimen día/noche, los almácigos se regaron durant ; muestra deshidratada regado solamente 55 días a 18°C y 16h/8h régimen día/noche; 3 días a 70% HR, 28 h régimen día/noche; 3 días a 50% HR, 28°C/20°C y 16h/8 oche; las muestras rehidratadas fueron de dratadas que se regaron durante 24 horas y se cultiva 2°C/16°C y 16h/8h régimen día/noche; las plantas con e fueron cultivadas durante 55 días a 85% HR, 20°C/18°C en día/noche; 7 días a 70% HR, 22°C/16°C y 16h/8 oche; 7 días a 70% HR, 6°C/2°C y 16h/8h régimen día/n igos se regaron durante toda su vida.

Construcción de las bibliotecas SAGE Se extrajo el ARN utilizando reactivo TRIZOL® (In La base de datos relacional fue diseñada para alma etas, bibliotecas y los recuentos de expresión rimentos de SAGE. Cada secuencia de etiqueta (incl encia enzimática) fue buscada en todo el buscador de rpuesto de ballico y en los conjuntos EST. La búsqueda s bas direcciones y solo se utilizó la correspondenci rgaron los resultados en la base de datos relacional u abordaje Formato de Características Generale p : //www3. ebi . ac . uk/Services/WebFeat) .

Todas las secuencias del buscador de genes de ball on anotadas utilizando búsquedas de homología en todas as siguientes bases de datos públicas y privadas: AGI TIGR Gene Indices, Arabidopsis, publicada el 1 04 OGI TIGR Gene Indices, Rice, publicada el 14-1 de GENESEQN Derwent patent DNA sequences 7-dic-2002 ent patent amino acid sequences 7-dic-2002 Os_unig edundant GenBank+EMBL+DDBJ+PDB sequences (but no or HTGS sequences) 11-mar-2003 swissprot The last majo the SWISS-PROT protein sequence datábase (no r-2003.

Un valor E de determinación inferior a E-05 y un jetivos por base de datos fueron almacenados en la bas ional .

Anotación de etiquetas: Las etiquetas con aciertos para los conjuntos d n anotadas al crear un sumario de todas las anotac ucraban secuencias. Se generó el resumen utili itmo para calcular la frecuencia de aparición de cad s anotaciones y se las clasificó en orden descenden número de apariciones. El resumen se limitó a 10 p tilizó una lista de palabras invalidadas para mación insignificante. La línea resultante del r La anotación detallada basada en los principales ac ecuencias involucradas se exhibió cuando se vio la in as etiquetas.

Se identificó una secuencia de polinucleótidos d icular al realizar un análisis BLASTX de las secu nucleótidos, que tenían etiquetas de SAGE exclusi ioteca SAGE del ballico perenne deshidratado, en cont factores de transcripción putativa. El resultado del 6 a la identificación de un gen proteico similar a u ORF136. En la SEQ ID NO: 7 se muestra un ADNc para O encias codificadoras de ORF136 se extienden desde la eótida 88 a la posición nucleótida 576. El pe scripto en nuestra biblioteca SAGE es : Datos para la Etiqueta de SAGE CCTGCGGCAG (SEQ queta de SAGE CCTGCGGCAG Epm -pastoreo 0 0 * epm = Recuentos ele Etiquetas por millón de Los siguientes cebadores se utilizaron para a 36 5 (basado en CLP0023004352-cF3_20040205) 827 CAGCCAGACTCTCTCTCGTACC (SEQ ID NO : 14 } 828 CTTCAGTTTCCTCCGTTCATTC (SEQ ID NO: 15} Ejemplo 2: Identificación de variantes de 0 F1 10 La secuencia de polinucleótidos ORF136 fue secuencia inicial para realizar una búsqueda discon blasto BLASTN en i) base de datos NR/NT de cole eótidos GenBank (v2.2.17 fecha de publicación 26 007) y ii) base de datos de secuencias de patentes a de publicación 26 de agosto de 2007) .

La secuencia de polipéptidos codificada por ? izó como secuencia inicial para realizar una cífica por posición repetida en BLASTP en comparaci de datos GenBank NR (v2,2.l7 fecha de publicaci lar programa de múltiple alineamiento Clust encias alineadas se visualizaron utilizando otra he MBOSS llamada "prettyplot" , que muestra las s eadas con color y las secuencias de consenso marcad a separada. El alineamiento se muestra en la Figu ORF136 y las proteínas variantes alineadas en recen ser factores de transcripción de dedo de z cterizan por la presencia de un motivo de dedo de (pfam01754 = X3-C-X (2-4) -C-X11-C-X2-C-X2, donde X quier aminoácido; Marchler-Bauer A, et al, 2007, s Res. 35: D237-40) en la mitad del extremo N-termi eína, y un motivo de dedo de zinc tipo A 1 (c -C-X (9-12) -C-X (1-2) -C-X4-C-X2-H-X5-H-X-C donde X quier aminoácido; Marchler-Bauer A, et al, 2007, s Res. 35: D237-40) en la mitad del extremo C-termi eína .

La extensión del motivo tipo AN1 en la proteína OR ltada en la Figura 5. La secuencia del motivo tip 36 se muestra en SEQ ID NO: 18. Este motivo se encue ervado en todas las variantes con 23 de 33 letamente conservados. Los solicitantes tificaron un motivo dentro del tipo AN1 que se e letamente conservado en todas las secuencias alin ción de este motivo completamente conservado se m igura 5, y la secuencia se muestra en SEQ ID NO: 1 La Figura 6 muestra un filograma de las secue eínas alineadas en la Figura 5.

El filograma se realizó mediante la alineación d os 1 - 6 utilizando los parámetros predeterminad amienta para análisis de secuencias de ClustalW en del Instituto Europeo de Bioinf : //www. ebi . ac . uk/Tools/clustalw2/ ) .

La Figura 1 muestra un mapa de (CORF136) . La sec 136 se muestra en la Figura 3 y en SEQ ID NO: 20.

La Figura 2 muestra un mapa de DORF136. La sec 136 se muestra en la Figura 4 y en SEQ ID NO: 21.

Transformación de plantas con los pollnucleóti nción Se transformó esencialmente el ballico perenne nne L. cv. Impacto como se describe en Bajaj et. a Reports, 2006, 25: 651-659). Se utilizaron rimentos de transformación callos embriogénicos der ones meristemáticas de los brotes de lineas de ccionadas y una cepa EHAIOI de Agrojbac eriuTn tumefa ctor binario modificado (CORF136 Figura 1 o DORF13 Se sumergieron los callos embriogénicos con cul bacterium producidos durante la noche durante 30 m ación constante. Se seleccionaron los callos resi ada clon a condiciones de invernadero conservadas aardó un clon equivalente en cultivo de te ido como malizaron diecisiete líneas transgénicas indepe 1 a 7ael7, también descriptas como DORF136-1 a DOR ectivamente) en un laboratorio con control ental, donde se evaluó su biomasa en condiciones 1. Los clones separados de estas líneas tambié tidos a estrés por sequía.

Hibridación por Southern Blot Se aisló ADN genómico de líneas testigo de Loliu Sformadas y no transformadas. Se cosechó aproximada e material de cuerpo de hoja y seudotallo de cada ó tej ido en un mortero con mano hasta convertirlo itrógeno líquido y se almacenó en un tubo de 50 m a la extracción. Se asiló ADN del tejido p cialmente como se describe en Doyle and Doyle, 199 ras. La reacción digerida luego fue precipitada co rifugada, se descartó el sobrenadante, se secó con ió a suspender en 25µ1 de H20d para la electrofor Las muestras de ADN digerido fueron s troforáticamente por aproximadamente 4 horas a 45 v 15 cm de gel de agarosa utilizando una solución amort orrida 1 x TAE. Luego de la electroforesis el aturalizado (NaCl 1,5M, NaOH 0,5M) y después neut 1 1,5 , base Tris 0,5M) antes de la transferencia membrana de nailon cargada positivamente (Hy izando un método alcalino como describe el prove thcare, Buckinghamshire , Inglaterra) . Se fijaron sferidos a la membrana utilizando Stratalinker (St olla, CA, EE.UU.) siguiendo las recom'endaci icante. Las membranas se almacenaron a 4°C entre p sferencia en una bolsa plástica hasta el tiempo re IG Easy Hyb Kit (Roche Diagnostics, Basilea, Suiza) a a 42 °C. Se desnaturalizó la sonda etiquetada con D ñutos) y se agregó a la solución de prehibridaci ranas fueron hibridizadas por 12 horas aproximad Luego las membranas de hibridación fueron someti dos de 5 minutos en una solución amortiguadora de rigor (2 x SSC, 0,1% SDS (p/v) ) a temperatura amb ación, seguido de dos lavados de 15 minutos en tiguadora de lavado de alto rigor (0, 1 x SSC, 0# 1% SD alizaron más lavados utilizando el juego de DIG y ción amortiguadora de bloqueo (Roche Diagnostics, a) . Luego las membranas fueron incubadas por 30 eratura ambiente con una solución bloqueadora que cuerpo anti-DIG-AP (Roche Diagnostics, Basilea, o se detectaron las sondas hibridizadas med sgénicos para el ADN plantilla de P DORF136.

Ejemplo 4: Alteración de la tolerancia al estrés a lantas transformadas con polinucleótidos de la in Evaluación de sequía en cámara de crecimiento Se construyó un sistema de crecimiento de plant de longitud; con tubos de plástico para aguas plu . Se colocaron los tubos en una bandeja móvil y se s costados con cuerdas y un marco metálico. Se tapo s en la extremidad inferior con lana de roca y se resivamente con arena de argamasa lavada y agua pa nvasado uniforme. En el centro de la extremidad a tubo se plantó una mata de ballico perenne (25 brot eventos transgénicos independientes y cada evento is tubos. Las plantas fueron dispuestas aleatoriam da una de las seis réplicas y fueron cultivadas en un tiva de 70%; en un ciclo 16/8 horas día/noche y Lción de Hoagland y el agua. Durante la evaluaci ía, todas las plantas fueron sometidas a 50% de -2 tiva; ciclo 16/8 horas día/noche y 650 pmol.m sidad luminosa. El estrés por sequía se llevó a cab días en la primera ronda cuando el contenido volum en la tierra arenosa era inferior a 1% a 12 cm de prof contenido volumétrico de agua en las plantas atadas era superior a 10% a 12 cm de profundidad. strés por sequía y se retomó la irrigación en las esadas por sequía. Todas las plantas también volvi e humedad relativa; ciclo 16/8 horas día/noche y 650 de intensidad luminosa. Luego de cuatro días (Figu 6 la altura de las plantas y se volvió a recortar ra de 15 cm. Se tomó el peso en fresco de la muestra ego se secaron las muestras. Se permitió que las ieran en condiciones de rie o total or un total d blecimiento se cortó la irrigación subsuperf enido de humedad de la tierra disminuyó y alcanzó un c métrico de agua (CVA) inferior a 1,0%. Luego de u o irrigación siguió un período de nuevo crecimien Biomasa por encima del suelo El peso en seco de las hojas cortadas se determ % CVA) y después del estrés por sequía (<1,0% CVA) . s fueron cortadas a 15 cm de altura. El peso en fr s hojas se midió inmediatamente, luego se secaron °C durante 96 horas y se midió el peso en seco cidad de crecer bajo el estrés por sequía se calc entaje de pérdida de masa inversa, que se calcul rencia entre el peso en fresco en condiciones sin ondiciones de estrés por sequía sobre el peso en iciones sin estrés, es decir, (1- [{Peso en fresco ( ) en condiciones sin estrés - Peso en fresco (o peso rimento (Figura 9) . Estas plantas también tuvieron imiento que el testigo cuando fue analizado el cre ondiciones sin estrés (Figura 10) .

Ejemplo 5: Alteración de la biomasa de las sformadas con polinucleótidos de la invención.

El procedimiento que se describe en el Ejemplo 4 ealizo con las plantas transgénicas de tipo silve condiciones de hidratación total. Varias de la sgénicas produjeron más biomasa que las plantas estre en cada una de las cosechas (esencialmente ribe en el Ejemplo 4) . Cuando se determinó el cre lado durante un período de cuatro cosechas, la 36-5, 12 y 15 produjeron sistemáticamente más bio orrespondiente testigo (líneas no transgénicas) , 136-5 (7ae5) , 7 (7ae7) y 15 (7ael5) , por ejemplo m mento de 250-300% de biomasa en comparación con l blecidas, las plantas se cultivaron en bolsas de pol 4 en un medio de maceta de uso general (60:40 turb licó un fertilizante foliar para el crecimiento (Ya nda, Auckland) en un intervalo semanal. Las plant rtadas regularmente a una altura de aproximadame evitar el florecimiento.

Se cultivaron genotipos de cultivar Impact isición A10745, argot Forde Germplasm Centre, P h, Nueva Zelanda) como parejas de cruzamiento en pr cruzamientos controlados con transgénicos primar nició la vernalización cuando las plantas -la sgénicas y las parejas de cruzamiento-habían desarr mo de 20 brotes. Se trasladaron las plantas del in a cámara refrigerada a 6°C y 8 horas de fotoperío odo de 12 semanas. Se suministró la iluminación con odio de alta presión de 400 w SonT Agro (Philips florecillas. Se mantuvo a las plantas dentro de l ruzamiento por aproximadamente tres meses hast rvó la senescencia de tallos inflorescentes . En e sécharon separadamente los inflorescentes de cada amiento en bolsas de papel y se incubaron en uesto a 28 °C durante dos semanas.

Se separaron las semillas de las florecillas del chado mediante frotación en una trituradora de semil superficies de goma corrugadas. Se retiró la c de de las semillas al pasarlas por un tamiz de ímente se limpiaron las semillas en un soplador de h Dakota (Seedburo Equipment Co., Chicago, EE. aron y pesaron las semillas que se obtuviero amientos individuales .

La segregación del ADN plantilla de los almacig ración TI fue determinada por PCR utilizando Tabla 1: Rendimiento de semilla en planta TO a transgenicas con inserción de una sola copia Previo a la emergencia de las anteras o el estig lorecillas, se combinaron los tallos inflorescent Tabla 2 : Rendimiento de semilla en la generac ir de líneas transgénicas con inserción de una so Linea x Cantidad promedio Rendimi de semillas por promedi planta semilla (g) 7AE4 363 0.618 7AE5 205 0.349 7AE8 137 0.23 7AE13 144 0.244 7AE15 211 0.358 7AE17 25 0.042 ORF138 promedi 181 0.307 Testigo 61 0.103 Transgénico 1 Testigo 119 • 0.203 Transgénico 2 romedio testigo 90 ¦0.15 transgénico .os inflorescentes de ambas parejas de cruzamient ichadas conjuntamente y las semillas se cosechar Í ser secadas adicionalmente en una incubadora a excepción del evento transgénico 7AE8, el cual una planta de progenie transgénica, se cal imiento de semilla para cada evento transgé ediar el rendimiento de semillas para más de tres rogenie 10 transgénica y sus' respectivas pa arniento. Los datos sobre el rendimiento de se aran con el rendimiento de semilla promedio amientos de plantas de progenie transgénicas di provenían de la transformación de las plantas de un gen 15 diferente.

La Figura 12 muestra una representación grá nto en el rendimiento de semilla en las pí sformadas con ORF136 (=ORF138) , tomado de l RESUMEN DE SECUENCIAS: Tipo de Información Especi secuencia poliéptido ORF136 Loliu Poliéptido gb/A2Z2J6.1 Oryza indic Poliéptido gb/AEZ09556.1 Oriza indic Poliéptido EAZ45178.1 Oryza Poliéptido Q84 D8.1 TMRI Oryza Poliéptido NP 001106262.1 Zea m Polinucleótido ADNc ORF136 Loliu Polinucleótido gb/AF140722/A2Z2J6.1 Oryza indic Polinucleótido gb/CM000134/AEZ09556.1 Oriza indic Polinucleótido gb/C 000146/EAZ45178.1 Oryza indic Polinucleótido gb/ÁY601878/Q84PD8.1 | TMRI Oryza indic Polinucleótido NM 001112721/NP 001106262.1 Zea Polinucleótido Etiqueta SAGe Loliu Polinucleótido cebador Loliu Polinucleótido cebador Loliu Peren Polinucleótido motivo A20 Loliu Polinucleótido motivo A20 conservado Artif Polinucleótido motivo AN1 Artifi Polinucleótido motivo AN1 conservado Artifi

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como ante ama como propiedad lo contenido en las si indicaciones : 1. Polinucleótido aislado que codifica éptido que comprende la secuencia de SEQ ID NO ante del mismo que comprende una secuencia con al identidad a SEQ ID NO:l, caracterizado porque el p entidad se calcula sobre la longitud completa de SEQ donde la variante es un polipéptido capaz de modul ta al menos uno de : i) biomasa, ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés a ccionado de sequía, frío, congelamiento, calor y sa a mitad C-terminal del polipéptido. 5. Polinucleótido aislado de conformida indicación 2, caracterizado porque el dominio e la fórmula general: X3-C-X (2-4) -C-X11-C-X2 -C-X2 , ser cualquier aminoácido. 6. Polinucleótido aislado de conformida indicación 2, caracterizado porque el dominio e la fórmula -C-X (9-12) -C-X (1-2) -C-X4-C-X2-H-X5-H-X-C, donde X uier aminoácido. 7. Polinucleótido aislado de conformida indicación 2 , caracterizado porque el domino tipo ños 70 % de identidad a la secuencia de SEQ ID N 8. Polinucleótido aislado de conformida indicación 2 , caracterizado porque el domino ende la secuencia de SEQ ID NO: 17. 12. Polinucleótido aislado de conformida indicación 2, caracterizado porque el domino rende la secuencia de SEQ ID NO: 18. 13. Polinucleótido aislado de conformida indicación 1, caracterizado porque el polin do codifica para un polipéptido con la secuencia 14. Polinucleótido aislado de conformida indicación 1, caracterizado porque el polinu do comprende una secuencia con al menos 70 % de i secuencia codificante de SEQ ID NO: 7. 15. Polinucleótido aislado de conformida ndicación 1, caracterizado porque el polin rende una secuencia capaz de hibridizar bajo co ras a la secuencia codificante de SEQ ID NO: 7. 16. Polinucleótido aislado de conformida ii) rendimiento de semilla, y iii) tolerancia a al menos un estrés a ccionado de sequía, frío, congelamiento, calor y sa 18. Polinucleótido aislado de conformidad indicación 17, caracterizado porque el polinucle se define en cualquiera de las reivindicaciones 3 19. Polinucleótido aislado de conformidad indicación 17, caracterizado porque el polinu ado comprende la secuencia codificante de SEQ ID 20. Polipéptido caracterizado porque es codifica ucleótido de conformidad con cualquiera indicaciones 1 a 19. 21. Polinucleótido aislado caracterizado porque c ragmento, de al menos 200 nucleótidos de longitu ucleótido de conformidad con cualquiera ndicaciones 1 a 19. indicaciones 22 o 23. 25. Célula hospedadora genéticamente mod terizada porque sirve para expresar un polinucle rmidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 26. Célula de planta caracterizada porque c onstrucción de conformidad con la reivindicación 27. Planta caracterizada porque comprende u lanta de conformidad con la reivindicación 26. 28. Método para producir una planta con al i) biomasa alterada, ii) rendimiento alterado de semilla, y iii) tolerancia alterada a al menos un estrés a cionado de sequía, frío, congelamiento, calor y sa terizado porque comprende la transformación de u lanta o planta con: ta . 30. Método de conformidad con la reivindicación eterizado porque se incrementa la alteración. 31. Método de conformidad con cualquiera indicaciones 28 a 30, caracterizado porque la p sforma con una construcción de conformidad indicación 22 o 23. 32. Método de conformidad con cualquiera indicaciones 28 a 31, caracterizado porque el polinu fica para un polipéptido que codifica para la sec rmidad con cualquiera de SEQ ID NO: 2 a 4 y 6. 33. Método para seleccionar una planta con al meno i) biomasa alterada, ii) rendimiento alterado de semilla, y iii) tolerancia alterada a al menos un estrés a ccionado de sequía, frío, congelamiento, calor y sa eterizada porque se modifica genéticamente para co polinucleótido de conformidad con cualquiera indicaciones 1-19. 36. Grupo, o población de plantas caracterizado p ccionados por el método de conformidad con la reivi 37. Una parte, fruta, semilla, material CO águlo o progenie, caracterizado porque es una p rmidad con la reivindicación 27, 34 o 35. 38. Una parte, fruta, semilla, material eo gulo o progenie de una planta de la reivindica Cterizado porque se modifica genéticamente para co nos un polinucleótido de conformidad con cualquie ndicaciones 1 a 19, o una construcción de la reivi