MX2010012035A - Metodos de formacion de imagenes y composiciones que comprenden colorantes fluorescentes asociados con componentes virales para representacion mediante imagenes de los nervios. - Google Patents

Abstract

En la presente se describen composiciones y métodos para representar mediante imágenes células nerviosas. La composición comprende un colorante fluorescente y un componente viral seleccionado de un virus neurotrópico de replicación defectuosa, una proteína viral de un virus neurotrópico y un cápsido de un virus neurotrópico. Aunque el colorante fluorescente por sí mismo no puede penetrar las células nerviosas, el colorante fluorescente se une al componente viral para formar un complejo de colorante/componente viral que puede penetrar células nerviosas.

Description

METODOS DE FORMACION DE IMAGENES Y COMPOSICIONE RENDEN COLORANTES FLUORESCENTES ASOCIADOS CON CO ALES PARA REPRESENTACIÓN MEDIANTE IMÁGENES DE LO SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de 35 U.S.C. § 119(e) la Solicitud Provisional 61/127,659, presentada el 14 de mayo de 2008 y isional de Patente No. 61/082,981 presentada o de 2008, las descripciones de las cuales se i por referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN En la presente se describen composiciones se refieren al campo de médicas. statectomia . Como antecedente, el cáncer de próst o más común de cáncer en hombres americanos. U tratamiento común es la remoción -del tejido de cerosa (es decir, prostatectomía ) antes de que disemine localmente y antes de la metásta plicaciones de prostatectomía radical ontihencia e impotencia. Un porcentaje impo bres que padecen procedimientos de pros icales se vuelven impotentes debido a la lesi vios cavernosos durante la cirugía.

El riesgo de lesión al nervio iatrogén ucirse evitando la lesión a los haces de ne ' ''i re a lo largo de la superficie de la gl nd «stata y son necesarios para una erección. Sin e 'ugía con preservación de los nervios exi icuencia es difícil de lograr debido a la dific SUMARIO DE LA INVENCIÓN En la presente se describen composiciones a representar mediante imágenes los nervios. Esto den localizarse en diferentes áreas de un sujeto.

También en la presente se desc cubrimiento que une un colorante fluorescen ponente viral (v.gr., virus, proteínas virales, c También se describe en la pres cubrimiento de que la unión de un colorante fluo componente viral (v.gr., virus, proteínas sidos) capaces de penetrar axones de nervios pue complejo de colorante/componente viral que puede nes de nervios, permitiendo asi la representació genes de células de nervios mejorada. Una modal i composición que comprende: un colorante fluorescente; y En estas y otras modalidades descrita sente, los virus neurotrópicos : defectuosos licación pueden ser, por ejemplo, componente nuados o inactivados que pueden penetrar la viosas. En otra modalidad, la composición pued una que comprende el colorante fluorescent onente viral seleccionado de un virus neurotró teina viral de un virus neurotrópico y un cáps us neurotrópico. Consecuentemente, otra modalid vacuna, que comprende: un colorante fluorescente, y un componente viral seleccionado de rotrópico, una proteina viral de un virus neuro cápsido de un virus neurotrópico, en donde el colorante fluorescente se ponente viral paxa formar un compl permitiendo que el colorante fluorescente onente viral para formar un complejo de ponente viral que puede penetrar células nervios Otra modalidad provee métodos para re iante imágenes los nervios y/o diagnosticar anor condiciones de nervios. Los métodos incluyen los administrar una composición, como se descri senté, al sujeto, (b) permitir el complejo de c colorante/viral para penetrar células nervio ica una cantidad suficiente de energía radiante manera que el colorante emite fluorescencia, ención intraoperativa de una imagen de fluoresc eto. El método puede incluir el paso de observar orescente para observar uno o más nervios en el ervar la imagen fluorescente para determinar si o más nervios. un virus neurotrópico, y un cápsido de rotrópico, en donde el colorante fluorescente se onente viral para formar un compl orante/componente viral; (b) permitir que el comple orante/componente viral penetre células nerviosas (c) aplicar una cantidad suficiente d iante al sujeto de manera que el coloran orescencia; (d) obtener intraoperativamente una orescente del sujeto, y (e) observar la imagen fluorescente para o más nervios en el sujeto.

Otra modalidad provee un método para di condición de un nervio, comprendiendo: en donde el colorante fluorescente se onente viral para formar un compl rante/componente viral; (b) permitir que el comple rante/componente viral penetre células nerviosas (c) aplicar una cantidad suficiente de iante al sujeto de manera que el coloran rescencia ; (d) obtener intraoperativamente una rescente del sujeto, y (e) observar la imagen fluorescente para d se corta el nervio.

Otras modalidades proveen un kit que con osiciones descritas en la presente ju trucciones para usar la composición de acuerdo de los métodos descritos en la presente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 describe esquemáticamente u representación de imágenes médicas; La Figura 2 es una gráfica de flujo que ritmos para representación mediante imágenes mé en llevarse a cabo por software instalado esador de computadora; La Figura 3A muestra una imagen fluoresce lda del ratón del Ejemplo 3; La Figura 3B es una imagen luminosa nca) de la misma espalda del ratón de la Figur representación mediante imágenes de fluorescenci La Figura 3C es una representación de im rescencia con alguna iluminación de luz visib la espinal expuesta del ratón del Ejemplo 3; La Figura 3D es una imagen fluorescente de l n spían y el nervio fluorescente del pie izquierd esentación de imágenes de luz fluorescente y bla La Figura 4C es una imagen fluorescente n de la Figura 4B; La Figura 4D son imágenes fluorescentes lio de raíz dorsal fluorescente rebanado ierdo de la espina del ratón del Ejemplo 4 únic blanca, con un segmento corto de sus axones e cho del ganglio y (ii) el ganglio correspond derecho de la espina, cuyos axones de las alm a pata derecha no fueron inyectados.

La Figura 4E son imágenes de fluorescenci anglio de la Figura 4D(i) y (ii) el ganglio de La Figura 4F es una imagen de fluo ntada del ganglio de la Figura 4E(i); La Figura 5C muestra un dibujo anatomic emidad derecha de conejo para comparación con luorescencia; La Figura 5D es una imagen de un segment nervio safeno, en luz blanca visible; La Figura 5E es una imagen de fluoresc tra un segmento aislado del nervio saf rescencia de complejo de ICG/HSV-2ARR; Las Figuras 5F y 5H son imágenes de fluo muestran, respectivamente, un segmento extir io safeno de los dos marcos previos (Figura io in situ (Figura 5H) ; · Las Figuras 5G y 51 son imágenes de fluo muestran el segmento extirpado del nervio saf ra 5F pero teñido para el gen LacZ del virus IC inactivado por UV; En una modalidad, la composición incluye un como un colorante fluorescente usado para repr ante imágenes médicas. Sin embargo, muchos colo adecuados para representar mediante imágenes iones del cuerpo, tales como nervios, dado rantes normalmente son incapaces de penetrar iosas. En la presente se describe el descubri un componente viral neurotrópico, es decir, un c l capaz de penetrar células nerviosas., se pu transportar axonalmente un colorante a través d la red de nervios . Esto puede lograrse fo iejo de un colorante unido al componente viral.

Colorantes Como se usa en la presente, el término " rescente" o "colorante" significa una pequeña m proteína u otro polímero o macromolécula q n ia emitiendo luz en el ran o de lon itu tras que en otras modalidades, puede ser so dos. En ciertas modalidades, el colorante es un tricarbocianina tal como un verde de indociani íó por Akom, Inc. (Buffalo Grove, IL) . El col es aprobado por FDA para uso humano. lidades, el colorante es verde de infracianina . lidades, el colorante se seleccionan de isotioc resceína, rodamina, ficoeritrina, fic icocínaina, o-ftaloaldehído, fluorscamina, Beng de tripano, fluoro-dorado, 3-indocianina-verde- olidina-tiona, proteína verde fluorescente, prot rescente, proteína amarilla fluorescente, prot rescente y otras proteínas fluorescentes. Los c en mezclarse o combinarse, en algunas modali en usar análogos de colorantes. Un "análogo de c un colorante que se ha modificado químicamente, rescente verde se une covalentemente a una pr s neurotrópico que penetra las células nerviosas.

Componentes Virales En una modalidad, el componente viral se s n virus, proteínas virales o cápsidos. En una m proteina viral es un análogo de proteina viral lidad, las proteínas virales y análogas pueden célula nerviosa por si misma, sin ser parte de u l o virus completo. En otra modalidad, las les y análogas pueden ser parte de un cápsido s completo que penetra por si mismo una célula análogos tienen una estructura de ácidos rente que da como resultado los cambios de am servadores, que aunque altean la secuencia prima eína o péptido, no alteran normalmente su fun En una modalidad, la proteína viral y los a misma pueden aislarse antes de que el coloran ,l s * Debido a que se usa en aplicaciones médi onente no es virulento o "con replicación def se usa en la presente, el término "con re ctuosa" significa no formar partículas de virus irus) en la célula blanco (una célula nerviosa) lidad, "con replicación defectuosa" se refie pacidad para reproducir. Un virus "defec icación" puede referirse también a un virus ate modalidad, los virus atenuados son virus vivos q virulencia. En una modalidad, los virus atenua ican. En otra modalidad, pueden expresar les en célula infectadas sin replicación. lidad, los virus atenuados se replican y dosis de luz UV que inhibirá la form de ciertos virus, reproducidos en la siguie Tabla 1 En una modalidad, la mutación puede viendo o inactivando material genético viral o virus de ARN, o ADN para virus de ADN) o avax© (Merck & Co., Inc., Whitehouse Stat ecuentemente, otra modalidad provee una rendiendo : un colorante fluorescente; y un componente viral seleccionado de otrópico, una proteina viral de virus neurotróp ido de un virus neurotrópico, en donde el rescente se une al componente viral para f iejo de colorante/componente viral que ta otrópico, es decir, es capaz de penetrar cél ema nervioso. La unión entre el colorante y el eínas virales pueden ocurrir a través racciones de van der Waal, interacciones de lo, interacciones de interacción de catión-pi, ógeno, unión iónica, unión covalente, o cualq de unión suficiente para que el colorante ent mutante del mismo. HSV-2 infecta células del ioso. El gen de HSV-2 ICP10 codifica una e nucleótido reductasa (RR) comprendida de dos sub minada como las subunidades grande y pequeña, c genes UL39 y UL40, respectivamente. El gen HS eBank No. M12700) se describió en las Patentes 6,013,265, 6,054,131 y 6,207,168.

En un ejemplo de una mutante de HSV-2, e ribonucleótido reductasa (RR) se suprime de I inación de este dominio es útil dado que la ltante se vuelve defectuosa en la replicación.

En una modalidad, el virus es la forma m 2, ICPIOARR, en el cual el domino de ribo ctasa de ICP10 se reemplaza con el gen que codif virus ICPIOARR se conoce en la materia (Peng , Virology, 216:184-196; la tinción especifica Los procedimientos de biología molecular cidos en la material pueden usarse para cre uados. Se describen procedimientos ilustra rook y otros (1089, Molecular Clcning: A L al, Cold Spring Harbor Laboratory, New York) , e ros (1997, Current Protocols in Molecular Biol y & Sons, new York) y en Gerhardt y otros (ed ods for General and Molecular Bac teriology, ety for Microbiology, Washington, D.C.).

Composiciones Como se describió antes, en alunas modali osición incluye un colorante unido a un compone replicación defectuosa. En ciertas modalid osición incluye un colorante unido a una proteín s inactivado, como se describe además de la pres permitiendo que un colorante fluorescente componente viral para formar un comp rante/componente viral que es capaz de penetra iosas .

En algunas modalidades, la composición o ningún colorante que no se puede unir al eína viral. Por ejemplo, la cantidad de colora crear la composición puede titularse a la ca s o proteína viral usada. Similarmente, se pued colorante extraño (no unido) puede removers osición a través de diálisis o usar un gra rosa .

También en la presente se describe la prep de composiciones descritas en la present osición puede consistir del ingrediente activo forma adecuada para la administración a un suj otrópico, cápsido viral o proteína viral a la cu olorante fluorescente.

Como se usa en la presente, el término acéuticamente aceptable" significa una co ica con la cual el ingrediente activo puede com siguiendo la combinación, puede usarse para ad ngrediente activo a un sujeto.

Como se usa en la presente, el término és iológicamente aceptable" significa una forma de del ingrediente activo, que es compatible con ingrediente de la composición y que no es pe el sujeto a quien se del administra la composic Las formulaciones de las compasiones des resente se pueden preparar por cualquier método esarrollado después en la material de fármaco ral, dichos métodos preparatorios incluye el animales de todas las clases. La codific osiciones adecuadas para la administración nos con el fin de hacer adecuadas las composici nistración a varios animales se entiende bie acólogo veterinario experto comúnmente puede izar dicha modificación únicamente con experi naria, si hay alguna. Los sujetos para qu empla la administración de las composiciones no se limitan a, primates humanos y no humanos feros .

Las composiciones se pueden preparar, e er en las formulaciones adecuadas para nistración parenteral, intravenosa, oftálmica, i alquier otra.

Las composiciones se pueden preparar, e er en volumen como una sola dosis untarla, o Como se usa en la presente, "admin nteral" de una composición incluye cualquier nistración caracterizada por ramificación fisi do a un sujeto y administración de la compo és de la ruptura del tejido. La administración p uye por lo tanto, pero no se limita a, la admin una composición por inyección, por aplicaci osición a través de la incisión quirúrgica, cación de la composición a través de una h úrgica de penetración de tejido y simila icular, la administración parenteral se conte uye, pero no se limita a, inyección sul aperitoneal , intramuscular, intraesternal y té sión dialitica de riñon.

Las formulaciones de una composición ade nistración parenteral comprende un ingredient uspensiones, soluciones, emulsiones en vehículo uosos, pastas y formulaciones implantables de l enida o biodegradables . Dichas formulacione render además uno o más ingredientes ad uyendo, pero no limitado a, agentes de su bilización o dispersión. En una modalidad ulación para administración parenteral, se p ediente activo en forma seca (es decir, polvo, g ilizada) para reconstitución con un vehículo r., agua libre de pirógeno estéril) antes nistración parenteral de la composición reconsti Las dosis que pueden administrarse a un ., un ser humano, varían de aproximadament dedor de 108, o de aproximadamente 102 a alreded e aproximadamente 103 a alrededor de 108 uni ación de placa de virus por gramo de peso cor Métodos de Representación Mediante Imágenes Una modalidad provee un método para re ante imágenes por lo menos un nervio de un s en puede obtenerse intraoperativamente . Por lo en donde la cirugía será llevada a cabo o las anas pueden ser expuestas quirúrgicamente. E rende: (a) administrar la composición descrit enté para formar un complejo de colorante/c l, (b) permitir que el complejo de colorante/c l penetre las células nerviosas # (c ) aplicar una ciente de energía radiante al área de manera rescencia el colorante, (d) obtener intraopera imagen de fluorescencia y (e) observar la rescencia para determinar la presencia o ausenc enos un nervio en la imagen de fluorescencia.

En una modalidad, la "observación de la liciad, un uso para la asignación de los ne aoperatoria . Se prevé que esta tecnología izar para teñir-etiquetar nervios para su us roscopía, una técnica de imagen de uso común cos para obtener las imágenes en movimiento e de las estructuras internas de un paciente. Por visualización intraoperatoria del campo d úrgico, por todos los medios convencionales dis e ocurrir por ejemplo que la ubicación nocimiento de los nervios, especialmente ficaciones del mismo, es insuficiente para as gía conservadora de nervios. En tales situacione roscópico intraoperatorio de la innovación te enté será fundamental para obtener r sfactorios .

Con base en los experimentos public rante se desplaza al área a explorar y está pr a zona en el momento de la representación enes. La cantidad de tiempo requerido puede de aplicación de imágenes del nervio y el nistración. Como un ejemplo, la composición p nistrado hasta o menos de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 s de la representación mediante imágenes en dét edimientos, por ejemplo, sobre la base de la el colorante tiene que viajar en la página de na modalidad, la composición se administra no má horas antes de la representación mediante imágen Al observar la imagen de la fluoresce po quirúrgico se puede determinar la ausencia o n nervio en la imagen. A menudo, los nervios tificar por su tamaño, forma y ubicación a izando la iluminación convencional del campo q ación de uno o más nervios para determinar ará a cabo el procedimiento quirúrgico. Por ndose en la información obtenida a través del u dos, el equipo quirúrgico puede decidir h sión en un punto en el sujeto en donde es menos corten accidentalmente o quirúrgicamente en con ervio en particular con base en la ausencia per ervio de esa zona.

Otras modalidades contemplan la obtenció alidad de imágenes. La pluralidad de imágenes arada entre si para determinar que un nervio ido daños, por ejemplo, corte inadvertido.

La información obtenida de la imagen capt ar en el trasplante de los extremos de los nerv ionan. En el caso de corte transversal, los in io se pueden aplicar directamente a los extre io ha sido lesionado o seccionado o resectado c ejemplo, durante un procedimiento quirúrgico, lidad, el método de diagnóstico incluye los pas dministración de la composición descrita en la sujeto, (b) permitir que el compl rante/componente viral penetre en las células n aplicar una cantidad suficiente de energía ra to de manera que el colorante emite fluoresce ner intraoperat ivamente una imagen de fluoresc to, y, (e) observar la imagen de la fluorescenci uno o más nervios en el sujeto y/o determin iona uno o más nervios.

Por lo tanto, al ver una imagen de un n rio puede determinar si un nervio en particula ionado. En algunas modalidades, la imagen se úti rminar si un nervio seccionado ha sido corre cuerdo con los métodos descritos. Por ejemplo, l gulares pueden indicar transección. Del mismo mó io parece más largo o más amplio en una prime en una imagen posterior, esto también puede in ervio ha sido seccionado. Por el contrario, sx io más largo o más amplio en una imagen posterio imagen anterior, esto puede indicar que se ha r en algunas modalidades, el método contempla la mágenes múltiples.

Dispositivos para la representación enes Una vez administrado, el colorante flúore omposición se excita hasta fluorescencia y su lu captada por una cámara. Un dispositivo adecua ema SPY (Novadaq Technologies Inc., Mississauga, rolador 120, fuente de energía de luz 130 y cí rolador/cronómetro 140. El regulador 120 con eratura de la fuente de energía de luz plo, la temperatura de un diodo láser afec itud de onda de operación (por ejemplo, un camb or grado centígrado) . En algunas modalidades, ribe en este documento, la fuente de energía d uede ser un láser de diodo y por lo tanto un co puede no ser necesario. El circu rolador/cronómetro 140 controla el tiempo de la' gía de luz 130 al detector/cámara 100 a t utadora 150. También incluye el software de proc imágenes en el medio legible por computadora utadora 150 está en comunicación eléctrica con y la pantalla 160. La pantalla 160 recibe enes de la computadora 150 y las muestra. lidades, la fuente- de energía de luz 130 pued Se puede iluminar directamente el tejido de i ampo de visión (es decir, puede ser no requerido . La cámara capta la radiación 100 emitida rante después de que se excita y transmite d s de imagen a la computadora 150. El lente 180, y la cámara 100 son parte de la cabeza de for enes 230. La cabeza 230 puede ser una cabeza a algunas modalidades, la cabeza 230 incluye a or de distancia/indicador de enfoque 220. Los co os sistemas se describen con más detalle en la p En ciertas modalidades, la energía rad ca a los tejidos de interés, en una cantidad s causar que un colorante fluorescente emita flúo itiendo así que sea reflejado el tejido de in nas modalidades la fuente de la energía de l itud de onda sufostancialmente uniforme. El lás render la óptica para la divergencia del rayo ca puede ser ajustable para permitir la variaci o de iluminación. La óptica ajustable pued ién para proporcionar una iluminación uniforme dada (por ejemplo, el campo de visión) .

En algunas modalidades, la salida de f inua o casi continua. En otras modalidades la s r es por impulsos. La salida de impulsos p ronizada con la adquisición de imágenes mediant un generador de impulsos. En algunas modalid lso del láser puede durar por lo menos 3 femto algunas modalidades la salida del lás ximadamente 30 segundos. En otras modalidades láser dura de aproximadamente 0.5 seg ximadamente ß? segundos. Un régimen de r da en el rango de 1 a alrededor de 4 vatios. lidades aún la potencia media es inferior a 5 vat En algunas modalidades, la fuente de la e luz incandescente con un filtro adecua orcionar una longitud de onda adecuada de cir el colorante fluorescente para fluorescen rgo, en otras modalidades de la fuente de luz es or de luz (LED) .

En algunas modalidades, la energía radia r una longitud de onda en el rango de 150nm a 1 gía puede abarcar luz infrarroja. En algunas mo üz de excitación tiene una longitud de onda de 05 nm. En ciertas modalidades la luz de excitac longitud de onda en el rango de cerca de 80 En una modalidad, la energía de luz de excit nistra en una longitud de onda es más cort algunas modalidades. En estas modalidades, ites de luz pueden ser utilizados, por ejemplo, r para excitar un primer colorante y un segu excitar el segundo colorante. El experto entien te de luz será elegida o configurada para ex rante particular. En otras modalidades, una so luz se puede configurar para excitar los c iples, por ejemplo, por la alternancia de la Io en la que se emite la energía.

La cabeza de formación de imágenes 230 pu uesta por un sensor de luz, por ejemplo, una cám adquisición de imágenes se puede realizar quier sensor capaz de detectar una señal fluo ejemplos incluyen sensores basados en silicio, os de óxido-semi óxido de metal (CMOS, por sus és) y película fotográfica. En una modalidad En algunas modalidades, la posición relati ra y el láser se fija con el fin de aumentar la ducir al mínimo el ruido de fondo. En estas mod láser se encuentra en un ángulo de m ximadamente 85° con respecto a los ejes del lá ra. En otras modalidades, el láser se encuent lo de 20° a 70° con respecto a los ejes del lá ra. En algunas modalidades, el láser se encuent lo mayor a 85° con respecto a los ejes del lá ra. Este ángulo puede ser, por ejemplo, 90°.

En ciertas modalidades la cámara tran en capturada a un convertidor de analógico a o a través de la captura de imágenes y sof esamiento que se ejecutan en una computadora. e ser almacenada en cualquier medio adecú plo, un disco duro, un disco óptico, la cinta m ener un procesador Pentium IV (Intel, Santa Cí lgunas modalidades el equipo 150 también puede ad de CD y DVD. La unidad puede tener funcion ura y escritura. El sistema también propor ware de procesamiento de imágenes.

En ciertas modalidades un endoscopio izar para excitar a un colorante fluorescent osición y detectar su fluorescencia, por ejem caciones de intervención. Incluye un sensor y u nergía radiante. El endoscopio puede estar comp as ópticas. En ciertas otras modalidades izar un microscopio que abarca una fuente del ación, por ejemplo, un microscopio quirúrgico. E lidades el sensor consta de una cámara de tas modalidades el sensor puede capturar imáge cidad de al menos 10 por segundo, por lo men uye instrucciones almacenadas en un medio legibl utadora) . Cuando se' ejecuta, el programa de orciona instrucciones al procesador de la comput se describe a continuación. El experto en la nderá además que la computadora está en comunic áser, sensor y pantalla como se describió en la Al comienzo (paso 10) el usuario p entado con varios cuadros de diálogo u otros p nterfaz de usuario común. Por ejemplo, el usua consultado acerca de si desea iniciar un nuev o 20) . Si el usuario indica que lo hace, p ruido para ingresar o de alguna manera selecci ente para el estudio. Por ejemplo, se le puede rio que elija un nombre en una lista vinculada a atos que sea accesible para el equipo. Alternat uede pedir ingresar la identificación de un pac nicaciones en Medicina (DICOM) normales. E ndar es un producto de la Comisión de Estándares us numerosos grupos de trabajo internaciona aciones del día a día son gestionadas por la A onal de Fabricantes Eléctricos (Rosslyn, VA) . El disponible al público en : //medical . nema . org/ y se incorpora aquí por r u totalidad.

Después de que se ingresan los datos del onitor o pantalla muestran las imágenes captada ra o el otro sensor en la comunicación con e o 40) . En este punto, el usuario puede ca ción, la orientación, el aumento o de otros parár ámara para obtener una vista deseada del pacient Alternativamente, el usuario puede optar p studio (paso 25) al inicio 10, Tras esta indic el sensor en la memoria RAM (paso 70) . Las imá ?? real se siguen mostrando en la pantalla. Al u regunta si desea apagar el láser (paso 80) . Si si, la computadora hace que se apague el lás . Alternativamente, si el usuario no indica que apagar el láser, la computadora determin scurrido una cantidad de tiempo determinada (por segundos) desde el paso 60. Una vez que dete idad de tiempo transcurrido, el equipo hace que áser. Las secuencias de video siguen siendo al a memoria RAM hasta que el láser se apaga. Una v r se apaga, se pregunta al usuario sobre si dese secuencia (paso 105) . Si se indica una afirm inuación, las secuencias se almacenan en el di o 115) u otros medios de comunicación.

Volviendo ahora al paso 40 con objeto de ivo de imágenes y sistema informático, por ejemp ato DICOM.

En otra modalidad, la cámara también pued imágenes a un monitor LCD o pantalla (por ej visión/sistema de video, etc.) de tal manera en se puede mostrar en tiempo real y/o oducir de nuevo en un momento posterior. Dad en puede ser usada para guiar la totalidad o pa rvención quirúrgica, de la imagen puede apare o del procedimiento quirúrgico. En otras modali en se puede exhibir en un tamaño menor a la l de la intervención quirúrgica. En otra moda ware permite manipular las imágenes despué isición, tales como zoom, en la región de la sel rés, cambio de brillo y contraste y la visuali as imágenes simultáneamente.

Definiciones Los artículos "un" y "uno" se emplean rirse a uno o más de uno (es decir, al menos to gramatical del artículo. A modo de ejem entó" significa un elemento o más de un ralidad" significa por lo menos dos.

"Sujeto" como se usa aquí, se refiere a al. El animal puede ser un mamífero. Algunos ej feros adecuados incluyen, pero no se limita ates humanos y no humanos, perros, gatos, oveja os, caballos, ratones, ratas, conejos y conej as . "1CG" es de color verde indocianina, un rescente bíocompatible cercano a infrarrojo apro humano .

"PBS" es solución salina regulada por fosf "S.C." es la médula espinal.

Los siguientes ejemplos se proporcionan s de ilustración únicamente y no se debe limita se especifique lo contrario. Asi, de ninguna enderá que la invención sea limitada a los s plos, sino que se debe interpretar que abarcan c odas las variaciones que se vuelven eviden ltado de la enseñanza provista en la presente.

EJEMPLOS Ejemplo 1 : Preparación de imitantes del vir El HSV-2 ARR mutante se puede preparar ribe en Laing, J. y colaboradores, la admin anasal del crecimiento que compromete vectores de que el cainato induzca convulsiones y pérdida atas y ratones. Mol. Ther. mayo 2006; 13 (5): 20 µ? de la solución madre de virus se co ? de solución madre ICG y se mantiene durante (mezcla ICG/PBS/HSV-2 ARR) .

Ejemplo 3: Estudio de Animales El ejemplo 3 es una comparación de imágen rante fluorescente solo contra un colorante flu o al virus. A menos que se especifique lo c s las imágenes son imágenes digitales obtenida ra CCD. ün ratón (60 g) fue brevemente anestes lación de halotano. Se inyectó la planta der n con 10 µ? de ICG, solución salina regulada co ) y un virus mutante, el VHS-2 ARR ("me PBS/HSV-2") . La planta izquierda fue inyectada ezcla de ICG/PBS como control. La misma concent La Figura 3A es una imagen de fluorescenc lda del ratón del ejemplo 3, con los múscul mna vertebral y la espalda al descubie rescencia del pie izquierdo, con la única iny se limita a la pierna izquierda . E1 pie ctado con la mezcla de ICG/P33S/HSV-2 ARR, rescente, pero la fluorescencia se extiende mna donde se encuentran los ganglios de la ra decir, los cuerpos celulares de las neuronas) ios del pie. El complejo ICG-PBS-VHS-2 ARR ha tr es de los pies a los cuerpos celulares de los a olumna vertebral. La inyección de la almohadill CG-PBS-VHS-2 ARR ha trazado los nervios plantare no hasta la columna vertebral. La figura 3B m a vista de la figura 3A, pero como una luz nco) de imagen de sin representación mediante im la espinal que no está etiquetado con ICG/PBS/H igura 3D muestra que sólo los nervios planta es tomó y transportado el virus fluorescent uetados, como indican las flechas, y no otros, n cionados . En las figuras 3C y 3D, la etiquet ca la posición de la pinza el nervio tirando le la espinal, indicado en 312. La médula espinal a posición 314 (Fig. 3C solamente) . La cabeza ncuentra generalmente hacia el lado derecho de mientras que los puntos de la cola del ratón e a el lado izquierdo de la figura.

Ejemplo 4: Estudio de los Animales El Ejemplo 4 es una comparación de un rescente unido a un virus versus ninguna inyec strar que la fluorescencia se limita a los ne orte ele vena yugular y se inyectaron 10 mi de na isotónica lentamente en una cámara aérea d zón exanguinante y matar al ratón. El propósi guinación fue reducir la fluorescencia de tejido ltante de moléculas ICG en el bolo pata inyec ulado al virus y que entró en el sistema linf l que con el primer ratón, las imágenes de flúo CG fueron adquiridas en primer lugar del ratón i ntinuación, de las distintas etapas de la disecc Resultados La Figura 4A muestra una imagen de la fluo CG/PBS/HSV-2 ARR en una vista ventral del ratón ratón está acostado sobre la espalda) . Los resu luorescencia de la inyección en la pata izquier izquierdo completo y hasta en la pierna izqu o ratón. La fluorescencia se limita a la parte a columna vertebral sin fluorescencia en el laci a no .inyectada) .

La Figura 4D muestra (i) el ganglio de al fluorescente cortado 330 en el lado izquier mna vertebral del ratón en la luz blanca solam segmento corto de sus axones en el lado der lio, y (ii) el ganglio correspondiente 332 desd cho de la columna vertebral, el pie derech cta. La Figura 4E muestra (i) la imagen rescencia del ganglio de la Figura 4D (i), y en de la fluorescencia del ganglio de la Figura Figura 4F una muestra ampliada, la imagen diación del ganglio de la Figura 4E(i). Las Figu tran que la inyección de planta del la pata ueta el nervio de la pata izquierda hasta ext Una solución madre del ICG se preparó di de ICG en 0.8 mi de H20. Una solución madre de aró con 107 fpu de HSV-2 ARR en 20 µ? de PBS. 50 µ? de la solución madre de virus se co µ? de solución madre del ICG en un frasco y sar durante 1 hora a 4°C ("mezcla ICG/PBS/HSV-2 ía ICG/PBS/HSV-2 ARR anterior fue inactiv ación UV a 350 nm durante aproximadamente 15 min Un conejo de bandas Ditch (2.57 kg) se a emente pora por inhalación de halotano. El c ctado con 100 µ? de mezcla ICG/PBS/HSV-2 ??. hadilla del dedo medio de la pierna derecha y s 100 µ? de mezcla de ICG/PBS/HSV-2 ARR inacti s UV en la almohadilla del dedo medio de ierda. Cuatro y media horas después de real cciones en las almohadillas de la pata, se ane a extremidad derecha elevada por las tijeras de a posición 340. La fluorescencia de los vasos s anos, también es visible. La fluorescencia en el inyección de la almohadilla del dedo de la pat ble en la parte inferior de la Figura 5B .

La Figura 5C es un dibujo anatómico rficie media de la extremidad derecha de un c ha indica un nervio grande adyacente a l uineos. El procedimiento de disección misma se en la extremidad izquierda en el que se habla irus HSV-2-ARR inactivado por UV. Las imágen ento aislado del nervio safeno se muestran ble (Figura 5D) y con fluorescencia ICG (Figura lecha blanca indicando la posición del nervio.

El segmento del nervio aislado fue extirp ca en un portaobjetos de microscopio. De do se muestran en dos aumentos (Figura 5G, aum ira 51, aumento 10X) , indicando la presencia del ervio .

La Figura 5K muestra una imagen de la flúo la cara dorsal de la pierna izquierda del co nplo 5, un dibujo anatómico de los cuales se mues ra 5J. La flecha en la Figura 5J puntos a de de la extremidad superior. La Figura 5K muest PBS/HSV-2 ARR viaja desde el sitio de la inyecc hadilla del dedo de la pata en el nervio rior. El virus ICG inactivado por UV se trasla ficaciones pequeñas de lo que se supone que ios isquiático y tibial (flechas) , lo que pe esentación mediante imágenes, incluso de los eños. Las flechas están aproximadamente 11 cm p sitio de inyección de la almohadilla del dedo, ninguna manera. Se pretende que la especifi plos sean considerados únicamente como ilustrat lcance y espíritu real de la invención siendo las con un verdadero alcance y el espirit nción que es indicada por las s indicaciones .

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. - Una composición que comprende: un colorante fluorescente; y un componente viral seleccionado de otrópico, con replicación defectuosa; una prote un virus neurotrópico y un cápsido de otrópico , en donde el colorante fluorescente se onente viral para formar un compl rante/componente viral que puede penetrar las iosas . 2. - La composición de la reivindicación 1, colorante se seleccionan de verde indocianin acianina, colorante fluorescente verde; isotioc resceína, rodamina, ficoeritrina, fic 4. - La composición ele la reivindicación 1, omponente viral es un virus neurotrópico, con re ctuosa. 5. - La composición de la reivindicación 4, irus es virus de herpes o una mutante o vari IO . 6. - La composición de la reivindicación 5, irus de herpes es HSV-2. 7. - La composición de la reivindicación 4, irus es herpes varicellae. 8. - La composición de la reivindicación 4, irus comprende HSV-2 ICPIOARR. 9. - La composición de la reivindicación 4, virus se vuelve con replicación defectu tivación de UV, mutación, tratamiento qu amiento por cloro. en donde el colorante fluorescente se onente viral para formar un compl rante/componente viral que puede penetrar iosas . 12. - Un método para formar una composi rende : combinar un colorante fluorescente onente viral seleccionado de un virus neurotr icación defectuosa, una proteína viral de otrópico y un cápsido de un virus neurotrópico. 13. - El método de la reivindicación 12, en onente viral es un virus neurotrópico con re ctuosa . 14. - El método de la reivindicación 13, en s se vuelve con replicación defectuosa por ación por UV, tratamiento químico, o tratarai un virus neurotrópico, y un cápsido de otrópico, en donde el colorante fluorescente se onente viral para formar un compl rante/componente viral; (b) permitir que el comple rante/componente viral penetre células nerviosas; (c) aplicar una cantidad suficiente de ante al sujeto de manera que el coloran rescencia ; (d) obtener intraoperativamente una rescente del sujeto, y (e) observar la imagen fluorescente para o más nervios en el sujeto. 16.- El método de la reivindicación 15, en rante fluorescente se selecciona de verde de ind 17. - El método de la reivindicación 16, en rante fluorescente es verde indocianina. 18. - El método de la reivindicación 15, en osición comprende virus de herpes con re ctuosa . 19. - El método de la reivindicación 18, en s de herpes es HSV-2. 20. - El método de la reivindicación 18, en s con replicacion defectuosa comprende HSV-2 ICP 21. - Un método para diagnosticar una iosa, comprendiendo: (a) administrar una composición al su osición comprende : un colorante fluorescente; y un componente viral seleccionado de otrópico, con replicacion defectuosa, una prote (c) aplicar una cantidad suficiente de ante al sujeto de manera que el coloran rescencia; (d) obtener intraoperativamente una rescente del sujeto, y (e) observar la imagen fluorescente para d e corta el nervio.