MX2008002687A - Agentes para evitar y tratar desordenes que involucran la modulacion de receptores ryr - Google Patents

Agentes para evitar y tratar desordenes que involucran la modulacion de receptores ryr

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MX2008002687A
MX2008002687A MXMX/A/2008/002687A MX2008002687A MX2008002687A MX 2008002687 A MX2008002687 A MX 2008002687A MX 2008002687 A MX2008002687 A MX 2008002687A MX 2008002687 A MX2008002687 A MX 2008002687A
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MXMX/A/2008/002687A
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Inventor
W Landry Donald
Robert Marks Andrew
Zhuang Cheng Zhen
Deng Shixian
E Lehnart Stephan
Original Assignee
Zhuang Cheng Zhen
Deng Shixian
W Landry Donald
E Lehnart Stephan
Robert Marks Andrew
The Trustees Of Columbia University In The City Of New York
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Abstract

La presente invención proporciona compuestos de la Fórmula I, (I) y sales, hidratos, solvatos, complejos y prodrogas de los mismos. La presente invención además proporciona métodos para sintetizar los compuestos de la fórmula I. La invención adicionalmente proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la Fórmula I y los métodos para usar las composiciones farmacéuticas de la Fórmula I para tratar y evitar desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR que regulan el canal de calcio que funciona en las células.

Description

AGENTES PARA EVITAR Y TRATAR DESORDENES QUE INVOLUCRAN LA MODULACIÓN DE RECEPTORES RYR Esta invención se hace con soporte del Gobierno bajo la subvención del Gobierno NIH número P01 HL 67849-01. Como tal, el Gobierno de los Estados Unidos de América puede tener ciertos derechos en esta invención. Esta solicitud reclama la prioridad de la solicitud de patente de los Estados Unidos de América serie número 11/212,413, presentada el 25 de agosto de 2005.
CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a compuestos y a su uso para evitar y tratar desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR que regulan el canal de calcio que funciona en las células. Más particularmente, la invención se describe en relación a compuestos que están relacionados a 1,4-benzotiazepinas y son útiles para tratar los desordenes de esqueleto musculares y cardiacos. La invención también describe composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de artículos de fabricación que comprenden las composiciones farmacéuticas .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El retículo sarcoplásmico (SR) es una estructura en células que funciona, entre otras cosas, como un almacén de calcio intracelular especializado (Ca2+) . Los canales en el retículo sarcoplásmico llamados receptores rianodina (RyRs) abren y cierran para regular la liberación de calcio desde el retículo sarcoplásmico adentro del citoplasma intracelular de la célula. La liberación del calcio adentro del citoplasma desde el retículo sarcoplásmico aumenta la concentración de calcio citoplásmica . La probabilidad abierta (Po) de los receptores RyR se refiere a la posibilidad de que el canal RyR sea abierto en cualquier momento, y por tanto sea capaz de liberar el calcio dentro del citoplasma desde el retículo sarcoplásmico .
Estos tres tipos de receptores rianodina, todos los cuales son canales de calcio altamente relacionados: RyRl, RyR2, RyR3. El RyRl se encuentra predominante en el músculo esqueleto así como en otros tejidos, el RyR2 se encuentra predominantemente en el corazón así como en otros tejidos, y el RyR3 se encuentra en el cerebro así como en otros tejidos. Los canales RyR son formados por cuatro polipéptidos RyR en asociación con cuatro proteínas aglutinantes FK506 (FKBPs), específicamente FKBP12 (calstabinl) y RKBP12.6 (calstabin2) . El Calstabin 1 aglutina a RyRl, el calstabin2 aglutina a RyR2, y Calstabin 1 aglutina a RyR3. Las proteínas FKBP (calstabil y calstabin2) aglutinan al canal RyR (una molécula por sub-unidad RyR) , estabilizan el funcionamiento de canal RyR, y facilitan la compuerta acoplada entre los canales RyR vecinos, evitando por tanto la activación anormal del canal durante el estado cerrado del canal.
Además de la calstabina aglutinante proteínas, la proteína quinasa A (PKA) también aglutina a la superficie citoplásmica de los receptores RyR. La fosforilación PKA de los receptores RyR provoca la disasociación parcial de las calstabinas de RyRs. La disasociación de calstabina de RyR aumenta la probabilidad abierta del RyR, y por tanto aumenta la liberación del calcio desde el retículo sarcoplásmico adentro del citoplasma intracelular.
La liberación de calcio desde el retículo sarcoplásmico en las células de músculo esqueleto y las células de corazón es un mecanismo fisiológico clave que controla el desempeño de músculo, debido a la concentración incrementada de calcio en el citoplasma intracelular que provoca la contracción del músculo.
El acoplamiento de excitación-contracción (EC) en los músculos esqueletos involucra la depolarización eléctrica de la membrana de plasma en el túbulo transversal (T-túbulo) , el cual activa los Cañáis de calcio tipo L de compuerta-voltaje (LTCCs) . El calcio dispara los LTCCs liberado del retículo sarcoplásmico a través de la interacción fisica con RyRl. El aumento resultante en la concentración de calcio citoplásmica induce una interacción de actina-miocina y contracción de músculo. Para permitir el relajamiento, el calcio intracelular es bombeado de regreso adentro del retículo sarcoplásmico a través de las bombas de SR Ca2+-ATPase (SERCAs), que se regula por el fosfolamban (PLB) dependiendo del tipo de fibra de músculo.
Se ha mostrado que la enfermedad forma ese resultado en la activación sostenida del sistema nervioso simpático y aumenta los niveles de catecolamina de plasma que causan una activación mal adaptada de los proyectores de tensión intracelular resultando en desestabilización del estado cerrado de canal RyRl y del filtrado de calcio intracelular. El filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico a través de los canales RyRl se encontró que agota los almacenes de calcio de retículo sarcoplásmico intracelular, para aumentar el consumo de energía compensatorio, y para resultar en una aceleración significante de la fatiga del músculo. El defecto de músculo inducido por estrés permanentemente reduce al músculo aislado en el desempeño en vivo particularmente en situaciones de demanda incrementada.
También se ha mostrado que la desestabilización del estado cerrado RyRl ocurre bajo condiciones patológicas de una activación simpática incrementada e involucra el agotamiento de la sub-unidad de canal de calstabinl (FKBP12) estabilizante. Los experimentos de prueba de principio han mostrado que la activación PKA como un efecto de extremo del sistema nervioso simpático aumenta la fosforilación RyRl PKA a Ser-2843 lo cual disminuye la afinidad aglutinante de calstabinl a RyRl y aumenta la probabilidad abierta de canal.
En el músculo estriado cardiaco, RyR2 es el canal de liberación de calcio principal requerido para el acoplamiento de excitación-contracción y contracción de músculo. Durante el acoplamiento de excitación-contracción, la depolarización de la membrana de célula de músculo cardiaco durante la fase cero de la acción potencial activa los canales de calcio de compuerta-voltaje. El influjo de calcio a través de los canales de compuerta-voltaje abiertos a su vez inicia la liberación de calcio desde el retículo sarcoplásmico a través de RyR2. Este proceso es conocido como liberación de calcio inducida por calcio. La liberación de calcio inducida por calcio medida con RyR2 libera entonces las actividades de las proteínas de contracción en la célula cardiaca resultando en una contracción del músculo cardiaco.
La fosforilación del RyR2 cardiaco por PKA es una parte importante de la respuesta de "lucha o vuela" que aumenta la ganancia de acoplamiento de excitación-contracción cardiaca mediante aumentar la cantidad de calcio liberada por un disparador dado. Esta trayectoria de señalamiento proporciona un mecanismo mediante el cual la activación del sistema nervioso simpático, en respuesta al estrés, resulta en una salida cardiaca incrementada. La fosforilación PKA de RyR2 aumenta la probabilidad abierta del canal mediante el disasociar el calstabin2 (FKBP12.6) del complejo del canal. Esto a su vez aumenta la sensibilidad de RyR2 a la activación dependiente de calcio.
A pesar de los avances en el tratamiento, la falla de corazón permanece siendo una causa importante de la mortalidad en los países occidentales. Un hallazgo importante de la falla de corazón es la contracción de miocardio reducida. En la falla de corazón, las anormalidades de contracción resultan, en parte de las alteraciones en la trayectoria de señalamiento que permite la acción cardiaca potencial para disparar la liberación de calcio a través de los canales RyR2 y la contracción del músculo. En particular, en los corazones que fallan, la amplitud de calcio de célula completa transitorio es disminuida y la duración prolongada.
La arritmia cardiaca, una falla común de la falla de corazón resulta en muchas de las muertes asociadas con la enfermedad. La fibrilación auricular (AF) es la arritmia cardiaca más común en los humanos, y representa una causa principal de la mortandad y de la morbidez. El remodelado estructural y eléctrico, incluyendo el acortamiento de la refracción auricular, la pérdida de la adaptación relacionada a la taza de refracción y el acortamiento de la longitud de onda de las ondulas re-entrantes-acompañan la taquicardia sostenida. Este remodelamiento es factiblemente importante en el desarrollo, mantenimiento y progresión de la fibrilación auricular. Los estudios sugieren que el manejo de calcio juega un papel en el remodelado eléctrico en la fibrilación auricular .
Aproximadamente 50% de todos los pacientes con enfermedad de corazón mueren de arritmias cardiacas fatales. En algunos casos, una arritmia ventricular en el corazón es rápidamente fatal-un fenómeno mencionado como "muerte cardiaca repentina" (SCD) . Las arritmias ventriculares fatales y la muerte cardiaca repentina pueden ocurrir en individuos jóvenes o de otra manera saludable quienes no saben que tienen una enfermedad de corazón estructural. De hecho, la arritmia ventricular es la causa más común de la muerte repentina en individuos de otra manera saludables.
La taquicardia ventricular polifórmica catecolaminérgica (CPVT) es un desorden heredado en los individuos con corazones estructuralmente normales. Esto se caracteriza por una taquicardia ventricular inducida por estrés-una arritmia mortal que provoca la muerte cardiaca repentina. En sujetos con taquicardia ventricular polifórmica catecolaminérgica, el ejercicio físico y/o el estrés inducen las taquicardias ventriculares bidireccionales y/o polifórmicas que llevan a la muerte cardiaca repentina aún en la ausencia de una enfermedad de corazón estructural detectable. La taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica heredada en una forma dominante autosomal. Los individuos con taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica tienen arritmias ventriculares cuando se someten al ejercicio, pero no desarrollan arritmias en el descanso. Los estudios han identificado las mutaciones en el gen RyR2 humano sobre los cromosomas Iq42-q43 en los individuos con taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica.
Los corazones que fallan (por ejemplo, en los pacientes con falla de corazón en modelos animales de falla de corazón) se caracterizan por una respuesta de mal adaptación que incluye una estimulación hiperadrenérgica crónica. En la falla de corazón, el estimulo beta-adrenérgico crónico está asociado con la activación de receptores beta-adrenérgicos en el corazón, los cuales, a través del acoplamiento con las proteinas-G activan la adenilil ciclasa y por tanto aumentan la concentración cAMP intracelular. El CAMP activa el PKA dependiente cAMP, el cual ha mostrado que induce hipersforilación de RyR2. Por tanto, la falla de corazón crónica es un estado hiperadrenérgico crónico que resulta en varias consecuencias patológicas, incluyendo la hiperfosforilación PKA de RyR2.
La hiperfosforilación PKA de RyR2 se ha propuesto como un factor que contribuye a la función de contracción deprimida y a la arritmogenesis en la falla de corazón. Consistente con esta hipótesis, la hiperfosfrilación PKA de RyR2 en corazones que fallan se ha demostrado, en vivo, tanto en modelos animales como en paciente con falla de corazón que sufren un trasplante cardiaco.
En los corazones que fallan, la hiperfosforilación de RyR2 por PKA induce la disasociación de FKBP12.6 (calstabin2) del canal RyR2. Esto causa marcados cambios en las propiedades biofísicas del canal RyR2, incluyendo la probabilidad abierta incrementada (Po) debido a una sensibilidad incrementada de la activación dependiente de calcio; la desestabilización del canal, resultante en estados de sub-conductancia; y la compuerta acoplada perjudicada de los canales, resultando en un acoplamiento de extensión-contracción defectuoso y una disfunción cardiaca. Por tanto, el RyR2 PKA hiperfosforilatado es muy sensible al estimulo de calcio de nivel bajo, y esto se manifiesta así mismo como un derrame de calcio de retículo sarcoplásmico diastólico a través del canal RyR2 hiperfosforilatado PKA.
La respuesta de maladaptación al estrés en la falla de corazón resulta en el agotamiento del FKBP12.6 del complejo macromolecular de canal. Esto lleva un cambio a la izquierda en la sensibilidad de RyR2 a la liberación de calcio inducida-calcio, resultando en canales que son más activos a concentraciones de calcio bajas-a-moderadas. Con el tiempo, el "filtrado" incrementado a través de RyR2 resulta en el reasentamiento del contenido de calcio de retículo sarcoplásmico a un nivel inferior, lo cual a su vez reduce la ganancia de acoplamiento de excitación-contracción y contribuye a la contracción sistólica perjudicada.
Adicionalmente, una sub-población de RyR2 que son particularmente "escurridas" puede soltar calcio de retículo sarcoplásmico durante la fase de descanso del ciclo cardiaco, diástole. Esto resulta en depolarizaciones de la membrana de cardiomiocito conocido como despolarización-posteriores retrazadas (DADs), las cuales se conocen porque disparan arritmias cardiacas ventriculares fatales.
En los pacientes con mutaciones de taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica en su RyR2 y en corazones de otra manera estructuralmente normales, está trabajando un fenómeno similar. Específicamente, se conoce que el ejercicio y el estrés inducen la liberación de catecolaminas que activan los receptores beta-adrenérgicos en el corazón. La activación de los receptores beta-adrenérgicos lleva a la hiperfosforilación PKA de los canales RyR2. La evidencia también sugiere que la hiperfosforilación PKA de RyR2 resulta de la activación de receptor beta-adrenérgico que hace a los canales RyR2 botados más factibles de abrir en la fase de relajamiento del ciclo cardiaco, aumentando la posibilidad de arritmias.
Las arritmias cardiacas son conocidas por estar asociadas con los filtrados de calcio de retículo sarcoplásmico diastólico en pacientes con mutaciones de taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica y sus RyR2 y en corazones de otra manera estructuralmente normales. En estos casos, el mecanismo más común para la inducción y mantenimiento de la taquicardia ventricular es la automaticidad anormal. En una forma de la automaticidad anormal, conocida como arritmia disparada está asociada con la liberación aberrante de calcio de retículo sarcoplásmico, que inicia despolarizaciones posteriores retrazadas. Las despolarizaciones posteriores retrazadas son despolarizaciones anormales en los cardiomiocitos que ocurren después de la repolarización de un potencial de acción cardiaca. La fase molecular de la liberación de calcio de retículo sarcoplásmio anormal que resulta en despolarizaciones posteriores retrazadas no se ha elucidado completamente. Sin embargo, las despolarizaciones posteriores retrazadas son conocidas porque son bloqueadas por rianodina, proporcionando evidencia de que el RyR2 juega un panel clave en la patogénesis de esta liberación de calcio aberrante .
La patente de los Estados Unidos de América número 6,489,125 discute JTV-519 (4-[3- (4-benzilpiperidina-l-yl) propionilo]-7-metoxi-2, 3, 4, 5-tetrahidro-l, 4-benzotiazepina monohidrocloruro; también conocido como k201 o ICP-Calstan 100), a 1, 4-benzotiacepina, como un nuevo modulador de los canales de ion de calcio RyR.
La solicitud también pendiente serie de los Estados Unidos número 10/763,498 discute RyR2 como un objeto para tratar y evitar la falla de corazón y las arritmias cardiacas, incluyendo la fibrilación auricular y las arritmias cardiacas que provocan la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio (SCD) . Los canales RyR2 con 7 mutaciones de taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgia diferente (por ejemplo, S2246L, R2474S, N4104K, R4497C, P2328S, Q4201R, V4653F) se encontraron que tienen defectos funcionales que resultaron en canales que se escurren (por ejemplo filtrado de calcio) cuando se estimulan durante el ejercicio. El mecanismo para la taquicardia ventricular en la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica se ha demostrado que es el mismo que el mecanismo para la taquicardia ventricular en falla de corazón.
Se ha encontrado que las arritmias inducidas por ejercicio y la muerte súbita (en pacientes con taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica) resultan de una afinidad reducida de FKBP12.6 (calstabin2) para RyR2. Adicionalmente, se ha demostrado que el ejercicio activa el RyR2 como resultado de la fosforilación mediante adenosina 3' , 5' -monofosfato (cAMP) de quinasa de proteina dependiente (PKA) . Los canales RyR2 mutantes los cuales tienen una función normal en las bicapas de lípido planas bajo condiciones básales, sensibles a la activación mediante fosforilación PKA-exhibiendo una actividad incrementada (probabilidad abierta) y estados abiertos prolongados, en comparación con los canales de tipo silvestre. Además, los canales RyR2 mutantes PKA-fosforilatados fueron resistentes a inhibiciónmediante Mg2+, un inhibidor fisiológico del canal, y mostró un aglutinamiento reducido a FKBP12.6 (aka calstabin2, el cual estabiliza el canal en el estado cerrado) . Estos hallazgos indican que durante el ejercicio, cuando el RyR2 es PKA-fosforilatado, los canales de taquicardia ventricular polifórmica catecolaminérgica mutantes son más factibles de abrirse en la fase de relajamiento del ciclo cardiaco (diástole) , aumentando la posibilidad de arritmias disparadas por el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico.
Adicionalmente, la solicitud de patente de los Estados Unidos de América también pendiente 09/288,606 discute un método para regular la contracción de un corazón de sujeto mediante administrar un compuesto que regula la fosforilación PKA de un receptor RyR2 y específicamente disminuye la fosforilación PKA. La solicitud de patente de los Estados Unidos de América también pendiente 10/608,723 también discute un método para tratar y para la profilaxis para la taquiarritmia auricular y las arritmias inducidas por estrés y ejercicio mediante la administración de un agente el cual inhibe la fosforilación PKA de RyR2.
SÍNTESIS DE LA INVENCIÓN En vista de lo anterior, hay una necesidad de identificar nuevos agentes efectivos para tratar o evitar los desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR que regulan el funcionamiento de canal de calcio en las células, incluyendo los desordenes y enfermedades esqueleto musculares y especialmente las enfermedades y desordenes cardiacos. Más particularmente, existe una necesidad de identificar nuevos componentes que pueden ser usados para tratar los desordenes asociados con RyR mediante por ejemplo, reparar el filtrado en los canales RyR, y mejorar el aglutinamiento de las proteínas FKBP (calstabinl y calstabin2) a el RyR PKA-fosforilatado y al RyR mutante que de otra manera tiene una afinidad reducida para, o que no se aglutina a FKBP12 y FKBP12.6. Las incorporaciones de la invención resuelven algunas o todas de estas necesidades.
Por tanto, la presente invención generalmente proporciona compuestos que pueden ser clasificados como 1,4-benzotiazepinas y algunas veces se mencionan aquí como "RyCals".
La presente invención además proporciona compuestos de la fórmula I: En donde, n es 0, 1 ó 2; q es O, 1, 2, 3 ó 4; cada R es seleccionada independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2, CF3, acilo, -O-acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilarilamino, alquiltio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, hterociclialquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, -O-acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilarilamino, alquiltio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser opcionalmente sustituidos; Ri es seleccionado del grupo que consiste de H, oxo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroaril y heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo pueden opcionalmente ser sustituidos; R2 es seleccionado del grupo que consiste de H,-C(=0)Rs, C(=S)R6, -SO2R7,-P(=O)R8R9,-(CH2)m-R10, alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, y heterociclilo; en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterociclilo pueden ser sustituidos opcionalmente; R3 es seleccionado del grupo que consiste de H, -C02Y, -C (=0) NHY, acilo, -O-acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo; en donde cada alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo pueden ser opcionalmente sustituidos; y en donde Y es seleccionado del grupo que consiste de H, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo y en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo pueden ser opcionalmente sustituido; R es seleccionado del grupo que consiste de H, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclil pueden ser opcionalmente sustituido; R5 es seleccionado del grupo que consiste de - R15R16,-(CH2) qNR15Ri6, -NHOH, -OR15, -C (=0) NHNR15R?6, -C02R15, -C (=0) NR15R?6, -CH2X, acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituidos, y en donde q es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6; * Rd es seleccionado del grupo que consiste de -OR15, -NHNR15R16, -NHOH, -NR15R16, -CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituidos; R es seleccionado del grupo que consiste de -OR15, - R?5R?6, -NH R15R16, -NHOH, -CH2X, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo, en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituido; R8 y R9 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heteroarilo, heterocicilo, y heterociclilalquilo; en cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, ciccloalquialquilo, heteroarilo, heterociclilo y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituidos; Rio es seleccionado del grupo que consiste de -NR15R16, OH, M-SO2Ru,-NHSO2R??,C(=0)R?2) , NHC=0 (Ri2) , -0C=0 (R12) , y -P (=0) R?3R?4; Rii Ri2/ R13 y Ri4 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, -NHNH2, -NHOH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser opcionalmente sustituidos; X es seleccionado del grupo que consiste de halógeno-CN, -C02R15,-C(=0)NR15Ri6,-ORi5,-S02R7, y -P(=0)R8R9; y R15 y Ríe independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser opcionalmente ser sustituidos, y opcionalmente R15 y Ri6 juntos con el N el cual estos están unidos para formar un heterociclo el cual puede ser sustituido; el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede opcionalmente ser un nitrógeno cuaternario; y los enantioméricos, diasteroméricos, tautómeros, las sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y prodrogas de los mismos; siempre que q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, C (=0) NH2, (=0) NHPh, -C (=S) NH-nButilo, -C (=0) NHC (=0) CH2C1, -C (=0) H, -C (=0) Me, -C (=0) Et, -C (=0) CH=CH2, -S (=0) 2Me, ó -S (=0) 2Et ; siempre y cuando q es 0 y n es 1 ó 2, entonces R2 no es -C(=0)Me,-C(=0)Et,-S(=0)2Me, ó -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, y R es Me, Cl, ó F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, Me,-C(=0)H,-C(=0)Me,-C(=0)Et,-C(=0)Ph,-S(=0)2,Me, ó -S(=0)2Et; y además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es OCT3, OH, alcoxi C?~C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, -C (=0) CH=CH2 ó En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I, como se describió arriba, con la condición de que el compuesto no es S24 ó S68.
En una incorporación de la presente invención, se proporcionan compuestos de la fórmula I-a: En donde: n es 0, 1 ó 2; q es 0, 1, 2, 3, ó 4; cada R es seleccionada independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2, CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituidos o no sustituidos; R2 es seleccionado del grupo que consiste de H,-C(=0)R5, C(=S)R6, -S02R7,-P(=0)R8R9,-(CH2)m-R?o, alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, y heterociclilo; en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterociclilo pueden ser sustituidos o no sustituido opcionalmente; R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6 _NR?5R?6,-NHOH, -OR15, -C (=0) NHNR?5R?6, -C02R?5, -C (=0) NR?5R?6, -CH2X, acilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada; acilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos; Rd es seleccionado del grupo que consiste de -0Ri5, -NHNR?5R?6, -NHOH, -NR15R16, -CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos; R7 es seleccionado del grupo que consiste de H, -OR15, -NR?5R?6, -NHNR15R16, -NHOH, -CH2X, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo, en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituido no sustituidos; R8 y Rg independientemente son seleccionados del grupo que consiste de OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterocicilo, y heterociclilalquilo; en cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterocicilo, y heterociclilalquilo pueden opcionalmente ser sustituidos no sustituidos; Rio es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, OH, -SO2R??,-NHSO2R??,-C(=0)R?2,-NH(C=O)R?2,-O(C=O)R12, y -P (=0) Ri3R?4; m es 0, 1 , 2, 3, ó 4; Rii/ R12 R13 y R1 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, -NHNH2, -NHOH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser opcionalmente sustituidos o no sustituidos; X es seleccionado del grupo que consiste de halógeno, -CN,-C02Ri5,-C(=0)NR?5Ri6,-NRi5Ri6,-ORi5,-S02R7 y -P(=0)R8R9; y R15 y Ri6 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser ser sustituidos, y opcionalmente R?5 y Ri6 juntos con el N el cual estos están unidos para formar un heterociclo el cual puede ser sustituido; el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede opcionalmente ser un nitrógeno cuaternario; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y prodrogas de los mismos; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, -C (=0) NH2, (=0) NHPh, -C (=S) NH-nButilo, -C (=0) NHC (=0) CH2C1, -C (=0) H, -C (=0) Me, -C (=0) Et, -C (=0) CH=CH2, -S (=0) 2Me, ó -S (=0) 2Et ; además, siempre que cuando q es 0 y n es 1 ó 2, entonces R2 no es -C(=0)Me,-C(=0)Et,-S(=0)2Me, ó -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, y R es Me, Cl, ó F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, Me,-C(=0)H,-C(=0)Me,-C(=0)Et,-C(=0) Ph, -S (=0) 2,Me, ó -S(=0)2Et; y además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es 0CT3, OH, alcoxilo C?-C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepeno, entonces R2 no es H, -C (=0H) CH=CH2, ó En ciertas incorporaciones de la presente invención se proporcionan compuestos de la fórmula I-a, en donde cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno, -OH-OMe, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3-N3, - S(=0)2 alquilo C?-C4, -S (=0) alquilo C?-C4, -S-alquilo C?~C4,-OS(=0)2CF3, Ph,-NHCH2Ph,-C(=0)Me,-OC(=0)Me, morfolinilo y propenilo y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-a, en donde R2 es seleccionado del grupo que consiste de -C=0=0 (R5) , -C=S (Re) , -S02R7,-P(P=0)R8,R9, y -(CH2)m-R?o.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de I-b: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituidos o no sustituidos; R2 y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a arriba; Y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-b en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?~C ,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H ó OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-b, en donde R2 es seleccionado del grupo que consiste de -C=0 (R5) , -C=S ( Rß) , -S02R7,-P(=0)R8R9, y -(CH2)m-R?o- En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-c: en donde cada R, R , q y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-C, en donde R es independientemente seleccionada del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-c, en donde R7 es seleccionado del grupo que consiste de -OH, -NR?5R?6, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalqulo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalqulo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser sustituido o no sustituido .
En una incorporación adicional, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituidos o no sustituidos; R7 y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C , -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H ó OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d, en donde R7 es seleccionado del grupo que consiste de -OH, -NR?5R?6, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos .
En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e: en donde cada R, R5, q y n es como los compuestos definidos de la fórmula I-a dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones de la presente invención se proporcionan compuestos de la fórmula I-e, en donde cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S(=0)2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?~C4, -OS(=0)2CF3,Ph,-NHCH2Ph,-C(=0)Me,-OC(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e, en donde R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHOH, -OR15, -CH2X, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo pueden ser sustituido o no sustituido.
En algunas incorpores, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e, en donde R5 es un alquilo sustituido por lo menos con un grupo etiquetante, tal como un fluorescente, uno bioluminiscente, uno quimoluminiscente, uno colorimétrico y un grupo de etiquetado radiactivo. Un grupo de etiquetado fluorescente puede ser seleccionado de bodipy, dansil, fluoresceína, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarin, azul Cascade®, azul pacífico, azul marina, verde Oregon, 4' , 6-diamidino-2-fenilindole (DAPI), tintes de indopira, amarillo lucifer, yodo propidio, porfirinas, arginina y variantes y derivados de los mismos .
En otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -0CF3, -N3, -S03H, -S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R5 y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a arriba; y enantiómeros y diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C ,-S- alquilo Cx-C , -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph,-C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H ó OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f, en donde R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHOH, -OR15, -CH2X, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquil'alquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo pueden ser sustituido o no sustituido.
En alguna otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g: (i-gl en donde es S u 0; cada R, R?5, R?6, q y n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a, dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -0C(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde R15 y Ríe independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser sustituido; y opcionalmente R15 y Ri6 juntos con el N a los cuales están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser sustituido.
En algunas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde W es 0 ó S.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h: en donde es S ú 0; en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -0CF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R15 y íe y n son como se definió en los compuestos de la fórmula-a dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, las sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?~C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H ó OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h, en donde R15 y R?6, independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo y heterociclilalquilo puede ser sustituido, y opcionalmente Ri5 y Ri6 junto con la N a la cual estos están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser sustituido.
En algunas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde W es 0 ó S.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i: en donde R17 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHNR15R16, -NHOH,-ORi5, -CH2X, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituido o no sustituido; cada R, q y n es definido como en los compuestos de la fórmula I-a dados arriba; los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i, en donde cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?~C ,-S- alquilo C?~C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-i, en donde Ri7 es -NR15R16, y -OR15. En ciertas otras incorporaciones, Ri7 es -OH, OMe, -NEt, -NHEt,-NHPh, -NH2, ó -NHCH2piridilo .
En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-j : en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R17 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, NHNR15R16, -NHOH, -OR15, -CH2X, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquialquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser sustituido o no sustituido; n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-j , en donde en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S(=0)2 alquilo C?~C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?~C4, -OS(=0)2CF3,Ph,-NHCH2Ph,-C(=0)Me,-OC(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H ó OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i, en donde R?7 es -NR15R16, y -OR15. En ciertas otras incorporaciones, R?7 es -OH, OMe, -NEt, -NHEt,-NHPh, -NH2, ó -NHCH2piridilo.
En otra incorporación de la presente invención, se proporcionan compuestos de la fórmula I-k: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; Ría es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -C (=0)NR?5R?6, - (C=0)OR?5,-ORi5, alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclilo y un grupo etiquetante; en donde cada alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclilo puede ser sustituido o no sustituido; en donde p es l ,2 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ó 10; y n es 0, 1 ó 2; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-k, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?~C ,-S- alquilo C?~C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-k, en donde R8 es seleccionado del grupo que consiste de -R15R16, - (C=0) OR15, -OR15, alquilo, arilo y por lo menos un grupo etiquetante; y en donde cada alquilo y arilo puede ser sustituido o no sustituido. En algunos casos, m es 1, y R?8 es Ph, C (=0) OMe, C (=0) OH, aminoalquilo, NH2, NHOH, ó NHCbz. En algunos casos, m es 0, y Ris es alquilo C?-C , tal como Me, Et, propilo, y butilo. En aún otros casos, m es 2, y R8 es pirrolidina, piperidina, piperazina o morfolina. En algunas incorporaciones, m es 3, 4, 5, 5, 7, ú 8 y Ris es un grupo etiquetante fluorescente seleccionado del grupo que consiste de bodipilo, dansilo, fluoresceína, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarinos, azul Cascade®, Azul pacífico, azul marina, verde Oregon, 4' , 6-Diamidino-2-fenilindole (DAPI), tintes indopira, amarillo lucifer, yodo propidio, porfirinas, arginina y variantes y derivados de los mismos.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -0CF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; Re y n son definidos en compuestos de la fórmula I-a; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1, en donde Re es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHNR?5R?6, -OR15, -NHOH, -CH2X- acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos. En algunos casos, R6 es -NR?5R?6 tal como -NHPh, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina y similares. En otros casos, R6 es alcoxilo, tal como -0-tBu.
En una incorporación adicional, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-m: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R8, R9 y n son como se definió en compuestos de la fórmula I-a dada arriba, y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, sdolvatos, compeljos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-m, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C ,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-m, en donde R8 y Rg son independientemente alquilo, arilo, -OH, alcoxilo, ó alquilamino.
En algunos casos, R8 es alquilo C?-C4 tal como Me, Et, propilo y butilo; y Rg es arilo tal como fenilo.
En alguna incorporación, el compuesto es seleccionado del grupo que consiste de SI, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S9, Sil, S12, S13, S14, S19, S20, S22, S23, S25, S26, S36, S37, S38, S40, S43, S44, S45, S46, S47, S48, S49, S50, S52, S53, S54, S55, S56, S57, S58, S59, S60, S61, S62, S63, S64, S66, S67, S68, S69, S70, S71, S72, S73, S74, S75, S76, S77, S78,S79, S80, S81, S82, S83, S84, S85, S87, S88, S89, S90, S91, S92, S93, S94, S95, S96, S97, S98, S99, SlOO, S101, S102, S104, S105, S107, S108, S109, S110, Slll, S112, S113, S114, S115, S116, S117, S118, S119, S120, S121, S122 y S123.
Los compuestos de la invención pueden opcionalmente comprenden un grupo etiquetante, tal como un grupo fluorescente, bioluminiscente, quimiluminiscente, colorimétrico o un grupo de etiquetado radiactivo. Los grupos de etiquetado fluorescentes adecuados incluyen, pero no se limitan a bodipi, densil, fluoresceía, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarinos, azul Cascade®, azul pacífico, azul marina, verde Oregon, ' 6-diamidino-2-fenilindole (DAPI), tintes indopira, amarillo lucifer, yodo propidio, porfirinas y variantes y derivados de los mismos. Uno con habilidad en el arte puede seleccionar fácilmente un marcador adecuado o un grupo de etiquetado, y conjugar tal grupo de etiquetado a cualquiera de los compuestos de la invención sin la experimentación indebida.
La presente invención también proporciona métodos para la síntesis de los compuestos de la formula I,I-a,I-b,I-c, I-d. I-e, I-f, I-g, I-h, I-i,I-j, I-k, 1-1 e I-m, y sales, hidratos, solventes y complejos y pro-drogas de los mismos.
La presente invención proporciona además un método para tratar o evitar varios desordenes y enfermedades en un sujeto que están asociadas con los receptores R y R como los desordenes cardíacos y musculares, que comprende administrar al sujeto una cantidad del compuesto efectiva para evitar o tratar de un desorden, o enfermedad asociada con receptores RyR, En donde el compuesto es de la Fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d. I-e, I-f, I-g, I-h, I-i,I-j, I-k, 1-1 o I-m, o sales, hidratos, solventes , complejos y pro-drogas de los mismos.
También se proporciona un método para evitar o tratar un filtrado en un receptor RyR2 en un sujeto, incluyendo el administrar al sujeto una cantidad del compuesto efectiva para evitar o tratar un filtrado en el receptor RyR2 en donde el compuesto de la Fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d. I-e, I-f, I-g, I-h, I-i,I-j, I-k, 1-1 o I-m, o sales, hidratos, solventes , complejos y pro-drogas de los mismos. El sujeto es, por ejemplo, un sistema en Vitro (por ejemplo tejidos o células cultivadas) o un sistema en vivo (por ejemplo animal o humano.
En adición, la presente invención proporciona un método de modular el aglutinamiento de RyR y FKBP en un sujeto incluyendo el administrar al sujeto una cantidad de un compuesto efectivo para modular el nivel de FKBP unido RyR, en donde el compuesto es de la Fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d. I-e, I-f, I-g, I-h, I-i,I-j, I-k, 1-1 o I-m, o sales, hidratos, solventes , complejos y pro-drogas de los mismos. El sujeto es como por ejemplo, un Sistema in Vitro ( por ejemplo, tejidos o células cultivadas) o un sistema en vivo (por ejemplo animal o humano).
La presente invención también proporciona artículos de fabricación para tratar y evitar desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR, tal como los desordenes musculares y cardíacos en un sujeto. Los artículos de fabricación comprenden una composición farmacéutica de uno o más de los compuestos de la Fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d. I-e, I-f, I-g, I-h, I-i,I-j I-k, 1-1 o I-m, o sales, hidratos, solventes, complejos y pro-drogas de los mismos. Los artículos de fabricación son empacados con indicaciones para varios desordenes que son capaces de tratar y / o de evitar las composiciones farmacéuticas.
Otras características y ventajas de la presente invención serán evidentes de la descripción detallada que sigue. Deberá entenderse como sin embargo, que la descripción detallada y los ejemplos específicos aún cuando indican varias incorporaciones en la invención se dan por vía de ilustración solamente, ya que pueden hacerse varios cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención como ser evidente para aquellos expertos en el arte de la descripción que sigue.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1, las incorporaciones A, B, C, y D son, respectivamente, (A ) inmunomanchas de RyR2 PKA fosforilatado en la presencia de FKBP12.6 y aumentando las concentraciones deJTV-519; (B9) inmunomanchas de RyR2 PKA fosforilatado en la presencia de 0.5nM S36; (C) una gráfica de una corriente a través de una membrana de plasma, el voltaje dependiente de los canales de calcio de tipo L dependientes los cuales están completamente bloqueados por nifedipina pero no por S36 en cardiomiocitos de ratón aislados; Y (D) una gráfica de dependencia de voltaje de la corriente de calcio tipo L en canales en la presencia de JTV-519 y S36.
La figura 2, las incorporpaciones A,B,C, y D demuestran la prevención de las arritmias ventriculares inducidad por ejercicio por el JTV-519 en ratones calstabin (FKBP12.6) + ~ haploinsuficiente. La incorporación A son electrocardiogramas telemétricos representativos (ECGs) de un ratón (izquierda) no tratado con calstabin 2(FKBP12.6) + ", un ratón (medio) calstabin2 (FKBP12.6) + ~ tratado con JTV-519, un ratón (derecha) (FKBP12.6) + ~ calstabin2. La incorporación B son grabaciones telemétricas de una taquicardia ventricular polimórfica sostenida (sVT) en un ratón calstabin 2 (FKBP12.6) + ~ haploinsuficiente no tratado y un ratón calstabin 2 (FKBP12.6) + ~ JTV-519-tratado, cada uno sometido a una prueba de ejercicio inmediatamente después de la inyección con 0.5 miligramos de epinefrina por kilogramo de peso de cuerpo. La incorporación C son gráficas mostrando los números de ratones con muerte cardiaca (izquierda) taquicardia ventricular sostenida (medio) y taquicardia ventricular no sostenida (derecha) en grupos experimentales de ratones sometidos a prueba de ejercicio e inyección con 0.5 mg. /kilogramo de epinefrina. La incorporación D proporciona gráficas que comparan la dependencia de dosis de los efectos farmacológicos de JTV-519 Y S36 en relación a la muerte cardiaca repentina (izquierda) taquicardias ventriculares sostenidas (medio) y taquicardias ventriculares no sostenidas (derecha) .
La figura 3 es una gráfica que muestra el acortamiento fraccional (FS) del ventrículo izquierdo evaluado por el ecocardiografia modo-M dos semanas después del infarto al miocardio en placebo en contra de ratones tratados con S36. Los ratones tratados S36 muestran una mejora significante en los grupos lOOnM y 200 nM en comparación al placebo.
La figura 4 es una gráfica que muestra las proporciones de peso del corazón a peso del cuerpo (HW/BW) las cuantificaciones de circuitos de presión-volumen (Dp/dt) una semana después de el infarto al miocardio del placebo y de los ratones tratados con S-36. El tratamiento S36 resulta en una reducción benéfica de la proporción de peso de corazón a peso de cuerpo y una velocidad incrementada del desarrollo de presión en S36 en comparación a los ratones tratados con placebo.
La figura 5, es una gráfica que resume los valores EC50 de JTV-519 y la serie de compuestos Rycal indicando varios compuestos con una actividad biológica superior como se evidenció por los valores EC50 signi icativamente inferiores en comparación a JTV-519.
La figura 6, incorporaciones A,B,C, son, respectivamente, (A) indicios de corriente de canal único de RyR2-P2328S no fosforilatado y RyR2-WT no fosforilatado tratado con S36; (B) indicios de corriente de canal único de RyR2-P2328S fosforilatado y RyR2-P2328S no fosforilatado tratado con S36; (C) análisis de inmunomancha de aglutinamiento de calstabin-2 RyR2-P2328S la presencia o en la ausencia de PKA y S36.
La figura 7, las incorporaciones A y B, son, respectivamente (A) una inmunomancha de RyR2 inmunoprecipitado con el anticuerpo en contra de RyR2, y las inmunomanchas de RyR2 PKA fosforilación a Ser-2809 y calstabin2; Y (B)una gráfica de de barras que cuantifica la cantidad relativa de RyR2 PKA fosforilatado a Ser-2808 (correspondiendo a Ser-2809 humano) unido a RyR2 en el tipo silvestre (control) y ratones (FKBP12.6_ ") calstabin-2 deficientes.
La figura 8, incorporaciones A, B y C, son respectivamente, gráficas de barras de (A) ecocardiogramas de mo M en vivo cuantitativos comparando la función de eyección (EF) Antes y después de la operación simulada o el ligado de arteria coronaria descendiente (LAD) izquierda anterior permanente en el tipo salvaje y ratones knockin RyR2-S2808A; (B) cuantificación de circuito de presión-volumen en vivo de carga de presión máxima con el tiempo (dp/dt) en ratones de tipo silvestre y knocking RyR2-S2808A después de la operación simulada o el ligado de arteria coronaria (LAD) descendiente anterior izquierda permanente, y(C) evaluación ecocardiográfica modo-M cuantitativamente de diámetro extremo-sistólico (ESD) en los ratones de tipo silvestre knockin R yR2-S2808A después de una operación simulada o un ligado de arteria coronaria descendiente (LAD) anterior izquierda permanente.
La figura 9, incorporaciones A, B, C y D demuestran el efecto de JTV-519 sobre la afinidad de calstabin2 a RyR2 en ratones (FKBP12.6) + ~ calstabin2 haploionsuficientes después del ejercicio. La incorporación A es de inmunomanchas en cantidades equivalentes de RyR2 inmunoprecipitadas con un anticuerpo en contra de RyR2 (superior) . La incorporación B son gráficas de barras mostrando la cantidad de fosforilación PKA las de RyR2 a Ser-2809 y la cantidad de calstabin2 unida a RyR2 de animales de control y animales después del ejercicio inmediatamente después de la inyección con 0.5 mg/kg. de epinefrina. La incorporación C son indicios de canal único de canales RyR2 aislados de corazones de ratones deficientes de calstabin2_ ~ y calstabin2+ ~ haploionsucifientes inmediatamente después de la prueba ejercicio y de la inyección de 0.5mg de epinefrina por kg. de peso de cuerpo, ambos no tratado (superior) y después del tratamiento (media y fondo) con JTV-519. La probabilidad abierta promedio (Po) en tiempo abierto (To) el tiempo cerrado promedio (To) están indicados y en estado cerrado está indicado por "c". Las lineas ponteadas indican niveles de sub-conductancia para aberturas RyR2 parciales. La incorporación D es una gráfica de barras que resume las probabilidades abiertas por medio de canales RyR2 singulares de ratones deficientes de calstabin2_ ~ Y calstabin2+ ~ haploinsuficientes después del ejercicio con y sin el tratamiento de JTV-519. "*" indica el nivel de significado P<0.05. Los números en las barras indican el número de canales singulares medidos.
La figura 10, incorporaciones A,B,C,D,E y F demuestran la activación periódica de canal RyR2 normalizada y el aglutinamiento de calstabin2 incrementado a los canales RyR2 después del tratamiento con JTV-519. La incorporación A son inmunomanchas de canales RyR2 (RyR2-WT) de tipo silvestre inmounoprecipitados fosforilatados por PKA en la ausencia o la presencia del PKI5_24 péptido inhibidor incubado con calstabin 2 (250Nm) a las concentraciones de JTV-519 indicadas; las inmunomachas muestran la cantidad de RyR2 (superior) y la cantidad de calstabin2 (fondo) asociada con RyR2 inmunoprecipitada después de la incubación con o sin las concentaraciones indicadas de JTV-519. La incorporación B son inmunomanchas de RyR2-S2809D la cual imita la fosforilación PKA constitutiva de RyR2, analizada como en la incorporación A. La incorporación C son curvas aglutinantes de 35S/radioetiquetado calstabin2 a RyR2 no fosforilatado o PKA fosforilatado o a RyR2-S2809D en la presencia o en la ausencia de JTV-519, documentando las diferencias en la afinidad aglutinante de calstabin2 para RyR2. Las incorporaciones D, E y F son indicios de canal singular (izquierdo) y programas de amplitud (derecha) RyR2s PKA-fosforilatado (las incorporaciones E y F) o no fosforilatado (la incorporación D en la presencia del inhibidor PKA PKI4) incubado con calstabin2 (250nM) con (incorporación F) o sin (incorporaciones D y E) JTV-519 (lµM) . Los indicios de canal único están mostrados a 150 Nm [Ca2 ]cual imita la fase diastolica de descanso en el corazón; las aberturas de canal están hacia arriba, la linea punteada indica el nivel completo de abertura de canal (4pA),Y "c" indica el estado cerrado de los canales. Los histogramas de amplitud tienen amplitud representada sobre el eje x, y los eventos sobre el eje y indican el número de aberturas de canal.
La figura 11, incorporaciones A,B,C,D,E,y F demuestran que la fracción de canal RyRl es aumentada y normalizada en ratones mdx tratados con JTV-519. Las incorporaciones A y B son respectivamente un indicio de corriente de canal singular y un histograma de amplitud de RyRl de músculo soleo de un ratón de control (tipo silvestre) bajo condiciones de descanso. Las incorporaciones C y D son respectivamente, un indicio de corriente de canal singular y un histograma de amplitud de RyRl de músculo soleo de un ratón mdx . La incorporación E y F son como respectivamente, un indicio de corriente de canal singular y un histograma de amplitud de RyRl de músculo soleo de un ratón mdx tratado con JTV-519.
La figura 12, incorporpaciones A y B, son respectivamente, inmunomanchas de RyRl, Rl-pSer 2843 asociadas con calstabin 1 en ratones mdx y ratones de tipo silvestre; y las gráficas de barra de cantidades relativas de RyRl, Rl-pSer 2843 y calstabin 1 mdx y ratones de tipo silvestre.
La figura 13, incorporaciones A,B,y C demuestran que el filtrado de calcio de retículo sarcoplástico es detectable en los músculos esqueletos de animales con falla de corazón. Las incorporaciones A y B son imágenes de exploración de linea de fluorescencia de chispas de calcio en miofibras respectivamente, desde, ratas con infarto simulado y de post-miocardio (PMI) . La incorporación C proporciona gráficas de barras que resumen la amplitud el tiempo de elevación, FDHM, y FWHM de las chispas de calcio para las ratas simulada (símbolos abiertos) y PPMI (símbolos cerrados) .
La figura 14, incoporaciones A y B demuestran que el tratamiento de los ratones tipo silvestre, JTV-519 mejora los tiempos de fatiga de músculo soleo. La incorporación A proporciona indicios de tiempo de fatiga de fuerza tetánica máximos para los ratones de tipo silvestre y calstabin2_/~, tratados con JTV-519 o placebo como se indicó. La incorporación B son gráficas de barras resumiendo el tiempo medio para la fatiga para el tipo silvestre y los ratones calstaben2_ ~, tratados con JTV-519 o placebo como se indicó.
La figura 15, incorporaciones A y B , demuestran que los efectos benéficos del tratamiento JTV-519 sobre la función de músculo esqueleto dependen de calstabinl y no de calstabin2 aglutinando a RyRl. La incorporación A proporciona una gráfica de barras de fosforilación PKA de RyRl a Ser-2844 en protones, los cuales corresponden a Ser-2843 en los humanos. La incorporación B son gráficas de la cantidad de calstabinl unido a RyRl de los ratones de tipo silvestre calstabin2_ "tratados con JTV-519 o placebo.
La figura 16, incorporaciones A, B, C, y D demuestran que JTV-519 normaliza la función de canal RyRl normal o que se filtra en vivo. Las incorporaciones A y C son indicios de corriente de canal singular de ratón de tipo silvestre con falla de corazón tratado con placebo (A) y JTV-519 (C) . Las incorporaciones B y D son histogramas de amplitud para ratones de tipo silvestre con falla de corazón tratada con placebo (B) JTV-519 (D) .
La figura 17, incorporaciones A y B, demuestran que el JTV-519 aumenta el aglutinamiento calstabin RyR forforilatado PKA. La incorporación A son inmunomanchas de calstabinl incubado y asociado con RyRl y calstabin2 incubado y asociado con RyR2 a concentraciones en aumento de JTV-519. La incorporación B proporciona gráficas que resumen la proporción de calstabinl y calstabin2 unido a RyRl y a RyR2 como se indicó.
La figura 18, incorporaciones A, B, C y D demuestran que la fosforilación PKA de Ser-2843 aumenta la probabilidad abierta y las sineticas de activación periódica de canales RyRl. La incorporación A proporciona indicios de corriente de canal único y un histograma correspondiente de RyRl de tipo silvestre. La incorporación B proporciona indicios de corriente de canal singulares y un histograma correspondiente de RyRl de tipo silvestre que es PKA fosforilatado. La incorporación C proporciona indicios de corriente de canal singular y de histograma correspondientses de RYR1-Ser-2843A. La incorporación D proporciona los indicios de corriente de canal singulares y de histograma correspondientes de RyRl-Ser-2843D.
La figura 19, incorporaciones A Y B, demuestran la hiperfosforilación PKA y la deficiencia calstabinl de los canales RyRl después del ejercicio sostenido. La incorporación A son inmunomanchas de RyRl, RyRl-pSer2844, RyRl-pSer2849 y calstabinl para control y nadar ratones después de un régimen de ejercicio. La incorporación B es una gráfica de barras que resume las cantidades relativas de los compuestos indicados después del régimen de ejercicio.
La figura 20, incorporaciones A y B, demuestran que la fosforilación PKA RyRl aumenta después de la exposición a duraciones incrementadas de ejercicio sostenido. La incorporación A proporciona inmunomanchas de RyRl y RyRl-pSer 2844 después de duraciones incrementadas de ejercicio sotenido. La incorporación B es una gráfica que muestra la fosforilación PKA relativa de RyRl para duraciones variables de ejercicio.
La figura 21, incorporaciones A,B,y C, demuestran que RyRl PKA fosforilación aumenta con la fatiga del músculo. Las incorporaciones A y B son respectivamente, indicios de tiempo de fatiga y la gráfica de barras mostrando los tiempos de fatiga principales para músculo soleo de rata de falla de corazón y sujetos de control. La incorporación C es la gráfica de fosforilación PKA en contra de tiempo de fatiga.
La figura 22 son manchas de • tricromo y de exhematoxilina-eosina de secciones transversales de ratón M. extensor digitorum longus como demuestra la degeneración de miofibra consistente con la remodelación distrófica después del ejercicio sostenido.
La figura 23 tiene una muestra de indicio de corriente hERG antes (control) y después de la aplicación de ARM036 al 100 µM. También esta mostrado el protocolo de pulsación de voltaje usado para evocar las corrientes hERG.
La figura 24 muestra un curso de tiempo típico del efecto de ARM036 sobre la amplitud de corriente hERG la aplicación de lOµM de ARM036 es indicada por la barra horizontal.
La figura 25 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM036 a varias concentraciones.
La figura 26 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM036-Na a varias concentaciones .
La figura 27 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM047 a varias concentaciones .
La figura 28 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM048 a varias concentaciones .
La figura 29 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM050 a varias concentaciones .
La figura 30 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM057 a varias concentaciones .
La figura 31 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM064 a varias concentaciones .
La figura 32 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM074 a varias concentaciones .
La figura 33 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM075 a varias concentaciones .
La figura 34 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM076 a varias concentaciones .
La figura 35 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM077 a varias concentaciones .
La figura 36 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM101 a varias concentaciones .
La figura 37 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM102 a varias concentaciones.
La figura 38 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM103 a varias concentaciones.
La figura 39 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM104 a varias concentaciones.
La figura 40 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM106 a varias concentaciones.
La figura 41 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de ARM107 a varias concentaciones.
La figura 42 es una gráfica de respuesta-concentración que muestra el porciento de inhibición de la corriente hERG después de la aplicación de S26 a varias concentaciones .
La figura 43 es una gráfica de concentración-respuesta mostrando el porciento de inhibición de corriente hERG después de la aplicación de JTV-519 ("ARMOXX") a varias concentraciones .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se usó aquí y en las cláusulas anexas, las formas singulares de "un", "una", y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contenido claramente dicte de otra manera. Por tanto, por ejemplo la referencia a "un agente" incluya la probabilidad de tales agentes equivalentes de los mismos conocidos por aquellos expertos en el arte, y la referencia a el "polipéptido FKB12.6" es una referencia a uno a más polipétidos FKB12.6 (también conocido como calstabin2) y los equivalentes del mismo conocido por aquellos expertos en el arte y otros. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas aquí son incorporadas por esta mención en su totalidad.
Las siguientes son definiciones de términos usados en la presente descripción. La definición inicial proporciona un grupo o término aquí aplica a ese grupo o término a través de la presente descripción individualmente como parte de otro grupo, a menos que se indique de otra manera.
Como se uso aquí, el término "compuestos RyCal" se refiere a compuestos de la fórmula general I, I-a, I-b, I-c, I-d.I-e,I-f, I-g, I-h, I-i,I-j, I-k, 1-1 o I-m,o como se proporcionó por la invención, y mencionados aquí, "compuestos de la invención".
Los compuestos de la invención son mencionados aquí usando un sistema de denominación numérico, con los compuestos número 1 a 123 proporcionados ahi. Estos compuestos numerados son referidos mediante el uso del prefijo "S" o el prefijo "ARM". Por tanto, el primer compuesto numerado es mencionado ya sea como "SI" o "ARM001", el segundo compuesto numerado es referido, como ya sea , "S2" o "ARM002, el tercer compuesto numerado es mencionado como ya sea "S3" O "ARM003",y otros el sistema de nomenclatura "S" y "ARM" son usados intercambiablemente a través de la descripción, de los dibujos y de las reivindicaciones.
El término "alquilo" se usara en comillas y como se usó aqui y se refiere a un hidrocarburo saturado lineal o ramificado teniendo desde 1 hasta 6 átomos de carbono. Los grupos de alquilo representativos incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, tert-butilo, pentilo, isopentilo, noepentilo, hexilo, isohexilo, neohexilo. El término "alquilo C1-C4" se refiere a una radical de alcano de cadena recta o ramificada (hidrocarburos) conteniendo desde 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo e isobutilo.
El término "alquinilo" como se usó aquí se refiere a un hidrocarburo lineal ramificado teniendo desde 2 a 6 átomos de carbono y teniendo por lo menos una unión doble de carbón-carbón. En una incorporación el alquinilo tiene uno o dos enlaces dobles. La mitad de alquinilo puede existir en la conformación el E o Z y los compuestos de la presente invención incluyen ambas conformaciones.
El término "alquinilo" como se usó aquí se refiere a un hidrocarburo lineal ramificado teniendo desde 2 A 6 átomos de carbono y teniendo por lo menos un enlace triple de carbón-carbón.
El término "arilo" como se usó aqui se refiere a un grupo aromático que contiene de 1 a 3 anillos aromáticos, ya sea fusionados o enlazados.
El término "grupo cíclico" como se usó aquí incluye el grupo ciclo alquilo y el grupo etero cíclico.
El término "grupo cicloalquilo" como se usó aquí se refiere a un anillo de carbón saturado, o parcialmente saturado de tres a siete miembros, cualquier posición de anillo adecuada del grupo de ciclo alquilo puede ser enlazada covalentemente a la estructura química definida. Los ejemplos De los grupos de cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, y cicioheptilo.
El término "halógeno" se usará en comillas, como se usó aqui y se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo.
El término "grupo heterocíclico" o "heterocíclico" o "heterociclil" o "heterociclo" como se usaron aquí se refieren a los grupos cíclicos aromáticos (por ejemplo "heteroarilo") completamente saturados o parcialmente o completamente insaturados (por ejemplo sistemas de anillo monociclico de 4 a 7 miembros, bicíclico de 7 a 11 miembros o triciclico de 10 16 miembros) los cuales tienen por lo menos un heteroátomo en por lo menos un anillo que contiene átomo de carbono. Cada anillo del grupo heterociclico conteniendo un heteroátomo puede tener 1, 2, 3, ó 4 heteroátomos seleccionados de átomos de nitrógeno, átomos de oxigeno y/o átomos de sulfuro, en donde los heteroátomos de nitrógeno y de sulfuro pueden opcionalmente ser oxidados y los heteroátomos de nitrógeno pueden opcionalmente ser cuaternizados. El grupo heterocíclico puede ser unido al resto de la molécula en cualquier heteroátomo o átomo de carbón del anillo o del sistema de anillo. Los grupos heterocíclicos de ejemplo incluyen, pero no se limitan a aceptanilo, aceptidinilo, acidirinilo, dioxalanilo furanilo, furazanilo, homo pipuracinilo, imidazolidinilo, imidazolinil, isiotozolilo, isosiazolilo, morfolinilo, oxiodizolilo, oxiozolidinilo, oxiozolilo, oxiozolidinilo, pirinidinilo, tridinilo, fenanpronilino, fenantridinilo, fenantrolinilo, piperazinilo, piperidinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolil, pirazinilo, pirodooxazolilo, piridoimidazolilo, piridotiozolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirronilino, quinoclidinilo, tetrahidrofuranilo, teodiacinilo, teodiazolilo, tianilo, tianotioziolilo, tianooxiazolilo, tianoimidazolilo, tiomofolidino, tiofenilo, triacilo, triasolilo. Los grupos heterocíclicos bicíclicos de ejemplo incluyen indolilo, isoindolilo, benzotiosolilo, benzoxasolilo, benzooxadiasolilo, benzotianilo, quinoclidinilo, quininolinilo, tetrahidroizoquinolinilo, izoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indonizinilo, benzofurilo, benzofuranzanilo, cromonilo, comarinilo, benzopiranilo, cinolinilo, quinozalinilo, indozalolilo, pirrolopiridilo, furopirindinilo, (tal como furo [2, 3-c] piridinilo, furo [3, 2-b] pirindinilo] o furo [2,3-b] pirindinilo) , dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3, 4-dihidro-4-oxo-quinoxonilino) , triazinilazepinilo, tetrahidroquinolinilo y similares. Los grupos heterocíclicos tricícliclos de ejemplo incluyen carbazolilo, benzidolilo, fenantronilino, acrdidinilo, fenantrdinilo, xantenilo y similares .
El término "fenil" como se usó aquí se refiere al grupo de fenilos sustituido o no substituido.
Los términos antes mencionados "alquilo" "alquenilo" "alquinilo" "arilo", "fenilo", "grupo cíclico," "cicloalquilo," "heterociclil," "heterociclo" y "heterocíclea" pueden ser opcionalmente substituidos con uno o mas substituyentes. Los substituyentes de ejemplo incluyen pero no están limitados a uno o mas de los siguientes grupos: hidrógeno, halógeno, CF3, 0CF3, ciano, nitro, N3 oxo, cicloalquilo, alquinilo, alquinilo, heterocíclo, arilo, alquiloarilo, heteroarilo, 0Ra, SRa, S(=0)Re, S(=0)Re, P(=0)2Re, S (=0) 20Ra,NRbRc,NRbS (=0) 2Re,NRbP (=0) 2Re,S (=0) 2NRbRc, P (=0) 2NRbRc, C (=0) 0 Ra,C (=0) 0Ra,C (=0) NRbRc, OC (=0) Ra,0C (=0) NRbRcNRbC (=0) 0RaNRbRc, NRdS (=0) 2 NRbRc,NRdP(=0)2NRbRc,NRbC(=0)ORa o NRbP(=0)2Re, en donde Ra es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, o arilo; Rb,Rc, y Rd/ son independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, arilo o dicho R ,RC/ juntos con N al cual estos están unidos opcionalmente forman un heterociclo; Y Re es alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, alquinlarilo, heteroarilo, heterociclo, o arilo. En los substituyentes de ejemplo antes mencionados, los grupos tales como tales como de alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquenilo, alquilarilo, 7 heteroarilo, heterociclo, y arilo pueden en si mismos ser sustituidos opcionalmente.
Los substituyentes de ejemplo pueden además opcionalmente incluir por lo menos un grupo de etiquetado, tal como un grupo fluorescente, uno bioluminiscente, uno quimoluminiscente, uno colorimétrico y un grupo de etiquetado radioactivo. El grupo de etiquetado fluorescente puede ser seleccionado de bodipy, dansilo, fluoresceino, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarino, Azul Cascade™, Pacific Blue, Azul Marina, Verde Oregon 4', 6-Diamidino-2-feninendole (DAPI) tintes indopira, amarillo lucifer yodopropilio, porfirinas, alginina y variantes y derivados de los mismos. Por ejemplo ARM118 de la presente invención contiene un grupo etiquetante de BODIPY, el cual es una familia de floroforos basados sobre la mitad de , 4-difluoro-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indeceno. Para una información adicional de las mitades de etiqueta fluorescente y técnicas de fluorescencia vea por ejemplo, "El manual de Sondas Fluorescentes y Químicos de Investigación", de Richard P. Haughland, Sexta Edición, Sondas Molecular, (1996), la cual se incorpora aquí por referencia en su totalidad. Un experto en el arte puede fácilmente seleccionar un grupo de etiquetado adecuado, y conjugar tal grupo de etiquetado con cualquiera de los compuestos de la invención sin una experimentación indebida.
El término "nitrógeno cuaternario" se refiere a el átomo de nitrógeno cargado positivamente tetravalente incluyendo como por ejemplo, el nitrógeno cargado positivamente en un grupo de tetralquilamonio (por ejemplo tetralquilamonio, N-metilpiridimium) , el nitrógeno cargado positivamente en las especies de amonio protolatadas (por ejemplo, trimetilo-hidroamonio, N-hidropiridina) , el nitrógeno cargado positivamente en N-oxido salina (por ejemplo N-metilo-morfolina-N-oxido, piridina-N-oxido) , el nitrógeno cargado positivamente en un grupo de N-amino-amonio (por ejemplo N-aminopiridimio) .
A través de la especificación, a menos que se note de otra manera el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina de compuestos de la presente invención puede opcionalmente ser nitrógeno cuaternario. Los ejemplos no limitantes incluyen ARM- 113 y ARM-119.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en forma tautomérica (por ejemplo como un amido o imino éter) . Todas las formas tautoméricas están contempladas aquí como parte de la presente invención.
El término "prodroga" como se empleo aqui denota un compuesto que con la administración al sujeto, sufre la conversión química mediante procesos metabólicos o químicos para dar compuestos de la presente invención.
Todos los esteroisómeros de los compuestos de la presente invención (por ejemplo, aquellos los cuales existen debido a los carbones asimétricos sobre varios substituyentes) , incluyendo las formas enantioméricas y las formas diasteroméricas, están contempladas dentro del alcance de ésta invención. Los esteroisómeros individuales de los compuestos de la invención pueden como por ejemplo, estar esencialmente libres de otros isómeros (por ejemplo, como un isómero óptico esencialmente puro teniendo una actividad especificada) o pueden ser ellos mezclados, como por ejemplo, como compañeros de carrera o con todos otros u otros esteroisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R como se definió por las recomendaciones IUPAC 1974. Las formas racémicas pueden san resueltas por métodos físicos, como tal, como por ejemplo, la cristalización faccional, la separación o cristalización de derivados diasteroméricos o la separación por cromatolografia de columna quiral. Los isómeros ópticos individuales pueden ser obtenidos de las mezclas racémicas por cualquier método adecuado, incluyendo sin limitación, los métodos convencionales tal como, por ejemplo, la formación de sal con cualquier ácido ópticamente activo, seguido por la cristalización.
Los compuestos de la presente invención son, subsecuentes a su preparación preferiblemente aislados y purificados para obtener una composición conteniendo una cantidad de peso igual a o mayor que 99% del compuesto ("compuesto esencialmente puro") , el cual es entonces usado y formulado como se escribió aquí. Tales compuestos "esencialmente puros" de la presente invención también están contemplados aquí como parte de la presente invención.
Todos los isómeros de configuración de los compuestos de la presente invención están contemplados, ya sea en mezcla o en una forma pura o esencialmente pura. La definición de los compuestos de la presente invención abarca ambos isómeros de alqueno cis (Z) y trans (E) , asi como los isómeros cis y trans de hidrocarburo cíclico o de anillos heterociclicos .
A través de la descripción, los grupos y los sustituyentes de los mismos pueden ser escogidos para proporcionar las mitades estables y los compuestos.
La presente invención proporciona compuestos que son capaces de tratar y evitar desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR que regulan el canal de calcio funcionando en las células. Mas particularmente, la presente invención proporciona compuestos que son capaces de tratar o de evitar un filtrado en los canales RyR. "Desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR" significa desordenes y enfermedades que pueden ser tratadas y/evitadas por la modulación de los receptores RyR que regulan el canal de calcio funcionando en las células. "Desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR" incluyen sin limitación, los desordenes y enfermedades cardiacos, los desordenes y enfermedades esqueletomusculares, los desordenes y enfermedades del conocimiento, hipertermia maligna, diabetes, y síndrome de muerte infantil repentina. Las enfermedades y desordenes cardiacos incluyen, pero no se limitan a desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular; desordenes de latido de corazón irregular inducido por ejercicio y enfermedades; muerte cardiaca súbita; muerte cardiaca súbita inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad de los pulmones de obstrucción crónica; y presión de sangre alta. Los desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular incluyen pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular, la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia auricular y ventricular; la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y los variantes inducidos por ejercicio de los mismos. Las enfermedades y desordenes esqueletomusculares incluyen, pero no se limitan a la fatiga del músculo esqueleto, la fatiga del músculo esqueleto inducida por ejercicio la distrofia muscular, los desordenes de la vejiga y la incontinencia. Los desordenes de conocimiento y enfermedades incluyen, pero no se limitan a la enfermedad de Alzheimer, formas de pérdida de memoria, y pérdida de memoria dependiendo de la edad.
Compuestos En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I: en donde, n es 0, 1, o 2; q es 0, 1,2,3 o 4; cada R es independientemente seleccionada del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, - S03H, S (=0) 2alquilo, S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, -O-acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilarilamino, alquilitio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, hererociclilalquilo, alquelilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, -0-acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilarilamino, alquilitio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, hereroarilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquelilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, (hetero-) arilamino; pueden ser opcionalmente substituidos; Ri es seleccionado del grupo que consiste de H, oxo, alquilo, alquelilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, heterociclilo; en donde cada alquilo, alquelilo arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, y heterociclilo Puede ser opcionalmente substituido; R2 es seleccionado del grupo que consiste de H, -C(=0)R5, C(=S)R6, SO2R7,-P(=0)R8R9, (CH2)m-R?o,- alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterociclilo; en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalaquilo y heterociclilo; pueden ser opcionalmente substituidos; R3 es seleccionado del grupo que consiste de H, -C02Y2,C (=0) NHYR, acilo, -O-acilo, alquilo, alquenilo arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo pueden ser opcionalmente substituidos; y en donde Y es seleccionada del grupo consistente de H, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, y heterociclilo; en donde cada , alquilo, alquenilo arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclil puede ser opcionalmente substituido; R4 es seleccionado del grupo que consiste de H, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo puede ser opcionalmente substituido; R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5Ri6,-(CH2)q, NRisRie," NR?5Ri6,-NHOH,-ORi5,-C(=0)NHNR?5R?6-C02Ri5,C (=0)NR?5Ri6, -CH2X acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo heterociclilo, heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo heterociclilo, heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido y como q es 1,2,3,4,5 o 6; Re es seleccionado del grupo que consiste de -OR , -NR15R16, -NHOH, -NR?5Ri6,CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, a alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido; R7 es seleccionado del grupo que consiste de -OR , -NR?5Ri6,-NHNR?5Ri6 -NHOH, -CH2X, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido; R8 y Rg independientemente son seleccionados del grupo que consiste en OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido; Rio es seleccionado del grupo que consiste de NR?5R?6,OH,S02R??,-NHS02-R??,C(=0) (Ri2) , NHC=0 (Ri2) , -0C=0 (Ri2) y-P(=0)Ri3R?4; Ru, R?2, Ri3 y Ri4 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H,OH,NH2, NHNH2,-NH0H acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido; X es seleccionado del grupo que consiste de halógeno, -CN, -CO15-C (=0) NR?5R?6, -NR?5R?6, 0R?5, -S02R7, y-P (=0) R8R9, y R15 y Ríe independientemente son seleccionados del grupo que consiste en H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2 alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser opcionalmente substituido; y opcionalmente R15 y Ri6 juntos con el N a la cual están unidos pueden formar un heterociclo puede ser substituido; el nitrógeno en el anillo de benxotiazepina, puede opcionalmente ser un nitógeno cuaternario; y enantiomeros, diasteromeros, tautomeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, complejos y prodogas de los mismos; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et-C (=0) NH2, (=0) NHPh, -C (=S) NH-nButil, -C (=0) NHC (=0) CH2C?, -C (=0) H, C (=0) Me, -C (=0) Et, -C (=0) CH=CH2-S (=0) 2Me, o -S (=0) 2Et ; Además siempre que cuando q es 0 , y n es l o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me,-C(=0)Et,-S(=0)2Me,o -S(=0)2Et; Además siempre que cuando q es 1 y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H,Me,-C(=0)H, C(=0)Me,- C (=0) Et, -C (=0) Ph, - S(=0)2Me,o -S(=0)2Et; y además siempre que cuando q es 1, n es 0 y R es 0CT3, OH, alcoxilo C?-C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, C (=0) CH=CH2, o En una incorporación, la presente invención comprende compuestos de la fórmula I como se describe antriormente, con la provisión que dicho compuesto no es S24 o S 68.
En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-a: en donde n es 0, 1, o 2; q es 0,1,2,3 o 4; cada R es seleccionada independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -0HmNH2, -No2, -CN, -CF3-OCF3, -N3, -S03H S (=0) 2alquilo S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo, aquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada alquilo, alquilo , alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo, aquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino puede ser substituido o no substituido; R2 es seleccionado del grupo que consiste de H,-C(=0)R5, C(=S)R6, SO2R7,-P(=0)R8R9, (CH2)m-R?0,- alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterociclilo; en donde cada alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalaquilo y heterociclilo; pueden ser substituido o no substituido; Rs es seleccionado del grupo que consiste de - NR15R16, -NR15R16, " NHOH, -OR15, -C (=0) NHNR?5R?6-C02Ri5, C (=0) NR?5R?6, -CH2X acilo, alquilo, alquenilo, alquilino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, alquilino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; R6 es seleccionado del grupo que consiste de -OR 15,-NHNR?5R?6, -NHOH, -NR?5R?6,CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, a alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; R7 es seleccionado del grupo que consiste de H -OR15, -NR?5R?6,-NHNR?5R?6,-NHOH,-CH2X, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, y heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; R8 y Rg independientemente son seleccionados del grupo que consiste en OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, y heterociclilalquilo en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclil, y heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; Rio es seleccionado del grupo que consiste de R15R16, OH, SOzRu, -NHS02-Rn, C (=0) (Ri2 ) , NH (C=0 ( R12 ) , -0 (C=0) (R?2) y-P (=0) R?3R?4 ; m es 0 , 1 , 2 , 3 o 4 ; Rii/ R12 R13 y R14 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H,0H,NH2/ NHNH2,-NH0H acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; X es seleccionado del grupo que consiste de halógeno, -CN, -C02R?5-C (=0) NR?5R?6, -NR?5R?6, ORi5, -S02R7, y-P (=0) R8R9, y R15 y Ri6 independientemente son seleccionados del grupo que consiste en H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2 alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido; y opcionalmente R15 y R16 juntos con el N a la cual están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser substituido o no substituido ; el nitrógeno en el anillo de benxotiazepina, puede opcionalmente ser un nitógeno cuaternario; y enantiomeros, diasteromeros, tautomeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, complejos y prodogas de los mismos; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et-C (=0) NH2, (=0) NHPh, -C (=S) NH-nButil, -C (=0) NHC (=0) CH2C?, -C (=0) H, -C (=0) Me, -C (=0) Et, -C (=0) CH=CH2-S (=0) 2Me, o -S (=0) 2Et; Además siempre que cuando q es O , y n es l o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me,-C(=0)Et,-S(=0)2Me,o -S(=0)2Et; Además siempre que cuando q es 1 y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H,Me,-C(=0)H, C(=0)Me,- C (=0) Et, -C (=0) Ph, - S(=0)2Me,o -S(=0)2Et; y además siempre que cuando q es 1, n es 0 y R es 0CT3, OH, alcoxilo C?-C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, C (=0) CH=CH2, o En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-a, en donde cada R es seleccionada independientemente del grupo que consiste de H halógeno, -OH, OMe, -NH2-N02, -CN, -CF3, -OCF3-Ne, -S (=0) 2C?-C4alquilo, -S (=0) C?-C4alquilo, -S-C1-Calquilo, - OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me morfolinilo y propenilo y n es 0,1, o 2 En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-a, en donde R2 es seleccionada independientemente del grupo de C=0Rs, C=S(R6),-S02R7-P(=0)R8R9 y-(CH2)m-R10.
En aún otra incorporación la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-b: (I-b) En donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, CF3-OCF3-N3- S03H,S (=0)2alquilo,-S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alguiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino, ; en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alguiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y pueden ser substituido o no substituido; R2 y n son como se define en los compuestos de la formula I-a dada arriba; y enantiomeros, diasteromeros, tautomeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-b, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H , halógeno, OH, -NH2-N02, -CN, -CF3-OCF3-N3-S02H, C?-C4Salquilo, -S-Ci-C4alquilo, OS (=0) 2CF3, Ph, NHCH2Ph, -C (=0) Me, -OC (=0) Me, -OC (=0) Me, morfolinilo y propenilo; Y n es 0,1 o 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R" es H.
En otras incorporaciones la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-b, en donde R2 es seleccionado del grupo que consiste de-C=0 (R5) , -C=S (R6) , -S02R7, -P(=0)R8R9, y -(CH2)M-R?0.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-c: (I-c) En donde cada R, R7 q, y n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a y enantiomeros, diasteromeros, tautomeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-c en la que cada R es independientemente seleccionada del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -OMe, N02, -CN, CF3-OCF3-N3-S (=0)2 C?-Calquilo, -S-C?~ Calquilo, OS (=0) 2CF3, Ph, NHCH2Ph, -C (=0) Me, -OC (=0) Me, -OC (=0) Me, morfolinilo, y propenilo y n es 0, 1 o 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-c en la que R7 es independientemente seleccionada del grupo que consiste de OH,-NR15 R16, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclil, heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo heterociclil, heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido.
En una incorporación adicional la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste deH, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, CF3-OCF3-N3-S03H, S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alguiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo (hetero- ) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino, ; en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, puede ser substituido o no substituido; R7 y en n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a arriba; y enantiomeros, diasteromeros, tautomeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solventes, complejos y pro-drogas de los mismos.
Ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, OH, OMe, -NH2, -N02, -CN, CF3-OCF3-N3- S02H, C?-C4alquilo, -S-Ci-C4alquilo, OS (=0) 2CF3, Ph, NHCH2Ph, -C (=0) e, -OC (=0) Me, -OC (=0) Me, morfolinilo y propenilo y n es 0,1 o 3. En algunos casos, R' es H u OMe, u R" es H.
En otras incorporaciones la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-d, en donde R7 es seleccionada del grupo que consiste de -OH, -NR?5NR?6 alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo heterociclilo, heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo heterociclilo, heterociclilalquilo puede ser substituido o no substituido.
En una incorporación la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e: En donde cada R, R5, q y n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e, en donde cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?~C , -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C(=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e, en donde R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHOH, -OR15, CH2X, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilaquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilaquilo puede ser sustituido o no sustituido; En algunas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-e, en donde R5 es un alquilo, sustituido por lo menos por un grupo de etiquetado, tal como un grupo fluorescente, bioluminiscente, quimiluminiscente, colorimétrico y un grupo de etiquetado radiactivo. Un grupo de etiquetado fluorescente puede ser seleccionado de bodipi, densil, fluoresceia, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarinos, azul Cascade®, azul pacifico, azul marina, verde Oregon, ' 6-diamidino-2-fenilindole (DAPI), tintes indopira, amarillo lucifer, yodo propidio, porfirinas y variantes y derivados de los mismos.
En otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R5 y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; Y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C ,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-f, en donde R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHNR15R16, - OR15, -NHOH, -CH2X- alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g: en donde W es S ú O; cada R, R15, R16, q, y n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde cada R es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C ,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C , -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph,-C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde R?5 y R?6 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos; y opcionalmente R15 y R16 juntos con el N al cual estos están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser sustituido.
En algunas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde W es 0 ó S.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h: En donde W es S ú 0; en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, - N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; Ri5/ Ríe y n son como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; Y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C , -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-h, en donde R15, y R16, son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos; y opcionalmente R?5 y R?6 juntos con el N al cual estos están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser sustituido.
En algunas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-g, en donde W es O ó S.
En otra incorporación adicional, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i: en donde R17 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R?6, -NHNR?5R?6, -NH0H,-0Ri5, -CH2X, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo puede ser sustituido o no sustituido; cada R, q, y n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a dada arriba; y los enantiómeros, diastereómeros, tatuómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i, en donde cada R es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C ,-S(=0) alquilo C?-C ,-S- alquilo C?-C4 -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 2.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-i, en donde R? es -NR15R?6, y -OR15. En ciertas otras incorporaciones, R?7 es -OH, -OMe, -NEt, -NHEt,-NHPh, -NH2, ó -NHCH2piridil? .
En una incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-j : en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -0CF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R1 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?5R16,-NHNR?5R16, -NHOH, -OR15, CH2X, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituido; n es como se definió en los compuestos de la fórmula I-a; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-j, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -0C(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-j, en donde R?7, es-NR15R?6, ó -OR15. En ciertas otras incorporaciones, R?7 es -OH, -OMe, -NEt,-NHEt, -NHPh, -NH2, ó -NHCH2piridilo .
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-k: CH^Rtg / a-u en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, - N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; Ríe es seleccionado del grupo que consiste de -NR15R16,-C (=0)NR15R16, - (C=0)0R?5, -OR15, alquilo, arilo, cicloalquilo, heterociclilo, y en un grupo etiquetado; en donde cada alquilo, arilo, cicloalquilo heterociclilo pueden ser sustituido o no sustituiod; en donde p es l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10; y n es 0, 1 ó 2; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-k, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C ,-S(=0) alquilo C?-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -OC (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-k, en donde R?8 es seleccionado del grupo que consiste de -NR15R?6, - (C=0) 0R15, 0R15, alquilo, arilo y en un grupo de etiquetado; y en donde cada alquilo y arilo puede ser sustituido o no sustituido. En algunos casos, m es 1 y R18 es Ph, C(=0)0Me, C(=0)0H, aminoalquilo, NH2, NHOH, ó NHCbz. En otros casos, m es 0 y R?8 es alquilo C?-C4, tal como Me, Et, propilo y butilo. En aún otros casos, m es 2 y R?8 es pirrolidina, piperidina, piperazina o morfolina. En algunas incorporaciones, m es 3 , 4, 5, 5, 7 ú 8 y R?8 es un grupo de etiquetado fluorescente seleccionado de bodipi, densil, fluoresceia, rodamina, rojo Texas, tintes cianina, pireno, coumarinos, azul Cascade®, azul pacífico, azul marina, verde Oregon, 4' 6-diamidino-2-fenilindole (DAPI), tintes indopira, amarillo lucifer, yodo propidio, porfirinas y variantes y derivados de los mismos.
En aún otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1: en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -OS (=0) 2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; RÍ y n son como se definió en compuestos de la fórmula I-a; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -OCF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C4,-S(=0) alquilo d-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C (=0)Me, -0C(=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula 1-1, en donde Re es seleccionada del grupo que consiste de -NR15R16, -NHNR15R16, -ORis, -NHOH, -CH2X- acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, y heterociclilalquilo pueden ser sustituidos o no sustituidos. En algunos casos, R6 es -NR?5R?6 tal como -NHPh, pirrolidina, piperidina, piperazina, morfolina y similares. En otros casos, R es alcoxilo, tal como -O-tBu.
En otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-M: s- ) en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2-N02, -CN-CF3, -OCF3, -N3,-S03H,-S(=0)2alquilo,-S (=0) alquilo, -OS (=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, pueden ser sustituidos o no sustituidos; R8, Rg y n son como se definió en compuestos de la fórmula I-a dada arriba; y enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos.
En ciertas incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-m, en donde R' y R' ' son independientemente seleccionados del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, OMe, -NH2, -N02-CH, -CF3, -0CF3, -N3, -S (=0) 2 alquilo C?-C ,-S(=0) alquilo Cx-C4,-S- alquilo C?-C4, -OS (=0) 2CF3, Ph, -NHCH2Ph,-C (=0)Me,-0C (=0)Me, morfolinilo y propenilo; y n es 0, 1 ó 3. En algunos casos, R' es H u OMe, y R' ' es H.
En otras incorporaciones, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula I-m, en donde R8 y Rg son independientemente alquilo, arilo, -OH, alcoxilo, ó alquilamino. En algunos casos, R8 es alquilo C?~C4 tal como Me, Et, propilo y butilo; y R9 es arilo tal como fenilo.
Los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 y I-m tratan y evitan los desordenes y enfermedades asociados con los receptores RyR.
Los ejemplos de tales compuestos incluyen sin limitación, SI, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S9, Sil, S12, S13, S14, S19, S20, S22, S23, S25, S26, S36, S37, S38, S40, S43, S44, S45, S46, S47, S48, S49, S50, S52, S53, S54, S55, S56, S57, S58, S59, S60, S61, S62, S63, S64, S66, S67, S68, S69, S70, S71, S72, S73, S74, S75, S76, S77, S78,S79, S80, S81, S82, S83, S84, S85, S87, S88, S89, S90, S91, S92, S93, S94, S95, S96, S97, S98, S99, SlOO, S101, S102, S104, S105, S107, S108, S109, S110, Slll, S112, S113, S114, S115, S116, S117, S118, S119, S120, S121, S122 y S123. Estos compuestos tienen las siguientes estructuras : S22 S 5 S2 S43 S68 S69 S70 S71 S72 74 S76 S78 S79 1 S81 S82 S83 S84 S91 S92 -€QloCM- S95 O S97 S99 S101 S102 S103 SI04 S120 Afí?)121 S121 S122 Si 23 A?ro120 En una incorporación de la presente invención, para los compuestos de la Fórmula I, si R2 es C=0(R5) ó S02R7, entonces R está en las posiciones 2, 3 ó 5 del anillo de benceno.
En aún otra incorporación de la invención, para los compuestos de la Fórmula I, si R2 es C=0(Rs) ó S02R7, entonces cada R es independientemente seleccionado del grupo que consiste de H, halógeno -OH, -NH2, -N02, -CN, -N3, -S03H, acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclialquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclialquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3-SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (heter-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo.
En otra incorporación de la invención, para los compuestos de la fórmula I, si R2 C=0(R5) ó S02R7, entonces hay dos por lo menos R unidos al anillo de benceno. Además, hay por lo menos dos grupos R unidos al anillo de benceno, y ambos grupos R están unidos en las posiciones 2, 3 ó 5 sobre el anillo de benceno. Aún adicionalmente, cada R es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, halógeno -OH,-NH2, -N02, -CN, -N3, -S03H, acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclialquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclialquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3-SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (heter-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo .
En otra incorporación de la invención, para los compuestos de la fórmula I, Si R2 es C=0(R5), entonces R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR16, NHNHR16, NHOH, -OR15, CONH2NHR?e, CONRie, CH2X, acilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicliclo, y heterociclialquilo; en donde cada acilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterocicliclo, y heterociclialquilo pueden ser sustituidos con una o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo.
En otra incorporación, la presente invención proporciona compuestos de la fórmula II: en donde R=OR' ' ' , SR' ' ' , NR' ' ' , alquilo o haluro y R' ' ' =alquilo, arilo, ó H, y en donde R puede estar en la posición 6, 7, 8, ó 9. La fórmula II está discutida también en la solicitud pendiente 10/680,988, cuya descripción se incorpora aqui en su totalidad por referencia.
Rutas de Actividad Los compuestos de la invención tales como los compuestos de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-j, I-k, 1-1 y I-m, reducen la probabilidad abierta de RyR mediante el aumentar la afinidad del FKBP12 (calstabinl) y FKBP12.6 (calstabin2) , para respectivamente el RyRl PKA-fosforilatado y el RyR2 PKA-fosforilatado. Además, los compuestos de la invención normalizan la activación periódica de los canales RyR mutantes, incluyendo los canales RyR2 mutantes asociados con la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica, mediante aumentar la afinidad de aglutinamiento de FKBP12 (calstabin2) y FKBP12.6 (calstabin2) . Por tanto, los compuestos de la invención se refieren a desordenes y condiciones que involucran la modulación de los receptores RyR, particularmente los receptores RyRl y RyR2. Los ejemplos de tales desordenes y condiciones incluyen sin limitación, los desordenes y enfermedades cardiacas, los desordenes y enfermedades esqueleto musculares, los desordenes y enfermedades del conocimiento, la hipertermia maligna, la diabetes y el síndrome de muerte infantil repentina. El desorden y las enfermedades cardiacas incluyen, pero no se limitan a desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular; desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducido por ejercicio, muerte cardiaca repentina; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstrucción crónica; y alta presión de la sangre. Los desordenes y enfermedades de latidos de corazón irregular incluyen y las enfermedades y desordenes del latido de corazón irregular inducido por ejercicio incluyen, pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular; la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia auricular y ventricular; la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y las variantes inducidas por ejercicio de las mismas. Las enfermedades y desordenes esqueleto-musculares incluyen, pero no se limitan a la fatiga esqueleto muscular, la fatiga esqueleto muscular inducida por ejercicio, la distrofia muscular, los desordenes de la vejiga y la incontinencia. Los desordenes y enfermedades del conocimiento incluyen pero no se limitan a la enfermedad de Alzheimer, las formas de pérdida de la memoria y una pérdida de memoria dependiente de la edad. Los compuestos de la invención tratan estos desordenes y condiciones mediante el aumentar la afinidad de la unión de FKBP12 (calstabinl) -RyRl y aumentando la afinidad de unión de FKBP12.6 (calstabin2) -RyR2.
De acuerdo con lo anterior, la presente invención proporciona un método para limitar o evitar una disminución en el nivel de FKBP unido-RyR (calstabin) en las células de un sujeto. Como se usó aqui, RyR incluye RyRl, RyR2 y RyR3. Adicionalmente, el FKBP incluye ambos FKBP12 (calstabinl) y FKBP12.6 (calstabin2) . El FKBP unido RyR por tanto se refiere al FKBP12 (calstabinl) unido RyRl, FKBP12.6 (calstabin2) unido RyR2 y el FKBP12 (calstabinl) unido RyR3.
Como se usó aqui, "RyR" también incluye una "proteina RyR" y un "análogo RyR". Un "análogo RyR" es una variante funcional de la proteina RyR, teniendo la actividad biológica RyR que es 60% o más una homología de secuencia de aminoácido mayor con la proteina de RyR. El RyR de la presente invención son no fosforilatado, fosforilatado (por ejemplo mediante PKA) o hiperfosforilatado (por ejemplo mediante PKA) . Como se usó además aqui, el término "actividad biológica RyR" se refiere a la actividad de una proteina o péptido que demuestra una habilidad para asociarse físicamente con, o unirse, FKBP12 (calstabinl) en el caso de RyRl y de RyR3, y de FKBP12.6 (calstabin2) en el caso de RyR2 (por ejemplo la unión de aproximadamente dos veces o de aproximadamente cinco veces, arriba de la unión de fondo de un control negativo) bajo las condiciones de ensayos descritos aqui.
Como se usó aqui, "FKBP" incluye ambas "una proteina FKBP" y un "análogo FKBP", ya sea que este sea FKBP12 (calstabinl) ó FKBP12.6 (casltabin2) . A menos que se indique de otra manera aqui, "proteina" incluirá una proteina, dominio de proteina, polipéptido o péptido o cualquier fragmento del mismo. Un "análogo FKBP" es una variante funcional de la proteina FKBP, teniendo la actividad biológica FKBP, que tiene 60% o más de homología de secuencia-ácido-amino con la proteina FKBP, ya sea que este sea FKBP12 (calstabinl) ó FKBP12.6 (calstabin2) . Como se usó además aqui, el término "actividad biológica FKBP" se refiere a la actividad de una proteina o péptido que demuestra una capacidad para asociarse físicamente con o aglutinarse con el RyR2 no fosforilatado o no hiperfosforilatado (por ejemplo, la unión de aproximadamente dos veces o de aproximadamente cinco veces arriba de la unión de fondo de un control negativo) bajo las condiciones de los ensayos descritos aqui.
El FKBP se une al canal RyR, una molécula por sub-unidad RyR. Por tanto, como se usó aqui, el término "FKBP unido-RyR" incluye una molécula de una proteina FKBP12 (calstabinl) que está unida a una sub-unidad de proteina RyRl ó un tetrámero de FKBP12 que está en asociación con un tetrámero de RyRl, una molécula de jproteina FKBP12.6 (calstabin2) que está unida a una sub-unidad de proteina RyR2 o un tetrámero de FKBP12.6, que está en asociación con un tetrámero de RyR2, y una molécula de una proteina FKBP12 (calstabinl) que está unida a una unidad sub-unidad de proteina RyR3 o un tetrámero de FKBP12 que está en asociación con un tetrámero de RyR3. Por tanto, FKBP unido RyR se refiere a FKBP12 unido RyRl, "FKBP12.6 unido RyR2" y "FKBP12 unido RyR3".
De acuerdo con el método de la presente invención, una "disminución" o "desorden" en el nivel de FKBP unido RyR en las células de un sujeto se refiere a una disminución detectada, decrecimiento o reducción detectada en el nivel de FKBP unido RyR en las células del sujeto. Tal disminución está limitada o evitada en las células de un sujeto cuando la disminución está en cualquier manera detenida, perjudicada, impedida, obstruida o reducida por la administración de los compuestos de la invención, de manera que el nivel de FKBP unido RyR en las células del sujeto es superior de lo que de otra manera seria en la ausencia del compuesto administrado.
El nivel de FKBP unido RyR en un sujeto es detectado por ensayos estándar y técnicas, incluyendo aquellas determinadas fácilmente del arte conocido (por ejemplo fénicas inmunológicas, análisis de hibridización, inmunoprecipitación, análisis de mancha Western, técnicas de formación de imagen de fluorescencia y/o detección de radiación, etc.), asi como cualquier ensayo y métodos de detección descritos aqui. Por ejemplo la proteina está aislada y purificada de células de un sujeto usando métodos estándar conocidos en el arte, incluyendo, sin limitación, extracción de células (por ejemplo con un detergente que solubiliza la proteina) en donde sea necesario, seguido pro la purificación de afinidad sobre una columna, cromatografía (por ejemplo FTLC y HPLC) , inmunoprecipitación (con un anti-cuerpo) y precipitación (por ejemplo con isopropanol y un reactivo tal como Trizol) . El aislamiento y la prurificación de la proteina seguido por la electroforesis (por ejemplo, sobre un gel SDS-poliacrilamida) . Una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en un suejto, o como la limitación o prevención del mismo es determinada por la comparación de la cantidad de FKBP unido de RyR detectada antes de la administración de JTV-519 o un compuesto de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 ó I-m, (de acuerdo con los métodos descritos abajo) con la cantidad detectada un tiempo adecuado después de la administración del compuesto .
Una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en las células de un sujeto se limitó o se evitó, por ejemplo mediante inhibir la disasociación de FKBP y RyR en las células del sujeto; y mediante el incrementar la unión entre FKBP y RyR en las células del sujeto; o mediante el estabilizar el complejo de RyR-FKBP en las células de un sujeto. Como se usó aqui, el término "inhibir disasociación" incluye el bloquear, disminuir, inhibir, limitar o evitar la disasociación física o separación de una sub-unidad de FKBP de una molécula RyR en las células del sujeto, y bloquear, disminuir, inhibir, limitar o evitar la disasociación o separación física de una molécula RyR de una sub-unidad FKBP en las células de un sujeto. Como se usó además aqui, el término "unión con incremento" incluye mejorar, incrementar o mejorar la capacidad de el RyR fosforilatado para asociarse físicamente con el FKBP (por ejemplo la unión de aproximadamente dos veces o de aproximadamente cinco veces, arriba de la unión de fondo de un control negativo) en células del sujeto y mejorando, aumentando o incrementando la capacidad del FKBP para asociarse físicamente con el RyR fosforilatado (por ejemplo la unión de aproximadamente dos veces o de aproximadamente cinco veces, arriba de la unión de fondo de un control negativo) en células del sujeto. Adicionalmente, una disminución en el nivel de KFBP unido-RyR en las células de un sujeto está limitado o evitando mediante disminuir directamente el nivel de RyR fosforilatado en las células del sujeto mediante disminuir indirectamente el nivel de RyR fosforilatado en las células (por ejemplo mediante especificar una enzima (tal como PKA) u otra molécula endógeno que regula o modula las funciones o niveles del RyR fosforilatado en las células) . En una incorporación, el nivel de RyR fosforilatado en las células es disminuido por lo menos por 10% en el método de la presente invención. En otra incorporación, el nivel de RyR forsforilatado es disminuido por lo menos por 20%.
El sujeto de la presente invención son los sistemas in Vitro y en vivo, incluyendo sin limitación los tejidos o células aisladas o cultivadas y los sistemas de ensayo in Vitro sin célula y un animal (por ejemplo un anfibio, un pájaro, un pez, una mamífero, un marsupial, un humano, un animal doméstico (tal como un gato, perro, mono, ratón o rata) o un animal comercial (tal como una vaca o un cerdo) ) .
Las células de un sujeto incluyen las células de músculo estriado. Un músculo estriado es un músculo en el cual las unidades repetitivas (sarcómeros) de las miofibras contráctiles están arregladas en coincidencia a través de la célula, resultando en estriados transversales u oblicuos que son observados en el nivel de un microscopio de luz. Los ejemplos de las células de músculo estriado incluyen sin limitación, las células de músculo (esqueleto) voluntario y las células de músculo cardiaco. En una incorporación, la célula usada en el método de la presente invención es una célula de músculo cardiaco humano. Como se usó aqui, el término "célula de músculo cardiaco" incluyen fibras de músculo cardiaco, tal como aquellas encontradas en el miocardio del corazón. Las fibras de músculo cardiaco están compuestas de cadenas de célula de músculo-corazón contiguas o cardiomiocitos, unidos de extremo a extremo en discos intercalados. Los discos posee dos clases de juntas de célula: desmosomas expandidas que se extienden a lo largo de sus partes transversales y juntas de separación, la más grande las cuales yace a lo largo de sus partes longitudinales.
Una disminución en el nivel de RyR-unido FKBP está limitada o editada en las células del suejto mediante administrar los compuestos de la invención al sujeto; esto también permite hacer contacto entre células del sujeto y los compuestos de la invención. Los compuestos de la invención son moduladores de canales de calcio-ión. Además de regular los niveles de calcio en las células del miocardio, los compuestos de la invención modulan la corriente Na+ y la corriente K+ de rectificador hacia adentro en las células, tal como las células ventriculares de cerdo de guinea, e inhibe la corriente K+ de rectificador retrazada en las células, tal como las células auriculares del cochinito de guinea.
Composición Farmacéutica Los compuestos de la invención son formulados en composiciones farmacéuticas para la administración a sujetos humanos en una forma biológicamente compatible adecuada para la administración en vivo. De acuerdo a otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I_k, 1-1 ó I-m, en combinación con el diluente y/o portador farmacéuticamente aceptable. El portador farmacéuticamente aceptable debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composición y no perjudicial al recipiente del mismo. El portador farmacéuticamente aceptable empleado aqui es seleccionado de varios materiales orgánicos o inorgánicos que son usados como materiales para formulaciones farmacéuticas y los cuales son incorporados agentes analgésicos, amortiguadores, aglutinantes, desintegrantes, diluentes, emulsificadores, excipientes, entendedores, glidantes, solubilizadores, estzbilizadores, agentes de suspensión, agentes de tonicidad, vehículos y agentes de incremento de viscosidad. Si es necesario, los aditivos farmacéuticos tal como los anti-oxidantes, aromáticos, colorantes, agentes mejoradores de sabor, preservativos y endulzadores también son agregados. Los ejemplos de los portadores farmacéuticos aceptables incluyen carboximetilcelulosa, celulosa cristalina, glicerina, goma arábiga, lactosa, estereato de magnesio, metil celulosa, polvos, agua salada, alginato de sodio, sucrosa, almidón, talco y agua aún entre otros.
Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención son preparadas por los métodos muy conocidos en las artes farmacéuticas. Por ejemplo, los compuestos de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 ó I-m, se ponen en asociación con un portador y/o un diluente como una suspensión o solución. Opcionalmente, uno o más ingredientes accesorios (por ejemplo, amortiguadores, agentes de sabor, agentes de superficies activas y similares) también son agregados. La elección del portador es determinada por la solubilidad y la naturaleza química de los compuestos, la ruta escogida de administración y la práctica farmacéutica estándar.
Los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I_h, I-i, I_j, I-k, 1-1 ó I-m, son administrados a un sujeto mediante hacer contacto con las células especificas (por ejemplo células de músculo cardiaco) en vivo en el sujeto con los compuestos. Los compuestos son puestos en contacto con (por ejemplo introducidos dentro) las células del sujeto usando las técnicas conocidas utilizadas para la introducción y administración de proteínas, ácido nucleicos y otras drogas. Los ejemplos de los métodos para poner en contacto con las células con (por ejemplo tratar las células con) los compuestos de la invención incluyen, sin limitación, la absorción, electroporación, inmersión, inyección, introducción, entrega de liposa, transfección, transfusión, vectores y otros métodos y vehículos de entrega de droga. Cuando las células de objetivo están localizadas en una porción particular de un sujeto, es deseable introducir los compuestos de la invención directamente en las células, mediante la inyección o mediante algunos otros medios (por ejemplo, mediante introducir los compuestos dentro de la sangre u otro fluido del cuerpo) . Las células de objetivo están contenidas en el tejido de un sujeto y son detectadas por los métodos de detección estándar fácilmente determinados del arte conocido, los ejemplos de los cuales incluyen, sin limitación, las técnicas inmunológicas (por ejemplo manchado inmunoistoquimico) , técnicas de formación de imagen fluorescencia y técnicas microscópicas.
Adicionalmente, los compuestos de la presente invención son administrados a un humano o a un sujeto animal a través de procedimientos conocidos, incluyendo sin limitación, la administración oral, la administración sub-lingual o bucal, la administración parenteral, la administración transdérmica, a través de inhalación o intranasalmente, vaginalmente, rectalmente e intramuscularmente. Los compuestos de la invención son administrados parenteralmente, mediante epifacial, intracapsular, intracraneal, intracutáneo, intratecal, intramuscular, intraorbital, intraperitoneal, intraespinal, intraesternal, intramuscular, intravenoso, parequimatoso, subcutáneo o inyección sub-lingual o por cualquier manera de catéter. En una incorporación, el agente es administrado al sujeto por via de la entrega a los músculos del sujeto incluyendo, pero sin limitarse a los músculos cardiacos del sujeto. En una incorporación, el agente es administrado al sujeto por via de una entrega de objetivo a las células de músculo cardiaco a través de un catéter insertado adentro del corazón del sujeto. 14 Para la administración oral, la formulación de los compuestos de la invención puede estar presentes como cápsulas, tabletas, polvos, granulos o como una suspensión o solución. La formulación tiene aditivos convencionales, tal como lactosa, manitol, almidón de maiz o almidón de papa. La formulación también está presentada como aglutinantes tales como celulosa cristalina, derivados de celulosa, acacia, almidón de maiz o gelatinas. Adicionalmente, la formulación está presentada con desintegradores, tal como almidón de maiz, almidón de papa o carboximetilcelulosa de sodio. La formulación también está presentada como un glicolato de almidón de sodio o anhidro de fosfato de calcio dibásico. Finalmente, la formulación está presentada con lubricantes tal como esterato de magnesio o talco.
Para la administración parenteral (por ejemplo la administración por inyección a través de una ruta distinta al canal alimentario) , los compuestos de la invención son combinados con una solución acuosa estéril que es isotónica con la sangra del sujeto. Tal formulación es preparada mediante disolver un ingrediente activo sólido en agua conteniendo sustancias fisiológicamente compatibles, tal como cloruro de sodio, glicina y similares, y teniendo un pH amortiguado compatible con las condiciones fisiológicas, como para producir una solución acuosa y entonces hacer a dicha solución estéril. La formulación está presentada en recipientes de unidad de dosis o de dosis múltiples, tal como recipientes o ampolletas selladas. La formulación es entregada por cualquier modo de inyección, incluyendo, sin limitación epifacial, intracapsular, intracraneal, intracutánea, intratecal, intramuscular, intraorbital, intraperitoneal, intraespinal, intraesternal, intramuscular, intravenosa, parequimatosa, subcutánea, o sublingual por cualquier forma del catéter adentro del corazón del sujeto.
Para la administración transdérmica, los compuestos de la invención son combinados con mejoradores de penetración de la piel, tal como propilen glicol, polietilen glicol, isopropanol, etanol, ácido oleico, N-metil pirrolidona y similares, los cuales aumentan la permeabilidad de la piel a los compuestos de la invención y permiten a los compuestos el penetrar a través de la piel y adentro de la corriente sanguínea. Las composiciones mejoradoras/compuesto también pueden ser además combinadas con una sustancia polimérica, tal como etil celulosa, hidropropil celulosa, etileno/vinil acetato, polivinil pirrolidona y similares, para proporcionar a la composición en forma de gel, los cuales son disueltos en un solvente, tal como cloruro de metileno, y no parados a la viscosidad deseada y después aplicados al material de respaldo para proporcionar un parche.
En algunas incorporaciones, la composición está en una forma de dosis de unidad tal como una tableta, cápsula o una ampolleta de dosis única. Las dosis de unidad adecuadas, por ejemplo, las cantidades terapéuticamente efectivas, pueden ser determinadas durante los ensayos químicos diseñados apropiadamente para cada una de las condiciones para las cuales está indicada la administración de u compuesto escogido y variarán, desde luego, dependiendo del punto final clínico deseado. La presente invención también proporciona artículos de fabricación para tratar y evitar desórdenes, tal como desórdenes cardiacos, en un sujeto. Los artículos de manufactura comprenden una composición farmacéutica de uno o más de los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, ?-q, I-h, I-i, I-j, I~k, 1-1, o I-m, como se describió aqui. Los artículos de manufactura son empacados con indicaciones para varios desórdenes que son capaces de tratar y/o de prevenir las composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, los artículos de fabricación comprenden una dosis de unidad de un compuesto descrito aqui que es capaz de tratar o evitar un desorden muscular, y una indicación de que la dosis de unidad es capaz de tratar o de evitar cierto desorden, por ejemplo una arritmia.
De acuerdo con un método de la presente invención, los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, son administrados al sujeto (o son puestos en contacto con las células del sujeto) en una cantidad efectiva para limitar o evitar una disminución en el nivel de FKBP RyR en el sujeto, particularmente en las células del sujeto. La cantidad es fácilmente determinada por un artesano experto, con base en procedimientos conocidos, incluyendo el análisis de las curvas de desdoblamiento establecidas en vivo y los métodos de ensayo descritos aqui. En una incorporación, una cantidad adecuada de los compuestos de la invención efectiva para limitar o evitar la disminución en el nivel de FKBP unido RyR en el sujeto varia de desde alrededor de 0.01 mg/kg/dia a alrededor de 20 mg/kg/dia, y/o es una cantidad suficiente para lograr niveles de plasma variando de desde alrededor de 300 ng/ml a alrededor de 1,000 ng/ml. En una incorporación, la cantidad de compuesto de la invención varia de desde alrededor de 10 mg/kg/dia a alrededor de 20 mg/kg/dia. En otra incorporación, de desde alrededor de 0.01 mg/kg/dia a alrededor de 10 mg/kg/dia es administrada. En otra incorporación es administrado, de desde alrededor de 0.01 mg/kg/dia a alrededor de 5 mg/kg/dia. En otra incorporación, es administrado de desde alrededor de 0.05 mg/kg/dia a alrededor de 5 mg/kg/dia. En otra incorporación preferida, es administrado de desde alrededor de 0.05 mg/kg/dia a alrededor de 1 mg/kg/dia.
Usos La presente invención proporciona un rango nuevo de tratamientos terapéuticos para pacientes con varios desórdenes involucrando la modulación de los receptores RyR, particularmente los desórdenes músculo esqueleto (RyRl) , los desórdenes cardiacos (RyR2), y los desórdenes del conocimiento (RyR3) .
En una incorporación, de la presente invención, el sujeto no ha desarrollado aún un desorden, tal como desórdenes cardiacos (por ejemplo, arritmia cardiaca inducida por ejercicio) . En otra incorporación de la presente invención, el sujeto requiere el tratamiento para un desorden incluyendo un desorden cardiaco.
Varios desórdenes que pueden evitar o tratar los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a desórdenes cardiacos y enfermedades cardiacas, desórdenes y enfermedades esqueleto musculares, desórdenes y enfermedades del conocimiento, hipertermia maligna, diabetes y síndrome de la muerte de infante repentina. Los desórdenes y enfermedades cardiacos incluyen, pero no se limitan a desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular; desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio; muerte cardiaca repentina; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; y presión de sangre superior. Los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregulares incluyen y los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio incluyen, pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular; la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia articular y ventricular; la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y las variantes inducidas por ejercicio de las mismas. Los desórdenes y enfermedades músculo esqueletos incluyen, pero no se limitan a la fatiga de músculo esqueleto, la fatiga de músculo esqueleto inducida por ejercicio, la distrofia muscular, los desórdenes de la vejiga y la incontinencia. Los desórdenes del conocimiento y las enfermedades incluyen, pero no se limitan a la enfermedad de alzheimer, o formas de pérdida de memoria y a pérdidas de memoria dependiente de la edad. Un experto en el arte reconocerá que aún otros usos, incluyendo pero no limitándose a los desórdenes musculares y cardiacos que son útiles de tratar los compuestos de la invención, de acuerdo con la invención se proporcionan aqui.
La cantidad de compuestos de la invención efectiva para limitar o evitar una disminución en el nivel de FKBP 12.6 unido RyR2 en el sujeto es una cantidad efectiva para evitar la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en el sujeto. La arritmia cardiaca es una perturbación de la actividad eléctrica del corazón que se manifiesta como una anormalidad en la tasa del corazón o el ritmo del corazón. Como se usó aqui, una cantidad de compuestos de la invención "efectiva para evitar la arritmia cardiaca inducida por ejercicio" incluye una cantidad de los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, efectiva para evitar el desarrollo del perjuicio o síntomas clínicos de la arritmia cardiaca inducida por ejercicio (por ejemplo palpitaciones, desmayo, fibrilación ventricular, taquicardia ventricular y muerte cardiaca repentina. La cantidad de los compuestos efectiva para evitar la arritmia cardiaca inducida por ejerció en el sujeto variará dependiendo de los factores particulares de cada caso, incluyendo el tipo de arritmia cardiaca inducida por ejercicio, el peso del sujeto, la severidad de la condición del sujeto, y el modo de administración de los compuestos. Esta cantidad es fácilmente determinada por un artesano experto, con base en procedimientos conocidos, incluyendo ensayos clínicos, y métodos descritos aqui. En una incorporación, la cantidad de los compuestos de la invención efectiva para evitar la arritmia cardiaca inducida por ejercicio es una cantidad efectiva para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en el sujeto. En otra incorporación, los compuestos de la invención evitan la arritmia cardiaca inducida por ejercicio y la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en el sujeto.
Debido a su habilidad para estabilizar el FKBP unido de RyR y mantener y restaurar el balance en el contexto de la fosforilación PKA dinámica y la desfosforilación de RyR, los compuestos de la invención son útiles para tratar a un sujeto que ya ha experimentado síntomas clínicos de éstos varios desórdenes. Por ejemplo, si los síntomas del desorden son observados en el sujeto en forma suficientemente temprana, los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I_k, 1-1, o I-m, son efectivos para limitar o evitar una disminución adicional en el nivel de FKBP unido RyR en el sujeto.
Adicionalmente, el sujeto de la presente invención es un candidato part. los desórdenes cardiacos inducidos por ejercicio, tal como la arritmia cardiaca inducida por ejercicio. La arritmia cardiaca inducida por ejercicio es una condición del corazón (por ejemplo una fibrilación ventricular o una taquicardia ventricular, incluyendo cualquiera que lleve a la muerte cardiaca repentina) que se desarrolla durante/después de que un sujeto ha subido un ejercicio físico. Un "candidato" para un desorden cardiaco inducido por ejercicio es un sujeto que se conoce, o se cree que está sospechoso de estar en riesgo de desarrollar un desorden cardiaco durante/después del ejerció físico. Los ejemplos de los candidatos para la arritmia cardiaca inducida por ejercicio incluyen, sin limitación, un animal/persona conocido por tener una taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; un animal/persona que se sospecha que tiene una taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica; y una persona/animal que se conoce o se cree que es sospechosa de estar en riesgo de desarrollar la arritmia cardiaca durante/después del ejercicio fisico, y quien está a punto de hacer ejercicio, está haciendo ejercicio actualmente o ha justo completado el ejercicio. Como se discutió anteriormente, la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica es un desorden heredado en los individuos con corazones estructuralmente normales. Esto se caracteriza por la taquicardia ventricular inducida por estrés-una arritmia letal que provoca una muerte cardiaca repentina. En los sujetos con taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica, el ejercicio fisico y/o el estrés inducen las taquicardias ventriculares bidireccionales y/o polimórficas que llevan a la muerte cardiaca repentina (SCD) en la ausencia de una enfermedad de corazón estructural detectada. Los individuos con taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica tienen arritmias ventriculares cuando se someten al ejercicio, pero no desarrollan arritmias en el descanso.
Por tanto, en aún otra incorporación de la presúmete invención, el sujeto se ha ejercitado, o esta haciendo ejercicio y ha desarrollad un desorden inducido por ejercicio. En este caso, la cantidad de los compuestos de la invención efectiva para limitar o evitar una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en el sujeto es una cantidad de compuesto efectiva para tratar el desorden inducido por ejercicio en el sujeto. Como se usó aqui, una cantidad de compuestos de la invención "efectivo para tratar un desorden inducido por ejercicio" incluye una cantidad de un compuesto de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, efectivo para aliviar o aminorar el perjuicio o síntomas clínicos del desorden inducido por ejercicio (por ejemplo en el caso de arritmia cardiaca, palpitaciones, desmayos, fibrilación ventricular, taquicardia ventricular y muerte cardiaca repentina) . La cantidad de los compuestos de la invención efectiva para tratar un desorden inducido por ejercicio en el sujeto variará dependiendo de los factores particulares de cada caso, incluyendo el tipo de desorden inducido por ejercicio, el peso del sujeto, la severidad de la condición del sujeto, y el modo de administración de los compuestos. Esta cantidad es fácilmente determinada por el artesano experto, con base en procedimientos conocidos, incluyendo ensayos clínicos, y método descritos aqui. En una incorporación, los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, tratan los desórdenes inducidos por ejercicio en el sujeto.
La presente invención además proporciona un método para tratar los desórdenes inducidos por ejercicio en un sujeto. El método comprende administrar los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, al sujeto en una cantidad efectiva para tratar el desorden inducido por ejercicio en el sujeto. Una cantidad adecuada de los compuestos efectiva para tratar, por ejemplo, la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en el sujeto varia de desde alrededor de 5 miligramos/kilogramo/dia a alrededor de 20 miligramos/kilogramo/dia y/o es una cantidad suficiente para lograr niveles de plasma variando de desde alrededor de 300 ng/ml a alrededor de 1,000 ng/ml. La presente invención también proporciona un método para evitar un desorden inducido por ejercicio en un sujeto. El método comprende administrar los compuestos de la invención al sujeto en una cantidad efectiva para evitar el desorden inducido por ejercicio en el sujeto. Una cantidad adecuada de los compuestos de la invención efectiva para evitar el desorden inducido por ejercicio en el sujeto varia de desde alrededor de 5 mg/kg/dia a alrededor de 20 mg/kg/dia y/o es una cantidad suficiente para lograr niveles de plasma variando de desde alrededor de 300 ng/ml a alrededor de 1,000 ng/ml. Adicionalmente, la presente invención proporciona un método para evitar los desórdenes inducidos por ejerció en un sujeto. El método comprende administrar los compuestos de la invención al sujeto en una cantidad efectiva para evitar un desorden inducido por ejercicio en el sujeto. Una cantidad adecuada de los compuestos de la invención efectiva para evitar un desorden inducido por ejercicio en el sujeto varia de desde alrededor de 5 mg/kg/dia a alrededor de 20 mg/kg/dia, y/o es una cantidad suficiente para lograr niveles de plasma variando de desde alrededor de 300 ng/ml a alrededor de 1,000 ng/ml.
Adicionalmente, los compuestos evitan los desórdenes de latido de corazón irregular en los sujetos con defectos heterozigos en el gen FKBP 12.6.
Los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, pueden ser usados solos, en combinación unos con otros, o en combinación con otros agentes que tienen una actividad cardiovascular incluyendo, pero no limitándose a diuréticos, anticoagulantes, agentes antiplaquetas, antiarritmicos, agentes inotrópicos, agentes cronotrópicos, bloqueadores a y ß, inhibidores angiotensin y vasodilatadores. Además, tales combinaciones de los compuestos de la presente invención y otros agentes cardiovasculares son administrados separadamente o en conjunción. Además, la administración de un elemento de la combinación es anterior a, concurrente o subsecuente a la administración de otros agentes.
En varias incorporaciones de los métodos antes descritos, la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en el sujeto está asociada con la taquicardia ventricular. En algunas incorporaciones la taquicardia ventricular es taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica. En otras incorporaciones de éstos métodos, el sujeto es un candidato para la arritmia cardiaca inducida por ejercicio, incluyendo candidatos para la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio.
En vista de los métodos anteriores, la presente invención también proporciona el uso de los compuestos de la invención en un método para limitar o evitar un desorden en el nivel de FKBP unido RyR en un sujeto quien es candidato para un desorden. La presente invención también proporciona el uso de los compuestos de la invención en un método para tratar o evitar un desorden muscular en un sujeto. Además, la presente invención proporciona el uso de los compuestos de la invención en un método para evitar el tratamiento o evitar los desordenes musculares inducidos por ejercicio en un sujeto.
De acuerdo por tanto, la presente invención además proporciona un método para ensayar los efectos de los compuestos de la invención para evitar desórdenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR. El método comprende los pasos de: (a) obtener o generar un cultivo de células conteniendo RyR; (b) poner en contacto las células con uno o más de los compuestos de la invención; (c) exponer las células a una o más condiciones conocidas porque aumenta la fosforilación del RyR en las células; y (d) determinar si uno más compuestos de la invención limitan o evitan una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en las células. Como se usó aqui, una célula "conteniendo RyR" es una célula en la cual el RyR, incluye RyRl, RyR2, y RyR3, o un derivado u homólogo de los mismos, es naturalmente expresado o bien ocurre naturalmente. Las condiciones conocidas por que aumentan la fosforilación de RyR en las células incluye, sin limitación, PKA.
En el método de la presente invención, las células son puestas en contacto con uno o más de los compuestos de la invención por cualquiera de los métodos estándar para efectuar el contacto entre las drogas/agentes y células, incluyendo cualquier modos de introducción y administración descritos aqui. El nivel de FKBP unido RyR en la célula es medido es detectado por procedimientos conocidos, incluyendo cualquiera de los métodos, procedimientos moleculares y ensayos conocidos por un experto en el arte o descritos aqui. En una incorporación de la presente invención, el uno o más compuestos de la invención 15 limita o evita una disminución en el nivel de FKB unido RyR en las células.
El RyR, incluyendo RyRl, RyR2 y RyR3, se han implicado en número de eventos biológicos en las células. Por ejemplo, se ha mostrado que los canales RyR2 juegan un papel importante en el acoplamiento de EC y la contracción en las células de músculo cardiaco. Por tanto, es claro que las drogas preventivas diseñadas para limitar o evitar una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en las células, particularmente el FKBP 12.6 unido RyR2 en las células de músculo cardiaco son útiles en la regulación de un número de eventos biológicos asociados RyR, incluyendo la contracción y acoplamiento EC. Por tanto, el uno o más compuestos de la invención son evaluados para los efectos sobre el acoplamiento y la contracción EC en las células, particularmente las células de músculo cardiaco, y por tanto, útiles para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio.
Por tanto, el método de la presente invención además comprende los pasos de poner en contacto uno o más compuestos con un cultivo de células que contiene RyR; y determinar si uno o más compuestos tiene un efecto sobre un evento biológico asociado con RyR en las células. Como se usó aqui, un "evento biológico asociado con RyR" incluye un proceso bioquímico o fisiológico en el cual los niveles de RyR o la actividad se han implicado. Como se discutió aqui, los ejemplos de los eventos biológicos asociados con RyR incluyen, sin limitación, el acoplamiento y la contracción EC en las células de músculo cardiaco. De acuerdo a éste método de la presente invención, el uno o más compuestos son puestos en contacto con una o más células (tal como las células de músculo cardiaco) in Vitro. Por ejemplo, un cultivo de las células es incubado con una preparación que contiene uno o más compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1, o I-m. El efecto de los compuestos sobre el evento biológico asociado con RyR entonces es evaluado por cualquier ensayos o métodos biológicos conocidos en el arte, incluyendo los registros de canal único, el inmunomanchado y cualquier otros descritos aqui.
La presente invención está además dirigida a uno o más compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j I-k, 1-1, o I-m, identificadas por el método de identificación descrito arriba, asi como la composición farmacéutica que comprende el compuesto y un portador y/o diluente farmacéuticamente aceptable. Los compuestos son útiles para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en un sujeto, y para tratar o evitar otras condiciones asociadas con RyR. Como se usó aqui, una "condición asociada RyR" es una condición, enfermedad o desorden en la cual el nivel de RyR o la actividad se implicado e incluye un evento biológico asociado con RyR. La condición asociada RyR es tratada o evitada en el sujeto mediante el administrar al sujeto una cantidad del compuesto efectiva para tratar o evitar la condición asociada RyR en el sujeto. Esta cantidad es fácilmente determinada por un experto en el arte. En una incorporación, la presente invención proporciona un método para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en un sujeto, mediante el administrar el uno o más compuestos de la invención al sujeto en una cantidad efectiva para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en el sujeto.
La presente invención también proporciona un método en vivo para ensayar la efectividad de los compuestos de la invención para evitar desórdenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR. El método comprende los pasos de: (a) obtener o generar un animal conteniendo RyR; (b) administrar uno o más de los compuestos de la invención al animal; (c) exponer al animal a una o más condiciones conocidas porque aumentan la fosforilación de RyR en las células; y (d) determinar la extensión de los limites del compuesto o evitar una disminución en el nivel de FKBP unido RyR en el animal. El método además comprende los pasos de: (e) administrar uno o más de los compuestos de la invención a un animal conteniendo RyR; y (f) determinar la extensión del efecto del compuesto sobre un evento biológico asociado RyR en el animal. También se proporciona una composición farmacéutica que comprende ese compuesto; y un método para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en un sujeto, mediante el administrar ese compuesto al sujeto en una cantidad efectiva para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en el sujeto.
Se ha demostrado que los compuestos los cuales bloquean la activación PKA pueden ser esperados que reduzcan la activación del canal RyR, resultando en menos liberación de calcio dentro de la célula. Los compuestos que aglutinan al canal RyR en el sitio de unión FKBP, pero que no salen fuera del canal cuando el canal es fosforilatado por PK. También se esperarla que disminuyera la actividad del canal en respuesta a la activación PK u otros disparadores que activan el canal RyR. Tales compuestos también resultarán en menos liberación de calcio adentro de la célula.
Por via de ejemplo, los ensayos de diagnóstico exploran la liberación de calcio adentro de las células a través del canal RyR, usando tintes fluorescentes sensibles al calcio (por ejemplo, fluo-3, fura-2, y similares) . Las células son cargadas con el tinte de elección fluorescente, entonces se simulan con activadores RyR para determinar la reducción de la señal fluorescente dependiente de calcio (Brillantes y otros, estabilización de la función de canal de liberación de calcio (receptor ryanodina) por proteina de unión FK506. Célula 77:513-23, 1994; Gillo y otros, entrada de calcio durante diferenciación inducida en células eritroleucemia de murido. Sangre, 81:783-92, 1993; Jayaraman y otros, regulación de inositol 1, 4, 5-receptor trifosfato mediante fosforilación tirosina. Ciencia (272:1492-94, 1996). Las señales fluorescentes dependiendo de calcio son vigiladas con un tubo de fotomultiplicador, y se analizan con un software apropiado. Este ensayo puede ser fácilmente automatizado para explorar los compuestos de la invención usando platos de pozos múltiples.
Para demostrar que los compuestos para inhibir la activación dependiente de PK de la liberación de calcio intracelular mediada RyR, cualquier ensayo involucra la expresión de canales RyR recombinantes en u sistema de expresión heterologo, tal como Sf9, HEK293, o células CHO. El RyR también puede ser expresado conjuntamente con receptores beta-adrenégicos. Esto permitirá la evaluación del efecto de los compuestos de la invención sobre la activación RyR, en respuesta a la adición de los agonistas receptores beta-adrenégicos .
Nivel de fosforilación PK de RyR2 el cual se correlaciona con el grado de falla de corazón también está ensayado y entonces usado para determinar la eficacia de uno o más compuestos de la invención para bloquear la fosforilación PKA del canal RyR2. Tal ensayo está basado sobre el uso de anticuerpos que son específicos para la proteina RyR2. Por ejemplo, la proteina de canal RyR2 es inmunoprecipitada y después fosforilatada de regreso con PK y [gamma32P] -ATP. La cantidad de etiqueta [32P] radiactiva es transferida a la proteina RyR2 entonces es medida usando un fosforimaginador (Marx y otros, la fosforilación PKA diasocia FKBP12.6 de canal de liberación de calcio (receptor rianodina) : regulación defectuosa en corazones que fallan. Célula, 101:365-76, 2000).
Otro ensayo de los compuestos de la invención involucra el uso de un anticuerpo especifico-fosfoepitope que detecta el RyRl que es PKA fosforilatado sobre Ser 2843 o RyR2 que es PKA fosforilatado sobre Ser 2809. El inmunomanchado con tal anticuerpo puede ser usado para evaluar la eficacia de estos compuestos para la terapia para la falla de corazón y las arritmias cardiacas. Adicionalmente, son usados los ratones RyR2 S2809A y RyR2 S2809D para evaluar la eficacia de la terapia para la falla de corazón y las arritmias cardiacas. Tales ratones además proporcionan la evidencia de que la PKA hiperfosforilación de RyR2 es un factor contribuyente en la falla de corazón y las arritmias cardiacas mediante el mostrar que la mutación RyR2 S2809 inhibe la falla de corazón y las arritmias, y que la mutación RyR2 S2809D empeora la falla de corazón y las arritmias.
Por tanto, en una incorporación especifica, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de la falla de corazón, la fibrilación auricular o la arritmia cardiaca inducida por ejercicio, comprendiendo el administrar a un animal en necesidad del mismo, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto seleccionado de los compuestos de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m.
El filtrado de calcio intracelular es propuesto como un mediador principal del desempeño de músculo deprimido y de la remodelación de músculo distrofico. Las distrofias musculares son enfermedades hereditarias heterogéneas caracterizadas por la debilidad y desperdicio de músculo progresivo. De todas las formas de atrofias musculares, involucrando el complejo de proteínas usado con la distrofia (mencionado aqui como distrofinopatia) , la distrofia muscular Duchenne (DMD) es una de las enfermedades genéticas más frecuentes (X-enlazada; 1 en 3,500 niños) con la muerte usualmente ocurriendo antes de los 30 años de edad por falla respiratoria y/o cardiaca en números altos de los pacientes. La distrofia muscular Becker (BMD) representa una forma más suave de la enfermedad asociada con una reducción en la cantidad o expresión de una forma truncada de la proteina distrofina mientras que los pacientes Duchenne se han caracterizado por una ausencia completa o niveles muy bajos de distrofina. La distrofia muscular Becker y Duchenne (DMD/BMD) son causadas por las mutaciones en el gen codificando la distrofina proteínas citoesqueleta 427-kDa. Sin embargo, con el aumento de la edad en los síntomas cardiacos BMD son más comunes que en los pacientes DMD y no se correlacionan con los síntomas de músculo esqueleto. Dado que el análisis genético no elimina DMD debido a la alta incidencia de casos esporádicos, una terapia efectiva es altamente deseable. El DMD/BMD se ha asociado consistentemente con el metabolismo de calcio en la célula perturbado. Debido a las alteraciones de las concentraciones de calcio intracelular en las miofibras DMD se cree que representa un mecanismo patogénico central, el desarrollo de una intervención terapéutica que evita las anormalidades de calcio intracelular como una causa de la degeneración de músculo esqueleto es altamente deseable.
Esta muy establecido que la falta de expresión de distrofina es el defecto genético primario en DMD y BMD. Sin embargo, el mecanismo clave que lleva al daño de músculo progresivo es largamente desconocido. Se ha sugerido que las elevaciones en concentraciones de calcio intracelular ([Ca2+]i) bajo condiciones de descanso directamente contribuye al daño de célula (miofibra) de músculo tóxico y la activación concurrente de las proteasas dependientes de calcio Ca2+. Dado que la actividad de calpaina es aumentada en las fibras de músculo necróticas de ratones mdx y la disfunción de calpaina contribuye a la distrofia muscular de faja-miembro, la activación preventiva de las proteasas dependientes de calcio mediante el inhibir las elevaciones de calcio intracelular representa una estrategia para evitar el desperdicio del músculo en DMD. Los aumentos significantes en [Ca2+] i entre los músculos normales y distróficos se han reportado en miotubos y modelos animales incluyendo el ratón mdx deficiente de distrofina. Las elevaciones de calcio intracelulares evitan mediante la administración de una composición farmacéutica comprendiendo un compuesto de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m.
La presente invención también proporciona un método de diagnosis de una enfermedad o desorden en un sujeto, dicho método comprende: obtener una muestra de célula o tejido de un sujeto; obtener el ADN de la célula o tejido; comparar el ADN de la célula o tejido con el ADN de control codificando RyR para determinar si una mutación está presente en ADN de la célula o tejido, la presencia de una mutación indicando una enfermedad o desorden. En una incorporación, la mutación es una mutación RyR2 sobre el cromosoma Iq42-q43. En otra incorporación, la mutación es una o más mutaciones de taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica. En otra incorporación, la mutación puede ser una mutación que esta presente en el ADN codificando RyR2 del sujeto SIDS. El método de diagnóstico es usado para detectar la presencia de una enfermedad o desorden en un adulto, un niño o un feto. La enfermedad y desorden incluye, pero no se limita a desórdenes y enfermedades cardiacas, desórdenes y enfermedades esqueleto musculares, desórdenes del conocimiento y enfermedades del conocimiento, hipertermia maligna, diabetes y síndrome de muerte infantil repentina. El desorden cardiaco y la enfermedad incluyen, pero no se limitan a desórdenes y enfermedades de la fibra de corazón irregular; desórdenes de latido de corazón irregular inducido por ejercicio y enfermedades; muerte cardiaca repentina; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstruyente crónica; y presión de sangre alta. Los desórdenes de latido de corazón irregular y las enfermedades incluyen y los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular indicios por ejercicio incluyen, pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular, la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia auricular y ventricular; y la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y las variantes inducidas por ejercicio de las mismas. El desorden músculo esqueleto y las enfermedades incluyen, pero no se limitan a la fatiga músculo esquelético, la fatiga de músculo esqueleto inducida por ejercicio, la distrofia muscular, los desórdenes de vejiga y la incontinencia. Los desórdenes y enfermedades del conocimiento incluyen, pero no se limitan a la enfermedad de Alzheimer, a las formas de pérdida de memoria y a la pérdida de memoria dependiente de la edad.
La presente invención además proporciona un método de diagnóstico de desórdenes y enfermedades en un sujeto, dicho método comprende: obtener una muestra de células o tejido del sujeto; incubar las células o muestra de tejido con el compuesto de la invención bajo condiciones las cuales aumentan la fosforilación de RyR a las células; determinar (a) si RyR esta unido a casltabin (por ejemplo, RyRl unido a calstabin 1, RyR2 unido a calstabin 2 o RyR3 unido a calstabin 1) es aumentado en la células o tejido en comparación a RyR unido a calstabin en las células o tejidos de control dichas células o tejidos de control careciendo de canales de calcio RyR mutantes, o (b) si una disminución en la liberación de calcio ocurre en los canales RyR en comparación a una falta de disminución en la liberación de calcio a las células de control; un aumento en calstabin unido-RyR en (a) indicando un desorden o enfermedad en el sujeto o una disminución en la liberación de calcio en los canales RyR en (b) comparado a las células de control indicando una enfermedad o desorden cardiaco en el sujeto. El método de diagnóstico es usado para detectar la presencia de una enfermedad o desorden en un adulto como un niño o un feto. El desorden y la enfermedad incluye, pero no se limitan a desordenes y enfermedades cardiacas, desordenes y enfermedades esqueleto musculares, desordenes del conocimiento y enfermedades, hipertermia maligna, diabetes, y síndrome de muerte infantil repentina. Los desórdenes y enfermedades cardiacas incluyen, pero no se limitan a desórdenes de latido de corazón irregular y enfermedades; desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidas por ejercicio; muerte cardiaca repentina; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstruyente crónica; y presión de sangre alta. Los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular incluyen desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio incluyen, pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular; la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia auricular y ventricular; la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y las variantes inducidas por ejercicio de las mismas. Los desórdenes y enfermedades músculo esqueletos incluyen, pero no se limitan a la fatiga de músculo esqueleto, la fatiga de músculo esqueleto inducida por ejercicio, la distrofia muscular, los desórdenes de la vejiga y la incontinencia. Los desórdenes del conocimiento y las enfermedades incluyen, pero no se limitan a la enfermedad de alzheimer, o formas de pérdida de memoria y a pérdidas de memoria dependiente de la edad.
La presente invención además proporciona un método de diagnóstico de un desorden o enfermedad cardiaca en un sujeto, dicho método comprende: obtener células o muestras de tejido cardiaco de un sujeto; incubar las células o muestra de tejido cardiaco con el compuesto de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I_h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, bajo condiciones las cuales aumentan la fosforilación de RyR2 en las células; determinar (a) si RyR2 unido a casltabin 2 es incrementado en las células o tejido en comparación a RyR2 unido a calstabin 2 en las células de control o en los tejidos dichas células de control o tejidos careciendo de canales de calcio RyR2 mutantes, o (b) si una disminución en la liberación de calcio ocurre en los canales RyR2 en comparación a una falta de disminución en la liberación de calcio en las células de control; un aumento en calstabin 2 unido-RyR2 en (a) indicando un desorden o enfermedad en el sujeto o una disminución en la liberación de calcio en los canales RyR2 en (b) comparado a las células de control indicando una enfermedad o desorden cardiaco en el sujeto. El método proporcionado es usado para diagnosticar la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica. El método proporcionado también es usado para diagnosticar el síndrome de muerte infantil repentina (SIDS) . El método proporcionado adicionalmente es usado para diagnosticar los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular cardiacos; los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidas por ejercicio; la muerte cardiaca repentina; la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; la falla de corazón congestiva; la enfermedad pulmonar obstruyente crónica; y la presión de sangre alta. Los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregulares incluyen y los desórdenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducido por ejercicio incluyen, pero no se limitan a la arritmia auricular y ventricular; la fibrilación auricular y ventricular; la taquiarritmia auricular y ventricular; la taquicardia auricular y ventricular; la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; y las variantes inducidas por ejercicio de las mismas.
En adición, a los usos terapéuticos antes mencionados, los compuestos de la invención también son útiles en los ensayos de diagnóstico, ensayos de examen u las herramientas de investigación.
Métodos de Sintesis La presente invención, proporciona en un aspecto, procesos para la preparación de un compuesto de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1, o I-m, y las sales, sorbatos, hidratos, complejos y pro-drogas de los mismos y las sales farmacéuticamente aceptables de tales prodrogas. Más particularmente, la presente invención proporciona procesos para la preparación de compuestos seleccionados del grupo que consiste de SI, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S9, Sil, S12, S13, S14, S19, S20, S22, S23, S26, S36, S37, S38, S40, S43, S44, S45, S46, S47, S48, S49, S50, S51, S52, S53, S54, S55, S56, S57, S58, S59, S60, S61, S62, S63, S64, S66, S67, S69, S70, S72, S73, S74, S75, S76, S77, S78, S79, S80, S81, S82, S83, S84, S85, S86, S87, S88, S89, S90, S91, S92, S93, S94, S95, S96, S97, S98, S99, SlOO, S101, S102, S103, S104, S105, S107, A108, A109, A110, Slll, S112, S113, S114, S115, S116, S117, S118, S119, S120, S121, S122, Y S123, y sales, sorbatos, hidratos, complejos y pro-drogas de los mismos y las sales farmacéuticamente aceptables de tales pro-drogas. Las varias rutas sintéticas a los compuestos están descritas aqui.
Algunas de las siguientes sintesis utilizan solventes. En una incorporación, el solvente es un solvente orgánico. En otra incorporación, el solvente orgánico es cloruro de metileno (CH2C12) , cloroformo (CC14) , formaldehido (CH20) o metanol (CH3P0H) . Algunas de las siguientes sintesis también utilizan un catalizador de base. En una incorporación, el catalizador de base es un compuesto de amina. En otra incorporación, el catalizador de base es una alquil amina tal como trietilamina (TEA) . En aún otra incorporación, el catalizador de base es piridina. Algunas de las siguientes sintesis también utilizan soluciones básicas. En una incorporación, la solución básica es bicarbonato de sodio o carbonato de calcio. En otra incorporación, la solución básica es bicarbonato de sodio saturado o carbonato de calcio saturado. Algunas de las sintesis usan soluciones acidicas . En una incorporación, la solución acidica es una solución de ácido sulfúrico, una solución de ácido hidroclórico, o una solución de ácido nítrico. En una incorporación, la solución es N HCl. Un experto en el arte apreciará aún otros solventes, solventes orgánicos, catalizadores de base, soluciones básicas, y soluciones acidicas que son usadas en las incorporaciones de acuerdo a la descripción dada aqui. Los solventes, los solventes orgánicos, los reactivos, catalizadores, soluciones de lavado y otros se agregan a temperaturas apropiadas (por ejemplo la temperatura ambiente o alrededor de 20° C-25° C, a 0o C, etc. ) .
Algunas de las siguientes sintesis utilizan el compuesto S68 como un material de inicio. El S68 está disponible comercialmente de MicroChemistry Limited (de Moscú, Rusia). También vea WO 01/55118 para la preparación de S68.
Varias de las siguientes sintesis usan S26 como un material de inicio. El S26 es sintetizado como un intermedio en la sintesis de S3, S4, S5 y S54, como se ilustró en el esquema 1 en el ejemplo 4. Los métodos para sintetizar S26 también están descritos en la solicitud de patente de los Estados Unidos de América No. 10/680,988.
Algunas de las siguientes sintesis requieren purificación de la mezcla de reacción para dar un punto final. La purificación de la mezcla de reacción involucra uno o más procesos tal como la remoción de cualquier solvente, la cristalización del producto, la separación cromatografía del producto (incluyendo HPLC, cromatografía de gel de sílice, cromatografía de columna y otros) , el lavado con solución básica, el lavado con solución acidica, la redisolución del producto en otro solvente y otros. Un experto en el arte apreciará aún otros procesos que son usados en las incorporaciones, de acuerdo a la descripción dada aqui.
Las reacciones son llevadas a cabo como se requiera (por ejemplo, una hora, varias horas, durante la noche, 24 horas, etc.) para obtener los rendimientos . deseados u óptimos de los compuestos deseados. Frecuentemente, las mezclas de reacción son agitadas. Las reacciones son llevadas a cabo a temperaturas apropiadas (por ejemplo, a la temperatura ambiente o alrededor de 20° C-25°C, 0o C, 100°C, te).
El Synthon S26 es preparado de acuerdo a los métodos descritos en la solicitud de patente de los Estados Unidos de América No. 10/680,988.
El S3, S4, S5, y S54 son preparados de S26. El S26 es reaccionado con RS02C1, en donde R es CH2=CH-(S3), Me- (S4), p-Me-C6H4- (S5) , o NH-2-Py (S54), para formar un producto. El producto es purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna, para dar S3, S4, S5, o S54. En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico CH2C12, de manera que una mezcla de reacción es formada, y el solvente es removido de la mezcla de reacción antes o durante la purificación del producto. Si es necesario, un catalizador base, tal como la trietilamina, es usada en la sintesis. También, los lavados básicos (por ejemplo, bicarbonato de sodio saturado) y los lavados acidicos (por ejemplo ÍN HCl) son usados si es necesario para purificar la mezcla de reacción y/o producto, y sin acompañados por el secado, por ejemplo sobre sulfato de sodio si se requiere. La cromatografía de columna por ejemplo, es usada para purificar el residuo para aislar el producto deseado.
SI y S2 son preparados de S3 por la reacción con HNR?R2, en donde R es (SI) o NBu2 (S2) . El producto es purificado, por ejemplo, por cromatografía de columna, para dar SI o S2. En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente tal como un solvente orgánico como CH2C12, de manera que la mezcla de reacción es formada, y el solvente es removido de la mezcla de reacción antes o durante la purificación del producto. La cromatografía de columna, por ejemplo, es usada para purificar el residuo para aislar el producto deseado.
S7, S9, S27 y S40 son preparados de S26 por la reacción con un alcohol de la fórmula RCOX, en donde X es Cl o NHS y R es ICH2- (S7)m Ph- (S9) , CH2=CH- (S27)m o 4-N3-2-OH-C6H5 (S40). En una incorporación, la mezcla de reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico como CH2C12, de manera que la mezcla de reacción es formada, y el solvente es removido de la mezcla de reacción antes o durante la purificación del producto. Si es necesario, un catalizador de base, tal como trietilamina se usa en la sintesis. También, los lavados básicos (por ejemplo, bicarbonato de sodio saturado) y acidicos (por ejemplo, ÍN HCl) son usados si se requiere para purificar la mezcla de reacción y/o el producto, y son acompañados por el secado si se requiere. En otra incorporación, S40 es formado por la reacción con un alcohol de la fórmula RCOX, en donde R es 4-N3-2-OH-C6H5 y X es NHS. La cromatografía de columna, por ejemplo, es usada para purificar el residuo para aislar el producto deseado.
Sil y S12 son preparados de S26 por la reacción con un compuesto de la fórmula C5H4 NCX, en donde X es O (Sil) o S (S12) . En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente tal como un solvente orgánico como CH2C12, de manera que la mezcla de reacción es formada, y el solvente es removido de la mezcla de reacción antes o durante la purificación del producto. Si es necesario, un catalizador base, tal como trietilamina o piridina como se usa en la sintesis. En otra incorporación, un catalizador base tal como piridina es usado como el solvente en el cual la reacción tiene lugar, y el solvente adicional, tal como etilen acetato u otro solvente orgánico apropiado es agregado después de que ocurre la reacción. También, los lavados básico (por ejemplo, bicarbonatos de sodio saturados) y acidico (por ejemplo, ÍN HCl) son usados si se requiere para purificar la mezcla de reacción y/o el producto, y son acompañados por el secado si se requiere. La cromatografía de columna, por ejemplo es usada para purificar el residuo para aislar el producto deseado.
Los isómeros S13 y S14 son preparados de S26 mediante la reacción con cloruro de fenil metoxifosfonilo (Ph (MeO) P (0) Cl) . En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. Si es necesario, un catalizador base tal como trietanolamina puede ser usado, por ejemplo, mediante el agregar a este una mezcla de reacción formada mediante el mezclado de reactivos en un solvente. También, la mezcla de reacción es lavada con solución básica, por ejemplo bicarbonato de sodio saturado si es necesario. Los isómeros son preparados y purificados, por ejemplo, usando cromatografía de gel de silice. 519 y 22 son preparados de S26 por la reacción con un compuesto de la fórmula ClOC-X-CoCl, en donde X es CH2C12 (S19) o ^x^ (S22) . En una incorporación, la reacción ocurre en la presencia de un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. Si es necesario, un catalizador de base tal como trietilanina es agregado a la mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos en un solvente. También, el ácido base (por ejemplo, bicarbonatos de sodio saturado) (por ejemplo, ÍN NH1) , y los lavados de agua son usados para remover los compuestos no deseados de la mezcla de reacción, si es necesario. 520 y S23 son preparados de un compuesto intermedio de la fórmula , en donde R es CH2=CH- (S20) o (S23) . El compuesto intermedio es tratado con H202. Si es necesario, el tiosulfato de sodio también es usado para tratar el intermedio. En una incorporación la reacción ocurre en la presencia de un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como metanol (CH30H) , formando una mezcla de reacción. El solvente es removido de la mezcla de reacción después de que tiene lugar la reacción, si se desea, el residuo es disuelto en otro solvente, tal como un solvente orgánico, tal como etil acetato. La mezcla de reacción es lavada con la solución básica (por ejemplo, carbonato de sodio saturado) si se desea para remover los compuestos no deseados de la mezcla de reacción. La mezcla de reacción es secada (por ejemplo usando el sulfato de sodio) si esta es lavada con una solución básica. El residuo final es purificado, por ejemplo, por cromatografía de columna, para obtener el producto final.
S57 es preparado de S26 y metilo clorooxoacetato.
En una incorporación, la reacción ocurre en la presencia de un solvente, tal como un solvente orgánico tal como cloruro de metileno. Un catalizador de base tal como piridino es usado como sea necesario para facilitar o apurar la reacción. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y un solvente es lavada con la solución básica (por ejemplo, bicarbonato de sodio) , la solución acidica (por ejemplo HCl) y agua. La purificación tal como la cromatografía de gel silico da S57.
S36 es preparado de S57 por la reacción con hidróxido de sodio. En una incorporación, la reacción tiene lugar en un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como metanol. El solvente es removido de la mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente, formando por tanto el residuo. El residuo es disuelto en agua y lavado con otro solvente orgánico tal como éter, para remover los compuestos hidrofóbicos no deseados. La fase acuosa de los lavados básicos es acidificada y el producto es extraído del mismo usando un solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. La purificación adicional es usada si es necesario.
S38 es preparado en una manera similar a S36, excepto por un compuesto de la fórmula es usado como el material de inicio en la sintesis.
S44 es preparado mediante el tratar S36 con cloruro de tionilo para formar S36-C1 crudo. El cloruro de tionilo en exceso, si hay alguno, es removido de la mezcla de reacción. El S36-C1 crudo es entonces disuelto en un solvente, tal como un solvente orgánico como cloruro de metileno, y reaccionado con la cistamina mono-protegida (por ejemplo, mono-Boc protegido) . Un catalizador de base tal como piridina es usada si se desea, y la mezcla de reacción es enfriada como una solución básica (por ejemplo, bicarbonato de sodio saturado) . La mezcla de reacción formada por el mezclado de cistamina y de activos S36-C1 es purificada. Los grupos protectores (por ejemplo Boc) son removidos usando un ácido o lavado base apropiado (por ejemplo, ácido trifluoroacético en solvente orgánico en el caso del grupo protector Boc) . El producto final es entonces purificado, por ejemplo, usando técnicas de cromatografía .
S57 y S59 son preparados de S36-C1, el cual es reaccionado con metanol (S57) o etilamina (S59) .
S43 y S45 son preparados de S36-cistamina, la cual es preparada como se describió aqui. La cistamina S36 es reaccionada con el éster activado NHS de un compuesto azido apropiado para dar S43 y S45. La reacción tiene lugar en un solvente, tal como un solvente orgánico.
S37 es preparado de S26 por la reacción con 4-nitrofenilo cloroformiato (N02C6H5OCOCl) . La reacción tiene lugar en un solvente, y si se desea, un catalizador de base tal como trietilamina puede ser usado. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y un solvente es lavada con agua para remover los compuestos hidrofilicos no deseados. El solvente es removido de la mezcla de reacción para formar un residuo, el cual es purificado (por ejemplo usando técnicas de cromatografía) para dar S37.
S6, S46-53, S64, S66 y S67 son preparados de S37 por reacción una amina de la fórmula RNH2, en donde NR es NH2 (S46), NEt2 (S48), NHCH2Ph (S49) , NHOH (S51) , (S53), (S64), (S66),or (S67) La reacción tiene lugar en la presencia de un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como DMF. En una incorporación, solo un equivalente de amina es usado en la reacción. La purificación es lograda, por ejemplo por cromatografía de columna Si02.
S6, S46-53, S-64, S66 y S67 también son preparados de S25, con el intermedio S26-fosgeno. El intermedio S26-fosgeno es formado mediante el reaccionar S-26 con trifosgeno.
Después, el S26-fosgeno es reaccionado con la amina de la fórmula RNH2, en donde NR es NH2 (S46) , NEt2 (S48), NHCH2Ph (S64) (S67). La reacción tiene lugar en la presencia de un solvente, tal como un solvente orgánico. En una incorporación, solo un equivalente de amina es usado en la reacción. La purificación es lograda, por ejemplo por cromatografía de columna Si02.
S55, S56, S58, y S60-63 son preparados de S27 por la reacción con HNR?R2, en donde N lR2 (S60).
La reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico tal como cloroformo, formando por tanto una mezcla de reacción.
El solvente es removido de la mezcla de reacción para formar un residuo el cual es purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna de gel de sílice para dar el producto final.
S69-75 son preparados de S68, a través del intermedio S58-fosgeno. El S68 es tratado con trifosgeno para formar el intermedio, el cual a su vez es tratado con una amina RNH2, en donde NR es NH2 (S70) , NEt2 (S75) , NHOH (S74), (S72) (vS73). Lta reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como cloroformo, formando por tanto una mezcla de reacción. El solvente es removido de la mezcla de reacción para formar un residuo, el cual es purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna de sílice para dar el producto final.
S76 es preparado de S68 por la reacción con clorooxoacetato de metilo. En una incorporación, la reacción ocurre en la presencia de un solvente, tal como solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. Un catalizador base tal como piridina es usado como sea necesario para facilitar o apurar la reacción. La mezcla de reacción es formada mediante el mezclar los reactivos y un solvente es lavado con la solución básica (por ejemplo bicarbonato de sodio saturado) , solución acidica (por ejemplo HCl), y agua. La purificación tal como la cromatografía de gel silico da S76.
S77 es preparado de S76 por reacción con hidrógeno de sodio. En una incorporación, la reacción tiene lugar en un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como metanol. El solvente es removido de la mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente, formando por tanto un residuo. El residuo es disuelto en agua y lavado con otro solvente orgánico, tal como éter, para remover los compuestos hidrofóbicos no deseados. La fase acuosa de los lavados básicos es acidificada y el producto es extraído de los mismos usando un solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. La purificación adicional es usada si es necesario.
S78-S81 son preparados mediante el tratar S77 con cloruro tionilo para formar S77-C1. El cloruro de tionilo en exceso, si hay alguno, es removido de la mezcla de reacción. El S77-C1 crudo entonces es disuelto en un solvente, tal como un solvente orgánico como cloruro de metileno, y se reacciona con HX, en donde X es NHEt (S78), NHPh (S79) , NH2 (S80) , y NHCH2-piridina (S81) . El solvente es removido, y el residuo es purificado.
S82 es preparado de S68. S68 es reaccionado con CH2CHS02C1 en una manera análoga a la producción de S3. El producto entonces es tratado con HNR?R2 en una manera análoga a la producción de SI y S2, excepto que NR?NR2 es S83 es preparado de S68. S68 es reaccionado con RC0C1, en donde R es , en una manera análoga a la producción de S7, S9 y S40.
El S84 es preparado de S68 por la reacción con bromuro de bencilo. En una incorporación, la reacción tiene lugar en un solvente, tal como un solvente orgánico como cloruro de metileno. Un catalizador base tal como trietilamina es agregado como sea necesario para catalizar la reacción. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente es purificada para dar S84. 585 es preparado de S26. S26 es reaccionado con di-tert-butilo dicarbonato en un solvente, por ejemplo un solvente orgánico como cloruro de metileno. Un catalizador base tal como trietilamina también es usado, si es necesario. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente es lavada con una solución de bicarbonato de sodio saturado y la capa acuosa es extraída con solvente orgánico. Las capas orgánicas combinadas son secadas y el concentrado proporciona S85. 586 es preparado de S85 en un solvente, por ejemplo un solvente orgánico. S85 es tratado con BBr3 para formar una mezcla de reacción. Si es necesario, un catalizador base, tal como trietilamina, es usado en la reacción. La reacción es enfriada (por ejemplo, en el caso de trietilamina con metanol) y concentrada. La purificación, por ejemplo por cromatografía de columna, da S86. 587 es preparada mediante el reaccionar S86 con anhídrido de trifluorometilsulfonilo. La reacción es llevada a cabo en un solvente, tal como un solvente orgánico. Un catalizador base tal como trietilamina es agregada si es necesario. En el caso de trietilamina, la mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente es enfriada con agua, después de lo cual la capa acuosa es extraída con un solvente orgánico apropiado. Si se desea, las capas orgánicas con secadas (por ejemplo usando sulfato de magnesio) y las capas orgánicas son concentradas. La purificación de las capas orgánicas concentradas da S87. 588 es preparado de S87 por la reacción de morfolina, tris (dibencilidenoacetona) dipaladio (0) , 2-(di-tert-butilfosfino) -bifenilo, y fosfato de potasio. La mezcla de reacción es diluida con solvente, tal como cloruro de metileno u otro solvente orgánico apropiado, y lavado con agua. La capa acuosa, formada mediante el lavado con agua es extraída con el solvente orgánico, tal como cloruro de metileno. Las capas orgánicas son entonces secadas (por ejemplo sobre sulfato de magnesio) y concentradas. El residuo es purificado, por ejemplo mediante cromatografía de destello de gel de silice para dar S88. 589 es preparada de S87 por la reacción con bencenotiol y i-Pr2Net en un solvente, tal como CH3CN u otro solvente orgánico apropiado. Después de la reacción, un solvente orgánico tal como etil acetato es agregado a la mezcla de reacción. Si es necesario, la mezcla de reacción es lavada con uno o más de las soluciones acidica (por ejemplo HCl) , básica (por ejemplo NaOH), y agua. Después del secado (por ejemplo, con Na2S04) , la solución es concentrada. La purificación, por ejemplo mediante cromatografía, da S89. En una alternativa, el reflujo S87 con bencetiol en un solvente apropiado tal como dioxano con un catalizador tal como i-Pr2Net/Pd2(dba)3/xantphos da S89. 590 es preparado de S87 reaccionado con una base, ácido fenilborónico y un catalizador. En una incorporación, la base es K2C03 y el catalizador es (Pd(Ph3P)4). En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico, tal como dioxano. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente es diluida con un solvente (por ejemplo cloruro de metileno) y lavado con agua para remover los compuestos hidrofilicos no deseados. La concentración y la purificación del residuo da S90.
S92 es preparado de S87 reaccionado con cianido de zinc. En una incorporación, la reacción ocurre en un solvente, tal como un solvente orgánico como DMF. Un catalizador tal como Pd(Ph3P)4 también es usado para facilitar y apurar la reacción. La mezcla de reacción formada por el mezclado de los reactivos y el solvente, si es necesario, es diluida con agua de una solución acidica y extraída con un solvente orgánico. Los extractos orgánicos son entonces lavados usando una solución de sal, son secados, filtrados y concentrados. La purificación del residuo procede, por ejemplo mediante cromatografía de columna de gel de silice. 594 es preparada para S86 por la reacción con anhídrido acético. En una incorporación, la reacción tiene lugar en un solvente, tal como un solvente orgánico, como cloruro de metileno. La trietilamina u otro catalizador base es agregado si es necesario. El lavado con agua, seguido por el secado (por ejemplo usando sulfato de sodio) es usado como se desea. La purificación de los residuos da S94. 595 es preparado de S94 por la reacción con A1C13 anhidro, en un solvente si se desea. El solvente es un solvente orgánico como benceno. La mezcla de reacción es reflujada y enfriada sobre hielo. La extracción con solvente orgánico, la concentración y purificación del residuo da S95. 596 es preparado de S86 por iodinación. Por ejemplo, S86 es agregado a un solvente, tal como un solvente orgánico como metanol, con Nal en exceso y Chloramina-T. La mezcla de reacción es enfriada con solución de Na2S203. La concentración y purificación de residuo da S96 como una mezcla de producto mono-iodinatados y di-iodinatados . 597 es preparado de S86 por la reacción con ácido nítrico. S86 es protegido (por ejemplo usando los grupos de protección Boc) y agregados al ácido sulfúrico concentrado. El ácido nítrico es agregado a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción es enfriada y neutralizada (por ejemplo usando Na2C03) para enfriar la reacción. La extracción orgánica y la concentración subsecuente es usada para aislar el producto. La purificación da S97. 598 es preparado por hidrogenación de S97. Por ejemplo, S97 es agregado a una solución, tal como una solución orgánica como metanol. El gas H2 es burbujeado a través de la solución y el catalizador Pd/C u otro catalizador aplicable es agregado. La filtración para remover el catalizador y la purificación da S97.
SlOO es preparado de S98. S98 es disuelto en disolución acida tal como HCl acuoso. Esta solución de nitrito de sodio y entonces NaN3 en agua son agregados. La mezcla de reacción es extraída usando un solvente orgánico. Si se requiere, el extracto es lavado con la solución básica (por ejemplo, bicarbonato de sodio saturado) y agua. Las capas orgánicas de los lavados son secadas usando, por ejemplo, sulfato de sodio anhidro y concentrado para formar un residuo. El residuo es purificado para dar SlOO. Para preparar S99, NaN3 es sustituido con NaBF4 en una manera similar.
S101, S102 y S103 puede cada uno ser preparados de S68.
S101 puede ser preparado de S68 como sigue. El trifosgeno es reaccionado con S68 en la presencia de un solvente (tal como el diclorometano de solvente orgánico, CH2C12) para generar el fosgeno S68. Opcionalmente, una base también está presente o agregada al ácido de depuración generado durante la reacción. Cualquier base adecuada puede ser usada. Por ejemplo, las bases orgánicas tales como las aminas orgánicas como trietilamina, di-isopropiletilamina o piridina pueden ser usadas. Las bases inorgánicas tal como el bicarbonato de sodio pueden ser también usadas. Entonces, sin la necesidad de purificación, la mezcla de reacción conteniendo el fosgeno S68 es tratado con 1-piperonilpiperazina . Si es necesario, la mezcla de reacción es lavada como uno o más de soluciones acidica (por ejemplo HCl), básico (por ejemplo NaOH), y agua. Los solventes son removidos, por ejemplo bajo una presión reducida. El producto S101 puede ser entonces purificado, por ejemplo usando la cromatografía de columna Si02. 5102 puede ser preparado de S68 usando el mismo esquema para SlOl, con la excepción de que la piridina es usada en lugar del piperonilpiperazina. 5103 puede ser preparado de S68 usando el mismo esquema para SlOl, con la excepción de que N-Boc 1-piperazina es usado en lugar de piperonilpiperazina. También, el ácido trifluoroacético (TFA) es agregado para desproteger el grupo Boc. 5104 puede ser preparado mediante reaccionar S36 con el peróxido de hidrógeno (H202) en la presencia de un solvente (tal como MeOH) . Los solventes son removidos (por ejemplo bajo presión reducida) y el producto S104 puede entonces ser purificado, por ejemplo mediante recristalización. 5105 puede ser preparado de S68 como sigue. S68 es entonces reaccionado con CH30-C (0) C (O) Cl en la presencia de un solvente (tal como el diclorometano solvente orgánico (CH2C12) ) y opcionalmente un catalizador (tal como piridina) . Preferiblemente, el CH30-C (0) C (0) Cl debe ser agregado en forma de gotas. Si es necesario, la mezcla de reacción es lavada con uno o más de soluciones acidica (por ejemplo HCl), básica (por ejemplo NaOH), y agua. Los solventes son removidos y el producto puede además ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna Si02.
S107 puede ser preparado de S26 como sigue. A una solución de S26 en un solvente (tal como MeOH) , formaldehido (CH20) y cianoborohidrido de sodio (NaBCNH3) son agregados y se dejan reaccionar. Preferiblemente, la mezcla de reacción es mantenida a alrededor de un pH de 4-5, por ejemplo mediante la adición de unas cuantas gotas de ÍN HCl. Los solventes son entonces removidos, por ejemplo bajo presión reducida. Si es necesario, el residuo puede ser disuelto en etil acetato y lavado con uno o más de una solución básica (por ejemplo NaOH) , y agua. Los solventes pueden ser removidos y el producto puede ser además purificado, por ejemplo usando la cromatografía de columna Si02.
S108 puede ser preparado como sigue. Una mezcla de N-benziloxicarbonilo-glicina (Cbz-Gly, ) , diisopropilo-carbodiimida (DIC), y N-hidroxisuccinimida (NHS) son reaccionados juntos en un solvente (tal como diclorometano solvente orgánico (CH2C12) ) por una cantidad de tiempo adecuada. El S26 es entonces agregado a la mezcla y la reacción se deja proceder adicionalmente. Si es necesario, la mezcla de reacción es lavada con uno o más de las soluciones acidica (por ejemplo HCl) básica (por ejemplo NaOH), y agua. Los solventes pueden entonces ser removidos por ejemplo mediante evaporación.
El producto puede además ser purificado, por ejemplo usando la cromatografía de columna Si02.
S109 puede ser preparado de S108, como sigue. S108 en un solvente (tal como el diclorometano de solvente orgánico (CH2C12) ) es reaccionado con HBr/CH3C02H. Después de una cantidad de tiempo adecuada, la mezcla de reacción es evaporada, por ejemplo bajo presión reducida. El residuo es disuelto en un solvente adecuado, tal como MeOH, y es tratado con óxido de propileno. El solvente puede entonces ser removido, bajo presión reducida, para proporcionar S109 crudo. El SlOO puede además ser purificado, por ejemplo mediante disolución en una solución acidica (tal como HCl) , lavando con etil acetato y evaporación.
El SllO puede ser preparado como sigue. Una mezcla de S26, metilo 1-bromoacetato y piridina son reaccionados en DMF por una cantidad de tiempo adecuada. A esta mezcla, es agregado el etil acetato, si es necesario, la mezcla de reducción es lavada con una solución básica (por ejemplo NaHC03) o agua. El producto SllO, como un aceite, puede ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna Si02.
Slll puede ser preparado como sigue. Una base (tal como ÍN NaOH) es agregado a SllO en un solvente (tal como MeOH), y la mezcla se deja reaccionar por una cantidad de tiempo adecuada. Los solventes son entonces reávidos, bajo la presión reducida, y el residuo puede entonces ser disuelto en una solución acuosa tal como agua. La fase acuosa puede ser lavada con etil acetato y acidificada, por ejemplo con ÍN HCl, a un pH de alrededor de 4. Los solventes pueden entonces ser removidos, por ejemplo bajo presión reducida para producir Slll crudo. El NaCl puede ser removido usando un alcohol, tal como etanol para dar Slll puro como un sólido.
S112 puede ser preparado como sigue. A una mezcla de S26 y piridina en un solvente (tal como diclorometano de solvente orgánico (CH2C12) ) S02C12 es agregado con gotas a alrededor de 0°C y se reacciona por una cantidad de tiempo adecuada. Los solventes pueden ser removidos, por ejemplo bajo presión reducida. El residuo puede ser disuelto en una solución básica adecuada tal como NaOH. La solución acuosa puede entonces ser lavada con etil acetato, y acidificada (por ejemplo con ÍN NC1) a alrededor de un pH de 4. La fase acuosa puede ser extraída de nuevo con etil acetato y la fase de etil acetato puede ser evaporada, por ejemplo bajo una presión reducida, como para proporcionar S112, como un polvo.
S113, puede ser prepesado como sigue. S107 en etil acetato es tratado con CH3I. La mezcla es agitada por una cantidad de tiempo adecuada, y el producto S113, como un sólido blanco, es recolectado por filtrado. 5114 puede ser preparado como sigue. El compuesto S26, en un solvente tal como el solvente orgánico CH2C12 es idealmente enfriado alrededor de 0°C. A esta solución, es agregado el trifosfeno. Opcionalmente, está también presente una base o es agregada al ácido de depuración generado durante la reacción. Cualquier base adecuada puede ser usada. Por ejemplo, las bases orgánicas tal como las aminas orgánicas como trietilamina di-isopropiletilamina o piridina también pueden usarse. Las bases inorgánicas tal como el bicarbonato de sodio también puede ser usado. La reacción se deja proceder (idealmente a alrededor de 0°C) por una cantidad de tiempo adecuada (por ejemplo alrededor de 1 hora) . Sin la necesidad de la purificación, el S26-fosgeno resultante en la mezcla de reacción puede entonces ser tratado con N-Boc 1-piperazina, de nuevo idealmente a alrededor de 0°C, y la reacción se deja proceder (idealmente alrededor de 0°C) por una cantidad de tiempo adecuada (por ejemplo alrededor de 1 hora) . Si es necesario, la mezcla de reacción es lavada con una o más de las soluciones acidica (por ejemplo HCl) , básica (por ejemplo NaOH), y agua. Los solventes son removidos y el producto puede además ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna Si02. 5115 puede ser preparado como sigue. Una mezcla de S114 y de Reactivo Lawesson en tolueno es agitada alrededor de 90°C por varias horas. La mezcla es enfriada a temperatura ambiente y se lava con una base adecuada tal como NaHC03 saturada. El producto S115 puede ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía Si02.
S116 puede ser preparado como sigue. Una mezcla de S115 y de ácido trifluoroacético (TFA) en un solvente adecuado (tal como diclorometano solvente orgánico (CH2C12) ) es agitado a una temperatura ambiente por una cantidad de tiempo adecuada (por ejemplo alrededor de 2 horas). La evaporación de los solventes, por ejemplo bajo presión reducida produce S116. 5117 (S117) puede ser preparado como sigue. Una solución de S057 en un solvente adecuado (tal como el diclorometano de solvente orgánico (CH2C12) ) es enfriado a alrededor de -78°C. A esto, es agregado IM BBr3 un solvente adecuado (tal como diclorometano solvente orgánico (CH2C12) ) es agregado y la mezcla es agitada a alrededor de 78 °C por una cantidad de tiempo adecuada (por ejemplo alrededor de 3 horas) y después wSed a la temperatura ambiente. Si es necesario, la mezcla es lavada con un ácido (tal como ÍN HCl) y/o H20. Después de la remoción de los solventes, el producto S117 puede ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía de columna Si02. 5118 puede ser sintetizado como sigue. S26 en un solvente adecuado (tal como el diclorometano de solvente orgánico (CH2C12) ) es tratado con BODIPY TMR-X, SE (de Molecular Probes Inc.) para una cantidad adecuada de tiempo (por ejemplo alrededor de 3 horas) . Si es necesario, la mezcla puede ser lavada con un ácido (tal como 0.01 N HCl) y/o una base (tal como NaHC03) . La remoción de los solventes (por ejemplo bajo reducción reducida dará S118.
S119 puede ser sintetizado como sigue. Una mezcla de S107, H202 (por ejemplo de alrededor de 50%) y un alcohol (tal como MeOH) se agita a la temperatura ambiente por una cantidad de tiempo adecuada (típicamente alrededor de 2 dias) . Si se desea, la espectrometría de masa puede ser usada para vigilar la desaparición de S107 y la formación del producto S119) . Los solventes pueden ser removidos, por ejemplo bajo presión reducida para dar S119.
S120 puede sintetizado como sigue. Una mezcla S26, bromuro de bencilo y Na2C03 en un solvente (tal como DMF) , es reaccionado por una cantidad de tiempo adecuada, preferiblemente durante la noche. El etil acetato es agregado a la reacción y después, si es necesario, la reacción es lavada con un solvente adecuado, por ejemplo con H20 (4x10 mi) . La fase orgánica puede ser concentrada por ejemplo, bajo presión reducida, y el residuo puede ser purificado, por ejemplo por cromatografía para dar S121.
S121 puede ser sintetizado como para S120, pero usando en vez del 4-OH-bencil bromuro de bencil bromuro. 5122 puede ser sintetizado como sigue. A una solución fria de un compuesto S26 en un solvente, tal como el solvente orgánico en CH2C12, DIEA es agregado y subsecuentemente el cloruro de acetoxiacetilo es agregado. La reacción se deja proceder por una cantidad de tiempo adecuada y después se disuelve (por ejemplo con 1.0 M de solución acuosa HCl) y se extrae (por ejemplo usando CH2C12) . Las capas orgánicas combinadas si es necesario, son lavadas (por ejemplo con H20, salmuera) , se secan (por ejemplo con Na2S04) se filtran y secan (por ejemplo mediante evaporación) . El producto puede además ser purificado por ejemplo por cromatografía sobre una columna de gel de silice, y puede ser elutado con un gradiente aumentando polaridad de desde 0 a 50% de petróleo y etil acetato. Las fracciones relevantes pueden entonces ser combinadas para dar el producto deseado. 5123 puede ser sintetizado como sigue. A una solución de un compuesto S122 en un solvente (tal como MeOH) y THF, preferiblemente a la temperatura ambiente, es segregado LiOH. La reacción se deja proceder por una cantidad de tiempo adecuada a una temperatura adecuada (idealmente a la temperatura ambiente y puede entonces se diluida (por ejemplo con una solución acuosa de 1.0 M de HCl) y extraída (por ejemplo con CH2C12) . Las capas orgánicas combinadas pueden ser lavadas (por ejemplo con H20, salmuera) , secadas (por ejemplo con Na2S04) , filtradas y secadas (por ejemplo mediante evaporación) . El producto crudo puede ser purificado, por ejemplo mediante cromatografía sobre una columna de gel de silice, elutados, por ejemplo con un gradiente en aumento en polaridad de desde 0 a 70% de petróleo en etil acetato. Las fracciones relevantes pueden ser entonces combinadas para dar S123.
Deberá notarse que los compuestos usados como materiales de inicio para, o generados como intermedios en, la sintesis de los compuestos de la invención pueden en si mismos tener estructuras abarcadas por las fórmulas de la invención, y/o pueden en si mismos ser agentes activos útiles en los métodos y composiciones de la presente invención. Tales materiales de inicio e intermedios pueden ser útiles para entre otros tratar o evitar varios desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR tal como los desordenes cardiacos y musculares, tratar de evitar un filtrado en el receptor RyR2 en un sujeto, o modular el aglutinamiento de RyR y FKBP en un sujeto. La presente invención abarca cualquiera de los materiales de inicio o intermedios descritos aqui que tienen estructuras abarcadas por las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1 ó I-m, y/o las cuales son útiles como agentes activos en los métodos y combinaciones de la presente invención. Por ejemplo, en una incorporación el compuesto S68, el cual es útil como un material de inicio para la sintesis de los compuestos S69 y S75, pueden ser usado para entre otros tratar de evitar varios desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR, tratar de evitar un filtrado en un receptor RyR2 o modular la unión de RyR y FKBP en un sujeto.
En otra incorporación, el compuesto S26, el cual es útil en la sintesis de muchos compuestos descritos aqui (incluyendo S3, S4, S5, S7, S9, Sil, S12, S13, S14 y otros compuestos) pueden ser usados, entre otros, para tratar de evitar varios desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR, tratar de evitar un filtrado en el receptor RyR2 o modular la unión de RyR y FKBP en un sujeto.
En forma similar, en otra incorporación, el compuesto S25 (vea la solicitud de patente de los Estados Unidos de América número 10/809,089) también puede ser usada, entre otros para tratar de evitar varios desordenes y enfermedades asociados con los receptores RyR, tratar de evitar un filtrado en un receptor RyR2, o modular la unión de RyR y FKBP en un sujeto.
Los compuestos de la presente invención son preparados en formas diferentes, tal como sales, hidratos, solvatos, complejos, pro-drogas o sales de pro-drogas y la invención incluye todas las formas variantes de los compuestos.
El término "compuesto o compuestos de la invención" como se usó aqui abarca un compuesto de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1 ó I-m, y sales, hidratos, pro-drogas y solvatos de los mismos.
Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos descritos aqui, o sales farmacéuticamente aceptables, hidratos o pro-drogas de los mismos, con otros componentes químicos tales como portadores y excipientes fisiológicamente aceptables. El propósito de una composición farmacéutica es para facilitar la administración de un compuesto para un organismo.
Una "pro-droga" se refiere a un agente el cual es convertido en la droga padre en vivo. Las pro-drogas son frecuentemente útiles debido a que en algunas situaciones, éstas son más fáciles de administrar que la droga padre. Estas son biodisponibles, por ejemplo, mediante administración oral mientras que la droga padre no lo es. La pro-droga también tiene una solubilidad mejorada en las composiciones farmacéuticas sobre la droga padre. Por ejemplo, el compuesto lleva grupos protectores los cuales son divididos por hidrólsisi en los fluidos del cuerpo, por ejemplo en la corriente sanguinea, liberando por tanto el compuesto activo o bien oxidado o reducido en los fluidos del cuerpo para liberar el compuesto.
Un compuesto de la presente invención también puede ser formulado como una sal farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, la sal de adición acida y los complejos de la misma. La preparación de tales sales puede facilitar el uso farmacológico mediante alterar las caracteristicas físicas del agente sin evitar el efecto fisiológico. Los ejemplos de las alteraciones útiles en las propiedades físicas incluyen, pero no se limitan a bajar el punto de derretido para facilitar la administración transmucosal y aumentar la solubilidad para facilitar la administración de las concentraciones superiores de la droga.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal de adición de ácido la cual es adecuada para o es compatible con el tratamiento de un paciente o de un sujeto tal como un paciente humano o un animal tal como un perro.
El término "sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable" como se usó aqui significa cualquier sal orgánica o inorgánica no tóxica de cualquier compuestos de base representados por las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1 ó I-m, o cualquiera de sus intermedios. Los ácidos inorgánicos ilustrativos los cuales forman la sales de adición de ácido adecuadas incluyen los ácidos hidroclórico, hidrobrómico, sulfúrico y fosfórico, asi como las sales de metal tal como el monohidrógeno ortofosfoato y el sulfato de hidrógeno de potasio. Los ácidos orgánicos ilustrativos que forman las sales de adición de ácido adecuadas incluyen ácidos mono-, di-, y tricarboxilicos tal como glicólico, láctico, pirúvico, masónico, succinico, glutámico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, benzoico, fenilacético, cinámico y salicilico, asi como los ácidos sulfónicos tal como p-tolueno sulfónico y ácidos metanosulfónicos . Cualquiera de las ales mono o di-ácidas pueden ser formadas, tales sales existen en cualquiera en la forma hidratada, solvatada o sustancialmente anhidra. En general, las sales de adición de ácido de los compuestos de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I_k, 1-1 y I-m, son más solubles en agua y varios solventes orgánicos hidrofilicos, y generalmente demuestran puntos de derretido superiores en comparación a sus formas de base libre. La selección de una sal apropiada se conocerá por un experto en el arte. Otras sales no farmacéuticamente aceptables, por ejemplo los oxalatos son usados, por ejemplo en el aislamiento de los compuestos de la invención para el uso de laboratorio o para una conversión subsecuente a una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de la presente invención forman hidratos o solvatos, los cuales son incluidos en el alcance de las reivindicaciones. Cuando los compuestos de la presente invención existen como regioisómeros, los isómeros configuracionales, los conformeros o las formas diasteroisoméricas de tales formas y varias mezclas de los mismos se incluyen en el alcance de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 y I-m. Es posible aislar los isómeros individuales usando métodos de purificación y de separación conocidos com se desea. Por ejemplo, cuando un compuesto de la presente invención es una mezcla racémica, la mezcla racémica puede ser separada en el (S) -compuesto y en el (R) -compuesto mediante resolución óptica.
Los isómeros ópticos individuales y las mezclas de los mismos están incluidos en el alcance de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 y I-m.
El término "solvato" como se usó aqui es un compuesto de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1 ó I-m, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas, en donde las moléculas de un solvente adecuado son incorporadas en una red de cristal. Un solvente adecuado es fisiológicamente tolerado a la dosis administrada. Los ejemplos de los solventes adecuados son etanol, agua y similares. Cuando el agua es el solvente, la molécula es mencionada como un "hidrato".
El término "cantidad efectiva", "cantidad suficiente" o "cantidad terapéuticamente efectiva" de un agente es usada aqui como la cantidad suficiente para efectuar resultados benéficos o deseados, incluyendo los resultados clínicos, y como tal una "cantidad efectiva" depende del contexto en el cual esta siendo ésta aplicada. La respuesta es preventiva y/o terapéutica. El término "cantidad efectiva" también incluye la cantidad del compuesto de las fórmulas I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j , I-k, 1-1 ó I-m, la cual "es terapéuticamente efectiva" y la cual evita o atenúa esencialmente los efectos colaterales indeseados.
Como se usó aqui y se entendió bien en el arte "tratamiento" es un acercamiento para obtener resultados beneficios deseados, incluyendo resultados clínicos. Los resultados clínicos benéficos o deseados pueden incluir pero no se limitan a el alivio o mejoramiento de uno o más síntomas o condiciones, la disminución de la extensión de la enfermedad, el estado estabilizado (por ejemplo que no empeora) de la enfermedad, evitar el esparcimiento de la enfermedad, retrazar o desalentar la progresión de la enfermedad, aminorar o debilitar el estado de enfermedad y la remisión (ya sea total o parcial), ya sea detectable o no detectable. El "tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia en comparación a una supervivencia esperada si no se recibe el tratamiento.
Los términos "animal", "sujeto" y "paciente" como se usó aqui incluyen todos los miembros del reino animal, incluyendo pero no limitándose a los mamíferos, animales (por ejemplo, gatos, perros, caballos, etc.) y los humanos.
La presente invención además proporciona una composición que comprende compuestos etiquetas de radio de la fórmula I, I-a, I-b, I-c, I-d, I-e, I-f, I-g, I-h, I-i, I-j, I-k, 1-1 y I-m. El etiquetado de los compuestos es logrado usando una variedad de diferentes etiquetas radioactivas conocidas en el arte. El etiquetado radioactivo de la presente invención es por ejemplo, un radioisótopo. El radioisótopo es cualquier isótopo que emite una radiación que puede ser detectada incluyuendo sin limitación 35S, 125I, 3H, ó 14C. La radioactividad emitida por el radioisótopo puede ser detectada por técnicas muy conocidas en el arte. Por ejemplo, la emisión gama del radioisótopo es detectada mediante usar las técnicas de formación de imagen gama, particular, la formación de imagen escintigráfica .
Por via de ejemplo, los compuestos radio-etiquetados de la invención son preparados como sigue. Un compuesto de la invención puede ser dementilatado en elel anillo fenilo usando BBr3. El compuesto de fenol resultante entonces es re-metilatado con un agente de metilación radio-etiquetado (tal como sulfato 3H-dimetilo) en la presencia de una base (tal como NaH) para proporcionar los compuestos 3H-etiquetados .
La presente invención además proporciona compuestos que pueden ser clasificados como 1,4-benziotiazepinas, incluyendo por via de ejemplo y sin limitación SI, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S9, Sil, S12, S13, S14, S19, S20, S22, S23, S25, S26, S36, S37, S38, S40, S43, S44, S45, S46, S47, S48, S49, S50, S52, S53, S54, S55, S56, S57, S58, S59, S60, S61, S62, S63, S64, S66, S67, S68, S69, S70, S71, S72, S73, S74, S75, S76, S77, S78,S79, S80, S81, S82, S83, S84, S85, S87, S88, S89, S90, S91, S92, S93, S94, S95, S96, S97, S98, S99, SlOO, SlOl, S102, S104, S105, S107, S108, S109, SllO, Slll, S112, S113, S114, S115, S116, S117, S118, S119, S120, S121, S122 y S123.
Estos y otros compuestos de la presente invención están asociados con un portador farmacéuticamente aceptable como se describió anteriormente, como para formar una composición farmacéutica.
De acuerdo con el método de la presente invención, la disminución en el nivel de FKBP unido RyR está limitado o se evita en el sujeto mediante la disminución del nivel de RyR fosforilatado en el sujeto. En una incorporación, la cantidad del agente efectivo para evitar una disminución en el nivel de FKBP12.6 unido RyR2 en el sujeto es una cantidad del agente efectivo para tratar de evitar la falla de corazón, la fibrilación auricular y/o la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en el sujeto. En otra incorporación, la cantidad de agente efectiva para limitar o evitar la disminución en el nivel de FKBP12.6 unido RyR2 en el sujeto es una cantidad del agente efectivo para evitar la muerte cardiaca repentina inducida en el sujeto.
En vista de lo anterior, la presente invención además proporciona un método para tratar o evitar la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en un sujeto, comprendiendo administrar al sujeto un compuesto de 1, -benzotiazepina, como se discutió aqui, en una cantidad efectiva para tratar de evitar la arritmia cardiaca inducida por ejercicio en el sujeto. En forma similar, la presente invención proporciona un método para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en un sujeto, comprendiendo administrar al sujeto un compuesto de 1, 4-benzotiazepina, como se describió aqui, en una cantidad efectiva para evitar la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio en el sujeto. Adicionalmente, la presente invención proporciona un método para tratar o evitar la fibrilación auricular o la falla de corazón en un sujeto, comprendiendo administrar a un sujeto un compuesto, como se describió aqui, en una cantidad efectiva para tratar o evitar la fibrilación auricular o la falla de corazón en el sujeto. En cada uno de estos métodos, el compuesto es seleccionado del grupo de compuestos que consiste de compuestos de la fórmula: en donde, n es 0, 1 ó 2; R está localizado en una o más posiciones del anillo de benceno; cada R es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, halógeno -OH, NH2, -N02, -CN, -N3- S03H, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino pueden ser sustituidos con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, O, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo y (hetero-) ciclilo; Ri es seleccionado del grupo que consiste de H, oxo, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo y heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo y hterociclilo puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, O, -S-,-CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; R2 es seleccionado del grupo que consiste de H,-C=0(Rs),-C=S(R6), -S02R7, -P0R8Rg,- (CH2)m-R?0, alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterocicliclo; en donde cada alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo y heterocicliclo puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; R3 es seleccionado del grupo que consiste de H, C02Y, CONY, acilo, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclilo puede ser sustituido con una o más radicales independientemente seleccionadas del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; y en cada Y es seleccionado del grupo que conssite de H, alquilo, arilo, cicloalquilo y heterociclilo; R4 es seleccionado del grupo que consiste de H, alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclilo pueden ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; R5 es seleccionado del grupo que consiste de -OR15, NHNR16, NHOH,,- 0Ri5, CONH2NHR?6, C02R?5, C0NR?6, CH2X, acilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo; en donde cada acilo, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero- (cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; R6 es seleccionado del grupo que consiste de -OR15, NHNR?6, NHOH, -NR16, CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo, puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; R7 es seleccionado del grupo que consiste de -OR15, -NR?6, NHNHRie, NHOH, CH2X, alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo; en donde cada alquilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilaquilo pueden ser sustituidos con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, O, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; Ra y Rg independientemente son seleccionados del grupo que consiste de OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y hterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, O, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo; Rio es seleccionado del grupo que consiste de NH2, OH,- S02Rn, -NHS02Rn, C=0(Ri2), NHC=0(Ri2), -0C=0(R?2) y -P0R13R?4; Riif Ri2f R13 y R14 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, OH, NH2, NHNH2, HHOH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociquilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociquilalquilo pueden ser sustituidos con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alaquilamino, amino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo e hidroxi; X es seleccionada del grupo que consiste de halógeno, CN, C02Ri5, CONRig, -NR16,- 0R15,- S02R7, y -POR8R9; y R15 y Ri6 independientemente son seleccionados del grupo que consiste de H, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo puede ser sustituido con uno o más radicáis independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alaquilamino, amino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, hterociclilo, heterociclilalquilo; e hidroxilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, y cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo y radical de heterociclilalquilo puede ser en si mismo sub-sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, -N-, -0-, -S-, -CN, -N3, nitro, oxo, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, amino, arilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo e hidroxi; y las sales, hidratos, solvatos, complejos y pro-drogas de los mismos .
Los ejemplos de tales compuestos incluyen, sin limitación SI, S2, S3, S4, S5, S6, S7, S9, Sil, S12, S13, S14, S19, S20, S22, S23, S25, S26, S36, S37, S38, S40, S43, S44, S45, S46, S47, S48, S49, S50, S52, S53, S54, S55, S56, S57, S58, S59, S60, S61, S62, S63, S64, S66, S67, S68, S69, S70, S71, S72, S73, S74, S75, S76, S77, S78,S79, S80, S81, S82, S83, S84, S85, S87, S88, S89, S90, S91, S92, S93, S94, S95, S96, S97, S98, S99, SlOO, SlOl, S102, S104, S105, S107, S108, S109, SllO, Slll, S112, S113, S114, S115, S116, S117, S118, S119, S120, S121, S122 y S123.
En una incorporación de la presente invención, si R2 es C=0(R5) ó S02R7, entonces R está en las posiciones 2, 3 ó 5 del anillo de benceno.
En otra incorporación de la invención si R2 es C=0(R5) ó S02R7, entonces cada R es seleccionada independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2 - N02, -CN, -N3, -S03H, acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero-) arilamino puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo.
En otra incorporación de la inveción, si R2 es C=0(Rs) ó S02R7, entonces hay por lo menos dos grupos R unido al anillo de benceno. Además, en donde están por lo menos dos grupos R unidos al anillo de benceno, y ambos grupos R están aunidos en las posiciones 2, 3 ó 5 sobre el anillo de benceno. Aún además, cada R es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, halógeno, -OH, -NH2,- N02, -CN, -N3, S03H, acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero- ) ariltio, y (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, alquilo, alquilamino, cicloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, y (hetero- ) arilamino puede ser sustituido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeni, N, 0, -S-, -CN, -N3, -SH, nitro, oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo.
En otra incorporación de la invención, si R2 es C=0(Rs), en donde R5 es seleccionado del grupo que consiste de -NR?6, NHNHRig, NHOH, -0R?5, CONH2NHR?6, C0NR16, CH2X, acilo, arilo, cicloalquilo, cialoalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo; en donde cada acilo, arilo, cicloalquilo, cialoalquilalquilo, heterociclilo y heterociclilalquilo puede ser sustiuido con uno o más radicales independientemente seleccionados del grupo que consiste de halógeno, N, 0, -S-, -CN, -N3, nitro , oxo, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquenilo, arilo, (hetero-) cicloalquilo, y (hetero-) ciclilo .
Demostraciones de Eficacia Como se mostró por la figura 1, las incorporaciones A, B, C, y D, S36 es más potente para aumentar la unión de KBP12.6 y RyR2 que JTV-519 y no bloquea el canal de calcio tipo L (Ica,L) o el canal HERG K+ (Ikr)- En la incorporación A el RyR2 PKA fosforilatado es generado como sigue: las preparaciones de membrana de retículo sarcoplásmico cardiaco (5 µl, 50 µg) son agregados a un total de 100 µl de amortiguador de quinasa (8 mM MgC12, 10 mM EGTA, 40 mM Tris-PIPES, pH 6.8) conteniendo 100 µM MgATP y 40 unidades de PKA, e incubado a la temperatura ambiente. Las muestras son centrifugadas a 95,000 g por 10 minutos y las pelotillas son lavadas tres veces en 0.2 mililitros de amortiguador de imidazole. Las pelotillas finales son estancadas y suspendidas de nuevo en amortiguador de imiodazole (concentración final « lOµg/µl) . Para probar la eficiencia de reunión de FKBP12.6 de JTV-519, retículo sarcoplasmico cardiaco fosforilatado PKA (50mg)ES INCUBADO POR 30 minutos a la temperatura ambiente con los compuestos de prueba y 250 nM FKBP12.6 en lOnM de amortiguador de imidizol, pH7.0. Las muestras son entonces centrifugadas a 100,000g por 10 minutos y las pelotillas son lavadas 3 veces con amortiguador de imidazol.
Después del lavado las proteínas son fraccionadas de tamaño sobre 15% PAGE. Las inmunomanchas son desarrolladas usando un anticuerpo anti-FKBP (1:3,000 de dilución). La cantidad de reaglutinantes cuantificada usando la densitrometria de manchas Western y se compara a la cantidad de FKBP asociada con RyR en retículo sarcoplásmico no fosforilatado. El EC50<s para los compuestos son determinados mediante el generar los datos de unión FKBP usando concentraciones de compuestos variando de desde 0.5-1000 Nm. En la incorporación B, las corrientes através de los canales de calcio tipo L en los cardiomiocitos de ratón aislados son registrados usando la abrazadera de parche de célula completa registrando las condiciones Ba2+ como el portador de carga. La solución extra celular contiene (en mM) : (n-metilo-D-glucamina, 125; BaCl220;Cs Cl,5;MgCL2l; HEPES, 10; glucosa, 5; pH 7.4 (HCl). La solución intracelular contiene (en mM):CsCl, 60;CaCl2 1;EGTA, ll;MgCl2,l;K2ATP,5; HEPES, 10; ácido aspartico , 50: Ph7.4 (CsOH) . Bajo estas condiciones, se espera que la corriente medida fuera llevada por Ba2+ primariamente a través de los canales de calcio tipo L el cual es mencionado como ICa,L. Las drogas son aplicadas por un cambiador de solución local y alcanzan la membrana de célula dentro de 1 s . Los efectos de la nifedipina y S36 son probados con pasos de abrazadera-voltaje de 20 ms de largo a + 10 o + 20Mv (pico de la relación de corriente-voltaje para cada célula individual) desde los potenciales de retención de -80 mV o 40mV. En una incorporación C, la dependencia de voltaje de la corriente de calcio tipo L bloqueada por JTV-519 (lµM9 y S36 (lµM)son medidos y presentados.
Como se demostró por la figura 2, incorporaciones A,B,C, y D, S36 evitan la muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio a niveles de plasma mas bajos y a comparación con JTV-519. En una incorporación A están mostrados los ECGs representativos de un ratón y ratones FKPB12.6+ ~ . Los ratones son tratados con 0.5 miligramos de JTV-519/M por kilogramo de peso de cuerpo por hora por 7 dias con una mini-bomba osmótica implantada. El JTV-519 no tiene efecto sobre la tasa de corazón en descanso u otros parámetros ECG tal como la tasa de corazón (HR) . En la incorporación B están mostrados la taquicardia ventricular polimórfica sostenida registrada por telemetría en un ratón FKPB12.6+ " no tratado (indicio superior) sometido a la prueba de ejercicio inmediatamente seguido por la inyección con 0.5 miligramos de epinefrina por kilogramo de peso al cuerpo. El registro de ECG de telemetría representativo de un ratón FKPB12.6+ " tratado con JTV-519 siguiendo el mismo protocolo está mostrado en el indicio de fondo. En una incorporación C están mostrados los números de ratones con muerte cardiaca (izquierda) , taquicardia ventricular sostenida (>10 latidos, medios) y taquicardias ventriculares no sostenidas (3 a 10 latidos arritmogénicos, derecha ) en grupos de ratones sometidos a prueba de ejercicio y la inyección de 0.5 miligramos/de epinefrina. En la incorporación D, la dependencia de dosis de los efectos farmacológicos de JTV-519 y S35 está mostrada. Los niveles de plasma de lµM JTV-519 evitan las arritmias cardiacas y la muerte cardiaca repentina de ratones FKPB12.6+ ~ . Los niveles de plasma de lµM y 0.02µM S36 también evitan las arritmias cardiacas y la muerte cardiaca repentina en ratones los FKPB12.6+ Como se demostró por la figura 3, S36 evita en desarrollo de infarto post-miocardio de falla de corazón agudo . Los ratones tratados con placebo o tratados con S36 (lOOnM o 200nM de concentraciones de plasma) son sometidos a una ligación permanente de la arteria coronaria descendiente anterior izquierda resultando en un infarto al miocardio. El S36 significativamente mejora el acortamiento fraccional evaluado por la ecocardiografia de modo -M 2 semanas después del infarto al miocardio, en comparación con el placebo.
Como se demostró por la figura 4, S36 mejora la función cardiaca en el infarto de miocardio posterior de falla de corazón crónica. Los ratones de tipo silvestre son sometidos a un ligado permanente de la arteria coronaria descendiente anterior izquierda resultando en un infarto de miocardio. Siete dias después del infarto al miocardio, los ratones son probados con S36 (concentración de plasma 200 nM) o placebo. Las proporciones a peso de corazón a peso de cuerpo (HW/BW) las cuantificaciones de circuitos de presión-volumen (Dp/dt, inclinación del derivado máximo de cambio en presión sistólica con el tiempo) mostró una remodelación de reversa y mejoró la contracción cardiaca en loso ratones tratados con S36 en comparación con el placebo.
La figura 5 es una gráfica de resumen de los valores EC50 de JTV-519 y de los compuestos S1-S67 descritos aqui. El ensayo de reunión de FKPB12.6 descrito arriba es usado para determinar la cantidad de FKPB12.6 uniendo a RyR2 fosforoilatado a varias concentraciones (0.5 lOOONm) de los compuestos mostrados. Los valores EC50 son calculados usando la curva de ajuste Michaellis-Menten.
Como se demostró por la Figura 6, las incorporaciones A, B, y C, S-36 normaliza la estructura y función de canal RyR2-P2328S asociado con la taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica. En la incorporación A están mostrados los indicios de corriente de canal único representativos de RyR2-P2328S no fosforilatado y RyR2-WT fosforilatado con PKA tratado con S36 no mostrando influencia de JTV-519 sobre la función de canal de linea de base. Sin embarbo, en RyR2-P2328S PKA fosforilatado como se mostró en la incorporación B, S36 normaliza el estado cerrado de canal único a niveles que se aproximan a aquellos vistos en la incorporación A reduciendo la probabilidad abierta de desde 14.4% a 0-3% después de la administración 0. lµmol/LS36. Los insertos en las incorporaciones A y B muestran las aberturas de canal >1 pA a una resolución superior. La incorporación C muestra el análisis de inmunomancha de la unión de calstabin-2 de RyR2-P2328S, en la presencia o en la ausencia de PKA y 0. lµmol/LS36, como se indicó. RyR2-P2328S es inmunoprecipitado y el PKA in Vitro fue forsforilatado como se describió arriba.
Como se demostró en la figura 7, las incorporaciones A y B, el tratamiento con JTV-519 reduce la fosforilación PKA de RyR2 en ratones con falla de corazón. Las cantidades de RyR2 son inmunoprecipitadas con un anticuerpo en contra de RyR2 (mancha superior) . Las inmunomanchas representativas (incorporación A) y las gráficas de barras (incorporación B) muestra la cantidad de RyR2 fosforilatada con PKA en la unión Ser-2808 a RyR2 en ratones de tipo silvestre y calstabin 2 (FKPB12.6_/") . El tratamiento conJTV-519 (0.5mg/kg. /h) por 28 dias después del infarto al miocardio posterior reduce la fosforilación PKA de RyR2 presumiblemente debido a la remodelación cardiaca inversa, en los ratones de tipo silvestre pero no en los de calstabin-2 FKPB12.6~ _) .
Como se demostró en la figura 8, incorporaciones A y B, los ratones en los cuales el RyR2 cardiaco no puede ser PKA fosforilatado (ratones golpeando RyR2-S2898A) tienen una función cardiaca mejorada después del infarto al miocardio. Mostrado en la incorporación A está la cuantificación de los ecocardiogramas modo M RyR2-S2898A en comparación con los de tipo silvestre 28 dias después del ligado de arteria coronaria permanente. En las incorporaciones B y C están mostradas las cuantificaciones de circuito de volumen-presión mostrando (incorporación B) una contracción cardiaca mejorada y una dilación cardiaca disminuida (incorporación C) en ratones knockin S2808A con tipo salvaje después del infarto al miocardio.
La figura 9 incorporaciones A,B,C, y D demuestran el efecto de JTV-519 sobre la afinidad de calstabin2 a RyR2 en los ratones calstabin2 (FKBP12.6+ ~) haploinsuficientes después del ejercicio la probabilidad promedio de que los canales RyR2 estén abiertos en los ratones calstabin2+ ~) sometidos a ejercicio fue incrementada significativamente en comparación a aquellos canales de ratones de tipo silvestre (control; calstabin2+ +) ejercitados, los cuales están cerrados predominantemente bajo condiciones que simulan diástole en el corazón por decir. Como se mostró en las incorporaciones C y D el tratamiento de los ratones calstabin2+/") ejercitados con JTV-519 redujo significativamente la probabilidad abierta de canal (pQ) en comparación con aquella de los canales de ratones ejercitados que no fueron tratados, consistente con las cantidades incrementadas de calstabin2 en el complejo de canal RyR2. Por tanto, JTV-519 aumenta la afinidad de calstabin2 a RyR2. En contraste el tratamiento de JTV-519 de ratones deficientes de calstabin2_/~ no resultó en canales con un Pc, bajo indicando que la presencia de calstabin2 es necesaria para los efectos JTV-519 los cuales están documentados como unión de calstabin2 a RyR2.
La figura 10, incorporaciones A,B,C.D,E y F demuestran respectivamente, la activación periódica de canal RyR2 normalizada y la unión de calstabin2 incrementada a los canales RyR2 después del tratamiento JTV-519. Las inmunomanchas en las incorporaciones A y B muestran las cantidades de calstabin2 y de RyR2 asociadas con RyR2 inmunoprecipitados después de la incubación con las concentraciones indicadas de JTV-519 para, respectivamente, los canales RyR2 y (RyR2-WT)de tipo salvaje y RyR-S2809D. Las curvas de unión en la incorporación C demuestran que JTV-519 aumenta significativamente la afinidad de calstabin2 para los canales RyR2 PKA fosforilatados . Los resultados también demuestran que el agotamiento de calstabin2 de el complejo macromolecular RyR2 el cual está asociado con la probabilidad abierta de RyR2 aumenta, las taquicardias ventriculares y la muerte cardiaca repentina en los ratones calstabin2+ " haploinsuficientes que es revertida por el tratamiento con JTV-519. Por tanto, JTV-519 y los compuestos relacionados evitan los desordenes y las condiciones asociadas con los receptores RyR2.
Como se mostró en la figura 11, las incorporaciones A,B,C,D y E del funcionamiento de canal RyRl es incrementada y normalizada en ratones mdx (deficientes de distrofina) tratados con JTC-519. En la figura 11 las aberturas de canal están representadas como deflecciones hacia arriba; "c" indica el estado cerrado; y una amplitud abierta de corriente 4pA es indicada por un guión. Los indicios superiores representan 5 segundos y los indicios inferiores 500 ms; las lineas punteadas indican los estados de subconducción.
La incorporación A de la Figura 11, muestra un indicio de corriente de canal único de RyRl del músculo soleo de ratón de control (tipo silvestre) bajo condiciones de descanso (150nM de calcio citoplásmico) . Como se vio RyRl está predominantemente cerrado. La incorporacón C de la figura 11 muestra que el canal RyRl funciona en el ratón mdx mostrando una probabilidad abierta significativamente incrementada una abertura promedio incrementada y tiempos de permanencia cerrados por medio disminuidos, To y Te, respectivamente. El Po en los ratones mdx es consistente con el filtrado de calcio intracelular. Los histogramas de amplitud en las incorporaciones B,D y F muestran estados de subonductancia múltiples consistentes en el agotamiento de calstabinl (FKBP12) en RyR del músculo soleo mdx. La incorporación E de la figura 11 muestra un ratón mdx tratado con 1.0 µMJTV-519. Como se vio, los canales RyRl del ratón tratado con JTV-519 demuestra una actividad normal que no es significativamente diferente de los indicios de tipo silvestre no tratados indicando por tanto que el JTV-519 puede normalizar la función de canal RyRl y los ratones mdx.
Los datos de la figura 11 son consistentes con el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico normalizado en ratones mdx.
Los datos de la figura 11 son consistentes con el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico a través de canales RyRl como la causa de filtrado de calcio citosolico incrementado en músculo esqueleto de ratones mdx (deficientes de distrofina) .
La figura 12 incorporaciones A y B demuestran que el músculo esqueleto mdx tiene niveles normales de fosforilación PKA RyRl, pero ni los niveles agotados de calstabinl. Las inmunomanchas en la incorporación A muestran que los ratones tipo mdx tienen niveles agotados de calstabinl en comparación a un ratón de control (tipo silvestre) . La gráficas de barras de resumen de la incorporación B que el ratón mdx, no obstante, tiene un nivel equivalente de PKA-fosforilación. Por tanto se concluye que el agotamiento de calstabinl es un defecto que es consistente con el filtrado de calcio intracelular observado en las células de músculo esqueleto de ratones mdx y miofibras de portadores de mutación humana. El filtrado de Ca2+ de retículo sarcoplásmico intracelular es factible que contribuye a la muerte de miofibra y al desperdicio de la masa de músculo por la sobrecarga de calcio intracelular toxica y la activación de proteasas.
La figura 13 incorporaciones A, B y C, demuestran que el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico en el nivel subcelular en los músculos esqueletos de animales con falla de corazón es detectable. La calidad de vida y la prognosis en los pacientes de falla de corazón (HF) es disminuida severamente debido a la disfunción músculo esqueleto (por ejemplo falta de aire debido a la debilidad diafragmática e intolerancia de ejercicio debido a la fatiga del músculo esqueleto del miembro) en adición a una función cardiaca deprimida. La desregulación de la liberación de calcio de retícula sarcoplásmico intracelular es un mecanismo patógeno debajo de la disfunción de músculo esqueletal en la falla de corazón. La falla de corazón en los animales causa aceleraciones significativas de la fatiga de músculo esquelético intrínsecas.
Las incorporaciones A y B de la figura 13 son imágenes de exploración de linea de fluorescencia ?F/F de ejemplos representativos de inicios de calcio en miofibras de ratas con infarto de miocardio posterior (PMI) y simuladas y el curso de tiempo de chispa de calcio correspondiente. La incorporación C muestra la distribución relativa de las propiedades-temporales de las chispas de calcio. Las gráficas indican porcentajes de 25, 50, 75, las lineas horizontales indican el rango de desde 1-99% de la distribución. Simulado, símbolos abiertos (n=137, tres animales); infarto postmiocardio (PMI), símbolos grises (n=82, dos animales). *,P <0.05. FDHM, duración completa a una amplitud de 50% pico; ancho completo FWHM a una amplitud de 50% pico.
La figura 14, incorporaciones A y B, demuestra que el tratamiento de ratones de tipo silvestre con JTV-519 mejoró los tiempos de fatiga de músculo soleo en comparación con el placebo. Los músculos soleo de ratones de tipo silvestre tratados con JTV-519 o de ratones calstabin2_ ~ con falla de corazón de infarto al miocardio son más resistentes a la fatiga (P<0.05) en comparación a los ratones tratados con placebo. Después de completar el tratamiento, el músculo soleo fue diseccionado y montado en un baño de tejido para evaluar la función de músculo esqueleto aislado. El 50% representativo de los indicios de tiempo de fatiga de fuerza titánica máximos están mostrados para los ratones de tipo silvestre y calstabin2_/", tratados con JTV519 o place, en la incorporación A. En la incorporación B está mostrada la gráfica de barras que resume el tiempo medio a la fatiga.
En resumen, el tratamiento JTV-519 mejoróa la fatiga músculo esqueleto en los animales con falla de corazón en vivo. En forma interesante, los ratones calstabin2_ ~, los tiempos de fatiga también fueron mejorados significativamente en los ratones tratados con JTV519, sugiriendo que los efectos benéficos sobre la función de músculo esqueleto aislada dependen de calstabinl y no de calstabin2 uniendo a RyRl. En verdad, el calstabinl parece ser la única isoforma de significado funcional expresada en músculo esqueletos.
La figura 15, incorporaciones A y B, demuestran que en el modelo de ratón de falla de corazón de infarto de miocardio posterior, RyRl en el músculo soleo es también PKA-hiperfosforilatado. Ambos en el tipo silvestre y los ratones de calstabin2_ ", el JTV-519 aumentó la unión de calstabinl a RyRl en el músculo soleo, sugiriendo que JTV-519 mejora la fatiga de músculo esqueleto mediante normalizar la reunión de calstabinl al complejo de canal. Las cantidades equivalentes de RyRl fueron inmunoprecipitadas con un anticuerpo en contra de RyRl. La incorporación A proporciona gráficas de barras que muestran la cantidad de fosforilación PKA de RyRl a Ser-2844 en ratones (correspondiente a Ser-2843 en humanos) . La disminución significante de fosforilación PKA RyRl en animales de tipo silvestre tratados con JTV 519 es factiblemente resultante de los efectos cardiacos benéficos y de la reducción secundaria de la actividad nerviosa simpática. La incorporación B son gráficas de barras que muestran la cantidad de calstabinl unido a RyRl de los ratones de tipo silvestre o casltabin2~/~ tratados con JTV519 un placebo. Los ratones fueron tratados con JTV-519 mediante minibombas osmóticas que pueden ser implantadas usando una dosis de 0.05 mg/kilogramo/dia. En resumen, el tratamiento de JTV-519 resultó en un aumento altamente significativo de calstabinl en el complejo RyRl en los músculos soleo en vivo.
La figura 16, incorporaciones A, B, C y D demuestra que la reunión de calstabinl a RyRl mediante JTV519 normaliza la función de canal RyRl que filtra o anormal en vivo. En las incorporaciones A y C están mostrados los indicios de canal único RyRl a 150 nM de calcio citoplásmico representando condiciones de descanso en músculo esqueleto para los ratones de tipo silvestre tratados con placebo y JTV-519. El tratamiento de JTV-519 de ratones con falla de corazón y fatiga de músculo incrementada normalizó la activación periódica de canal RyRl en el músculo esqueleto en vivo. Las aberturas de canal están hacia arriba, el guión indica el nivel completo de abertura de canal (4 pA) , las lineas punteadas indican niveles de sub-conducción, y "c" indica el estado cerrado de los canales. Para los histogramas de amplitud en las incorporaciones B y D, la amplitud está representada sobre el eje x y los eventos indican el número de aberturas de canal. Los valores Po, To y Te corresponden a los indicios representativos. El tratamiento como se indicó sobre la parte superior de los indicios. El inserto muestra una resolución superior de los estados abiertos.
En resumen, los datos muestran que el tratamiento JTV519 en vivo normaliza la función músculo esqueleto y la disfunción de canal RyRl consistente con el evitar el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico intracelular como una causa de la fatiga de músculo esqueleto incrementada.
La figura 17 demuestra que JTV-519 también aumenta la afinidad de unión de calstabinl para RyRl en el músculo esqueleto en vivo. Esto explica probablemente por qué los ratones tratados con JTV519 con falla de corazón tienen niveles incrementados de calstabinl unido a RyRl en el músculo soleo. En la incorporación A, las cantidades equivalentes de RyRl esqueleto o RyR2 cardiaco fueron inmunoprecipitadas, fosforilatadas con PKA e incubadas con calstabinl o calstabin2 a concentraciones de incremento de JTV519, respectivamente. El sedimiento representa solo la unión de calstabin a RyR. El inmuunomanchado mostró que >50 nM de JTV519 aumentó la afinidad de unión de calstabin para RyR. Las gráficas de la incorporación B además demuestran que la fosforilación PKA de RyRl reduce la afinidad de calstabinl para RyRl (circuios abiertos) mientras que el tratamiento con JTV519 (circuios llenos) restauró la afinidad de unión de calstabinl para RyRl a aquella de RyRl no fosforilatado con PKA (cuadrados abiertos) .
La figura 18, incorporaciones A, B, C y D demuestran que Ser-2843 es el único sitio de fosforilación PKA en los canales RyR esqueleto. (A) los indicios de canal único representativos de los ratones RyRl de tipo silvestre, (B) efecto de fosforilación PKA exógena de RyRl (wt RyRl-P) , (C) el PKA no afecta el RyRl-S2843A que contiene un sitio de fosforilación PKA no funcional. Dado que el PKA no aumenta la actividad RyRl-S2843A, el Ser-2843d parece que constituye el sitio de fosforilación PKA único en los canales RyRl en el músculo esqueleto. Por tanto, (D) constitutivamente RyRl-S2843D fosforilatado imita la fosforilación PKA exógena mostrada en (B) confirmando que Ser-2843 es el único sitio de fosforilación PKA en los canales RyRl esqueleto. Los registros de canal único RyRl en bicapas de lipido planas muestran actividad de los canales a 150 nM [Ca2+]cis (lados citosólidos) con 1 mM de ATP. Los registros fueron a 0 mV, estado cerrado de los canales como se indicó por "c", y las aberturas de canal son deflexiones hacia arriba. Todos los histogramas de amplitud de punto están mostrados sobre la derecha. La probabilidad abierta (PQ) y cerrada media (Te) y los tiempos de permanencia abiertos (To) están indicados arriba de cada indicio de canal.
La figura 19, incorporaciones A y B demuestran el agotamiento del casltabinl estabilizante y la hiperfosforilación de PKA de los canales RyRl de ejercicio sostenido. El ejercicio aeróbico puede ser definido como una forma de ejercicio fisico que aumenta la taza de corazón y mejora la toma de oxigeno para un desempeño mejorado. Los ejemplos de ejercicio aeróbico son correr, hacer bicicleta y nadar. Durante el estudio de la figura 19, los ratones fueron desafiados mediante ejercicio aeróbico (nado forzado) por 90 minutos dos veces al dia. Los animales fueron acostumbrados a nadar en secciones de entrenamiento preeliminares : dia-3 dos veces 30 minutos, dia -2 dos veces 45 minutos, dia-1 dos veces 60 minutos, dia 0 y siguientes dos veces 90 minutos. Los ratones fueron entonces ejercitados por 1, 7 o 21 dias consecutivos adicionales por 90 minutos dos veces al dia. Entre las sesiones de nadado separadas por un periodo de descanso de cuatro horas los ratones se mantuvieron calientes y se les dio de comer y beber. Un estanque de agua corriente ajustable fue usado para ejercitar los ratones con el nado. El estanque acrilico (90 centímetros de largo por 45 centímetros de ancho por 45 centímetros de profundidad) es llenado con agua a una profundidad de 25 centímetros fue usado. Una corriente en el estanque fue generada por una bomba. La velocidad de la corriente durante la sesión de nado fue a una velocidad constante de 11/minuto taza de flujo. La temperatura de agua fue mantenida a 34 °C con un calentador eléctrico. Los ratones de peso y edad igualados fueron usados para excluir diferencias en flotación de la grasa del cuerpo.
Usando el lado forzado como un protocolo eficiente para aumentar la capacidad aeróbica de músculo esqueleto en los ratones, la composición y el estado de fosforilación del complejo de canal RyR esqueleto se ha investigado. Inesperadamente, después de tres semanas de 90 minutos de nado, dos veces diariamente, los ratones tipo silvestre C57B16 mostraron un aumento significativo de forsforilación de RyRl por PKA mientras que la fosforilación de calmodulin quinasa II (CaMKII) -Ca2+ no fue cambiada indicando especificación de que fue estable la expresión de proteina RyRl de trayectoria de esfuerzo, sin embargo, los canales RyRl fueron agotados de la calstabinl (FKBP12) de sub-unidad estabilizante. Se ha mostrado que la hiperfosforilación de RyRl y el agotamiento de calstabinl son consistentes con los canales RyRl filtrantes que provocan el filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico intracelular.
Los canales RyRl son PKA hiperfosforilatados agotados de la sub-unidad de calstabinl estabilizante después de tres semanas de 90 minutos de nado dos veces al dia. Como se ve en la incorporación A, el complejo de canal macromolecular RYR1 inmunoprecipitado mostró una fosforilación PKA incrementada a Ser-2844 (correspondiente a RyRl-Ser-2843 humano) mientras que la fosforilación CaMKII a Ser-2849 (correspondió al RyRl-Ser-2848 humano) no es cambiado. Concomitantemente la hiperfosforilación de PKA RyRl-Ser-2844 incrementada, el calstabinl es agotado del complejo de canal.
Como se ve en la incorporación B, la normalización de la fosforilación y el contenido calstabinl para cuatro subunidades del complejo de canal tetramérico mostró un aumento significativo en fosforilación PKA y agotamiento de la sub-unidad de calstabinl estabilizante. Los ratones no ejercitados de control; los ratones ejercitados 90 minutos dos veces diariamente nadando por 3 semanas (datos preliminares). P<0.05.
La figura 20, incorporaciones A y B, demuestran que la fosforilación de PKA aumenta para duraciones de incremento de ejercicio sostenido. Para investigaar la influencia de la duración del ejercicio sostenido sobre el efecto de canal de liberación de calcio RyRl, los ratones fueron expuestos al nado por 1, 7 ó 21 dias seguido por un sacrificio inmediato. La exposición más prolongada al ejercicio sostenido resultó en un aumento significante de hiperfosforilación de PKA de RyRl, comenzando a 7 dias y saturando a 21 dias.
La figura 20, incorporación A, el complejo de canal RyRl inmunoprecipitado mostró niveles significativos y fisiológicos superiores de fosforilación de PKA incrementada a Ser-2844 (correspondiendo a RyRl-Ser-2843 humano) después de 7 dias de ejercicio de nado. En la figura 20, la incorporación B, normalización de fosforilación de RyR2-Ser-2844 dentro del complejo de canal tetramérico documenta un aumento significante en la fosforilación PKA. *, P<0.05; **, P<0.005.
En resumen, los datos de la figura 20 muestran que el ejercicio sostenido resulta en una fosforilación de RyRl incrementada significativamente por la proteina quinasa A (PKA) la cual contribuye al agotamiento de la sub-unidad de calstabinl estabilizante del complejo de canal como la causa de un defecto de ganancia de función.
La figura 21 proporciona datos que muestran que el estimulo simpático incrementado crónicamente de los músculos esqueletos, resulta en un filtrado de calcio intracelular dependiente de RyRl y aumenta significativamente la fatiga de músculo. ¿Cuál es la consecuencia funcional de la hiperfosforilación de PKA de RyRl incrementada crónicamente?. Como se mostró en la figura 21 para los ratones y ratas con falla de corazón de infarto al miocardio, la hiperfosforilación PKA de RyRl resulta en fatiga de músculo incrementada.
En la incorporación A, puede verse que el músculo esqueleto de falla de corazón se fatiga más temprano que el control. El músculo soleo de rata (n=5 control, n=8 HF) fue montado sobre un baño de tejido para evaluar la función de contracción. El indicio de tiempo de fatiga representativo está mostrado para los músculos de esqueleto de control HF. La gráfica de barras muestra un tiempo medio (±S.D.) a 40% de fatiga. *,P<0.05. En la incorporación B, puede verse que el músculo esqueleto de falla de corazón logró la fuerza tetánica máxima más lentamente que los músculos esqueletos de control. La fuerza tetánica fue inducida por una estimulación de campo de alta frecuencia. La gráfica de barras muestra el tiempo de contracción de 50% tetánico. **,P<0.01. La incorporación C demuestra la correlación entre el tiempo a la fatiga y la fosforilación PKA RyRl (r=0.88) en el músculo esqueleto de rata de animales con falla de corazón y simulada. La función de músculo y la fosforilación de PKA de RyRl fueron evaluadas usando los músculos soleo contralaterales de cada animal.
En resumen, la figura 21 proporciona datos que muestran que el ejercicio sostenido provoca la hiperfosforilación PKA de RyRl y el agotamiento de calstabinl, y la figura 21 muestra que un defecto idéntico ocurre en las formas de enfermedad con una actividad de simpático incrementada provocando un filtrado de calcio de retículo sarcoplásmico intracelular y una fatiga músculo esqueleto significativamente acelerada.
Un problema adicional durante el ejercicio y estrés sostenido es la degeneración músculo esqueleto que además contribuye a un desempeño de músculo esqueleto disminuido. Para evaluar los cambios estructurales durante el ejercicio sostenido, los cambios histológicos en los músculos de contracción rápida de ratones expuestos a 3 semanas de ejercicio mediante nadar se ha caracterizado. Los resultados son mostrados en la figura 22. Las secciones transversales del ratón M. extensor digi torum longus (EDL) mostró cambios histológicos consistentes con la degeneración de miofibra de sobrecarga de calcio intracelular de canales RyRl defectuosos. Por tanto, el ejercicio sostenido por 90 minutos dos veces diariamente dispara un fenotipo distrófico en los músculos EDL de los ratones C57B16 normales.
La mancha tricroma muestra la miofibra empacada de dimensión en sección transversal similar en ratones de control (izquierdo) sin ejercicio (WT) . Las tres semanas de nadado resultan en la degeneración de miofibra en depósitos de colágeno intersticiales con tamaños de fibras irregulares. La mancha de hetmatoxilina-eosina (H&E) indica cambios nucleares y muerte de miofibra. Estos cambios son consistentes con la remodelación distrófica.
El canal de potasio rectificador retrazado rápido (I(Kr)) es importante para la repolarización del potencial de acción cardiaca. El HERG es la sub-unidad de formación de poro del canal I (Kr) . La supresión de la función I (Kr) , por ejemplo como un ejemplo colateral de una droga o un resultado de una mutación en hERG, puede llevar a un síndrome QT largo (LQT) , el cual está asociado con un riesgo incrementado de arritmias que amenazan la vida. Los compuestos de la presente invención exhiben un nivel inferior de actividad de bloqueo hERG que la JTV-519 como se demostró en las figuras 23-43. Por tanto, los compuestos de la presente invención son esperados como siendo menos tóxicos y/o que exhiban menos efectos colaterales que JTV-519.
Las figuras 23 a 26 ilustran el efecto del compuesto ARM035 (también mencionado como S36) y ARM036-Na (una sal de sodio de ARM036) sobre corrientes hERG.
La figura 23 muestra un registro de corriente de abrazadera-voltaje hERG tipico antes (control) y después de la aplicación de ARM036 a lOOµM. El protocolo de pulsación de voltaje usado para activar las corrientes hERG está ilustrado debajo del Índice de corriente. Puede verse que, después de la activación por el pre-pulso de acondicionamiento (a +20mV) , la repolarización parcial (-50mV pulsación de prueba) de la membrana evocó una corriente de cola hacia fuera decadente lentamente grande. La aplicación de ARM036 redujo mínimamente la corriente de cola hacia fuera en una manera dependiente del tiempo y de la concentración.
La figura 24 muestra un curso de tiempo típico del efecto de ARM036 a lOOmM sobre la amplitud de la corriente de canal hERG.
La figura 25 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM036 sobre la corriente hERG. La tabla 1 proporciona los datos numéricos que están gráficamente ilustrados en la figura 25. Debido a la concentración más alta de ARM036 probada que resultó en menos de 50% de la inhibición de corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM036.
Tabla 1 La figura 26 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM036-Na sobre la corriente hERG. La tabla 2 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 26. Debido a que la concentración más alta de ARM036-Na probada resultó en menos de 50% de la inhibición actual, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM036-NA.
Tabla 2 La figura 27 es una gráfica que mostrando la concentración-dependencia del efecto de ARM047 sobre el hERG actual. La tabla 3 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 27. El valor IC50 para el bloque ARM047 para el hERG actual fue de 2.496 µM.
Tabla 3 La figura 28 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM048 sobre el actual hERG. La tabla 4 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 28. Debido a la concentración más alta de ARM048 probada resultó en menos de 50% de inhibición actual, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM048.
Tabla 4 La figura 29 es una gráfica que muestra la dependencia-concentración del efecto de ARM050 sobre el hERG actual. La tabla 5 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 29. Debido a la concentración más alta del ARM050 probado resultó en menos de 50% de la inhibición actual, no fue posible determinar el valor IC50 para ARM050.
Tabla 5 La figura 30 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM057 sobre el hERG actual. La tabla 6 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 30. Debido a la concentración más alta de ARM057 probada resultó en menos de 50% de inhibición actual no fue posible determinar el valor IC50 para ARM057.
Tabla 6 La figura 31 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM064 sobre el hERG corriente. La tabla 7 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 31 debido a que la concentración más alta de ARM064 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM064.
Tabla 7 La figura 32 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM064 sobre el hERG actual. La tabla 8 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 32. Debido a que la concentración más alta de ARM050 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM074.
Tabla 8 La figura 33 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM075 sobre el hERG corriente. La tabla 9 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 33. Debido a que la concentración más alta de ARM075 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM075.
Tabla 9 La figura 34 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM076 sobre el hERG corriente. La tabla 10 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 34. Debido a que la concentración más alta de ARM076 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM076.
Tabla 10 La figura 35 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM077 sobre el hERG corriente. La tabla 11 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 35. Debido a que la concentración más alta de ARM077 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM077.
Tabla 11 La figura 36 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM101 sobre el hERG corriente. La tabla 12 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 36. Debido a que la concentración más alta de ARM101 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM101.
Tabla 12 La figura 37 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM102 sobre el hERG corriente. La tabla 13 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 37. Debido a que la concentración más alta de ARM102 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM102.
Tabla 13 La figura 38 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM103 sobre el hERG corriente. La tabla 14 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 38. Debido a que la concentración más alta de ARM103 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM103.
Tabla 14 La figura 39 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM104 sobre el hERG corriente. La tabla 15 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 39. Debido a que la concentración más alta de ARM104 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM104.
Tabla 15 La figura 40 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM106 sobre el hERG corriente. La tabla 16 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 40. Debido a que la concentración más alta de ARM106 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM106.
Tabla 16 La figura 41 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de ARM107 sobre el hERG corriente. La tabla 17 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 41. Debido a que la concentración más alta de ARM107 probada resultó en menos de 50% de inhibición corriente, no fue posible determinar un valor IC50 para ARM107.
Tabla 17 La figura 42 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de S26 ARM076 sobre el hERG corriente. La tabla 18 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 42. El valor C50 para S26 fue de 7.029 µM.
Tabla 18 La figura 43 es una gráfica que muestra la concentración-dependencia del efecto de JTV-519 (mencionado en la figura como "ARMOXX") sobre el hERG actual. La tabla 19 proporciona los datos numéricos que están ilustrados gráficamente en la figura 43. El valor IC50 para JTV-519 fue de 0.463 µM.
Tabla 19 La droga antiarritmica E-4031, un bloqueador conocido de corrientes hERG, fue usado como control positivo. La E-4031 bloqueó la corriente hERG con un IC5o de 0.5 µM (n-6) .
En resumen, los compuestos de la presente invención exhibieron una actividad de bloqueo hERG reducido en comparación a JTV-V519. Por tanto, los compuestos de la invención se espera que sean menos tóxicos y/o exhiban menos efectos colaterales que JTV-519.
La tabla 20 abajo proporciona valores EC50 para compuestos S1-S107. Estos datos EC50 fueron obtenidos usando tres ensayos de reunión de FKBP12.6 descritos arriba para determinar la cantidad de FKBP12.6 que se une a RYR2 PKA-fosforilatado a varias concentraciones (0.5-1000 nM) de los compuestos mostrados en la tabla 20. Los valores EC50 son calculados el ajuste de cura Michaelis-Mente .
Tabla 20 Métodos de exploración de producción alta En adición a los compuestos descritos aqui, otros compuestos pueden ser descubiertos los cuales son capaces de modular la actividad de canal de ion de calcio, en particular aquellos canales relacionados a la series RyR de canales de ion de calcio. Aqui se proporciona un ensayo altamente eficiente para la exploración de producción alta de otros compuestos que son capaces de modular la actividad de canal de ion de calcio.
Por via de ejemplo, y como se mostró en el ejemplo 5 dado abajo, un ensayo altamente eficiente para la exploración de producción alta para moléculas pequeñas se desarrolló mediante inmobilizar el FKPB, ya sea FKBP12 ó FKBP12.6 (por ejemplo, FKBP12.6 tipo silvestre o una proteina de fusión, tal como GST-FKBP12.6) sobre una placa de 96 pozos recubierta con glutionato, usando procedimientos estándar. El receptor rianodina fosforilatado -PKA (RyR) específicamente RyRl ó RyR3 en el caso de KKBP12 y RyR2 en el caso de FKBP12.6, está cargado sobre una placa recubierta de FKBP y se incubó con compuestos a varias concentraciones (10-100 nM) por 30 minutos. Después, la placa es lavada para remover el RyR no unido y después se incubó con un anticuerpo anti-RyR( por ejemplo 30 minutos) . La placa es lavada de nuevo para remover el anticuerpo anti-RyR no unido y después se trató con un anticuerpo secundario etiquetado fluorescente. La placa es leida por un lector de placa fluorescente automa 'tico para la actividad de unión.
Alternativamente, RyR es PKA-fosforilatada en la presencia de 32P-ATP. El Ryr PKA-fosforilatado radiactivo es cargado sobre una placa de 96 pozos recubierta de FKBP, en la presencia de análogos JTV-519 y otros compuestos a varias concentraciones (10-100 nM) por 30 minutos. La placa es lavada para remover el RyR radioetiquetado no unido, y después se lee por un lector de placa automático. El RyR PKA-fosforilatado también está recubierto a la placa, y se incuba con FKBP etiquetado 32S en la presencia de los compuestos.
La presente invención está descrita en los siguientes ejemplos, los cuales se establecen para ayudar al entendimiento de la invención y no deben considerarse como limitantes en ninguna manera del alcance de la invención como se define en las cláusulas que siguen después.
EJEMPLOS EJEMPLO 1- FOSFORILACIÓN PKA RYR2 Y UNIÓN KKBP12.6 Los miembros de retículo sarcoplásmico cardiaco son preparados, como se describió previamente (Marx y otros, la fosforilación PKA desasocia FKBP12.6 del canal de liberación de calcio (receptor rianodina) : regulación defectuosa en corazones que fallan. Cell, 101:365-76, 2000; Kaflan y otros, Efectos de rapacimina sobre receptor rianodina/ canales de liberación de calcio del músculo cardiaco. Circ. Res., 78:990-97, 1996). El FKBP12.635-S etiquetado fue generado usando el sistema de translación/transcripción de acoplado rápido TNT® de Promega (Madison, Wisconsin) . La lectura de [3H] rianodina es usada para cuantificar los niveles RyR2. 100 µg de microsomas son diluidos en 100 µl de 10-mM de amortiguador imidazol (pH 6.8) incubado con 250-nM (concentración final) [35S]-FKBP12.6 a 37°C por 60 minutos, después enfirado con 500 µl de amortiguador de imidazole hielo-frio. Las muestras son centrifugadas a 100,000 g por 10 minutos y se lavan tres veces en amortiguador de imidazol. La cantidad de unión [35S]-FKBP12.6 se determinó mediante la cuenta de destello liquido de la pelotilla.
EJEMPLO 2- INMUNOMANCHAS El inmunomanchado de microsoma s(50 µg) se llevó a cabo como se describió con el anti-FKBP12/12.6 (1:1,000), anti-ryR-5029 (1:3,000) (Jayaraman, y otros, Proteina de unión FK506 asociada con el canal de liberación de calcio (receptor rianodina). J. Biol. Chem., 267:9474-77, 1992), ó anti-fosfo Ryr"-P2809 (1:5,000) para 1 hora a la temperatura ambiente (Reiken y otros, los Bloqueadores-Beta restauran la fusión de canal de liberación de calcio y mejoran el desempeño de músculo cardiaco en la falla de corazón humano. Circulación, 107:2459-66,2003). El anticuerpo anti-RyR2 especifico-fosfoepitope P2809 es un anticuerpo de conejo policlonal purificado-afinidad, hecho a la mediad por Zymed Laboriatories (San Francisco, California) usando el péptido CRTRRI- (pS) -QTSQ, el cual corresponde al PKA-fosforilatado RyR2 a Ser2809. Después de la incubación con el IgG anticonejo HRP etiquetado (1:5,000 dilusión; Transduction Laboratorios, de Lexington, Kentucky) las manchas son desarrolladas usando ECL (de Amersham Pharmacia, Piscataway, New Jersey) .
EJEMPLO 3- REGISTROS DE CANAL ÚNICO Los registros de canal único de RyR2 nativo de corazones de ratón, o RyR2 recombinantes son adquiridos bajo condiciones de abrazadera-voltaje a 0 m V, como se describió previamente (Marx y otros, la fosforilación PKA desasocia el FKBP12.6 del canal de liberación de calcio (receptor rianodina): regulación defectuosa en corazones que fallan. Célula, 101:365-76,2000). Las soluciones simétricas usadas para los registros de canal son: trans-compartimento-HEPES, 250 mmol(L; Ba(OH)2, 53 mmol/L (en algunos experimentos, Ba(OH)2 se reemplaza por Ca(OH)2); pH 7.35; y cis compartimiento-HEPES, 250 mmol(L; tris-Base, 125 mmol/L; EGTA, 1.0 mmol/L; y Cacl2, 0.5 mmol/ L; pH 7.35. A menos que se indique de otra manera, los registros de canal único son hechos en la presencia de 150-nM [Ca2+] y 1.0-mM [Mg2+] en el compartimiento cis. La rianodina (5mM) es aplicada al compartimiento cis para confirmar la identidad de todos los canales. Los datos son analizados de los registros de corriente digitizados usando el software Fetchan (de Axon Instrumentos, de Union City, California) . Todos los datos son expresados como ± SE medio. La prueba de estudiante t sin par usada para la comparación estadística de valores principales entre los experimentos. Un valor de p<0.05 es considerado estadísticamente significante.
EJEMPLO 4 - COMPUESTOS Y MÉTODOS PARA SUS SÍNTESIS Esquema 1 sintesis de S3, S4, S5 y S54 El Sinthon S26 fue preparado de acuerdo a los métodos descritos en la solicitud de patente de los Estados Unidos de América número 10/680,988.
La sintesis de S3 (Esquema 1) : Para una solución agitada de ácido vinil sulfónico (22 mg, 0.2 mmol) en CH2C12 (5 mi) anhidro es agregado al cloruro de etionilo (2M en CH2C12, 0.1 mi, 0.2 mmol) . La mezcla de reacción es agitada a la temperatura ambiente durante la noche y se evaporó bajo vacio. El residuo es disuelto en CH2C12 (5 mi) . A esta solución, se agregó con gotas a 0°C una solución de S26 (20 mg, 0.1 mmol) en CH2C12 (3ml) . La mezcla de reacción es agitada a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente por otra hora y se lavó con bicarbonato de sodio saturado en ÍN HCl. Después de la remoción del solvente, el producto S3 es purificado mediante cromatografía de columna de Si02 como un aceite sin color (18 mg, 65) .
Sintesis de S4 (Esquema 1) : A una solución agitada de S26 (20 mg, 0.1 mmol) en CH2C12 (5ml) se agregó el cloruro de metilsulfonilo (26 mg, 0.2 mmol) y trietilamina (30 mg, 0.3 mmol) a 0°C. La mezcla resultante se agitó a 0°C por una hora a la temperatura ambiente durante la noche. La fase orgánica es lavada con bicarbonato de sodio saturado acuoso y se secó sobre sulfato de sodio. Después de la filtración y evaporación de los solventes orgánicos, el producto S4 es purificado mediante cromatografía de columna Si02 (25 mg de aceite, dio: 90%) . Similarmente, S5 y S54 son sintetizados en 95% y 91% de rendimientos respectivamente.
Esquema 2 : Síntesis de SI y S2 S3 Síntesis de SI y S2 (Esquema 2) : A una solución de S3 (28 mg, 0.1 mmol) en cloroformo (5 mi) se agregó 4-benzilpiperidina (18 mg, 0.1 mmol). La mezcla resultante es mezclada a una temperatura ambiente por un día. Después de la remoción del solvente orgánico, el residuo es purificado en columna de gel de sílice. El producto SI es obtenido como un aceite incoloro (34 mg, rendimiento 75%) . S2 es sintetizado en forma similar de S3 y dibutilamina en 78% de rendimiento.
Esquema 3: Síntesis de S7, S9 y S40.
Síntesis de S7, S9, S27 y S40 (Esquema 3) : A una solución agitada de ácido iodacético (37 mg, 0.2 mmol) en CH2C12 (10 mi) se agregó cloruro de tionilo (solución de 2 M en CH2C12, 0.1 mi, 0.2 mmol). La mezcla resultante es agitada a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente durante la noche. Después de la remoción del solvente, el cloruro de ácido crudo es agregado a una solución agitada de S26 (20 mg, 0.1 mmol) y trietilamina (30 mg, 0.3 mmol) en CH2C12 (10 mi) a 0°C. La mezcla es agitada a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente durante la noche. La fase orgánica es lavada con bicarbonato de sodio saturado en ÍN HCl . El producto crudo es purificado mediante cromatografía de columna para dar S7 como un aceite incoloro (34 mg, rendimiento, 95%) . En forma similar, S9 es sintetizado en 95% de rendimiento; synton S27 es sintetizado en 96% de rendimiento; y S40 es sintetizado en 91% de rendimiento usando N-hidroxisuccinimidilo 4-ácido azidosalicilico (NHS-ASA) .
Esquema 4: Síntesis de Sil y S12 S26 S11: X= 0 S12: X= S Síntesis de Sil y S12 (Esquema 4) : A una solución de S26 (20 mg, 0.1 mmol) en piridina (1 mi) se agrego el fenil isocianato (18 mg, 0.15 mmol). La mezcla resultante es agitada a la temperatura ambiente por 24 horas . Entonces es agregado el etil acetato (10 mi) y la fase orgánica es lavada con ÍN HCl y se saturó con bicarbonato de sodio. El producto Sil es purificado mediante cromatografía de columna Si02 como un sólido blanco (27 mg, rendimiento: 86%) . En forma similar, S12 es sintetizado de S26 y fenil isotiocianato en 85% de rendimiento.
Esquema 5: Síntesis de S13 y S14 S2T S13/S14 Síntesis de S13 y S14 (Esquema 5) : A S26 (20 mg, 0.1 mmol) en CH2C12 (5 mi) se agrego trietilamina (30 mg, 0.3 mmol) y cloruro de metoxifosfonilo fenilo (38 mg, 0.2 mmol) a 0°C. Después de la agitación por dos horas a la temperatura ambiente, la mezcla de reacción es lavada con bicarbonato de sodio saturado. Los isómeros son separados y purificados mediante columna de gel de sílice para dar S13 (14 mg, rendimiento: 40%) y S14 (16 mg, rendimiento: 45%) .
Esquema 6: Síntesis de S19, S22 S19: X=CH2-CH2 S22: X^? Y' Síntesis de S19 (Esquema 6) : A una solución agitada de S26 (20 mg, 0.1 mmol) y trietilamina (30 mg, 0.3 mmol) en CH2C12 (5 mi) se agregó 1,4-cloruro de butildiacido (8 mg, 0.05 mmol) a 0°C. La mezcla resultante se agitó a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente durante la noche . La fase orgánica es lavada con bicarbonato de sodio saturado y ÍN HCl y agua. Después de la remoción del solvente, el producto S19 es purificado mediante cromatografía de columna (aceite, 19 mg, 80% de rendimiento) . En forma similar S22 se preparó de 2,6 de piridilo dicarboxilico ácido dicloruro.
Esquema 7: Síntesis de S20 y S23 Síntesis de S20 y S23 (Esquema 7) : S27 (25 mg, 0.1 mmol) en MeOH (5 mi) se trató con CH2C12 (30%, 0.5ml) a la temperatura ambiente por 1 día. Después del tratamiento con solución de tiosulfato de sodio, el metanol es removido por evaporación. El residuo resultante es disuelto en etil acetato (10 mi) y se lavó con carbonato de sodio saturado. Después del secado sobre el sulfato de sodio, el solvente es evaporado para proporcionar un producto crudo el cual es purificado mediante cromatografía de columna de gel de sílice para dar S20 como aceite incoloro (16 mg, 60% de rendimiento) . En forma similar S23 es sintetizado de S10.
Esquema 8: Síntesis de S36, S43, S44, S45, S57, S59 Síntesis de S36 y S57 (Esquema 8) : A una solución agitada de S26 (0.85g, 4.4mmol) y piridina (0.70g, 8.8mmol) en CH2C12 (50 mi) a 0°C se agregó clorooxoacetato de metilo con goteo (0.81 g, 6.6mmol). La mezcla de reacción es agitada a 0°C por dos horas y después se lava con bicarbonato de sodio saturado, ÍN HCl, y agua. La cromatografía de columna de gel de sílice proporciona S57 como un sólido blanco (l.lg, rendimiento de 90%). S57 (l.lg, 3.9 mmol) es disuelto en metanol (lOml) y entonces una solución de hidróxido de sodio (0.3g, 7.5 mmol) en agua (10 mi) es agregado. La mezcla de reacción es agitada a la temperatura ambiente por una hora. Después de que el solvente es removido, el residuo es disuelto en agua (10 mi) y se lavó con éter (2 x 10 mi) . La fase acuosa es acidificada en ÍN HCl a un pH = 2. El producto es extraído con CH2C12 (2 x 20 mi) . La remoción del solvente da el producto S36 como un sólido blanco (l.Og, rendimiento de 100%) . El producto puede además ser purificado por recristalización. S38 es sintetizado similarmente (vea la lista de estructura) .
Síntesis de S43, S44, S45 y S59 (Esquema 8): S36 (150 mg, 0.56 mmol) es tratado con cloruro de tionilo (5 mi) la temperatura ambiente durante la noche . Después de la remoción del cloruro de tionilo de exceso, el producto crudo S36-C1 es disuelto en CH2C12 (10 mi) y, a esta solución, son agregados la cistamina mono-Boc protegida y piridina (0.2 mi, 196 mg, 2.48 mmol) son agregados a 0°C. La mezcla de reacción es agitada a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente durante la noche y se enfría con bicarbonato de sodio saturado. La fase orgánica es separada y el solvente es removido para dar S36-cistamina intermedia, la cual es purificada mediante cromatografía de columna Si02 en un rendimiento de 80%. La desprotección del grupo-Boc es lograda con ácido trifluoroacético en CH2C12, y la S36-cistamina desprotegida es usada para la síntesis de S43 y S45 mediante la reacción de éster activado con NHS de compuestos azido. El rendimiento es de 75% para S43 y de 80% para S45.
S44 es sintetizado como un producto derivado de la siguiente reacción: S36 (50 mg, 0.19 mmol) es tratado con cloruro de tionilo (2ml) a la temperatura ambiente durante la noche. Después de la remoción del exceso de cloruro de tionilo, el producto crudo es disuelto en CH2C12 (5ml) . A esta solución, se le agrega cistamina (134 mg, 0.88 mmol) y piridina (98 mg, 1.23 mmol) en CH2C12 (lO l) y la mezcla de reacción es agitada a la temperatura ambiente durante la noche. S44 es purificado mediante columna como un sólido blanco (20 mg, 16%) . En forma similar, S57 y S59 son sintetizados por reacción de S36-C1 con metanol ó etilamina (Esquema 8) .
Esquema 9: Síntesis de análogos a base de urea S6, S46-S53, S64, S66, S67 CHjíP Síntesis de análogos a base de urea S6, S46-S53, S64, S66, S67 (Esquema 9). S26 (195 mg, 1.0 mmol) en CH2C12 (20ml) es agregado a 4-nitrofenilo cloroformiato (220 mg, 1.1 mmol) y trietilamina (120 mg, 1.2 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción es agitada por dos horas a la temperatura ambiente y es lavada con agua. La remoción de los solventes, seguida por la purificación usando cromatografía de columna proporciona el compuesto S37 (330 mg, 91%). La reacción de S37 (36 mg, 0.1 mmol) con un equivalente de amina en DMF (3ml) durante la noche proporciona compuestos a base de urea en un rendimiento de >60% después de la purificación mediante cromatografía de columna Si02. Alternativamente, los compuestos a base de urea pueden ser sintetizados a través de S26-fosgeno intermedio versátil y más reactivo mostrado en el Esquema 9.
Esquema 10: Síntesis de S55, S56, S58, S60-S63 Síntesis de S55, S56, S58, S60-S63 (Esquema 10) : La mezcla de reacción de S27 (25 mg, 0.1 mmol) y 4- (4-aminobenzilo) piperidina (19 mg, 0.1 mmol) en cloroformo (5ml) es agitado a la temperatura ambiente durante dos días.
Después de la remoción del solvente, el producto S60 es purificado mediante cromatografía de columna de gel de sílice como un sólido blanco (36 mg, rendimiento 90%) . El S55, S56, S58 y S61-S63 similarmente son sintetizados de acuerdo al método descrito arriba.
Experimento para nuevos compuestos Esquema 11: Síntesis de análogos a base de urea S69-S75 Los análogos S69-S75, no teniendo grupos de metoxilo sobre el anillo de benzeno (R=H en la fórmula I) , son sintetizados como se mostró en el esquema 11 de una manera similar a aquélla empleada en la síntesis de S46-S53 (vea el Esquema 9) . La síntesis empieza con el S68 comercialmente disponible e involucra el S68-fosgeno intermedio versátil para proporcionar S69-S75 en un rendimiento de 60-95%.
Esquema 12: Síntesis de S76-S81 S76 S77 S77-CI S78: X*NHEtS79: X=NHPh S80: NH2 S8t: X=NHCH2-p íWlp? Esquema 13: Síntesis de S82-S84 Por analogía la síntesis de S36, S43-S45, S57 y S59 (Esquema 8) , S76-S81 son sintetizados de S68 comercialmente disponible como se mostró en el esquema 12 en un rendimiento de 70-95%. Usando el S68 como material de inicio, los compuestos S82, S83 y S84, como se mostraron en el Esquema 13, también son sintetizados similarmente a los compuestos los cuales tienen un grupo metoxi sobre el anillo de benzeno (R=4-OCH3 en la fórmula I) Esquema 14: Síntesis de S88-S93 S92: R=CN S93: R=PhCH2NH Síntesis de S85-S93 se logra como se mostró en el esquema 14. Los siguientes son ejemplos de la síntesis.
Síntesis de S85: Una solución de S26 (10 mmol), di-tert-butil dicarbonato (11 mmol) , y trietilamina (12 mmol) en diclorometano (100 mi) es mezclado a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción es lavada con solución de bicarbonato de sodio saturado (lOml) y la capa acuosa es extraída con diclorometano (2 x 15 mi) . Las capas orgánicas combinadas son secadas sobre sulfato de magnesio y concentradas bajo vacío para proporcionar S85 como aceite incoloro (2.90g, 98% de rendimiento).
Síntesis de S86: A una solución de S85 (2.36 g, 8 mmol) en diclorometano (lOOml) a -78 °C se agregaron BBr3 (1.0 M solución en diclorometano) (18 mi, 18 mmol) con gotero. La solución es calentada a la temperatura ambiente y la mezcla de reacción es enfriada con metanol (lOOml) y se concentró bajo vacío. El producto S86 es purificado mediante cromatografía de columna.
Síntesis de S87: A una solución de S86 (6 mmol) en diclorometano (40ml) a 0°C se agregó trietilamina (7 mmol) seguido por el anhídrido de trifluorometilsulfonilo (7 mmol) . La solución es agitada a la temperatura ambiente por 30 minutos, y la mezcla de reacción es enfriada con agua (10 mi) . La capa acuosa es extraída con diclorometano (2 x 15 mi) , y las capas orgánicas combinadas son secadas sobre sulfato de magnesio y concentradas bajo vacío. El producto crudo es purificado mediante cromatografía de centelleo de gel de sílice para proporcionar S87 en un rendimiento de 75%.
Síntesis de S88: Una mezcla de S87 (1 mmol), morfolino (8 mi), tris (dibenzilideneacetona) dipalladio (0) (5 mol%) , 2- (di-tert-butilfosfino) -bifenilo (20 mol%) , y fosfato de potasio (1.2 mmol) es calentado a 80°C en un tubo sellado por 12 horas. La mezcla de reacción es enfriada a la temperatura ambiente, diluida con diclorometano (50 mi) , y lavado con agua (10 mi) . La capa acuosa es extraída con diclorometano (2 x 15 mi) , y las capas orgánicas combinadas son secadas sobre sulfato de magnesio secado y concentradas bajo vacío. El producto crudo es purificado por cromatografía de centelleo de gel de sílice para dar S88 en un rendimiento de 81%.
Síntesis de S89: Una solución de S87 (1 mmol), benzenetiol (2 mmol) e i-Pr2NEt (2 mmol) en CH3CN (20 mi) es calentado a 80°C por 18 horas. Después del enfriamiento, es agregado el etil acetato (30 mi) y después se lavo con ÍN HCl, agua y entonces ÍN NaoH. Después del secado con Na2S04, la solución fue concentrada. El producto S89 fue purificado mediante cromatografía en 59% de rendimiento. Alternativamente, S89 es sintetizado mediante el reflujo de S87 con benzetiol en dioxano por 10 horas usando i-Pr2NEt/Pd2 (dba) 3/xantfos como catalizador.
Síntesis de S90: A una solución de S87 (1.0 mmol) en dioxano (10 mL) son agregados K2C03 (2 mmol) , ácido fenilboronico (1 mmol), y (Pd(Ph3P)4 (0.11 mmol), y la mezcla es agitada a 90°C por 16 horas. La mezcla de reacción es enfriada a 25°C, diluida con CH2C12 (30 mL) , lavado con agua (10 mL) , y la fase orgánica es evaporada al secado bajo vacío. La purificación mediante cromatografía de columna da S90 en 40% de rendimiento.
Síntesis de S92: A una solución de S87 (1.0 mmol) en DMF (5 mL) son agregados cianido de zinc (1 mmol) y Pd(Ph3P)4 (0.11 mmol). La mezcla de reacción es agitada a 100°C por una hora, seguido por el enfriamiento, dilución con agua (50 mL) y 2 M de ácido sulfúrico (5 mL) , y extracción con EtOAc (3x) . Los extractos orgánicos combinados son lavados con salmuera (2x) , secado sobre sulfato de magnesio, filtrados y evaporados bajo vacío. El producto S92 es purificado con cromatografía de columna de gel de sílice en un rendimiento de 80%.
Esquema 15: Síntesis de S94-S100 Síntesis de S94: A una solución de S86 (1 mmol) en CH2C12 (10 mi) se agregaron a 0°C el anhídrido acético (1.2 mmol) y trietilamina (1.3 mmol) . La mezcla de reacción es agitada a la temperatura ambiente durante la noche, después se lavó con H20. Después del secado con Na2S04, el solvente es evaporado y el producto S94 (98% de rendimiento mediante NMR) es usado para la siguiente reacción sin una purificación adicional .
Síntesis de S95 : A una solución agitada de S84 (0.5 mmol) en benzeno (20 mi) es agregado A1C13 anhidro (0.6 mmol) con goteo. La mezcla de reacción es reflujada por 5 horas y vertida sobre hielo triturado (10 g) . Después de la extracción y concentración, el producto S95 es purificado mediante cromatografía de columna de gel de sílice en 83% de rendimiento.
Síntesis de S96 : A una solución de S86 (0.1 mmol) en metanol (5 mi) es agregado Nal (10 mg exceso) y cloramina-T (0.3 mmol). La mezcla de reacción es agitada por 30 minutos y enfriada con una solución de Na2S203. El solvente es evaporado. El producto es purificado mediante cromatografía de columna de gel de sílice con una mezcla de productos mono-iodinatados ó di-iodinatados en un rendimiento combiando de 60%.
Síntesis de S97 : S86 (3 mmol) es agregado a H2S04 concentrado (2 mi) . A la mezcla agitada se agrega, lentamente, el HN03 concentrado (2 mi) con goteo. Después de 10 minutos, la mezcla de reacción es vertida sobre el hielo triturado (5 g) y neutralizado con Na2C03 a pH=7. El intermedio nitro Boc-desprotegido es recolectado por extracción con EtOAc y convertido de regreso a S97 por reacción con Boc20. La purificación mediante cromatografía de columna de gel de sílice proporciona el S97 en un rendimiento de 78%.
Síntesis de S98: Una mezcla de S97 (2 mmol) y 10% Pd/C (0.1 g) en metanol (20 mi) es burbujeado a través con gas H2 por 2 horas. Después del filtrado y la concentración, el producto amina es usado para las siguientes reacciones sin una purificación adicional.
Síntesis de S99 y SlOO: S98 (1 mmol) es disuelto en HCl acuoso (2 mmol HCl, lOml H20) . A esta solución es agregado a 0°C lentamente una solución de nitrato de sodio (1 mmol) en agua (5 mi) . La mezcla de reacción es agitada a 0°C por una hora, después el NaN3 (2 mmol) en agua (2 mi) es agregado con goteo a 0°C. La mezcla resultante es agitada a 0°C por una hora y a la temperatura ambiente durante la noche. El producto es extraído con etil acetato y lavado con bicarbonato de sodio saturado y agua. La capa orgánica es secada sobre el sulfato de sodio anhidro y es concentrada para dar un producto crudo S98. La purificación de columna sobre gel de sílice proporciona el producto en 71% de rendimiento. En forma similar, S99 es sintetizado en 60% de rendimiento.
Síntesis de SlOl, S102, y S103 (también mencionado aquí como ARM101, ARM102, y ARM103, respectivamente) puede ser lograda como se mostró en el esquema 16. Los siguientes son ejemplo de las síntesis.
Esquema 16: Síntesis de ARM101, ARM102, y ARM103 a)N-Boc1 . piperazina b)TFA Síntesis de SlOl: Una solución de S68 (165 mg. 1 mmol) en CH2C12 (50 mi) fue enfriado a 0°C. A esta solución, fueron agregados el trifosgeno (150 mg, 0.5 mmol) y piridina (0.5 mi. de exceso) y se agitaron a 0°C por 1 hora. Sin purificación, el S68-fosgeno resultante en la mezcla de reacción fue tratado con 1-piperonilpiperazina (233 mg, 1.1 mmol) a 0°C. Después de la agitación a 0°C por 1 hora, la mezcla de reacción fue lavada con H20 (2 x 10 mi) , ÍN HCl (2 x 10 mi) y se saturo con NaHC03 (2 x 10 mi) , y los solventes fueron removidos bajo presión reducida. La purificación mediante cromatografía de columna Si02 proporcionó ARM101 teniendo un rendimiento de 80%. La estructura del producto fue confirmada por resonancia magnética nuclear (NMR) , espectroscopia de masa (MS) y/o mediante análisis elemental.
Síntesis de S102: S102 fue sintetizado de S68 usando el mismo método empleado para sintetizar SlOl, con la excepción de que la piperidina fue usada en lugar de 1-piperonilpiperazina. La estructura del producto fue confirmada mediante resonancia magnética nuclear (NMR) , espectroscopia de masa (MS) y/o mediante análisis elemental.
Síntesis de S103: S103 fue sintetizado de S68 usando el mismo método usado para sintetizar SlOl, con la excepción de que N-Boc 1-piperazina fue usado en lugar de 1-piperonilpiperazina, y en un paso subsecuente el grupo Boc fue desprotegido usando el ácido trifluoroacético (TFA) . La estructura del producto fue confirmada mediante resonancia magnética nuclear (NMR) , espectroscopia de masa (MS) y/o mediante análisis elemental.
Esquema 17: Síntesis de ARM104 Síntesis de S104 (ARM104) puede ser lograda como se mostró en el esquema 17. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis. Una mezcla ARM036 (S36) (27 mg, 0.1 mmol), 50% H202 (1 mi) , y MeOH (3 mi) fue agitado a la temperatura ambiente por dos días para generar el producto ARM104. La espectroscoía de masa (MS) fue usada para vigilar la desaparición de ARM036 y la apariencia del producto ARM104. Los solventes fueron removidos bajo presión reducida, y el producto fue purificado mediante re-cristalización. El rendimiento final fue de 26 mg de ARM104 a una pureza de 85%. La estructura del producto final fue determinada por resonancia magnética nuclear (NMR) y/o MS .
Esquema 18: Síntesis de ARM105 Síntesis de S105 (ARM105) puede ser lograda como se mostró en el esquema 18. Lo siguiente es un ejemplode la síntesis: A una solución agitada de S68 (80 mg, 0.48 mmol) y piridina (0.1 mi, en exceso) en CH2C12 (50 mi) a 0°C, CH30-C(0)C(0)C1 (70 mg, 0.58 mmol) fue agregado con goteo. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C por 2 horas y lavada con ÍN HCl, se saturó con bicarbonato de sodio y agua. La remoción de los solventes y la purificación mediante cromatografía de columna Si02 fue llevada a cabo para producir el producto ARM105 como un sólido blanco (rendimiento: 95 mg, 94%) Esquema 19: Síntesis de ARM107 NaBCNH3 S"' 5326 Arm107 Síntesis de S107 (ARM107) puede ser lograda como se mostró en el esquema 19. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: A S26 (180 mg, 0.92 mmol) en MeOH (20 mi) fueron agregados 30% de solución de CH20 (1.5 mi en exceso) y cianoborohidrido de sodio (NaBCNH3) (0.4 g en exceso). La mezcla de reacción fue agitada a la temperatura ambiente, y el pH de la solución fue mantenido a alrededor de 1 pH de 4-5 mediante la adición de unas cuantas gotas de ÍN HCl. Después de 3 horas, los solventes fueron removidos bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en 20 mi de etil acetato y se lavaron con H20 y se saturaron con NaHC03 (2 x 10 mi) . Los solventes fueron removidos y el ARM107 fue purificado mediante cromatografía de columna Si02 para dar un rendimiento: 170 mg, 93%.
Esquema 20: Síntesis de ARM108 Síntesis de S108 (ARM108) puede ser lograda como se mostró en el esquema 20. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una mezcla de N-benziloxicarbonilo-glicina (Cbz-Gly, 129 mg, 0.61 mmol), Diisopropilo-carbodiimida (DIC, 90 mg, 0.71 mmol), N-hydroxisuccinimida (NHS, 70.4 mg, 0.71 mmol) en CH2C12 (50 mi) fue agitado a 0.5 horas a temperatura ambiente. A esta mezcla fue agregado S26 (100 mg, 0.51 mmol) y la mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante la noche. Después de lavado con 1NC1 (2 x 10 mi) y saturado con la solución NaHC03 (2 x 10 mi) , los solventes fueron removidos por evaporación. El producto ARM108 fue purificado mediante cromatografía de columna Si02 para dar un rendimiento de 120 mg, 61%.
Esquema 21: Síntesis de ARM109 Arm108 Arm109 Síntesis de S109 (ARM109) puede ser lograda como se mostró en el esquema 21. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: ARM108 (40 mg, 0.1 mmol) en CH2C12 (5 mi) fue tratado con 1 mi de 30% de HBr/ CH3C02H. Después de la agitación a la temperatura ambiente durante la noche, la mezcla de reacción fue evaporada bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en MeOH (3 mi) y se trató con óxido de propileno (1 mi) . Los solventes fueron removidos bajo presión reducida para proporcionar ARM109 crudo el cual fue además purificado mediante la disolución en una solución de 0.15 N HCl H20 (3.5 mi) , seguido por el lavado con etil acetato (3 mi) y evaporación. El rendimiento de ARM109 fue de 28.3 mg, 95% (polvo blanco, sal HCl) .
Esquema 22: Síntesis de ARM110 S2G Arm110 Síntesis de SllO (ARM110) puede ser logrado como se mostró en el esquema 22. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una mezcla de S26 (100 mg, 0.51 mmol) y metilo 1-bromoacetato (100 mg, 1,2 eq.) y piridina (50 mg) en DMF (5ml) fue agitado a la temperatura ambiente durante la noche. A esta mezcla, el etil acetato (50 mi) fue agregado y se lavó con una solución de NaHC03 (2 x 10 mi) y H20 (2 x 10 mi) . El producto ARM110 como un aceite fue purificado mediante cromatografía de columna Si02, para dar un rendimiento de 32 mg, 23%.
Esquema 23: Síntesis de ARM111 Síntesis de Slll (ARM111) puede ser logrado como se mostró en el esquema 23. Lo siguiente es un ejempoo de la síntesis: A una mezcla de ARM110 (16 mg, 0.06 mmol) en MeOH (2 mi) fue agregado a ÍN de NaOH (0.1 mi) y la mezcla fue agitada a la temperatura ambiente durante la noche . Los solventes fueron removidos bajo presión reducida y fue disuelto en H20 (10 mi) . La fase acuosa fue lavada con etil acetato (2 x 5 mi) y acidificada con ÍN HCl a pH=4. La remoción de los solventes bajo presión reducida proporcionó ARM111 crudo, el NaCl fue removido usando etanol para dar ARM111 puro como sólido, teniendo un rendimiento de 13mg, 87%.
Esquema 24: Síntesis de ARM112 Síntesis de S112 (ARM112) puede ser logrado como se mostró en el esquema 24. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: A una mezcla de S26 (100 mg, 0.51 mmol) y piridina (100 mg) en CH2C12 (20 mi), fue agregado el S02C12 (89 mg, 1.2 eqquivalente) con goteo a 0°C y se agitó a la temperatura ambiente durante la noche. Los solventes fueron removidos bajo presión reducida y el residuo fue disuelto en 5.5 mi de solución de NaOH (5 mi de H20 + 0.5 mi ÍN de NaOH) . La solución de agua fue lavado con etil acetato (2 x 5 mi) , y acidificada con ÍN de HCl a pH4. La fase acuosa fue extraída con etil acetato (3 x 5 mi) y la fase de etil acetato fue evaporada bajo presión reducida para proporcionar ARM112, como polvo, con un rendimiento de 9 mg.
Esquema 25 : Síntesis de ARM113 Síntesis de S113 (ARM113) puede ser lograda como se mostró en el esquema 25. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: ARM107 (45 mg, 0.21 mmol) en etil acetato (2 mi) fue tratado con CH3I (200 mg, exceso) . La mezcla fue agitada a la temperatura ambiente durante la noche y el producto ARM113, como sólido blanco, fue recolectado por filtración para dar un rendimiento de 69 mg, 97%.
Esquema 25A: Síntesis de ARM114 Síntesis de S114 (ARM114) puede ser logrado como se mostró en el esquema 25A. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis S26 (195 mg, 1 mmol) en CH2C12 (50 mi) fue enfriado a 0°C. A esta solución, el trifosgeno (150 mg, 0.5 mmol) y el piridino (0.5 mi. exceso) fueron agregados y agitados a 0°C por una hora. Sin purificación, el fosgeno S26 resultante en la mezcla de reacción fue tratado con N-Boc 1-piperazina (200 mg, 1.1 mmol) a 0°C. Después de la agitación a 0°C por 1 hora, la mezcla de reacción fue lavada con H20 (2 x 10 mi) , ÍN HCl (2 x 10 mi) , y se saturó con NaHC03 (2 x 10 mi) y los solventes fueron removidos bajo presión reducida. La purificación de cromatografía de columna Si02 proporcionó ARM114 con un rendimiento de 80%.
Esquema 26: Síntesis de ARM115 Síntesis de S115 (ARM115) puede lograrse como se muestra en el esquema 26. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una mezcla de ARM114 (200 mg, 0.49 mmol) y el reagente Lawesson (400 mg) en tolueno (50 mi) fueron agitados a 90°C por 5 horas. La mezcla fue enfriada a la temperatura ambiente y lavada con NaHC03 saturado (2 x 20 mi) . El producto ARM115 fue purificado mediante cromatografía de columna Si02 para dar un rendimiento de 160 mg, 75%.
Esquema 27: Síntesis de ARM116 Síntesis de S116 (ARM116) puede lograrse como se mostró en el esquema 27. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una mezcla de ARM115 (10 mg, 0.02 mmol) y ácido trifluoroacético (TFA, 0.5 mi) en CH2C12 (10 mi) fue agitado a temperatura ambiente por 2 horas. La evaporación de los solventes bajo presión reducida produjo ARM116 con un rendimiento de 6 mg, 92%.
Esquema 28: Síntesis de ARM117 Síntesis de S117 (ARM117) puede lograrse como se mostró en el esquema 28. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una solución de ARM057 (200 mg, 0.71 mmol) en CH2C12 (20 mi) fue enfriada a -78°C. Para esto, 1M BBr3 en CH2C12 (1 mi) fue agregado y la mezcla fue agitada a -78°C por 3 horas y después se entibió a la temperatura ambiente durante la noche. La mezcla fue lavada con ÍN HCl (2 x 10 mi) y H20 (1 x 10 mi) . Después de la remoción de los solventes, el producto ARM117 fue purificado por cromatografía de columna Si02 para dar un rendimiento de 60 mg, 33%.
Esquema 29: Síntesis de ARM118 Síntesis de S118 (ARM118) puede ser logrado como se mostró en el esquema 29. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: S26 (3.6 mg, 0.018 mmol) en CH2C12 (3 mi) fue tratado con BODIPY TMR-X, SE (Molecular Probes Inc.) (4 mg, 0.006 mmol) por 3 horas. La mezcla fue lavada con 0.01 N HCl (2 x 1 mi) y saturado con NaHC03 (2 x 1 mi) . La remoción de los solventes bajo presión reducida produjo ARM118 puro (98%) .
Esquema 30: Síntesis de ARM119 Arm107 Arm119 Síntesis de S119 (ARM119) puede ser logrado como se mostró en el esquema 30. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: Una mezcla de ARN 107 (50 mg, 0.24 mmol), 50% de H202 (1 mi), MeOH (3 mi) fue agitada a la temperatura ambiente por dos días (espectrometría de masa fue usada para vigilar la desaparición de ARM 107 y la formación del producto) . Los solventes fueron removidos bajo presión reducida para dar ARM 110, teniendo un rendimiento de 26 mg, 45%.
Esquema 31: Síntesis de ARM 120 y ARM 121.
La Síntesis de S120 (ARM 120) y S121 (ARM 121) puede ser lograda como se mostró en el esquema 31. Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: una mezcla S26 (195 mg, 1 mmol), bromuro de bencilo (1.1 mmol) y Na2C03 (10 mmol) en DMF (10 mi) fue agitada durante la noche. El etil acetato (30 mi) fue agregado a la reacción y después la reacción fue lavada con H20 (4x10 mi) . La fase orgánica fue concentrada bajo presión reducida y el residuo fue purificado por cromatografía de columna para dar S121 como un polvo blanco, con un rendimiento de 280 mg a 98%. S120 fue sintetizado similarmente mediante el uso de 4-OH-bencilo bromuro en vez de bromuro de bencilo.
La Síntesis de S122 (ARM 122) (LB 21300-30) . El siguiente es un ejemplo de la síntesis: a una solución fría del compuesto S26 (250 mg, 1.28 mmol, 1 equivalente) en CH2C12 (50 mi) a 0o C fue agregado el DIEA (0.67 mL, 3.8 mmol, 3.0 equivalente). Seguido por cloruro de acetoxiacetilo (0.17 mL, 1.58 mmol, 1.24 equivalente), después la muestra de reacción fue agitada a 0o C por 20 minutos, se diluyó con 1.0 ?f de HCl solución acuosa (100 mL) y se extrajo mediante CH2C12 (3 x 50 mL) . Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas (H20, salmuera) fueron secadas (Na2S04) , filtradas y evaporadas para secado. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía con columna de gel de sílice, se elutó con un ingrediente incrementando en polaridad de desde 0 a 50% de petróleo en metil acetato. Las fracciones relevantes fueron combinadas para dar el compuesto deseado (350 mg, 93%) .
La Síntesis de S123 (ARM 123) (LB 21300-34) . Lo siguiente es un ejemplo de la síntesis: a una solución del compuesto S122 (287 mg, 0.97 mmol, 1 equivalente) en MeOH (5 mL) y el THF (8 mL) a 23° C fue agregado a LiOH (140 mg, 3.33 mmol, 3.44 equivalente en H20 5 mL) . La mezcla de reacción fue aplicada a 23° C por 20 minutos, se diluyó con 1.0 M de solución acuosa de HCl (100 mL) y se extrajo mediante CH2C12 (3 x 50 mL) . Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas (H20, salmuera), secadas (Na2S04) , filtradas y evaporadas al secado. El producto crudo fue purificado mediante cromatografía sobre columna de gel de sílice, se elutó con un ingrediente aumentando en polaridad de desde 0 a 70% de petróleo en metil acetato. Las fracciones relevantes fueron combinadas para dar S123 (244 mg, 100%) .
EJEMPLO 5 - MÉTODO DE FILTRADO DE PRODUCCIÓN ALTA Los ensayos para filtrar las moléculas pequeñas biológicamente activas se han desarrollado. Estos ensayos son basados sobre la reunión de la proteína FKBP 12 a RyR.
Un ensayo altamente eficiente para filtrar la producción alta para moléculas pequeñas se desarrolló mediante la inmovilización de FKBP 12.6 (proteína de GST-fusión) sobre una placa de 96 pozos recubierta con glutationa. El receptor de ryanodina fosforilatado con PKA tipo 2 (RyR2) está cargado sobre la placa recubierta con FKBP 12.6, y se incubó con JTV-519 análogo a varias concentraciones (10-100 nM) por 30 minutos. Después, la placa es lavada para remover el RyR2 no unido, y después se incubó con el anticuerpo anti-RyR2 por 20 minutos. La placa de nuevo es lavada para remover el anticuerpo anti-RyR2 no unido y después se trató con un anticuerpo secundario etiquetado-fluorescente . La placa es leída por un lector de placa fluorescente automático respecto de la actividad de unión- .
En un ensayo alterno, RyR2 es PKA-fosforilatado en la presencia de 32P-ATP. El RyR2 PKA fosforilatado radioactivo es cargado sobre la placa de 96 pozos recubierta de FKBP 12.6 en la presencia de análogos de JTV-519 a varias concentraciones (10-100 nM) por 30 minutos. La placa es lavada para remover el RyR2 radioetiquetado no unido y después leído por el lector de placa automático.
EJEMPLO 6 - EFECTO DE COMPUESTOS ARM 036 SOBRE CORRIENTES hERG Los efectos de los compuestos de la invención sobre corrientes hERG fueron estudiados usando las células de riñon embriónico humano cultivadas 293 (KEK 293) las cuales se habían transferido establemente con hERG cADN. Las células HEK 293 no expresan hERG endógeno. Las células HEK 293 fueron transfectadas con un plásmido conteniendo el hERG cADN y un gen de resistencia de neomicina. Los transfectantes estables fueron seleccionados mediante el cultivo de células en la presencia de G418. La selección de presión fue mantenida mediante el cultivo continuado en la presencia de G418. Las células fueron cultivos en el medio Eagle modificado/nutriente Mizture F-12 (D-MEM/F-12) de Dulbecco complementado con 10% de suero bovino fetal, 199U/ml de penicilina G de sodio, 10 µg/mL de sulfato estreptomicina y 500 µg/mL G418. Las células para el uso en electrofisiología fueron cultivadas en platos de 35 milímetros .
Los registros electrofisiológicos (usando el método de abrazadera de parche de célula completo) fueron llevados a cabo a la temperatura ambiente (18° C-24° C) . Cada célula actuó como su propio control. El efecto de ARM0036 fue evaluado a dos concentraciones: 10 y 100 µM. Cada concentración fue probada en por lo menos tres células (n > 3) . 90 nM de Cisapride (comercialmente disponible de TOCRIS Bioscience) fue usado como un control positivo para el bloqueo hERG. Para el registro, las células fueron transferidas a la cámara de registro y se súper fusionaron con la solución de control de vehículo. La solución de pipeta de parche para todo el registro de célula contuvo 130 mM de aspartato de potasio, 5 mM de MgCl2, 5 mM de EGTA, 4 mM de ATP y 10 mM de HEPES. El pH fue ajustado a 7.2 con KOH. La solución de pipeta fue preparada en cargas, en partes alícuotas y almacenada congelada. Una parte alícuota fresca fue descongelada y usada cada día. Las pipetas de parche fueron hechas de tubo capilar de vidrio usando un jalador de micropipeta P-97 (de Sutter Instruments, de Novato, California) . Un amplificador de abrazadera de parche comercial fue usado para los registros de célula completos. Antes de la digitación, los registros de corriente fueron filtrados de paso bajo a un quinto de la frecuencia de muestreo.
El inicio y el bloque de estado estable de corriente hERG fue medido usando un patrón de pulso con amplitudes fijas (prepulsación de acondicionamiento: +20 mV por 2 segundos; pulsación de prueba: _50 mV por 2 segundos) repetido a intervalos de 10 segundos desde potencial de retención de -80 mV. La corriente de cola pico fue medida durante el paso de 2 segundos a _50 mV. Un estado estable fue mantenido por lo menos por 30 segundos antes de aplicar el compuesto de prueba o el control positivo. La corriente de cola pico fue vigilada hasta que fue logrado un nuevo estado estable. Las concentraciones del compuesto de prueba fueron aplicadas acumulativamente en orden ascendiente sin el lavado entre aplicaciones.
La adquisición de análisis de datos se llevó a cabo usando el juego de programas pCLAMP (Vre. 8.2) (de Axon Instruments, de Union City, California) . El estado estable fue definido por la tasa constante limitante de cambio con el tiempo (dependencia de tiempo lineal) . El estado estable antes y después de la aplicación de los compuestos de prueba de control fue usado para calcular el porcentaje de corriente inhibida en cada concentración. Los datos de respuesta-concentración fueron ajustados a una ecuación de la forma: % Bloque = {1-1/[Prueba]/IC50)N]}x100 en donde [Prueba] es la concentración del compuesto de prueba, ICS0 (concentración inhibitoria 50) es la concentración del compuesto de prueba produciendo la inhibición media-máxima, N es el coeficiente Hill, y el por ciento bloque es el porcentaje de corriente hERG inhibida en cada concentración del compuesto de prueba. Los ajustes cuadrados no lineales fueron resueltos con el agregado Solver para Excel 2000 (Microsoft, Redmond, Washington) . Para algunos compuestos no fue posible determinar el IC50 debido a la concentración más alta del compuesto de prueba que se usó que no bloqueó el canal hERG por 50% o más.
EJEMPLO 7 - EFECTO DE VARIOS COMPUESTOS SOBRE CORRIENTES hERG Los compuestos múltiples de la invención fueron probados por sus efectos sobre las corrientes hERG. Los compuestos probados fueron ARM036-Na ARM047, ARM048, ARM050, ARM057, ARM064, ARM074, ARM075, ARM076, ARM077, ARM101, ARM102, ARM103, ARM104, ARM106, ARM107 y ARM26. Por vía de comparación, el efecto JTV-519 (mencionado en las figures como ARMOXX) sobre las Corrientes hERG también se probaron. Los registros electrofisiológicos fueron hechos usando el sistema de abrazadera de parche paralelo automático PatchXpress 7000A (dispositivos moleculares) . Cada compuesto fue probado a 0.01, 0.1, 1 y 10 mM, con cada concentración probada en 2 células (n > 2) . La duración de la exposición a cada concentración de prueba fue de 5 minutos. Otros aspectos de los protocolos experimentales fueron esencialmente similares a aquellos descritos en el ejemplo 6. Para algunos de los compuestos o fue posible el determinar el IC50 debido a la concentración más alta del compuesto de prueba usado que no bloqueó el canal hERG por 50% o más.
Todas las publicaciones, referencias, patentes y solicitudes de patentes citadas aquí son incorporadas por referencia en su totalidad en la misma extensión como si cada solicitud individual, patente o solicitud de patente fuera especificada e indicada individualmente para ser incorporada por referencia en su totalidad.
Aún cuando la invención anterior ha sido descrita en algún detalle para propósitos de claridad y entendimiento, se apreciará por un experto en el arte, de una lectura de la descripción, que pueden hacerse varios cambios en la forma y detalles sin departir del verdadero alcance de la invención en las reivindicaciones anexas.

Claims (33)

    R E I V I N D I C A C I O N E S
  1. A compuesto de la fórmula I : (Fórmula I) o una sal farmacéuticamente aceptable por tanto, en donde : n es 0, 1, o 2; q es 0, 1, 2, 3, o 4; cada R es independientemente halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, -0S(=0)2CF3, acilo, -O-acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilarilamino, alquilthio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicliloalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) arilthio, o (hetero-) arilamino; en donde cada acilo, -O-acil, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquilariloamino, alquilthio, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicliloalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) arilthio, y (hetero-) arilamino puede ser sustituido; Rx es H, oxo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, o heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, y heterociclilo puede ser sustituido; R2 es H, -C(=0)R5, -C(=S)R6, -S02R7, -P(=0)R8R9, - (CH2)m-R10, alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, o heterociclilo; en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, y heterociclilo puede ser sustituido; m es O, 1, 2, 3, 4, 5, 5, 7, u 8; R3 es H, -C02Y, -C(=0)NHY, acilo, -O-acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, o heterociclilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, o heterociclilo puede ser sustituido; Y es H, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, o heterociclilo; y en donde cada alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, y heterociclilo puede ser sustituido; R4 es H, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo; en donde cada alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, heteroarilo, y heterociclilo puede ser sustituido; o uno o más de R, R1# R2, R3, o R4 comprende un grupo de etiquetado fluorescente, biolu iniscente, quimoluminiscente, colorimétrico o radioactivo; Rs es -NR1SR16, es alquilo sustituido con -NR15R16, -NHNR1SR16, -NHOH, -OR15, -C (=0) NHR15R16, -C02R15, -C (=0) NR15R16 , -CH2X, acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, o heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquilo, alquenilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; R6 es -0R1S, -NHNR15R16, -NHOH, -NR15R16, -CH2X, acilo, alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, o heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alquilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; R7 es -0R15, -NR15R16, -NHNR15R16, -NHOH, -CH2X, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo o heterocicliloalquilo; en donde cada alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; R8 y R9 independientemente son OH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo o heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; R10 es-NR15R16 , -OH , -SOaR11 # -NHSOaRll f C ( =0) R12 , NHC=OR12 , -OC=OR12 , O - P ( =0) R13R14 ; R11# R12, R13, y R14 independientemente son are H, -OH, -NH2, -NHNH2, -NHOH, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo o heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; X es halógeno, -CN, -C02R15, -C (=0)NR15R16, -NR15R16, -0R15, -S02R7, o -P(=0)R8R9; R1S y R16 independientemente son H, acilo, alquenilo, alcoxilo, -OH, -NH2, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, o heterocicliloalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, y heterocicliloalquilo puede ser sustituido; u opcionalmente R15 y R16 juntos con el N al cual éstos están unidos puede formar un heterociclo el cual puede ser sustituido; y el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede opcionalmente ser nitrógeno cuaternario; o un enantiómero, diastereómero, tautómero, sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo o prodroga del mismo; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, -C(=0)NH2, -C(=0)NHPh, -C (=S) NH-nbutilo, C(=0)NHC(=0)CH2C1, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C (=0) CH=CH2, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 0 y n es l o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me, -C(=0)Et, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, Me, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C(=0)Ph, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es OH o alcoxilo C1-C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, -C (=0) CH=CH2, o además siempre que el compuesto no es SI, S3, S4, S6, S7, S20, S24, S25, S26, S27, o S36; además siempre que cuando q es 1, n es 0, R es -OCH3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, y R1# R3, y R4 son cada uno H, entonces R2 no es -C(=0)CH2I, -C (=0) C (=0) OH, (4-benzilpiperidina-l-yl) propilo, -S(=0)2R19, -S(=O)2NR20, C(=O)NHR20 o -C(=O)OR20, en donde R19 es R20 o alquenilo; R20 es arilo, alquilo, - (CH2) DN(R21) 2, o - (CH2) DSR21; j es 0, 1, 2, o 3; y R21 es alquilo o cicloalquilo; además siempre que cuando q es l,n es 1 o 2 R es - 0CH3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina y R?,R3, y R4 son cada uno H, entonces R2 no es CO (CH2)tA(R2?) 2, S02 (CH2) t (R2?) 2, o SO-NH(CH2)tA(R2?)2,A es N o S, y t es 1,2 o 3; y además siempre que las siguientes estructuras sean excluidas de la formula I en donde es 0 o 1, R22 es OR29, SR29,NR29 alquilo, o haluro en las posiciones 6,7,8 o 9 sobre el anillo de benzotiazepina; R29 es alquilo, arilo o H; R23 y R24 son independientemente H, alquilo, o arilo R25 es H, OR30, SR30, NR30 alquilo, o haluro en las posiciones 6,7,8 o 9 sobre el anillo de benzotiazepina; R30 es alquilo, arilo o acilo; R26 y R27 son independientemente H, alquilo, alquenilo, o arilo; y R2g es H, haluro, alquenilo, ácido carboncílico o alquilo conteniendo 0,S o N.
  2. 2. Un compuesto del grupo seleccionado que consiste de S Sil S S1 S2 S S47 S S51 S54 S61 S6 S69 S70 S71 S72 O S73 S74 S76 S77 S78 S79 S81 S82 S83 S85 S89 S91 S92 PhCH NH S93 S94 S96 S97 S99 SlOO SlOl S102 S103 S104 S108 Slll 10 S113 S1 10 S120 S121 Anm122 S122 Arm123 S123 o una sal farmacéuticamente acceptable o hidrato de los mismos
  3. 3. El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 2 caracterizado porque tiene la fórmula o una sal farmacéuticamente acceptable o hidrato del mismo.
  4. . El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 3 caracterizado porque la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de hidrocloruro.
  5. 5. El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 2 caracterizado porque tiene la fórmula (S107) o una sal farmacéuticamente acceptable o hidrato del mismo.
  6. 6. El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 5, caracterizado porque la sal faracéuticamente aceptable es una sal de hidrocloruro.
  7. 7. El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque tiene la fórmula I-a: (Formula I-a) o un enantiomero, o diesteromero, tautomero, sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo, o prodroga del mismo, en donde R,R2,q, y n son como se definió en la cáusula 1.
  8. 8. El compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 7, caracterizado porque tiene la fórmula I-e: (formula I-e) En donde R5 es -NR15R?6; formula I-i: ~c (0 r)nr ( formula I-i ) en donde Ri7 es -NR?5R?6, -NHNR?5R?6, -NHOH, -OR15, -CH2X, alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, o heterocicloalquilo, cada alquenilo, arilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heterociclilo, o heterocicloalquilo, puede ser substituido; formula I : (formula I) en donde Ri, R3, and R4 are H, and R2 is - (CH2 ) m-R?0; o formula I-k : (formula I-k) en donde R' and R" son independientemente H, halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alkyl, -S(=0) alkyl, -OS(=0)2CF3, acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo , alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-ariltio) , o (hetero-) arilamino; , y en donde cada acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclil, heterociclilalquilo , alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-ariltio), o (hetero-) arilamino pupede ser sustituido; Ris es H, -NR15R16, -C (=0)NR?5R16, -(C=0)0R? , -OR15, alquilo, arilo, cicloalquilo, y heterociclil, puede ser substituido; y p es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10; en donde n, q, R, R15, R16, X, m, and Rio son como se definió en la cláusula 1; o un enantiomero, o diesteromero, tautomero, sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo, o prodrogas de los mismos.
  9. 9. Una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la fórmula: con una base farmacéuticamente aceptable.
  10. 10. El compuesto como se reivindica en la cláusula 9 caracterizado porque la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de sodio.
  11. 11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto tal y como se reivindica en cualquiera de las 1 a 10 y por lo menos un aditivo seleccionado al grupo que consiste de antioxidantes, aromáticos, amortiguadores, aglutinantes, colorants, desintegrantes, diluentes, emulsificadores, exipientes, extendedores, agentes mejoradores de sabor, gelantes, glidantes, preservativos, mejoradores de penetración de la piel, solubilizadores, estabilizadores, agentes de suspensión, endulzadores, agentes de tonicidad, vehículos y agentes de aumento de viscosidad.
  12. 12. Una composición farmacéutica tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizada porque está en la forma de cápsula, granulo, polvo, solución, suspensión, o tableta está diseñada para la administración por un modo oral, sublingual, bucal, parenteral, intravenoso, transdérmico, de inhalación, intranasal, vaginal, intramuscular o rectal.
  13. 13. Un método para hacer una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de desordenes de enfermedades asociados con los receptores RyR que regulan el canal de calcio funcionando en las células que comprende asociar un compuesto de acuerdo a una cualquiera de las cláusulas 1 a 10 con por lo menos un aditivo seleccionado al grupo que consiste de antioxidantes, aromáticos, amortiguadores, aglutinantes, colorantes, desintegrantes, diluentes, emulsificadores, excipientes, extendedores, agentes mejoradotes de sabor, gelantes, glidantes, preservativos, mejoradotes de penetración de la piel, solubilizadores, estabilizadores, agentes de suspensión, endulzadores, agentes de tonicidad, vehículos y agentes de incremento de viscosidad.
  14. 14. El método tal y como se reivindica en la cláusula 13 caracterizado porque los desordenes son seleccionados del grupo que consiste de desordenes y enfermedades cardiacas, desordenes y enfermedades esqueleto musculares, desordenes y enfermedades de conocimiento, hipertpeprmia maligna, diabetes y síndrome de muerte infantil repentina.
  15. 15. El método tal y como se reivindica en la cláusula 14 caracterizado porque los desordenes y enfermedades cardiacos son seleccionados del grupo que consiste de desordenes de latido de corazón irregular enfermedades; desordenes y enfermedades de latido corazón irregular inducido por ejercicio; muerte cardiaca repentina; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstructiva crónica y alta presión de la sangre.
  16. 16. El método tal y como se reivindica en la cláusula 15 caracterizado porque los desordenes y nfermedades de latido de corazón irregular y los desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio son seleccionados del grupo que consiste de arritmia auricular y ventricular; fibrilación auricular y ventricular; taquiarritmia auricular y ventricular; taquicardia auricular y ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPTV) ; y variantes inducidas por ejercicio de las mismas;
  17. 17. El método tal y como se reivindica en la cláusula 14 caracterizado porque los desordenes y enfermedades esqueleto musculares son seleccionados del grupo que consiste de fatiga de músculo esqueleto, fatiga de músculo esqueleto inducido por ejercicio, distrofia muscular, desordenes de la vejiga e incontinencia.
  18. 18. El método tal y como se reivindica en la cláusula 14 caracterizado porque los desordenes del conocimiento y enfermedades son seleccionados del grupo que consiste de enfermedad de Alzheimer, formas de pérdida de memoria pérdida de memoria dependiente de la edad.
  19. 19. El uso de un compuesto tal y como se reivindica en cualquiera de las cláusulas 1 a 10 para el tratamiento en desordenes y enfermedades asociadas con receptores RyR que regulan el funcionamiento de canal de calcio en las células.
  20. 20. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 19 caracterizado porque los desordenes y enfermedades son seleccionados del grupo que consiste de desordenes y enfermedades cardiacas, desordenes y enfermedades esqueleto musculares, desordenes y enfermedades del conocimiento, hipertermia maligna, diabetes, y síndrome de muerte de infante repentina.
  21. 21. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 20 caracterizado porque los desordenes y enfermedades cardiacos son seleccionados del grupo que consiste de desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular; desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio; muerte cardiaca repentina inducida por ejercicio; muerte cardiaca súbita; falla de corazón congestiva; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; y alta presión de la sangre
  22. 22. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 21 caracterizado porque los desordenes y enfermedades de latido de corazón irregular y los desordenes y enfrmeades de latido de corazón irregular inducidos por ejercicio son seleccionados del grupo que consiste de arritmia auricular y ventricular; fibrilación auricular y ventricular, taquiarritmia auricular y ventricular; taquicardia auricular y ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPTV) ; y variantes inducidas por ejercicio de las mismas.
  23. 23. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 20 caracterizado porque los desordenes y enfermedades esqueleto musculares son seleccionados del grupo que consiste de fatiga esqueleto muscular; fatiga de músculo esqueleto inducida por ejercicio, distrofia muscular, desordenes de la vejiga e incontinencia.
  24. 24. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 20 caracterizado porque los desordenes y enfermedades son seleccionados del grupo que consiste de enfermedad de Alzheimer, formas de pérdida de memoria y pérdida de memoria dependiente de la edad.
  25. 25. Un método para la síntesis de un compuesto de la fórmula Al: (Al), en donde R' es OMe o H, y n, R?5 y R?6 son como se definió en la cláusula 1 ; (i) reaccionar un compuesto de la fórmula fórmula A2 Con trifosgeno para formar un compuesto de la fórmula A3 (ii) reaccionar el compuesto de la fórmula A3 con una amina de la fórmula HNR15R16 bajo condiciones suficientes para formar el compuesto de la fórmula Al; o (i) reaccionar un amino de la fórmula H R?5R?6 con trifosgeno para formar un compuesto de la fórmula A4 : Cl3CO (C=0) NR15R16 (A4 ) ; y (ii) reaccionar un compuesto la fórmula A4 con un compuesto de fórmula A2 : (A2) bajo condiciones suficientes pra formar el compuesto de la fórmula Al.
  26. 26. Un método para la síntesis de un compuesto de la fórmula A5 : en R' es OMe o H, n es 0, 1, o 2, y Raa es alquilo o arilo, C?-C4 comprendiendo: (i) reaccionar a un compuesto de la fórmula A2 : con un cloruro de ácido de la fórmula ClC (=0) C (=0) ORaa en la presencia de una base bajo condiciones suficientes para formar el compuesto de la fórmula A5.
  27. 27. Un método para la síntesis de un compuesto de la fórmula A6, En donde R' es OMe o H; y n es 0, 1, o 2, que comprende el reaccionar un compuesto de la fórmula A5 en donde Raa es como se definió en la cláusula 26, con un ácido o una base bajo condiciones suficientes para formar el compuesto de la fórmula A6.
  28. 28. El método tal y como se reivindica en la cláusula 27, en n es 0 y R' es -OCH3.
  29. 29. Un método para la síntesis de un compuesto de la fórmula A7 : en donde R es OR' ' ' , SR' ' ' , NR' ' ' , alquilo, H, o haluro y R' ' ' es alquilo, arilo , o H, el cual comprende el reaccionar un compuesto de la fórmula A8 : con formaldehido (CH20) y cianoborohidrido de sodio (NaB(CN)H3) bajo condiciones suficientes para formar el compuesto de la fórmula A7.
  30. 30. Un método para la sintesis de un compuesto de la fórmula A9 : en donde R es seleccionado del grupo que consiste de OR' ' ' , SR' ' ' , NR' ' ' , alquilo, H, y haluro y R' ' ' es alquilo, arilo, o H, que comprende (i) reaccionar un compuesto de la fórmula A8 : con metilo-1-bromoacetato y piridina , bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula AlO: (AlO); Y (ii) tratar el compuesto de la fórmula AlO con hidróxido de sodio, bajo condiciones suficientes para formar el compuesto de la fórmula A9.
  31. 31. Un compuesto de la fórmula I: (Formula I] en donde n, q, m, X, Y, R, Ri, R2, R3, R4, R6, R8, R9, R?0, Rn, R?2, R?3, R?4, y Ri6 son como se identificó en la cláusula 1; o uno o mas de R, R , R2, R3, o R4 comprende un grupo etiquetado fluorescente, bioluminescente, quimoluminescente, colorimetrico o radioactivo; R5 es -NHNR?5R?6, -NHOH, -C (=0) NHR?5R?6, -C (=0)NR?5Ri6, ~C02Ri5, -CH2X, acilo, arilo, alqularilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclil, o heterociclilalquilo, en donde cada acilo, arilo, alqularilo, cicloalquilo, cicloalquiloalquilo, heteroarilo, heterociclil, y heterociclilalquilo, puede ser substituido con uno o mas de halógeno, CF3, OCF3, ciano, nitro, N3, oxo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, alquilarilo, heteroarilo , 0Ra, SRa, S(=0)Re, S(=0)2Re, P(=0)2Re, S(=0)2ORa, P(=0)2ORa, NRbRc, NRbS(=0)2Re, NRbP(=0)2Re, S(=0)2NRbRc, P(=0)2NRbRc, C(=0)0Ra, C(=0)Ra, C(=0)NRbRc, 0C(=0)Ra, 0C(=0)NRbRc, NRbC(=0)0Ra, NRdC(=0)NRbRc, NRdS (=0) 2NRbRc, NRdP (=0) 2NRbRc, NRbC(=0)Ra, o NRbP(=0)2Re, en donde Ra es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo , alquilarilo, heteroarilo, heterociquilo , o arilo; Rb, Rc y Rd son independientemente hidrógeno , alquilo , cicloalquilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, arilo , o dicho Rb y Rc juntos con el N al cual estos están unidos opcionalmente forman un heterociclo; y Re es alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclilo, o arilo; y donde el alquilo puede ser substituido en uno o mas de CF3; R7 es -0R?5, -NHNR?5R?6, -NHOH, -CH2X, alquinilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclil, o heterociquilalquilo; en donde cada alquinilo, alquiloarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclil, y heterociclilalquilo puede ser substituido; X es -CN, -C02Ri5, -C (=0) NR?5R?6, -OR15, -S02R , o -P(=0)R8R9; R15 es acilo; alquenio, alcoxilo, -OH, -NH2 alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclil, o heterociquilalquilo; en donde cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, , heteroarilo, heterociclil y heterociclilalquilo pueden ser substituidos; y opcionalmente R15 and Ri6 juntos con N el cual estos están unidos pueden formar un heterociclo el cual puede ser substituido; y el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede opcionalmente ser nitrógeno cuaternario; o un antiomero, diasteromero, tautomero, una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo, o prodroga de los mismos. siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, -C(=0)NH2, -C(=0)NHPh, -C (=S) NH-nButyl, -C(=0)NHC(=0)CH2C1, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C (=0) CH=CH2, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q is 0 and n es 1 o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me, -C(=0)Et, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, Me, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C(=0)Ph, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es OH o o alcoxilo C?-C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, -C (=0) CH=CH2, o siempre que el compuesto no sea SI, S3, S4, S6, S7, S20, S24, S25, S26, S27, o S36.
  32. 32. Un compuesto de la fórmula I: (Formula I) en donde n, q, m, X, Y, R, Ri, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Rio iir Ri2f RI3? RI<W i5/ y i6 son como se definió en la cláusula 1 y ; el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede ser opcionalmente un nitrógeno cuaternario; un enantiomero, diasteromero, tauteromero, sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo o prodroga del mismo; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, -C(=0)NH2, -C(=0)NHPh, -C (=S) NH-nButyl, C(=0)NHC(=0)CH2C1, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C (=0) CH=CH2, -S(=0)2Me, o-S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 0 y n es l o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me, -C(=0)Et, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q is 1, y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina, entonces R2 no es H, Me, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C(=0)Ph, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es OH o alcoxilo C?-C3 en la psosición 7 del anillo de benzotizepina, entonces R2 no es H, -C (=0) CH=CH2, o además siempre que R2 -C=0(R5) o -S02R7, entonces hay por lo menos dos grupos R unidos al anillo de benzeno; y además siempre que el compuesto no es SI, S3, S4, S6, S7, S20, S24, S25, S26, S27, o S36.
  33. 33. Un compuesto teniendo la formula I-a: ( Formula I-a) En donde: n, q, m, X, Y, Rl R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, Rio/ Rii/ R12/ Ri3/ Ri4 Ri5/ and Ri6 son como se mencionó en la cláusula 1; y cada R es independientemente halógeno, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3, -N3, -S03H, -S (=0) 2alkyl, -S (=0) alquilo, -0S(=0)2CF3, acilo, alquilo, cicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, o (hetero-) arilamino; en donde cada, acilo, alquilo, ccicloalquilo, alquilarilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, heterocicloalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero-) arilo, (hetero-) ariltio, o (hetero-) arilamino puede ser substituido o no substituido; y el nitrógeno en el anillo de benzotiazepina puede ser opcionalmente un nitrógeno cuaternario o un enantiomero, diesteromero, tautomero, sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, complejo, o prodroga de los mismos; siempre que cuando q es 0 y n es 0, entonces R2 no es H, Et, -C(=0)NH2, -C(=0)NHPh, -C (=S) NH-nButyl, C(=0)NHC(=0)CH2C1, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C (=0) CH=CH2, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es O y n es l o 2, entonces R2 no es -C(=0)Me, -C(=0)Et, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, y R es Me, Cl, o F en la posición 6 del anillo de benzotiazepina entonces R2 no es H, Me, -C(=0)H, -C(=0)Me, -C(=0)Et, -C(=0)Ph, -S(=0)2Me, o -S(=0)2Et; además siempre que cuando q es 1, n es 0, y R es OH o alcoxilo C?~C3 en la posición 7 del anillo de benzotiazepina entonces R2 no es H, -C (=0) CH=CH2, o siempre que el compuesto no sea SI, S3, S4, S6, S7, S20, S24, S25, S26, S27, o S36. R E S U M E N La presente invención proporciona compuestos de la Fórmula I, (I) y sales, hidratos, solvatos, complejos y prodrogas de los mismos. La presente invención además proporciona métodos para sintetizar los compuestos de la fórmula I. La invención adicionalmente proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la Fórmula I y los métodos para usar las composiciones farmacéuticas de la Fórmula I para tratar y evitar desordenes y enfermedades asociadas con los receptores RyR que regulan el canal de calcio que funciona en las células.
MXMX/A/2008/002687A 2005-08-25 2008-02-25 Agentes para evitar y tratar desordenes que involucran la modulacion de receptores ryr MX2008002687A (es)

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