MX2008001610A - Uso de inhibidores de hdac para el tratamiento de mieloma. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere al uso de un inhibidor de HDAC, en especial un inhibidor de HDAC de la Formula (I), en donde los radicales y simbolos tienen los significados definidos en la memoria descriptiva, para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de mieloma, en particular mieloma multiple, en especial mieloma que sea resistente a la quimioterapia convencional; a una combinacion que comprende un inhibidor de HDAC y un compuesto que afecta la apoptosis de las celulas de mieloma, de preferencia bortezomib, para su uso simultaneo, separado, o en secuencia; a metodos para el tratamiento de mieloma; y a una composicion farmaceutica que comprende esta combinacion.

Description

USO DE INHIBIDORES DE HDAC PARA EL TRATAMIENTO DE MIELOMA La presente invención se refiere al uso de un inhibidor de HDAC para la preparación de un medicamento para el tratamiento de mieloma; a un método para el tratamiento de un animal de sangre caliente, en especial un ser humano, que tenga míeloma, el cual comprende administrar a este animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de HDAC, en especial un compuesto de la Fórmula (I), como se define en la presente; a una combinación que comprende un inhibidor de HDAC y un compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma, de preferencia bortezomib, y opcionalmente cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso simultáneo, separado, o en secuencia; y a una composición farmacéutica y un paquete comercial que comprende esta combinación. El término "mieloma", como se utiliza en la presente, se refiere a un tumor compuesto de células del tipo que se encuentra normalmente en la médula ósea. El término "mieloma múltiple", como se utiliza en la presente, significa un neoplasma maligno diseminado de células de plasma, que se caracteriza por múltiples foci tumorales de médula ósea, y secreción de un componente M (un fragmento de inmunoglobulína monoclonal), asociado con lesiones osteolíticas ampliamente extendidas que dan como resultado dolor de huesos, fracturas patológicas, hipercalcemia, y anemia normocítica normocrónica. El mieloma múltiple es incurable mediante el uso de las quimioterapias convencionales y de dosis alta. Los compuestos de la Fórmula (I), como se definen en la presente, son inhibidores de la desacetilasa de histona ("inhibidores de HDAC"). La acetilación reversible de las histonas es un regulador importante de la expresión genética que actúa alterando la accesabilidad de los factores de transcripción al ADN. En las células normales, la desacetilasa de histona (HDA) y la acetil-transferasa de histona, controlan juntas el nivel de acetilación de las histonas para mantener un equilibrio. La inhibición de la desacetilasa de histona da como resultado la acumulación de histonas hiperacetiladas, lo cual da como resultado una variedad de respuestas celulares. De una manera sorprendente, ahora se ha encontrado que los inhibidores de HDAC, en especial los compuestos de la Fórmula (I), como se definen en la presente, inhiben directamente la proliferación de las líneas celulares de mieloma y las células de mieloma de los pacientes que expresan Flt-1. En adición, estos compuestos inhiben la migración de células de mieloma, ensayado mediante el ensayo de migración celular trans-pozos. Adicionalmente, estos compuestos pueden inhibir tanto la proliferación de las células de mieloma que son adherentes a las células estromales de médula ósea (BMSCs), como la secreción de IL-6 inducida por el enlace de las células de mieloma a las células estromales de médula ósea. Por consiguiente, la invención se refiere al uso de un inhibidor de HDAC para la preparación de un medicamento para el tratamiento de mieloma.

Compuestos Inhibidores de HDAC Los compuestos inhibidores de HDAC de interés particular para utilizarse en la combinación de la invención son los compuestos de hidroxamato descritos por la Fórmula (I): en donde: Ri es H; halógeno; o un alquilo de 1 a 6 átomos de carbono de cadena recta, en especial metilo, etilo, o propilo normal, cuyos sustituyentes de metilo, etilo, y propilo normal están insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes descritos más adelante para los sustituyentes de alquilo; R2 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 10 átomos de carbono, de preferencia alquilo de 1 a 10 átomos de carbono, por ejemplo metilo, etilo, ó -CH2CH2-OH; cicloalquílo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquil-alquilo de 4 a 9 átomos de carbono; cicloalquil-alquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; -(CH2)nC(0)R6; -(CH2)nOC(0)R8; amino-acilo; HON-C(0)-CH=C(R1)-aril-alquilo-; y R3 y R4 son ¡guales o diferentes, y son independientemente H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; acilo; o acil-amino; o R3 y R , junto con el átomo de carbono con el que están enlazados, representan C=0, C=S, ó C = NR6; o R2, junto con el átomo de nitrógeno con el que está enlazado, y R3, junto con el átomo de carbono con el que está enlazado, pueden formar un hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; un heteroarilo; un poli-heteroarilo; un poli-heterociclo no aromático; o un anillo mixto de poli-heterociclo de arilo y no de arilo; R5 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; acilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; policiclos aromáticos; policiclos no aromáticos; policiclos mixtos de arilo y no de arilo; poli-heteroarilo; poli-heterociclos no aromáticos; y poli-heterociclos mixtos de arilo y no de arilo; n, ni, n2, y n3 son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente de 0 a 6; cuando n, es de 1 a 6, cada átomo de carbono puede estar opcionalmente independientemente sustituido con R3 y/o R4; X e Y son ¡guales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H; halógeno; alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como CH3 y CF3; N02; C(0)R?; OR9; SR9; CN; y NR10Rn; R6 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; cicloalquil-alquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo y 2-fenil-etenilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo pirídil-metilo; OR12; y NR13R14; R7 se selecciona a partir de OR15; SR15; S(0)R16; S02R17; NR13R14; y NR12S02R6; R8 se selecciona a partir de H; OR15; NR13R14; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; heterocicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; arilalquilo, por ejemplo bencilo; y heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; R9 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, por ejemplo CH3 y CF3; C(0)-alquilo, por ejemplo C(0)CH3; y C(0)CF3; Río y 11 son ¡guales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H; alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; y -C(0)-alquilo; R12 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquil-alquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; policiclo mixto de arilo y no de arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; y heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; R13 y R? son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; amino-acilo; o R13 y R? , junto con el átomo de nitrógeno con el que están enlazados, son hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; heteroarilo; poli-heteroarilo; poli-heterociclo no aromático; o poli-heterociclo mixto de arilo y no de arilo; R15 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; aril-alquilo; heteroarilalquilo; y (CH2)mZR12; R16 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; poli-heteroarilo; ari I-alquilo; heteroaril-alquilo; y (CH2)mZR12; R17 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; policiclos aromáticos; heteroarilo; aril-alquilo; heteroaril-alquilo; poli-heteroarilo; y NR13R 4; m es un entero seleccionado de 0 a 6; y Z se selecciona a partir de O; NR13; S; y S(O); o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Como sea apropiado, "insustituido" significa que no hay sustituyente alguno, o que los únicos sustituyentes son hidrógeno. Los sustituyentes de halógeno se seleccionan a partir de flúor, cloro, bromo, y yodo, de preferencia flúor o cloro. Los sustituyentes de alquilo incluyen alquilo de 1 a 6 átomos de carbono de cadena recta y ramificada, a menos que se observe de otra manera. Los ejemplos de los sustituyentes de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono de cadena recta y ramificada adecuados incluyen metilo, etilo, propilo normal, 2-propilo, butilo normal, butilo secundario, butilo terciario, y similares. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes de alquilo incluyen tanto los grupos alquilo insustituidos como los grupos alquilo que están sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo insaturación, es decir, hay uno o más dobles o triples enlaces de C-C; acilo; cicloalquilo, halógeno; oxialquilo; alquil-amino; amino-alquilo; acilamino; y OR15, por ejemplo alcoxilo. Los sustituyentes preferidos para los grupos alquilo incluyen halógeno, hidroxilo, alcoxilo, oxíalquilo, alquil-amino, y amino-alquilo. Los sustituyentes de cicloalquilo incluyen los grupos cicloalquilo de 3 a 9 átomos de carbono, tales como cíclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciciohexilo, y similares, a menos que se especifique de otra manera. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes de cicloalquilo incluyen tanto los grupos cicloalquilo insustituidos como los grupos cicloalquilo que están sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados, ¡ncluyendo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, halógeno, hidroxilo, aminoalquilo, oxialquilo, alquil-amino, y OR15, tal como alcoxilo. Los sustituyentes preferidos para los grupos cicloalquilo incluyen halógeno, hidroxilo, alcoxilo, oxialquilo, alquil-amino, y aminoalquilo. La discusión anterior de los sustituyentes de alquilo y cicloalquilo también se aplica a las porciones de alquilo de otros sustituyentes, tales como, sin limitación, los sustituyentes de alcoxilo, alquil-aminas, alquil-cetonas, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, alquil-sulfonilo, y alquil-éster, y similares. Los sustituyentes de hetero-cicloalquilo incluyen los anillos alifáticos de 3 a 9 miembros, tales como los anillos alifátícos de 4 a 7 miembros que contienen de 1 a 3 heteroátomos seleccionados a partir de nitrógeno, azufre, oxígeno. Los ejemplos de los sustituyentes de hetero-cicloalquilo adecuados incluyen pirrolidilo, tetrahidro-furilo, tetrahidro-furanilo, piperidilo, piperazilo, tetrahidropiranilo, morfilino, 1 ,3-diazapano, 1 ,4-diazapano, 1 ,4-oxazepano, y 1 ,4-oxatiapano. A menos que se observe de otra manera, los anillos están insustituidos o sustituidos sobre los átomos de carbono por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; halógeno; amino; alquil-amino, y OR15, por ejemplo alcoxilo. A menos que se observe de otra manera, los heteroátomos de nitrógeno están insustituidos o sustituidos por H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; acilo; amino-acilo; alquil-sulfonilo; y aril-sulfonilo.

Los sustituyentes de cicloalquil-alquilo incluyen los compuestos de la fórmula -(CH2)n5-cicloalquilo, en donde n5 es un número de 1 a 6. Los sustituyentes de alquil-cicloalquilo adecuados incluyen ciclopentil-metilo, ciclopentil-etilo, ciclohexil-metilo, y similares. Estos sustituyentes están insustituidos o sustituidos en la porción de alquilo o en la porción de cicloalquilo por un sustituyente adecuado, incluyendo los enlistados anteriormente para alquilo y cicloalquilo. Los sustituyentes de arilo incluyen fenilo insustituido, o fenilo sustituido por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquil-alquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; u 0(CO)alquilo; oxialquilo; halógeno; nitro; amino; alquil-amino; amino-alquilo; alquil-cetonas; nitrilo; carboxi-alquilo; alquil-sulfonilo; amino-sulfonilo; aril-sulfonilo; y OR15, tal como alcoxilo. Los sustituyentes preferidos incluyen alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; alcoxilo; oxialquilo; halógeno; nitro; amino; alquil-amino; aminoalquilo; alquil-cetonas; nitrilo; carboxi-alquilo; alquil-sulfonilo; ariisulfonilo, y amino-sulfonilo. Los ejemplos de los grupos arilo adecuados incluyen alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-fenilo, alcoxilo de 1 a 4 átomos de carbono-fenilo, trifluoro-metil-fenilo, metoxi-fenílo, hidroxi-etil-fenilo, dimetil-amino-fenilo, amino-propil-fenilo, carbetoxi-fenilo, metan-sulfonil-fenilo, y tolil-sulfonil-fenilo. Los policiclos aromáticos incluyen naftilo, y naftilo sustituido por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; alquil-cicloalquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; oxialquilo; halógeno; nitro; amino; alquil-amino, amino-alquilo; alquil-cetonas; nitrilo; carboxi-alquilo; alquil-sulfonilo; nitro; amino; alquilamino; amino-alquilo; alquil-cetonas; nitrilo; carboxi-alquilo; alquilsulfonilo; aril-sulfonilo; amino-sulfonilo, y OR15, tal como alcoxilo. Los sustituyentes de heteroarilo incluyen los compuestos con un anillo aromático de 5 a 7 miembros que contiene uno o más heteroátomos, por ejemplo de 1 a 4 heteroátomos, seleccionados a partir de N, O, y S. Los sustituyentes de heteroarilo típicos incluyen furilo, tienilo, pirrol, pirazol, triazol, tiazol, oxazol, piridina, pirimidina, isoxazolilo, pirazina, y similares. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes de heteroarílo están insustituidos o sustituidos sobre un átomo de carbono por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo alquilo, los sustituyentes de alquilo identificados anteriormente, y otro sustituyente de heteroarilo. Los átomos de nitrógeno están insustituidos o sustituidos, por ejemplo por R13; los sustituyentes de N especialmente útiles incluyen H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, acilo, amino-acilo, y sulfonilo. Los sustituyentes de aril-alquilo incluyen los grupos de la fórmula -(CH2)n5-arilo, -(CH2)n5.1-(CH-arilo)-(CH2)n5-arilo ó -(CH2)n5. ?CH(arilo)(arilo), en donde arilo y n5 se definen anteriormente. Estos sustituyentes de aril-alquilo incluyen bencilo, 2-fenil-etilo, 1 -feniletilo, tolil-3-propilo, 2-fenil-propilo, difenil-metilo, 2-difenil-etilo, 5,5-dimetil-3-fenil-pentilo, y similares. Los sustituyentes de aril-alquilo están insustituidos o sustituidos en la fracción de alquilo o en la fracción de arilo, o en ambas, como se describe anteriormente para los sustituyentes de alquilo y arilo. Los sustituyentes de heteroaril-alquilo incluyen los grupos de la fórmula -(CH2)n5-heteroarilo, en donde heteroarilo y n5 se definen anteriormente, y el grupo de puente está enlazado con un átomo de carbono o con un átomo de nitrógeno de la porción de heteroarilo, tal como 2-, 3-, ó 4-piridil-metilo, imidazolil-metilo, quinolil-etilo, y pirrolil-butilo. Los sustituyentes de heteroarilo están insustituidos o sustituidos como se discute anteriormente para los sustituyentes de heteroarilo y alquilo. Los sustituyentes de amino-acilo incluyen los grupos de la fórmula -C(0)-(CH2)n-C(H)(NR13R14)-(CH2)n-R5, en donde n, R13, R14, y R15 son como se describen anteriormente. Los sustituyentes de amino-acilo adecuados incluyen los aminoácidos naturales y no naturales, tales como glicinilo, D-triptofenilo, L-tisinilo, D- ó L-homoserinilo, acilo 4-amino-butírico, y +-3-amin-4-hexenoílo. Los sustituyentes de policiclos no aromáticos incluyen los sistemas de anillos fusionados bicíclicos y tricíclicos, en donde cada anillo puede ser de 4 a 9 miembros, y cada anillo puede contener cero, uno, o más dobles y/o triples enlaces. Los ejemplos adecuados de los policiclos no aromáticos incluyen decalina, octahidroindeno, perhidrobenzo-ciclohepteno, y perhidrobenzo-[f]-azuleno. Estos sustituyentes están insustituidos o sustituidos como se describe anteriormente para los grupos cicloalquilo. Los sustituyentes de policiclos mixtos de arilo y no de arilo incluyen los sistemas de anillo fusionados bicíclicos y tricíclicos, en donde cada anillo puede ser de 4 a 9 miembros, y cuando menos un anillo es aromático. Los ejemplos adecuados de los policiclos mixtos de arilo y no de arilo incluyen metilendioxi-fenilo, bis-metilendioxi-fenilo, bis-metilendioxi-fenilo, 1 ,2,3,4-tetrahidronaftaleno, díbenzo-suberano, dihidroantraceno, y 9H-fluoreno. Estos sustituyentes están ¡nsustituidos o sustituidos por nitro, o como se describe anteriormente para los grupos cicloalquilo. Los sustituyentes de poli-heteroarilo incluyen los sistemas de anillos fusionados bicíclicos y tricíclicos, en donde cada anillo puede ser independientemente de 5 ó 6 miembros, y puede contener uno o más heteroátomos, por ejemplo 1, 2, 3, ó 4 heteroátomos, seleccionados a partir de O, N, ó S, de tal manera que el sistema de anillo fusionado es aromático. Los ejemplos adecuados de los sistemas de anillos de poli-heteroarilo incluyen quinolina, isoquinolina, pirido-pirazina, pirrolo-piridina, furopiridina, indol, benzofurano, benzotiofurano, benzindol, benzoxazol, pirrolo-quinolina, y similares. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes de poli-heteroarilo están insustituidos o sustituidos sobre un átomo de carbono por uno o más sustituyentes adecuados, incluyendo alquilo, los sustituyentes de alquilo identificados anteriormente, y un sustituyente de la fórmula -O-(CH2CH = CH(CH3)(CH2))?.3H. Los átomos de nitrógeno están insustituidos o sustituidos, por ejemplo, por R13, y los sustituyentes de N especialmente útiles incluyen H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, acilo, amino-acilo, y sulfonilo.

Los sustituyentes poli-heterocíclicos no aromáticos incluyen los sistemas de anillos fusionados bicíclicos y tricíclicos, en donde cada anillo puede ser de 4 a 9 miembros, puede contener uno o más heteroátomos, por ejemplo 1, 2, 3, ó 4 heteroátomos, seleccionados a partir de O, N, ó S, y puede contener 0 ó 1 o más dobles o triples enlaces de C-C. Los ejemplos adecuados de los poli-heterociclos no aromáticos incluyen hexítol, cis-perhidro-ciclohepta-[b]-piridinilo, decahidro-benzo-[f]-[1 ,4] -oxazepi ni lo, 2,8-dioxabiciclo-[3.3.0]-octano, hexahidro-tieno-[3, 2-b] -tiof eno, perhidro-pirrolo-[3,2-b]-pirrol, per-hidro-naftíridina, perhidro-1 H-diciclopenta-[b,e]-pirano. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes poli-heterocíclicos no aromáticos están insustítuidos o sustituidos sobre un átomo de carbono por uno o más sustituyentes, ¡ncluyendo alquilo y los sustituyentes de alquilo identificados anteriormente. Los átomos de nitrógeno están insustituidos o sustituidos, por ejemplo por R13, y los sustituyentes de N especialmente útiles incluyen H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, acilo, amino-acilo, y sulfonilo. Los sustituyentes de poli-heterociclos mixtos de arilo y no de arilo incluyen los sistemas de anillos fusionados bicíclicos y tricíclicos, en donde cada anillo puede ser de 4 a 9 miembros, puede contener uno o más heteroátomos seleccionados a partir de O, N, ó S, y cuando menos uno de los anillos debe ser aromático. Los ejemplos adecuados de los poliheterociclos mixtos de arilo y no de arilo incluyen 2,3-dihidro-indol, 1 ,2,3,4-tetrahidro-quinolina, 5,11-d i hidro-1 OH -dibenzo- [b,e]-[1 ,4]-diazepina, 5H-dibenzo-[b,e]-[1 ,4]- diazepina, 1 ,2-dihidro-pirrolo-[3,4-b]-[1 ,5]-benzodiazepina, 1 ,5-dihidro-pirido-[2,3-b]-[1 ,4]-diazepin-4-ona, 1 ,2,3,4,6,11-hexahidro-benzo-[b]-pírido-[2,3-e]-[1 ,4]-diazepin-5-ona. A menos que se observe de otra manera, los sustituyentes poliheterocíclicos mixtos de arilo y no de arilo están insustituídos o sustituidos sobre un átomo de carbono por uno o más sustituyentes adecuados, ¡ncluyendo -N-OH, =N-OH, alquilo, y los sustituyentes de alquilo identificados anteriormente. Los átomos de nitrógeno están insustituidos o sustituidos, por ejemplo por R13; y los sustituyentes de N especialmente útiles incluyen H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, acilo, amino-acilo, y sulfonilo. Los sustituyentes de amino incluyen aminas primarias, secundarias, y terciarias, y en forma de sal, aminas cuaternarias. Los ejemplos de los sustituyentes de amino incluyen mono- y di-alquil-amino, mono- y di-arilo, mono- y di-aril-alquil-amino, aril-aril-alquil-amino, alquil-aril-amino, alquil-aril-alquil-amino, y similares. Los sustituyentes de sulfonilo incluyen alquil-sulfonilo y ariisulfonilo, por ejemplo metan-sulfonilo, bencen-sulfonilo, tosilo, y similares. Los sustituyentes de acilo incluyen los grupos de la fórmula -C(0)-W, -OC(0)-W, -C(0)-0-W, ó -C(0)NR13R14, en donde W es R16, H, o cicloalquil-alquílo. Los sustituyentes de acil-amino incluyen los sustituyentes de la fórmula -N(R12)C(0)-W, -N(R12)C(0)-0-W, y -N(R12)C(0)-NHOH, y R12 y W son como se definen anteriormente.

' El sustituyente R2 de HON-CÍC -CH^R^-aril-alquilo- es un grupo de la Fórmula: Las preferencias para cada uno de los sustituyentes incluyen las siguientes: RT es H, halógeno, o un alquilo de 1 a 4 átomos de carbono de cadena recta; R2 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, cicloalquil-alquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, -(CH2)nC(0)R6, amino-acilo, y -(CH2)nR7; R3 y R4 son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H y alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o R3 y R4, junto con el átomo de carbono con el que están enlazados, representan C=0, C=S, ó C = NR6; R5 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroarilalquilo, un policiclo aromático, un policiclo no aromático, un policiclo mixto de arilo y no de arilo, poli-heteroarilo, un poli-heterociclo no aromático, y un poli-heterociclo mixto de arilo y no de arilo; n, n1t n2, y n3 son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente de 0 a 6, en donde n, es de 1 a 6, y cada átomo de carbono está insustituido o independientemente sustituido con R3 y/o R4; X e Y son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H, halógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, CF3, N02, C(0)R,, OR9, SR9, CN, y NR10Rn; R6 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquílo de 4 a 9 átomos de carbono, alquil-cicloalquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, OR12, y NR-?3R 4; R, se selecciona a partir de OR16, SR15, S(0)R16, S02R17, NR13R14, y NR12S02R6; R8 se selecciona a partir de H, OR16, NR13R? , alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cícloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, arilalquilo, y heteroaril-alquilo; Rg se selecciona a partir de alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y C(0)-alquílo; Río y R11 son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y -C(0)-alquilo; R12 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, y heteroaril-alquilo; R13 y R? son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroarilalquilo, y amino-acilo; R15 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroarilalquilo, y (CH2)mZR12; R16 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, y (CH2)mZR12; R?7 se selecciona a partir de alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroarilalquilo, y NR13R?4; m es un entero seleccionado de 0 a 6; y Z se selecciona a partir de O, NR?3, S, y S(O); o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los compuestos útiles de la Fórmula (I) incluyen aquéllos en donde cada uno de Ri, X, Y, R3, y R4 es H, incluyendo aquéllos en donde uno de n2 y n3 es cero, y el otro es 1 , en especial aquéllos en donde R2 es H ó -CH2-CH2-OH. Un género adecuado de compuestos de hidroxamato es el de aquéllos de la Fórmula (la): en donde: n4 es de 0 a 3; R2 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, cicloalquil-alquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, -(CH2)nC(0)R6, amino-acilo, y -(CH2)mR7; y R5 es heteroarilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; policiclos aromáticos; policiclos no aromáticos; policiclos mixtos de arilo y no de arilo; poli-heteroarilo, o arilo mixto; y polí-heterociclos no de arilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otro género adecuado de compuestos de hidroxamato es el de aquéllos de la Fórmula (la): (la) en donde: n4 es de 0 a 3; R2 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, cicloalquil-alquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, -(CH2)nC(0)R6, amino-acílo, y -(CH2)mR7; y R5 es arilo; aril-alquilo; policiclos aromáticos; policiclos no aromáticos, y arilo mixto; y policiclos no de arilo, en especial arilo, tales como p-fluoro-fenilo, p-cloro-fenílo, p-O-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-fenilo, tal como p-metoxi-fenilo, y p-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-fenilo; y aril-alquilo, tal como bencilo, orto-, meta-, o para-fluoro-bencilo, orto-, meta-, o para-cloro-bencilo, orto-, meta-, o para-mono-, di-, ó tri-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-bencilo, tal como orto-, meta-, o para-metoxi-bencilo, m,p-dietoxi-bencilo, o,m,p-trimetoxi-bencilo, y orto-, meta-, o para-mono-, di-, o tri-alquilo de 1 a 4 átomos de carbono-fenilo, tal como p-metilo, m,m-d ietil-f enilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otro género interesante es el de los compuestos de la Fórmula (Ib): (Ib) en donde: R2 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 6 átomos de carbono; cicloalquil-alquilo, por ejemplo ciclopropil-metilo; (CH2)2.4OR21, en donde R21 es H, metilo, etilo, propílo, isopropilo; y R5 es 1 H-indol-3-ilo, benzofuran-3-ilo, p quinolin-3-ilo insustituidos, ó 1 H-indol-3-ilo sustituido, tal como 5-fluoro-1 H-indol-3-ilo, ó 5-metoxi-1 H-indol-3-ilo, benzofuran-3-ilo, o quinolin-3-ilo; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otro género interesante de compuestos de hidroxamato es el de los compuestos de la Fórmula (le): en donde: el anillo que contiene Zi es aromático o no aromático, cuyos anillos no aromáticos están saturados o insaturados; Z es O, S, ó N-R20; Ríe es H; halógeno; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono (metilo, etilo, butilo terciario); cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono; arilo, por ejemplo fenilo insustituido, o fenilo sustituido por 4-OCH3 ó -CF4; o heteroarilo, tal como 2-furanilo, 2-tiofenilo, ó 2-, 3-, ó 4-piridilo; R20 es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono-cicloalquilo de 3 a 9 átomos de carbono, por ejemplo ciclopropil-metilo; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; acilo, por ejemplo acetilo, propionilo, y benzoílo; o sulfonilo, por ejemplo meta-sulfonilo, etan-sulfonilo, bencen-sulfonilo, y toluen-sulfonilo; AÍ es 1, 2, ó 3 sustituyentes que son independientemente H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; -OR?9; halógeno; alquil-amino; amino-alquilo; halógeno; o heteroaril-alquilo, por ejemplo piridilmetilo; R12 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cícloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo, bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo, y -(CH2CH=CH(CH3)(CH2)),.3H; R2 se selecciona a partir de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono, cicloalquíl-alquilo, arilo, heteroarilo, aril-alquilo, heteroaril-alquilo, -(CH2)nC(0)R6, amino-acilo, y -(CH2)nR7; v es 0, 1 , ó 2; p es de 0 a 3; y q es de 1 a 5, y r es 0; o q es 0 y r es de 1 a 5; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los otros sustituyentes variables son como se definen anteriormente.

Los compuestos especialmente útiles de la Fórmula (le), son aquéllos en donde R2 es H, o -(CH2)pCH2OH, en donde p es de 1 a 3, en especial aquéllos en donde Ri es H; tales como aquéllos en donde Ri es H, y X e Y son cada uno H, y en donde q es de 1 a 3 y r es 0, o en donde q es 0 y r es de 1 a 3, en especial aquéllos en donde Z es N-R20. Entre estos compuestos, R2 es de preferencia H o -CH2-CH2-OH, y la suma de q y r es de preferencia 1. Otro género interesante de compuestos de hidroxamato es el de los compuestos de la Fórmula (Id): en donde: Z es O, S, ó N-R20; R18 es H; halógeno; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono (metilo, etilo, butilo terciario, cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono; arilo, por ejemplo fenilo insustituido, o fenilo sustituido por 4-OCH3 ó 4-CF3; o heteroarilo; R20 es H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono-cicloalquilo de 3 a 9 átomos de carbono, por ejemplo ciclopropil-metilo; arilo; heteroaplo; aril-alquilo, por ejemplo bencilo; heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; acilo, por ejemplo acetilo, propionilo, y benzoílo; o sulfonilo, por ejemplo, metan-sulfonilo, etan-sulfonilo, bencen-sulfonilo, toluen-sulfonilo; Ai es 1, 2, ó 3 sustituyentes, los cuales son independientemente H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, -OR19, o halógeno; R19 se selecciona a partir de H; alquilo de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; hetero-cicloalquilo de 4 a 9 átomos de carbono; arilo; heteroarilo; aril-alquilo, por ejemplo, bencilo; y heteroaril-alquilo, por ejemplo piridil-metilo; p es de 0 a 3; y q es de 1 a 5, y r es 0; o q es 0 y r es de 1 a 5; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los otros sustituyentes variables son como se definen anteriormente.

Los compuestos especialmente útiles de la Fórmula (Id), son aquéllos en donde R2 es H ó -(CH2)pCH2OH, en donde p es de 1 a 3, en especial aquéllos en donde R-\ es H; tales como aquéllos en donde R( es H, y X e Y son cada uno H, y en donde q es de 1 a 3 y r es 0, o en donde q es 0 y r es de 1 a 3. Entre estos compuestos, R2 es de preferencia H ó -CH2-CH2-OH, y la suma de q y r es de preferencia 1.

La presente invención se refiere además a los compuestos de la Fórmula (le): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los sustituyentes variables son como se definen anteriormente. Los compuestos especialmente útiles de la Fórmula (le), son aquéllos en donde R18 es H, flúor, cloro, bromo, un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido, un grupo cicloalquilo de 3 a 7 átomos de carbono, fenilo insustituido, fenilo sustituido en la posición para, o un anillo de heteroarilo, por ejemplo piridilo. Otro grupo de compuestos útiles de la Fórmula (le) es de aquéllos en donde R2 es H ó -(CH2)pCH2OH, en donde p es de 1 a 3, en especial aquéllos en donde fí^ es H; tales como aquéllos en donde Ri es H, y X e Y son cada uno H; y en donde q es de 1 a 3 y r es 0, o en donde q es 0 y r es de 1 a 3. Entre estos compuestos, R2 es de preferencia H o -CH2-CH2-OH, y la suma de q y r es de preferencia 1. Entre estos compuestos, p es de preferencia 1 , y R3 y R4 son de preferencia H. Otro grupo de compuestos útiles de la Fórmula (le) es el de aquéllos en donde R18 es H, metilo, etilo, butilo terciario, trifluorometilo, ciciohexilo, fenilo, 4-metoxi-fenilo, 4-trifluoro-metil-fenilo, 2-furanilo, 2-tiofenilo, ó 2-, 3-, ó 4-piridilo, en donde los sustituyentes de 2-furanilo, 2-tiofe?ilo, y 2-, 3-, ó 4-piridilo están insustítuidos o sustituidos como se describe anteriormente para los anillos de heteroarilo; R2 es H ó -(CH2)pCH2OH, en donde p es de 1 a 3; en especial aquéllos en donde R( es H, y X e Y son cada uno H, y en donde q es de 1 a 3 y r es 0, o en donde q es 0 y r es de 1 a 3. Entre estos compuestos, R2 es de preferencia H ó -CH2-CH2-OH, y la suma de q y r es de preferencia 1. Los compuestos de la fórmula (le), en donde R20 es H o alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, en especial H, son miembros importantes de cada uno de los subgéneros de compuestos de la Fórmula (le) descritos anteriormente. La N-hidroxi-3-[4-[[(2-hidroxí-etil)-[2-(1H-indol-3-il)-et¡l]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, la N-hidroxi-3-[4-[[[2-(1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, y la N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de las mismas, son compuestos importantes de la Fórmula (le). La presente invención se refiere además a los compuestos de la Fórmula (If): o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los sustituyentes variables son como se definen anteriormente. Los compuestos útiles de la Fórmula (If) incluyen aquéllos en donde R2 es H ó -(CH2)pCH2OH, en donde p es de 1 a 3, en especial aquéllos en donde Ri es H; tales como aquéllos en donde RÍ es H, y X e Y son cada uno H, y en donde q es de 1 a 3 y r es 0, o en donde q es 0 y r es de 1 a 3. Entre estos compuestos, R2 es de preferencia H ó -CH2-CH2-OH, y la suma de q y r es de preferencia 1. La N-hidroxi-3-[4-[[[2-(benzofur-3-il)-etil]-amíno]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, es un compuesto importante de la Fórmula (If). Los compuestos descritos anteriormente se utilizan con frecuencia en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, cuando sea apropiado, las sales de adición de base y las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, por ejemplo las sales de metales, tales como las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, las sales de amonio, las sales de adición de amina orgánica, y las sales de adición de aminoácido, y las sales de sulfonato. Las sales de adición de ácido incluyen las sales de adición de ácido inorgánico, tales como clorhidrato, sulfato, y fosfato; y las sales de adición de ácido orgánico, tales como alquil-sulfonato, aril-sulfonato, acetato, maleato, fumarato, tartrato, citrato, y lactato. Los ejemplos de las sales de metales son las sales de metales alcalinos, tales como la sal de litio, la sal de sodio, y la sal de potasio; las sales de metales alcalinotérreos, tales como la sal de magnesio y la sal de calcio, la sal de aluminio, y la sal de zinc. Los ejemplos de las sales de amonio son la sal de amonio y la sal de tetrametil-amonio. Los ejemplos de las sales de adición de amina orgánica son las sales con morfolina y piperidina. Los ejemplos de las sales de adición de aminoácido son las sales con glicina, fenilalanina, ácido glutámico, y lisina. Las sales de sulfonato incluyen mesilato, tosilato, y las sales de ácido bencen-sulfónico. En la Publicación Internacional Número WO 02/22577, publicada el 21 de marzo de 2002, la cual se incorpora a la presente como referencia en su totalidad, se dan a conocer compuestos de HDAI adicionales dentro del alcance de la Fórmula (I), y su síntesis. Dos compuestos preferidos dentro del alcance de la Publicación Internacional Número WO 02/22577 son: N-hidroxi-3-[4-[(2-hidroxi-etil)-(2-(1H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma; y N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. La presente invención pertenece en particular al uso de los inhibidores de HDAC para la preparación de un medicamento, para el tratamiento de mieloma, que sea resistente a la quimioterapia convencional. Un inhibidor de HDAC, como se utiliza para la presente invención, exhibe, en el ensayo descrito anteriormente, de preferencia un valor IC5o de entre 50 y 2,500 nM, más preferiblemente de entre 250 y 2,000 nM, y de una manera muy preferible de entre 500 y 1,250 nM. Adicionalmente, la invención se refiere a un método para el tratamiento de mieloma, en especial mieloma que sea resistente a la quimioterapia convencional, el cual comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de HDAC a un animal de sangre caliente, en particular a un ser humano, que lo necesite, de preferencia una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I), como se define anteriormente, o la sal de este compuesto que tenga cuando menos un grupo formador de sal, a un animal de sangre caliente, de preferencia un ser humano, que lo necesite. A través de toda la presente solicitud y de las reivindicaciones, mieloma significa de preferencia mieloma múltiple (MM). El término "tratamiento", como se utiliza en la presente, comprende el tratamiento de los pacientes que tengan mieloma, o que estén en u na etapa previa de esta enfermedad, que efectúe la demora del progreso de la enfermedad en estos pacientes. El bortezomib es un agente principal para el tratamiento de mieloma múltiple, que efectúa la apoptosis de las células de mieloma. De una manera sorprendente, se ha encontrado que los inhibidores de HDAC de la presente invención , se agregan al efecto de Bortezomib sobre las células de mieloma m últiple. Por consiguiente, la presente invención pertenece también a una combinación que comprende un inhibidor de H DAC, de preferencia un compuesto de la Fórmula (I) , como se define anteriormente, y un compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma, en donde los ingredientes activos están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en especial para utilizarse en un método para el tratamiento de mieloma. De preferencia, en esta combinación, el compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma es bortezomib. Una combinación que comprende un inhibidor de H DAC y un compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma, en donde los ingredientes activos están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable, será referida posteriormente en la presente como una COMBI NACIÓN DE LA INVENCIÓN . La COMBI NACIÓN DE LA I NVENCIÓN puede ser una preparación combinada o una composición farmacéutica. El término "una preparación combinada", como se utiliza en la presente, define en especial un "kit de partes", en el sentido de que los ingredientes activos, como se definen anteriormente, se pueden dosificar de una manera independiente, o mediante el uso de diferentes combinaciones fijas con cantidades distinguidas de los ingredientes, es decir, de una manera simultánea o en diferentes puntos del tiempo. Las partes del kit, por ejemplo, se pueden administrar entonces de una manera simultánea o cronológicamente escalonada, es decir, en diferentes puntos del tiempo y con intervalos de tiempo iguales o diferentes para cualquier parte del kit de partes. De una manera muy preferible, los intervalos de tiempo se seleccionan de tal manera que el efecto sobre la enfermedad tratada en el uso combinado de las partes, sea mayor que el efecto que se obtendría mediante el uso de solamente cualquiera de los ingredientes activos. La proporción de las cantidades totales del ingrediente activo 1 al ingrediente activo 2, para administrarse en la preparación combinada, se pueden variar, por ejemplo, con el objeto de tratar con las necesidades de una sub-población de pacientes que se vaya a tratar, o con las necesidades del paciente individual, cuyas diferentes necesidades pueden deberse a la edad, el sexo, el peso corporal , etc. , de los pacientes. De preferencia, hay cuando menos un efecto benéfico, por ejemplo una mejora mutua del efecto de los primero y segundo ingredientes activos, en particular un sinergismo, por ejemplo un efecto más que aditivo, efectos convenientes adicionales, menos efectos secundarios, un efecto terapéutico combinado en una dosificación no efectiva de uno o ambos de los primero ingredientes activos, y en especial un fuerte sinergismo de los primero y segundo ingredientes activos. Adicionalmente, la presente invención proporciona un método para el tratamiento de mieloma, el cual comprende administrar una COMBI NACIÓN DE LA INVENCIÓN , en una cantidad que sea conjuntamente efectiva terapéuticamente contra el mieloma, a un animal de sangre caliente que lo necesite. La persona experta en la técnica pertinente está absolutamente capacitada para seleccionar los modelos de prueba relevantes, para probar los efectos benéficos mencionados anteriormente en la presente y posteriormente en la presente sobre el mieloma, de un compuesto que inhiba la actividad de H DAC, o de una COMBI NACIÓN DE LA INVENCIÓN . La actividad farmacológica de u n compuesto que inhiba la actividad de HDAC, o una COMBI NACIÓN DE LA I NVENCIÓN , por ejemplo, se puede demostrar en un estudio clínico adecuado, o por medio de los Ejemplos descritos más adelante. Los estudios clínicos adecuados son, por ejemplo, estudios de escala de dosis de etiqueta abierta, sin selección aleatoria, en pacientes con mieloma avanzado. Estos estudios prueban en particular el sinergismo observado con las COMBINACION ES DE LA INVENCIÓN. Los efectos benéficos sobre mieloma se pueden determinar directamente a través de los resultados de estos estudios, o mediante cambios en el diseño del estudio, los cuales son conocidos como tales por una persona experta en este campo. Por ejemplo, se puede administrar un componente de combinación con una dosis fija, y se escala la dosis de un segundo componente de combinación, hasta que se alcance la Máxima Dosificación Tolerada (MTD). De una manera alternativa, se puede conducir un estudio doble-ciego controlado por placebo, con el objeto de probar los beneficios de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN mencionados en la presente.

Eiemplos Inhibidor de HDAC La N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, el Compuesto (lll) (Novartis Pharma, Basilea, Suiza) se disolvió en agua desyodizada, y se almacenó a -20°C, luego se descongeló y se diluyó en un medio para experimentos de cultivo celular. Para los experimentos con animales, el fármaco se disolvió en agua estéril antes de la inyección intraperitoneal. Líneas Celulares Derivadas de Mieloma Múltiple, y Células de los Pacientes Se cultivaron las líneas celulares de mieloma múltiple humano sensibles al bortezomib (MM.1S) y resistentes al Bortezomib (MM.1R), así como células RPMI-8226 resistentes a Doxorrubicina (Dox 40), Mitoxantrona (MR20), y Melfalano (LR5), en un medio RPMI-1640 (Cellgro, Medíatech, VA) con suero bovino fetal al 10 por ciento, 2 milimoles/litro de L-glutamina (GIBCO, Grand Island, NY), 100 unidades/mililitro de penicilina, y 100 miligramos/litro de estreptomicina (GIBCO). Las líneas celulares resistentes al fármaco se cultivaron con cualquiera de doxorrubicina, mitoxantrona, melfalano, o bortezomib, para confirmar su falta de sensibilidad al fármaco. Las células de los pacientes con mieloma múltiple se purificaron (>95 por ciento CD138+) mediante selección positiva con Microperlas MACS anti-CD138 (Miltenyl, San Diego, CA). Se obtuvieron muestras de células mononucleares de médula ósea (BMMC) y de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante sedimentación de densidad Ficoll-Hipaque, y se incubaron en placas de 96 pozos con o sin el Compuesto (lll). Cultivos de BMSC Se obtuvieron muestras de médula ósea de pacientes con mieloma múltiple. Se utilizaron células mononucleares, separadas mediante sedimentación de densidad Ficoll-Hipaque, para establecer los cultivos de médula ósea a largo plazo. Cuando se hubo desarrollado una monocapa de células adherentes, las células se cosecharon en HBSS conteniendo tripsina al 0.25 por ciento y EDTA al 0.02 por ciento, y se lavaron y se recolectaron mediante centrifugación. Entonces se aplicaron la BMSCs sobre placas de 96 pozos de fondo plano durante la noche, y luego se agregaron 3 x 104 células MM.1S durante 48 horas. Se removieron 150 microlitros de sobrenadante, y las células se impulsaron con [3H]-timidina (0.5 µCí/pozo) durante las últimas 8 horas de los cultivos de 48 horas. Se utilizó el Duoset ELISA (R&D System) para medir la IL-6 en los sobrenadantes de los cultivos de 48 horas de las BMSCs con o sin células MM.1S, en la presencia o en ausencia del Compuesto (lll). Síntesis del ADN Las células de mieloma múltiple (3x 104 células/pozo) se incubaron en placas de cultivo de 96 pozos (Costar, Cambridge, MA) en la presencia del medio, el Compuesto (lll), y/o bortezomíb o IL-6 recombinante (Genetics Institute, Cambridge, MA) durante 48 horas a 37°C. La síntesis del ADN se midió por la absorción de 3H-timidina (NEN Products, Boston, MA). Las células se impulsaron con 3H-timidina (0.5 µCi/pozo) durante las últimas 8 horas de los cultivos de 48 horas. Todos los experimentos se llevaron a cabo por triplicado. Ensayo de Inhibición del Crecimiento Se evaluó el efecto inhibidor del Compuesto (lll) sobre el crecimiento de MM y de BMSC, midiendo la absorbencia de tinte MTS (Promega, Madison, Wl) de las células. Las células de cultivos de 24, 48, ó 72 horas en 200 microlitros del medio más el fármaco, se impulsaron con 40 microlitros de 5 miligramos/mililitro de MTS a cada pozo durante las últimas 4 horas de los cultivos. La absorbencia se midió a 490 nanómetros, utilizando un espectrofotómetro (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA).

Análisis del Ciclo Celular Las líneas celulares de míeloma múltiple, y las células de mieloma múltiple de los pacientes cultivadas durante 0, 8, 12, 18, 36, y 42 horas en el Compuesto (lll) (1 µM), en el Compuesto (lll) más el inhibidor de pan-caspasa ZVAD-FMK (20 µM) (Calbiochem, San Diego, CA), o en un medio de control, se cosecharon, se lavaron con suero regulado con fosfato, se fijaron con etanol al 70 por ciento, y se trataron con 10 mililitros/mililitro de ARNsa (Roche Diagnostics Corp., Indianápolís, IN). Luego las células se tiñeron con 5 miligramos/mililitro de yoduro de propidio (Sigma), y se determina el perfil del ciclo celular utilizando el software del programa M en un citómetro de flujo Epics (Coulter Immunology, Hialeah, FL). Los datos se analizaron utilizando el sistema de flujo Phoenix. Detección de Apoptosis En adición a identificar las células sub-G1 utilizando el análisis del ciclo celular, como se describe anteriormente, también se confirmó la apoptosis utilizando el teñido con anexina V. Se cultivaron células de mieloma múltiple en el medio solo, o con el medio más el Compuesto (lll) 1 µM a 37°C durante 24 horas. Luego las células se lavaron dos veces con suero regulado con fosfato helado, y se volvieron a suspender (1 x 106 células/mililitro) en regulador de enlace (100 milimoles/litro de HEPES, pH de 7.4, 140 milimoles/litro de NaCI, 2.5 milimoles/litro de CaCI2). Las células de mieloma múltiple (1 x 106) se incubaron con anexina V-FITC (5 microlitros; Pharmingen, San Diego, CA), y con Pl (5 miligramos/mililitro) durante 15 minutos a temperatura ambiente. Las células apoptóticas con anexina B + PI se enumeraron utilizando el seleccionador de células Epics (Coulter). Inmunomanchado Las células de mieloma múltiple de los pacientes, y las células MM.1S, se cultivaron con el Compuesto (lll) a 0.01, 0.1, ó 1 µM; se cosecharon; se lavaron; y se Usaron utilizando el regulador de lisis; el regulador RIPA, 2 milimoles/litro de Na3V04, 5 milimoles/litro de NaF, 1 milimol/litro de fluoruro de fenil-metil-sulfonilo (PMSF), 5 miligramos/mililitro de leupeptina, y 5 miligramos/mililitro de aprotinína. Los lisados celulares se sometieron a SDS-PAGE, se transfirieron a una membrana de difluoruro de polivinilideno (PVDF), y se inmunomancharon con anti-histona acetilada (Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), anticuerpo anti-P21 (Santa Cruz Biotech, Santa Cruz, CA), anti-PARP; anti-caspasa-8, anti-caspasa 9, y anti-caspasa 3 (Cell Signaling, MA); así como con conjugados anti-poliubiquitina, anti-LMP7, ant¡-ß5 (Affiníti, Mamhead, Exeter, Devon, Reino Unido). Las membranas se pusieron en tiras, y se volvieron a sondear con anti-tubulina o anti-ß-actina (Sigma, St. Louis, MO), para asegurar la carga de proteína equivalente). Ensayo de Actividad de Proteasoma Se cuantificó la actividad de proteasoma en extractos citosólicos utilizando el sustrato de proteasoma fluorogénico Suc-LLVYAMC (Calbiochem, San Diego, CA). Dicho de una manera breve, el extracto citosólico (100 microgramos de proteína en 5 mililitros) se incubó en una reacción de 200 microlitros conteniendo Tris-HCl 20 mM (pH de 7.8), EDA 0.5 mM, y Suc-LLVY-AMC 100 µM, a temperatura ambiente durante 90 minutos. Se midió la fluorescencia en un fluorímetro de placas de microtitulación (excitación de 360 nanómetros; emisión de 460 nanómetros). EMSA Se llevaron a cabo extractos nucleares para EMSAs. La sonda de oligonucleótído en consenso NF -KB de doble cadena (5'-GGGGACTTTCCC-3', Santa Cruz Biotechnology) se marcó en los extremos con [?-32P]ATP0 (50 µCi a 222 TBq/mM; NEN, Boston, MA). Se condujeron reacciones de enlace que contenían 1 nanogramo del oligonucleótido, y 5 microgramos de la proteína nuclear, a temperatura ambiente durante 20 minutos, en un volumen total de 10 mililitros de regulador de enlace [Tris-HCl 10 mM (pH de 7.5), NaCI 50 mM, MgCI2 1 mM, EDTA 0.5 mM, DTT 0.5 mM, glicerol al4 por ciento (volumen/volumen), y 0.5 miligramos de poli-dl.dC) (Pharmacia, Peapack, NJ). Modelo de Xenoinierto de Murino Los ratones Beige-Nude-Xid de 5 a 6 semanas de edad se inocularon subcutáneamente en el flanco derecho con 3x107 células mM en 100 microlitros de RPMI 1640, junto con 100 microlitros de matriz de membrana de basamento Matrigel (Becton, Bedford, MA), como se describió anteriormente. Cuando los tumores fueron mensurables, los ratones se asignaron a un grupo que recibió el Compuesto (lll) en 25 miligramos/kilogramo intraperitonealmente cada día, o a un grupo de control que recibió el vehículo solo (cloruro de sodio al 0.9 por ciento) en el mismo programa. El tratamiento con el Compuesto (lll) se dio en 25 miligramos/kilogramo. Se llevaron a cabo mediciones de calibre de los diámetros de tumores perpendiculares más largos cada día alterno, para estimula el volumen del tumor, utilizando la siguiente fórmula: 4p/3x (anchura/2)2x (longitud/2), que representa el volumen tridimensional de una elipse. Los animales se sacrificaron cuando sus tumores alcanzaron 2 centímetros. La sobrevivencia se evaluó desde el primer día de tratamiento hasta la muerte. El crecimiento tumoral se evaluó desde el primer día del tratamiento hasta el día del primer sacrificio (día 9). Análisis Estadístico Se determinó el significado estadístico de las diferencias observadas en los cultivos tratados con fármaco contra los cultivos de control utilizando la prueba t de Student. El nivel mínimo de significado fue de p<0.05. El análisis del sinergismo y el antagonismo con el Compuesto (lll) y dexametasona se llevó a cabo utilizando el análisis de Efecto de Dosis Media, en conjunto con el programa de software comercialmente disponible Calcusyn (Biosoft, Ferguson, MO, EUA). Se calcularon las curvas de sobrevivencia para los ratones utilizando el método de Kaplan-Meier. Las diferencias en el tiempo de sobrevivencia entre el grupo de control y el grupo tratado, se compararon utilizando una prueba de rango-log. Los tiempos de sobrevivencia media se compararon utilizando la prueba exacta de Fisher. Con el fin de comparar el índice de crecimiento tumoral en los dos grupos, se ajustó un modelo de efecto mixto lineal (modelo de coeficiente aleatorio). Adicionalmente, los Ejemplos demuestran que el Compuesto (lll) inhibe el crecimiento de células de mieloma a una concentración inhibidora media de menos de 10 nM a las 48 horas en las líneas celulares de mieloma múltiple resistentes a las terapias convencionales, así como en las células de los pacientes con mieloma múltiple, como se determinó mediante el ensayo MTS, y la absorción de timidína tritiada. También se inhibió la proliferación de células de mieloma MM.1S cuando se co-cultivaron con células estromales de médula ósea, demostrando la capacidad para superar los efectos estimulantes del micro-medio-ambiente de la médula ósea. Los efectos pro-apoptóticos se confirmaron mediante Western-blot. Se observó una disociación significativa de la caspasa 8, la caspasa 9, la caspasa 3, y PARP, con 20 nM del Compuesto (lll) en las células MM.1S, indicando un involucramiento de las sendas apoptóticas tanto intrínseca como extrínseca en la apoptosis mediada por el Compuesto (lll). Hubo un aumento asociado de p21, y una disminución de c-myc. Se observó actividad sinérgica en combinación con el inhibidor de proteasoma bortezomib. La inhibición de HDAC inducida por el Compuesto (lll) dio como resultado la hiperacetilación de histona en bajas concentraciones nanomolares. La acetilación de la a-tubulina es una modificación posterior a la traducción que consiste en la adición de un grupo acetilo a la lisina 40, que se revierte mediante HDAC6, o la desacetilasa de tubulina (TDAC). La acetilación de tubulina tiene un papel importante en la diferenciación de la estructura y función de los microtúbulos. Adicionalmente, la desacetilasa de tubulina se enlaza de una manera constitutiva tanto con las proteínas mal plegadas poliubiquítinadas, como con la dineína, la proteína mal plegada de reclutamiento para los motores de dineína para el transporte a los agresomas a lo largo de los microtúbulos, que sirve como un mecanismo de defensa importante contra la apoptosis en las células de mieloma múltiple. Es importante que se observó una inhibición dependiente de la dosis de TDAC en las células MM.1S con bajas concentraciones nanomolares del Compuesto (lll). Es un objetivo de esta invención proporcionar una composición farmacéutica que comprenda una cantidad, que sea conjuntamente efectiva terapéuticamente contra mieloma, la cual comprenda la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN. En esta composición, los componentes de combinación se pueden administrar juntos, uno después del otro, o por separado en una forma de dosificación unitaria combinada, o en dos formas de dosificación unitaria separadas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una combinación fija. Las composiciones farmacéuticas para la administración separada de los componentes de combinación, y para la administración de una combinación fija, es decir, una sola composición galénica comprendiendo cuando menos dos componentes de combinación , de acuerdo con la invención, se pueden preparar de una manera conocida por sí misma, y son aquéllas adecuadas para administración enteral, tal como oral o rectal , y parenteral a mam íferos (animales de sangre caliente), incluyendo el hombre, las cuales comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de cuando menos un componente de combinación farmacológicamente activo solo o en combinación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, en especial adecuados para aplicación enteral o parenteral. La composición farmacéutica novedosa contiene, por ejemplo, de aproximadamente el 10 por ciento a aproximadamente el 100 por ciento, de preferencia de aproximadamente el 20 por ciento a aproximadamente el 60 por ciento de los ingredientes activos. Las preparaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para administración enteral o parenteral son , por ejemplo, aquéllas en formas de dosificación unitaria, tales como tabletas recubiertas con azúcar, tabletas, cápsulas, o supositorios, y además ampolletas. Si no se indica de otra manera, éstas se preparan de una manera conocida por sí misma, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezcla, granulación , recubrimiento con azúcar, disolución, o líofilización . Se apreciará que el contenido unitario de un componente de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosificación no necesita por sí mismo constituir una cantidad efectiva, debido a que se puede alcanzar la cantidad efectiva necesaria mediante la administración de una pluralidad de unidades de dosificación. En particular, se puede administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de cada uno de los componentes de combinación de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN de una manera simultánea o en secuencia y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar por separado o como una combinación fija. Por ejemplo, el método de tratamiento de mieloma de acuerdo con la presente invención puede comprender: (i) la administración de un componente de combinación (a) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable; y (ii) la administración de un componente de combinación (b) , en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable, de una manera simultánea o en secuencia en cualquier orden, en cantidades conjuntamente efectivas terapéuticamente, de preferencia en cantidades sinérgicamente efectivas, por ejemplo, en dosificaciones diarias correspondientes a las cantidades descritas en la presente. Los componentes de combinación individuales de la COMBI NACIÓN DE LA INVENCIÓN se pueden administrar por separado, en diferentes tiempos durante el transcurso de la terapia, o de una manera concurrente, en formas de combinación divididas o individuales. Adicionalmente, el término "administrar" también abarca el uso de un pro-fármaco de un componente de combinación que se convierta in vivo hasta el componente de combinación como tal. Por consiguiente, se debe entender que la presente invención abarca todos los regímenes de tratamiento simultáneo o alternado, y el término "administrar" se debe interpretar de conformidad con lo mismo. La dosificación efectiva de los compuestos utilizada para inhibir la actividad de H DAC y de los componentes de combinación empleados en la COMBI NACIÓN DE LA INVENCIÓN , puede variar dependiendo del compuesto particular o de la composición farmacéutica empleada, del modo de administración , del tipo de mieloma que se esté tratando, de la severidad del mieloma que se esté tratando. Por consiguiente, el régimen de dosificación de la COMBI NACIÓN DE LA I NVENCIÓN se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, incluyendo la vía de administración , y la función renal y hepática del paciente. Un médico, clínico, o veterinario de una experiencia ordinaria, puede determinar fácilmente y prescribir la cantidad efectiva de los compuestos que inhiban la actividad de HDAC, o de los ingredientes activos individuales de la COMBI NACIÓN DE LA I NVENCIÓN requeridos para prevenir, contrarrestar, o detener el progreso de la condición. La precisión óptima para alcanzar la concentración de los ingredientes activos dentro del intervalo que produzca eficacia sin toxicidad, requiere de un régimen basado en la cinética de la disponibilidad y sitios objetivo de los ingredientes activos . Más aún, la presente invención proporciona un paquete comercial que comprende, como ingredientes activos, la COMBI NACIÓN DE LA I NVENCIÓN , junto con instrucciones para su uso simultáneo , separado, o en secuencia, en el tratamiento de mieloma. La presente invención también proporciona el uso de un compuesto de la Fórmula (I), como se define en la presente, y el uso de una COMBINAC IÓN DE LA I NVENCIÓN , para la preparación de un medicamento para el tratamiento de mieloma.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. El uso de un inhibidor de HDAC para la preparación de un medicamento para el tratamiento de mieloma, en donde el inhibidor de HDAC es la N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, que tiene la Fórmula (lll): o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el mieloma es resistente a la quimioterapia convencional.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el animal de sangre caliente es un ser humano.

4. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad es mieloma múltiple.

5. Un método para el tratamiento de mieloma, el cual comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de HDAC a un animal de sangre caliente que lo necesite, en donde el inhibidor de HDAC es ola N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, que tiene la Fórmula (lll): o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el mieloma es mieloma múltiple.

7. Una combinación, la cual comprende un inhibidor de HDAC, y un compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma, en donde los ingredientes activos están presentes en cada caso, en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente cuando menos un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en donde el inhibidor de HDAC es la N-hidroxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]-metil]-fenil]-2E-2-propenamida, que tiene la Fórmula (lll): o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

8. La combinación de acuerdo con la reivindicación 7, en donde el compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma es bortezomib.

9. La combinación de acuerdo con la reivindicación 7, para uso simultáneo, separado, o en secuencia, en el tratamiento de mieloma.

10. Un método para el tratamiento de míeloma, el cual comprende administrar una combinación como se define en la reivindicación 7, en una cantidad que es conjuntamente efectiva terapéuticamente contra el mieloma, a un animal de sangre caliente que lo necesite. 1 1 . Una composición farmacéutica, la cual comprende una cantidad que es conjuntamente efectiva terapéuticamente contra el mieloma, de una combinación de acuerdo con la reivindicación 7, y cuando menos un veh ículo farmacéuticamente aceptable. 12. Un paquete comercial, el cual comprende un inhibidor de HDAC, y un compuesto que efectúa la apoptosis de las células de mieloma, junto con instrucciones para su uso simultáneo, separado, o en secuencia, en el tratamiento de mieloma.