MX2007015781A

MX2007015781A - Conjugados antigenos y sus usos.

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Publication number: MX2007015781A
Application number: MX2007015781A
Authority: MX
Inventors: Martin Bachmann; Yu Zou; Alain Tissot; Philippe Saudan; Nicole Schmitz; Andrea Jegerlehner; Adrian Huber; Stephen Martin; Heather Hinton
Original assignee: Cytos Biotechnology Ag
Priority date: 2005-06-14
Filing date: 2006-06-14
Publication date: 2008-02-15
Also published as: CN101193654A; WO2006134125A1; KR20080015854A; ZA200710488B; IL187479A0; EP1896068A1; WO2006134125A9; RU2007147938A; JP2008543810A; US20100111995A1; CA2612069A1; BRPI0612293A2; AU2006259057A1

Abstract

La presente invencion concierne a los campos de medicina, salud publica, inmunologia, biologia molecular y virologia. La invencion proporciona una composicion que comprende una particula similar a virus (VLP) ligada al menos a un antigeno de la invencion, en donde el antigeno de la invencion es CCR5 de la invencion, gastrina de la invencion, CXCR4 de la invencion, CETP de la invencion o C5a de la invencion. La invencion tambien proporciona un proceso para producir la composicion. Las composiciones de la invencion son utiles para la produccion de vacunas, particularmente para el tratamiento contra enfermedades en donde el antigeno de la invencion interviene o contribuye a la condicion, particularmente para el tratamiento contra el SIDA, neoplasia gastrointestinales, enfermedades cardiacas coronarias o enfermedades inflamatorias. Mas aun, las composiciones de la invencion inducen respuestas inmunitarias eficientes, particularmente respuestas de anticuerpos. Mas aun, las composiciones de la invencion son particularmente utiles para inducir, de manera eficiente, respuestas inmunitarias autoespecificas dentro del contexto indicado.

Description

CONJUGADOS &NTIGENICOS Y SUS USOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención incluye el campo de la medicina, salubridad pública, inmunología, virología y biología molecular. La invención proporciona una composición que comprende una particula similar a virus (VLP por sus siglas en inglés) ligada con al menos un antigeno de la invención, en donde el antigeno de la invención es CCR5, gastrina de la invención, CXCR4 de la invención, CETP de la invención o C5a de la invención. La invención también proporciona un proceso para producir la composición. Las composiciones de esta invención son útiles para la producción de vacunas, particularmente para el tratamiento contra enfermedades en donde el antigeno de la invención interviene o contribuye a la condición, particularmente para el tratamiento contra el SIDA, neoplasia gastrointestinales, enfermedades cardiacas coronarias o enfermedades inflamatorias. Más aún, las composiciones de la invención inducen respuestas inmunitarias eficientes, particularmente respuestas de anticuerpos. Más aún, las composiciones de la invención son particularmente útiles para inducir de manera eficiente respuestas inmunitarias autoespecificas dentro del contexto indicado.

Ref. :187195 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las cepas de VIH R5 utilizan las moléculas CD4 y CCR5 de superficie celular para fijarse y entrar en macrófagos y células CD4+ T. CCR5 es un receptor 7-transmembranal con una secuencia N-terminal y 3 bucles expuestos al espacio extracelular, que se llaman subsiguientemente; PNt, ECL-1, ECL-2 y ECL-3, respectivamente. Los ligandos CCR5 naturales, RANTES, MlP-la, MIP-lß y sus análogos son capaces de bloquear la interacción virus-correceptor y además internalizan el CCR5 (Lederman et al., 2004, Science 306, p485). Se han encontrado en el 12.5% de mujeres autoanticuerpos específicos para CCR5 que se expusieron repetidamente a VIH pero que permanecieron sin infectarse (Lopalco et al., 2000, J. Immunology 164, 3426) . Se demostró que estos anticuerpos se unen al primer bucle extracelular (ECL-1) del CCR5 y pueden inhibir la infección VIH R5-trófica de células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) . La aloinmunización en mujeres conlleva a los anticuerpos específicos para CCR5 que fueron capaces de inhibir la infección por R5-VIH in vitro (Wang et al., 2002, Clin. Exp. Immunol. 129, 493) . Los anticuerpos monoclonales a-CCR5 son capaces de evitar la infección por VIH in vi tro (Olson et al., 1999, J. Virol. 73, 4145; Wu y LaRosa et al., 1997, J. Exp. Med. 186, 1373). La unión del anticuerpo a un péptido cíclico que corresponde a un pequeño bucle extracelular ECL-2A (Argl68-Cysl78 ) suprime la infección por VIH-1 R5 (Misumi et al., 2001, J. Virol. 75, 11614). Los anticuerpos producidos por simios inmunizados con péptidos CCR5 lineales (a partir del N-terminal, la secuencia ECL-1 ó ECL-2) tiene efecto inhibitorio viral in vitro (Lehner et al., 2001, J. Immunology 166, 7446). El dominio N-terminal de CCR5 se muestra en partículas similares a papilomavirus y simios inmunizados (Chackerian et al., 2004, J. Virol. 78, 4037) . El receptor de quimocina CXCR4, también conocido como LESTR o fusina, pertenece a la familia de receptores acoplados a proteína G del dominio 7-transmembranal (Federsppiel et . al. (1993), Genomics 16:707). CXCR4 se expresa sobre la superficie celular en la mayoría de poblaciones de leucocitos, incluyendo células B y monocitos, la mayoría de subconjuntos de linfocitos-T, células endoteliales y células epiteliales (Murdoch, (2000) Immunol. Rev. 177:175). El único ligando conocido para CXCR4 es SDF-1 (Pelchen-Mattews, et. al. (1999) Immunol. Rev. 168:33). Posteriormente se identificó a CXCR4 como un correceptor para VIH (Feng et al (1996) Science 272:872). En consecuencia, las cepas VIH que necesitan de CXCR4 para ingresar en células se categorizan como cepa X4 y esta entrada puede ser bloqueada mediante SDF-1 que ha demostrado bloquear la entrada de VIH-1 (Oberlin et al (1996), Na ture 382 : 833; Bleul, et al (1996) Na ture 382 : 829. Se han identificado varios antagonistas del péptido CXCR4 y se demostró que inhiben la entrada e infección de cepas de X4 VIH-1 (Murakami et al (1997) J Exp Med 186: 1389;Arakaki et al (1999). J Virol 73 : 1 719; Doranz et al (2001) AIDS Res Hum Retroviruses 1 7 : 415; Doranz, et al (1997) J Exp Med 186: 1395; Schols, D. (2004), Curr Top Med Chem 4 : 883. Además, el pequeño compuesto químico AMD3100 que es un potente y selectivo inhibidor de la replicación de VIH-1 y VIH-2 ha demostrado ser específico para CXCR4 (De Clercq (2003) Nat Rev Drug Discov 2:581). Sin embargo, los anticuerpos monoclonales anti-CXCR4 que tienen especificidad de objetivo hacia diferentes dominios extracelulares de CXCR4 mostraron inhibición de infección por VIH-1 (Endres et al (1996) Cell 87 : 745; Brelot et al (1997), J Virol 71 : 4744 ; Misumi et al (2003), J Biol Chem 278 : 32335; Xiao et al (2000), Exp Mol Pa thol 68 : 139) . La gastrina (G17) es un grupo de clásicas hormonas peptídicas intestinales que se encuentran en una cantidad mucho menor en el colon y páncreas (Koh, Regulatory Peptides. 93, 37-44 (2000) ) . La gastrina se procesa a partir de su precursor, progastrina (G34). Tanto la gastrina como la progastrina existen en forma de glicina C-terminal extendida y en una forma amidada de fenilalanina C-terminal (Steel. IDrugs. 5, 689-695 (2002)). La gastrina se conoce bien por su habilidad para estimular secreción de ácido gástrico (Pharmacol Ther. 98, 109-127 (2003)). La hormona relacionada, colecistocinina (CCK), que tiene la amida tetrapeptídica C-terminal a manera de gastrina, se sintetiza en el duodeno y es responsable de la secreción de enzimas pancreáticas. Aunque la G17 amidada se une al receptor CCK-2, el CCK se une tanto al receptor CCK-1 como al receptor CCK-2 (Steel. IDrugs. 5, 689-695 (2002)). Permanece impreciso el receptor para gastrina extendida con lisina. Los datos recientes sugieren que la gastrina puede promover el desarrollo de neoplasia del tracto gastrointestinal (Watson. Aliment Pharmacol Ther. 14, 1231-1247 (2000); Watson. Aliment Pharmacol Ther. 14, 1231-1247 (2000)). La activación del sistema del complemento induce una cantidad de potentes efectos biológicos, varios de los cuales están regulados por la anafilatoxina C5a. El quinto componente del complemento (C5) es escindido por C5 convertasa en dos fragmentos, C5a y C5b. C5a, una glicoproteína agrupada de 4 hélices y 74 aminoácidos (Fernández y Hugli, J. Biol. Chem. 253, 6955-6964, 1978), es responsable de la generación de una variedad de diversos efectos sobre sistemas celulares, especialmente neutrófilos, células endoteliales y macrófagos para inducir inflamación local y combatir microorganismos infecciosos (Ward P., Nat. Rev. Immunol. 4:133, 2004). Sin embargo, conforme a lo mismo, la excesiva generación de C5a en sepsis, conlleva a serios defectos funcionales en neutrófilos (Czermak et al., Nat. Med. 5:788, 1999; Huber-Lang et al., J. Immunol . 166:1193, 2001) . La elevada activación de C5a también se ha implicado en una variedad de enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, tales como artritis reumatoide (José P. Ann Rheum. Dis. 49:747, 1990), psoriasis (Takematsu H., Arch. Dermatol. 129:74, 1993), síndrome de fatiga respiratoria en adultos (Langlois P., Heart Lung 18:71, 1989), lesión por reperfusión (Homeister, J. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 34:17, 1994), lupus nefritis y penfigoide bulboso. Se han sugerido los anticuerpos que se unen a C5 y bloquean la escisión y con ello reducen la generación de C5a y C5b, para usarse en el tratamiento contra condiciones como por ejemplo, glomerulonefritis (W09529697), asma (WO04022096) , artritis inducida por colágeno (Wang et al, Proc. Nati. Acad. Sci., 92:8955, 1995) y artritis transferida por suero (Ji et al, I munity, 16:157, 2002). Los anticuerpos como especialmente los que se unen al C5a, se han sugerido para utilizarse en el tratamiento contra síndrome de fatiga respiratoria en adultos (ARDS por sus siglas en inglés) (WO8605692) y activación dañina de complemento intravascular (EP245993) . También se ha propuesto el uso de un anticuerpo monoclonal, que es sensible al bucle extracelular de C5aR y con ello, presumiblemente reduce o inhibe la unión de C5a con C5aR para el tratamiento contra trastornos inmunopatológicos (WO2003062278 ) . La proteína de transferencia de colesteril-éster (CETP por sus siglas en inglés) es una glicoproteína plasmática que regula el intercambio de éster de colesterol (CE por sus siglas en inglés) y triglicéridos (TG) entre partículas de lipoproteína de alta densidad (HDL por sus siglas en inglés) y partículas ricas en apo B tal como las partículas de lipoproteína de muy baja densidad (VLDL por sus siglas en inglés) o partículas de lipoproteína de baja densidad (LDL por sus siglas en inglés) . El CETP también transfiere fosfolípidos (PL por sus siglas en inglés) . El ADNc de CETP de humano codifica para una proteína de 476 aminoácidos. El HDL se considera antiaterogénico, a diferencia del nivel de colesterol de HDL y enfermedad cardíaca coronaria (CHD por sus siglas en inglés) que se ha observado (Barter P.J. and Rye K.-A. (1996) Atherosclerosis 121: 1-12). El documento W096/39168 describe un método para aumentar HDL-c al estimular una respuesta inmunitaria que inhibe la actividad de CETP. La inmunización contra antígenos CETP también se ha descrito en el documento US2003/0026808. Los polipéptidos CETP se fusionan con "MAP" y se emulsionan en un adyuvante completo de Freund (CFA por sus siglas en inglés) para la inmunización de conejos. Se ha descrito en el documento US2003/0026808, la fusión de un péptido CETP al antígeno de núcleo de hepatitis B (HBcAg) , pero no se mencionó la inmunogenicidad de la estructura.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Sorprendentemente, hemos descubierto que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, comprenden al menos un dominio extracelular CCR5 o al menos un fragmento de dominio extracelular CCR5 y son capaces de inducir respuestas inmunitarias, particularmente respuestas de anticuerpos, que conllevan a una elevada titulación de anticuerpos contra CCR5. Más aún, sorprendentemente, hemos descubierto que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, que comprenden al menos un dominio extracelular CCR5 o al menos un fragmento de dominio extracelular CCR5 son capaces de inducir respuestas inmunitarias, particularmente respuestas de anticuerpos con un efecto terapéutico y/o protector contra infección por VIH. Esto indica que las respuestas inmunitarias, particularmente los anticuerpos generados por las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, son capaces de reconocer específicamente a CCR5 in vivo e interfieren con su fusión como correceptor VIH. Por lo tanto, en el primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende (a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y (b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es un dominio extracelular CCR5 o un fragmento de dominio extracelular CCR5 o cualquier combinación de éstos y en donde (a) y (b) se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un arreglo u ordenamiento antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende una proteína recombinante, de preferencia una proteína de cubierta recombinante, o mutantes o fragmentos de la misma, de un virus, de preferencia un bacteriófago ARN. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona una composición que comprende: (a) una partícula similar a virus (VLP) de un bacteriófago ARN con al menos dos primeros sitios de unión; y (b) al menos un dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión; en donde el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente de: (i) un dominio Nta o un fragmento del dominio Nta, y (ii) un dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO:27 (SEQ ID N0:56) ó un fragmento del dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27, en donde el C-término del dominio Nta o fragmento del dominio Nta se fusiona, preferiblemente en forma directa, con el N-término del dominio Ntb o el fragmento del dominio Ntb en donde el primer o el segundo de al menos dos segundos sitios de unión comprenden o son un grupo sulfhidrilo, de preferencia un grupo sulfhidrilo de un residuo cisteína en donde el primero o al menos el segundo sitio de unión se ubican en dirección 5' del N-término de aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27 y en donde el segundo de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 3' del C-término de los aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27, preferiblemente en dirección 3' del C-término del dominio PNt extracelular de CCR5; y en donde el VLP del bacteriófago ARN y el dominio PNt extracelular de CCR5 están ligados mediante al menos una unión covalente no peptídica. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar infección por VIH, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un humano, en donde el antígeno de la invención es un CCR5 de la invención. Ahora, hemos descubierto sorprendentemente que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, que comprenden al menos un dominio extracelular CXCR4 o al menos un fragmento de dominio extracelular CXCR , son capaces de inducir fuertes respuestas inmunitarias, particularmente fuertes respuestas de anticuerpos que conllevan a una elevada titulación de anticuerpos contra CXCR4. Por lo tanto, en el primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, donde al menos un antígeno es un dominio extracelular CXCR4 o un fragmento de dominio extracelular CXCR4 o cualquier combinación de éstos y en donde a) y b) se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un arreglo u ordenación antigénica repetitiva y ordenada. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende una proteína recombinante, preferiblemente una proteína de cubierta recombinante, o fragmentos o mutantes de la misma, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. Sorprendentemente, ahora hemos descubierto que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, comprenden al menos una proteína CETP o al menos un fragmento CETP y son capaces de inducir fuertes respuestas inmunitarias, particularmente fuertes respuestas de anticuerpos, que conlleva a una elevada titulación de anticuerpos contra CETP. Por lo tanto, en el primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es una proteína CETP o un fragmento CETP y en donde a) y b) se ligan a través de al menos un primer y un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un ordenamiento o arreglo antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende proteína recombinante, preferiblemente proteína de cubierta recombinante, o mutantes o fragmentos de la misma, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. Sorprendentemente, hemos ahora descubierto que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, comprenden al menos una proteína C5a o al menos un fragmento C5a y son capaces de inducir fuertes respuestas inmunitarias, particularmente fuertes respuestas de anticuerpos, que conllevan a una elevada titulación de anticuerpos contra C5a. Más aún, hemos descubierto de manera sorprendente que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, comprenden al menos una proteína C5a o al menos un fragmento C5a y son capaces de inducir fuertes respuestas inmunitarias, particularmente fuertes respuestas de anticuerpos con un efecto protector y/o terapéutico contra enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde C5a tiene una función importante como en la artritis. Esto indica que las respuestas inmunitarias, particularmente los anticuerpos generados por las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, son capaces de reconocer específicamente a C5a in vivo e interferir con su función.

Por lo tanto, en el primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es una proteína C5a o un fragmento C5a y en donde a) y b) se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un arreglo u ordenamiento antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende una proteína recombinante, preferiblemente una proteína de cubierta recombinante, o mutantes o fragmentos de la misma, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. La presente invención es ventajosa con respecto a la técnica anterior que emplea anticuerpos monoclonales contra C5a para el tratamiento contra enfermedades. Los inconvenientes de la terapia de anticuerpos monoclonales incluyen la necesidad de repetidas inyecciones de grandes cantidades de anticuerpo (Kaplan, Curr Opin Invest. Drugs. 2002; 3:1017-23). Las elevadas dosis de anticuerpos pueden conllevar a efectos secundarios tales como enfermedad de infusión. También pueden generarse anti-anticuerpos en pacientes con una respuesta alotípica, incluso si se utilizan anticuerpos humanos o humanizados, lo que conlleva a un menor efecto terapéutico o a potenciales efectos secundarios. Más aún, el gasto asociado con el elevado costo de producción de un anticuerpo monoclonal humanizado y con la necesidad de frecuentes hospitalizaciones hace de este tratamiento con anticuerpos algo inviable para varios pacientes que lo necesita . En un aspecto, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna de la invención, respectivamente, a un animal o un humano, en donde al antígeno de la invención es un C5a de la invención. Las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde C5a interviene o contribuye a la condición, incluyen, entre otras, a la artritis reumatoide, lupus sistémico eritematoso, asma y penfigoide bulboso. En un aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es Bradicinina de la invención en donde a) e b) se ligan a través de al menos un primer y un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un arreglo u ordenamiento antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende una proteína recombinante, preferiblemente una proteína de cubierta recombinante, mutantes o fragmentos de la misma, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. En un aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es des-Arg-Bradicinina de la invención en donde a) y b) se ligan a través de un primer y al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un arreglo u ordenamiento antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende proteína recombinante, preferiblemente proteína de cubierta recombinante, sus mutantes o fragmentos, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. Ahora, hemos descubierto de manera sorprendente que las vacunas y composiciones inventivas, respectivamente, comprenden al menos una gastrina G17, al menos un fragmento de gastrina G17, progastrina G34 o al menos un fragmento de progastrina G34 y son capaces de inducir fuertes respuestas inmunitarias, particularmente fuertes respuestas de anticuerpos, lo que conlleva a una elevada titulación de anticuerpos contra gastrina o progastrina.

Por lo tanto, en el primer aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antígeno es gastrina G17, un fragmento de gastrina G17, una progastrina G34 ó un fragmento de progastrina G34 y en donde a) y b) se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente para formar un ordenamiento o arreglo antigénico repetitivo y ordenado. En una modalidad preferida de la invención, la partícula similar a virus adecuada para usarse en la presente invención comprende una proteína recombinante, preferiblemente una proteína de cubierta recombinante, mutantes o fragmentos de la misma, de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición de vacuna, en donde la composición de vacuna comprende al menos un antígeno de la invención. Más aún, la presente invención proporciona un método para administrar la composición de vacuna a un humano o animal, preferiblemente un mamífero. La composición de vacuna inventiva es capaz de inducir una fuerte respuesta inmunitaria, particularmente una respuesta de anticuerpo sin la presencia de al menos un adyuvante. Por lo tanto, en una modalidad preferida, la composición de vacuna está desprovista de un adyuvante. Al no utilizar un adyuvante, se reduce la posible ocurrencia de una respuesta de célula T inflamatoria indeseada. En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende la composición inventiva y un portador farmacéuticamente aceptable. Nuevamente, en otro aspecto, la invención proporciona un método para producir la composición de la invención que comprende a) proporcionar una VLP con al menos un primer sitio de unión; b) proporcionar al menos un antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión; y c) combinar la VLP y al menos un antígeno de la invención para producir la composición, en donde al menos un antígeno y la VLP se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura ÍA muestra el resultado de ELISA en placas recubiertas ya sea con nG17amida ó CCK8 y se incuban con suero de ratón diluido en serie (14 días posteriores a la inmunización) . La Figura IB muestra el resultado de inhibición de ELISA, en donde el suero se incuba previamente con nG17amida ó CCK8 diluido en serie antes de agregarse a las placas recubiertas. La Figura 2A muestra la suma de la puntuación clínica promedio a través de todas las extremidades después de la inyección final de colágeno/CFA (Figura 2A) ó después de la inyección final de coctel anticuerpo anti-colágeno-monoclonal (Figura 2B) de ratones inmunizados ya sea con Qß-mC5acys ó Qß de VLP. El eje-x representa los días posteriores a la inyección de colágeno y el eje-y representa la suma promedio de la puntuación clínica de todas las patas. La Figura 3 muestra el porcentaje de ratones inmunizados ya sea con Qß-mC5acys ó Qß VLP con lectura de proteinuria mayores a 300µg/ml.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos y científicos utilizados aquí tienen el mismo significado que normalmente entendería el experto en la técnica a la cual pertenece la invención. Antígeno: como se utiliza aquí, el término "antígeno" se refiere a una molécula capaz de unirse a un anticuerpo o un receptor de célula T (TCR por sus siglas en inglés) si es presentado por moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC por sus siglas en inglés) . El término "antígeno", como se utiliza aquí, también abarca epítopos de células T. Además, un antígeno es capaz de ser reconocido por el sistema inmunitario y/o es capaz de inducir una respuesta inmunitaria humoral y/o una respuesta inmunitaria celular lo que conlleva a la activación de linfocitos B y/o T. Sin embargo, esto puede requerir de al menos, en ciertos casos, que el antígeno contenga o esté ligado a un epítopo de célula T y que además se administre en adyuvante. Un antígeno puede tener uno o más epítopos (epítopos B y T) . La reacción específica a la que se hace referencia anteriormente significa que indica que el antígeno reacciona preferiblemente, por lo general en forma muy selectiva, con su anticuerpo correspondiente ó TCR y no con la multitud de otros anticuerpos ó TCRs que pueden ser sensibilizados por otros antígenos. Los antígenos, como se utilizan aquí, también pueden ser mezclas de varios antígenos individuales. Sitio antigénico: el término "sitio antigénico" y el término "epítopo antigénico", se utilizan aquí indistintamente y se refieren a porciones continuas o discontinuas de un polipéptido que puede unirse de manera inmunoespecífica con un anticuerpo o un receptor de célula T dentro del contexto de una molécula MHC. La unión inmunoespecífica excluye la unión no específica pero no necesariamente excluye una reactividad cruzada. El sitio antigénico normalmente comprende 5-10 aminoácidos en conformación espacial lo cual es exclusivo para el sitio antigénico. Antígeno de la invención: el término "antígeno de la invención", como se utiliza aquí, se refiere a un antígeno seleccionado a partir del grupo que comprende: a) CCR5 de la invención; b) CXCR4 de la invención; c) CETP de la invención; d) C5a de la invención; e) gastrina de la invención; f) Bradicinina de la invención; y g) des-Arg-Bradicinina de la invención. CCR5 de la invención: el término "CCR5 de la invención" como se utiliza aquí, se refiere al menos a un dominio extracelular CCR5, al menos a un fragmento de dominio extracelular CCR5 como se define aquí o cualquiera de sus combinaciones . Dominio extracelular CCR5 : el término "dominio extracelular CCR5" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista o alternativamente o preferiblemente que sea cualquiera de los cuatro dominios extracelulares de CCR5 humano de SEQ ID NO: 24 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. Más aún, el término "dominio extracelular CCR5" como se utiliza aquí, también abarca cualquier polipéptido que comprenda, que consista o que alternativamente o preferiblemente sea cualquier variante natural o genéticamente manipulada que tenga más del 70%, preferiblemente más del 80%, inclusive con mayor preferencia más del 90%, nuevamente incluso más preferiblemente más del 95% y con mayor preferencia más del 97% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto al dominio extracelular CCR5 como se define anteriormente. El término "dominio extracelular CCR5", como se utiliza aquí, debe además abarcar modificaciones postraduccionales que incluyen, entre otras, a glicosilaciones, acetilaciones y fosforilaciones del dominio extracelular CCR5 como se refiere anteriormente. Preferiblemente, el dominio extracelular CCR5 como se define aquí, comprende en su mayoría 200, incluso, preferiblemente a lo mucho 100 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, el dominio extracelular CCR5 es capaz de inducir in vivo la producción de anticuerpo que se une específicamente a CCR5. Fragmento de dominio extracelular CCR5 : el término "fragmento de dominio extracelular CCR5" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente, o que tenga al menos 4, 5, preferiblemente al menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20, 25 ó 30 aminoácidos contiguos de un dominio extracelular CCR5 como se define aquí, así como cualquier polipéptido que tenga más del 65%, preferiblemente más del 80%, de preferencia más del 90% incluso más preferiblemente más del 95% de identidad de secuencia. Preferiblemente, el término "fragmento de dominio extracelular CCR5" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista o alternativamente o preferiblemente que tenga al menos 6 aminoácidos contiguos de un dominio extracelular CCR5 como se define aquí, así como cualquier polipéptido que tenga más del 65%, preferiblemente más del 80%, preferiblemente más del 90% incluso más preferiblemente, más del 95% de identidad de secuencia aminoacídica. Preferiblemente, el fragmento de dominio extracelular CCR5, como se define aquí, comprende a lo mucho 50, incluso más preferente a lo mucho 30 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, un fragmento del dominio extracelular CCR5 es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente a CCR5. Combinación de dominio extracelular CCR5 y/o fragmento del dominio extracelular CCR5: el término "combinación de dominio extracelular CCR5 y/o fragmento del dominio extracelular CCR5" debe abarcar cualquier entidad que comprenda o alternativamente que consista de cualquier combinación del dominio extracelular CCR5 y/o fragmento del dominio extracelular CCR5 como se define anteriormente. Preferiblemente, el dominio extracelular CCR5 y/o o el fragmento del dominio extracelular CCR5 se combinan mediante fusión en un solo polipéptido. Por lo tanto, el término "combinación de dominio extracelular CCR5 y/o fragmento del dominio extracelular CCR5" además comprende aminoácidos adicionales como separadores, en donde el separador normalmente no es mayor a 10, preferiblemente no es mayor a 6 aminoácidos y en donde el separador se encuentra entre dos dominios extracelulares CCR5 y/o fragmentos de dominio extracelular CCR5. CXCR4 de la invención: el término "CXCR4 de la invención" como se utiliza aquí, se refiere al menos a un dominio extracelular CXCR4 , al menos un fragmento de dominio extracelular CXCR4 como se define aquí o cualquiera de sus combinaciones . Dominio extracelular CXCR4 : el término "dominio extracelular CXCR4" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista o alternativamente o preferiblemente que sea cualquiera de los cuatro dominios extracelulares de CXCR4 humano de SEQ ID NO: 28 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. Más aún, el término "dominio extracelular CXCR4" como se utiliza aquí, debe también abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de cualquier variante natural o genéticamente manipulada que tenga más del 70%, preferiblemente más del 80%, incluso con mayor preferencia más del 90%, nuevamente más preferiblemente, que tenga más del 95% y, de preferencia más del 97% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto al dominio extracelular de CXCR4 como se define anteriormente. El término "dominio extracelular CXCR4" como se utiliza aquí, además debe abarcar modificaciones postraduccionales que incluyan, entre otras, glicosilaciones, acetilaciones, fosforilaciones del dominio extracelular CXCR4 como se define anteriormente. Preferiblemente, el dominio extracelular CXCR4, como se define aquí, comprende a lo mucho 200, incluso con mayor preferencia a lo mucho 100 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, el dominio extracelular CXCR4 es capaz de inducir, in vivo, la producción de anticuerpos que se unen específicamente con CXCR4. Fragmento de dominio extracelular CXCR4 : el término "fragmento de dominio extracelular CXCR4" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de al menos 4, 5, preferiblemente al menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20, 25 ó 30 aminoácidos contiguos de dominio extracelular CXCR4 como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga más de 65%, preferiblemente más de 80%, como de preferencia más de 90% incluso más preferiblemente, más de 95% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto a éste. Preferiblemente, el término "dominio extracelular CXCR4" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de al menos 6 aminoácidos contiguos de un dominio extracelular CXCR4 como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga más del 65%, preferiblemente más del 80%, preferiblemente más del 90% incluso con mayor preferencia más del 95% de identidad de secuencia con respecto a éste. Preferiblemente, el fragmento de dominio extracelular CXCR4, como se define aquí, comprende a lo mucho 50, incluso más preferentemente, a lo mucho 30 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, el fragmento del dominio extracelular CXCR4 es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que específicamente se unen con CXCR4. Combinación de dominio extracelular CXCR4 y/o fragmento de dominio extracelular CXCR4 : el término "Combinación de dominio extracelular CXCR4 y/o fragmento de dominio extracelular CXCR4" abarca cualquier entidad que comprenda o alternativamente que consista de cualquier combinación de dominio extracelular CXCR4 y/o fragmento de dominio extracelular CXCR4 como se define anteriormente. Preferiblemente, el dominio extracelular CXCR4 y/o fragmento de dominio extracelular CXCR4 se combinan mediante fusión en un solo polipéptido. Por lo tanto, el término "combinación de dominio extracelular CXCR4 y/o fragmento de dominio extracelular CXCR4" además comprende aminoácidos adicionales como un separador, en donde el separador normalmente no es mayor a 10, preferiblemente no mayor a 6 aminoácidos en donde el separador se encuentra entre dos dominios extracelulares CXCR4 y/o fragmentos de dominio extracelular CXCR4. C5a de la invención: el término "C5a de la invención" como se utiliza aquí, se refiere al menos a una proteína C5a o al menos a un fragmento C5a como se define aquí o cualquier combinación de éstos.

Proteína C5a: el término "proteína C5a" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de C5a humano de SEQ ID NO: 45 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. Más aún, el término "proteína C5a" como se utiliza aquí, debe también abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de cualquier variante natural o genéticamente manipulada que tenga más de 70%, preferiblemente en más de 80%, incluso más preferiblemente, más de 90%, nuevamente, más preferiblemente, más del 95% y con mayor preferencia más de 97% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto al C5a humano de SEQ ID NO: 5 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal. El término "proteína C5a", como se utiliza aquí, debe además abarcar las modificaciones postraduccionales que incluyen, entre otras, glicosilaciones, acetilaciones, fosforilaciones de la proteína C5a como se define anteriormente. Preferiblemente, la proteína C5a, como se define aquí, comprende a lo mucho 200, incluso con mayor preferencia a lo mucho 100 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, la proteína C5a es capaz de inducir la producción in vivo de anticuerpos que se unen específicamente con C5a. Fragmentos C5a: el término "fragmentos C5a" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de al menos 4, 5, preferiblemente al menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20, 25 ó 30 aminoácidos contiguos de una proteína C5a como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga 65%, preferiblemente más del 80%, con mayor preferencia más del 90% incluso más preferiblemente, más del 95% de identidad de secuencia aminoacídica del mismo. Preferiblemente, el término "fragmentos C5a" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente, de al menos 6 aminoácidos contiguos de una proteína C5a como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga más del 65%, preferiblemente más del 80%, preferiblemente más del 90% incluso más preferiblemente, más del 95% de identidad de secuencia aminoacídica del mismo. Preferiblemente, el fragmento C5a, como se define aquí, comprende a lo mucho 50, incluso con mayor preferencia, a lo mucho 30 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, un fragmento C5a es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con C5a. CETP de la invención: el término "CETP de la invención" como se utiliza aquí como se refiere al menos a una proteína CETP o al menos a un fragmento CETP como se define aquí o cualquier combinación de éstos. Proteína CETP: el término "proteína CETP" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de CETP humano de SEQ ID NO: 31 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. Más aún, el término "proteína CETP" como se utiliza aquí, también debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de cualquier variante natural o genéticamente manipulada que tenga más del 70%, preferiblemente más del 80%, incluso más preferiblemente, más del 90% y nuevamente más preferiblemente, más del 95% y con mayor preferencia, más del 97% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto al CETP humano de SEQ ID NO: 31 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal. El término "proteína CETP" como se utiliza aquí, debe además abarcar modificaciones postraduccionales que incluyan, entre otras, a glicosilaciones, acetilaciones, fosforilaciones de la proteína CETP como se define anteriormente. Preferiblemente, la proteína CETP como se define aquí, comprende a lo mucho 500 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, la proteína CETP es capaz de inducir in vivo a la producción de anticuerpos que se unen específicamente con CETP. Fragmento CETP: el término "fragmento CETP" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de al menos 4, 5, preferiblemente al menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 18, 19, 20, 25 ó 30 aminoácidos contiguos de una proteína CETP como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga más del 65%, preferiblemente más del 80%, con mayor preferencia más del 90% incluso más preferiblemente, más del 95% de identidad de secuencia aminoacídica del mismo. Preferiblemente, el término "fragmento CETP" como se define aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o preferiblemente de al menos 6 aminoácidos contiguos de una proteína CETP como se define aquí así como cualquier polipéptido que tenga más del 80%, preferiblemente más del 90% incluso con mayor preferencia, más del 95% de identidad de secuencia aminoacídica del mismo. Preferiblemente, el fragmento CETP, como se define aquí, comprende a lo mucho 50, incluso como de preferencia, a lo mucho 30 aminoácidos de longitud. Normalmente y preferiblemente, un fragmento CETP es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con CETP. Gastrina de la invención: el término "gastrina de la invención" como se utiliza aquí, se refiere al menos a una gastrina G17, o al menos un fragmento de gastrina G17, al menos una progastrina G34 o al menos un fragmento de progastrina G34 como se define aquí o a cualquiera de sus combinaciones . Gastrina G17: el término "gastrina G17" debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente o que comprenda gastrina 1-17 humana como la de SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, gastrina 1-17 de SEQ ID NO: 34 teniendo amidada la fenilalanina C-terminal ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. El término "gastrina G17" debe además abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de gastrina 1-17 de humano, como en SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, gastrina 1-17 de SEQ ID NO: 34 teniendo amidada la fenilalanina C-terminal ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, en donde a lo mucho 3, preferiblemente a lo mucho 2 y con mayor preferencia a lo mucho 1 aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución aminoacídica conservadora. La longitud de gastrina G17 es, de preferencia, no mayor a 50, no mayor a 30 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, la gastrina G17 es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con gastrina. Fragmento de gastrina G17: el término "fragmento de gastrina G17" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de al menos 4, 5, preferiblemente al menos 6, 7, 8, 9, ó 10 aminoácidos contiguos de gastrina G17. El término "fragmento de gastrina G17" debe además abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de fragmento de gastrina G17 como se define anteriormente, en donde al menos un aminoácido, preferiblemente a lo muchos 3, incluso con mayor preferencia a lo mucho 2, incluso más preferiblemente, 1 aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido por otro aminoácido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución aminoacídica conservadora. La longitud de un fragmento de gastrina G17 es preferiblemente no mayor a 30, con mayor preferencia no mayor a 20 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, un fragmento de gastrina G17 es capaz inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con gastrina. Progastrina G34: el término "progastrina G34" abarca cualquier polipéptido que comprende, que consiste esencialmente o alternativamente de gastrina 1-34 humana como en SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, gastrina 1-34 teniendo amidada la fenilalanina C-terminal o los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. El término "progastrina G34" debe además abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de gastrina 1-34 humana como en SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, gastrina 1-34 teniendo amidada la fenilalanina C-terminal o los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, en donde a lo mucho 5, preferiblemente al mucho 4, con mayor preferencia a lo mucho 3 y más preferiblemente a lo mucho 2 e incluso con mayor preferencia a lo mucho 1 aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución conservadora. La longitud de progastrina G34 preferiblemente es no mayor a 60, con mayor preferencia no mayor a 40 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, una progastrina G34 es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con progastrina. Fragmento de progastrina G3 : el término "fragmento de progastrina G34" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de al menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ó 14 aminoácidos de progastrina G34. El término "fragmento de progastrina G34" debe además abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de un fragmento de progastrina G34 como se define anteriormente, en donde al menos un aminoácido, preferiblemente a lo mucho 3, incluso con mayor preferencia a lo muchos 2, incluso más preferiblemente, a lo mucho un aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido por otro aminoácido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución aminoacídica conservadora. La longitud de un fragmento de progastrina G34 es no mayor a 40, con mayor preferencia no mayor a 20 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, un fragmento de gastrina G34 es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que unen específicamente con progastrina. Bradicinina de la invención: el término "Bradicinina de la invención" como se utiliza aquí, debe abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de Bradicinina humana co o en SEQ ID NO: 22 o los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. El término "Bradicinina de la invención" como se utiliza aquí, debe además abarcar cualquier polipéptido que comprenda, que consista esencialmente o alternativamente de Bradicinina humana como en SEQ ID NO: 22 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, en donde a lo mucho 2, preferiblemente 1 aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido por otro aminoácido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución aminoacídica conservadora. La longitud de Bradicinina de la invención es preferiblemente no mayor a 30, con mayor preferencia no mayor a 20 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, una Bradicinina de la invención es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con Bradicinina. Des-Arg-Bradicinina de la invención: el término "des-Arg- Bradicinina de la invención" como se utiliza aquí, abarca cualquier polipéptido que comprende, que consiste esencialmente o alternativamente de des-Arg-Bradicinina humana como en SEQ ID NO: 23 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, preferiblemente de mamíferos. El término "des-Arg-Bradicinina de la invención" como se utiliza aquí, además abarca cualquier polipéptido que comprende o consiste esencialmente o alternativamente de des-Arg-Bradicinina humana como en SEQ ID NO: 23 ó los ortólogos correspondientes de cualquier otro animal, en donde a lo mucho 2, preferiblemente 1 aminoácido ha sido suprimido, agregado o sustituido por otro aminoácido. Preferiblemente, la sustitución es una sustitución aminoacídica conservadora. La longitud de des-Arg-Bradicinina de la invención es preferiblemente no mayor a 30, con mayor preferencia no mayor a 20 aminoácidos. Normalmente y preferiblemente, una Bradicinina de la invención es capaz de inducir la producción de anticuerpos in vivo, que se unen específicamente con des-Arg-Bradicinina . Asociado: el término "asociado" (o su sustantivo asociación) como se utiliza aquí, se refiere a todas las posibles formas, de preferencia interacciones químicas, mediante las cuales dos moléculas se unen conjuntamente. Las interacciones químicas incluyen interacciones covalentes y no covalentes. Los ejemplos típicos de interacciones no covalentes son interacciones iónicas, interacciones hidrófobas o enlaces de hidrógeno, mientras que las interacciones covalentes están basadas, a manera de ejemplo, en enlaces covalentes, enlaces éster, éter, fosfoéster, amida, péptido, carbono-fósforo, enlaces carbono-azufre como tioéter o enlaces imida . Sitio de unión, primer: como se utiliza aquí, la frase "primer sitio de unión" se refiere a un elemento que se encuentra en forma natural con la VLP o que se agrega artificialmente a la VLP y al cual se puede ligar un segundo sitio de unión. El primer sitio de unión puede ser una proteína como un polipéptido, un aminoácido como un péptido, un azúcar, un polinucleótido, un polímero natural o sintético, un compuesto o metabolito secundario (biotina, fluoresceína, retinol, digoxigenina, iones metálicos, fenilmetilsulfonilfluoruro) o un grupo químicamente reactivo tal como un grupo amino, un grupo carboxilo, un grupo sulfhidrilo, un grupo hidroxilo, un grupo guadinililo, un grupo histidinilo o una combinación de éstos. Una modalidad preferida de un grupo químicamente reactivo que funciona como el primer sitio de unión es el grupo amino del aminoácido como lisina. El primer sitio de unión está ubicado, normalmente sobre la superficie y preferiblemente sobre la superficie externa de la VLP. Se encuentran presentes sobre la superficie múltiples primeros sitios de unión, preferiblemente sobre la superficie externa de la partícula similar a virus, normalmente en una configuración repetida. En una primera modalidad, el primer sitio de unión está asociado con la VLP, a través de al menos una unión covalente, preferiblemente a través de al menos una unión peptídica. En otra modalidad preferida, el primer sitio de unión ocurre naturalmente con la VLP. Alternativamente, en otra modalidad preferida, el primer sitio de unión se agrega artificialmente en la VLP. Sitio de unión, segundo: como se utiliza aquí, la frase "segundo sitio de unión" se refiere a un elemento que existe naturalmente con, o que se agrega artificialmente al antígeno de la invención y al cual puede ligarse el primer sitio de unión. El segundo sitio de unión del antígeno de la invención puede ser una proteína como un polipéptido, un péptido, un aminoácido, un azúcar, un polinucleótido, un polímero natural o sintético, un compuesto o metabolito secundario (biotina, fluoresceína, retinol, digoxigenina, iones metálicos, fenilmetilsulfonilfluoruro) , o un grupo químicamente activo tal como un grupo amino, como un grupo carboxilo, un grupo sulfhidrilo, un grupo hidroxilo, un grupo guadinililo, un grupo histidinilo o una combinación de éstos. Una modalidad preferida de un grupo químicamente reactivo que funciona como el segundo sitio de unión es el grupo sulfhidrilo, preferiblemente de un aminoácido cisteína. Los términos "antígeno de la invención con al menos un segundo de unión", como se utilizan aquí, se refieren a una estructura que comprende el antigeno de la invención y al menos un segundo sitio de unión. En una modalidad preferida, el segundo sitio de unión se encuentra naturalmente dentro del antígeno de la invención. En otra modalidad preferida, el segundo sitio de unión se agrega artificialmente al antígeno de la invención. En una modalidad preferida, el segundo sitio de unión está asociado con el antígeno de la invención a través de al menos una unión covalente, preferiblemente través de al menos una unión peptídica. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión comprende un ligador, preferiblemente el ligador comprende al menos un segundo sitio de unión, preferiblemente el ligador se fusiona con el antígeno de la invención mediante una unión peptídica. Proteína de cubierta: el término "proteína de cubierta" y el término que se utiliza de manera indistinta "proteína del cápside" dentro de esta solicitud, se refiere a una proteína vírica, que es capaz de ser incorporada en un cápside viral o una VLP. Normalmente y preferiblemente, el término "proteína de cubierta" se refiere a la proteína de cubierta codificada por el genoma del virus, preferiblemente un bacteriófago ARN o por el genoma de una variante de un virus, preferiblemente un bacteriófago ARN. Con mayor preferencia y a manera de ejemplo, el término "proteína de cubierta de AP205" se refiere a SEQ ID NO: 14 o a la secuencia aminoacídica, en donde la primer metionina se escinde de SEQ ID NO: 14. Más preferiblemente y a manera de ejemplo, el término "proteína de cubierta de Qß" se refiere a SEQ ID N0:1 ("CP de Qß") y SEQ ID NO: 2 (Al), con o sin metionina en el N-término. El cápside del bacteriófago Qß se compone principalmente de CP de Qß, con un contenido menor de proteína Al. Ligado: el término "ligado" (o el sustantivo: ligamiento), como se utiliza aquí, se refiere a todas las formas posibles, preferiblemente interacciones químicas, mediante las cuales al menos un primer sitio de unión y al menos un segundo sitio de unión se unen conjuntamente. Las interacciones químicas incluyen interacciones covalentes y no covalentes. Los ejemplos típicos de interacciones no covalentes son interacciones iónicas, interacciones hidrófobas o enlaces hidrógeno, mientras que las interacciones covalentes están basadas, por ejemplo, en enlaces covalentes tales como enlaces éster, éter, fosfoéster, amida, péptido, carbono-fósforo, enlaces carbono-azuf e como el tioéter o enlaces imida. En ciertas modalidades preferidas, el primer sitio de unión y el segundo sitio de unión se ligan a través de al menos una unión covalente, preferiblemente a través de al menos un enlace no peptídico e incluso con mayor preferencia, a través de exclusivamente enlaces no peptídicos. Sin embargo el término "ligado", como se utiliza aquí, no debe solo abarcar un ligamiento directo de al menos un primer sitio de unión y al menos un segundo sitio de unión pero también alternativamente y preferiblemente, un ligamiento indirecto de al menos un primer sitio de unión y al menos un segundo sitio de unión a través de moléculas intermedias y en la presente, normalmente y preferiblemente mediante el uso de al menos uno, preferiblemente un agente de entrecruzamiento heterobifuncional . Ligador: un "ligador", como se utiliza aquí, se asocia el segundo sitio de unión con el antígeno de la invención o comprende o consiste esencialmente del segundo sitio de unión. Preferiblemente, un "ligador", como se utiliza aquí, comprende el segundo sitio de unión, típicamente y preferiblemente -pero no necesariamente- como un residuo aminoacídico, preferiblemente como un residuo cisteína. Un "ligador", como se utiliza aquí, también se llama "ligador aminoacídico", particularmente cuando un ligador según la invención contiene al menos un residuo aminoacídico. Por lo tanto, los términos "ligador" y "ligador aminoacídico" se utilizan aquí indistintamente. Sin embargo, esto no implica que este ligador comprenda exclusivamente residuos de aminoácidos, incluso si el ligador que comprende residuos de aminoácidos es una modalidad preferida de la presente invención. Los residuos aminoacídicos del ligador se componen preferiblemente de aminoácidos naturales o aminoácidos no naturales que se conozcan en la técnica, todas las formas -L o -D o sus mezclas. Otras modalidades preferidas de ligador según la invención son moléculas que comprenden grupos sulfhidrilo o residuos cisteína y por lo tanto, estas moléculas están abarcadas dentro de la invención. Otros ligadores útiles para la presente invención son moléculas que comprenden un alquilo C1-C6, un cicloalquilo tal como ciclopentilo o ciciohexilo, una entidad cicloalquenilo, arilo o heteroarilo. Más aún, los ligadores comprenden preferiblemente una fracción heteroaril-o aril-, cicloalquil- (C5, C6) , alquil-Cl-C6 y aminoácidos adicionales que también pueden utilizarse como ligadores para la presente invención y que deberán abarcar el alcance de la invención. La asociación del ligador con el antígeno de la invención se lleva a cabo preferiblemente mediante al menos una unión covalente, con mayor preferencia mediante al menos una unión peptídica. En caso de un segundo sitio de unión que no sea natural con respecto al antígeno de la invención, el ligador se asocia al menos con el segundo sitio de unión, por ejemplo, una cisteína, preferiblemente mediante al menos una unión covalente, con mayor preferencia mediante al menos una unión peptídica. Arreglo u ordenación antigénica repetitiva y ordenada: como se utiliza aquí, el término "arreglo u ordenación antigénica repetitiva y ordenada" se refiere generalmente a un patrón repetido de antígenos o se caracteriza normalmente y preferiblemente mediante un elevado orden de uniformidad en una configuración espacial de antígenos con respecto a la partícula similar a virus, respectivamente. En una modalidad de la invención, el patrón repetido puede ser un patrón geométrico. Ciertas modalidades de la invención, como la VLP de fagos ARN, son ejemplos normales y preferidos de arreglos antigénicos repetitivos y ordenados adecuados que, más aún, poseen órdenes paracristalinas estrictamente repetitivas de antígenos, preferiblemente con separaciones de 1 a 30 nanómetros, preferiblemente 2 a 15 nanómetros, incluso con mayor preferencia 2 a 10 nanómetros, incluso con más preferencia aún de 2 a 8 nanómetros y incluso más preferiblemente 1.6 a 7 nanómetros. Envuelto: el término "envuelto" como se utiliza aquí, se refiere al estado de macromolécula polianiónica en relación con la VLP. El término "envuelto" como se utiliza aquí, incluye una unión que puede ser covalente, por ejemplo, mediante copulación química o no covalente, por ejemplo interacciones iónicas, interacciones hidrófobas, enlaces de hidrógeno, etcétera. El término también incluye el encierro o encierro parcial de una macromolécula polianiónica. Por lo tanto, la macromolécula polianiónica puede encontrarse encerrada en la VLP sin la existencia de una unión actual, particularmente una unión covalente. En modalidades preferidas, al menos una macromolécula polianiónica se encuentra envuelta dentro de la VLP, con mayor preferencia en forma no covalente. Polipéptido: el término "polipéptido" como se utiliza aquí, se refiere a una molécula compuesta de monómeros "aminoácidos" que se ligan en forma lineal mediante uniones amida (también conocidas como uniones peptídicas) . Esto indica una cadena molecular de aminoácidos y no se refiere a la longitud específica del producto. Por lo tanto, se incluyen dentro de la definición de polipéptido, a los péptidos, dipéptidos, tripéptidos, oligopéptidos y proteínas. Por ejemplo, también se abarcan las modificaciones postraduccionales del polipéptido, glicosilaciones, acetilaciones, fosforilaciones y lo similar. VLP recombinante: el término "VLP recombinante", como se utiliza aquí, se refiere a una VLP que se obtiene mediante un proceso que comprende al menos un paso de tecnología de ADN recombinante. El término "VLP producida de manera recombinante" como se utiliza aquí, se refiere a una VLP que se obtiene mediante un proceso que comprende al menos un paso de tecnología de ADN recombinante. Por lo tanto, los términos "VLP recombinante" y "VLP producida de manera recombinante" se utilizan indistintamente y deben tener el significado idéntico. Partícula viral: el término "partícula viral" como se utiliza aquí, se refiere a la forma morfológica de un virus. En algunos tipos de virus comprende un genoma rodeado por una cápside proteico; otros tiene estructuras adicionales (por ejemplo, envolturas, colas, etcétera). Partícula similar a virus (VLP), como se utiliza aquí, se refiere a una partícula viral no replicativa o no infecciosa, preferiblemente no replicativa y no infecciosa o se refiere a una estructura no replicativa o no infecciosa, preferiblemente no replicativa y no infecciosa que se asemeja a una partícula viral, preferiblemente un cápside de un virus. El término "no replicativa", como se utiliza aquí, se refiere a que es incapaz de replicar el genoma comprendido por la VLP. El término "no infecciosa" como se utiliza aquí, se refiere a que es incapaz de entrar a la célula hospedera. Preferiblemente, una partícula similar a virus de conformidad con la invención es no replicativa y no infecciosa ya que carece de la totalidad o parte del genoma viral o función genómica. En una modalidad, una partícula similar a virus es una partícula viral, en donde el genoma viral ha sido físicamente o químicamente inactivado. Normalmente y con mayor preferencia, una partícula similar a virus carece de la totalidad o parte de los componentes replicativos e infecciosos del genoma viral. Una partícula similar a virus de conformidad con la invención puede contener un ácido nucleico distinto de su genoma. Una modalidad típica y preferida de una partícula similar a virus de conformidad con la presente invención es un cápside viral tal como el cápside viral del virus correspondiente, un bacteriófago, preferiblemente un fago ARN. Los términos "cápside viral" ó "cápside", se refieren a un ensamble macromolecular compuesto de subunidades proteicas virales. Normalmente, existen 60, 120, 180, 240, 300, 360 y más de 360 subunidades de proteínas virales. Normalmente y preferiblemente, las interacciones de estas subunidades conllevan a la formación de un cápside viral o una estructura similar a cápside viral con una organización repetida inherente, en donde la estructura es normalmente esférica o tubular. Una característica común de la partícula viral y la partícula similar a virus es la configuración altamente ordenada y repetitiva de sus subunidades. Partícula similar a virus de un bacteriófago ARN: como se utiliza aquí, el término "partícula similar a virus de un bacteriófago ARN" se refiere a una partícula similar a virus que comprende o preferiblemente consiste esencialmente de proteínas de cubierta, mutantes o fragmentos de la misma, de un bacteriófago ARN. Además, la partícula similar a virus de un bacteriófago ARN se semeja a la estructura de un bacteriófago ARN, que no es replicativa y/o ni infecciosa y carece de al menos el gen o genes que codifican para la maquinaria de replicación del bacteriófago ARN y normalmente también carece del gen o genes que codifican para la proteína o proteínas responsables de la unión viral o entrada en el hospedero. Sin embargo, esta definición también debe abarcar partículas similares a virus de bacteriófagos ARN, en donde el gen o genes anteriormente mencionados aún están presentes pero se encuentran inactivos y por lo tanto, también conllevan a partículas similares a virus no replicativas y/o no infecciosas de un bacteriófago ARN. Dentro de la presente descripción, los términos "subunidades" y "monómeros" se utilizan de manera indistinta y equivalente dentro del contexto. Un, una o uno: cuando los términos "un", "una" o "uno" se utilizan en esta descripción, significan "al menos uno" o "uno o más" a menos que se indique otra cosa. En esta solicitud, los anticuerpos se definen por unirse específicamente, si se unen al antígeno, con una afinidad de unión (Ka) de 106 M_1 o más, preferiblemente 107 M"1 o más, con mayor preferencia 108 M"1 o más y con mayor preferencia 109 M"1 o más. La finalidad de un anticuerpo puede determinarse con facilidad por el experto en la técnica (por ejemplo, mediante un análisis de Scatchard) . La identidad de secuencia de aminoácidos de los polipéptidos puede determinarse convencionalmente utilizando programas conocidos para computadora, tal como el programa Bestfit. Cuando se utiliza Bestfit o cualquier otro programa de alineación de secuencias, preferiblemente Bestfit, para determinar si una secuencia es, por ejemplo, 95% idéntica a una secuencia aminoacídica de referencia, los parámetros se determinan de manera tal, que el porcentaje de identidad se calcula con respecto a toda la longitud de la secuencia aminoacídica de referencia donde se permiten discontinuidades en la homología de hasta 5% de la cantidad total de residuos aminoacídicos en la secuencia de referencia. Este método anteriormente mencionado para la determinación del porcentaje e identidad entre polipéptidos puede aplicarse a todas las proteínas, polipéptidos o sus fragmentos descritos en esta invención. Las sustituciones aminoacídicas conservadoras, como el experto en la técnica entiende, incluyen sustituciones isostéricas, son sustituciones en donde se mantiene la naturaleza cargada, polar, aromática, alifática o hidrófoba del aminoácido. Las típicas sustituciones aminoacídicas conservadoras son sustituciones entre aminoácidos dentro de alguno de los siguientes grupos: Gly, Ala; Val, lie, Leu; Asp, Glu; Asn, Gln; Ser, Thr, Cys; Lys, Arg; Phe y Tyr Esta invención proporciona composiciones y métodos para potenciar respuestas inmunitarias contra un antígeno de la invención en un animal o un humano. La composición de la invención comprende: a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos un antigeno es un antígeno de la invención y en donde a) y b) se unen a través de al menos un primer y un segundo sitio de unión. Preferiblemente, el antígeno de la invención está ligado a la VLP, para formar así un ordenamiento o arreglo de antígeno-VLP ordenado y repetitivo. En modalidades preferidas de la invención, al menos 20, preferiblemente al menos 30, con mayor preferencia al menos 60, nuevamente con más preferencia al menos 120 y aún más preferiblemente, al menos 180 antígenos de la invención están ligados a la VLP. Se puede seleccionar como la VLP de la invención cualquier virus conocido en la técnica que tenga una estructura ordenada y repetida. Los virus ARN o ADN ilustrativos, la proteína de cubierta o cápside que pueden utilizarse para la preparación de las VLP, se han descrito en el documento WO 2004/009124 en la página 25, renglón 10-21, en la página 26, renglones 11-28 y en la página 28, renglón 4 a la página 31, renglón 4. Estas descripciones se incorporan aquí por referencia. El virus o la partícula similar a virus pueden producirse y purificarse a partir de un cultivo celular infectado con el virus. El virus o particulas similares a virus resultantes, para el propósito de la vacuna, necesitan estar desprovistas de virulencia. Además de la manipulación genética, se pueden emplear métodos físicos o químicos para inactivar la función del genoma viral tal como radiación UV y tratamiento con formaldehído. En una modalidad preferida, la VLP es una VLP recombinante. Casi todos los virus comúnmente conocidos han sido secuenciados y se encuentran fácilmente disponibles para el público. El experto en la técnica puede identificar fácilmente el gen que codifica para la proteína de cubierta. El experto en la técnica tiene el conocimiento común para la preparación de las VLP mediante la expresión recombinante de la proteína de cubierta en un hospedero. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus comprende o alternativamente consiste de proteínas recombinantes, sus mutantes o fragmentos, de un virus seleccionado a partir del grupo que comprende: a) fagos ARN; b) bacteriófagos; c) virus de hepatitis B, preferiblemente su proteína de cápside (Ulrich, et al., Virus Res. 50:141-182 (1998)) o su proteína de superficie (WO 92/11291); d) virus de paperas (Warnes, et al., Gene 160:173-178 (1995)); e) virus Sindbis; f) rotavirus (US 5,071,651 y US 5,374,426); g) virus de enfermedad de pies y boca (Twomey, et al., Vaccine 13:1603 1610, (1995)); h) virus Nor alk (Jiang, X., et al., Science 250:1580 1583 (1990); Matsui, S.M., et al., J. Clin. Invest. 87:1456 1461 (1991)); i) alfavirus; j) retrovirus, preferiblemente su proteína GAG (WO 96/30523); k) retrotransposón Ty, preferiblemente la proteína pl; 1) virus de papiloma humano (WO 98/15631) ; m) virus de polioma; n) virus del mosaico del tabaco; o) virus Flock House. En una modalidad preferida, la VLP comprende o consiste en más de una secuencia aminoacídica, preferiblemente dos secuencias aminoacídicas de proteínas recombinantes o sus mutantes o fragmentos. La VLP comprende o consiste en más de una secuencia aminoacídica que se refiere en esta solicitud, como la VLP de mosaico. El término "fragmento de una proteína recombinante" o el término "fragmento de una proteína de cubierta" como se utiliza aquí, se define como un polipéptido, que tiene al menos 70%, preferiblemente al menos 80%, con mayor preferencia al menos 90%, incluso más preferiblemente al menos 95% de la longitud de la proteína recombinante silvestre o la proteína de cubierta, respectivamente y que preferiblemente retiene la capacidad de formar la VLP. Preferiblemente, el fragmento se obtiene mediante al menos una supresión interna, al menos un truncamiento o al menos una combinación de éstos. El término "fragmento de una proteína recombinante" o en "fragmento de una proteína de cubierta" además abarca un polipéptido que tiene al menos 80%, preferiblemente 90%, incluso con mayor preferencia 95% de identidad de secuencia aminoacídica con respecto al "fragmento de una proteína recombinante" o "fragmento de una proteína de cubierta", respectivamente, como se define anteriormente y que es preferiblemente capaz de ensamblarse en una partícula similar a virus. El término "proteína recombinante mutante" o el término "mutante de una proteína recombinante" se utilizan indistintamente en la invención o el término "proteína de cubierta mutante" o el término "mutante de proteína de cubierta" se utilizan indistintamente en la invención, y se refieren a un polipéptido que tiene una secuencia aminoacídica derivada de la proteína recombinante silvestre o la proteína de cubierta silvestre, respectivamente, en donde la secuencia de aminoácidos es al menos 80%, preferiblemente al menos 85%, 90%, 95%, 97% o 99% idéntica a la secuencia silvestre y preferiblemente retiene la habilidad para ensamblarse en una VLP. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus de la invención es del virus de hepatitis B. La preparación de partículas similares a virus de hepatitis B se ha descrito, inter alia, en los documentos WO 00/32227, WO 01/85208 y en WO 01/056905. Todos estos tres documentos se incorporan explícitamente por referencia. En la página 34-39 WO 01/056905 se han descrito otras variantes de HBcAg adecuadas para usarse en la práctica de la presente invención. En otras modalidades preferidas de la invención, se introduce un residuo lisina en el polipéptido HBcAg, para regular el ligamiento de antígeno de la invención con la VLP de HBcAg. En modalidades preferidas, las VLP y composiciones de la invención se preparan utilizando HBcAg que comprende o alternativamente que consiste de aminoácidos 1-144 o 1-149, 1-185 SEQ ID NO: 20, que se modifican para que los aminoácidos en las posiciones 79 y 80 sean reemplazados con un péptido que tenga la secuencia aminoacídica de Gly-Gly-Lys-Gly-Gly . Esta modificación cambia la SEQ ID NO:20 a SEQ ID NO:21. En otras modalidades preferidas, los residuos cisteína en las posiciones 48 y 110 de SEQ ID NO: 21, o sus fragmentos correspondientes, preferiblemente 1-144 o 1-149 se mutan en serina. La invención además incluye composiciones que comprenden mutantes de proteína de núcleo de hepatitis B que tengan las alteraciones aminoacídicas correspondientes anteriormente mencionadas. La invención además incluye composiciones y vacunas, respectivamente, que comprende polipéptidos HBcAg que comprenden o alternativamente, consisten de secuencias de aminoácidos que tienen al menos 80%, 85%, 90%, 95%, 97% ó 99% de identidad con respecto a la SEQ ID NO:21. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus es virus Cowpea Chlorotic Mottle, virus Cowpea Mosaic o virus de Mosaico de Alfalfa. En los documentos US 2005/0260758 y WO05067478 se han descrito los métodos para producir la VLP de estos virus. En modalidades preferidas de la invención, la partícula similar a virus es de un bacteriófago ARN. Preferiblemente, el bacteriófago ARN se selecciona a partir del grupo que comprende a) bacteriófago Qß; b) bacteriófago R17; c) bacteriófago fr; d) bacteriófago GA; e) bacteriófago SP; f) bacteriófago MS2; g) bacteriófago Mil; h) bacteriófago MX1; i) bacteriófago NL95; k) bacteriófago f2; 1) bacteriófago PP7 y m) bacteriófago AP205. En una modalidad preferida de la invención, la composición comprende proteínas de cubierta, o los mutantes o fragmentos de bacteriófagos ARN, en donde la proteína de cubierta tiene una secuencia aminoacídica seleccionada a partir del grupo que comprende: (a) SEQ ID N0:1, refiriéndose a CP de Qß; (b) una mezcla de SEQ ID N0:1 y SEQ ID NO: 2 (refiriéndose a proteína Al de Qß) ; (c) SEQ ID NO:3; (d) SEQ ID NO:4; (e) SEQ ID NO : 5 ; (f) SEQ ID NO:6, (g) una mezcla de SEQ ID NO: 6 y SEQ ID NO: 7; (h) SEQ ID NO: 8; (i) SEQ ID NO: 9; (j) SEQ ID NO:10; (k) SEQ ID NO: 11; (1) SEQ ID NO:12; (m) SEQ ID NO: 13; y (n) SEQ ID NO: 14. En términos generales, la proteína de cubierta mencionada anteriormente es capaz de ensamblarse en una VLP con o sin la presencia de una metionina N-terminal . En una modalidad preferida de la invención, la VLP es una VLP de mosaico que comprende o alternativamente consiste en más de una secuencia aminoacídica, preferiblemente dos secuencias aminoacídicas de proteínas de cubierta, los mutantes o fragmentos de un fago ARN. En una modalidad muy preferida, la VLP comprende o alternativamente consiste de dos diferentes proteínas de cubierta de un fago ARN, ambas proteínas de cubierta tienen una secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, o de SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:7. En las modalidades preferidas de la invención, la partícula similar a virus de la invención comprende o alternativamente consiste esencialmente o alternativamente de proteínas de cubierta recombinantes, los mutantes o fragmentos del bacteriófago ARN Qß, fr, AP205 o GA. En una modalidad preferida, la VLP de la invención es una VLP de un fago ARN Qß. Otras partículas preferidas similares a virus de los fagos ARN, particularmente Qß, y fr de conformidad con la invención se describen en el documento WO 02/056905, la descripción de este documento se incorpora aquí por referencia en su totalidad. El ejemplo particular 18 del documento WO 02/056905 proporciona una descripción detallada de la preparación de particulas VLP de Qß. En otra modalidad preferida, la VLP de la invención es una VLP de un fago ARN AP205. Las formas mutantes competentes para el ensamble de AP205 de VLP, incluyendo la proteína de cubierta AP205 con la sustitución de prolina en el aminoácido 5 por treonina, asparagina en el aminoácido 14 por ácido aspártico también pueden utilizarse en la parte de la invención y conlleva a otras modalidades preferidas de la misma. El documento WO 2004/007538 describe, particularmente en el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2, cómo obtener las VLP que comprenden proteínas de cubierta AP205 y por lo tanto, particularmente la expresión y purificación de la misma. El documento WO 2004/007538 se incorpora aquí por referencia. En una modalidad preferida, la VLP de la invención comprende o consiste de una proteína de cubierta mutante de un virus, preferiblemente un fago ARN, en donde la proteína de cubierta mutante ha sido modificada mediante la eliminación de al menos un residuo lisina mediante la sustitución y/o mediante supresión. La otra modalidad preferida, la VLP de la invención comprende o consiste de una proteína de cubierta mutante de un virus, preferiblemente un fago ARN, en donde la proteína de cubierta mutante ha sido modificada mediante la adición de al menos un residuo lisina mediante sustitución y/o mediante inserción. En una modalidad muy preferida, la proteína de cubierta mutante es de un fago ARN Qß, en donde al menos uno, o alternativamente al menos dos residuos lisina han sido eliminados mediante sustitución o mediante supresión. En una modalidad alternativa muy preferida, la proteína de cubierta mutante es un fago ARN Qß, en donde al menos uno o al menos dos residuos lisina han sido agregados mediante sustitución o mediante inserción. En otra modalidad preferida, la proteína de cubierta mutante del fago ARN Qß tiene una secuencia aminoacídica seleccionada a partir de cualquiera de SEQ ID NO.15-19. En una modalidad preferida, las composiciones y vacunas de la invención tienen una densidad antigénica de 0.5, preferiblemente de 1.0, preferiblemente de 1.2, preferiblemente de 1.6, preferiblemente de 1.9, preferiblemente de 2.2 a 4.0. El término "densidad antigénica" como se utiliza aquí, se refiere a la cantidad promedio de antígenos de la invención que se ligan en cada subunidad, preferiblemente por proteína de cubierta de la VLP y preferiblemente la VLP de un fago ARN. Por lo tanto, este valor se calcula como el promedio con respecto a todas las subunidades o monómeros de la VLP, preferiblemente la VLP del fago ARN en la composición de vacunas de la invención. También se ha demostrado que otras proteínas de cubierta de fagos ARN se autoensamblan al momento de expresarse en un hospedero bacteriano (Kastelein, RA. et al., Gene 23:245-254 (1983), Kozlovskaya, TM. et al., Dokl. Akad. Nauk SSSR 287:452-455 (1986), Adhin, MR. et al., Virology 170:238-242 (1989), Priano, C. et al., J. Mol. Biol. 249:283-297 (1995)).

En particular, se han descrito las propiedades biológicas y bioquímicas de GA (Ni, CZ., et al., Protein Sci. 5:2485-2493 (1996), Tars, K et al., J. Mol. Biol. 271:759-773(1997)) y de fr (Pushko P. et al., Prot. Eng. 6:883-891 (1993), Liljas, L et al. J Mol. Biol. 244:279-290, (1994)). Se ha determinado la estructura cristalina de varios bacteriófagos ARN (Golmohammadi, R. et al., Structure 4:543-554 (1996)). Al utilizar esta información, se pueden identificar los residuos expuestos sobre la superficie y de esta forma, las proteínas de cubierta del fago ARN pueden modificarse de manera que uno o más residuos aminoacídicos reactivos puedan insertarse mediante inserción o sustitución. Otra ventaja de las VLP derivadas de fagos ARN es su elevada producción de expresión en bacterias que permiten la producción de elevadas cantidades a un costo asequible. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención es un dominio extracelular CCR5, un fragmento de un dominio extracelular CCR5 o cualquier combinación de éstos. En una modalidad preferida de la invención, al menos un antígeno es un fragmento de dominio extracelular CCR5. En una modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CCR5 comprende o consiste esencialmente de un fragmento ECL2 de dominio extracelular de CCR5, preferiblemente ECL2A. ECL2A, como generalmente se entiende la técnica, comienza preferiblemente desde el primer aminoácido desde el N-término de ECL2 y finaliza preferiblemente en treonina, que se encuentra justo antes de cisteína en la secuencia ECL2 humana. En otra modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CCR5 comprende o consiste esencialmente o alternativamente de SEQ ID NO: 25. En una modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CCR5 comprende o consiste esencialmente de ECL2A ciclizado. En otra modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CCR5 comprende o consiste esencialmente o alternativamente de SEQ ID NO: 25 ciclizado. En otra modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CCR5 comprende o consiste esencialmente o alternativamente de SEQ ID NO: 26 ó SEQ ID NO: 52 ciclizados, en donde el péptido es ciclizado por el residuo C y G en ambos extremos. La SEQ ID NO: 25 ciclizada, como se utiliza aquí, se refiere a una secuencia aminoacídica que comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO.25, en donde el primer residuo de aminoácido y el último residuo de aminoácido de la secuencia aminoacídica interactúan entre sí mediante al menos un enlace químico, preferiblemente mediante al menos una unión covalente. Preferiblemente, el primer residuo aminoacídico y el último residuo aminoacídico de la secuencia de aminoácidos interactúan entre sí mediante enlaces covalentes. Preferiblemente, el primer residuo aminoacídico y el último residuo aminoacídico de la secuencia de aminoácidos interactúan entre sí mediante una unión peptídica, lo que conlleva a un péptido circular. En una modalidad preferida de la invención, al menos un antígeno es un dominio PNt extracelular de CCR5. En una modalidad preferida, el domino PNt extracelular de CCR5 consiste esencialmente o alternativamente de SEQ ID NO: 27. En otra modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste de SEQ ID NO: 27 con un ligador adicional, preferiblemente cisteína, fusionado ya sea al C- o al N-término de SEQ ID NO: 27, preferiblemente fusionado al C-término de SEQ ID NO: 27. En otra modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 27 con un ligador adicional, preferiblemente cisteína, fusionado ya sea al C- o N-término de SEQ ID NO: 27, preferiblemente fusionado al C-término del SEQ ID NO: 27, en donde la cisteína natural dentro de SEQ ID NO: 27 se sustituye por otro aminoácido, preferiblemente por serina. Esto es para asegurar una presentación antigénica uniforme y definida. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona una composición que comprende: (a) una partícula similar a virus (VLP) de un bacteriófago ARN con al menos dos primeros sitios de unión; y (b) al menos un dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión; en donde el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente de: (i) un dominio Nta ó un fragmento de dominio Nta, y (ii) un dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO:27 (SEQ ID NO: 56) ó un fragmento de dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27, en donde el C-término del dominio Nta del fragmento del dominio Nta se fusiona, preferiblemente en forma directa, con el N-término del dominio Ntb o del fragmento del dominio Ntb y en donde el primero o segundo de al menos dos segundos sitios de unión, comprende o es un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un grupo sulfhidrilo de un residuo cisteína en donde uno o al menos dos segundos sitios de unión están ubicados en dirección 5' del N-término de los aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27; y en donde el segundo de al menos dos segundos sitios de unión esto ubicada en dirección 3' del C-término de los aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO:27, preferiblemente en dirección 3' del C-término del dominio PNt extracelular de CCR5; y en donde la VLP del bacteriófago ARN y el dominio PNt extracelular del CCR5 se ligan mediante al menos una unión covalente no peptídica. Dominio Nta: el término "dominio Nta" como se utiliza aquí, se refiere al dominio Nta natural que tiene la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 57 o la secuencia correspondiente a los ortólogos de CCR5 de cualquier otro animal, preferiblemente de primates (incluyendo antropoides y prosimios), con mayor preferencia de antropoides. Más aún, el término "dominio Nta" como se utiliza aquí, se refiere a un dominio Nta modificado, en donde tres, preferiblemente dos o con mayor preferencia un aminoácido del dominio Nta natural, como se define aquí, se ha modificado mediante supresión, inserción y/o sustitución, preferiblemente mediante una sustitución conservadora, con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el dominio Nta modificado se unan específicamente al CCR5 de humano. Fragmento del dominio Nta: el término "fragmento del dominio Nta" como se utiliza aquí, se refiere a cualquier polipéptido que comprende o consiste esencialmente de una secuencia de al menos 8, preferiblemente de al menos 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ó 16 aminoácidos consecutivos del dominio Nta como se define aquí, siempre que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el fragmento del dominio Nta se unan específicamente al CCR5 de humano. Dominio Ntb. El término "dominio Ntb" como se utiliza aquí, se refiere al dominio Ntb natural que tiene la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 58 o la secuencia correspondiente de los ortólogos de CCR5 de cualquier otro animal, preferiblemente de primates (incluyendo antropoides y prosimios), con mayor preferencia de antropoides. Más aún, el término "dominio Ntb", como se utiliza aquí, se refiere a un dominio Ntb modificado, en donde dos, preferiblemente un aminoácido del dominio Ntb natural, como se define aquí, ha sido modificado mediante supresión, inserción y/o sustitución, preferiblemente mediante sustitución conservadora siempre que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el domino Ntb modificado se una específicamente con el CCR5 de humano. Fragmento del dominio Ntb: el término "fragmento del dominio Ntb" como se utiliza aquí, se refiere a cualquier polipéptido que comprende o consiste esencialmente de una secuencia de al menos 6, preferiblemente al menos 7, 8, 9 o 10 aminoácidos consecutivos del dominio Ntb como se define aquí, siempre que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el fragmento del dominio Ntb se unan específicamente al CCR5 de humano. Preferiblemente, el fragmento del dominio Ntb comprende o consiste esencialmente de la secuencia aminoacídica CQKINVK (SEQ ID NO: 59), más con mayor preferencia CQKINVKQ (SEQ ID NO: 60). Más aún, el fragmento del dominio Ntb comprende o consiste esencialmente de una secuencia aminoacídica CQKINVK, con mayor preferencia CQKINVKQ, en donde un aminoácido de CQKINVK ó CQKINVKQ ha sido modificado mediante supresión, inserción y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el fragmento del dominio Ntb se unan específicamente al CCR5 de humano. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión no comprende otro grupo sulfhidrilo de cisteína, preferiblemente otro grupo sulfhidrilo, además de los dos grupos sulfhidrilo, preferiblemente dos grupos sulfhidrilo de los residuos cisteína, que comprenden o que son el primero y segundo de al menos dos segundos sitios de unión. En una modalidad preferida, el primero de al menos dos segundos sitios de unión no está ubicado en dirección 5' del N-término del dominio Nta del fragmento del dominio Nta. Esto es para asegurar un libre acceso del N-término del dominio Nta ó fragmento del dominio Nta al sistema inmunitario hospedero ya que la configuración natural del CCR5 tiene un N-término de libre movimiento. Preferiblemente, el primero de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 3' con respecto al C-término del dominio Nta o del fragmento del dominio Nta. En una modalidad preferida, el primero de al menos dos segundos sitios de unión es el residuo cisteína natural dentro del dominio PNt extracelular de CCR5. En una modalidad preferida, el primero de al menos dos segundos sitios de unión corresponde al grupo sulfhidrilo del residuo cisteína de SEQ ID NO:27. En una modalidad alternativa, el primero de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en una, dos o tres posiciones aminoacídicas en dirección 5' o una o dos posiciones aminoacídicas en dirección 3' con respecto a la cisteína natural, en donde preferiblemente el primero de al menos dos segundos sitios de unión ha sido generado mediante inserción ó sustitución del residuo aminoacídico natural en aquella posición en cisteína; y en donde preferiblemente la cisteína natural dentro del dominio PNt ha sido suprimida o sustituida, preferiblemente por una sustitución de serina o alanina.

En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente consiste de una secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 27. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de la secuencia aminoacidica derivada de SEQ ID NO: 27, e donde preferiblemente tres, preferiblemente dos, preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 27 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden la secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO:27 se unan específicamente al CCR5 de humano. En una modalidad preferida, la composición además comprende un ligador, en donde el ligador se fusiona al C-término del dominio PNt extracelular de CCR5 y en donde el ligador comprende o es el segundo de al menos dos segundos sitios de unión. El ligador puede tener una longitud variable para que la flexibilidad del dominio Ntb o fragmento del dominio Ntb pueda ajustarse para acoplarse de manera más eficiente a las diferentes VLP o para imitar mejor la configuración natural del dominio Ntb natural. En una modalidad preferida, el ligador se selecciona a partir del grupo que comprende: (a) GGC; (b) GGC-CONH2; (c) GC; (d) GC-CONH2; (e) C; y (f) C-CONH2. En otra modalidad preferida, el ligador es una cisteína o una cisteína amidada. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 4. En una modalidad preferida, el primer y segundo de al menos dos segundos sitios de unión de asocian con al menos dos primeros sitios de unión a través de al menos dos uniones covalentes no peptídicas. En otra modalidad preferida, solo el primero y el segundo de al menos dos segundos sitios de unión se asocian con al menos dos primeros sitios de unión a través de al menos dos uniones covalentes no peptídicas, normalmente y preferiblemente lo que conlleva a una estructura "similar a puente" del dominio Ntb o fragmento del dominio Ntb. Sin estar limitado por la teoría propuesta, se piensa que esta estructura similar a puente imita la configuración natural del dominio Ntb natural, el N-término del cual se acopla en un enlace disulfuro con otra cisteína en el bucle ECL3 y el C-término del cual se ancla a la membrana celular. En una modalidad preferida, al menos dos primeros sitios de unión comprenden una funcionalidad reactiva idéntica. Preferiblemente, cada uno de al menos dos primeros sitios de unión comprende un grupo amino. Más preferiblemente, cada uno de al menos dos primeros sitios de unión comprende un grupo amino de un residuo lisina.

En una modalidad preferida, la composición además comprende al menos dos moléculas heterobifuncionales, en donde al menos dos moléculas heterobifuncionales ligan al menos dos primeros sitios de unión y al menos dos segundos sitios de unión, en donde preferiblemente cada una de al menos dos moléculas heterobifuncionales es SMPH. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus del bacteriófago ARN es Qß, AP205, fr ó GA. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus del bacteriófago ARN es Qß. Al menos cuatro residuos lisina se exponen sobre la superficie de la VLP de la proteína de cubierta Qß . Esta densidad de lisina asegura que uno de al menos dos segundos sitios de unión encuentre y se ligue rápidamente al primer sitio de unión después de que el otro de dos segundos sitios de unión se ha ligado al primer sitio de unión mediante al menos una unión covalente no peptídica. De manera similar, las VLP de otros bacteriófagos ARN también son adecuadas para esta invención . En un aspecto, esta invención proporciona un método para producir una composición que comprende los pasos de: (a) proporcionar una partícula similar a virus de un bacteriófago ARN con al menos dos primeros sitio de unión; en donde la partícula similar a virus (VLP) de un bacteriófago ARN comprende o consiste de proteínas de cubierta, mutantes o fragmentos de bacteriófago ARN; en donde preferiblemente cada uno de al menos dos primeros sitios de unión comprende o es un grupo amino, preferiblemente un grupo amino de un residuo lisina; (b) proporcionar al menos un dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión; en donde el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente de: (i) un dominio Nta o un fragmento de dominio Nta, y (ii) un dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27 (SEQ ID NO: 56) ó un fragmento del dominio Ntb que comprende los aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27, en donde el C-término del dominio Nta o del fragmento del dominio Nta está fusionado, preferiblemente de manera directa, con el N-término del dominio Ntb ó el fragmento del dominio Ntb y en donde el primero o segundo de al menos dos segundos sitios de unión comprende o es un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un grupo sulfhidrilo de un residuo cisteína y e donde el primero de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 5' con respecto al N-término de los aminoácidos 23 al 27 de SEQ ID NO: 27 en donde el segundo de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 3' con respecto al C-término de aminoácidos 23 al 27 de SEQ ID NO: 27, preferiblemente en dirección 3' con respecto al C-término del dominio PNt extracelular de CCR5; (c) ligar la VLP del bacteriófago ARN y el dominio PNt extracelular de CCR5 mediante al menos una unión covalente no peptídica. En una modalidad preferida, la proporción molecular del dominio PNt extracelular de CCR5 con respecto a la proteína de cubierta de la VLP de un bacteriófago ARN es de 8:1 a 0.5:1, preferiblemente de 4:1 a 1:1, con mayor preferencia de 4:1 a 2:1 y aún con mayor preferencia, de 2:1. En una modalidad preferida, el paso (a) además comprende agregarle a la partícula similar a virus (VLP) del bacteriófago ARN, un ligador heterobifuncional, en donde preferiblemente el ligador heterobifuncional es SMPH. Preferiblemente, la proporción molecular de SMPH con respecto a la proteína de cubierta de la VLP del bacteriófago ARN es de 40:1 a 2:1, preferiblemente de 20:1 a 4:1, con mayor preferencia a 10:1. En una modalidad preferida, el ligamiento de la VLP del bacteriófago ARN y el dominio PNt extracelular de CCR5 se lleva a cabo en una solución con una fuerza iónica no mayor a 150mM, preferiblemente no mayor a lOmM, preferiblemente no mayor a 75mM, con mayor preferencia no mayor a 50mM. En una modalidad preferida, la partícula similar a virus de un bacteriófago ARN es Qß, AP205, fr o GA, preferiblemente Qß. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de una secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 27. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de una secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 27, en donde tres, preferiblemente dos, o preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 27 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden la secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 27 se unan específicamente a CCR5 de humano. En una modalidad preferida, el dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 44. En un aspecto, la invención proporciona ala composición obtenible o preferiblemente que se obtiene según el método de la invención. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención es un dominio extracelular CXCR4, un fragmento del dominio extracelular CXCR4 o una combinación de éstos. En una modalidad preferida, el dominio extracelular de CXCR4 es el dominio extracelular N-terminal de CXCR4. En una modalidad preferida, el dominio extracelular N-terminal de CXCR4 se acopla mediante su C-término a la partícula similar a virus. En una modalidad preferida, el fragmento de dominio extracelular CXCR4 es el fragmento del dominio ECL2 extracelular de CXCR . En otra modalidad preferida, el fragmento del dominio ECL2 extracelular de CXCR4 comprende, o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 29 ó una secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 29 en donde dos, preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 29 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden la secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 29, se unan específicamente al CXCR4 de humano. En una modalidad preferida, el fragmento del dominio ECL2 extracelular de CXCR4 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de una secuencia lineal, es decir, SEQ ID NO: 29 no ciclizada o la secuencia aminoacídica derivada de SEQ ID NO: 29. En otra modalidad preferida, la secuencia lineal SEQ ID NO: 29 se acopla a la partícula similar a virus, ya sea mediante su N-término ó C-término, preferiblemente mediante su C-término. En una modalidad preferida, el fragmento del dominio extracelular de CXCR4 comprende o consiste de un fragmento del dominio ECL2 extracelular de CXCR4 ciclizado. En otra modalidad preferida, el fragmento del dominio extracelular de CXCR4 consiste esencialmente o alternativamente de SEQ ID NO: 29 ciclizado ó una secuencia aminoacídica ciclizada derivada de SEQ ID NO: 29. Como se utiliza aquí, la SEQ ID NO: 29 ciclizada se refiere a una secuencia aminoacídica que comprende o consiste de SEQ ID NO: 29, en donde el primer residuo aminoacídico y el último residuo aminoacídico de la secuencia aminoacídica interactúan entre sí mediante al menos un enlace químico, preferiblemente mediante al menos una unión covalente. Preferiblemente, el primer residuo aminoacídico y el último residuo aminoacídico de la secuencia de aminoácidos interactúan entre sí solo mediante enlaces covalentes. Preferiblemente, el primer residuo aminoacídico y el último residuo aminoacídico de la secuencia de aminoácidos interactúan entre sí mediante una unión peptídico, lo que conlleva a un péptido circular o cíclico. En otra modalidad preferida, el fragmento del dominio ECL2 extracelular de CXCR4 comprende o consiste de SEQ ID NO: 53 ó SEQ ID NO: 49 ciclizado, en donde el péptido está ciclizado mediante el residuo C y G en ambos extremos. En una modalidad preferida, al menos un antígeno es gastrina de la invención. En una modalidad, al menos un antígeno es gastrina G17. En una modalidad preferida, la gastrina G17 comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 34. En otra modalidad preferida, la gastrina G17 comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 36. En otra modalidad preferida y alternativa, la gastrina G17 comprende o consiste esencialmente o preferiblemente de SEQ ID NO: 34 y el último aminoácido F está amidado. En una modalidad preferida, al menos un antígeno es progastrina G34. En una modalidad preferida, la progastrina G34 comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 35. En otra modalidad preferida, la progastrina G34 comprende o consiste de SEQ ID NO: 37. En otra modalidad preferida y alternativa, la progastrina G34 comprende esencialmente o consiste de SEQ ID NO: 35 y el último aminoácido F está amidado. En una modalidad preferida, al menos un antígeno comprende o consiste esencialmente del fragmento 1-9 de gastrina G17 (SEQ ID NO: 33), preferiblemente con una secuencia de ligamiento fusionada a su C-término, con mayor preferencia con una secuencia de ligamiento SSPPPPC fusionada al C-término (SEQ ID NO:39) . En una modalidad muy preferida, la gastrina de la invención fusionada con un ligador comprende o consiste esencialmente de SEQ ID NO: 38. En una modalidad preferida, la gastrina de la invención con al menos un segundo sitio de unión comprende o consiste esencialmente o alternativamente de una secuencia aminoacídica seleccionada a partir de un grupo que comprende: SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 0; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 42; y SEQ ID NO:43. Se ha de observar que E en la posición uno de la secuencia EGPWLEEEE como parte de la secuencia de gastrina puede ser E, piro E ó Q. Cuando se fusiona un aminoácido adicional al N- término de EGPWLEEEE, E en la posición uno de la secuencia EGPWLEEEE puede ser E o preferiblemente Q. En una modalidad preferida, al menos un antígeno de la invención es un fragmento CETP. En otra modalidad preferida, el fragmento CETP comprende o consiste esencialmente de un polipéptido que tiene una secuencia aminoacídica como en SEQ ID NO: 32 ó un polipéptido derivado de SEQ ID NO: 32, en donde dos, preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 32 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el polipéptido derivado de SEQ ID NO: 32 se unan específicamente a CETP, preferiblemente CETP de humano. En una modalidad preferida, al menos un antígeno es una proteína C5a. En una modalidad preferida, la proteína C5a comprende o consiste esencialmente de un polipéptido que tiene una secuencia aminoacídica como en SEQ ID NO: 45 ó un polipéptido derivado de SEQ ID NO: 45, en donde cinco, cuatro, preferiblemente tres, preferiblemente dos, preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 45 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprenden el polipéptido derivado de SEQ ID NO: 45, se unan específicamente a C5a, preferiblemente C5a de humano. En una modalidad preferida, al menos un antígeno es un fragmento C5a. En otra modalidad preferida, el fragmento C5a, comprende o consiste esencialmente de un polipéptido que tiene una secuencia aminoacídica como en SEQ ID NO: 46 ó un polipéptido derivado de SEQ ID NO: 46, en donde dos como preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 46 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución, preferiblemente una sustitución conservadora con la condición de que los anticuerpos producidos como respuesta por las composiciones inventivas que comprende el polipéptido derivado de SEQ ID NO: 46, se unan específicamente a C5a, preferiblemente C5a de humano. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención es Bradicinina de la invención. La Bradicinina (BK, KRPPGFSPFR, SEQ ID NO: 50) es un principal péptido vasodilatador y tiene una importante función en la regulación local de la presión sanguínea, el flujo sanguíneo y la permeabilidad vascular (Margoli us H. S, et al . , Hypertension , 1995) . La Bradicinina ejerce sus efectos mediante el receptor B2. des-Arg9-BK (KRPPGFSPF, SEQ ID NO: 51) tiene funciones distintas y superpuestas a las de la Bradicinina. La evidencia sugiere que des-Arg9-BK se genera rápidamente después de un daño tisular y modula la manera de los eventos observados durante los procesos inflamatorios incluyendo la vasodilatación, aumento de permeabilidad vascular, extravasación plasmática, migración celular, dolor e hiperalgesia (Calixto J.B. et al., Pain 2000) . Des-Arg9-BK ejerce sus efectos mediante receptor Bl. BK y Des-Arg9-BK tienen una principal función en diversas enfermedades inflamatorias (Cruwys S.C. et al., Br J Pharmacol, 1994; Cassim B. et al., Immunopharmacology 1997). La evidencia experimental sugiere que tanto BK como des-Arg9-BK tienen una función importante durante el desarrollo del asma (Christiansen S.C. et al., Am. Rev. Dis. 1992 /Barnes P.J. et al., Thorax, 1992); Fuller R.W.et al., Am. Rev. Respir. Dis. , 1987) . En otra modalidad preferida, la Bradicinina de la invención además comprende un ligador fusionado al N-término de la Bradicinina de la invención, preferiblemente la secuencia de ligamiento es cisteína. En otra modalidad preferida, la Bradicinina de la invención además comprende un ligador fusionado al C-terminal de la Bradicinina de la invención, preferiblemente, la secuencia de ligamiento es una cisteína. En otra modalidad preferida, la Bradicinina de la invención comprende o consiste de SEQ ID NO: 50. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención es des-Arg-Bradicinina de la invención. En otra modalidad preferida, la composición de la invención además comprende un ligador fusionado al N-término de des-Arg-Bradicinina de la invención, preferiblemente la secuencia de ligamiento es cisteína. En otra modalidad preferida, la composición de la invención además comprende un ligador fusionado al C-terminal de des-Arg-Bradicinina de la invención. Preferiblemente, la secuencia de ligamiento es una cisteína. En otra modalidad preferida, la des-Arg-Bradicinina de la invención comprende o consiste SEQ 20 ID NO:51. Incluso en otra modalidad preferida, al menos un antígeno comprende o alternativamente consiste de al menos un sitio antigénico del antígeno de la invención. Se sabe que la posesión de inmunogenicidad usualmente no requiere toda la longitud de una proteína y normalmente una proteína contiene más de un epítopo antigénico, es decir, un sitio antigénico. Un fragmento o un péptido corto pueden ser suficientes para encontrar al menos un sitio antigénico que pueda unirse de manera inmunoespecífica a un anticuerpo o un receptor de célula T dentro del contexto de una molécula MHC. El sitio o sitios antigénicos pueden determinarse mediante una variedad de técnicas generalmente conocidas por el experto. Los métodos para determinar sitios antigénicos de una proteína se conocen por el experto en la técnica. El documento WO2005/108425 ha elaborado algunos de estos métodos a partir del párrafo [0099] al [0103] y esta descripción específica se incorpora aquí por referencia. Se ha de observar que estos métodos generalmente son aplicables a otros antígenos polipeptídicos y por lo tanto no se restringen a IL-23 pl9 como se escribe en el documento WO2005/108425. En una modalidad preferida de la invención, la VLP con al menos un primer sitio de unión se liga al antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión mediante al menos una unión peptídico. El gen que codifica para el antígeno de la invención, preferiblemente el antígeno de la invención no mayor a 75 aminoácidos, preferiblemente no mayor a 50 aminoácidos, incluso con mayor preferencia menor a 30 aminoácidos, se encuentra ligado dentro del marco de lectura, ya sea internamente o preferiblemente en el N- ó C-término del gen que codifica para la proteína de cubierta de la VLP. La fusión también puede efectuarse al insertarse secuencias del antígeno de la invención en un mutante de una proteína de cubierta en donde parte de la secuencia de la proteína de cubierta ha sido suprimida y a las que se refieren como mutantes de truncamiento. Los mutantes de truncamiento pueden tener supresiones internas o N- ó C-terminales como parte de la secuencia de la proteína de cubierta. Por ejemplo, para el HBcAg de VLP específico, los aminoácidos 79-80 se reemplazan con un epítopo de extraño. La proteína de fusión preferiblemente debe retener su habilidad para ensamblarse en una VLP al momento de la expresión lo que puede examinarse mediante microscopio electrónico. Los residuos aminoacídicos flanqueantes pueden agregarse para incrementar a distancia entre la proteína de cubierta y el epítopo extraño. Los residuos de glicina y serina son aminoácidos particularmente favorables para utilizarse en las secuencias flanqueadoras. Esta secuencia flanqueadora confiere una flexibilidad adicional, que puede disminuir el potencial efecto desestabilizador de fusionar una secuencia extraña en la secuencia de la subunidad de VLP para disminuir la interferencia con el ensamble mediante la presencia de un epítopo extraño. En una modalidad preferida, la VLP modificada es una VLP del virus del mosaico, en donde preferiblemente la VLP del virus del mosaico comprende o alternativamente consiste de al menos una proteína de fusión y al menos una proteína de cubierta viral. En otras modalidades, al menos un antígeno de la invención, preferiblemente el antigeno de la invención que comprende menos de 50 aminoácidos, puede fusionarse a una variedad de otras proteínas de cubierta virales, a manera de ejemplos, al C-término de una forma truncada de la proteína Al de Qß(Kozlovska, T. M., et al., Intervirology 39:9-15 (1996)) o insertarse entre la posición 73 y 73 de la extensión CP. Por ejemplo, Kozlovska et al., (Intervirology, 39: 9-15 (1996)) describen las fusiones de proteina QßAl en donde los epítopos se fusionan en el C-término de la extensión QßCP truncada en la posición 19. Como un ejemplo adicional, el antígeno de la invención puede insertarse entre el aminoácido 2 y 3 del fr CP(Pushko P. et al., Prot. Eng. 6:883-891 (1993)). Más aún, el antígeno de la invención puede fusionarse a la ß-horquilla protuberante N-terminal de la proteína de cubierta del fago ARN MS-2 (WO 92/13081) . Alternativamente, el antígeno de la invención puede fusionarse en una proteína de cápside de papilomavirus, preferiblemente de la principal proteína de cápside Ll de papilomavirus de bovino tipo 1 (BPV-1) (Chackerian, B. et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96:2373-2378 (1999), WO 00/23955). La sustitución de aminoácidos 130-136 de BPV-1 Ll con un antígeno de la invención esta en una modalidad de la misma. En el documento WO 2004/009124 página 62 renglón 20 a la página 68 renglón 17 que se incorpora aquí por referencia se han descrito otras modalidades de fusionar el antígeno de la invención a una proteína de cubierta, sus mutantes o fragmentos o una proteína de cubierta de un virus. En otra modalidad preferida, al menos un antígeno de la invención, preferiblemente el antígeno de la invención compuesto de menos de 70 aminoácidos, preferiblemente con menos de 50 aminoácidos se fusiona ya sea el N- ó C-término de la proteína de cubierta, sus mutantes o fragmentos al fago ARN AP205. En otra modalidad preferida, la proteína de fusión además comprende un separador, en donde el separador se fusiona a la proteína de cubierta, sus fragmentos o mutantes de la AP205 y el antígeno de la invención. Preferiblemente, el separador está compuesto de menos de 30, preferiblemente menos de 20 incluso y con mayor preferencia menos de 10 y aún más preferiblemente menos de 5 aminoácidos. En una modalidad preferida de la presente invención, la composición comprende o alternativamente, consiste esencialmente de una partícula similar a virus con al menos un primer sitio de unión ligado en al menos un antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión mediante al menos una unión covalente, preferiblemente la unión covalente es una unión no peptídica. Preferiblemente, el primer sitio de unión no comprende o no es un grupo sulfhidrilo de cisteína. Además, preferiblemente el primer sitio de unión no comprende o no es un grupo sulfhidrilo. En una modalidad preferida de la presente invención, el primer sitio de unión comprende o preferiblemente es un grupo amino, preferiblemente el grupo amino de un residuo lisina. En otra modalidad preferida de la presente invención, el segundo sitio de unión comprende o es preferiblemente un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un grupo sulfhidrilo de una cisteína. En una modalidad muy preferida de la invención, al menos un primer sitio de unión comprende o es preferiblemente un grupo amino, preferiblemente un grupo amino de un residuo lisina y al menos un segundo sitio de unión comprende o es preferiblemente un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un grupo sulfhidrilo de un residuo cisteína.

En una modalidad preferida de la invención como el antígeno de la invención se enlaza a la VLP mediante entrecruzamiento químico, normalmente y preferiblemente mediante el uso de un agente de entrecruzamiento heterobifuncional. En modalidades preferidas, el agente de entrecruzamiento heterobifuncional contiene un grupo funcional que pueda relacionar con los primeros sitios de unión preferidos, preferiblemente con el grupo amino, de preferencia con los grupos amino de residuos lisina de la VLP y otro grupo funcional que pueda reaccionar con el segundo sitio de unión preferida, es decir un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un residuo cisteína inherente o artificialmente agregado al antígeno de la invención y opcionalmente también está disponible para reacción mediante reducción. En la técnica se conocen varios agentes de entrecruzamiento heterobifuncionales. Estos incluyen los agentes de entrecruzamiento preferidos SMPH (Pierce), Sulfo-MBS, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB, SIA y otros agentes de entrecruzamiento disponibles, por ejemplo de Pierce Chemical Company, y que tienen un grupo funcional reactivo hacia grupos amino y un grupo funcional reactivo hacia grupos sulfhidrilo. Los agentes de entrecruzamiento anteriormente mencionados conllevan a la formación de un enlace amida posterior a la reacción con el grupo amino y un enlace tioéter con grupo sulfhidrilo. Otra clase de agentes de entrecruzamiento adecuados en la práctica de la invención se caracterizan por la introducción de un enlace disulfuro entre el antígeno de loa invención y la VLP al momento de la copulación o apareamiento. Los agentes de entrecruzamiento preferidos que pertenecen a esta clase incluyen, por ejemplo, SPDP y Sulfo-LC-SPDP (Pierce) . En una modalidad preferida, la composición de la invención además comprende un ligador. La incorporación mediante manipulación genética de un segundo sitio de unión en el antígeno de la invención se elabora mediante la asociación de un ligador, preferiblemente que contenga al menos un aminoácido adecuado como segundo sitio de unión según la descripción de la invención. Por lo tanto, en una modalidad preferida de la presente invención, el ligador está asociado al antígeno de la invención mediante al menos una unión covalente, preferiblemente mediante al menos una unión peptídico. Preferiblemente, el ligador comprende o alternativamente consiste de un segundo sitio de unión. En otra modalidad preferida, el ligador comprende un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un residuo cisteína. En otra modalidad preferida, el ligador aminoacídico es un residuo cisteína . La selección de ligadores puede describirse en el documento WO2005/108425A1, página 32-33 que se incorpora aquí por referencia.

El ligamiento de antígeno de la invención a la VLP mediante el uso de un agente de entrecruzamiento heterobifuncional según los métodos preferidos descritos anteriormente, permite la copulación del antígeno de la invención a la VLP en forma orientada. Otros métodos de ligamiento del antigeno de la invención a la VLP incluyen métodos en donde el antígeno de la invención se entrecruza con la VLP, utilizando carbodiimida EDC y MHS. El antígeno de la invención también puede primero tiolarse a través de una reacción, por ejemplo con SATA, SATP ó iminotiolano. El antígeno de la invención, después de la desprotección si es que se requiere, puede entonces copularse a la VLP de la siguiente forma. Después de separar la cantidad excesiva de reactivo de tiolación, el antígeno de la invención se hace reaccionar con la VLP, que previamente se activa con un agente de entrecruzamiento heterobifuncional que comprende una entidad reactiva cisteína y por lo tanto muestra al menos uno o varios grupos funcionales reactivos hacia residuos cisteína, a los cuales el antígeno tiolado de la invención puede reaccionar, como se escribe anteriormente. Opcionalmente, se incluyen pequeñas cantidades de agente reductor en la mezcla de reacción. En otros métodos, el antígeno de la invención se une a la VLP, utilizando un agente de entrecruzamiento homobifuncional tal como glutaraldehído, DSG, BM[PEO]4, BS3, (Pierce) u otros agentes de entrecruzamiento homobifuncionales conocidos teniendo grupos reactivos hacia grupos amina o grupos carboxilo de la VLP. En otras modalidades de la presente invención, la composición comprende o alternativamente consiste esencialmente de una partícula similar a virus ligada al antígeno de la invención mediante interacciones químicas, en donde al menos una de estas interacciones no es una unión covalente. Estas interacciones incluyen, entre otras, interacciones antígeno-anticuerpo, interacción receptor-ligando. El ligamiento de la VLP al antígeno de la invención puede efectuarse mediante la biotinilación de la VLP de expresión del antígeno de la invención como una proteína de estreptavidina-fusión. En una modalidad preferida de la invención, la VLP de la invención se produce de manera recombinante en un hospedero en donde la VLP se encuentra esencialmente libre de ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos del hospedero. En otra modalidad preferida, la composición además comprende al menos una macromolécula polianiónica unida o preferiblemente incluida o encerrada en la VLP. Aún en otra modalidad preferida, la macromolécula polianiónica es ácido poliglutámico y/o ácido poliaspártico. Esencialmente libre de ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos del hospedero: el término "esencialmente libre de ARN hospedero, preferiblemente libre de ácidos nucleicos del hospedero" como se utiliza aquí, se refiere a la cantidad de ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos del hospedero comprendidos por la VLP, en donde esta cantidad normalmente y preferiblemente es menor a 30. µg es preferiblemente menor a 30 µg, preferiblemente menor a 20 µg, con mayor preferencia menor a 10 µg, incluso más preferentemente menor a 8 µg incluso con mayor preferencia menor a 6 µg, incluso con mayor preferencia menor a 4 µg y más preferiblemente menor a 2 µg por mg de la VLP. El hospedero, como se utiliza dentro del contexto anteriormente mencionado, se refiere al hospedero en donde se produce de manera recombinante la VLP. El experto en la técnica conoce los métodos convencionales para la determinación de la cantidad de ARN, preferiblemente ácidos nucleicos. El método normal y preferido para determinar la cantidad de ARN, preferiblemente ácidos nucleicos, de conformidad con la presente invención, se describe en el ejemplo 17 del documento WO2006/037787A2 presentado el 5 de octubre de 2005 por la misma solicitante. Normalmente y preferiblemente, las condiciones idénticas, similares o análogas son utilizadas para la determinación de la cantidad de ARN, preferiblemente ácidos nucleicos, para las composiciones inventivas que comprenden las VLP distintas a Qß. Las modificaciones de las condiciones eventualmente necesarias se encuentran dentro del conocimiento del experto en la técnica. El valor numérico de las cantidades determinadas normalmente y preferiblemente deberá entenderse por comprender valores que tengan una desviación de ±10%, preferiblemente que tengan una desviación de ±5% del valor numérico indicado. Macromolécula polianiónica: el término "macromolécula polianiónica", como se utiliza aquí, se refiere a una molécula con una elevada masa molecular relativa que comprende grupos repetitivos de carga negativa, su estructura esencialmente comprende la repetición múltiple de unidades derivadas, actualmente o conceptualmente, de moléculas de baja masa molecular relativa. Una macromolécula polianiónica deberá tener un peso molecular de al menos 2000 Dalton y con mayor preferencia de al menos 3000 Dalton incluso más preferiblemente de al menos 5000 Dalton. El término "macromolécula polianiónica" como se utiliza aquí, normalmente y preferiblemente se refiere a una molécula que no es capaz de activar receptores tipo Toll por lo tanto, el término "macromolécula polianiónica" normalmente y preferiblemente excluye ligándose a receptores tipo Toll incluso con mayor preferencia además excluye sustancias inmunoestimulantes tales como ligados de receptores tipo Toll, ácidos nucleicos inmunoestimulantes y lipopolisacáridos (LPS) . De preferencia, el término "macromolécula polianiónica" como se utiliza aquí, se refiere a una molécula que no es capaz de inducir producción de citocinas. Incluso más preferiblemente, el término "macromolécula polianiónica" excluye sustancias inmunoestimulantes. El término "sustancias inmunoestimulantes" como se utiliza aquí, se refiere a una molécula que es capaz de inducir y/o potenciar respuestas inmunitarias específicamente contra el antígeno comprendido en la presente invención. ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos de hospedero: el término "ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos de hospedero" ó el término "ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos de hospedero, con una estructura secundaria", como se utiliza aquí, se refiere al ARN o preferiblemente ácidos nucleicos que se sintetizan originalmente por el hospedero. El ARN, preferiblemente ácidos nucleicos pueden sin embargo, experimentar cambio químicos y/o físicos durante el procedimiento de reducción o eliminación de la cantidad ARN, preferiblemente ácidos nucleicos, normalmente y preferiblemente a manera de los métodos inventivos, por ejemplo el tamaño de ARN, preferiblemente de ácidos nucleicos que se puede acortar o su estructura secundaria se puede alterar. Sin embargo, incluso estos ácidos nucleicos o ARN resultante aún se considera ARN o ácidos nucleicos de hospedero . En el documento WO2006/037787A2 presentado por la misma solicitante el 5 de octubre de 2005 y por lo tanto toda la solicitud, particularmente los ejemplos 4, 5 y 17 que se incorporan aquí por referencia, se muestran los métodos para determinar la cantidad de ARN y para reducir la cantidad de ARN comprendido en la VLP. La reducción o eliminación de la cantidad de ARN hospedero, preferiblemente de ácido nucleico de hospedero, minimiza o reduce las respuestas indeseadas de células T tales como respuesta inflamatoria de células T ó respuesta citotóxica de células T y otros efectos secundarios indeseados como fiebre mientras que se mantiene una fuerte respuesta de anticuerpos, específicamente contra el antígeno. En un aspecto, la invención proporciona una composición de vacuna que comprende o consiste esencialmente de la composición de la invención. En una modalidad preferida, el antígeno de la invención ligado a la VLP en la composición de vacuna puede ser de origen animal, preferiblemente de mamífero o humano. En las modalidades preferidas, el antígeno de la invención tiene origen humano, bovino, canino, felino, de roedor, porcino o equino. En una modalidad preferida, la composición de vacuna además comprende al menos un adyuvante. La administración de al menos un adyuvante puede ocurrir antes, concomitantemente o posteriormente a la administración de la composición inventiva. El término "adyuvante" como se utiliza aquí, se refiere a estimuladores no específicos de respuesta inmunitaria ó sustancias que permiten la generación de un depósito o reserva depot en el hospedero, que cuando se combina con la composición farmacéutica y de vacuna de la invención, respectivamente, pueden proporcionar una respuesta inmunitaria incluso más potente. En otra modalidad más preferida, la composición de vacuna está desprovista de adyuvante. Una característica ventajosa de la presente invención es la elevada inmunogenicidad de la composición, incluso en la ausencia de adyuvantes. La ausencia de un adyuvante, además, minimiza la ocurrencia de respuestas indeseadas de células T inflamatorias que representan una preocupación de seguridad en la vacunación contra autoantígenos. Por lo tanto, la administración de la vacuna de la invención a un paciente ocurre preferiblemente sin la administración de al menos un adyuvante al mismo paciente antes de; concomitantemente con o posteriormente a la administración de la vacuna. Generalmente la VLP ha sido descrita como un adyuvante. Sin embargo, el término "adyuvante", como se utiliza dentro del contexto de la solicitud, se refiere a un adyuvante que no es la VLP utilizada para las composiciones inventivas, mas bien es una adición a la VLP. La invención además describe un método de inmunización que comprende la administración de la vacuna de la presente invención a un humano o animal. Animal es preferiblemente un mamífero tal como un gato, oveja, cerdo, caballo, bovino, perro, rata, ratón y particularmente un humano. La vacuna puede administrarse a un animal o humano mediante diversos métodos como se usa en la técnica pero normalmente se administran mediante inyección, infusión, inhalación, administración oral u otros métodos físicos adecuados. Los conjugados pueden alternativamente administrarse intramuscularmente, intravenosamente, a través de la mucosa, transdérmicamente, intranasalmente, intraperitonealmente o subcutáneamente. Los componentes de conjugados para administración incluyen suspensiones y soluciones acuosas y no acuosas estériles (por ejemplo, solución salina fisiológica). Los ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los portadores ó apositos oclusivos pueden utilizarse para aumentar la permeabilidad dérmica y potenciar la absorción del antígeno. Se dice que las vacunas de la invención son "farmacológicamente aceptables" si su administración puede ser tolerada por el paciente receptor. Además, las vacunas de la invención se administran en una cantidad terapéuticamente efectivas" (es decir, una cantidad que produce un efecto fisiológico deseado) . La naturaleza o tipo de respuesta inmunitaria no es un factor limitante de esta descripción. Sin pretender limitar la presente invención por la siguiente explicación mecanística, la vacuna inventiva puede inducir anticuerpos que se unen a CCR5, CXCR4 , gastrina, progastrina, CETP, C5a, Bradicinina o des-Arg-Bradicinina y de esta forma reducir su concentración y/o interferir con su función fisiológica o patológica. En un aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende o consiste esencialmente de la composición como se muestra en la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Cuando la vacuna de la invención se administra a un paciente, puede estar en forma que contenga sales, amortiguadores, adyuvantes u otras sustancias que son deseables para mejorar las eficacia del conjugado. Los ejemplos y materiales adecuados para usarse en la preparación de composiciones farmacéuticas se proporcionan en diversas fuentes incluyendo REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Osol, A, ed., Mack Publishing Co . , (1990)). La invención muestra un proceso para producir la composición de la invención que comprende los pasos de: (a) proporcionar una VLP con al menos un primer sitio de unión; (b) proporcionar un antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión y (c) combinar la VLP y el antígeno de la invención para producir una composición, en donde el antígeno de la invención y la VLP se ligan a través de un primer y un segundo sitio de unión. En una modalidad preferida, se proporciona al menos un antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión mediante la expresión, preferiblemente mediante la expresión en un sistema bacteriano, preferiblemente en E. coli. Normalmente se agrega un identificador, tal como un identificador His o un identificador Myc para facilitar el proceso de purificación. En otro método, particularmente al menos un antígeno de la invención con no más de 50 aminoácidos puede sintetizarse químicamente . En otra modalidad preferida, el paso de proporcionar una VLP con al menos un primer sitio de unión comprende otros pasos: (a) desensamblar la partícula similar a virus en proteínas de cubierta, mutantes o sus fragmentos del bacteriófago ARN; (b) purificar las proteínas de cubierta, mutantes o fragmentos; (c) reensamblar las proteínas de cubierta purificadas, o los fragmentos del bacteriófago ARN en una partícula similar a virus, en donde la partícula similar a virus esté esencialmente libre de ARN hospedero, preferiblemente ácidos nucleicos del hospedero. En otra modalidad preferida, el reensamblado de las proteínas de cubierta purificadas se efectúa en presencia de al menos una macromolécula polianiónica. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar una infección de VIH, en donde el método comprende administrarle la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un humano, en donde el antígeno de la invención es un CCR5 de la invención.

En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar un infección por VIH, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un humano, en donde el antígeno de la invención es un CXCR4 de la invención. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar aterosclerosis, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un animal o un humano, en donde el antígeno de la invención es un CETP de la invención. La aterosclerosis es una enfermedad arterial que incluye, entre otras cosas, enfermedad cardíaca coronaria, enfermedad de arterias coronarias, enfermedad de arteria carótida y enfermedad cerebro vascular. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde el método comprende administrar la composición de vacuna o la composición de vacuna de la invención, respectivamente, a un humano o un animal, en donde el antígeno de la invención es C5a de la invención, enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde C5a interviene o contribuye a la condición, incluyendo, entre otras cosas, artritis reumatoide, grupo sistémico eritematoso, asma y penfigoide bulboso. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un humano o animal, en donde el antígeno de la invención es Bradicinina de la invención. Las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas en donde la Bradicinina interviene o contribuye a la condición, incluye, entre otras cosas a la artritis y asma. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método para prevenir y/o tratar enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, un humano o un animal, en donde el antígeno de la invención es des-Arg-Bradicinina de la invención. Las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde des-Arg-Bradicinina interviene o contribuye a la condición, incluyen entre otras cosas, la artritis y asma. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un método de prevención y/o tratamiento contra el cáncer, particularmente neoplasia del tracto gastrointestinal, en donde el método comprende administrar la composición inventiva o la composición de vacuna inventiva, respectivamente, a un humano o animal, en donde el antígeno de la invención es gastrina de la invención. Los neoplasia del tracto gastrointestinal incluyen, entro otros, carcinoma gástrico, cáncer de colon, cáncer rectal y cáncer pancreático. En otro aspecto, la invención proporciona la composición de la invención para utilizarse como un medicamento, en donde el antígeno de la invención es CCR5 de la invención, CXCR4 de la invención, gastrina de la invención, CETP de la invención, C5a de la invención, Bradicinina de la invención ó des-Arg-Bradicinina de la invención, respectivamente. En una modalidad preferida, la invención proporciona el uso de la composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra infección de VIH en un humano, en donde la composición comprende al menos un CCR5 de la invención. En una modalidad preferida, la invención proporciona el uso de la composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra infección VIH en un humano, en donde la composición comprende al menos un CXCR4 de la invención. En una modalidad preferida, la invención proporciona el uso de la composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de aterosclerosis, en donde la composición comprende al menos un CETP de la invención. La aterosclerosis es una enfermedad arterial que incluye, entre otras cosas, enfermedad cardíaca coronaria, enfermedad de arterias coronarias, enfermedad de arterias carótidas y enfermedad cerebro vascular. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona el uso de la composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde la composición comprende al menos un C5a de la invención. Para las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde el C5a interviene o contribuye a la condición, incluye, entre otras cosas, artritis reumatoide, lupus sistémico eritematoso , asma y penfigoide bulboso. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona el uso de la composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde la composición comprende al menos una Bradicinina de la invención. Las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde la Bradicinina interviene a contribuir a la condición, incluyen, entre otras cosas, a la artritis y asma. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona el uso de una composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde la composición comprende al menos una des-Arg-Bradicinina de la invención. Las enfermedades inflamatorias primarias y/o crónicas, en donde des-Arg-Bradicinina interviene o contribuye a la condición, incluyen, entre otras cosas a la artritis y asma. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona el uso de una composición para la elaboración de un medicamento para la prevención y/o tratamiento contra el cáncer, particularmente neoplasia del tracto gastrointestinal, en donde la composición comprende al menos una gastrina de la invención. Los neoplasia del tracto gastrointestinal incluyen, entre otros, carcinoma gástrico, cáncer de colon, cáncer rectal y cáncer pancreático.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Copulación de péptidos PNt de CCR5 o ECL2A con VLP de Qß Se derivatizan 2 g/1 VLP de Qß (143 µM de Qß proteína de cubierta) con 1.43 mM SMPH (Pierce) durante 30 minutos a 25°C y luego se someten a diálisis contra 20 mM Hepes pH 8, 150 mM NaCl. Se incuban durante 2 horas a 25°C 0.286 mM de péptido PNt-CC (SEQ ID NO: 44, de 3 mM solución en existencia en DMSO) con cisteína C-terminal amidada y 1 g/1 partículas Qß derivatizadas . Como segundo método, se derivatizan 2 g/1 VLP de Qß con 1.43 mM SMPH durante 30 minutos a 25°C y luego se someten a diálisis contra 20 mM fosfato pH 7.4. Se incuban durante 2 horas a 25°C 0.143 mM de péptido PNt-CC (SEQ ID NO: 44, de 50 mM solución en existencia en DMSO) con la cisteína C-terminal amidada y 1 g/1 partículas Qß derivatizadas. El producto de la copulación se somete a diálisis contra 20 mM fosfato pH 7.4. Se derivatizan 2 g/1 Qß con 1.43 mM SMPH durante 30 minutos a 25°C y luego se someten a diálisis contra 20 mM Hepes a pH 7.4, 150 mM NaCl. Se incuban durante 2 horas a 25°C 0.286 mM péptido PNt-SC (SEQ ID NO: 54, de 5 mM solución en existencia en DMSO) con la cisteína C-terminal amidada y 1 g/1 partículas Qß derivatizadas. El producto de la copulación se somete a diálisis contra 20 mM Hepes pH 7.4, 150 mM NaCl. Se derivatizan 2 g/1 Qß con 1.43 mM SMPH durante 30 minutos a 25°C y luego se someten a diálisis contra 20 mM Hepes pH 7.4, 150 mM NaCl. Se incuban durante 2 horas a 25°C, 0.143 mM péptido PNt-CN (SEQ ID NO: 55, de 5 mM solución en existencia en DMSO) estando la cisteína C-terminal amidada y 1 g/1 partículas Qß derivatizadas. El producto de la copulación es sometida a diálisis contra 20 mM Hepes a pH 7.4, 150 mM NaCl. Se derivatizan 2 g/1 Qß con 1.43 mM SMPH durante 30 minutos a 25°C y luego se someten a diálisis contra 20 mM fosfato pH 7.5. Se agregan e incuban durante 2 horas a 25°C en 20 mM fosfato pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 g/1 partículas Qß derivatizadas que se disuelven en 20% acetonitrilo y 0.286 mM ECL2A cíclico (SEQ ID NO: 26, a partir de 5 mM de solución en existencia en DMSO) . El producto de la copulación se somete a diálisis contra 20 mM fosfato, pH 7.5.

EJEMPLO 2 Inmunización Se ceban ratones C57BL/6 con 50 µg Qß-PNtCC, Qß-PNtCN, Qß-PNtSC o Qß-ECL2A (obtenidos del Ejemplo 1) en el día 0, (subcutáneamente, en 0.2 ml 20 mM fosfato pH 7.5) y se comparan con ratones Balb/C cebados con 50 µg de Qß solamente. Luego de reforzarse con las mismas vacunas en el día 14, se verifican las titulaciones de anticuerpos para el péptido a-Qß y a-CCR5 mediante ELISA en el día 14 y día 21 (TABLA 1) .

TABLA 1 Alternativamente, se ceban ratones Nueva Zelanda Blancos con 100 µg Qß-PNtCC (obtenido del EJEMPLO 1, segundo método) en el día 0, (intradérmica a 10 puntos en la parte dorsal del conejo) con partes iguales (v/v) de adyuvante completo de Freund. Los siguientes tres refuerzos (100 µg Qß-PNtCC en los días 14, 28, 56) se llevaron a cabo con partes iguales (v/v) con adyuvante incompleto de Freund. Se verifican las titulaciones de anticuerpos para péptidos a-Qß y a-CCR5 mediante ELISA en el día 37 y 56 y siempre se encontró que fueron mayor a 12 '000.

EJEMPLO 3 Purificación de IgG policlonal de ratón o conejo Se centrifuga durante 5 minutos a 14 '000 rpm el suero agrupado a partir de 5 ratones inmunizados, Qß-PNtCC, Qß-PNtSC, Qß-PNtSC o Qß-ECL2A, respectivamente) o dos conejos) (obtenidos del EJEMPLO 4). El sobrenadante se carga en una columna de 3.3 ml de proteína G sefarosa prelavada (Amersham) . Luego la columna se lava con PBS y se eluye con 100 mM glicina pH 2.8. Se recolectan fracciones de 1 ml en tubos previamente proporcionados con 112 µl 1 M Tris pH 8. Se agrupan las fracciones pico que absorben a 280 nm.

EJEMPLO 4 Purificación por afinidad de IgG policlonal de conejo Se inmoviliza 1 mg de Qß o Qß-PNtCC en una columna de sefarosa activada con N-hidroxisuccinimida, según las instrucciones del fabricante (GE Healthcare Europe) . Se cargan en PBS 5 mg de IgG de conejo (del EJEMPLO 3) en una columna de afinidad Qß con una baja tasa de 0.5 ml/min. Se recolecta la fracción que fluye a través para otra purificación específica para PNtCC. Se eluye IgG específica para Qß a partir de columna Qß con 100 mM glicina pH 2.6 y se neutraliza con 120 mM Tris pH 8. Se purifica aún más IgG específica para PNtCC en la fracción que fluye a través en una columna Qß-PNtCC. La IgG eludida y neutralizada se lava cuatro veces con PBS utilizando un dispositivo de filtración centrífuga (Amicon Ultra-4, 10 '000 MWCO) .

EJEMPLO 5 Tinción FACS de CCR5 celular con IgG policlonal de ratón CEM.NKR-CCR5 es una variante de la línea celular CEM.NKR que expresa para CCR5, una línea humana que expresa naturalmente para CD4 (Trkola et al., J. Viroll., 1999, página 8966) . Se cultivan células CEM.NKR-CCR5 en un medio de cultivo RPMl 1640 (con 10% FCS, glutamina y antibióticos). Las células se sedimentan y se vuelven a suspender en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) que contiene 1% de suero fetal de bovino (FCS por sus siglas en inglés) a fin de obtener 2.3 x 106 células/ml. Se agrega una dilución [1:250] de IgG de humano (Miltenyi Biotec) como agente de bloqueo y se incuba durante 20 minutos. Las células se lavan una vez en 1% FCS/PBS y 0.1 ml (2.3 x 105 células/pocilio) se colocan en placas y se incuban con anticuerpos policlonales CCR5 purificados a partir del EJEMPLO 3 (60 mg/l; eludido a partir de la proteína G de columna; diluciones con 1% FCS/PBS) . Luego de un período de 30 minutos a 4°C, las células se lavan una vez en 1% FCS/PBS y se tiñen durante 20 minutos a 4°C con 15 mg/l FITC-cabra-a-ratón-IgG (Jackson) en 1% FCS/PBS. Luego de dos lavados en 1% FCS/PBS, se analizan mediante citometría de flujo 5'000 - '000 células teñidas. La media geométrica de cada tinción se determina utilizando el software para citometría de flujo "cell quest". La TABLA 2 muestra que los anticuerpos específicos para PNtCC o ECL2A se unen de manera específica a moléculas CCR5 expresadas sobre la superficie celular de CEM.NKR, mientras que los anticuerpos específicos para PNtSC y PNtCN así como anticuerpos específicos para Qß no se unen a moléculas CCR5 expresadas sobre la superficie celular.

TABLA 2 EJEMPLO 6 Ensayo de neutralización de VIH En resumen, la capa leucocitaria obtenida a partir de tres donadores sanguíneos sanos se reduce en células CD8+ T utilizando el coctel Rosette Sep (StemCell Technologies Inc) y se aisla el PBMC mediante centrifugación Ficoll-Hypaque (Amersham-Pharmacia Biotech) . Las células se ajustan a 4 x 106/ml en medio de cultivo (RPMl 1640, 10% FCS, 100 U/ml IL-2, glutamina y antibióticos), se divide en tres partes y se estimula ya sea con 5 µg/ml fitohemaglutinina (PHA), 0.5 µg/ml PHA o 1 mg/l anti-CD3 MAb OKT3. Luego de un período de 72 horas, se combinan las células de las tres estimulaciones y se utilizan como una fuente de células CD4+ T estimuladas para experimentos de infección y neutralización viral. El ensayo de neutralización de VIH se llevó a cabo esencialmente como se describe previamente (Trkola et al., J. Virol., 1999, página 8966). Se han descrito previamente los virus R5 (cepas específicas para el correceptor CCR5) , JR-FL y SF162 (O'Brien et al., Nature 1990, 348, página 69; y Shioda et al., Nature 1991, 349, página 167). En resumen, las células se incuban con diluciones en serie de IgG policlonal purificada de conejo (25 µg/ml - 25 ng/ml, obtenido del EJEMPLO 5 o EJEMPLO 6) o Rantes inhibidor de VIH para control positivo en placas de cultivo de 96 pocilios durante una hora a 37°C. Los inóculos VIH-1 se ajustan para contener aproximadamente 1,000 a 4,000 TCID50/ml en un medio de ensayo (TCID50:50% dosis infectiva en cultivo tisular, Trkola et al., J. Virol., 1999, página 8966). Se agrega el inoculo viral (100 TCID50; 50% dosis infectiva de tejido tisular) y las placas se cultivan durante 7 días. El volumen total de infección es de 200 µl . Después, el medio del sobrenadante se evalúa para determinar la producción de antígeno p24 de VIH-1 mediante el uso de un inmunoensayo como se describe previamente (Moore et al., 1990. Science 250, página 1139). La TABLA 3 muestra que los anticuerpos purificados neutralizan de manera eficiente el VIH hasta en un 70% a una baja concentración de anticuerpos (por ejemplo, 0.56 µg/ml).

TABLA 3: Concentración de anticuerpos que inhiben HIV 50% 70Í inhibición inhibición Qß purificado por > 25 > 25 µg/ml afinidad PNtCC purificado por 0.23 0.56 µg/ml afinidad IgG total PNtCC 0.36 1.01 µg/ml RANTES 5.8 14.7 µg/ml Valoración de neutralización de VIH con células CEM 5.25 Actividad de neutralización de muestras de inmunoglobulina sérica de ratón purificada contra el aislado viral de JR-FL que se evalúan en células CEM 5.25.EGFP.luc.M7 (Nathaniel Landau) utilizando el virus indicador de luciferasa seudotipificada de envoltura JR-FL como se describe en (Montefiori, D.C. (2004) . Evaluating neutralizing antibodies against HIV, SIV and SHIV in luciferase repórter gene assays. Current Protocols in Immunology, John Wiley y Sons, 12.11.1-12.11.15. y 15 Wei, X., et al, Nature 422:307-12). Se incuban células CEM 5.25.EGFP.luc.M7 con diluciones en serie de anticuerpo de ratón (obtenido del EJEMPLO 3) durante una hora a 37°C. Luego se agrega el inoculo viral (150 TCID50) y polibreno (concentración final de 10 µg/ml) . El volumen total de infección es de 200 µl. La concentración Ig que causa 50% de reducción (NT50) en la producción del gen indicador de luciferasa luego de 72 horas se determina mediante análisis de regresión. La TABLA 4 muestra que IgG total específica para PNtCC inhibe infección de VIH a una baja concentración, mientras que IgG específica para PNtCN no inhibió la infección por VIH a ninguna concentración cuantificada.

TABLA 4: Concentraciones de anticuerpo que inhiben VIH 50% inhibición PNt-CN > 25 µg/ml PNt-CC 1.45 µg/ml Control 0.17 µg/ml positivo (Mab para CCR5) EJEMPLO 7 Digestión en gel y análisis LC/MS de Qß-PNtCC Se cargan en un gel reductor SDS-PAGE muestras de Qß-PNtCC, Qß-PNtSC y Qß derivatizada (obtenidas del EJEMPLO 1) . Las bandas de gel que corresponden al monómero Qß por péptido y dímero Qß por péptido (o monómero Qß y dímero Qß en el caso de Qß derivatizado) se cortan en pequeños trozos y se lavan dos veces con lOOµl 100 mM NH4HC03, 50% acetonitrilo y se lavan una vez con 50 µl acetonitrilo. Los tres sobrenadantes se desechan. Después, se agrega y se incuba a 37°C durante la noche 10 ml proteasa Glu-C (0.01 ng/µl en 10 mM Tris, pH 8.29 y 10 µl amortiguador (10 mM Tris, pH 8.2) . El sobrenadante se almacena y los pedazos de gel se extraen dos veces con 100 µl 0.1% ácido trifluoroacético, 50% acetonitrilo. Los tres sobrenadantes se combinan y se secan. Las muestras se disuelven en 15 µl 0.1% ácido fórmico. Se inyectan 6 µl en la columna HPLC y se determinan las masas de los péptidos mediante LC/MS.

EJEMPLO 8 Síntesis química de fragmentos CXCR4 (aal-39) y (aal76-185) y que se acoplan a VLP de Qß El fragmento 1-39 de CXCR4 (SEQ ID NO: 30) con la secuencia de ligamiento CGG o GGC fusionada ya sea al N- o C-término del fragmento 1-39 de CXCR4, fragmento 176-185 de CXCR4 (SEQ ID NO: 29) con un ligador CGG o GCC fusionado ya sea en el N-término o C-término o fragmento 176-185 de CXCR4 (SEQ ID NO: 29) que se cicliza al conectarle una C que se agrega en el N-término con una G que se agrega en el C-término se sintetiza químicamente según los procedimientos convencionales (Peter Henklein, Charité) . Se hace reaccionar una solución de 3 ml (1.0 mg/ml) de VLP de Qß en 20 mM Hepes, pH 7.2 durante 30 minutos con 85 µl SMPH (50 mM en DMSO, Pierce) a 25°C. La VLP Qß derivatizada y sometida a diálisis se utiliza subsiguientemente para copular péptidos CXCR4-CGG-1-39, CXCR4-1-39-GGC, CXCR4-CGG-176-185, CXCR4-176-185-GGC o CXCR4-C-176-185-G . En resumen, 1 ml de VLP de Qß derivatizado a una concentración de 1 mg/ml se hace reaccionar con 70 µl de 5 mM solución peptídica durante 2 horas a 25°C en 20 mM Hepes, pH 7.2. La eficiencia de copulación se estima entre 0.24 - 0.5 fragmentos CXCR4 por monómero de Qß.

EJEMPLO 9 Inmunización de ratones con fragmentos CXCR4 Se vacunan ratones hembra adulto C57B/6 (3 por grupo) con fragmentos Qß-CXCR4 (obtenidos en EJEMPLO 8), utilizando como control VLP de Qß . Se diluyen 100 µg de vacuna sometida a diálisis de cada muestra en PBS a un volumen de 200 µl y se inyectan subcutáneamente (100 µl en dos lados ventrales) en los días 0 y 14. Las vacunas se administran sin o con adyuvante (Allhydrogel, 1 mg/inyección) . Los ratones se sangran retroorbitalmente en el dia 14, 21, 28 y se determinan mediante ELISA las respuestas de anticuerpo específicas para el péptido al recubrir los péptidos CXCR4 copulados a ARNasa a una concentración de 10 µg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C. El CXCR4 se copula con ARNasa brevemente de la siguiente forma: se derivatiza 5 mg/ml de ARNasa en 0.2 mM SPDP (SIGMA) durante una hora a temperatura ambiente, la solución de ARNasa derivatizado se purifica sobre una columna PD10 (Amersham) . Se agregan 10 mM EDTA y 1 mM péptido a la solución ARNasa derivatizada y la reacción se incuba durante una hora.

TABLA 5 Se muestran titulaciones ELISA promedio específicas para el péptido en suero de tres ratones por grupo.

EJEMPLO 10 Detección de anticuerpos específicos para CXCR4 mediante tinción de superficie de células T humanas líneas de Jurkat y CEM.NKR-CCR5 Se cultivan células de Jurkat o células CEM.NKR-CCR5 en un medio de cultivo RPMl 1640 suplementado con 10% FCS, glutamina y antibióticos. Las células se retiran, se lavan y se vuelven a suspender en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) que contiene 1% suero fetal de bovino (FCS) . Para evitar la unión mediada por receptor Fc, primero se incuban las células durante 30 minutos con CD16 /CD32 -rat ón-a-rat a (BD Pharmingen) en PBS/1% FCS a una temperatura de 4°C. Luego de lavar las células (1 x 105) éstas se incuban con suero de ratón diluido en serie (obtenido del EJEMPLO 10) durante 30 a 4°C, las células se lavan con PBS/1% FCS y se incuban con IgG- rat ón-a- FIRC (BD Pharmingen) durante 30 minutos a 4°C, luego se analizan las células con FACS Calibur y se cuantifica la unión específica de anticuerpos mediante el uso del software CellQuest (BD Biosciences) . Los resultados se resumen en la siguiente TABLA.

TABLA 6: *Suero de d21 luego de la primera inmunización a una dilución de 1:200 que fue utilizado para la tinción de células.

EJEMPLO 11 Ensayo de neutralización de tinción VIH-1 de R4 En resumen, se obtienen las capas leucocitarias a partir de tres donadores sanguíneos sanos a los que primero se les disminuye células CD8+ T utilizando un coctel Rosette Sep (StemCell Technologies Inc., BIOCOBA AG) y células mononucleares de sangre periférica que se recolectan mediante centrifugación Ficoll-Hypaque (Amersham-Pharmacia Biotech) .

Luego se ajustan las células purificadas a 4 x 106/ml en medio de cultivo (RPMl 1640, 10% FCS, 100 U/ml IL-2, glutamina y antibióticos), se dividen en tres muestras y se estimulan ya sea con 5 µg/ml fitohemaglutinina (PHA), 0.5 µg/ml PHA o 1 mg/l anti-CD3 MAb OKT3. Luego de 72 horas, las células se combinan y se utilizan como células CD4+ T estimuladas para la infección y experimentos de neutralización viral. Para analizar el potencial neutralizador, primero se incuban las células con diluciones en serie de IgG purificado policlonal de ratón (como se describe anteriormente) o el anticuerpo 12G5 de control (25 µg/ml - 25 ng/ml; Pharmingen) en placas de cultivo de 96 pocilios durante una hora a 37°C.

Previamente se describieron las tinciones X4 para NL4-3 y 2044 (Trkola et al (1998), J. Virol. 72: 396; Trkola et al (1998), J. Virol. 72-1876). El inoculo viral (100 TCID50; 50% dosis infectiva de cultivo tisular; Trkola et al., J. Virol., 1999, página 8966) se agrega y las células se cultivan durante 4-114 días adicionales. El volumen total de infección es de 200 µl . En el día 6 posterior a la infección, el sobrenadante se analiza para determinar la cantidad de producción de antígeno p24 de VIH-1 mediante el uso de un inmunoensayo, como se describe previamente (Moore et al., 1990. Science 250, página 1139).

EJEMPLO 12 Copulación de fragmento CETP a VLP de Qß El péptido CETP1 de CETP, que tiene la secuencia carboxi-terminal que abarca desde el aminoácido 461-476 (SEQ ID NO: 32) de CETP humano y que está fusionado en el N-término con el tripéptido CGG para copularse con las VLP se sintetiza mediante química en fase sólida en las microcolecciones EMC de GmbH. El péptido se amida en su C-término. Se hace reaccionar durante 30 minutos una solución de 750 µl de VLP Qß en 20 mM Hepes, 150 mM NaCl pH 7.4 durante 30 minutos con una cantidad 10 veces mayor de SMPH (21.4 µl de 100 mM de solución en existencia en DMSO, Pierce) a 25°C. Se hace reaccionar 1.5 ml de VLP de Qß derivatizado a una concentración de 2 mg/ml con 21 µl de 50 mM de solución de péptido CETP durante dos horas a 15°C en 20 mM Hepes, 150 mM NaCl, pH 7.4.

EJEMPLO 13 Inmunización de ratones con Qß-CETPl y ELISA Se vacunan ratones hembra Balb/C (n = 3) con CETP1 copulado con VLP de Qß. 50 µg de vacuna sometida a diálisis se diluye en PBS hasta un volumen de 200 µl y se inyectan subcutáneamente (100 µl en ambos lados ventrales) en el dia 0, 14, 50 y 73. La vacuna se administra sin adyuvante. Se determinan las titulaciones de anticuerpo en ratones sangrados retroorbitalmente en el día 0, 70 y 80.

Se copula CETP1 con VLP de AP205 (20 mM Hepes, 150 mM NaCl pH 7.4) para recubrir placas de ELISA: En resumen, 1 ml de 1 mg/ml de VLP de AP205 se derivatiza con 7.1 µl de 50 mM SMPH (Pierce) de solución en existencia (en DMSO) durante 30 minutos a temperatura ambiente. La solución de AP205 derivatizada (1 ml) se hace reaccionar con 7.1 µl de 50 mM solución en existencia de CETP1 (en DMSO) y se incuba durante 2 horas a 15°C. El CETP1 también se copula con BSA para recubrir las placas de ELISA. Las placas de ELISA se recubren con péptido CETP copulado con VLP de AP205 o BSA a una concentración de 5 µg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C. TABLA 7 Titulación promedio de anticuerpo IgG específico para anti-CETPl (expresada como el recíproco de la dilución sérica que proporciona la unión media máxima en el ensayo de ELISA) en ratones inmunizados en el día 0, 14, 50 y 73 con Qß-CETPl .

TABLA 7 EJEMPLO 14 Clonación, expresión y purificación de CETPl fusionado al C- término de VLP de AP205 Clonación El fragmento ADN que codifica para el péptido CETPl (SEQ ID NO: 32) se forma al fijar dos oligonucleótidos complementarios que codifican para la secuencia peptídica de CETPl y que contienen los sitios de restricción Kpn2I y Mphl l 03l, respectivamente. El fragmento obtenido se digiere con Kpn2l y Mphl l 03I y se clona en los mismos sitios de restricción en el vector pAP405-61 (como se describe en el EJEMPLO 1 del documento WO2006/032674 ) bajo el control del promotor operón triptófano de E . coli . La proteína AP205-11-CETP1 codificada por el plásmido resultante es: proteina de cubierta AP205 - GTAGGGSG FGFPEHLLVDFLQSLS. AP205-11-CETP1 se expresa y purifica esencialmente como se describe en el documento WO04/007538.

EJEMPLO 15 Prueba de vacunas CETP en modelo experimental de aterosclerosis usando conejo alimentado con colesterol Se vacunan subcutáneamente conejos Nueva Zelanda Blanco (n = 12 por grupo) con 200 µg de vacuna VLP-CETP o VLP en el día 0 y se refuerza en la semana 3, 6, 9, 12, 15, 19, 23 y 27. Los conejos se colocan con una dieta rica en colesterol (0.25%) en la semana 16 y se mantienen con esta dieta durante 16 semanas. Se recolectan muestras plasmáticas de conejos en ayuno a intervalos regulares para determinar la titulación de anticuerpo, lipoproteína, colesterol y cuantificaciones de actividad CETP. Los animales se sacrifican en la semana 32 y se retira la aorta para un análisis de lesión aterosclerótica. La aorta se tiñe con colorante lipofílico Oil Red O luego de una preparación de la aorta "en cara abierta" y el porcentaje de la aorta cubierta por las lesiones se calcula en cada animal .

EJEMPLO 16 Copulación de Bradicinina y des-Arg9-Bradicinina para VLP de Qß e inmunización de ratones Se sintetizan químicamente según los procedimientos convencionales la Bradicinina (BK) (SEQ ID NO: 22) y des-Arg9- Bradicinina (SEQ ID NO: 23) con Cys fusionada al N-término de ambas secuencias o Bradicinina (BK) con un Cys fusionada al C-término. Los péptidos se copulan a VLP de Qß . Se vacunan ratones hembra adulto C57BL/6 (10 por grupo) ya sea con 50 µg Qß-BK o Qß-des-Arg9-BK copulado a Qß de manera subcutánea (100 µl en ambos lados ventrales) en los días 0, 14 y 28. La vacuna se administra sin adyuvante. Los ratones se sangran retroorbitalmente en el día 0, 14, 21 y 30 y los anticuerpos específicos para BK o des-BK se cuantifican mediante ELISA siguiendo un protocolo convencional. Primero, la BK o des-Arg9-BK se copula con ARNasa (SIGMA) . Las placas ELISA se recubren con péptidos de Bradicinina copulados con ARNasa a una concentración de 10 µg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C. TABLA 8 Promedio de titulación de anticuerpos IgG específica para anti-BK yanti-des-Arg9-BK (expresada como un factor de dilución) en ratones inmunizados en el día 0 y 14 con Qß-BK o Qß-des-Arg9-BK respectivamente.

EJEMPLO 17 Eficacia de vacunación contra Qß-BK, Qß-des-Arg9-BK para el tratamiento contra artritis inducida por colágeno Se inmunizan intradérmicamente tres veces 10 ratones macho DBA/1 ratón por grupo (días 0, 14 y 28) con 50µg de Qß-BK, Qß-des-Arg9-BK i Qß solamente. Los ratones se inyectan dos veces intradérmicamente (días 34 y 555) con 200 µg colágeno tipo II de bovino mezclado con adyuvante completo de Freund. Después de la segunda inyección con colágeno/CFA, los ratones se examinan regularmente y se asigna una puntuación clínica que abarca de 0 a 3 en cada miembro según el grado de enrojecimiento (rubor) e hinchamiento que se observa. Tres semanas después de la segunda inyección con colágeno/CFA, se determina el promedio de la puntuación clínica por miembro en los tres grupos experimentales.

EJEMPLO 18 Eficacia de vacunación contra Qß-BK y Qß--des-Arg9-BK para el tratamiento contra inflamación alérgica de las vías respiratorias (AAI por sus siglas en inglés) Se utiliza un modelo experimental de asma de inflamación alérgica de las vías respiratorias para evaluar los efectos de vacunación contra Bradicinina (BK) y des-Arg9-Bradicinina (des-Arg9-BK) en respuestas inmunitarias mediadas por Th2 caracterizadas por: influjo eosinofílico pulmonar, producción de citocina (IL-4, IL-5, IL-13) , producción de moco y anticuerpo IgE e hipersensibilidad bronquial (BHR por sus siglas en inglés) . Se inmunizan ratones Balb/c (5 por grupo) ya sea con Qß-BK o Qß-des . Arg9-BK como se describe en el EJEMPLO 16 o se inyecta solo con Qß . 35 días posteriores a la primera inmunización, los ratones se inyectan intraperitonealmente con 50 µg de ovalbúmina (OVA) en presencia o ausencia de adyuvante (Allhydrogel) . Diez días después (es decir, en el día 45) todos los ratones se desafían intranasalmente a diario con 50µg OVA en PBS durante 4 días consecutivos. Veinticuatro horas después del último desafío se determina el BHR con una plegtismografía de cuerpo completo. Luego se sacrifican ratones a diferentes intervalos para analizar la inflamación pulmonar y las respuestas inmunitarias mediadas por Th2. Los lavados pulmonares se llevaron a cabo con PBS/1% BSA. Las células contenidas en el lavado bronquioalveolar (BAL por sus siglas en inglés) se cuentan en un Contador Coulter (Instrumenten Gesellschaft AG) y se diferencian con tinción Naigrunwald-Giemsa como se describe previamente (Trifilieff A, et al. Clin Exp Allergy. 2001 junio; 31 (6) : 934-42) .

EJEMPLO 19 Copulación de gastrina o fragmentos de gastrina con VLP de Qß Se sintetizan los siguientes péptidos de gastrina según los procedimientos convencionales. G17(1-9)C2: pEGPWLEEEESSPPPPC (SEQ ID NO:39) clG17: pEGPWLEEEEEAYGWMDFGGC (SEQ ID NO: 40) nG17amide: CGGQGPWLEEEEEAYGWMDFCONH2 (SEQ ID NO: 41) nG17-G: CGGQGPWLEEEEEAYGWMDFG (SEQ ID NO: 40) nG34amide: CGGQLGPQGPPHLVADPSKKQGPWLEEEEEAYGWMDFCONH2 (SEQ ID NO:38) nG34-G: CGGQLGPQGPPHLVADPSKKQGPWLEEEEEAYGWMDFG (SEQ ID NO: 43) Subsiguientemente, se utiliza la VLP de Qß derivatizada y sometida a diálisis para copular clG17. En resumen, se hace reaccionar 1 ml de VLP de Qß derivatizado (a una concentración de 2 mg/ml) con 167 µl de 10 mM de solución peptídica en DMSO y 100 µl de acetonitrilo durante 2 horas a 15°C. El producto copulado se llama Qß-clG17. Se estima la eficacia de copulación [es decir, mol Qß-gastrina/mol monómero Qß (total)], mediante análisis densitométrico del SDS-PAGE teñido con azul de Coomassie, entre 2.4 fragmentos de clG17 por monómero Qß. La VLP Qß derivatizada y sometida a diálisis se utiliza subsiguientemente para copular nG17amida, nG17-G, nG34amida o nG34-G. En resumen, se hacen reaccionar 84 µl de VLP de Qß derivatizada (a una concentración de 2 mg/ml) con 12 µl de 10 mM solución peptídica y 4 µl de H20 durante 2 horas a 15°C. Los productos copulados se llaman Qß-nG17amida, Qß-nG17-G, Qß-nG34amida y Qß-nG34-G respectivamente.

EJEMPLO 20 Copulación de G17(1-9)C2 (SEQ ID NO: 39) con toxoide diftérico (TD) y Qß El protocolo utilizado para la copulación de G17(1-9)C2 a TD es similar EJEMPLO 1 de Patente de EE.UU. No. 5,866,128. En resumen, se activa TD (List Biological Laboratories) al disolver 1 mg de TD en 100 µl de 0.2 M amortiguador de fosfato sódico, pH 6.6. Por separado, 2 mg de SMPH se disuelven en 80 µl DMSO. Se agregan 12 µl de SMPH en 100 µl de TD. Luego de dos horas de incubación a temperatura ambiente, la mezcla se somete a diálisis dos veces durante dos horas contra dos litros de 0.1 M amortiguador de citrato sódico, pH 6.0. El producto copulado se llama DT-G17 ( 1-9) C2. La VLP Qß derivatizada y sometida a diálisis se utiliza subsiguientemente para copular el G17(1-9)C2. En resumen, 84 µl de VLP Qß derivatizada se hace reaccionar con 6 µl de 10 mM de solución peptídica en DMSO y 6 µl de H20 durante dos horas a 18°C. El producto copulado se llama Qß-G17 (1-9) C2.

EJEMPLO 21 Inmunización de ratones con Qß-clG17, Qß-nclG17amida, Qß-nG17- G, Qß-mG34amida, Qß-nG34-G, Qß-G17 ( 1-9) C2 y DT-G17 ( 1-9) C2 Se vacunan ratones hembra adulto C57BL/6 ya sea con Qß-clG17 (5 ratones por grupo), Qß-nG17amida, Qß-nG17-G, Qß-nG34amida y Qß-nG34-G (3 ratones por grupo) . Se diluye en PBS a un volumen de 200 µl, 50 µg de Qß-clG17 o 25 µg de Qß-nG17amida, Qß-nG17-G, Qß-nG34amida y Qß-nG34-G (obtenida en el EJEMPLO 24) y se inyecta subcutáneamente (100 µl en ambos lados ventrales) en los días 0 y 14. Las vacunas se administran sin adyuvante. Como testigos, se inyecta un grupo de ratones con 50 µg de Qß . Los ratones inmunizados con Qß-C1G17 se sangran retroorbitalmente en el día 0, 14, 21, 28, 42, 69 y 101 y los ratones que se inmunizan con Qß-nG17amida, Qß-nG17-G, Qß-nG34amida y Qß-nG34-G se sangran retroorbitalmente en el día 0, 14, 21, 28, 42, 56 y 77. Se inmunizan hembras adultas C57/BL6 con Qß-G17 (1-9) C2 con 1 mg de aluminio por ratón o sin aluminio y DT-G17 (1-9) C2 (5 ratones por grupo) con 1 mg de aluminio por ratón. Se diluyen 50 µg de Qß-G17 (1-9) C2 en PBS hasta obtener un volumen de 200 µl y se inyecta subcutáneamente (100 µl en ambos lados ventrales) en los días 0 y 14. Los ratones se sangran retroorbitalmente en el día 0 y el día 14. Se miden las titulaciones de anticuerpos específicos contra estos fragmentos de gastrina mediante ELISA o placas recubiertas con ELISA (96 pocilios MAXIsorp, inmunoplaca NUNC) y se recubre con ARNasa copulada a clG17 o nG17amida, nG17-G, nG34amida, nG34-G a una concentración de 10 µg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C. TABLA 9 Titulación promedio de anticuerpo anti-clG17-, nG17amida, nG17-G, nG34amida o nG34-G (expresada como factor de dilución) en ratones inmunizados en el día 0 y 14 con Qß-C1G17, Qß-nG17amida, Qß-nG17-G, Qß-nG34amida y Qß-nG34-G, respectivamente. Esto demuestra claramente que un conjugado de gastrina-VLP es capaz de inducir una elevada titulación de anticuerpos contra fragmentos de gastrina.

TABLA 10 muestra las titulaciones promedio de anticuerpos específicos para G17(1-9)C2. Las titulaciones ELISA se expresan como diluciones en serie que conllevan a una OD máxima media en el ensayo ELISA. En ratones inmunizados con Qß-G17(1-9)C2 con o sin Aluminio o DT-G17 (1-9) C2, las titulaciones promedio de aproximadamente 1: 4242, 1: 5838 y 1:788 respectivamente, fueron alcanzadas en el día 14. La titulación OD máxima media es menor a 100, que se considera por debajo del valor discriminante del ensayo. Esto demuestra claramente que Qß-G17 (1-9) C2 es capaz de inducir una respuesta mayor y más temprana de anticuerpos que DT-G17 (1-9) C2.

TABLA 10 EJEMPLO 22 Verificación de la reactividad cruzada de suero que se elevó contra C1G17 o CCK8 Se recubren placas ELISA con clG17 o CCK8 (SIGMA) a una ' concentración de 0.2 mg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C. Aunque la titulación ELISA a partir de la placa recubierta con clG17 es de 1250, no se observó ninguna clara reactividad para CCK (FIG. ÍA) . ' También se verificó la reactividad cruzada en un ELISA de inhibición. Las placas ELISA se recubren con clG17 o CCK8 (SIGMA) a una concentración de 0.2 mg/ml en un amortiguador de recubrimiento (0.1 M NaHC03, pH 9.6), durante la noche a 4°C.

Se incuba el suero de ratón (14 días posteriores a la inmunización) contra Qß-clG17 (obtenido del EJEMPLO 21) ya sea en forma de diluciones seriales nG17amida o CCK8 a 37 °C durante 2 horas en un bloque calefactor con una agitación a 600 rpm. Luego se agrega este suero a la placa ELISA y se incuba a temperatura ambiente durante 2 horas . Aunque la preincubación de nGl7amida inhibe el reconocimiento del suero para la nG17amida recubierta, no se observó ninguna actividad de inhibición CCK. Ambos experimentos mostraron que los anticuerpos sensibilizados con Qß-clG17 no reaccionaron de manera cruzada con CCK8 (FIG. IB) .

EJEMPLO 23 Copulación de C5a y fragmento C5a con Qß Se sintetiza químicamente por Dictagene SA la secuencia aminoacídica C5a de murino que contiene el ligador CGSGG N-terminal (SEQ ID NO: 47, de aquí en adelante llamado mC5acys). Los 19 aminoácidos C-terminales de la secuencia C5a de murino se sintetizaron químicamente (EMC Microcollections) con un ligador CGG adicional en el extremo N-terminal (SEQ ID NO: 48, de aquí en adelante llamado mC5acys59-77) . Se hace reaccionar una solución de 143 µM Qß VLP en 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.2 con dos veces un exceso molar (286 µM) de (SMPH, Pierce) durante 30 minutes a 25 'C con agitación. Después de la diálisis, se agrega una cantidad equimolar de mC5acys a 36 µM solución de VLP de Qß derivatizadas con SMPH. El volumen de radiación es de 100 µl y las reacciones se incuban durante dos horas agitándose a 15°C.

Se hace reaccionar una solución de 200 µM Qß VLP en 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, pH 7.2 con 5 veces exceso molar (lmM) de SMPH (Pierce) durante 30 minutos agitándose a 25°C. Después de la diálisis, se agrega 5x exceso molar de mC5acys59-77 a 107 µM solución de VLP de Qß derivatizado con SMPH. La reacción se incuba durante 2 horas agitándose a 15 °C.

EJEMPLO 24 Inmunización de ratones con vacuna Qß-mC5acys y detección de anticuerpos específicos para mC5acys Los ratones se inmunizan subcutáneamente con 50 µg de vacuna Qß-mC5acys preparada como se describe en EJEMPLO 23 en los días 0 y 14 y según se requiera. Los ratones se sangran retroorbitalmente o mediante la vena cauda en el día 14 y día 21 y en puntos temporales subsiguientes. El suero de estos sangrados se guarda y analiza mediante ELISA específico para C5a. Los ratones reciben 50 µg VLP de Qß o reciben solamente PBS como testigo negativo. Se determina mediante ELISA la titulación de anticuerpos IgG anti-mC5acys al recubrirse con 1 µg/ml mC5acys durante la noche en 0.1 M amortiguador de carbonato (pH 9.6). La TABLA 11 muestra los resultados representativos de este ensayo con suero de ratones ya sea inmunizados 24 días antes con Qß-mC5acys, solo con VLP de Qß o sin tratamiento. Los ratones que recibieron la vacuna Qß-mC5acys mostraron consistentemente una respuesta de anticuerpos IgG contra la placa recubierta con mC5acys. TABLA 11 Los ratones se inmunizan subcutáneamente con 50 µg Qß-mC5acys59-77 sustancialmente igual a como se describe anteriormente .

EJEMPLO 25 La inmunización con vacuna Qß-mC5acys neutralizó los efectos in vivo de mC5acys sistémico Se determina la actividad biológica de mC5acys in vivo en un ensayo de neutropenia al cuantificar la disminución aparente en la cantidad de granulocitos sanguíneos después de la administración intravenosa de pequeñas cantidades de mC5acys . Se anestesian ratones hembra C57BL/6 (6-8 semanas de edad) y se inyectan con 100 µl solución por medio de la vena cauda lateral. Los ratones reciben ya sea PBS, mC5acys en PBS o cápside Qß en PBS. Luego de tres minutos los ratones se sangran mediante la ruta retroorbital y se transfieren 100 µl de sangre completa a 2 ml PBS que contiene el anticoagulante heparina (Roche) . Las células se sedimentan mediante centrifugación a 450 xg durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de aspirar el sobrenadante, el sedimento celular se vuelve a suspender en 2 ml Tris Cloruro de Amonio en solución (TAC) (17 mM Tris, 126 mM NH4C1, pH 7.2) durante 5 minutos a temperatura ambiente para lisar los eritrocitos. Las células restantes se sedimentan mediante centrifugación y el tratamiento TAC se repite. Las células restantes se vuelven a sedimentar mediante centrifugación y se vuelven a suspender en 50 µl de amortiguador de lavado para citometría de flujo (PBS de Dulbecco que contiene 2% (v/v) suero fetal de bovino y 0.1% NaN3) . Las células se hacen pasar a través de un citómetro de flujo (FACSCalibur, Becton Dickenson) y la fracción de granulocitos se determina mediante el control de dispersión frontal y lateral de luz. En la TABLA 6 se proporciona un experimento representativo que demuestra que mCa5cys induce neutropenia. En este caso, 1 nmol de mC5acys induce una neutropenia estadísticamente significativa en comparación con ratones tratados con PBS y ratones que recibieron 1 µg de proteina cápside de Qß lo que muestra que mC5acys sintetizado tiene actividad biológica. Se inmunizan subcutáneamente ratones C57BL/6 en uno de los flancos con 50 µg de Qß-mC5acys diluido en PBS de Dulbecco . Los ratones testigo recibieron solo Qß o se dej aron sin tratamiento . Las inmuni zaciones se llevaron a cabo en el día 0 y en el día 14 del experimento. En él dia 22 posterior a la primera inmunización, se inyectó 50 pmol mC5acys en forma intravenosa por medio de la vena cauda lateral para inducir neutropenia sistémica . En ratones inmunizados solamente con VLP de Qß o en ratones sin tratamiento, hay una disminución en el porcentaje de granulocitos sanguíneos tres minutos posteriores ala inyección de 50 pmol mC5acys. En ratones vacunados con Qß-mC5acys esta disminución en el porcentaje de granulocitos sanguíneos pudo evitarse. Los anticuerpos anti-mC5a producidos como respuesta en ratones mediante inmunización con Qß-mC5acys son capaces de neutralizar la respuesta de neutropenia sistémica producida por la administración de mC5acys intravenoso (TABLA 12) TABLA 12 EJEMPLO 26 La inmunización con VLP de Qß-mC5acys alivia enfermedad en un modelo experimental en ratón de artritis inducida por colágeno Se inmunizan subcutáneamente ratones macho de 6 semanas de edad DBA/UCrl (Charles River, Alemania) en los flancos ya sea con 50 µg Qß-mC5acys (n = 8) o 50 µg VLP de Qß (n = 8), ambos diluidos en PBS de Dulbecco. También se administraron subcutáneamente dos inmunizaciones de refuerzo ya sea de 30 µg de Qß-mC5acys o 30 µg de VLP de Qß, en los días 15 y 24 posteriores a la inmunización inicial. Los ratones se inmunizaron intradérmicamente en la base de la cola dos veces en los días 35 y 57 después de la inmunización inicial con 100 µg de colágeno tipo II de bovino (MD Biosciences) emulsionado utilizando jeringas de vidrio con una proporción 1:1 en adyuvante completo de Freund (CFA por sus siglas en inglés) . El CFA se prepara a partir de Adyuvante Incompleto de Freund (Difco Laboratories) que contiene 5 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis termoinactivado cepa H37RA (Difco Laboratories). Luego los ratones se monitorizan para determinar la inducción y seguridad de la artritis inducida por colágeno mediante cuantificaciones diarias del grosor de la articulación frontal y posterior de los miembros y por la estimación diaria de las puntuaciones clínicas de las articulaciones. Se mide el grosor de la articulación utilizando calibradores de tensión constante. Se asignan las puntuaciones clínicas en base a la siguiente escala: Puntuación 0 - sin inflamación, articulación normal; Puntuación 1 - rubor leve y/o inflamación de los dígitos/patas; Puntuación 2 - rubor e inflamación, involucra toda la para/articulación; Puntuación 3 - Inflamación severa, deformación de las patas/articulaciones con anquilosis. Las observaciones experimentales continuaron hasta el día 15 después de la inyección final de colágeno/CFA (día 72 después de las inmunizaciones iniciales). La TABLA 13 muestra el aumento promedio en cuanto al grosor de la articulación en todos los miembros después de la inyección final de colágeno/CFA. El aumento promedio del grosor de la articulación es menor en la mayoría de los días para el grupo vacunado con Qß-mC5acys en comparación con el testigo Qß, teniendo esta diferencia un valor p < 0.1 (mediante una prueba T de Student de 2 colas) en los días 5, 7 y 10 posteriores a las inyecciones finales de colágeno/CFA.

La FIG. 2a muestra la suma de la puntuación clínica promedio en todas las extremidades después de la última inyección de colágeno/CFA. La suma de la puntuación clínica promedio es consistentemente menor en el grupo vacunado con Qß-mC5acys en comparación con el testigo de VLP de Qß, teniendo esta diferencia un valor p < 0.1 (mediante una prueba T de Student de dos colas) en los días 6, 8, 12 y 14 y un valor p < 0.05 (mediante una prueba T de Student de dos colas) en los días 7, 9 y 10 después de la inyección final de colágeno/CFA. Este resultado implica que la vacunación con Qß-mC5acys reduce la severidad de artritis inducida por colágeno en ratones en comparación con animales vacunados con el portador Qß .

EJEMPLO 27 La inmunización con VLP de Qß-mC5acys alivia la enfermedad en un modelo experimental de ratón de artritis inducida con coctel de anticuerpo monoclonal de anticolágeno Se inmunizan ratones hembra de 6 semanas de edad Balb/c (Charles River) subcutáneamente en los flancos ya sea con 50 µg Qß-mC5acys (n = 5) o 50 µg VLP de Qß (n = 5), todo se diluye en PBS de Dulbecco. También se administraron subcutáneamente dos inmunizaciones de refuerzo ya sea con 50 µg Qß-mC5a o 50 µg VLP de Qß en los días 21 y 35 después de la inmunización inicial. Los ratones se inmunizaron intravenosamente en el día 41 después de la inmunización inicial con 200 µl de coctel de anticuerpo monoclonal anticolágeno (MD Biosciences) seguido de una inyección intraperitoneal de 100 ul de solución LPS (MD Biosciences) un día después. Los ratones se monitorizan para la inducción y severidad de artritis inducida por anticuerpo monoclonal anticolágeno sustancialmente igual a como se describe para el EJEMPLO 26. Las observaciones experimentales continúan hasta el día 14 después de la inyección del coctel de anticuerpo monoclonal anticolágeno (día 55 después de las inmunizaciones iniciales). La FIG. 2b muestra la suma de la puntuación clínica promedio en todas las extremidades después de la inyección de coctel de anticuerpo monoclonal anticolágeno. La suma de la puntuación clínica promedio es consistentemente menor en el grupo vacunado con Qß-mC5acys en comparación con el control de VLP de Qß, teniendo esta diferencia un valor p < 0.1 (por una prueba T de Student de dos colas) en los días 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11 y 13 y un valor p < 0.05 (mediante una prueba T de Student de dos colas) en los días 12 y 14 después de la inyección final de colágeno/CFA. Este resultado implica que la vacunación con Qß-mC5acys reduce la severidad de la artritis en ratones inducida por anticuerpo monoclonal anticolágeno en comparación con los animales vacunados con el portador Qß . EJEMPLO 28 Inmunización con VLP de Qß-mC5acys y el modelo de cruza Fl de Nueva Zelanda Negro/Nueva Zelanda Blanco de lupus eritematoso sistémico los ratones NZB/NZW Fl desarrollan de manera espontánea una enfermedad autoinmunitaria con marcadas similitudes a lupus eritematoso sistémico humano (Andrews et al. J. Exp. Med., 148: 1198, 1978). Se inmunizan ratones NZB/NZW Fl hembras de 16 semanas de edad (Charles River) subcutáneamente en los flancos ya sea con 50 µ Qß-mC5acys (n = 20) o 50 µg VLP de Qß (n = 20), todos diluidos en PBS de Dulbecco. También se administran subcutáneamente dos inmunizaciones de refuerzo ya sea de 50 µ Qß-mC5a o 50 µg con VLP de Qß, en los días 14 y 28 posteriores a la inmunización inicial. Se administra en el día 58 una inmunización de refuerzo ya sea de 50 µ Qß-mC5a o 50 µg VLP de Qß en aluminio. La cantidad de proteina excretada en la orina (proteinuria) se cuantifica semanalmente a partir del 16 (día 0) hasta 29 semanas de edad (día 91) mediante un análisis colorimétrico utilizando tiras tornasol (Roche) . La proteinuria se cuantifica después semanalmente hasta las 52 semanas de edad y se mantienen las titulaciones de anticuerpos elevadas reforzando según se requiera. La FIG. 3 muestra el porcentaje de ratones cuya lectura de proteinuria alcanza 300 µg/ml. Estos datos muestran que el 30% de ratones en el grupo tratado con Qß tuvieron lectura de proteinuria mayor a 300 µg/ml a las 29 semanas de edad. En comparación, solo un ratón en el grupo tratado con QßC5acys tuvo una lectura mayor a 300 µg/ml a esta edad. Este ratón en particular tuvo una baja titulación de anticuerpos C5acys como se determina mediante ELISA. Este resultado implica quela vacunación con Qß-mC5acys reduce la incidencia o retarda la manifestación de proteinuria en el modelo experimental de lupus eritematoso sistémico en ratones Nueva Zelanda Negro/Nueva Zelanda Blanco Fl en comparación con animales vacunados con el portador Qß . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una composición caracterizada porque comprende: (a) una partícula similar a virus (VLP) con al menos un primer sitio de unión; y (b) al menos un antígeno con al menos un segundo sitio de unión, en donde al menos es un antígeno de la invención seleccionado a partir del grupo que comprende: a) CCR5 de la invención; b) C5a de la invención; c) CXCR4 de la invención; d) gastrina de la invención; e) CETP de la invención; y en donde (a) e (b) se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión.
2. La composición de conformidad con la reivindicación 1 caracterizada porque comprende: (a) una partícula similar a virus de un bacteriófago ARN con al menos dos primeros sitios de unión; (b) al menos un dominio PNt extracelular de CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión; en donde el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende: (i) un dominio Nta o un fragmento de dominio Nta, y (ii) un dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27 (SEQ ID NO: 56) o un fragmento de dominio Ntb que comprende aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO: 27, y en donde el primer o el segundo de al menos dos segundos sitios de unión comprende un grupo sulfhidrilo, y en donde el primero de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 5' del N-término de los aminoácidos 23 a 27 de SEQ ID NO:27; y en donde el segundo de al menos dos segundos sitios de unión está ubicado en dirección 3' de C-término del domino PNt extracelular de CCR5; y en donde la VLP del bacteriófago ARN y el dominio PNt extracelular de CCR5 está ligado mediante al menos una unión covalente no peptídica.
3. La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el dominio PNt extracelular CCR5 con al menos dos segundos sitios de unión no comprende otro grupo sulfhidrilo además de dos grupos sulfhidrilo comprendidos por el primer y segundo de al menos dos segundos sitios de unión.
4. La composición de conformidad con la reivindicación 2 ó 3, caracterizada porque el primero de al menos dos segundos sitios de unión corresponde al grupo sulfhidrilo del residuo cisteína de SEQ ID NO: 27.
5. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-4, caracterizada porque el dominio PNt extracelular de CCR5 comprende la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO:27.
6. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-5, que además comprende un ligador, caracterizada porque el ligador se fusiona al C-término del dominio PNt extracelular de CCR5 y en donde el ligador comprende el segundo de al menos dos segundos sitios de unión, en donde preferiblemente el ligador es cisteína o cisteína amidada .
7. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-6, caracterizada porque el primero y el segundo de al menos dos segundos sitios de unión se asocian con al menos dos primeros sitios de unión mediante al menos dos uniones covalentes no peptídicas.
8. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-7, caracterizada porque el bacteriófago ARN es Qß ó AP205.
9. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-8, caracterizada porque al menos dos primeros sitios de unión comprenden un grupo amino.
10. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el CCR5 de la invención es un dominio extracelular de CCR5, preferiblemente el dominio extracelular de CCR5 es un dominio PNt extracelular de CCR5, y además preferiblemente el dominio PNt comprende la secuencia aminoacídica de SEQ ID NO: 27.
11. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el CCR5 de la invención es un fragmento de dominio extracelular de CCR5, preferiblemente el fragmento de dominio extracelular de CCR5 es un fragmento ECL2A del dominio extracelular de CCR5, además preferiblemente, el fragmento ECL2 del dominio extracelular de CCR5 comprende una secuencia aminoacídica seleccionada a partir del grupo que comprende: (a) SEQ ID NO: 25; y (b) SEQ ID NO:26.
12. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la gastrina de la invención comprende, consiste esencialmente o alternativamente de una secuencia aminoacídica seleccionada a partir del grupo que comprende: a) SEQ ID NO:33 b) SEQ ID NO: 34; c) SEQ ID NO: 35; d) SEQ ID NO: 36; e) SEQ ID NO:37.
13. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el C5a de la invención es una proteína C5a, preferiblemente la C5a comprende, consiste esencialmente o alternativamente de una secuencia aminoacídica seleccionada a partir del grupo que comprende: (a) SEQ ID NO:45; y (b) un polipéptido derivado de SEQ ID NO: 45, en donde tres, preferiblemente dos, preferiblemente un aminoácido de SEQ ID NO: 45 ha sido modificado mediante inserción, supresión y/o sustitución.
14. La composición de conformidad con la reivindicación 1 o cualquiera de las reivindicaciones 10-13, caracterizada porque la VLP es de un bacteriófago ARN.
15. La composición de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el bacteriófago ARN es Qß, fr, GA ó AP205.
16. La composición de conformidad con la reivindicación 1 o cualquiera de las reivindicaciones 10-15, caracterizada porque la VLP con el primer sitio de unión se liga al antígeno de la invención con un segundo sitio de unión mediante al menos una unión covalente, en donde preferiblemente la unión covalente es una unión peptídica, en donde la VLP es de un bacteriófago ARN AP205.
17. La composición de conformidad con la reivindicación 1 o cualquiera de las reivindicaciones 10-15, caracterizada porque el primer sitio de unión está ligado al segundo sitio de unión mediante al menos una unión covalente, en donde preferiblemente la unión covalente es una unión no peptídica.
18. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el primer sitio de unión comprende, preferiblemente es un grupo amino de lisina.
19. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque el segundo sitio de unión comprende un grupo sulfhidrilo, preferiblemente un grupo sulfhidrilo de cisteína.
20. Una vacuna que comprende la composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19, caracterizada porque preferiblemente la vacuna está desprovista de un adyuvante.
21. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende : (a) la composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-19 ó la vacuna de la reivindicación 20: y (b) un portador farmacéuticamente aceptable.
22. Un método para producir la composición de conformidad con la reivindicación 1 ó cualquiera de las reivindicaciones 10-19, o la vacuna de la reivindicación 20, caracterizada porque comprende: (a) proporcionar una VLP con al menos un primer sitio de unión; (b) proporcionar al menos un antígeno de la invención con al menos un segundo sitio de unión; (c) ligar la VLP y al menos un antígeno de la invención para producir la composición, en donde al menos un antígeno la invención y la VLP se ligan a través de al menos un primer y al menos un segundo sitio de unión.
23. El uso de la composición de conformidad con las reivindicaciones 2-11, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento contra el SIDA.
24. El uso de la composición de conformidad con la reivindicación 12, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento contra cáncer gastrointestinal.
25. El uso de la composición de conformidad con la reivindicación 13, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento contra artritis.