LU86239A1 - METHOD OF DETECTING REAGENT AGENTS AND MEANS FOR IMPLEMENTING THE SAME - Google Patents
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Description
i -1 - Méthode de détection d'agents réactifs et moyens de mise en oeuvre de cette méthode.i -1 - Method for detecting reactive agents and means of implementing this method.
La présente invention a pour objet une nouvelle méthode de détection d'agents réactifs quelconques tels que des agents chimiques ou biolo -giques.The present invention relates to a new method for detecting any reactive agents such as chemical or biological agents.
La méthode selon l'invention est particulièrement utile pour la dé-5 tection et le dosage d'agents biologiques du type antigènes et anticorps, mais elle peut trouver des applications beaucoup plus générales, notamment pour la détection d'agents chimiques dans les domaines de l'industrie chimique et de la sécurité.The method according to the invention is particularly useful for the detection and determination of biological agents of the antigen and antibody type, but it can find much more general applications, in particular for the detection of chemical agents in the fields of chemical industry and security.
La méthode selon l'invention implique la fixation ("coating" ou 1 q "coatage") sur un support d'un réactif spécifique de (c'est-à-dire capable de s'associer à ) l'agent à détecter et la mise en évidence d'une association (une réaction) entre ledit réactif et l'agent à détecter, par un moyen particulièrement pratique à l'usage.The method according to the invention involves the fixing ("coating" or 1 q "coating") on a support of a specific reagent of (that is to say capable of associating with) the agent to be detected and the demonstration of an association (a reaction) between said reagent and the agent to be detected, by a means which is particularly practical for use.
Les techniques habituellement utilisées pour mettre en évidence par 15 exemple la réaction Antigène-Anticorps font appel à des conjugués flu -orescents (lecture au microscope ou au flow cytomètre), à un tra -ceur radioactif (lecture au compteur de particules) ou aux enzymes -2-The techniques usually used to demonstrate, for example, the Antigen-Antibody reaction, use fluorescent conjugates (reading under a microscope or a flow cytometer), a radioactive tracer (reading using a particle counter) or enzymes -2-
Les conjugués fluorescents demandent afin d'être visualisés un support cellulaire ou microsphère, de plus l'appréciation des résultats est qualitative, semi-quantitative (dilution).Fluorescent conjugates require, in order to be viewed, a cellular or microsphere support, moreover the appreciation of the results is qualitative, semi-quantitative (dilution).
Les traceurs radioactifs font appel comme leur nom l'indique à la 5 radioactivité et ce que cela comporte en inconvénients(déchets, précautions de manipulation, locaux adaptés).Radioactive tracers use radioactivity, as their name suggests, and what this has drawbacks (waste, handling precautions, suitable premises).
Les conjugués enzymatiques quant à eux , bien qu'étant très pratiques et en plein essor, demandent une étape supplémentaire (substrat).As for the enzyme conjugates, although they are very practical and booming, they require an additional step (substrate).
La technique idéale devrait rassembler tous les avantages des précé-10 dentes mais aucun des inconvénients.The ideal technique should combine all the advantages of the previous teeth, but none of the disadvantages.
De même les techniques de détection de certains agents chimiques impli quent le captage de l'agent concerné par un réactif approprié, après quoi un problème se pose pour la mise en évidence de l'agent chimique ainsi capté.Likewise, the techniques for detecting certain chemical agents involve the capture of the agent concerned with an appropriate reagent, after which a problem arises for the detection of the chemical agent thus captured.
15 La présente invention propose une technique de mise en évidence d'une association entre un agent à détecter et un réactif détecteur fixe/ sur un support, par des moyens magnétiques.The present invention provides a technique for demonstrating an association between an agent to be detected and a detector reagent fixed / on a support, by magnetic means.
La méthode de détection d'agents réactifs selon l'invention implique que : 20 au moins un agent détecteur capable de s'associer à au moins un agent • à détecter, est fixé sur un support ; le support ainsi préparé est mis en contact avec un milieu à analyser une association entre un agent à détecter et un agent détecteur est mis en évidence sur le support ; -3- et se caractérise par le fait qu'un agent magnétisable est associé à l'association de l'agent à détecter et l'agent détecteur fixé sur le support ou qu'un agent magnétisable préalablement associé à l'agent détecteur fixé sur le support est déplacé par l’association de 5 l'agent à détecter et l'agent détecteur, et que la présence, respectivement l'absence de l'agent magnétisable est détectés par un moyen approprié.The method of detecting reactive agents according to the invention implies that: at least one detecting agent capable of associating with at least one agent to be detected is fixed on a support; the support thus prepared is brought into contact with a medium to be analyzed an association between an agent to be detected and a detector agent is highlighted on the support; -3- and is characterized by the fact that a magnetizable agent is associated with the combination of the agent to be detected and the detector agent fixed on the support or that a magnetisable agent previously associated with the detector agent fixed on the support is moved by the combination of the agent to be detected and the detecting agent, and that the presence or absence, respectively, of the magnetizable agent is detected by an appropriate means.
Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention il est possible de disposer l'agent détecteur en piste(s) ou en 10 bande(s) sur le support, de manière à permettre plus facilement la réalisation en série de la méthode selon l'invention.According to a particularly advantageous embodiment of the invention, it is possible to arrange the detector agent in track (s) or in strip (s) on the support, so as to more easily allow the serial production of the method according to the invention.
Un mode de réalisation particulièrement préféré de la méthode selon l'invention prévoit l'utilisation d'un support qui est lui-même sous forme de bande, en particulier sous forme de bandes plastiques.A particularly preferred embodiment of the method according to the invention provides for the use of a support which is itself in the form of a strip, in particular in the form of plastic strips.
15 La mise eri oeuvre de la méthode selon l'invention peut procéder de diverses façons.The implementation of the method according to the invention can proceed in various ways.
Il est par exemple possible de mettre différentes portions d'une bande munie d'un faême) agent détecteur en contact avec différents milieux à analyser et de réaliser ainsi une méthode avantageuse d'a-20 nalyses en série.It is for example possible to put different portions of a strip provided with a false detector agent in contact with different media to be analyzed and thus to carry out an advantageous method of series analyzes.
Il est d'autre part également possible, par exemple, d'utiliser une bande sur laquelle sont fixés, de manière séquentielle, différents agents détecteurs, ce qui permet de réaliser une série de tests différents sur un même milieu à analyser.It is also also possible, for example, to use a strip on which are fixed, sequentially, different detector agents, which makes it possible to carry out a series of different tests on the same medium to be analyzed.
25 Selon une autre particularité préférée de l'invention, la présence respectivement l'absence de l'agent magnétisable, consécutive de l'association de l'agent à détecter avec l'agent détecteur fixé sur le support peut être mise en évidence par magnétisation du support -4- réactionnel et par lecture au moyen d'un lecteur approprié.According to another preferred feature of the invention, the presence respectively the absence of the magnetizable agent, consecutive to the association of the agent to be detected with the detector agent fixed on the support can be demonstrated by magnetization of the reaction medium and by reading by means of an appropriate reader.
Dans le cas d'une bande plastique,il est notamment possible, de * manière particulièrement avantageuse, de mettre en oeuvre des sys tèmes de magnétisation ("enregistrement") et de lecture classiques 5 du type "tape recorder" audio ou vidéo.In the case of a plastic strip, it is in particular possible, in a particularly advantageous manner, to use conventional magnetization ("recording") and playback systems 5 of the "tape recorder" audio or video type.
Selon l'une alternative de la méthode de l'invention, on met en évidence l'absence de l'agent magnétisable consécutive à l'association de l'agent à détecter et de l'agent détecteur.According to one alternative of the method of the invention, the absence of the magnetizable agent is demonstrated following the association of the agent to be detected and the detector agent.
Cette alternative peut par exemple résulter de l'utilisation d'un 10 support sur lequel est fixé un agent détecteur auquel est associé un agent magnétisable qui présente une affinité vis-à-vis de l'agent détecteur plus faible que celle de l'agent à détecter vis-à-vis de l'agent détecteur.This alternative can for example result from the use of a support on which is fixed a detector agent with which is associated a magnetizable agent which has a lower affinity with respect to the detector agent than that of the agent to be detected vis-à-vis the detector agent.
La présence d'agent à détecter dans le milieu analysé impliquera 15 alors le déplacement de l'agent magnétisable par l'agent à détecter, ce qui se manifestera à la "lecture" par une absence de magnétisation à cet endroit.The presence of agent to be detected in the medium analyzed will then involve the displacement of the magnetizable agent by the agent to be detected, which will be manifested on "reading" by an absence of magnetization at this location.
Un mode de réalisation particulièrement préféré de la méthode selon l'invention concerne la détection des antigènes respectivement anti-20 corps. Pour ce faire, on utilise un support sur lequel sont fixés en tant qu'agents détecteurs, des antigènes respectivement des anticorps tandis que les agents réactifs à détecter consistent en les anticorps respectivement les antigènes spécifiques correspondants.A particularly preferred embodiment of the method according to the invention relates to the detection of the respective anti-body antigens. To do this, a support is used on which are fixed as detector agents, antigens respectively antibodies while the reactive agents to be detected consist of antibodies respectively the corresponding specific antigens.
Dans ce mode de réalisation de l'invention, il peut de manière 25 préférée être prévu de "révéler" (mettre en évidence) l'association entre l'antigène (respectivement l'anticorps) fixé sur le support et l'anticorps (respectivement l'antigène) à détecter, par réaction avec un second anticorps dans lequel est incorporé ou auquel est conjugué un agent magnétisable.In this embodiment of the invention, provision may preferably be made to "reveal" (highlight) the association between the antigen (respectively the antibody) fixed on the support and the antibody (respectively the antigen) to be detected, by reaction with a second antibody in which is incorporated or to which a magnetizable agent is conjugated.
-5--5-
Dans ce mode de réalisation, on peut donc par exemple coater sur une bande un antigène (ou anticorps), faire réagir cette bande avec l’anticorps (ou l'antigène) correspondant et révéler cette réaction à l'aide d'un second anticorps dans lequel on a incorporé des particules 5 magnétiques ou conjugué par toute autre méthode à des particules magnétisables. La lecture se fait après enregistrement (magnétisation) à une fréquence donnée, sur un lecteur de bande appelé couramment "tape" et de visualiser sur oscilloscope.La quantité de particules magnétisées est proportionnelle à la quantité de complexes Antigène/ 10 Anticorps, donc quantifiable.In this embodiment, it is therefore possible, for example, to coate an antigen (or antibody) on a band, to react this band with the corresponding antibody (or antigen) and to reveal this reaction using a second antibody. in which magnetic particles have been incorporated or conjugated by any other method to magnetizable particles. Reading is done after recording (magnetization) at a given frequency, on a tape reader commonly called "tape" and visualizing on an oscilloscope. The amount of magnetized particles is proportional to the amount of Antigen / 10 Antibody complexes, therefore quantifiable.
L'invention concerne également les moyens à mettre en oeuvre pour la réalisation de la méthode selon 1'invention.Ainsi, l'invention concerne notamment un support coaté au moyen d'antigènes respectivement d'anticorps caractérisé par le fait que le support se présente sous la 15 forme d'une bande plastique.L'invention a donc également pour objet toute bande plastique munie à sa surface d'une couche (coating) d'antigènes, respectivement d'anticorps.The invention also relates to the means to be used for carrying out the method according to the invention. Thus, the invention relates in particular to a support coated with antigens or antibodies respectively, characterized in that the support is present in the form of a plastic strip. The invention therefore also relates to any plastic strip provided on its surface with a layer (coating) of antigens, respectively of antibodies.
Cette bande plastique peut selon une réalisation préférée de l'invention notamment être constituée de plages alternativement munies d'une 20 couche magnétisable et d'une couche d'antigènes respectivement anticorps .This plastic strip can, according to a preferred embodiment of the invention, in particular consist of pads alternately provided with a magnetizable layer and with a layer of antigens and respectively antibodies.
Une telle réalisation permet le codage de la bande en fonction des tests effectués.Such an embodiment allows the coding of the band as a function of the tests carried out.
La bande plastique peut également selon une autre réalisation préfé-25 rée de l'invention être constituée de plages successives munies d'une couche de différents antigènes, respectivement anticorps, ce qui permet au moyen d'une "bande d'analyse" d'effectuer différents tests sur un même milieu à analyser.The plastic strip can also according to another preferred embodiment of the invention consist of successive areas provided with a layer of different antigens, respectively antibodies, which allows by means of an "analysis strip" perform different tests on the same medium to be analyzed.
L'invention a d'autre part également pour objet des anticorps dans -6- lesquels sont incorporés ou auxquels sont conjugués des agents magnétisables, sous une forme destinée à la méthode selon l'invention.The invention also also relates to antibodies in which -6- which are incorporated or to which are conjugated magnetizable agents, in a form intended for the method according to the invention.
Sans déchets radioactifs, ni étape supplémentaire, la méthode selon l'invention est quantitative et permet une lecture intégrée, c'est-5 à-dire qu'une surface est balayée par une cellule de lecture donnant un résultat final dépendant de la vitesse de passage et de la longueur de la bande support réactionnel, permettant une meilleure descrimina-tion positif/négatif (seuil de sensibilité très abaissé). De plus, toutes les variantes basées sur l'association d'agents réactifs 10 (réactions compétitives, sandwich, reverse, etc...) sont applicables. De même qu'une bande peut être coatée par des substances différentes pour le screening en sérologie, ou en application directe en bactérie.Without radioactive waste, nor additional step, the method according to the invention is quantitative and allows an integrated reading, that is to say that a surface is scanned by a reading cell giving a final result depending on the speed of passage and length of the reaction support strip, allowing better positive / negative descrimina-tion (very low sensitivity threshold). In addition, all variants based on the combination of reactive agents 10 (competitive reactions, sandwich, reverse, etc.) are applicable. Similarly, a strip can be coated with different substances for screening in serology, or in direct application in bacteria.
Les techniques de coatage décrites par Engvall et modifiées par Voiler, consistant à mettre l'antigène en tampon basique et laisser 15 réagir cette solution avec le support solide sur lequel l'antigène va s'adsorber préférentiellement par sa partie hydrophobe (COOH) peuvent s'appliquer à tout support plastique (PVC, polystirène, nylon ...) Singer et coll. ont décrit en 1961 une méthode de couplage de la ferritine à un antigène ou anticorps pour une application au 20 microscope -électronique (méthode de densité électronique). Une application de cette méthode consiste à coupler des particules magnétiques à un anticorps monoclonal, et de séparer par aimantation les complexes Antigène/Anticorps formés.The coating techniques described by Engvall and modified by Voiler, consisting in putting the antigen in basic buffer and allowing this solution to react with the solid support on which the antigen will preferentially adsorb by its hydrophobic part (COOH) can '' apply to any plastic support (PVC, polystyrene, nylon ...) Singer et al. described in 1961 a method of coupling ferritin to an antigen or antibody for application to the electron microscope (electron density method). One application of this method consists in coupling magnetic particles to a monoclonal antibody, and in separating by magnetization the Antigen / Antibody complexes formed.
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