KR940000528B1 - Method of improving taste of stevioside - Google Patents

Abstract

The stevioside taste quality is improved by reacting stevioside with sugar transferred enzyme in reaction system for mixing water with hydrophobic organic solvent. The organic solvent is alcohol systematic solvent which is not mixed with water, halogenized hydrocarbon solvent, petroleum solvent, hydrocarbon solvent. The mixing water is used in the ratio of 1-10 % (V/V). In the enzyme, alpha-transferred inducing enzyme or beta-transferred inducing enzyme is used. As sugar donor, sugars having alpha-bond like starch or starch hydrolysate, and sugars having beta-bond like cellulose or cellulose hydrolysate are used. As enzyme, separated protein enzyme or immobilized enzyme is used.

Description

스테비오사이드의 미질 개선법Stevioside Improvement

제1도는 실시예 1의 반응 전 스테비오사이드의 HPLC 분석 결과이고,1 is the result of HPLC analysis of stevioside before the reaction of Example 1,

제2도는 실시예 1의 반응 2시간 경과 후의 스테비오사이드의 HPLC 분석 결과이다.2 is a result of HPLC analysis of stevioside after 2 hours of reaction of Example 1. FIG.

본 발명은 스테비오사이드의 미질 개선 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 물과 소수성 유기용매를 혼합한 반응계에서 스테비오사이드를 효소반응에 의하여 당전이 스테비오사이드로 전환하여 스테비오사이드의 미질을 개선하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for improving the quality of stevioside, and more particularly, to a method for improving the quality of stevioside by converting stevioside into stevioside by enzymatic reaction in a reaction system in which water and a hydrophobic organic solvent are mixed. will be.

스테비아 감미료는 남미 파라과이가 원산지인 국화과 다년생 초본인 스테비아 레바우디아나 베르토니(Stevia rebaudiana BERTONI)에 함유되어 있는 감미성분으로 스테비오사이드는 주로 레바우디오사이드A,B,C,D,E와 루보소사이드, 이소스테비올 등으로 되어있으며 이들은 이소스테비올 골격에 어글리콘(aglycone)의 글루코사이드 배당체로 결합되어 있다.Stevia sweetener is a sweetening ingredient contained in Stevia rebaudiana BERTONI, a perennial herb native to South America Paraguay. Said, isosteviol, and the like, which are bound to the isostebiol skeleton as an aglycone glucoside glycoside.

스테비오사이드는 열 및 pH에 안정한 감미 물질로 감미도는 설탕의 200~300배, 칼로리는 1/300인 천연 추출 감미료로 최근 사카린과 그의 염, 사이클라메이트와 같은 인공 감미료의 사용제한이 강화되고 있는 시점에서 향후 사용량의 급증이 기대되어지고 있는 건강 감미료이다. 그런데 이 감미료의 주요성분인 스테비오사이드는 설탕에 비하여 감미도는 뛰어나지만 뒷맛이 오래남으며 단맛이외에 쓴맛, 불쾌감 등이 있는 단점을 가지고 있다. 그로 인하여 사용량 및 용도의 한계가 발생하는 문제점이 있어 스테비오사이드의 비질을 개선하려는 필요를 느끼게 되었다.Stevioside is a sweetener that is stable to heat and pH. It is a natural extract sweetener with 200 ~ 300 times the sweetness of sugar and 1/300 calories. Recently, the use of artificial sweeteners such as saccharin, its salts and cyclate has been strengthened. It is a healthy sweetener that is expected to increase rapidly in the future. However, stevioside, which is the main ingredient of this sweetener, has a sweetness superior to sugar, but has a long aftertaste, and has a disadvantage of bitterness and discomfort besides sweetness. As a result, there is a problem in that the amount of usage and usage is limited, so that the need to improve the quality of steviosides is felt.

종래 스테비오사이드의 감미질 개선 방법은 (1) 설탕, 포도당, 과당등과 같은 천연 당질 감미료를 1종 또는 그 이상을 첨가하는 방법, (2) 아미노산 또는 아미노산의 염과 배합하는 방법, (3) 싸이클로덱스트린과 같이 포접능을 갖는 환형 당질에 물리적으로 결합시키는 방법(일본공개특허공부 소60-98957)등이 있다. 그러나 이상의 방법은 첨가물을 상당히 많은량 첨가하여야 하며 결국 스테비오사이드가 저칼로리 감미료라는 특징을 잃어버리는 단점이 있다.Conventional methods for improving sweetening of stevioside include (1) adding one or more natural sugar sweeteners such as sugar, glucose, fructose, and the like, (2) combining with amino acids or salts of amino acids, and (3) cyclo And a method of physically binding to a cyclic saccharide having an inclusion ability such as dextrin (Japanese Patent Application Laid-Open No. 60-98957). However, the above method requires the addition of a considerable amount of additives, which in turn loses the character of stevioside as a low calorie sweetener.

한편, 스테비아 잎에 함유되어 있는 스테비오사이드의 동족체(homolog)중 높은 감미도와 우수한 감미질을 갖는 레바우디오사이드 A는 스테비오사이드의 화학구조와 비교하여 보면 레바우디오사이드 A는 기본골격구조인 이소스테미올의 13번 탄소에 포도당이 1분자 더 결합되어 있어 이것이 두 물질의 감미특성을 다르게 하는 원인으로 규명되었다. 따라서 스테비오사이드로부터 레바우디오사이드 A혹은 이와 유사한 구조의 감미료를 제조하여 감미질을 개선하려는 연구가 많이 수행되어 왔다(일본 공개특허공보 소59-17996). 이들 연구의 촛점은 포도당 또는 기타의 당을 전이할수 있는 효소를 이용하여 수용액상에서 스테비오사이드에 당을 전이하는 것이다(일본공개특허공부 소54-5070, 소58-94367). 여기에 사용되는 효소는 α-전이를 일으키는 싸이클로댁스트린 글루카노트랜스퍼라제(cyclodextrin glucanotransferase, 이하 CGTace), α-글루코아밀라제(α-glucoamylase), β-전이를 일으키는 셀룰라제(cellulase), 라미나리나제(laminarinase)등과 같은 것으로 생화학적인 방법으로 스테비오사이드의 감미질을 개선하였다. 그러나 이들 방법은 모두 수용액상의 효소반응으로 반응속도가 늦어 긴 반응시간이 요구되며 또한 생성물의 농도가 낮은 문제점이 있다.Meanwhile, Rebaudioside A, which has high sweetness and excellent sweetness among the homologs of Stevioside contained in Stevia leaves, is compared to the chemical structure of Stevioside. One more molecule of glucose was added to the thirteenth carbon of myol, which was identified as the cause of the different sweetness of the two substances. Therefore, many studies have been conducted to improve sweetness by preparing a sweetener having a rebaudioside A or a similar structure from stevioside (Japanese Patent Laid-Open No. 59-17996). The focus of these studies is to transfer sugars to steviosides in aqueous solutions using enzymes capable of transferring glucose or other sugars (Japanese Patent Application Laid-Open No. 54-5070, 58-434367). Enzymes used here include cyclodextrin glucanotransferase (CGTace), α-glucoamylase, α-glucoamylase, and α-transduced cellulase and laminari. Such as laminarinase improved the sweetening of steviosides by biochemical methods. However, all these methods require a long reaction time due to the slow reaction rate due to the enzyme reaction in aqueous solution, and also has a problem of low concentration of the product.

본 발명자들은 상기의 문제점을 해결하기 위하여, 연구, 검토한 결과 소수성 유기용매계를 사용하면 반응속도가 빠르고 고농도의 생성물을 얻을 수 있다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다. 유기용매를 이용한 효소반응은 앞에서 언급한 장점이외에 (1) 열역학적 평형이 가수분해에서 합성쪽으로 이동되며, (2) 물에 의한 부반응이 억제되며, (3) 비등점이 낮은 유기용매를 사용하면 생성물의 회수가 용이하고, (4) 효소의 열안정성이 증대되며, (5) 미생물에 의한 오염이 방지되는 등의 여러가지 장점이 있다.In order to solve the above problems, the present inventors have found that the use of a hydrophobic organic solvent system results in a fast reaction rate and a high concentration of the product. In addition to the above-mentioned advantages, enzymatic reactions using organic solvents (1) thermodynamic equilibrium shift from hydrolysis to synthesis, (2) side reactions by water are inhibited, and (3) organic solvents with low boiling points are used. There are various advantages such as easy recovery, (4) increased heat stability of the enzyme, and (5) contamination by microorganisms.

본 발명은 소량의 물 또는 소수성 유기용매 중에 스테비오사이드와 당의 공여체를 녹이거나 분산시킨 후 당전이 효소 또는 가수분해 효소를 사용하여 당전이 스테비오사이드를 제조하는 것을 특징으로 한다. 이때 사용되는 유기용매는 소수성 유기용매로 물과 섞이지 않는 것이면 어떤 것이던지 사용이 가능하다. 구체적으로 이소아밀 알콜, 노말-옥탄올 등과 같은 탄소수 5개 이상의 알콜계 용매, 클로로포름, 사염화탄소, 1,2 -디클로로 에탄, 1,1,2,2-테트라클로로에탄, 트리클로로에틸렌, 클로로벤젠, 오르쏘- 디클로로벤젠 등의 할로겐화 탄화수소 용매, 에틸 에테르, 디에틸 에테르, 경질 벤젠, 세정용 벤젠, 리그로인 등의 석유 유래의 용매, 에틸 벤젠, 노말-헥산, 노말-펜탄, 싸이클로펜탄, 2-메틸 부탄, 메틸 싸이클로 부탄, 싸이클로헥산, 2-메틸 펜탄, 2,2-디메틸 부탄, 2,3-디메틸 부탄, 메틸 싸이클로 헥산, 노난, 데칸, 벤젠, 톨루엔, 오르쏘-크실렌 , 메타-크실렌, 파라-크실렌, 초산 에틸, 에틸 벤젠 등의 탄화 수소계 용매 등이 사용될 수 있다. 반응에 사용되는 효소는 α-전이를 일으키는 바실리스 속(Bacillus sp.), 클렙젤라 속(Klebsiella sp.)기원의 싸이클로덱스트린 글루카노트랜스퍼라제(CGTase), 페니실륨 속(Penicillium sp.), 싸카로마이쎄스 속(Sacharomyces sp.) 기원의 알파-글루코시다제(α-glucosidase), 아스퍼어질러스 속(Aspergillus sp.) 바실러스 속(B acillus sp.) 기원의 알파-아밀라제(α-amylase) 등과 같은 것과 β-전이를 일으키는 아스퍼어질러스 속(Aspergillus sp.), 트리코더마 속(Tricoderma sp.), 페니실륨 속(Penicillium sp.) 기원의 셀룰라제(cellulase), 아스퍼어질러스 속(Aspergillus sp.) 기원의 자일로시다제(xylosidase), 페니실륨 속(Penicillium sp.) 기원의 라미나리나제(laminarinase) 등과 같은 것이 사용될 수 있으며, 이들은 물과 유기용매에 안정한 불용성 담체에 고정화한 것을 사용하면 효소를 여러번 사용할 수 있고 반응물로부터 효소의 회수가 용이하게 되는 장점도 있다.The present invention is characterized by preparing a sugar transition stevioside using a sugar transfer enzyme or a hydrolase after dissolving or dispersing stevioside and a sugar donor in a small amount of water or a hydrophobic organic solvent. The organic solvent used may be any hydrophobic organic solvent as long as it is not mixed with water. Specifically, an alcohol solvent having 5 or more carbon atoms such as isoamyl alcohol, normal-octanol, chloroform, carbon tetrachloride, 1,2-dichloroethane, 1,1,2,2-tetrachloroethane, trichloroethylene, chlorobenzene, Halogenated hydrocarbon solvents such as ortho-dichlorobenzene, solvents derived from petroleum such as ethyl ether, diethyl ether, light benzene, benzene for cleaning, ligroin, ethyl benzene, normal-hexane, normal-pentane, cyclopentane, 2-methyl Butane, methyl cyclobutane, cyclohexane, 2-methyl pentane, 2,2-dimethyl butane, 2,3-dimethyl butane, methyl cyclohexane, nonane, decane, benzene, toluene, ortho-xylene, meta-xylene, para Hydrocarbon solvents such as xylene, ethyl acetate, ethyl benzene and the like can be used. The enzymes used in the reaction are Cyclodextrin Glucanotransferase (CGTase), Penicillium sp., Sakaro, which are of the genus Bacillus sp., Klebsiella sp. Alpha-glucosidase of the genus Sacharomyces sp., Alpha-amylase of the genus B acillus sp., Aspergillus sp. The same and cellulase from the genus Aspergillus sp., Trichoderma sp., Penicillium sp., Causing the β-transition, Aspergillus sp. .) Xylosidase of origin, laminarinase of Penicillium sp., Etc. may be used, and these may be immobilized on insoluble carriers that are stable in water and organic solvents. Enzymes can be used many times and reactants Since there is the advantage that the recovery of the enzyme easier.

본 발명에서 기질로 사용되는 스테비오사이드는 고도로 정제한 제품에 한정하지 않고 레바우디오사이드 A,B,C,E, 루보소사이드등과 같은 스테비오사이드의 동족체들이 들어 있는 혼합물이어도 좋고, 기타의 불순물이 섞여 있는 조제품의 경우에도 문제가 있다. 또다른 기질인 당의 공여체중 α-전이를 위한 공여체로는 전분, 전분의 가수분해물(D.E.=10~70)등과 같은 α-글루코실 당화합물을 사용하며, β-전이 효소를 사용할 때는 셀룰로스, 셀룰로스 가수분해물, 자일란 등과 같은 β-당화합물이 기질로 쓰인다.The stevioside used as the substrate in the present invention is not limited to a highly purified product and may be a mixture containing homologues of steviosides such as rebaudioside A, B, C, E, and rubososide, and other impurities. This mixed preparation is also problematic. Another donor for α-transition in the donor of sugar, which is another substrate, uses α-glucosyl sugar compounds such as starch and starch hydrolyzate (DE = 10 ~ 70), and cellulose and cellulose when β-transferase is used. Β-sugar compounds such as hydrolyzates and xylans are used as substrates.

반응에 사용하는 스테비오사이드의 농도는 약 0.1~30%(w/w), 당 공여체의 농도는 약 0.1~40%(w/w)가 좋으며 두 기질의 농도비는 효소반응의 속도와 체종 제품의 중량대비 감미도에 영향을 주게되므로 실제 농도비는 중량비로 약 50~400배 범위가 좋으며 바람직하기로는 1~10배가 좋다.The concentration of stevioside used in the reaction is about 0.1-30% (w / w), the concentration of sugar donor is about 0.1-40% (w / w). Since it affects the sweetness to weight, the actual concentration ratio is good in the range of about 50 to 400 times by weight, preferably 1 to 10 times.

당 공여체의 농도가 스테비오사이드에 비햐하여 100배 이상되면 반응속도가 스테비오사이드의 종도에 의존적이 되며, 최종제품은 설탕에 비하여 낮은 감미도를 나타낸다. 이것은 설탕보다 감미도가 낮은 당류로 스테비오사이드의 감미도를 희석하는 것과 유사한 것이다. 반면에 당 공여체의 농도가 스테비오사이드 농도에 비하여 50배 이하가 되면 반응속도는 당 공여체와 효소가 반응하는 속도에 의존적이 되며 감미도는 설탕에 비하여 높게 나타난다.If the concentration of sugar donor is more than 100 times that of stevioside, the reaction rate is dependent on the stevioside species, and the final product has a lower sweetness than the sugar. This is analogous to diluting the sweetness of steviosides with sugars that are less sweet than sugars. On the other hand, when the concentration of sugar donor is 50 times or less than the concentration of stevioside, the reaction rate is dependent on the rate at which the sugar donor and enzyme react, and the sweetness is higher than that of sugar.

반응에서 물의 사용비율은 1%(v/v) 내지 10%(v/v)가 적당하며 1% 미만의 경우에는 효소의 3차 구조가 변하여 실활이 되기 쉬우며 10%를 초과하면 얻어지는 생성물의 농도가 낮아지게 된다.The ratio of water used in the reaction is 1% (v / v) to 10% (v / v), and in case of less than 1%, the tertiary structure of the enzyme is easily changed to be inactivated. The concentration will be lowered.

수용액 상태에서의 반응 최적 pH는 효소를 얻는 기원에 따라 다르게 되며 보통 pH 3~10범위로 되어 있다. 본 발명에서도 반응액의 pH는 수용액 상태와 흡사한 범위로 하는 것이 좋으며 바람직하기로는 pH 5~8범위가 좋다. 그런데, 본 발명은 유기용매를 사용하기 때문에 일반적인 유리전극으로는 용액의 pH를 정확하게 측정할 수 없고, 유기용매를 전극(스위스 인골드사 제품)을 사용하여야만 반응계에서의 pH를 정확하게 측정할 수 있다. 반응온도는 20~70℃가 적당하며, 바람직하기로는 40~60℃가 좋다.The optimum pH of the reaction in aqueous state varies depending on the origin of the enzyme and is usually in the range of pH 3-10. In the present invention, the pH of the reaction solution is preferably in a range similar to that of the aqueous solution, and preferably in the range of pH 5-8. However, in the present invention, since the organic solvent is used, the pH of the solution cannot be accurately measured with a common glass electrode, and the pH in the reaction system can be accurately measured only by using the organic solvent as an electrode (Swiss Ingold). 20-70 degreeC is suitable and reaction temperature is 40-60 degreeC preferably.

예를들면 반응은 소량의 물에 스테비오사이드와 당 공여체를 가열하여 용해한 후 소수성 유기용매 중에 교반하면서 기질용액을 분산시킨다. 이어서 여기에 효소 용액 또는 고정화 효소를 첨가하여 특정의 pH와 온도 조건하에서 교반함으로써 행하여 진다 . 기질은 반응시작 전에 용해하지 않고 단순히 분산된 형태로 공급하면 반응이 진행되면서 용해되므로 반드시 용액상태의 것을 사용할 필요는 없다.For example, the reaction dissolves the stevioside and the sugar donor in a small amount of water, and then disperses the substrate solution with stirring in a hydrophobic organic solvent. Subsequently, this is performed by adding an enzyme solution or an immobilized enzyme and stirring under specific pH and temperature conditions. It is not necessary to use a solution because the substrate dissolves as the reaction proceeds if the substrate is supplied in a dispersed form instead of dissolving before the start of the reaction.

반응후 교반을 정지하면 저절로 유기용매층과 수용액층이 서로 분리되어 수용액층을 회수함으로써 반응물을 함유하는 제품을 얻을 수 있게 된다. 이렇게 얻는 반응액은 필요에 따라 가열하여 효소를 실활시킨 후 스타렌과 디비닐벤젠의 중합흡착수지[예로써 다이아이온 HP-20(일본 미쓰비시케미칼사 제품), XAD-7(미국 롬 앤 하스사 제품)등] 및 이온교환수지(예, H형태의 강산성 양이온 교환수지의 OH형태의 약염기성 음이온 교환수지)를 사용하여 정제한 후 농축하면 시럽 형태의 감미료를 얻을 수 있으며, 건조, 분말화하면 분말상의 제품을 얻을 수 있다. 당전이 제품의 농축, 건조 방법으로는 공지의 방법, 예로써 진공농축, 막농축, 감압건조, 분무건조 등의 각종 방법을 자유롭게 선택하여 이용할 수 있다.When the stirring is stopped after the reaction, the organic solvent layer and the aqueous solution layer are separated from each other and the aqueous solution layer is recovered to obtain a product containing the reactant. The reaction solution thus obtained is heated as necessary to deactivate the enzyme, followed by polymerization adsorption resins of styrene and divinylbenzene [for example, DIION HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical, Japan), XAD-7 (Rom & Haas, USA). Product), etc.] and ion exchange resins (e.g., OH type weakly basic anion exchange resins of H type strong acid cation exchange resins), and concentrated to obtain syrup-type sweeteners. A powdery product can be obtained. As the method for concentrating and drying the sugar transition product, various methods such as vacuum concentration, membrane concentration, reduced pressure drying and spray drying can be freely selected and used.

이처럼 얻은 제품의 감미도는 측정조건 및 당전이 스테비오사이드의 제품에 따라 차이가 있지만 일반적으로 반응에 사용한 스테비오사이드의 고형분 중량 기준으로 볼때 감미도는 약간 낮게 나타나며 감미질은 쓴맛, 불쾌감, 후미 등이 거의 없고 설탕에 가까운 맛을 나타내어 극히 미질이 우수하게 개량 되었음을 알 수 있다.Although the sweetness of the product obtained differs depending on the measurement conditions and the former stevioside products, the sweetness is generally slightly lower based on the solids weight of stevioside used in the reaction, and the sweetness has little bitterness, unpleasant feeling, and no aftertaste. It can be seen that the taste was improved to extremely good taste.

이하 실시예로서 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples.

[실시예 1]Example 1

자켓(jacket)과 배플(battle plate)이 부착된 반응조에 교반기를 설치하고 노말 -옥탄 290ml, 스테비오사이드 10g, 덱스티린(D.E≒60) 20g을 넣어 600~700rpm으로 교반하여 분산시킨다. 이때 자켓으로 온수를 순환시켜 반응조의 온도를 60℃로 유지한다.Agitator was installed in a reactor equipped with a jacket and a baffle plate, and 290 ml of normal-octane, 10 g of stevioside, and 20 g of dextrin (D.E ≒ 60) were added and stirred at 600 to 700 rpm. At this time, the hot water is circulated through the jacket to maintain the temperature of the reactor at 60 ℃.

한편 바실러스 속(Bacillus sp.) 유래의 CGTase 0.3g을 인산완충용액(pH 6.0 , 0.2M) 10ml에 용해시켜서 상기의 반응조에 첨가하여 교반하면서 반응시킨다. 경시적으로 감소되는 스테비오사이드와 생성되는 당전이 스테비오사이드의 양을 고속 액체크로마토그래피(HPLC, 컬럼 : Alltech Econospher NM₂, 감지기 : UV감지기)로 분석, 정량한다. 또 효소의 활성은 가용성 전분을 기질로하여 요오드 발색으로 행한다.Meanwhile, 0.3 g of CGTase derived from Bacillus sp. Is dissolved in 10 ml of a phosphate buffer solution (pH 6.0, 0.2 M), and added to the reaction tank to react with stirring. Over time, the amount of stevioside and the resulting sugar stevioside are analyzed and quantified by high-performance liquid chromatography (HPLC, column: Alltech Econospher NM ₂ , detector: UV detector). In addition, enzyme activity is performed by iodine coloration using soluble starch as a substrate.

제1도는 반응전 스테비오사이드의 HPLC 분석 결과이고, 제2도는 반응 2시간 경과 후의 분석결과이다.FIG. 1 shows the result of HPLC analysis of stevioside before reaction, and FIG. 2 shows the result of analysis after 2 hours of reaction.

다음 표 1은 수용액상에서의 반응과 유기용매상에서의 반응 중 스테비오사이드의 함량 변화와 효소의 잔존활성을 나타낸 것이다.Table 1 shows the stevioside content change and the remaining activity of the enzyme during the reaction in the aqueous phase and the reaction in the organic solvent.

[표 1]TABLE 1

[실시예 2]Example 2

실시예 1과 동일한 장치에 헥산 280ml, 스테비오사이드 10g, 썰로비오스 20g을 넣어 동일하게 분산시킨다. 이때의 반응온도는 40℃로 유지한다. 효소는 아스퍼어질러스 속(Aspergillus sp.) 유래의 셀룰라제 0.2g을 초산 완충용액(pH 5.0, 0.2M) 20ml에 용해시켜 동일하게 반응시킨 후 분석을 행한다. 셀룰라제의 활성 측정은 여과지를 기질로 하여 가수분해로 생성된 포도당을 정량하여 행한다.280 ml of hexane, 10 g of stevioside, and 20 g of zalobiose were added to the same apparatus as in Example 1 and dispersed in the same apparatus. The reaction temperature at this time is maintained at 40 ℃. Enzymes are analyzed by dissolving 0.2 g of cellulase derived from Aspergillus sp. In 20 ml of acetic acid buffer (pH 5.0, 0.2 M) and reacting the same. The activity measurement of cellulase is carried out by quantifying glucose produced by hydrolysis using a filter paper as a substrate.

다음 표 2는 수용액상에서의 반응과 유기용매상에서의 반응 중 스테비오사이드의 함량 변화의 효소의 잔존활성을 나타낸 것이다.Table 2 shows the remaining activity of the enzyme in the change of the content of stevioside in the reaction in the aqueous phase and the reaction in the organic solvent.

[표 2]TABLE 2

[실시예 3]Example 3

CGTase를 카이틴에 통상의 방법에 고정화 시킨(Biotechnol. Bioeng. Vol. 29 ,352-354페이지) 고정화효소 2g을 단백질 효소 대신에 투입하였다. 다른 조건은 실시예 1과 동일하게 하였다. 그 결과는 실시예 1과 대동소이하였다.2 g of immobilized enzyme immobilized on chitin by CGTase in a conventional manner (Biotechnol. Bioeng. Vol. 29, pages 352-354) was added in place of the protein enzyme. Other conditions were the same as in Example 1. The result was about the same as in Example 1.

Claims (5)

물과 소수성 유기용매를 혼합한 반응계에서 스테비오사이드를 효소반응에 의하여 당전이 스테비오사이드로 전환하는 것을 특징으로 하는 스테비오사이드의 미질 개선 방법.A stevioside microporous improvement method comprising converting stevioside to stevioside by an enzymatic reaction in a reaction system in which water and a hydrophobic organic solvent are mixed. 제1항에 있어서, 유기용매가 물과 섞이지 않는 알콜계 용매, 할로겐화 탄화수소 용매, 석유 유래의 용매, 탄화수소 용매인 것을 특징으로 하는 스테비오사이드의 미질 개선 방법.The method of improving the quality of steviosides according to claim 1, wherein the organic solvent is an alcohol solvent, a halogenated hydrocarbon solvent, a petroleum-derived solvent, or a hydrocarbon solvent which is not mixed with water. 제1항에 있어서, 물을 1~10%(v/v)의 비율로 사용하는 것을 특징으로 하는 스테비오사이드의 미질 개선 방법.The method of improving sterilization of steviosides according to claim 1, wherein water is used at a rate of 1 to 10% (v / v). 제1항에 있어서, 효소로서 α-전이 또는 β-전이를 유발하는 것을 사용하고, 당 공여체로서는 전분이나 전분의 가수분해물처럼 α결합을 갖는 당류, 셀룰로스나 셀룰로스 가수분해물처럼 β결합을 갖는 당류를 사용하는 것을 특징으로 하는 스테비오사이드의 미질 개선 방법.The method of claim 1, wherein an enzyme that induces α-transition or β-transition is used. As a sugar donor, sugars having α bonds, such as starch or starch hydrolysates, sugars having β bonds, such as cellulose or cellulose hydrolysates, are used. A method for improving the quality of steviosides, which is used. 제1항에 있어서, 효소로서 유리의 단백질 효소 혹은 고정화 효소를 사용하는것을 특징으로 하는 스테비오사이드의 미질 개선 방법.The method for improving the quality of steviosides according to claim 1, wherein a free protein enzyme or an immobilizing enzyme is used as the enzyme.