KR930002009B1 - Antihyperlipemics - Google Patents

Abstract

내용 없음.No content.

Description

항고지혈증제Antihyperlipidemic agents

본 발명은 항고지혈증제에 관한 것이다. 더욱 상세히 설명하면 뛰어난 항고지혈증활성과 안전성을 가지며, 신규이고 또한 진보성이 있는 개량 제법에 의한 약리적으로 허용할 수 있는 지렁이 건조 분말 및/또는 지렁이 추출물을 유효 성분으로하여 이루어진 항고지혈증제 또는 고지혈증의 치료, 예방제 또는 지질대사 개선제 또는 동맥경화 치료, 예방제에 관한 것이다.The present invention relates to antihyperlipidemic agents. More specifically, antihyperlipidemia or hyperlipidemia, which has excellent antihyperlipidemic activity and safety, and is composed of pharmacologically acceptable worm-dried powder and / or worm extract as an active ingredient by a novel and progressive improvement method. , Prophylactic or lipid metabolism improving agent or atherosclerosis treatment, prophylactic agent.

종래의 기술과 발명이 해결하려고 하는 문제점 ;Problems to be solved by the prior art and the invention;

고지혈증은 고혈압, 당뇨병, 끽연과 함께 동맥 경화의 주요한 위험인자라는 것이 인식되어 있고, 그 치료 및 예방을 위하여 여러가지의 합성 유기 화합물의 항고지혈증제가 연구 개발되고 있다. 예컨대 클로피플레이트 및 니코몰 등이 개밭되었으나, 클로피플레이트에서는 근육통, 간기능장해 외에 담석발생의 가능성이 높다는 것이 알려져 있다. 또, 니코몰에서는 안면홍조, 위장장해 등의 부작용이 있다는 것이 알려지고 있다. 또, 클로피플레이트 및 그 유도체로서는 근육통, 간기능장해 외에 담석 발생의 가능성이 높다는 것이 알려지고 있다. 또 클로피플레이트는 동물실험에서 간장암의 발생도 있다는 것이 보고[D. J. Svoboda 등 : Cancer Res. , 39, 3419(1979)]되어 있다.It is recognized that hyperlipidemia is a major risk factor for atherosclerosis along with hypertension, diabetes mellitus, and smoking, and antihyperlipidemic agents of various synthetic organic compounds have been researched and developed for the treatment and prevention thereof. For example, clopiplate and nicomol have been opened, but it is known that clopiplate is highly likely to cause gallstones in addition to muscle pain and liver failure. In addition, it is known that Nicomol has side effects such as hot flashes and gastrointestinal disorders. Moreover, it is known that clopiplate and its derivatives are highly likely to cause gallstones in addition to muscle pain and liver failure. Clopiplate has also been reported to cause liver cancer in animal studies [D. J. Svoboda et al .: Cancer Res. , 39, 3419 (1979).

이들의 안정성의 문제외에 약효, 약리에 대해서도 최근의 지질대사에 관한 연구, 특히 혈청지질의 운반체인 혈청리보단백의 기능에 대해서의 연구가 진보된 결과, 혈청중의 지질 농도 저하뿐만 아니고, 리보단백에 대한 작용이 중요하다고 주목되게 되었다.In addition to these stability issues, recent studies on lipid metabolism in terms of drug efficacy and pharmacology, in particular, on the function of serum riboprotein, a carrier of serum lipids, resulted in not only a decrease in lipid concentration in serum, but also riboprotein. It has been noted that the action on is important.

혈청 콜레스테롤은 트리글리세라이드(이하, TG라 칭한다. ) 총 인지질(이하, PL라 칭함. ), 아포단백과 함께 리보단백을 형성하고 있지만, 이 리보단백은 비중의 차이에 의해 초저비중 리보단백(이하, VLDL라 칭함), 저비중리보(이하, LDL라 칭한다. ) 및 고비중 리보단백(이하, HDL라 칭한다. )으로 분류된다. 이들중에서, VLDL, LDL가 동맥경화를 유발하는 리보단백이라 생각되어 왔었다. 이에 대하여, HDL은 말초현 관조직에서 간장으로의 콜레스테롤의 수송, 콜레스테롤 에스테르의 생성, TG의 이화에의 관여 등의 기능을 가지며, 동맥경화를 예방, 퇴측시키는 작용을 가지고 있는 것으로 되어 있다.Serum cholesterol forms triglycerides (hereinafter referred to as TG) and total phospholipids (hereinafter referred to as PL) and apoproteins to form riboproteins, but these riboproteins are ultra-low-weight riboproteins (below) due to differences in specific gravity. , Referred to as VLDL), low specific gravity (hereinafter referred to as LDL), and high specific weight ribo protein (hereinafter referred to as HDL). Among them, VLDL and LDL have been thought to be riboproteins that cause atherosclerosis. In contrast, HDL has a function of transporting cholesterol from peripheral tubular tissue to the liver, production of cholesterol esters, involvement in catabolism of TG, and the like, and have an effect of preventing and regressing arteriosclerosis.

따라서, 금후의 항고지혈증제의 창제는, 혈청의 총 콜레스테롤(이하, TC라 칭함. )을 저하시키는 작용외에 어느 종류의 리보단백의 콜레스테롤에 작용하고 있는가가 중요시된다. 특히 LDL중의 콜레스테롤(이하, LDL-C라 칭함. )값을 저하시키고 HDL중의 콜레스테롤(이하, HDL-C라 칭함. )값을 상승시키는 작용과 함께 동맥경화지수[이하 AI라 칭함. AI=(TC-HDL-C)/HDL-C의 계산식에 의해 구한다. ]을 저하시키는 작용을 갖는 약제가 요망되고 있다.Therefore, it is important to determine what kind of riboprotein cholesterol acts in addition to the action of lowering serum total cholesterol (hereinafter referred to as TC). In particular, the arteriosclerosis index (hereinafter referred to as AI), along with the action of lowering cholesterol (hereinafter referred to as LDL-C) in LDL and raising cholesterol (hereinafter referred to as HDL-C) in HDL. Obtained by the formula AI = (TC-HDL-C) / HDL-C. ] A drug having an action of lowering the demand is desired.

본 발명자들은, 항고지혈증 작용을 갖는 천연물에 대해서 여러가지 연구를 계속한 결과, 지렁이의 건조분말을 일부의 형태로서 함유하는 지렁이 건조분말 ; 지렁이를 수성용매, 수혼화성 유기용매(물과 혼화하지 않는 성상의 유기용매라는 뜻. ) 및 수비혼화성 유기용매(물과 혼화하지 않는 성상의 유기용매라는 뜻. )로서 구성된 군에서 선택되는 적어도 1종류의 추출제에 의해서 추출 처리하여 얻은 지렁이의 추출물은 우수한 항고지혈증 작용을 가지며, 더구나 LDL-C를 내리고, HDL-C를 올림과 함께 AI을 저하시키는 작용을 가지고 있을 뿐만 아니라, 간비대, 간기능장해 등의 부작용이 없는 안전성이 높은 약제이라는 것을 알아내고, 본 발명을 완성하였다.MEANS TO SOLVE THE PROBLEM The present inventors continued various research about the natural product which has an antihyperlipidemic effect, As a result, the earthworm dry powder which contains the dry powder of an earthworm as a form; Earthworms are at least selected from the group consisting of aqueous solvents, water-miscible organic solvents (meaning organic solvents that do not mix with water), and water-immiscible organic solvents (meaning organic solvents that do not mix with water.) The extract of the earthworm obtained by the extraction treatment by one type of extractant has an excellent antihyperlipidemic effect, and also lowers the LDL-C, raises the HDL-C, and lowers the AI. The present invention was completed by finding out that it is a highly safe drug without side effects such as liver failure.

지렁이는 태고의 옛날부터 주로 동양제국에 있어서, 지렁이, 토룡이라 칭하고, 약으로서 사용되어 왔었다. 종래의 문헌에 보고되고 있는 지렁이의 약리. 약효작용을 나타내면 다음과 같다.Earthworms have been used as medicines since the ancient times, mainly in the Oriental Empire, called earthworms and thoraxes. Pharmacology of earthworms reported in conventional literature. If the drug shows the following effects.

①「지렁이와 인생」오오무치신류지 1947년(소화 22년) 10읠 30일, 마끼쇼보 발생, 제223∼226페이지 및 복각지렁이 하다이신기시저 1980년 4읠 30일, 주식회사 사이엔티스트사 발행, 제160∼163페이지에 지렁이가 방광내 결석의 축소작용제 및 체의 배출작용제, 황달의 치료제, 분만제, 강장제, 모생약, 강정제 및 해열제외 약리작용을 가지며, 한편, 지렁이 독의 하나는 신경계통을 침범하고, 그외는 적열구의 파괴 즉, 용혈작용을 갖는다는 것을 보고하고 있다.① Earthworm and Life Omurchi Shinryuji, October 1947 (22 years old), Makishobo Occurrence, pages 223 to 226, and Reprinted Earthworms on October 4, 1980, published by Scienti Co., Ltd. On pages 160-163, earthworms have a pharmacological action other than bladder ablation and sieve excretion agents, jaundice remedies, delivery agents, tonics, mother pills, tonics and antipyretic drugs. Is reported to have a hemolytic action.

②「중화인민공학국 약전」중화인민공화국 위생부 약전 위원회편, 1977년간, 일부 제197∼198페이지에는 다음의 것이 기개되고 있다.(2) The Pharmacopoeia of the People's Republic of China Pharmacopoeia Committee of the People's Republic of China, 1977. In 11977, some of the following pages 197 to 198 are listed.

관습적으로 토룡제품에는 2종류가 있다. 그 하나의 광 토룡(Lumbricus Kwangtungesis)는 복부를 열어서 내장과 뻘과 모래를 씻어내리고, 양지, 음지 또는 저온으로 건조시킨 것이다. 다른 토룡(Lumbricus Nativus)은 초목의 재안에 넣어서 죽인 후, 재를 제거하여 양지, 그늘진 곳 또는 저온으로 건조한 것으로 지렁이체내에는 진흙이 채워져 있다. 이들의 2종의 토룡의 효과 적응증은 해열, 경풍을 가라 앉히고 숨이차서 헐떡거림을 가라않히고 경로를 통하게 하고(혈행을 양호하게 함), 고열로 인한 경풍이나 경련, 수족의 마비, 반신불수, 관절의 부기나 통증, 배뇨불완전, 기관지의 헐떡거림, 고혈압증이며, 4. 5 내지 9g/일 사용한다고 보고하고 있다.By convention, there are two kinds of tortoise products. The one Lumbricus Kwangtungesis opens the abdomen, washes off the intestines, mud and sand, and dry it to the sun, shade or low temperature. The other worm (Lumbricus Nativus) is killed by placing it in the vegetation's ashes, then removing the ashes and drying them in a sunny, shady or low temperature environment. The two indications for the effect of the two pterosaurs are fever, sensation of calming the wind, and breathing to reduce gasping and passage (good circulation), high winds and cramps, limb paralysis and paralysis , Swelling and pain in the joints, incomplete urination, panting of the bronchus, hypertension, and reported use of 4 to 9 g / day.

③「우리들의 한방약 시리이즈 3, 토룡. 오징어뼈/중국의 과학연구」1978년 10월 30일, 마쓰우라약꾸교 주식회사 발행, 제7페이지에 토룡정기(트룡의 에틸알코올 추출물)는 강압작용이 있다는 것을 보고하고 있다.③ “Our Chinese medicine series, 3, Dragon. Squid Bones / Chinese Science Research, published October 30, 1978, published by Matsuura Pharmaceutical Co., Ltd., page 7, reports that Toryon-Junggi (Teryong's ethyl alcohol extract) has a coercive action.

④「천연약물사전」오꾸다라꾸오편, 소화 61년 4월 15일, 히로가와 쇼텐 발행, 제215페이지에는 토룡이 하열제, 진통제, 이뇨제 및 해독제로 이용되고 있다는 것을 보고 하고 있다.④ The Natural Drug Dictionary, Kudakuraku, April 15, 61, published by Hirogawa Shoten, page 215, reports that Toryon is being used as an antipyretic, analgesic, diuretic and antidote.

⑤ 다나까마모두 [혹가이도 의학잡지 제24권, 제18∼24페이지(1949년)]은, 지렁이(건조세편물에서 진흙을 제외한것)을 끓는물로 추출하고, 이 추출액의 농축액에 에틸알코올을 첨가하여 얻은 침전물질(Lumbrofebrin)을 링겔씨액에 용해하고, 이 액을 마취하의 고양이에게 정맥주사하면 급격한 혈압강하를 가져오고, 또한 쇼크에 비례하여 혈액응고의 촉진이 보였다고 보고하고 있다.⑤ All Tanakama [Hokkaido Medical Journal, Vol. 24, pp. 18-24 (1949)] extract earthworms (except mud from dry matter) with boiling water, and then extract ethyl into the concentrate of the extract. It is reported that the precipitate obtained by adding alcohol (Lumbrofebrin) is dissolved in the ring gel seed solution and injected intravenously into the cat under anesthesia, resulting in a sudden drop in blood pressure and promotion of blood coagulation in proportion to shock.

⑥ 이가와견지료[야마꾸찌 의학 제 9권, 제571∼제576페이지(1960년)]은 토룡의 생리식염수의 추출액, 토룡의 에틸 알코올 또는 아세톤 추출 건조물을 생리식염수에 용해한 액을 성숙한 집토끼에 정맥주사하여 혈압의 강하를 보았다.⑥ The Igawa Dog Feeder [Yamakuchi Medicine Vol. 9, No. 571 to 576 (1960)] is a solution of the physiological saline extract of Toryo, the ethyl alcohol or acetone extract of Toryo rinsed in physiological saline. Injected to see a drop in blood pressure.

⑦「중약대사전」하권 강소신의학원편, 1980년, 상해과학기술 출판사 발행, 제2112페이지에는 광토룡정기, 지렁이 건조분말 현탁액, 지렁이의 열수침지액, 지렁이의 바짝달인액 등을 마취하의 개, 큰쥐, 고양이 또는 만성 신성 고혈압의 새앙쥐에게 투약하면 완만하게 지속적인 혈압 강하 작용이 보였다. 마취하의 개 또는고양이의 토룡엑기스를 정맥주사하였는바, 혈압 강하작용이 급속하게 나타났다. 단, 경구투여하거나 임상으로의 응융으로서는 효과가 없었다고 보고하고 있다. 또한, 동지의 제2114페이지에는 농도 40%의 토룡정기(토룡 40g을 60도의 에틸알코올 100ml에 침지를 매회 10ml, 1일 세번[즉 토룡 12g/일에 상당한다. (본 발명자가 환산)]복용한다. 정기를 마실 수 없는자는 순수한 토룡 분말에 물을 가하여 (소량의 부형제를 가한다)을 만들고 매회 3∼4g, 1일 세번[토룡 9∼12g/일에 상당(본 발명자가 환산)]복용하고, 30∼60일간 계속 복용하면 본태성 고혈압중에 효과가 있다. 또, 토룡 B₁액(HgCl₂를 사용하여 히포크산틴을 제외하고, 이온교환수지를 사용하여 혈압강하 성분을 분리하여 얻은 것을 매회 2ml(생약의 토룡 8g/을 함유함)을 1일 세번 [토룡 24g/일에 상당(본 발명자가 환산)]복용하면 본태성 고혈압중에 효과가 있었다고 보고하고 있다.(7) `` Chinese Medicine Dictionary '', Hebei, Jiangsu New Medical School, 1980, published by Shanghai Science and Technology Press, page 2112, contains a dog with anesthesia for photo-earth dragon periodicity, earthworm dry powder suspension, earthwater immersion liquid, earthworm decoction, etc. Dosing in large rats, cats or chronic rats with chronic hypertension showed a moderately sustained blood pressure drop. Anesthesia of dogs or cats under anesthesia was injected intravenously, resulting in a rapid drop in blood pressure. However, it is reported that it was not effective for oral administration or coagulation to clinical practice. In addition, page 2114 of the winter sol is used with a dragon dragon spirit of 40% concentration (40 grams of dinosaurs are immersed in 100 ml of 60-degree ethyl alcohol, 10 ml each time three times a day (that is, equivalent to 12 g / day of the dinosaurs). If you cannot drink regularly, add pure clay powder to the water (add a small amount of excipient) and use it every 3 to 4g, three times a day (equivalent to 9 to 12g / day of the dinosaur (converted by the inventors)). If taken continuously for 30 to 60 days, it is effective during essential hypertension, and it was obtained by separating the blood pressure lowering component using ion exchange resin except for hypoxanthine using thorax B ₁ solution (HgCl ₂₎ . It is reported that 2 ml (containing 8 g / l of herbal medicine each time) three times a day (equivalent to 24 g / day of dinosaur (converted by the inventors)) was effective in essential hypertension.

종래의 관습적인 지렁이의 건조물 또는 건조 분말의 제법은 대별하면 다음과 같다.Conventional customs of the production of earthworms or dried powder are roughly as follows.

ⓘ 지렁이의 복부를 열어서 체내의 내용물(내장과 진흙)을 제거하고, 양지 그늘 또는 저온(통상 50℃이하)으로 건조하는 방법.How to open the abdomen of the earthworm to remove the contents of the body (intestines and mud), and then dry it in sunny shade or low temperature (usually below 50 ℃).

지렁이를 초목의 재안에 넣어서 죽인 다음, 재를 제거하고 양지, 그늘 또는 저온(통상 50℃이하)으로 건조하고, 지렁이 체내에 진흙이 있는 채로 얻는 방법.

Earthworms are placed in ashes of vegetation and killed, then ashes are removed and dried in sunny, shade or low temperatures (typically below 50 ° C) and obtained with mud in the earthworm body.

지렁이 체내의 진흙을 제거한 다음, 초목의 재 또는 불에탄 재에 넣어서 건조하는 방법 등이다.

Earthworms remove mud from the body and then dry them in ashes or burnt ashes.

이들의 건조물은 필요시 또는 사용시에 분쇄하여 사용하고 있었다. 이들의 제법은 간이 하고도 경제적인 방법으로 가정에서도 용이하게 실행할 수 있는 장점이 있다.These dried products were ground and used when needed or when used. These recipes have the advantage of being easy to implement at home in a simple and economic way.

그러나, 이들의 제법으로 얻은 지렁이의 건조물 또는 건조분말은 0∼5℃의 냉장고내 또는 5∼45℃의 실온에 개방상태로 저장했을 때 약 6개월이내 밀폐상태로 저장했을 매 1년이내의 단기간 내에 곰팡이가 발생하여 사용이 불가능하게 되는 결점이 있다.However, the dried or dried powders of the earthworms obtained by these preparations are short-lived within about 1 month when stored in a closed state for about 6 months when stored in a refrigerator at 0-5 ° C or at room temperature of 5-45 ° C. There is a drawback in that mold is generated and becomes unusable.

상기

의 제법처럼, 체내에 진흙이 가득찬채 건조한 지렁이, 또는

의 제법처럼 초목 재 혹은 불에탄 재안에서 건조한 지렁이는 약으로서 사용할 때에는 대개의 경우, 열수로서 추출 또는 끓인물로 고온으로 한다음 여과하고, 여액을 복용하는 수가 많다. 특히

의 제법에 의한 지렁이의 건조물 또는 건조분말은 토룡정기나 분말 그대로 또는 환약 등으로 복용하는 것이 드물다. ⓘ의 제법에 의한 지렁이는 열수침지액, 푹달인 액으로하여 복용하는 외에 토룡정기나 토룡분말 그대로 또는 분말에 소량의 물 혹은 소량의 부형제를 가하여 환약으로 하여 복용하는 수가 많다. ⓘ 및

의 제법에 의할때, 산지렁이에서 수분 10∼16%의 건조지렁이의 수율은 5∼9%, 마찬가지로

의 제법에 의했을때의 수율은 13∼19%(본 발명자들의 실측치)이다.remind

Like the recipe for a dry earthworm with mud in your body, or

In the vegetation ash or the burnt ash, dry earthworms are usually used as medicines. In many cases, extraction is performed with hot water or heated to high temperature with boiled water. Especially

It is rare to take dried or dried powder of earthworms by the preparation method of the earthworm or powder as it is or as a pill. Earthworms by the method of ⓘ are often taken as hot water immersion liquid or soft liquid, and are often taken as a pill or clay powder, or as a pill with a small amount of water or a small amount of excipients. Ⓘ and

According to the recipe of dry earthworms, the yield of dry earthworms with 10 to 16% moisture is 5 to 9%,

The yield in the manufacturing method is 13 to 19% (actual value of the inventors).

최근, 본 발명의 한사람인 이시이 요이찌는 지렁이의 단백질 및 지질을 주성분으로 하는 건강식품 또는 그의 제조방법 [일본 특허 출원 공개 공보 소 59-216572호(공개일 1984년 12욀 6일)]을 보고하였다. 이 제법은 건강식품으로서의 지렁이 건조분말을 얻기 위한 하나의 뛰어난 방법이다. 그러나, 동맥경화제(별명 : 항고지혈증제), 당뇨병치료제 및 혈압강하제 등의 약용을 목적으로 한 지렁이 건조분말의 제법으로서는, 약효의 점에서 충분치 못하다는 것이 판명되었다. 즉, 동 공보에 기재한 바와 같이 산지렁이의 생체내에 남아있는 배설물을 제거하기 위하여 외적인 작용을 수행할 때에는 분토만을 선택적으로 제거할 수가 없다. 아무리 주의 깊게 조작하여도, 약효상 중요한 역할을 이루는 부분을 많이 함유한 내장 및 체액이 분토와 한꺼번에 제거됨으로 약효부족으로 되는 이유를 알게 되었다. 또 산지렁이에 대한 수율은 10∼19%로서 적다. 또한 큰 문제는 최종 마무리 공정의 진공건조를 80℃, 0. 3토르의 진공도로서 20시간 이상의 장시간 조작하기 위하여 약리. 약효상 중요한 작용을 이루는 지렁이 건조분말 중의 효소류가 파괴 또는 활성 상실된다는 것을 알게 되었다. 따라서, 본 발명의 제법으로 얻어진 지렁이 건조분말에 비교하면 일본 특허 출원 공개 공보소화 59-216572호에서 얻어지는 지렁이 건조분말의 항고지형증제의 약효는 급속히 감퇴한다는 것을 알았다.Recently, Yoshi Ishii, a man of the present invention, reports a health food or a manufacturing method thereof based on protein and lipids of earthworms (Japanese Patent Application Laid-Open No. 59-216572 (published date: December 6, 1984)). It was. This method is an excellent way to obtain earthworm dry powder as a health food. However, it has been found that the preparation of earthworm dry powder for medicinal purposes such as atherosclerosis (nickname: antihyperlipidemic), diabetes treatment, and blood pressure lowering agent is not sufficient in terms of its efficacy. In other words, as described in the publication, when only an external action is performed to remove the excrement remaining in the living body of the earthworm, it is not possible to selectively remove only the soil. No matter how carefully manipulated, the internal organs and body fluids that contain a lot of important parts of the drug effect was removed at a time and the reason for the lack of drug efficacy was found. In addition, the yield for mountain worms is small, 10-19%. In addition, a big problem is pharmacology in order to operate the vacuum drying of the final finishing process for a long time of 20 hours or more at a vacuum degree of 80 ° C and 0.3 Torr. It has been found that the enzymes in the earthworm dry powder, which have important effects on medicinal effects, are destroyed or lost in activity. Therefore, compared with the earthworm dry powder obtained by the manufacturing method of this invention, it turned out that the anti-fatal thickener of the earthworm dry powder obtained by Unexamined-Japanese-Patent No. 59-216572 declines rapidly.

동공보 기재와 같은 조건으로 최종 마무리 공정의 진공 건조를 행하였다. 즉, 온도 80℃, 진공도 0. 3토르로 하여 가열시간을 20, 24, 26 및 30시간으로 변동하여 수득한 제품 지렁이 건조분말의 실험적 고지혈증 쥐에 대한 항고지혈증 활성 시험을 후술한 약리시험 1에 따라 측정하였다. 본 발명의 제법의 지렁이 건조분말에 비교하면 그의 약효는 각각 약 46, 74, 81 및 88%로 급속히 소실한다는 것을 알았다.Vacuum drying of the final finishing process was performed under the same conditions as those described in the publication. In other words, the antihyperlipidemic activity test in experimental hyperlipidemic rats of the product earthworm dry powder obtained by varying the heating time to 20, 24, 26 and 30 hours at a temperature of 80 ° C. and a vacuum degree of 0.3 Torr was described in Pharmacology Test 1 below. Measured accordingly. Compared with the earthworm dry powder of the manufacturing method of this invention, it turned out that the efficacy is rapidly lost by about 46, 74, 81, and 88%, respectively.

최근, 본 발명자의 한사람인 미하라 히사시와 기타의 공동연구자 등에 의해 지렁이의 선용 활성물질은 적당한 pH가 8∼10, 안정 pH가 5∼10, 트리디톨(상표명), 트란사민(상표명), 대두 트립신 억제제 및 혈청으로 저해되며, 플라스미노겐 활성화 작용 및 피브린 용해작용을 가지며, 피브리노겐 용해작용을 갖지 않는 여러 성질을 보유하는 효소 단백질 이라는 것이 확인되었다.Recently, according to the inventor of the present invention, Hisashi Mihara and other co-researchers, the active substance for earthworms has an appropriate pH of 8-10, a stable pH of 5-10, triditol (trade name), transamine (trade name), and soybean trypsin. It was confirmed that it is an enzyme protein that is inhibited by inhibitors and serum, has plasminogen activating action and fibrin solubility, and has various properties that do not have fibrinogen solubility.

지렁이로 부터의 수성 용매의 추출법에 의한 조제 효소 단백질 획분과, 그 정제 처리에 의한 정제 효소단백질 획분으로 되는 선용 활성 물질의 제조 방법의 출원 특허 즉, 일본 특허 출원 공개 공보 소화 58-148824호(출원일 1982년 2월 27일)와, 이들의 우선권 주장에 의한 외국 출원이 미국 특허 출원 번호470394(출원일 l983년 2욀 28일), 영국 특허 출원 번호 8305359(출원일 1983년 2월 25일), 이탈리아 특허출원 번호 47795A(출원일 1983년 2월 25일), 프랑스 특허 출원 번호 03165(출원일 1983년 2월 25일), 서독특허 출원 번호 P 3306944. 1(출원일 1983년 2월 28일) 및 캐나다 특허 출원 번호 422034(출원일 1983년 2월 21일)이 보고되고 있다. 다시금, 미하라 히사시 등에 의해 지렁이로 부터의 6종의 신규인 프로테아제의 물질 특허의 출원, 즉 일본 특허 출원 공개 공보 소화 59-63184호(출원일 1982년 10읠 2일) 및 이들의 프로테아제를 유효 성분으로하는 혈전용해제의 특허 출원, 즉, 일본 특허출원 공개 공보 소화 59-184131(출원일 1983년 3월 31일)과, 이들의 병합 출원의 우선권 주장의 외국 특허 출원 즉, 한국 특허 출원 제2990호(출원일 1983년 6월 30일)을 위시하여, 다음의 특허 출원이 보고 [AU. P. App, 16293(출원일 1983년 6월 27일), CA. P. App. 431387(출원일 1983년 6읠 28일), DK. P. App. 3008(출원일 1983년 6월 29일), EP. P. App. 83106288. 0(출원일 1983년 6월 28일), ES. P. App. 523754(출원일 1983년 6월 30일), FI. P. App. 832383(출원일 1983년 6월 29일), No. P. App. 2399(출원일 1983년 6윌 30일), PH. P. App. 29151(출원일 1983년 6월 30일), TW. P, APP. 7211983(출원일 1983년 6월 18일), US. P. APp. 508163(출원일 1983년 6월 27일)]이 있다.Japanese Patent Application Laid-Open No. 58-148824 (Patent No. 58-148824) of a preparation enzyme protein fraction by an extraction method of an aqueous solvent from an earthworm, and a method for producing a linear active substance comprising purified enzyme protein fractions by the purification process. February 27, 1982), and foreign applications pursuant to their priorities, US Patent Application No. 470394 (filed February 28, l983), British Patent Application No. 8305359 (filed February 25, 1983), Italian Patent Application number 47795A (filed February 25, 1983), French patent application number 03165 (filed February 25, 1983), West German patent application number P 3306944. 1 (filed February 28, 1983) and Canadian patent application number 422034 (filed February 21, 1983) is reported. Again, a patent application for six new proteases from earthworms by Mihara Hisashi et al., Ie, Japanese Patent Application Laid-Open No. 59-63184 (filed date of October 10, 1982) and their proteases as active ingredients Patent application for thrombolysis, that is, Japanese Patent Application Publication No. 59-184131 (filed March 31, 1983), and foreign patent application claiming priority of their combined application, that is, Korean Patent Application No. 2902 (filed date) June 30, 1983), the following patent application is reported [AU. P. App, 16293 (filed June 27, 1983), CA. P. App. 431387 (filed June 28, 1983), DK. P. App. 3008 (filed June 29, 1983), EP. P. App. 83106288.0 (filed June 28, 1983), ES. P. App. 523754 (filed June 30, 1983), FI. P. App. 832383 (filed June 29, 1983), No. P. App. 2399 (filed June 30, 1983), PH. P. App. 29151 (filed June 30, 1983), TW. P, APP. 7211983 (filed June 18, 1983), US. P. APp. 508163 (filed June 27, 1983).

본 발명자들의 조사 결과에서는 지렁이의 건조분말 및 지렁이의 추출물을 유효성분으로 하는 항고지혈증 작용을 보고한 문헌을 찾아낼 수 없었다. 하물며, 지렁이 건조분말 및 지렁이의 추출물이 혈청 중의 TC 저하 작용을 가짐과 함께 형청중의 LDL-C를 내리고, HDL-C를 올리고, 다시금 AI 저하 작용를 가지며, 또한 간비대, 간기능 장해 등의 부작용이 없는 안전성이 높은 약제이라는 것을 보고한 문헌은 찾아낼 수 없었다.In the investigation result of the present inventors, the literature which reported the antihyperlipidemic effect which uses the dry powder of an earthworm and the extract of an earthworm as an active ingredient was not found. In addition, the earthworm dry powder and the earthworm extract have the effect of lowering TC in serum, lowering LDL-C in Hyungcheong, raising HDL-C, and again reducing AI, and also have side effects such as hepatomegaly and liver function disorder. No literature has been found to report that this drug is a highly safe drug.

본 발명은 지렁이의 건조물을 일부의 형태로 함유하는 지렁이의 건조분말 ; 지렁이를 수성 용매, 수혼화성 유기용매 및 수비혼화성 유기용매로서 구성되는 군에서 선택되는 적어도 1종류의 추출제에 의해서 추출처리하여 얻은 지렁이의 추출물을 유호 성분으로서 함유하는 항고지혈증제에 관한 것이다. 또한, 안전하고 뛰어난 항고지혈증 효과를 가지며, 또한 밀폐상태에서 적어도 4년간 저장 또는 보관이 가능한 무균 지렁이의 건조분말을 높은 수율로 얻기 위하여 상세하게 연구한 결과, 다음에 나타낸 신규성 및 진보성이 있는 개량제법을 확립하였다.The present invention is a dry powder of the earthworm containing the dry matter of the earthworm in some form; An antihyperlipidemic agent comprising an extract of the earthworm obtained by extracting and treating the earthworm with at least one extractant selected from the group consisting of an aqueous solvent, a water miscible organic solvent and a water immiscible organic solvent. In addition, in order to obtain a safe and excellent anti-hyperlipidemic effect and to obtain a high yield of dry powder of sterile earthworms which can be stored or stored for at least 4 years in a closed state, the novel and progressive improvement method shown below Was established.

제법 1 :Recipe 1:

산지렁이 1중량부를 온도 1∼30℃에서 10∼30시간, 바람직하게는 온도 4∼28℃에서 10∼30시간 담수 1∼10용량부 또는 초산, 구연산, 호박산, 사과산, 주석산, 젖산 등의 유기산 또는 인산, 황산, 염산 등의 무기산 또는 이들의 산의 나트륨 또는 칼륨염의 적어도 1종류의 화합물을 0. 3(중량)%이하, 바람직하게는 0. 1중량% 이하로 함유하는 저농도 또는 pH3∼6. 5의 약산성의 수용액 1∼10용량부중에 온도 1∼25℃로서 0. 5∼72시간, 바람직하게는 온도 2∼15℃, 1∼40시간 방치하여 산지렁이 자신이 갖는 배설력에 의해서 산지렁이의 소화관내의 분토를 충분히 배설시킨 다음, 물로 산지렁이의 체표면에 부착하고 있는 오물을 세척하고 이어 간단히 수분을 제거해서 얻은 산지렁이를 그대로 분쇄기에서 분쇄를 행하였다. 수득된 지렁이의 농후현탁액을 -5℃이하의 저온, 바람직하게는 -10∼-60℃의 저온으로 동결한 다음, 동결건조. 진공건조를 행하였다. 동결전조. 진공건조의 조건은 온도 -60∼ +90℃, 진공도 100mmHg이하, 바람직하게는 -40∼ +80℃에서 30mmHg 이하의 진공도로서 온도를 단계적으로 올리면서 5∼100시간, 바람직하게는 10∼60시간 동결건조. 진공건조를 행하여서 무균의 지렁이의 건조 분말을 얻었다.1 part by weight of the earthworm is 10 to 30 hours at a temperature of 1 to 30 ° C, preferably 1 to 10 parts by volume of fresh water for 10 to 30 hours at a temperature of 4 to 28 ° C, or organic acids such as acetic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, tartaric acid and lactic acid. Or a low concentration or pH 3 to 6 containing at least one compound of inorganic acids such as phosphoric acid, sulfuric acid and hydrochloric acid, or at least one compound of sodium or potassium salts of these acids in an amount of not more than 0.3% by weight, preferably 0.01% by weight or less. . 5 to 72 hours, preferably 2 to 15 ° C. for 1 to 40 hours, at a temperature of 1 to 25 ° C. in 1 to 10 parts by volume of a weakly acidic aqueous solution of 5; After excretion of the clay in the digestive tract, the soil adhering to the body surface of the mountain earthworm was washed with water, and then the earthworm obtained by simply removing moisture was ground in a crusher. The rich suspension of the obtained earthworm is frozen at a low temperature below -5 ° C, preferably at a temperature of -10 to -60 ° C, and then lyophilized. Vacuum drying was performed. Freeze Precursor. The conditions of vacuum drying are 5 to 100 hours, preferably 10 to 60 hours, while raising the temperature stepwise at a vacuum degree of -60 to + 90 ° C and a vacuum degree of 100 mmHg or less, preferably 30 mmHg or less at -40 to + 80 ° C. Lyophilization. Vacuum drying was performed to obtain dry powder of aseptic earthworm.

제법 2 :Recipe 2:

체표면에 부착하고 있는 오물을 물로 세척해서 씻어낸 후의 산지렁이 1중량부를 온도 1∼30℃에서 10∼30시간 바람직하게는 온도 4∼28℃에서 10∼30시간 담수 1∼10중량부 또는 초산, 구연산, 호박산, 사과산, 주석산, 젖산 등의 유기산 또는 인산, 황산, 염산 등의 무기산 또는 이들 산의 나트륨 칼륨염의 적어도 1종류의 화합물 0. 3(중량)% 이하 바람직하게는 0. 1(중량)% 이하 함유하는 저농도 또는 PH3∼6. 5의 약산성의수용액 1∼10용량부 중에 온도 1∼25℃로서 0. 5∼72시간, 바람직하게는 온도 2∼15℃로서 1∼40시간, 방치하여 산지렁이 자신이 갖는 배설력에 의해서 산지렁이의 소화관 내의 분토를 충분히 배설한 다음, 수세하거나 또는 수세하지 않고 수분을 제거해서 얻은 산지렁이 그대로를 분쇄기에서 분쇄를 행하였다. 수득된 지렁이의 농후 현탁액을 -5℃이하의 저온, 바람직하게는 -10∼-60℃의 저온으로 동결한 다음, 동결건조. 진공건조를 행하였다. 이 동결건조. 진공건조의 조건은 온도 -60∼+90℃, 진공도 100mmHg이하, 바람직하게로는 -40∼+80℃, 30mmHg 이하의 진공도로서 온도를 단계적으로 올리면서 5∼100시간 바람직하게는 10∼60시간 동결건조. 진공건조를 행하여서 무균의 지렁이의 건조분말을 얻었다.1 part by weight of the mountain worm after washing and washing off the dirt attached to the surface of the body for 10 to 30 hours at a temperature of 1 to 30 ° C, preferably 1 to 10 parts by weight of fresh water or acetic acid for 10 to 30 hours at a temperature of 4 to 28 ° C Or at least one compound of 0.3% by weight of an organic acid such as citric acid, succinic acid, malic acid, tartaric acid, lactic acid, or an inorganic acid such as phosphoric acid, sulfuric acid, hydrochloric acid, or sodium potassium salt of these acids, preferably 0.01 (weight) Low concentration or PH3 to 6. 5 to 72 hours at a temperature of 1 to 25 ° C., preferably 1 to 40 hours at a temperature of 2 to 15 ° C. in a weakly acidic aqueous solution of 5 to 10 parts by volume, and produced by the excretion power of the mountain worm itself. After the soil was sufficiently excreted in the digestive tract of the earthworm, the earthworm obtained by removing water with or without water washing was ground in a crusher. The rich suspension of the earthworm obtained was frozen at a low temperature below -5 ° C, preferably at a temperature of -10 to -60 ° C, and then lyophilized. Vacuum drying was performed. Lyophilized. The conditions of vacuum drying are temperatures of -60 to + 90 ° C and a degree of vacuum of 100 mmHg or less, preferably -40 to + 80 ° C and a degree of vacuum of 30 mmHg or less, 5 to 100 hours, preferably 10 to 60 hours, while gradually raising the temperature. Lyophilization. Vacuum drying was carried out to obtain dry powder of sterile earthworms.

지렁이의 분쇄방법, 즉, 지렁이 그대로의 조직(세포) 파괴방법으로서는 호모지나이저, 브렌더, 호모믹서, 뢰괴기, 가압형 세포 파괴 장치의 기기를 이용하여 현탁액 또는 균질액으로 하는 것이 바람직하다. 이 분쇄시의 온도는 1∼25℃ 바람직하게는 2∼15℃가 바람직하다.As a method of crushing the earthworm, that is, a method of destroying the tissue (cells) as it is, it is preferable to use a homogenizer, a blender, a homomixer, a lightning rod, or a device of a pressurized cell destruction device to prepare a suspension or homogenate. The temperature at the time of this grinding | pulverization is 1-25 degreeC, Preferably 2-15 degreeC is preferable.

상기한 조작에 의해 살아 있는 지렁이에서 황갈색 또는 갈색의 지렁이 건조분말을 수율 20∼35%로서 얻을 수가 있었다. 통상의 경우, 이 지렁이 건조분말의 수분은 5∼16%, 바람직하게로는 7∼14%, 회분은3∼8%, 바람직하게로는 4∼7%, 질소는 1∼11%, 바람직하게는 6∼11% 함유하도록 조제하였다. 또 지렁이 건조분말중에는 아스파라 긴산, 트레오닌, 세린, 글루타민산, 프로린, 글리신, 알라닌, 시스틴, 바린, 메티오닌, 이소로이신, 로이신, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 리신, 히스티딘, 아르기닌의 18종 또는 그 전후의 아미노산을 함유한다.By the above-mentioned operation, yellow-brown or brown earthworm dry powder was obtained in the living earthworm as yield 20-35%. In this case, the earthworm's dry powder has a water content of 5 to 16%, preferably 7 to 14%, ash content of 3 to 8%, preferably 4 to 7% and nitrogen to 1 to 11%, preferably Was prepared to contain 6-11%. In the earthworm dry powder, 18 kinds of asparinic acid, threonine, serine, glutamic acid, proline, glycine, alanine, cystine, varine, methionine, isoleucine, leucine, tyrosine, phenylalanine, tryptophan, lysine, histidine and arginine Contains amino acids

[시험예 1][Test Example 1]

상기한 제법 1(후기한 실시예 17 내지 실시예 20) 및 제법 2(후기하는 실시예 21, 22, 24 및 25)의 방법으로 수득한 지렁이 건조분말 제품(M-1∼M-9)의 조분석 결과를 표-1에 표시하였다. 제법 1에 의한 지렁이 건조분말 제품기호 M-1은 실시예 17의 방법으로 수득하였다. 마찬가지로 M-2는 실시예 18, M-3은 실시예 19, M-4는 실시예 20의 방법으로 수득하였다. 제법 2에 의한 지렁이 건조분말 제품 기호 M-5는 실시예 21의 방법으로 수득하였다. 마찬가지로 M-6은 실시예 22의 방법으로 수득하였다.Of the earthworm dry powder products (M-1 to M-9) obtained by the method of Preparation Method 1 described later (Examples 17 to 20) and Production Method 2 (Examples 21, 22, 24, and 25 described later). The crude analysis results are shown in Table-1. Earthworm dry powder product symbol M-1 according to Production Method 1 was obtained by the method of Example 17. Similarly, M-2 was obtained in Example 18, M-3 in Example 19, and M-4 in Example 20. Earthworm dry powder product symbol M-5 according to Production Method 2 was obtained by the method of Example 21. M-6 was likewise obtained by the method of Example 22.

[표 1]TABLE 1

[시험예 2][Test Example 2]

제법 1의 방법으로 얻은 M-2와 M-4 및 제법 2의 방법으로 얻은 M-5의 지렁이 건조분말 제품의 성분분석 결과를 표-2에 나타내었다.Table 2 shows the results of component analysis of the earthworm dry powder product of M-2 obtained by the method of Preparation Method 1 and M-4 obtained by the Method 2 and Method 2.

[표 2]TABLE 2

[시험예 3][Test Example 3]

제법 1의 방법으로 얻은 M-2와 M-4 및 제법 2의 방법으로 얻은 M-5의 지렁이 건조분말 제품중의 조단백질의 아미노산 분석을 행하고, 단백식품의 피슈밀 및 대두분의 분석값과 비교한 결과를 표-3에 나타내었다.Amino acid analysis of crude protein in earthworm dry powder products of M-2 and M-4 obtained by the method of Preparation 1 and M-5 obtained by the method of Preparation 2 was performed, and compared with the analysis values of fish wheat and soy flour of protein foods. One result is shown in Table-3.

[표 3]TABLE 3

* P. Mc Donald, R. A. Edwards and J. F. D. Greenhalgh :* P. Mc Donald, R. A. Edwards and J. F. D. Greenhalgh:

Animal Nutrition(1973년)에 기재되어 있는 데이터에서 :From the data described in Animal Nutrition (1973):

표-2 및 표-3에서 제법 1 및 2의 방법에 따라 얻은 지렁이 건조분말 중에는 조단백질, 조지질 및 각종 금속류가 풍부하게 함유되어 있다는 것을 알았으며, 또한, 조단백질중의 아미노산 조성에서는 필수아미노산을 다량으로 함유하고 있다는 것을 알았다.In Table 2 and Table 3, it was found that the earthworm dry powder obtained according to the methods of Preparation Methods 1 and 2 contained abundant crude protein, crude oil and various metals.In addition, the amino acid composition of the crude protein contained a large amount of essential amino acids. It was found that it contains.

본 발명자들은 산지렁이의 체표면에 부착한 진흙, 짚, 낙엽, 분토 등의 오물 및 소화관내의 분토를 가급적 단시간내에 제거하여 깨끗히 하는 것이 지렁이 건조분말 제품의 수율, 생리화학적 작용 활성의 향상, 보존성 등을 높이기 위하여 중요한 하나의 조작이라는 것을 발견하였다.The inventors of the present invention have shown that soil and dirt contained in the digestive tract and soil, such as mud, straw, fallen leaves, and clay attached to the body surface of mountain worms, can be cleaned in the shortest possible time. It was found to be an important operation to raise the back.

특히, 산지렁이의 소화관내의 분토를 먼저 배설시킨 후, 체표면에 부착한 오물을 물로 세척제거하는 제법1의 것이 제법 2보다도 단시간내에 세척 조작을 끝낼 수가 있었다.In particular, the method of the first method in which the soil in the digestive tract of the mountain earthworm was excreted first, and then the dirt attached to the surface of the body was washed and removed with water was able to complete the washing operation in less time than the second method.

지렁이의 성질로서는 다수의 산지렁이를 취급하면 지렁이 끼리가 서로 엉키어 집합한다. 소화관의 분토를 배출하기 전에 체표면에 부착한 오물을 세척 제거하려고 하면, 그 조작중에 산지렁이는 소화관내의 분토를 배설하고 이것이 지렁이 끼리의 체표면에 부착하기 때문에 1∼2회의 세척으로는 깨끗히 되지 않는다. 깨끗히 하기 위해서는 후기한 실시예 21 내지 실시예 25에 표시한 바와 같이 세척을 4 내지 5회 반복할 필요가있다.As a property of earthworms, if you handle a large number of mountain earthworms, the earthworms get tangled together. If you try to clean and remove dirt attached to the body surface before discharging the digestive tract, the earthworm will excrete the soil in the digestive tract and attach it to the body surface of the earthworms. It doesn't work. In order to clean, it is necessary to repeat the washing 4 to 5 times as indicated in Examples 21 to 25 described later.

그 결과, 세척 조작 회수의 증가에 따른 지렁이의 유실, 생체의 상처로부터의 체액 및 소화액의 손실이 있다.As a result, there is a loss of the earthworm, the body fluid from the wound of the living body and the digestive fluid with the increase in the number of washing operations.

그러나, 그후 상기한 수용액 또는 담수중에 방치하여 나머지의 분토를 배설시켰 을 경우에는 산지렁이의 체표면에 부착한 분토가 비교적 소량일때가 있다. 따라서 소량일때에는 이후의 건조공정의 관련에서 가벼운 세척이라도 좋을때, 또는 세척이 불필요할 때가 있다.However, when the remaining soil is excreted after leaving it in the above-mentioned aqueous solution or fresh water, there may be a relatively small amount of soil attached to the body surface of the mountain earthworm. Therefore, in the case of a small amount, it may be sufficient to wash lightly or it is unnecessary to wash | clean in connection with a subsequent drying process.

동일 종류의 붉은 지렁이(Lumbricus rubellus)를 사용하고, 세척방법을 제법 1과 제법 2와 다르게 하지만 그후의 제조조건을 거의 같게 하는 조작으로 수득한 지렁이 건조분말 제품의 수율 및 제품의 조분석결과(상기한 표-1과 표-2)의 비교를 표-3-1에 나타냈다.Yield and crude analysis of the product of the earthworm dry powder obtained by using the same kind of red earthworms (Lumbricus rubellus), and the washing method is different from the manufacturing method 1 and the manufacturing method 2, but the manufacturing conditions are almost the same. A comparison between Table 1 and Table 2) is shown in Table-3-1.

[표 -3-1]Table -3-1

즉, 표-3-1에 나타낸 제품 M-3과 M-5의 비교, 제품 M-4와 M-6의 비교에서 알 수 있듯이, 제법1의 방법으로 수득한 지렁이 건조분말 제품의 것이 제법 2의 제품보다도 수율이 0. 5 내지 1%, 회분이 0. 7내지 0. 9% 질소가 1. 2 내지 1. 4%로 모두 많다. 또 제법 1의 제품의 것이 제법 2의 제품보다도 생리화학적작용의 활성(명세서의 표-5의 결과 참조)이 약간 높고, 부작용이 약간 적은 경향의 바람직한 제품이 얻어졌다.That is, as can be seen from the comparison of the products M-3 and M-5 and the comparison of the products M-4 and M-6 shown in Table-3-1, the earthworm dry powder product obtained by the method of Preparation 1 is The yield is more than 0.5 to 1%, the ash content is from 0.7 to 0.9%, the nitrogen is 1. 2 to 1. 4%. Moreover, the product of the manufacturing method 1 obtained the preferable product which tends to have a slightly higher physiological-chemical activity (refer to the result of Table-5 of the specification) than the product of the manufacturing method 2, and has few side effects.

또, 상기한 유기산 또는 무기산 또는 이들의 양산의 나트륨 또는 칼륨염의 적어도 1종류의 화합물을 상기와 같은 저농도로 함유한 수용액중에 살아있는 지렁이를 방치하는 방법은 담수중에 방치한 것보다도 산지렁이의 소화관내의 분토의 배설이 빠르고, 또한 배설률이 크다.In addition, the method of leaving live earthworms in an aqueous solution containing at least one compound of the above-mentioned organic acid or inorganic acid or a sodium or potassium salt of a mass production thereof at a low concentration as described above is more effective in the digestive tract of the mountain earthworm than in the fresh water. The excretion of the clay is quick and the excretion rate is large.

상기 제법 1 및 2에서, 건조 종료후의 지렁이 건조물 제품의 제품화 상태는, 집합상 또는 덩어리가 혼합된 상태로 되는 수가 많다. 그러나, 이를 분쇄기를 이용하면 쉽게 분말이 된다. 지렁이의 건조물 및 지렁이의 추출물을 사람을 포함하는 포유동물에 투여할때에는 덩어리 보다는 분말이 바람직하다.In the above-mentioned manufacturing methods 1 and 2, the production state of the earthworm dried product after the completion of drying is often in the form of aggregates or lumps. However, using a grinder it is easily powdered. When the dried earthworm and the earthworm extract are administered to mammals including humans, a powder is preferred rather than a lump.

미하라 하사시 등 일본 특허 출원 공개 공보 소화 59-63184호 및 소화 59-184131호은 지렁이에서 신용효소의 6종의 신규 프로테아제를 분획하였다. 즉, 미하라 히사시 등은 지렁이 건조분말에 10배량의 생리적 식염수를 가하여 2일간 배양한 상청액에 대해서 황산암모늄 분획을 행한 다음, 그 침사를 세파크릴 S-200에 의한 겔 여과를 행하고 얻어진 단백 분획에 대해서 DEAE-셀룰로우스 이온교환 크로마토그래피를 행한결과, 카제인 분해와 피브린 분해 활성을 갖는 I, II, III 분획의 단백을 얻었다. 이 I, II, III의 분획에 대해서 다시금 DEAE-셀룰로우스, 세파멕스G-75, 토요발 WH55, ACH-세파로스, 벤즈아미딘-세파로스등에 의한 정제 처리를 행한 결과, 6분획의 정제 효소를 얻었다. SDS-PAGE로 분자량을 측정하면 분의1-0의 분자량이 제일 낮고, 23, 500이라 계산된다. 그후, 순차적으로 I -1, I -2, II, III-1, III-2로 분자량이 증가하고, III-2는 분자량 34, 200이었다.Japanese Patent Application Laid-Open No. 59-63184 and Digestion No. 59-184131, such as Mihara Hasashi, fractionated six new proteases of credit enzymes from earthworms. That is, Hisashi Mihara et al., Ammonium sulfate fractionation of the supernatant incubated for 2 days by adding 10 times the amount of physiological saline to the earthworm dry powder, and then the sediment was subjected to gel filtration by Sephacryl S-200 to obtain the protein fraction. DEAE-cellulose ion exchange chromatography was performed to obtain proteins of I, II, and III fractions having casein and fibrin degradation activities. The fractions of I, II, and III were further purified by DEAE-cellulose, Sephamex G-75, Toyobal WH55, ACH-Sepharose, Benzamidine-Sepharose, and the like. An enzyme was obtained. When the molecular weight is measured by SDS-PAGE, the molecular weight of 1-0 of the minute is the lowest, and it is calculated as 23,500. Thereafter, the molecular weight increased sequentially to I-1, I-2, II, III-1, III-2, and III-2 had a molecular weight of 34 and 200.

또 등전점 전기영동으로 이 6분획분의 등전점을 측정하면 1-0이 제일 높고, pH4. 12이며, 그후, 순차 pH는 낮아지며, III-2로 pH 3. 52이었다. 이들의 6분획은 세린 효소와도 다른 새로운 단백 분해효소이며, 또, 이들의 6분획의 단백 분해효소의 제일 적합한 pH는 8 부근 또는 pH8∼10, 안정 pH는 4∼12 또는5∼12, 제일 적합한 온도 50℃ 또는 50∼60℃, 활성 상실 조건은 70℃로 60분간이었다고 보고되고 있다.In addition, the isoelectric point of the six fractions is measured by isoelectric point electrophoresis, 1-0 is the highest and pH4. 12, then the pH was lowered gradually, and was pH 3.52 with III-2. These six fractions are new proteases that are different from serine enzymes, and the most suitable pH of these six fractions is around 8 or pH 8-10, and the stable pH is 4-12 or 5-12. A suitable temperature of 50 ° C. or 50-60 ° C., activity loss condition is reported to be 70 ° C. for 60 minutes.

상기한 제법 1 및 2에서 얻은 지렁이의 건조분말 제품 M-4 및 M-5에 10배량의 생리적 식염수를 가하여, 그 상청을 표준 피브린 평판으로 측정하면, 표-4에 나타낸 바와 같이, 바로 선용활성이 인정되었다. 이 M-4의 지렁이 건조분말의 생리적 식염수용액을 37℃ 배양하면 표-4에 나타낸 것처럼 그 상청의 선용활성은 10일째에서 약 4배로 되며, 50일재에 5배, 75일째에 5. 5배로 된다. 이 사실은 지렁이의 동결 건조분말중에는 이 단백 분해효소의 전구물질이 대량으로 존재하고, 자기 소화에 의해 효소 활성의 발현이 있는 것으로 생각된다. 이 50일째의 상청의 활성을 유로키나아제외 국제 단위로 환산하여 비교하면 약 8, 000IU/ml로 계산되었다. 또, 이 효소는 플라스미노겐·유리피브린 평간, 표준 피브린 평판마저도 용해하고, 표준 피부린 평판이 플라스미노겐. 유리평판에 비교하여 용해창이 크고, 피브린을 직접 분해할 효소 활성과 함께 플라스미노겐·활성화제의 활성도 나타내었다. 상기 조작에 있어서 M-4 대신에 M-5의 지렁이 건조분말을 사용하여 측정한 결과, 표-4와 동일 결과가 얻어졌다.When 10 times the amount of physiological saline is added to the dry powder products M-4 and M-5 of the earthworms obtained in the above-mentioned production methods 1 and 2, and the supernatant is measured with a standard fibrin plate, as shown in Table-4, immediately active activity This was recognized. When the physiological saline solution of the M-4 earthworm dry powder was incubated at 37 ° C., the supernatant activity of the supernatant was about 4 times at 10 days, 5 times at 50 days, and 5 times at 75 days as shown in Table-4. do. This fact is thought to be due to the presence of a large amount of protease of this protease in the freeze-dried powder of earthworms and the expression of enzyme activity by self-extinguishing. The activity of the supernatant on the 50th day was calculated to be about 8,000 IU / ml when compared in terms of eurokinase and other international units. The enzyme also dissolves even plasminogen free fibrin and even standard fibrin plates, and the standard dermalin plates are plasminogen. Compared to the glass plate, the dissolution window was larger, and the activity of the plasminogen-activator was shown along with the enzyme activity to directly decompose fibrin. In the said operation, it measured using the earthworm dry powder of M-5 instead of M-4, and the result similar to Table-4 was obtained.

[표 4]TABLE 4

본 발명의 지렁이 건조분말에 10배량의 생리식염수를 가하여, 37℃로 배양하였을때의 상청의 선용활성10-fold physiological saline was added to the earthworm dry powder of the present invention, and the supernatant activity of the supernatant when incubated at 37 ° C.

본 발명품의 지렁이 건조분말 및 지렁이의 추출물을 쥐 및 사람에게 경구투여함으로서 항고지열증 효과를 나타낸 이유에 대해서 상세한 이유는 불명하지만, 지렁이 건조분말 및 지렁이의 추출물중에 함유되어 있는 단백 분해효소(단백질) 자체 기타 효소류 또는 이 효소의 전구물질(단백질) 자체 혹은 단백질 또는 지질물질 혹은 기타의 미지 화합물 자체 또는 이들의 병합 작용에 의한 것으로 생각된다. 혈압조절제 또는 항고지현증제로서 제일 바람직한 본 발명품의 지렁이 건조분말의 질소 함량은 7∼l0%, 즉 조단백함량 43. 8∼62. 5%의 것이다. 혈압조절제 또는 항고지혈증제로서 가장 바람직한 본 발명품의 지렁이 건조분말의 질소 함량은 7∼l6%, 즉 조단백함량 43. 8∼100%의 것이다.The reason for showing the antihyperlipidemic effect by orally administering the earthworm dry powder and the earthworm extract of the present invention to rats and humans is not detailed, but the proteolytic enzyme (protein) contained in the earthworm dry powder and earthworm extract It is thought to be due to its own other enzymes or their precursors (proteins) themselves or proteins or lipids or other unknown compounds themselves or their combined action. The nitrogen content of the earthworm dry powder of the present invention most preferred as a blood pressure regulator or antihyperlipidemic agent is 7 to 10%, that is, crude protein content 43. 8 to 62. 5%. The nitrogen content of the earthworm dry powder of the present invention most preferred as a blood pressure regulator or antihyperlipidemic agent is 7 to 6%, that is, crude protein content of 43. 8 to 100%.

다음에 상기에 제법 1 및 2의 방법으로 얻은 지렁이의 분쇄에 의한 현탁액의 동결건조·진공건조 조작의 바람직한 구체예를 나타내면 다음과 같다.Next, the preferable specific example of the freeze-drying and vacuum-drying operation of the suspension by crushing the earthworm obtained by the method of the manufacturing methods 1 and 2 is shown below.

지렁이의 분쇄물 즉, 지렁이의 현탁액을 -10∼-60℃ 바람직하게는 -30∼-50℃로 5∼60시간 동결한 다음, 같은 온도로 0. 01∼0. 2mmHg의 진공하, 5∼12시간의 동결건조한다. 다음에 20∼30℃로 5∼15시간, 0. 01∼0. 2mmHg의 진공하에서 건조한다. 다음에 35∼50℃, 0. 1∼0. 5mmHg의 진공하에서 10∼20시간 건조한다.The grounded product of the earthworm, that is, the suspension of the earthworm, was frozen at -10 to -60 ° C, preferably -30 to -50 ° C for 5 to 60 hours, and then at the same temperature, 0.01 to 0. Lyophilization under vacuum of 2 mmHg for 5 to 12 hours. Next, 20 to 30 ° C. for 5 to 15 hours, 0.01 to 0. Dry under vacuum of 2 mmHg. Next, 35 to 50 ° C and 0.1 to 0. Dry under vacuum of 5 mmHg for 10 to 20 hours.

다음의 최종 마무리 공정의 진공건조는 0. 01∼0. 5mmHg의 진공하, 70∼80℃ 바람직하게로는 75∼80℃로 5∼10시간 진공건조하면 무균으로 또한 수분 5∼15% 함유의 지렁이 건조분말을 얻을 수 있었다. 특히 최종마무리의 진공건조가 중요 조작이다. 지렁이 건조분말 중에 함유되는 단백 분해효소 및 그 효소의 전구물질의 활성을 상실시키는 일이 없고, 지렁이의 건조분말을 무균 상태로 마무리 하기 때문에, 본 발명자는 상세히 연구한 결과, 동결건조·진공건조의 최종 공정의 진공건조 조건의 진공도(0. 01∼0. 5mmHg), 가온온도(70∼80℃), 시간(5∼10시간)의 3요소의 조합이 중요한 조건이라는 것을 알아내고, 상기한 운전 조건을 확립하였다.The vacuum drying of the next final finishing process is from 0.01 to 0. Under vacuum of 5 mmHg and vacuum drying at 70 to 80 ° C., preferably at 75 to 80 ° C., for 5 to 10 hours, aseptically, an earthworm dry powder containing 5 to 15% of moisture was obtained. In particular, vacuum drying of the final finishing is an important operation. Since the activity of the protease contained in the earthworm dry powder and the precursor of the enzyme is not lost, and the earthworm dry powder is finished in aseptic state, the present inventors have studied in detail and the results of freeze drying and vacuum drying It was found that the combination of the three factors of the vacuum degree (0.11 to 0.5 mmHg), the heating temperature (70 to 80 ° C), and the time (5 to 10 hours) of the vacuum drying conditions of the final process was an important condition. Conditions were established.

상기에 나타낸 것처럼, 지렁이 건조분말로부터의 정제 단백 분해효소의 6종 모두(일본 특허 출원 공개 공보 소화 제59-63184호 및 소화 제59-184131호) 70℃, 60분간으로 활성이 상실되는 것이 보고되고 있지만, 본 발명의 제법으로 얻은 지렁이 건조-분말 중의 단백 분해효소는 표-4에 나타낸 것처럼 활성이 상실되고 있지 않다. 이 이유는 하기와 같다.As indicated above, all six kinds of purified proteinases from earthworm dry powder (Japanese Patent Application Laid-Open No. 59-63184 and No. 59-184131) are reported to lose activity at 70 ° C. for 60 minutes. However, the protease in the earthworm dry-powder obtained by the production method of the present invention does not lose activity as shown in Table-4. This reason is as follows.

상기한 양 일본 특허 출원 공개 공보의 방법으로는 상압(1가압)하, 70℃에서 60분간 가열함으로써 단백분해효소 6종이 활성을 잃었다. 그런데 본 발명의 제법의 최종 공정에서는 0. 01∼0. 5mmHg의 고진공하에서의 70∼80℃, 5 내지 10시간의 가열때문에 지렁이 건조분말 중의 단백 분해효소는 활성을 잃지 않았다.In the method described in both Japanese Patent Application Laid-Open Publications, six proteolytic enzymes lost their activity by heating at 70 캜 for 60 minutes under normal pressure (1 pressurization). By the way, in the final process of the manufacturing method of the present invention, 0.01-0. Proteolytic enzymes in the earthworm dry powder did not lose their activity due to heating at 70-80 ° C. for 5-10 hours under high vacuum of 5 mmHg.

즉, 본 발명의 지렁이 건조분말의 최종 마무리 공정의 진공건조의 바람직한 조건으로서 상기한 가열온도 가열시간 및 진공도의 조합이 단백 분해효소를 활성을 읽게 하지 않고 잡균을 살균시키기 위한 중요 조건으로 된다. 이 조합 조건은 본 발명자들이 비로소 확립한 조건이다.That is, a combination of the above-mentioned heating temperature heating time and vacuum degree as a preferable condition for vacuum drying in the final finishing process of the earthworm dry powder of the present invention becomes an important condition for sterilizing various bacteria without causing the protease to read the activity. These combination conditions are conditions established by the present inventors.

제법 1 및 2의 방법으로 얻은 지렁이 건조분말은 5∼45℃의 실온에 밀폐 상태로 5년간 보존한 예에서는 곰팡이의 발생, 기타 변질은 전혀 보이지 않았다.In the case where the earthworm dry powders obtained by the methods of Preparation Methods 1 and 2 were stored for 5 years in a sealed state at room temperature of 5 to 45 ° C., mold development and other alterations were not seen at all.

본 발명의 항고지혈증제외 지렁이 건조분말 형태는, 상기의 제법 1 및 2에서 얻은 지렁이 건조분말 외에, 종래의 공지의 ⓘ,

및

의 제법에 의해서 얻은 지렁이의 건조물 및 그 건조분말도 가능하다.Earthworm dry powder form other than the antihyperlipidemic agent of the present invention, in addition to the earthworm dry powder obtained in the above production methods 1 and 2,

And

It is also possible to dry the earthworm obtained by the manufacturing method and its dry powder.

또, 항고지혈증제외 지렁이 추출물은, 다음 제조방법으로 얻을 수가 있다.In addition, an earthworm extract other than an antihyperlipidemic agent can be obtained by the following manufacturing method.

원료인 지렁이를 수성용매, 수혼화성 유기용매 및 수비혼화성 유기용매로 구성되는 군에서 선택되는 적어도 1종류의 추출제에 의해서 추출 처리하고, 얻어진 추출액을 농축하여 침전물로서 석출시키거나, 또는 농축추출액에 유기용매를 가하여 침전물로서 얻거나, 혹은 상압, 가압 또는 감압하에서 추출용매를 완전히 제거하여 추출물을 얻었다.The earthworm, which is a raw material, is extracted and treated with at least one extractant selected from the group consisting of an aqueous solvent, a water miscible organic solvent, and a water immiscible organic solvent, and the obtained extract is concentrated to precipitate as a precipitate, or a concentrated extract liquid. An organic solvent was added to the mixture to obtain a precipitate, or the extract solvent was completely removed under normal pressure, pressure, or reduced pressure to obtain an extract.

원료인 지렁이는, 상기 제법 1 및 2에서 얻은 지렁이 건조분말 ; 상기의 ⓘ,

및

의 공지의 제법으로 얻은 지렁이의 건조물 및 그 건조분말 ; 분토를 제거한 것 또는 분토를 함유한 산지렁이 혹은 이들의 생지렁이 ; 이들 산지렁이 및/또는 생지렁이의 분쇄 현탁액 따위 형상의 지렁이를 사용할 수가 있다. 이들 중, 가장 바람직한 원료 지렁이의 형태는, 상기의 제법 1 및 2의 조작 처리 공정에서 습식 분쇄를 하여서 얻은 지렁이의 현탁액이다. 즉, 산지렁이를 초산, 구연산, 호박산, 사과산, 주석산 또는 젖산으로 구성되는 유기산 ; 인산, 황산 또는 염산으로 구성되는 무기산 ; 이들의 유기산 나트륨염 ; 이들의 유기산칼륨염 ; 이들의 무기산 나트륨염 ; 이들의 무기산 칼륨염으로 구성되는 군에서 선택된 적어도 1종류의 화합물을 0. 3(중량)% 이하의 저농도 또는 pH3∼6. 5의 미산성의 수용액중 또는 담수중에 방치하여 산지렁이의 소화관내에 분토를 제거한 다음, 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거하여 습식분쇄를 하거나, 또는, 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거한 후의 산지렁이를 상기 수용액중 또는 담수중에 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 제거한 다음, 습식분쇄를 하여, 얻은 지렁이의 페이스트상 현탁액이다. 이 현탁액을 원료로 하였을때에는, 타형태의 지렁이보다도 용매의 사용량이 절약되고, 또한 항고지혈증제로서의 유효물질을 단시간내에 추출할 수가 있으며, 또한 처리시간 단위당 추출물량이 많은 등의 추출효율이 우수하다. 다음에 바람직한 원료 형태는 상기 제법 1 및 2에서 얻은 지렁이 건조분말이다.The earthworm which is a raw material is an earthworm dry powder obtained by said manufacturing method 1 and 2; Ⓘ above,

And

Dried earthworms and dried powder obtained by a known production method; Dirt removed or mountain earthworms containing clay or their live earthworms; It is possible to use earthworms in the form of a crushed suspension of mountain earthworms and / or live earthworms. Among these, the most preferable form of the raw earthworm is the suspension of the earthworm obtained by wet grinding in the above-described manufacturing processes 1 and 2. That is, the mountain earthworm is an organic acid composed of acetic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, tartaric acid or lactic acid; Inorganic acids composed of phosphoric acid, sulfuric acid or hydrochloric acid; These organic acid sodium salts; These organic potassium salts; These inorganic acid sodium salts; At least one compound selected from the group consisting of these inorganic acid potassium salts has a low concentration of 0.3% by weight or less, or a pH of 3 to 6. 5) Remove the soil in the digestive tract of the mountain earthworm by leaving it in the non-acidic aqueous solution of 5 or fresh water, and then wash and remove the dirt attached to the body surface of the mountain earthworm by wet grinding, or attach it to the body surface of the mountain earthworm. The earthworm after washing and removing one dirt in water is left in the aqueous solution or in fresh water to remove the soil in the digestive tract of the earthworm, and then wet-milled to obtain a paste-like suspension of the earthworm. When the suspension is used as a raw material, the amount of solvent used is reduced compared to other types of earthworms, and an effective substance as an antihyperlipidemic agent can be extracted within a short time, and the extraction efficiency such as a large amount of extract per unit of treatment time is excellent. The next preferred raw material form is the earthworm dry powder obtained in the above production methods 1 and 2.

추출용매의 수성용매는, 담수, 증류수, 생리식염수, pH5∼10의 각종 완층액 또는 각종의 조제수를 사용하는 것이 바람직하다. 완충액은 인산, 초산, 붕산, 구연산, 트리스·염산 따위의 pH5∼10 바람직하게는 pH6∼8의 각종 조성 완충액의 1종 이상이 사용가능하다. 또, pH5∼10 바람직하게는 pH6∼8의 조제액이란 염산, 황산, 인산, 초산, 젖산, 구연산, 호박산, 사과산 또는 주석산 등의 수용성 무기산, 유기산과 나트륨, 칼륨 등의 알칼리금속의 수산화물 또는 탄산염으로부터 자가조제한 희막 수용액을 의미한다. 가장 바람직한 수성용매는 생리식염수, 완충액, 담수이다. 이들 수성용매를 사용할때에는 파라히드록시 안식향산 에틸에스테르, 안식 향산나트륨염, 아지화나트륨등의 방부제를 0. 01∼0. 3(중량) % 사용하는 것이 바람직하다.As the aqueous solvent of the extraction solvent, it is preferable to use fresh water, distilled water, physiological saline, various complete layers of pH 5 to 10 or various prepared waters. The buffer solution may be one or more of various composition buffers having a pH of 5 to 10, preferably pH 6 to 8, such as phosphoric acid, acetic acid, boric acid, citric acid, tris and hydrochloric acid. The pH 5-10, preferably pH 6-8 preparation is a water-soluble inorganic acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, lactic acid, citric acid, succinic acid, malic acid or tartaric acid, organic acids and hydroxides or carbonates of alkali metals such as sodium and potassium. It means the dilute aqueous solution prepared by itself. Most preferred aqueous solvents are physiological saline, buffers and fresh water. When using these aqueous solvents, preservatives such as parahydroxy benzoic acid ethyl ester, benzoic acid sodium salt, sodium azide, etc. are used in 0.01 to 0. It is preferable to use 3 (weight)%.

수혼화성 유기용매로서는, 예로서, 메틸, 에틸, 아릴, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, s-부틸 또는 t-부틸 알코올 등의 탄소수 1∼4의 저급 알코올류 ; 아세톤 또는 에틸에틸케톤 등의 탄소수 1∼4의 케톤류 ; 에틸에테르, 1, 2-프로필렌옥시드, 디옥소란, 4-메틸디옥소란 또는 디옥산 등의 탄소수 1∼4의 에테르류; 포름산메틸, 포름산에틸, 초산메틸 등의 탄소수 1∼4의 에스테르류를 사용하는 것이 바람직하다. 이들 중, 가장 바람직한 수혼화성 유기용매는 탄소수 1∼4의 알코올류이다.As a water miscible organic solvent, For example, C1-C4 lower alcohols, such as methyl, ethyl, aryl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, s-butyl, or t-butyl alcohol; Ketones having 1 to 4 carbon atoms such as acetone or ethyl ethyl ketone; Ethers having 1 to 4 carbon atoms such as ethyl ether, 1, 2-propylene oxide, dioxolane, 4-methyldioxolane or dioxane; It is preferable to use C1-C4 esters, such as methyl formate, ethyl formate, and methyl acetate. Among these, the most preferable water miscible organic solvent is C1-C4 alcohols.

수비혼화성 유기용매로서는, 예로서, n-헥산, i-헥산, n-헵탄, i-헵탄, 옥탄, i-옥탄, 시콜로헥산, 벤젠, 톨루엔, 크실렌 또는 에틸벤젠 등의 탄소수 6∼10의 탄화수소류 ; n-헥실, 2-메틸펜틸, 2-에틸부틸, s-헥실, s-헵틸, n-옥틸, 2-에틸헥실, 2, 6-디메틸-4-헵틸, n-데실알코올을 따위의 탄소수 6∼10의 알코올류 ; 메틸-n-아밀케톤, 메틸시클로헥사논 또는 메틸헥실케톤 따위의 탄소수 7∼8의 케톤류 ; 초산 S-부틸, 초산 i-부틸, 초산-2-에틸부틸, 초산 s-아밀, 또는 초산에틸아밀 에스테르 따위의 탄소수 6∼8의 에스테르류 ; 클로로포름, 디클로로펜탄 또는 에피클로로히드린 등의 탄소수 1∼5의 할로겐화 탄화수소류 따위를 사용하는 것이 바람직하다.As a water-immiscible organic solvent, For example, C6-C10, such as n-hexane, i-hexane, n-heptane, i-heptane, octane, i-octane, a cyclohexanone, benzene, toluene, xylene, ethylbenzene, etc. Hydrocarbons; carbon number including n-hexyl, 2-methylpentyl, 2-ethylbutyl, s-hexyl, s-heptyl, n-octyl, 2-ethylhexyl, 2, 6-dimethyl-4-heptyl, n-decyl alcohol Alcohol of -10; Ketones having 7 to 8 carbon atoms such as methyl-n-amyl ketone, methylcyclohexanone or methylhexyl ketone; Esters having 6 to 8 carbon atoms such as S-butyl acetate, i-butyl acetate, 2-ethylbutyl acetate, s-amyl acetate, or ethyl amyl acetate; It is preferable to use halogenated hydrocarbons having 1 to 5 carbon atoms, such as chloroform, dichloropentane or epichlorohydrin.

추출방법은 일반적인 방법으로 실시하면 되며, 특히 한정은 없으나, 그 한 예는 다음과 같다.The extraction method may be performed by a general method, and there is no particular limitation, but one example thereof is as follows.

상기 형태의 원료 지렁이에 대하여, 수성용매, 농도 5∼70(용량)% 바람직하게는 10∼60(용량)%의 유기용매의 수용액, 농도 80∼100(용량)%의 수혼화성 유기용매, 농도 약 100%의 수비혼합성 유기용매로서 되는 군에서 선택되는 적어도 1종류의 추출제를 1∼100배량(중량/용량) 바람직하게는 2∼30배량 사용하고, 추출온도는 -50∼+60℃, 바람직하게는 -40∼+60℃ 추출 접촉 시간은 10분간에서 약 100일간 바람직하게는 30분간에서 약 40일간 동안, 때때로 또는 연속 교반을 한 후, 정치하여, 여과해서 추출액을 분취하였다. 여과는 가압 또는 강압여과기구(기계) 또는 원심분리기를 사용하는 것이 좋다. 추출 잔류물은 잘 세척한 다음, 추출액과 세액을 합친다. 추출액 또는 혼합액을 60℃ 이상의 온도에서 상압, 가압 또는 감압하에서 농축, 한외여과 농축 또는 동결건조 등의 농축법으로 추출용매를 제거하여서 추출물을 얻었다. 단, 추출제로서 예컨대 에탄올을 사용하였을때, 최종 목적제형의 종류에 따라, 완전히 제거하지 않고 에탄올을 잔류시키는 경우도 있다. 또, 상기 추출액 또는 합액의 농축액 방치에 의한 결정 석출법 또는 농축액에 유기용매를 첨가해서 결정을 석출시킨 후에, 여과, 건조시켜 추출물을 얻는 방법도 사용된다.Aqueous solvent, concentration of 5 to 70 (volume)%, preferably aqueous solution of organic solvent of 10 to 60 (volume)%, water miscible organic solvent of concentration 80 to 100 (volume)%, concentration At least one extractant selected from the group consisting of about 100% water-incompatible organic solvent is used in an amount of 1 to 100 times (weight / volume), preferably 2 to 30 times, and the extraction temperature is -50 to + 60 ° C. Preferably, the extraction contact time of −40 to + 60 ° C. is from about 10 minutes to about 100 days, preferably from 30 minutes to about 40 days, occasionally or after continuous stirring, and then, the mixture is filtered and fractionated. Filtration is preferably done using a pressurized or forced filter or a centrifuge. The extraction residue is washed well and then the extract and tax are combined. The extract or mixed solution was obtained by removing the extraction solvent by concentration, such as concentration, ultrafiltration concentration or freeze drying at atmospheric pressure, pressure or reduced pressure at a temperature of 60 ℃ or more. However, when ethanol is used as the extractant, for example, ethanol may be left without being completely removed depending on the type of the final target formulation. In addition, a method of obtaining the extract by filtering and drying the crystal after the crystal precipitation method or the concentrated liquid by adding the organic solvent to the concentrated solution of the extract or the mixed solution is precipitated.

상기 조작에서의 원료 지렁이에 대한 추출물의 수율은 건물 환산으로 3∼60(중량)%였다. 이 수율의 상이점은 원료 지렁이의 형태, 용매의 종류, 추출온도, 추출시간 기타의 추출조건에 의한다. 추출온도가 높으면, 유효물질이 분해될 위험이 있으므로 추출온도는 -40∼+60℃가 바람직하다.The yield of the extract for the raw earthworm in the above operation was 3 to 60% by weight in dry matter. The difference in yield is dependent on the type of raw earthworm, the type of solvent, extraction temperature, extraction time and other extraction conditions. If the extraction temperature is high, the extraction temperature is preferably -40 to +60 ° C because there is a risk of decomposition of the effective substance.

추출물중의 함유 성분은 표-2 및 표-3 표시와 같이, 지렁이의 건조분말 성분과 같이 18종의 아미노산, 8종의 금속 등을 함유한다. 특히, 이 추출물 중의 단백질은, 원료지렁이와 같은 아미노산으로 되는 단백질, 당질 단백질, 금속결합 단백질 등을 함유한다. 또한 추출물 중에는 유리아미노산, 지질, 각종 당질, ATP및 ATP 모양의 물질 기타 조성불명의 유효한 화학물질을 함유한다.The components contained in the extract contain 18 kinds of amino acids, 8 kinds of metals and the like as the dry powder components of the earthworm as shown in Table-2 and Table-3. In particular, the protein in this extract contains a protein consisting of amino acids such as a raw earthworm, a saccharide protein, a metal binding protein and the like. The extract also contains free amino acids, lipids, various sugars, ATP and ATP-like substances and other unknown chemicals.

본 발명에서 사용하는 지렁이의 붉은 지렁이(Lumbricus rubellus), LT 지렁이(별명 낚시 지렁이)[(Lumbricus terrestris) ], 줄무늬 지렁이 (Eisenia foetida), 갈색 낚시 지렁이 (Allolobophora caliginosa), 자색 낚시 지렁이 (Dendrobaena octaedra), 벗꽃 지렁이(Allolobophora japonica Michaelsen), 하쓰다 지렁이(Drawida hattamimizu Hatai), 검은등 지렁이(Pheretima divergens Michaelsen), 보통 지렁이(Pheretima communissima), 발지렁이(Pheretima agrestis), 시볼트 지렁이(Pheretima sieboldi Horst), 하나무늬 지렁이(Pheretima hilgendorfi), 둔치 지렁이(Pontodrilus matsushimensis Iizuka), 실지렁이(Tubifex hattai Nomura), 고또실지렁이(별명 백합지렁이)[Limmodrilus gotoi Hatai=L, socialis Stephensen]등 통상 생육하고 있는 지렁이라면 어느것이라도 이용할 수 있다.Earthworm red earthworm (Lumbricus rubellus), LT earthworm (alias fishing earthworm) [(Lumbricus terrestris), striped earthworm (Eisenia foetida), brown fishing earthworm (Allolobophora caliginosa), purple fishing earthworm (Dendrobaena octaedra) , Allolobophora japonica Michaelsen, Drawida hattamimizu Hatai, Black Spotted Earthworm (Pheretima divergens Michaelsen), Common Earthworm (Pheretima communissima), Earthworm (Pheretima agrestis), Seabolt Earthworm (Pheretimasie) If you are a native earthworm (Pheretima hilgendorfi), worm earthworm (Pontodrilus matsushimensis Iizuka), earthworm (Tubifex hattai Nomura), gothic earthworm (aka lily earthworm) [Limmodrilus gotoi Hatai = L, socialis Stephensen] Even if it is available.

본 발명의 지렁이 건조분말 및 지렁이의 추출물을 임상 치료용으로서 투여할때에는, 그것의 단독 또는 혼합으로 사용할 수가 있다. 그 형태는 경구제 또는 비경구제의 어느것이라도 좋지만, 특히 경구투여가 바람직하다. 본 발명품의 경구용의 제형으로서는, 본 발명품 자체 또는 적당한 약리적으로 허용되는 의약담체와 혼합하여 캅셀제, 정제, 과립제, 산제(분제), 코우팅제, 당의정, 유제 등의 제제가 사용된다. 의약담체로서는 예컨대, 부형제로서 유당, 백당, 반니톨, 포도당, 전분, 소르비톨, 크리신, 인산칼슘, 미결정 셀룰로우스 등 : 결합제로서 전분, 젤라틴, 아라비아검, 포도당, 백당, 소르비톨, 만니톨, 트라간토, 히드록시프로필셀룰로우스, 히드록시프로폭시메틸셀룰로우스, 카르복 시메틸셀룰로오스, 2 - 메틸-5-비닐피리딘-메타아크릴산-아크릴산메틸에틸공중합체, 폴리비닐피롤리돈, 아르긴산나트륨 등; 활택제로서 스테아린산, 경화유, 스테아린산마그네슘, 스테아린산칼슘, 폴리옥시에틸렌모노스테아레이트, 탈크, 산화규소, 폴리 에 틸렌글리콜 등 ; 붕괴제로서 감자전분, 계면활성제 등을 함유한 전분 ; 습윤제로서 라우릴 황산나트륨 등을 들 수 있다. 또한 비경구적으로 투여할 경우에는 좌제로서 사용할 수 있다. 특히 좌제의 기제로서 카카오지, 위텝솔(Witepsol), 서바날(Subanal), 폴리에틸렌글리콜, 폴리프로피렌글리콜, 글리세로젤라틴, 젤라틴캅셀 등이 사용된다. 기타 메틸파라히드록시벤조에이트, 프로필파라히드록시벤조에이트, 부틸파라히드록시벤조에이트, 부틸히드록시아니솔 등의 공지의 안전한 방부제, 기타의 안전한 색소를 배합하여 사용한다.When administering the earthworm dry powder and the earthworm extract of the present invention for clinical treatment, it can be used alone or in combination thereof. The form may be either oral or parenteral, but oral administration is particularly preferred. As an oral dosage form of the present invention, a mixture of the present invention itself or a suitable pharmacologically acceptable pharmaceutical carrier is used, such as capsules, tablets, granules, powders (powders), coating agents, dragees, emulsions and the like. Examples of pharmaceutical carriers include lactose, sucrose, vanitol, glucose, starch, sorbitol, chrysine, calcium phosphate, microcrystalline cellulose, and the like: starch, gelatin, gum arabic, glucose, sucrose, sorbitol, mannitol, and tratus as binders. Kanto, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropoxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, 2-methyl-5-vinylpyridine-methacrylic acid-methyl ethyl acrylate, polyvinylpyrrolidone, arginic acid Sodium and the like; Examples of the lubricant include stearic acid, hardened oil, magnesium stearate, calcium stearate, polyoxyethylene monostearate, talc, silicon oxide, and polyethylene glycol; Starches containing potato starch, surfactants, etc. as disintegrating agents; Sodium lauryl sulfate etc. are mentioned as a humectant. It may also be used as a suppository when administered parenterally. In particular, cacao butter, Whitepsol, Subanal, polyethylene glycol, polypropylene glycol, glycerogelatin, gelatin capsules and the like are used as the base of the suppository. Other well-known safe preservatives, such as methyl para hydroxy benzoate, propyl para hydroxy benzoate, butyl para hydroxy benzoate, and butyl hydroxy anisol, are used in combination.

본 발명의 항고지혈증제외 지렁이 건조분말 및 지렁이의 추출물의 투여량은, 투여방법, 환자의 연령, 체중, 상태 및 질환의 종류에 따라서도 변동하지만, 통상 사람에게 1일당 0. 01g에서 5g 정도가 바람직하다. 제일 바람직한 것은 1일당 0. 02g에서 2g으로 1일 1∼3회로 나누어서 투여할 수 있다.In addition to the antihyperlipidemic agent of the present invention, the dosage of the earthworm dry powder and the earthworm extract may vary depending on the administration method, the patient's age, weight, condition, and type of disease. desirable. Most preferably, it can be administered by dividing the dose from 0.02 g to 2 g per day once or three times a day.

작용 I :Action I:

본 발명 제품의 지렁이 건조분말의 독성 및 항고지혈증의 약리시험법과 그 결과에 대해서 이하, 상세히 설명하겠다.The toxicity and antihyperlipidemia pharmacological test method and results of the earthworm dry powder of the present invention will be described in detail below.

A. 급성 독성 시험 :A. Acute Toxicity Test:

체중 30±2g의 ddy계 수컷 생쥐 및 체중 100±2g의 위스타계 쥐 각 1군 5마리를 사용하여 경구투여로서의 급성독성 시험을 행하였다. 본 발명의 지렁이 건조분말 M-1(수분 10. 2%, 회분 5. 1%, 질소 9. 4% 함유) : 등 M-2(수분 10. 4%, 회분 5. 3%, 질소 8. 6% 함유) : 등 M-3(수분 10. 7%, 회분 5. 2%, 질소 9. 2% 함유) : 등 M-4(수분 10. 6%, 회분 5. 6%, 질소 9. 6%함유) : 등 M-5(수분 9. 5%, 회분 4. 5%, 질소 7. 8% 함유) : 등 M-6(수분 9. 2%, 회분 4. 7%, 질소 8. 4% 함유)의 6종 및 약효의 대조약으로서 사용한 γ-오리자놀 및 소이스테롤의 각각의 복용량을 0. 1g/kg에서 8g/kg로 증가하여, 상기한 생쥐(0. 1에서 5g/kg) 및 쥐(2에서 8g/kg)에 목구멍내 탐지봉으로 강제투여에 의해서 개별적으로 투약하였다. 시험기간중 동물은 동물실 온도 22∼23℃로 유지하고, 투약후 14일간 관찰하였다. 투약된 복용량으로서의 사망은 전혀 보이지 않았다. 투약후의 중동즉 및 행동을 경시적으로 관찰하였으나, 정상 동물군과 하등의 상위는 보이지 않았다. 또, 체중 증가도 정상 동물군과 거의 차가 없었다. 시험후에 실시한 검사에 있어서 주요기관의 여하한 부분에도 하등 거시작 장해는 보이지 않았다. 따라서, 본 발명의 지렁이 건조분말은 대단히 낮은 독성이기 매문에 LD₅₀값을 결정할 수 없었다.Acute toxicity test as oral administration was performed using 5 ddy male mice weighing 30 ± 2 g and 5 Wistar rats each weighing 100 ± 2 g. Earthworm dry powder M-1 of the present invention (water 10. 2%, ash 5. 1%, nitrogen 9. 4%): etc. M-2 (water 10. 4%, ash 5. 3%, nitrogen 8. 6%): etc M-3 (water 10. 7%, ash 5. 2%, nitrogen 9. 2%): etc. M-4 (water 10. 6%, ash 5. 6%, nitrogen 9. 6%): etc M-5 (water 9.5%, ash 4. 5%, nitrogen 7.8%): lamp M-6 (water 9.2%, ash 4.7%, nitrogen 8. Each dose of γ-orizanol and soysterol used as a control drug of 6 species (containing 4%) was increased from 0.01 g / kg to 8 g / kg, and the above-mentioned mice (0.1 to 5 g / kg) And rats (2 to 8 g / kg) were individually dosed by forced administration with a detection rod in the throat. During the test period, animals were kept at an animal room temperature of 22 to 23 ° C. and observed for 14 days after administration. No deaths as doses were seen. After the administration, the Middle East and behavior were observed over time, but there was no difference between normal animals and lower. In addition, weight gain was almost no difference from that of normal animals. In the examination conducted after the test, no failure was observed in any part of the major institutions. Therefore, the earthworm dry powder of the present invention could not determine the LD ₅₀ value because it is very low toxicity.

B. 실험적 고지혈증 쥐에 대한 작용B. Action on experimental hyperlipidemic rats

약리시험1 :Pharmacology Test 1:

1) 동물 : 체중 100±1g의 위스타계 수컷 쥐 1군 8마리를 사용하였다.1) Animals: One group of eight Wistar male rats weighing 100 ± 1 g were used.

2) 사료 : 닛뽄크레어사제 분말사료(CE-2)에 콜레스테롤 1중량% 및 코올산 0. 5중량%를 첨가하고, 잘 혼합한 것을 콜레스테롤식 사료로 하였다. 이 콜레스테롤식 사료에 본 발명의 지렁이 건조분말의 2종[M-2(수분 10. 4%, 회분 5. 3%. 질소 8. 6% 함유)와 M-5(수분 9. 5%, 회분 4. 5%, 질소 7. 8% 함유)]를 각각 2% 혼화하여 피험약사료로 하였다.2) Feed: 1% by weight of cholesterol and 0.5% by weight of kolic acid were added to a powder feed (CE-2) manufactured by Nippon Crere Co., Ltd., which was mixed well to obtain a cholesterol type feed. Two types of earthworm dry powder of the present invention [M-2 (water 10. 4%, ash 5. 3%, nitrogen 8. 6%)) and M-5 (water 9.5%, ash) 4. 5%, nitrogen 7. 8%)] 2% each was mixed to give a test feed.

3) 사육조건 : 1케이지에 쥐 한마리를 넣고, 각 사료 및 물은 자유 섭취하도록 하였다. 온도 23±1℃ 및 습도 55±5%의 항온항습으로 7일간 사육하였다. 7일간에 물 이외는 하룻밤 절식한 쥐를 펜토바르비탈나트륨[상품명 : 넴부탈(Nembutal)]을 사용한 마취하에서 복부하행 동맥으로부터 채혈하고, 냉각 원심분리에 의해 혈청을 얻었다. 혈청중의, 유리콜레스테롤(FC라 칭함), LDLC, HDL-C를 도오시바 TBA-480 자동분석 장치와 와꼬준야꾸 공업주식회사로부터 시판되고 있는 각 TA480 Test 시약을 사용하여 정량하였다. AI은 상기에 의해 계산하였다.3) Breeding condition: One rat was placed in one cage, and each feed and water were ingested freely. Breeding for 7 days at constant temperature and humidity of 23 ± 1 ℃ and 55 ± 5% humidity. Mice fasted overnight except water for 7 days were collected from the subabdominal artery under anesthesia using pentobarbital sodium (brand name: Nembutal), and serum was obtained by cooling centrifugation. Free cholesterol (referred to as FC), LDLC, and HDL-C in serum were quantified using a TOSHIBA TBA-480 automatic analyzer and TA480 Test reagents commercially available from Wako Pure Chemical Industries, Ltd. AI was calculated by the above.

4) 결과4) Results

결과를 표-5에 나타내었다.The results are shown in Table-5.

[표 5]TABLE 5

a) 각 값은 8마리의 쥐의 평균값 ±표준편차(Mean ± S. D. )를 나타냄.a) Each value represents mean ± standard deviation (Mean ± S. D.) of 8 rats.

b) 콜레스테롤 식군의 값으로부터의 유의차 : *P〈0. 05, **P〈0. 01, ***P〈0. 00lb) Significant difference from values of cholesterol diet group: * P <0. 05, ** P <0. 01, *** P <0. 00l

본 발명품의 지렁이 건조분말을 2% 첨가한 군은, 혈청중의 TC, FC, LDC-C 및 AI이 유의하게 저하했으나, HDL-C는 일정하게 유의한 변화는 없었다. 즉, 본 발명의 지렁이의 건조분말은 뛰어난 항고지혈증 효과를 갖는다는 것을 알았다.In the group to which 2% of earthworm dry powder of this invention was added, TC, FC, LDC-C, and AI in serum significantly reduced, but HDL-C did not have a significant change constantly. That is, it was found that the dry powder of the earthworm of the present invention has excellent antihyperlipidemic effect.

약리시험 2 :Pharmacology Test 2:

1) 동물 : 체중 105±1g의 Sprague-Dawley(이하 SD라 칭함)계 수컷쥐 1군 8마리를 사용하였다.1) Animals: 8 rats of Sprague-Dawley (hereinafter referred to as SD) male rats weighing 105 ± 1 g were used.

2) 사료 : 약리시험 2에 있어서의 콜레스테롤식의 성분은 표-6에 나타내있다.2) Feed: The components of cholesterol formula in pharmacological test 2 are shown in Table-6.

[표 6]TABLE 6

(주) a, b : 염류 혼합물 및 비타민 혼합물의 성분은 후꾸시마등 ; 약학잡지, 89권, 857∼862페이지(1962년)에 기재한 것을 사용하였다.(Note) a, b: Fukushima etc. as a component of a salt mixture and a vitamin mixture; The pharmaceutical journal, 89, pages 857-862 (1962) was used.

이 표 6의 성분을 잘 혼합하고, 콜레스테롤식 사료로 하였다. 피험약군의 사료는 이 콜레스테롤식 사료에 본 발명품의 지렁이 건조분말 M-3(수분 10. 7%, 회분 5. 2%, 질소 9. 2%)을 0. 25중량%, 동일한 M-1(수분 10. 2%, 회분 5, 1%, 질소 9. 4%)을 0. 5중량% 및 대조약인 γ-오리자놀(상품명 : 하이제트 세립) 또는 소이스테롤(상품명 : 모리스테롤 세립)을 0. 5 및/또는 1중량%를 각각 잘 혼합해 사료로 하였다.The components of this Table 6 were mixed well and it was set as a cholesterol type feed. The feed group of the test drug group contained the earthworm dry powder M-3 (10.7% water, 5.2% ash, 9.2% nitrogen) of 0. 25% by weight and the same M-1 Moisture 10. 2%, Ash 5, 1%, Nitrogen 9. 4%) and 0.5% by weight and the reference drug γ-orizanol (trade name: Hijet Granules) or Soysterol (trade name: Mostosterol Granules) 0 5 and / or 1% by weight of each was mixed well to obtain a feed.

3) 사육조건 : 1케이지에 쥐 2마리를 넣고, 사료 및 물은 자유 섭취하도록 하였다. 온도 23±1℃ 및 습도 55±5%의 항온 항습에서 4주간 사육하였다. 4주째에 물 이외는 하루밤 절식한 쥐를 펜토바르비탈나트륨[상품명 : 넴부탈(Nemutal)]을 사용한 마취하에서 복부 하행 대동맥으로 부터 채혈하고, 냉각원심분리에 의해 혈청을 얻었다. 혈청 중의 TC, FC, TG, PL, 유리지방산(이하 NEFA라 칭함. ), HDL-C, AI, 글루타민산 옥살로 초산트랜스 아미나아제(이하 GOT라 칭함) 및 글루타민산 비루빈산트랜스 아미나아제(이하GPT라 칭함)를 도오시바 TBA-480 자동분석장치와 와꼬준야꾸 공업주식회사로 부터 시판되고 있는 각 TA 480 Test 시약을 사용해서 정량 또한 계산하였다. 간장중의 지질은 폴크(Folch)법에 의해 추출하고, 이 간장지질중의 TC, TG 및 PL은 전술한 바와 같은 방법에 의해 정량하였다.3) Breeding condition: Two rats were put in one cage, and the feed and water were ingested freely. The animals were bred for 4 weeks at a constant temperature and humidity of 23 ± 1 ° C. and 55 ± 5% of humidity. At 4 weeks, mice fasted overnight except water were collected from the descending abdominal aorta under anesthesia using pentobarbital sodium (trade name: Nemutal), and serum was obtained by cooling centrifugation. TC, FC, TG, PL, free fatty acids (hereinafter referred to as NEFA), HDL-C, AI, glutamic acid oxalo acetate transaminase (hereinafter referred to as GOT) and glutamic acid non-rubinic acid transaminases (hereinafter referred to as GPT) in serum Quantum was also calculated using the TOSHIBA TBA-480 automatic analyzer and each TA 480 Test reagent available from Wakojun Yakku Co., Ltd. Lipids in the liver were extracted by the Folch method, and TC, TG and PL in the liver lipids were quantified by the method described above.

4) 결과 : γ-오리자놀 및 소이스테롤을 대조약으로, 본 발명품의 지렁이 건조분말의 실험적 고지혈중 쥐에 대한 효과를 표-7에 나타내었다. 본 발명의 지렁이 건조분말을 0. 25 및 0. 5% 혼합한 사료의 경우, 콜레스테롤 식군에 비해서 어느것이나 혈청중의 TC, FC, PL, NEFA를 통계학적으로 유의로 저하시켰다. TG는 저하경향을 나타내었으나, 유의한 저하는 보이지 않았다. γ-오리자놀을 0. 5 및 1% 혼합한 경우, NEFA를 유의로 저하시키는 이외는 TC, FC, TG 및 PL의 값의 유의한 저하는 보이지 않았다. 이점 대조약의 소이스테롤의 1% 혼합했을때에는 TC, FC, PL는 유의로 저하시키지만 TG 및 NEFA의 값은 콜레스테롤 식군과 대개 같은 값이었다. HDL-C는 상기에 나타낸 것처럼 동맥경화를 개선하는 인자로 되어 있고, 이 수치의 증가는 항고지혈증제로서 유용한 성질이라는 것이 많은 기초 및 임상의 연구자에 의해 명백하게 되어졌다. 본 발명품 첨가군은 표-7에서 나타낸 것처럼 콜레스테롤 식군에 비하여 통계학적으로 유의하게 HDL-C를 증가시키는 것이 확인되었다. 한편 대조약의 γ-오리자놀에서는 증가작용이 보이지 않았다. 그러나, 소이스테롤에서는 유의한 증가가 안정되었다. AI을 저하시키는 작용은, 항고지혈증제의 작용으로서 유용한 것은 상기하였으나, 본 발명품및 대조약 소이스테롤의 첨가군에서는 유의하게 저하시키는것이 확인되었다. 그러나, 대조군의 γ-오리자눌은 저하경향을 나타내었으나, 유의한 저하이지는 않았다.4) Results: Table 7 shows the effects of γ-orizanol and soysterol on rats of experimental hyperlipidemia of the earthworm dry powder of the present invention. In the feed mixed with the earthworm dry powder of 0.25% and 0.5% of the present invention, TC, FC, PL, and NEFA in serum were significantly lowered in the serum than in the cholesterol group. TG showed a tendency to decline, but no significant degradation was seen. When γ-orizanol was mixed with 0.5 and 1%, no significant degradation of the values of TC, FC, TG and PL was observed except for significantly lowering NEFA. Benefits When 1% of soysterol in the control group was mixed, TC, FC, and PL were significantly decreased, but the values of TG and NEFA were generally the same as those of the cholesterol group. As indicated above, HDL-C has been a factor for improving arteriosclerosis, and it has been evident by many basic and clinical researchers that this increase in value is a useful property as an antihyperlipidemic agent. It was confirmed that the group of the present invention increased HDL-C significantly as compared to the cholesterol diet group as shown in Table-7. On the other hand, there was no increase in the γ-orizanol of the reference drug. However, significant increases were stabilized in soysterol. Although the action of lowering AI was useful as an action of an antihyperlipidemic agent, it was confirmed that the addition of the present invention and the control agent soysterol was significantly lowered. However, γ-orizanol of the control group showed a tendency to decrease, but not a significant decrease.

상기와 바와 같이 시판되고 있는 항고지혈증제 안에는 부작용으로서 간장해를 발생하는 것이 있다. 따라서, 장기 인용할 때에는 문제로 되어간다. 간장에 미치는 영향을 조사하기 위해 혈청중의 GOT, GPT를 측정하였다. 일반적으로 이들의 검사치의 상승은 간기능 장해를 시사하는 것이 알려지고 있다. 본 발명품 첨가군은 콜레스테롤 식군에 비하여 GOT 및 GPT 함께 유의한 저하를 나타내었다. 한편, 대조약의 γ-오리자놀의 0. 5% 첨가군에서는 유의이지는 않지만, 명확한 상승경향을 나타내고, 1% 첨가군에는 GOT 및 GPT 함께 유의한 상승을 나타내었다. 그점 대조약의 소이스테롤 1% 첨가군은, 콜레스테롤 식군보다도 GOT 및 GPT 모두 낮은 값을 나타냈으나, 유의한 저하이지는 않았다. 간장의 중량은 본 발명품 첨가군은 콜레스테롤 식군보다도 유의한 저하를 나타내지만, 대조약인 γ-오리자놀 및 소이스테롤 첨가군에서는 콜레스테롤 식군과 거의 차이가 보이지 않았다. 간지질중의 TC는, 본 발명품 및 양대조약의 첨가군 모두에콜레스테롤 식군에 대하여 유의한 저하를 나타내었다. 간지질중의 TG는, 본 발명품 및 양제조약의 첨가군 모두에 약간의 저하경향을 나타내지만, 본질적인 변화는 보이지 않았다. 간지질 중의 PL는, 본 발명품 첨가군은 콜레스테롤 식군에 대하여 유의한 저하를 나타내었으나, 양 대조약의 첨가군은 변화가 보이지 않았다. 랫트의 체중에 대해서는, 본 발명품 및 양대조약의 첨가군 모두 순조롭게 중량하고, 유의한 변화가 보이지 않았다.As described above, some of the antihyperlipidemic drugs on the market cause liver damage as a side effect. Therefore, when long-term citation becomes a problem. Serum GOT and GPT were measured to investigate the effect on the liver. In general, it is known that an increase in these test values suggests a liver failure. The present group added significantly lower GOT and GPT than cholesterol diet group. On the other hand, it was not significant in the 0.5% addition group of γ-orizanol of the reference drug, but showed a clear upward trend, and GOT and GPT in the 1% addition group showed a significant increase. The 1% soysterol addition group of the control group showed lower values of GOT and GPT than the cholesterol diet group, but there was no significant decrease. The weight of soy sauce was significantly lower than that of the cholesterol-containing group in the present invention, but there was almost no difference in the cholesterol-containing group in the γ-orizanol and soysterol-added groups. TC in the liver lipid showed a significant decrease with respect to the cholesterol group in both the present invention and the addition group of both treaties. TG in the liver lipid showed a slight tendency of deterioration in both the present invention and the addition group of the pharmaceutical preparations, but no substantial change was seen. PL in the liver lipids showed a significant decrease in the cholesterol-added group of the present invention, but there was no change in the added group of both control drugs. As for the weight of the rats, both the present invention and the two groups added the weights smoothly, and no significant change was seen.

[표 7]TABLE 7

작용II : 본 발명 제품 지렁이 추출물의 독성 및 항고지혈증의 약리시험법과 그 결과에 대하여 다음에 설명한다.Action II: The pharmacological test method of the toxicity and antihyperlipidemia of the earthworm extract of the present invention and the results thereof will be described below.

원료의 조제 :Preparation of raw materials:

제법 3Preparation method 3

지렁이 건조분말의 조제 : 산지렁이(붉은 지렁이) 10kg(약 2만마리)을 사과산과 젖산 2 : 1의 혼합산을 용해시킨 pH 5. 8의 산성 수용액 20/중에 온도 15℃에서 3시간 방치하고, 소화관내의 분토를 층분히 배설시켰다. 이 산지렁이를 물로 잘 세척하어 산지렁이의 체표면에 부착한 흙, 분 따위 오물을 제거한 후, 간단히 수분을 제거하여 얻은 지렁이 그대로를 일트리 호모믹서(닛뽕세이끼주식회사제)로 습식분쇄하고, 지렁이의 농후 현탁액 9. 3kg을 얻었다. 이 농후 지렁이 현탁액을 1. 55kg씩으로 6등분하여, 각각을 E-1, -2, -3, -4, -5 및 -6으로 한다.Preparation of earthworm dry powder: 10 kg (about 20,000) of earthworms (red earthworms) are left for 3 hours at a temperature of 15 ° C. in an acidic aqueous solution of pH 5. 8 in which a mixed acid of malic acid and lactic acid 2: 1 is dissolved. The soil in the digestive tract was thoroughly excreted. After washing the earthworms well with water to remove the soil and dirt attached to the body surface of the earthworms, the earthworms obtained by simply removing the moisture are wet-crushed with an iltree homomixer (manufactured by Nippon Seiki Co., Ltd.), 9. 3 kg of a rich suspension of the earthworms were obtained. The thick earthworm suspension is divided into six equal parts of 1.55 kg each to be E-1, -2, -3, -4, -5 and -6.

상기에서 얻은 E-1과 E-2의 지렁이의 농후 현탁액 1. 55kg을 각각의 트레이에 넣고 -40℃에서 30시간 동결한다. 다음에 품은을 -40℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 6시간 동결 건조시키고, 다음에 25℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 8시간 건조시킨 다음, 45℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 12시간 건조시킨 다음, 마지막으로 80℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 6시간 건조시키므로서, 2개의 트레이 각각에 지렁이 건조물 318g을 얻었다. 이것을 K-1 및 K-2로 한다.The rich suspension of the earthworms of E-1 and E-2 obtained above is placed in each tray and frozen at -40 ° C for 30 hours. The bearing was then lyophilized at −40 ° C. under vacuum of 0.1 mmHg for 6 hours, then at 25 ° C. for 8 hours under vacuum of 0.1 mmHg and then at 45 ° C. under vacuum of 0.1 mmHg for 12 hours. Then, finally drying at 80 ° C. under a vacuum of 0.1 mmHg for 6 hours, 318 g of earthworm dried products were obtained in each of the two trays. Let this be K-1 and K-2.

추출물의 조제 :Preparation of the extract:

X-①. 지렁이의 건조물(K-1) 315g에 5배량의 99% 메탄올 1. 575ℓ를 가하여, 25℃에서 3회 추출한 다음, 마지막으로 잔류물을 3배량의 99% 메탄올 0. 945/로 세척하고, 추출액과 세액의 혼합액을 30℃에서 감압 농축 건고시킨 다음, 진공 건조에 의해서 88. 2g의 분말 추출물을 얻었다. 이것을 추출물 X-①으로 한다.X-①. Five hundred 99% methanol 1.575L was added to 315 g of the earthworm's dry matter (K-1), followed by extraction three times at 25 ° C., and finally the residue was washed with three times 99. methanol 0.95 /. The mixed solution of the supernatant was concentrated to dryness under reduced pressure at 30 ° C., and then 88.2 g of a powder extract was obtained by vacuum drying. Let this extract X-①.

X-②. 지렁이의 건조물(K-2) 315g에, 3배량의 클로로포름 0. 945ℓ와 2배량의 에탄올 0. 63ℓ의 혼합액을 가하고, 20℃에서 3회 추출한 다음, 마지막으로 잔류물을 2배량의 에탄올 0. 63ℓ로 세척하고, 추출액과 세액의 혼합액을 30℃에서 감압하에 농축 건조시킨 다음, 진공 건조하므로서 72. 5g의 분말 추출물을 얻었다. 이것을 추출물 X-②으로 한다.X-②. To 315 g of the earthworm's dry matter (K-2), a mixture of 0.94 L of 3 times chloroform and 0.63 L of 2 times ethanol was added, extracted three times at 20 DEG C, and finally the residue was extracted with 2 times ethanol 0. The mixture was washed with 63 L, and the mixed solution of the extract and the washing solution was concentrated to dryness under reduced pressure at 30 deg. C, and then vacuum dried to obtain 72. 5 g of powder extract. Let this be extract X-②.

X-③. 지렁이의 현탁액(E-3) 1. 55kg에 담수 6. 2ℓ를 가하여 10℃에서 2시간 교반한 다음, 여과하여 추출액과 잔류물로 분취한다. 잔류물을 수세한 다음 추출액과 세척액과의 혼합액 7. 7ℓ를 얻었다. 이 혼합액 7. 7ℓ에 n-핵산 2. 31ℓ를 가하여 교반한 다음, 정치하고, 수용부 층과 n-헥산층으로 분리한 다음, 수용부 층을 분취해서, 30℃에서 감압 농축 건고시킨 후, 동결건조시켜, 분말 추출물 86. 8g을 얻었다. 이것을 추출물 X-③으로 한다.X-③. Earthworm Suspension (E-3) 1. Add 55 liters of fresh water to 55 kg, stir at 10 ° C for 2 hours, filter, and separate the mixture with an extract. The residue was washed with water to obtain 7. 7 L of a mixture of the extract and the wash solution. 7.7 L of this mixed solution was added with 2.31 L of n-nucleic acid, followed by stirring. The mixture was left to separate into an accommodating layer and an n-hexane layer. The aqueous layer was aliquoted and concentrated to dryness under reduced pressure at 30 deg. Lyophilization gave 86. 8 g of powder extract. Let this be extract X-③.

X-④. 지렁이의 현탁액(E-4) 1. 55kg에 40% 에탄올 수용액 10ℓ를 가하고, 40℃에서 12시간 교반한다음, 여과하여, 추출액과 잔류물로 분취한다. 잔류물은 40% 에탄올 0. 3ℓ로 세척한 다음, 추출액과 세척액과의 혼합액을 40℃에서 감압 농축 건고시킨 다음, 진공 건조시키고, 분말의 추출물 69. 7g을 얻었다. 이것을 추출물 X-④로 한다.X-④. Earthworm Suspension (E-4) 1. To 55 kg, 10 L of 40% ethanol aqueous solution is added, stirred at 40 DEG C for 12 hours, filtered, and separated into an extract and a residue. The residue was washed with 0.3 L of 40% ethanol, and then the mixed solution of the extract and the washed solution was concentrated to dryness under reduced pressure at 40 ° C, and then dried in vacuo to give 69.7 g of an extract of the powder. Let this be extract X-④.

X-⑤. 지렁이의 현탁액(E-5) 1. 55kg에 pH 6. 4의 인산 완충액 2. 5ℓ를 가하여, 37℃에서 8시간 인큐베이숀하고, 지렁이 체내에 원래부터 함유되어 있는 프로테아제외 작용을 촉진시킨 다음, 여과하여 잔류물을 pH 6. 4의 인산 완충액으로 세척하고, 추출액과 세척액과의 혼합액 3. 9ℓ를 얻었다. 이 혼합액에 아지화나트륨 1g을 가하여 37℃에서 8시간 인큐베이숀한 다음, 30℃에서 감압 농축하고, 얻은 농축액에 2배량의 에탄올을 가하여 침점물을 여과시켜, 분취한 침전을 진공 건조시킨 다음, 동결 건조시켜 분말의 추출물 64. 2g을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑤로 한다.X-⑤. Earthworm suspension (E-5) 1. Add 55 liters of pH 6.4 phosphate buffer solution 2. 5L and incubate at 37 ° C for 8 hours to promote extra-protease activity originally contained in the earthworm body. The residue was filtered and the residue was washed with a phosphate buffer of pH 6. 4 to obtain 3.9 L of a mixture of the extract and the wash. 1 g of sodium azide was added to the mixture, incubated at 37 ° C. for 8 hours, concentrated under reduced pressure at 30 ° C., twice the amount of ethanol was added to the resulting concentrate, the precipitate was filtered off, and the precipitated precipitate was vacuum dried. The mixture was freeze-dried to obtain 64. 2 g of an extract of the powder. Let this be extract X-⑤.

X-⑥. 지렁이의 현탁액(E-6) 1. 55kg을 햇빛으로 자연 건조시킨 다음, 분말화한 지렁이의 건조분말(K-3이라 한다)에 에탄올과 에틸에테르 2 : 1의 혼합용매 900ml를 가하고 20℃에서 3회 추출한다. 마지막으로, 잔류물을 상기 혼합용매로 세척하고, 추출액과 세척액의 혼합액을 30℃에서 감압하에 농축 건고시킨다음, 진공 건조시키므로서 61. 5g의 추출물을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑥으로 한다.X-⑥. Earthworm Suspension (E-6) 1. Naturally dry 55 kg of sunlight, and add 900 ml of a mixed solvent of ethanol and ethyl ether 2: 1 to the powdered dry powder (called K-3) at 20 ℃. Extract 3 times. Finally, the residue was washed with the mixed solvent, and the mixed solution of the extract and the washed solution was concentrated to dryness under reduced pressure at 30 ° C., and then dried in vacuo to give 61. 5 g of the extract. Let this be extract X-⑥.

제법 4Recipe 4

지렁이 건조분말의 조제 : 양식 산지렁이(붉은 지렁이) 15kg(약 2만 6천마리)의 체표면에 부착한 오물(분토, 흙, 지푸라기 등)을 물로 제거한 후, 사과산과 구연산의 1 : 1 혼합액을 용존하는 pH 6. 2의 산성 수용액 40ℓ중에 온도 18℃에서 3시간 방치하고, 소화관내의 분토를 층분히 배설시킨 다음, 산지렁이를 물로 잘 세척하여 산지렁의 체표면에 부착된 흙, 분 따위 오물을 제거한 후, 단순히 수분을 제거해서 얻은 산지렁이의 그대로를 믹서로 분쇄하여, 지렁이의 농후 현탁액 9. 0kg을 얻었다. 이 지렁이 농후 현탁액을 1. 5kg씩 6등분하고, 이를 E-7, -8, -9, -10, -11, -12로 한다. 이 E-7과 E-8의 지렁이 농후 현탁액 1. 5kg을 각각의 트레이에 넣고 -30℃에서 40시간 동결시킨 다음에, 품은 -40℃에서 0, 1mmHg의 진공하에서 6시간 동결 건조시키고, 다음에 트레이를 얹어 놓은 선반의 온도를 30℃로 올려 0. 1mmHg의 진공하에서 6시간 건조시킨 후, 선반온도를 50℃로 올리고, 0. 2mmHg의 진공하에서 8시간 진공 건조시킨 다음, 마지막으로 선반온도를 78℃로 올려, 0. 2mmHg의 진공하에 8시간 건조시키므로서 지렁이의 건조분말 305g씩을 얻었다. 이것을 K-7과 K-8로 한다.Preparation of earthworm dry powder: 15 kg (about 26,000 fish) of farmed mountain earthworms (red earthworms) are removed from the soil surface (dust, soil, straw, etc.) with water, and then 1: 1 mixture of malic acid and citric acid is removed. In a 40 liter of acidic aqueous solution of pH 6. 2, it was left for 3 hours at a temperature of 18 ° C. The soil in the digestive tract was thoroughly excreted, and the earthworms were washed well with water. After removing the dirt, the earthworm obtained by simply removing moisture was ground with a mixer to obtain 9.0 kg of a rich suspension of the earthworm. The earthworm rich suspension is divided into 1.5 parts by 5 kg, which is E-7, -8, -9, -10, -11, -12. This earthworm rich suspension of E-7 and E-8 was placed in each tray and frozen at -30 ° C for 40 hours, and the product was freeze-dried at -40 ° C under vacuum of 0, 1 mmHg for 6 hours, then The tray on which the tray is placed at 30 ° C. and dried for 6 hours under a vacuum of 0.1 mmHg, the shelf temperature was increased to 50 ° C., and vacuum dried for 8 hours under a vacuum of 0.2 mm Hg, and finally the shelf temperature. Was heated to 78 deg. C, and dried in a vacuum of 0.2 mmHg for 8 hours to obtain 305 g of dry powder of the earthworm. Let this be K-7 and K-8.

추출물의 조제 :Preparation of the extract:

X-⑦. 지렁이의 건조물(K-7) 300g에, 3ℓ의 0. 02% 파라히드록시 안식향산 에틸에스테르를 함유하는 0. 9% 염화나트륨 수용액을 가하고, 30℃에서 96시간 교반한후, 여과하여, 잔류물을 0. 9/의 0. 9% 염화나트륨 수용액으로 세척하고, 추출액과 세척액을 혼합한 청동 추출액 3. 8ℓ를 얻었다. 이것을 한의 여과법으로 농축하고, 액량을 0. 16ℓ로 해서, 여기에 에탄올 0. 16ℓ를 가하여 침전 분류한 후의 여과액에 최종농도로서 에탄올 농도가 80%로 되도록 첨가해서 얻은 침전을 진공 건조시켜, 결정분말 14. 4g을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑦-1로 한다. 추출물 X-⑦-1의 여과액을 30℃에서 감압농축 건조시키므로서 72. 5g의 결정분말을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑦-2로 한다.X-⑦. To 300 g of the earthworm dried product (K-7), an aqueous 0.9% sodium chloride solution containing 3 liters of 0.2% parahydroxybenzoic acid ethyl ester was added, stirred at 30 ° C for 96 hours, and then filtered. 3. 8 L of a bronze extract, which was washed with 0.9 / 0.9% aqueous sodium chloride solution and mixed with the extract, was obtained. This was concentrated by a single filtration method, and the amount of liquid was 0.16 L. To this was added 0.16 L of ethanol to precipitate fractionation, and the precipitate obtained by adding ethanol concentration to 80% as a final concentration was dried under vacuum to determine 14.14 g of powder was obtained. Let this be the extract X-⑦-1. The filtrate of the extract X-⑦-1 was concentrated under reduced pressure at 30 ° C. to obtain 72. 5 g of crystal powder. Let this be the extract X-⑦-2.

X-⑧. 지렁이 건조물(K-8) 300g에 3ℓ의 0. 1% 안식향산나트륨을 함유하는 담수를 첨가하고, 32℃에서 72시간 교반 추출한 후, 여과하고, 잔류물을 0. 6ℓ의 담수로 세척하여, 추출액과 세척액을 합친 청동 추출액 35ℓ를 얻었다. 이 추출액을 한외 여과법으로 농축한 액을, 다음에 감압 농축 건고시키므로서 69g의결정 분말을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑧로 한다.X-⑧. To 300 g of earthworm dry matter (K-8) was added fresh water containing 3 L of 0.01% sodium benzoate, stirred and extracted at 32 ° C for 72 hours, filtered and the residue was washed with 0.6 L of fresh water, and the extract was extracted. 35 L of the bronze extract combined with the wash solution was obtained. 69 g of crystalline powder was obtained by concentrating the extract which concentrates this extract by an ultrafiltration method, and then concentrating under reduced pressure. Let this be extract X-⑧.

X-⑨. 지렁이의 현탁액(E-9) 1. 5kg을 40℃에서 진공 건조하고, 분말화한 지렁이의 건조분말(K-9)에, 3ℓ의 0. 02% 파라히드록시 안식향산 에틸에스테르를 함유하는 증류수를 가하여, 32℃에서 120시간 교반한 다음, 여과해서, 추출액과 잔류물로 분취한다. 잔류물을 증류수로 잘 세척한 다음, 추출액과 세척액과의 혼합액을 30℃, 약 1/10량으로 감압 농축한 다음, 4배량의 에탄올을 가하여, 잘 교반한 다음, 1주야 정치하여, 생성된 침전을 여과하고, 에탄올로 세척한 후, 진공 건조시켜 분말 추출물 72. 5g을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑨로 한다.X-⑨. Earthworm Suspension (E-9) 1. 5 kg was vacuum-dried at 40 ° C., and distilled water containing 3 liters of 0.2% parahydroxybenzoic acid ethyl ester was added to the powdered dry powder (K-9). The mixture was stirred at 120 DEG C for 120 hours, filtered and separated into an extract and a residue. The residue was washed well with distilled water, and then the mixture was concentrated under reduced pressure at 30 ° C. and about 1/10 of the mixture, and then 4 times of ethanol was added thereto, stirred well, and left standing overnight. The precipitate was filtered off, washed with ethanol and dried in vacuo to give 72. 5 g of powder extract. Let this be extract X-⑨.

X-⑩. 지렁이 현탁액(E-10) l. 5kg에 60% 에탄올 수용액 7. 5ℓ를 가하고, 밀봉 상태에서 수시로 교반하면서 20∼22℃에서 8일간 정치하였다. 그후, 여과하여 잔류물을 50% 에탄올 수용액 0. 5ℓ로 세척하고, 추출액과 세척액과의 혼합액을 30℃에서 감압 농축 건고시킨 다음 동결 건조시켜, 분말 추출물 40. 5g을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑩으로 한다.X-⑩. Earthworm Suspension (E-10) l. 7. 5 L of 60% ethanol aqueous solution was added to 5 kg, and it left still for 8 days at 20-22 degreeC, stirring frequently in a sealed state. Thereafter, the residue was filtered and washed with 0.5 L of a 50% ethanol aqueous solution. The mixture of the extract and the washed solution was concentrated to dryness under reduced pressure at 30 ° C., and then freeze-dried to obtain 40. 5 g of a powder extract. Let this be extract X-X.

X-⑪. 지렁이의 현탁액(E-11) 1. 5kg에 50% 에탄올 수용액 4. 5ℓ와 50% 이소프로판을 수용액 3ℓ의 혼합 용매를 가하고, 밀봉상태에서 수시로 교반하면서 8℃에서 16일간 정치하였다. 그후, 여과하여, 잔류물을 50% 에탄올 수용액 0. 5ℓ로 세척하고, 추출액과 세척액과의 합액을 35℃에서 강압 농축 건고시킨 다음, 동결 건조시켜, 분말 추출물 28. 2g을 얻었다. 이것을 추출물 X-⑪로 한다.X-⑪. Earthworm suspension (E-11) 1. 5 kg of 50% ethanol aqueous solution 4. 5 L and 50% isopropane were added to a mixed solvent of 3 L aqueous solution, and the mixture was allowed to stand at 8 ° C. for 16 days with frequent stirring. Thereafter, the residue was filtered, the residue was washed with 0.5 L of a 50% ethanol aqueous solution, the combined solution of the extract and the washed solution was concentrated to dryness at 35 ° C, and then lyophilized to obtain 28.2 g of a powder extract. This is called extract X-X.

X-⑫. 지렁이의 현탁액(E-12) 1. 5kg에 60% 에탄올 수용액 7. 5ℓ를 가하고, 25℃에서 2시간 교반하면서 3회 추출하고, 마지막으로 잔류물을 60% 에탄올 수용액 1ℓ로 세척하여, 추출액과 세척액의 혼합액을 30℃에서 강압 농축 건고시킨 다음, 동결 건조시키므로서 90. 5g의 분말 추출물을 얻었다. 이것을 추출물X-⑫로 한다.X-⑫. Earthworm suspension (E-12) 1. Add 5 kg of 60% ethanol solution 7. 5 liters, extract three times with stirring at 25 ° C. for 2 hours, and finally wash the residue with 1 l of 60% ethanol solution. The mixed solution of the washing solution was concentrated under reduced pressure at 30 ° C. and then freeze-dried to obtain 90. 5 g of powder extract. Let this be extract X-X.

본 발명의 지렁이 추출물, 즉, 원료지렁이를 수성 용매, 수혼화성 유기용매 및 수 비혼화성 유기용매로 구성되는 군에서 선태되는 적어도 1종류의 추출제에 의해서 추출 처리하고, 얻어진 추출물의 특성 및 항고지형증의 약리 시험법과 그 결과는 다음과 같다.The earthworm extract of the present invention, i.e., the raw earthworm is extracted and treated with at least one extractant selected from the group consisting of an aqueous solvent, a water miscible organic solvent, and a water immiscible organic solvent, and the characteristics and anti-fatty shape of the extract obtained. The pharmacological test of symptom and the result are as follows.

A-1. 급성 독성시험 : 상기 A. 급성 독성시험법과 같은 방법에 의하여 측정하였다. 즉, 체중 30±2g의 ddy계 수컷 마우스 각 1군 5마리를 사용해서 경구 투여에 의한 급성 독성시험을 하였다. 예로서, 상기 본 발명의 지렁이 추출물 X-①, -②, -③, -④, -⑥, -⑨, -⑩ 및 -⑫의 8종을 사용하여, 상기의 마우스에 0. 1g/kg으로 부터 59/kg로 증가하여, 인후 프로브봉으로 강제 투여에 의해 개개로 투약하였다. 시험중 마우스는 동물실 온도 22∼23℃로 유지하고, 투약후 14일간 관찰하였다. 투약된 복용량에서의 사망은 전연 인지되지 않았다. 또한 중독 증사의 소견이나 부검에서는 이상이 전연 없었다. 따라서, 본 발명의 지렁이로 부터의 수성용매 및/또는 유기용매에 의한 추출물은 대단히 낮은 독성 때문에 LD₅₀치를 결정할 수가 없었다.A-1. Acute Toxicity Test: It was measured by the same method as A. Acute Toxicity Test. In other words, acute toxicity test by oral administration was performed using 5 ddy male mice each weighing 30 ± 2 g. For example, using the eight kinds of the earthworm extract X-①, -②, -③, -④, -⑥, -⑨, -⑩ and -⑫ of the present invention, the mouse at 0.1 g / kg From 59 / kg, individually administered by forced administration with a throat probe rod. Mice were kept at an animal room temperature of 22-23 ° C. and observed for 14 days after dosing. Death at the administered dose was not entirely recognized. In addition, there was no abnormality in autopsy findings or autopsy. Therefore, the extract by the aqueous solvent and / or organic solvent from the earthworm of the present invention could not determine the LD ₅₀ value because of its very low toxicity.

B-1. 실험적 고지혈증 래트에 대한 작용B-1. Action on experimental hyperlipidemic rats

약리시험 3 : 상기 B. 실험적 고지혈증 래트에 대한 작용의 약리시험 1과 같은 방법에 의하여 측정하였다. 즉,Pharmacological Test 3: The same method as Pharmacological Test 1 of B. Experimental hyperlipidemic rat action was measured. In other words,

1) 동물 : 상기 약리시험 1과 같다.1) Animal: Same as pharmacological test 1.

2) 사료 : 닛뽕크레아 사제 분말사료(CE-2)에 콜레스테롤 1wt% 및 콜산 0. 5wt%를 첨가하고, 잘 혼합한 것을 콜레스테롤 식사료로 하였다. 이 콜레스테롤 식사료에, 본 발명의 지렁이 건조분말의 4종[K-1, -3, -7 및 -9]을 2wt% 혼화하고, 또, 본 발명의 지렁이로 부터의 추출물 7종[X-①, -②, -③, -④, -⑥, -⑩ 및 -⑫]을 0. 4wt% 혼화하여 피험 약사료로 하였다.2) Feed: 1 wt% of cholesterol and 0.5 wt% of cholic acid were added to the powder feed (CE-2) manufactured by Nippon-Crea Corporation, and a well mixed one was used as a cholesterol meal. 2 wt% of four kinds [K-1, -3, -7 and -9] of the earthworm dry powder of the present invention were mixed with this cholesterol diet, and seven kinds of extracts from the earthworm of the present invention [X- ①, -②, -③, -④, -⑥, -⑩ and -⑫] were mixed with 0.4 wt% to obtain a test feed.

3) 사육조건 : 상기의 약리시험 1과 같다.3) Breeding condition: Same as pharmacological test 1 above.

4) 결과 : 결과는 표-7-1에 표시하였다.4) Results: The results are shown in Table-7-1.

[표 7a]TABLE 7a

a) 각 수치는 8마리의 래트의 평균치 ± 표준편차(Mean±S. D. )를 표시한다.a) Each figure represents the mean ± standard deviation (Mean ± S. D.) of 8 rats.

b) 콜레스테롤 식군의 값으로부터의 유의차 :^*P〈0. 05,^**P〈0. 01,^***P〈0. 001b) Significant difference from values of cholesterol diet group: ^* P <0. 05, ^** P <0. 01, ^*** P <0. 001

표-7-1에 표시하는 바와같이, 본 발명의 지렁이 건조 분말을 2wt% 첨가한 군과 지렁이의 추출물을 0. 4wt% 첨가한 군의 사이에는 효과의 차가 없었다. 즉, 양군의 혈청중의 TC, FC, LDL-C, HDL-C 및 AI의 값이 대략 같았다.As shown in Table-7-1, there was no difference in effect between the group to which the earthworm dry powder of the present invention was added 2wt% and the group to which the extract of the earthworm was added 0.4 wt%. That is, the values of TC, FC, LDL-C, HDL-C and AI in serum of both groups were approximately equal.

이 사실에서, 단위 중량당 지렁이의 추출물은 지렁이의 건조분말에 대하여 5배의 항고지혈증 활성을 가지는 것을 알았다.In this fact, it was found that the extract of the earthworm per unit weight had 5 times the antihyperlipidemic activity against the dry powder of the earthworm.

또, 양군 공히, 혈청중의 TC, FC, LDL-C 및 AI가 상당히 저하하였으나, HDL-C는 일정하며 별로 변화가 없었다.In both groups, TC, FC, LDL-C and AI in serum were significantly decreased, but HDL-C was constant and did not change much.

그러나, 본 발명의 지렁이 건조분말 및 지렁이 추출물은 뛰어난 항고지혈증 활성을 가짐을 알았다.However, the earthworm dry powder and earthworm extract of the present invention was found to have excellent antihyperlipidemic activity.

C. 지렁이 건조분말의 사람에 대한 경구 투여실험 :C. Oral Administration of Human Earthworm Dry Powder:

본 실험에 찬성한 4명의 지원자에 대하여, 후술하는 실시예 10에서 제조한 캅셀제 D[1제중에 지렁이 건조분말(전기한 M-2, 수분 10. 4%, 회분 5. 3%, 질소, 8. 6% 함유)150mg]를 1회 1제 1일 3회를 식후 30분이내의 경구 복용으로 하였다. 혈청 지질의 측정은 원칙으로서 약제 복용후 3∼4개읠 마다로 하고, 복용기간 6∼7개월간 조조 공복시에 채혈하여 혈청중의 TC, TG, HDL-C 및 AI을 측정하였다. 측정법은 전기와 같은 와꼬준야꾸 주식회사 시판중인 키트를 사용하였다. 이 결과는 표-8에 나타내었다.For four volunteers who agreed to this experiment, earthworm dry powder (previous M-2, water 10. 4%, ash 5. 3%, nitrogen, 8) 150 mg] was used once orally 3 times a day within 30 minutes after eating. As a rule, serum lipids were measured every 3 to 4 mm after administration of the drug, and blood was collected on an empty stomach for 6 to 7 months during the administration period to measure TC, TG, HDL-C and AI in serum. The measurement method used the kit commercially available from Wakojun-yaku Co., Ltd. as described above. The results are shown in Table 8.

[표 8]TABLE 8

이 4명의 지원자에게 본 발명의 지렁이 건조분말의 투여 실험을 행한 지방 주민 건강인의 혈청 지질의 표준치(mg/dl)는 TC 130∼230, TG 50∼170, HDL-C 35∼60이다.The standard values (mg / dl) of serum lipids of the local health workers who conducted the test of the earthworm dry powder of the present invention to these four volunteers are TC 130-230, TG 50-170, and HDL-C 35-60.

표-8에 나타낸 것처럼, 투여전의 4명의 전원의 TC 값은, 어느 것이나 표준값을 넘고 있었다. TC 및 HDL-C 값은 표준치 내였다.As shown in Table 8, the TC values of all four prior to administration exceeded the standard values. TC and HDL-C values were within standard values.

표-8의 결과는 불과 4명에의 지렁이 건조분말의 경구 투여 실험 결과였지만, 투여전의 TC 238∼280mg/d1의 값은, 투여 3∼4개월 후에 194∼220mg/dl로 되며, 표준치 범위내까지 저하하고, 6∼7개월후에서는 174∼209mg/d1로 현저히 저하하였다. AI은 투여 3∼4개월후에서 명백하게 저하하고, 6∼7개월 후에는 TC의 저하와 함께 현저하게 저하하였다.Although the result of Table 8 was the result of the oral administration experiment of the earthworm dry powder to only 4 people, the value of TC 238-280 mg / d1 before administration becomes 194-220 mg / dl three to four months after administration, and is within the standard value range. After 6-7 months, it fell to 174-209 mg / d1 remarkably. AI apparently decreased after 3 to 4 months of administration, and after 6 to 7 months, it decreased markedly with TC.

한편, HDL-C는, 대략 일정하며 변화가 부족하지만, 6∼7개월후에는 약간이기는 하나 명확한 상승 경향이 보였다.HDL-C, on the other hand, was approximately constant and lacking in change, but after 6-7 months there was a slight, but upward trend.

TG는 3∼4개월후부터 저하경향이 관찰 되었으며, 6∼7개월후에서는 명확한 저하가 보었다.TG showed a tendency to deteriorate after 3-4 months, and a clear deterioration after 6-7 months.

이 사람예의 경구 투여실험결과는 실험적 지혈증 쥐에의 투여 실험 결과와 같도록, TC 및 AI이 현저하게 저하하고, HDL-C도 약간이기는 하지만 상승하는 것이 보였다.The results of the oral administration of this human example showed that TC and AI were markedly lowered, and HDL-C was slightly elevated, as was the result of the administration to experimental hemostatic rats.

그러나, 실험적 고지혈증 쥐에의 투여실험에서는, TC의 유외한 저하는 보이지 않았으나, 사람에의 경구투여 실험에 있어서는 6 내지 7개월후에 명확한 저하가 보였다. 이러한 것은 주목해야할 결과라고 생각된다.In the experimental hyperlipidemic rats, however, no significant decrease in TC was seen, but in the oral administration experiments in humans, there was a clear decrease after 6-7 months. This is considered to be a noteworthy result.

이 지렁이 건조분말의 사람에게 경구 투여 실험은 안전하게 또한 부작용이 발생하는 일이 없어, 무사히 종료할 수 있었다. 예컨대 6∼7개월 간의 장기 투여에 있어서도, 혈증당량(60∼110mg/dl)의 하한치 이하까지 강하한 저혈당의 위험 발생은 전혀 없었다.The oral administration experiment with this earthworm dry powder safely and side effects did not generate | occur | produce, and it could be terminated safely. For example, even in long-term administration for 6 to 7 months, there was no risk of hypoglycemia dropping to below the lower limit of the blood glucose equivalent (60 to 110 mg / dl).

표-8에서 알수 있듯이 지렁이 건조분말은 합성 유기 화합물 약제와 같게 목적 달성할 수 있는 항고지혈증제는 아닌 것 같다. 즉, 비교적 장기간의 연용 투약을 필요로 하는 완화작용 형의 항고지혈증제인 것으로 생각된다. 그러나 사람에게 경구 투여한 3~4개월부터 TC, AI가 명확하게 저하하고, HDL-C는 6∼7개읠 후에 약간이나마 상승 경향을 나타내고 TG도 6~7개월 후에 명확한 저하가 보였다.As Table 8 shows, earthworm dry powder does not seem to be an antihyperlipidemic agent that can achieve its purpose as synthetic organic compound drugs. In other words, it is considered to be a palliative antihyperlipidemic agent that requires relatively long-term continuous medication. However, TC and AI clearly decreased from 3 to 4 months of oral administration to humans, HDL-C showed a slight upward trend after 6-7 months and TG also showed a clear decrease after 6-7 months.

본 발명품의 대상 환자에게는 연령별 제한은 특별히 없다.There is no age restriction in particular for the subject of this invention.

본 발명품은 만능형이지만 바람직한 대상 환자는 중. 고령자의 환자이다. 상기한 결과에 따라 본 발명의 지렁이 건조 분말은 안전하며, 또한 뛰어난 항고지혈증 치료 예방제라는 것을 알았다.Although the present invention is a universal type, preferred subject patients are heavy. It is a patient of the elderly. According to the above results, the earthworm dry powder of the present invention was found to be safe and an excellent antihyperlipidemic treatment preventive agent.

이들 결과에 의하여, 지렁이로부터의 추출물인 지렁이 추출물도 지렁이 건조분말과 마찬가지로, 사람에 대하여 안전하며, 또한, 뛰어난 항고지혈증 치료, 예방제임을 쉽게 알 수가 있다.These results show that the earthworm extract, which is an extract from the earthworm, is also safe for humans and is an excellent antihyperlipidemia treatment and preventive agent, like the earthworm dry powder.

[실시예 1]Example 1

정제 ATablet A

정제 BTablet B

정제 CTablets C

상기 치방에 따라 균일하게 잘 혼합한 분말을 타정기에 의해 각종 중량의 정제를 제조하였다.Tablets of various weights were prepared by a tableting machine of the powder mixed uniformly well according to the above.

[실시예 2]Example 2

과립제 AGranule A

상기 처방에 따라 유동층 조립장치를 사용하고, 지렁이의 건조분말, 유당, 미결정 셀룰로우스 및 옥수수 전분을 잘혼합하고, 히드록시프로필셀룰로우스 5%수용액을 결합제로서 분부하고, 저온 건조후 과립으로 하였다.Using the fluidized bed granulator according to the above prescription, mixing the dry powder of the earthworm, lactose, microcrystalline cellulose and corn starch well, distributing the hydroxypropyl cellulose 5% aqueous solution as a binder, and drying it at low temperature to granules. It was.

[실시예 3]Example 3

과립제 BGranule B

과립제 CGranule C

상기 처방에 따라 잘 혼합한 분말을 압출기로 과립제를 제조하였다.The powder was mixed well according to the formulation was prepared granules by an extruder.

[실시예 4]Example 4

캡술제 ACapsul A

상기 처방중, 히드록시 프로필셀룰로오스 이외의 성분을 유동층 조립장치를 사용하여 잘 혼합한 후, 히드록시 프로필 셀룰로오스의 5% 수용액을 결합체로 하여 분무하고, 저온 건조후, 과립으로 하였다. 이 과립을 경 캡슐에 250㎎씩 충전하여 경 캡슐제를 제조하였다.In the above formulation, components other than hydroxypropyl cellulose were mixed well using a fluidized bed granulator, and then sprayed using a 5% aqueous solution of hydroxy propyl cellulose as a binder, followed by drying at low temperature to form granules. Light granules were prepared by filling 250 mg of the granules into light capsules.

[실시예 5]Example 5

캡술제 BCapsul agent B

실시예3에 의해 제조한 과립제 C를 경 캡슐에 250㎎씩 충전하여 경캡슐제를 제조하였다.Light capsules were prepared by filling 250 mg of the granules C prepared in Example 3 into light capsules.

[실시예 6]Example 6

캡술제 CCapsul C

상기 처방한 것을 잘 혼합하고 이 혼합분말을 No. 1의 젤라틴 캅셀에 250㎎씩 충전하고, 캅셀제를 제조하였다.Mix the above prescribed well and mix this powder. 250 mg of each gelatin capsule was filled, and a capsule was prepared.

[실시예 7]Example 7

장용정제Enteric tablets

상기의 처방에 따라, 균일하게 혼합한 본말을 타정기로서 소정을 제조한 다음, 다음에 나타낸 장용제피의 코우팅제로코우팅하고, 장용정제를 제조하였다.In accordance with the above-mentioned prescription, a predetermined mixture was prepared as a tableting machine using a uniformly mixed main body, and then coated with a coating agent of the enteric coating shown below to prepare an enteric tablet.

코우팅제Coating agent

[실시예 8]Example 8

산제 APowder A

산제 BPowder B

상기 성분을 각각 원추 혼합기 안에서 균일하게 잘 혼합하여 산제로 하였다.Each of the above components was mixed well in a cone mixer to prepare a powder.

[실시예 9]Example 9

좌제 ASuppository A

좌제 BSuppository B

상기 처방한 것을 각각 잘 혼합한 용융물을 알루미늄제의 거푸집에 주입하고, 냉각하여 좌제를 제조하였다.The melts well mixed with each of the above-mentioned prescriptions were poured into aluminum dies, and cooled to prepare suppositories.

[실시예 10]Example 10

캅셀제 DCapsule D

상기 처방한 것을 잘 혼합한다. 이 혼합 분말을 No. 1의 젤라틴 캅셀에 150㎎씩 충전하고, 캅셀제를 제조하였다.Mix well as prescribed above. This mixed powder 150 mg of each was filled into gelatin capsules of 1 to prepare a capsule.

[실시예 11]Example 11

캅슐제 ECapsule E

상기 처방중, 히드록시프로필렐룰로우스 이외의 성분을 유동층 조립 장치를 사용하여 잘 혼합한 다음, 히드록시프로필셀룰로루스의 5% 수용액을 결합제로서 분무하고 40℃에서 건조후 과립으로 하였다. 이 과립을 경캡슐에 250㎎씩 충전하여 경 캡슐제를 제조하였다.In the above formulation, components other than hydroxypropyl cellulose were mixed well using a fluidized bed granulation apparatus, and then a 5% aqueous solution of hydroxypropyl cellulose was sprayed as a binder and dried at 40 ° C. to form granules. The granules were filled in 250 mg of light capsules to prepare light capsules.

[실시예 12]Example 12

캡슐제 FCapsule F

상기 처방에 따라, 잘 혼합한 분말을 압출기로 과립제를 제조하였다. 이 과립제를 경 캡슐에 250㎎씩 충전하여 경 캡슐제로 제조하였다.According to the above formulation, the well mixed powder was prepared granules by an extruder. 250 mg of the granules were filled in light capsules to prepare light capsules.

[실시예 13]Example 13

캡슐제 GCapsule G

상기 처방된 것을 잘 혼합하여, 이 혼합분말을 제라틴 캡슐에 150㎎씩 충전하여, 캡슐제를 제조하였다.The formulations described above were mixed well, and the mixed powder was filled in 150 mg each of the gelatin capsules to prepare capsules.

[실시예 14]Example 14

캡슐제 HCapsule H

상기 처방한 것을 잘 혼합한다. 이 혼합분말을 제라틴 캡슐에 150㎎씩 충전하여 캡슐제를 제조하였다.Mix well as prescribed above. This mixed powder was filled in 150 mg each of the gelatine capsules to prepare a capsule.

[실시예 15]Example 15

캡슐제 ICapsule I

상기 처방한 것을 잘 혼합한다. 이 혼합 분말을 제라틴 캡슐에 250㎎씩 충전하여, 캡슐제를 제조 하였다.Mix well as prescribed above. This mixed powder was filled in 250 mg each of the gelatin capsules to prepare a capsule.

[실시예 16]Example 16

캡슐제 JCapsule J

상기 처방된 것을 잘 혼합한다. 이 혼합분말을 제라틴 캡슐에 250㎎씩 충전하여, 캡슐제를 제조하였다.Mix well as prescribed above. 250 mg of each of the mixed powders was packed into capsules to prepare a capsule.

[실시예 17]Example 17

물로 가볍게 세척한 산지렁이(붉은 지렁이) 1kmg(약 1천마리)를 사과산과 구연산의 1 : 1의 혼합산을 용존하는 pH6. 2의 산성 수용액 4ℓ내에 온도 18℃에서 3시간 방치하여 소화 관내의 분토를 층분히 배설시킨후, 산지렁이를 물로 잘 세척하여 산지렁이의 체표면에 부착되어 있는 진흙, 분토 등의 오물을 씻어낸다.1 kmg (approximately 1,000) of mountain worms (red earthworms) lightly washed with water dissolve 1: 1 mixed acid of malic acid and citric acid. After leaving for 4 hours at 4 ℃ in acidic aqueous solution of 2, the soil in the digestive tract is thoroughly excreted, and the earthworms are washed well with water to wash away the dirt and clay attached to the body surface of the earthworms. .

다음에 믹서에 넣어서 습식 분쇄하였다. 수득된 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣어 -30℃에서 40시간 동결한후, 품은 -40℃에서 0. 1mmHg의 진공하, 6시간 동결 건조시키고, 다음에 트레이가 실려있는 선반의 온도를 30℃로 올려 0. 1mmHg의 진공하, 6시간 진공 건조시킨후, 다음에 선반의 온도를 50℃로 올리고 0. 2mmHg의 진공하 10시간 진공 건조시키고, 다음에 선반의 온도를 80℃로 올리고, 0. 2mmHg의 진공하에시8시간 건조시킴으로써 지렁이의 건조 분말제품(M-1)을 280g 수득하였다.Next, it was put into a mixer and wet-pulverized. The obtained suspension of the earthworms was put in a tray and frozen at -30 ° C for 40 hours, and the product was lyophilized at -40 ° C under vacuum of 0.1 mmHg for 6 hours, and then the temperature of the shelf on which the tray was loaded was raised to 30 ° C. And vacuum drying for 6 hours under a vacuum of 0.1 mmHg, and then raising the temperature of the shelf to 50 ° C and vacuum drying for 10 hours under a vacuum of 0.2 mmHg, and then raising the temperature of the shelf to 80 ° C. 280 g of a dry powder product (M-1) of an earthworm was obtained by drying for 8 hours under a vacuum of 2 mmHg.

[실시예 18]Example 18

물로 가볍게 세척한 산지렁이(붉은 지렁이) 1kg을 사과산, 주석산 및 젖산 1 : 1 : 1의 혼합산을 함유하는 pH 5. 5의 산성 수용액 3ℓ중에 온도 10℃에서 2. 5시간 방치하여 소화관내의 분토를 충분히 배설시킨 후 산지렁이를 물로 잘 세척하여 산지렁이의 체표면에 부착되어 있는 진흙, 분 등의 오물을 씻어 냈다.1 kg of acid worms (red worms) washed lightly with water are allowed to stand for 5 hours at a temperature of 10 ° C. for 2 hours in an acidic aqueous solution of pH 5. 5 containing a mixed acid of malic acid, tartaric acid and lactic acid 1: 1: 1. After the soil was excreted sufficiently, the earthworms were washed well with water to wash away the dirts such as mud and powder on the body surface of the earthworms.

다음에 믹서로 습식 분쇄하였다. 얻어진 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣고 -25℃에서 20시간 동결 시킨후, 품온을 -35℃로 내리고, 0. 1mmHg의 진공하에서 7시간 동결 건조시키고, 다음에 트레이가 실려있는 선반의 온도를 28℃로 올리고, 0. 1mmHg의 진공하에서 10시간 진공 건조시키고 다음에 40℃에서 0. 2mmHg의 진공하, 13시간 진공 건조시키고, 다음에 78℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 8시간 건조시킴으로써 지렁이 건조 분말세품(M-2) 275g을 수득하였다.Then it was wet milled with a mixer. The suspension of the earthworms obtained was placed in a tray and frozen at -25 ° C for 20 hours, and then the product temperature was lowered to -35 ° C, freeze-dried for 7 hours under vacuum of 0.1 mmHg, and the temperature of the shelf on which the tray was loaded was 28 ° C. The earthworm dried powder by vacuum drying for 10 hours under vacuum of 0.1 mmHg, followed by vacuum drying for 13 hours under vacuum of 0.2 mmHg at 40 ° C, and then drying for 8 hours under vacuum of 0.1 mmHg at 78 ° C. 275 g of fine product (M-2) was obtained.

[실시예 19]Example 19

물로 가볍게 세척한 산지렁이(붉은 지렁이) 1kg을 담수 3ℓ중에 온도 10℃에서 16시간 방치하여 소화관내의 분토를 배설시켰다. 산지렁이를 물로 잘 세척하여 산지렁이이 체표면에 부착되어 있는 진흙, 분 등의 오물을 씻어낸다. 다음에 울트라 호모믹서로 습식 분쇄하였다. 수득된 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣고 -25℃에서 15시간 동결하였다. 다음에 품온을 -35℃로 내려서 0. 1mmHg의 진공하에서 6시간 동결건조시키고, 다음에 30℃에서 0. 08mmHg의 진공하에서 10시간 건조시킨후, 다음에 40℃에서 0. 2mmHg의 진공하, 15시간 건조시키고, 다음에 78℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 8시간 건조시킴으로써 지렁이 건조 분말제품(M-3) 245g을 수득하였다.1 kg of mountain worms (red worms) washed with water was left for 16 hours at a temperature of 10 ° C. in 3 L of fresh water to excrete the soil in the digestive tract. Wash the earthworm well with water to wash away the dirt, such as mud and powder, which are attached to the surface of the mountain earthworm. Then, it was wet milled with an ultra homomixer. The suspension of the earthworms obtained was put in a tray and frozen at -25 ° C for 15 hours. Next, the product temperature was lowered to -35 ° C and lyophilized for 6 hours under vacuum of 0.1 mmHg, followed by drying for 10 hours under vacuum of 0.08 mmHg at 30 ° C, followed by vacuum of 0.2 mmHg at 40 ° C, 245 g of earthworm dried powder product (M-3) was obtained by drying for 15 hours and then drying at 78 DEG C under vacuum of 0.1 mmHg for 8 hours.

[실시예 20]Example 20

물로 가볍게 세척한 산지렁이(붉은 지렁이) 1kg을 사과산을 용해한 pH 5. 8의 산성 수용액 2ℓ중에 온도 13℃에서 3시간 방치하여, 소화관내의 분토를 충분히 배설시켰다. 산지렁이를 물로 잘 세정하여 산지렁이의 체표면에 부착되어 있는 진흙, 분 등의 오물을 씻어낸다. 다음에 울트라 호모믹서(닛뽕세이끼(주)재)로 습식 분쇄하였다. 수득된 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣어 -30℃에서 30시간 동결시킨후, 품온 -30℃에서 0. 1mmHg의 진공하, 8시간 동결 건조시키고 다음에 트레이가 실려있는 선반의 온도를 25℃로 올려서 0. 1mmHg의 진공하에서 7시간 진공 건조시키고 다음에 선반의 온도를 45℃로 올려 0. 1mmHg의 진공하에서 12시간 진공 건조시키고 다음에 선반의 온도를 80℃로 올려 0. 1mmHg의 진공하에서 7시간 건조 시킴으로써 지렁이 건조 분말제품(M-4) 275g을 수득하였다.1 kg of a mountain worm (red worm) lightly washed with water was left for 3 hours at a temperature of 13 ° C. in 2 L of an acidic aqueous solution of pH 5. 8 in which malic acid was dissolved, and the soil in the digestive tract was sufficiently excreted. Wash the earthworm well with water to wash away the dirt, such as mud and powder, which are attached to the body surface of the earthworm. Next, it was wet-pulverized with the ultra homo mixer (Nippon Seiki Co., Ltd. product). The suspension of the obtained earthworms was put in a tray and frozen at -30 ° C for 30 hours, and then freeze-dried at a temperature of -30 ° C under vacuum of 0.1 mmHg for 8 hours, and then the temperature of the shelf on which the tray was loaded was raised to 25 ° C. Vacuum drying for 7 hours under vacuum of 1 mmHg and then raising the temperature of the shelf to 45 ° C. for 12 hours under vacuum of 0.1 mmHg and then raising the temperature of the shelf to 80 ° C. for 7 hours under vacuum of 0.1 mmHg. By drying, 275 g of earthworm dried powder product (M-4) was obtained.

[실시예 21]Example 21

산지렁이(붉은 지렁이) 1kg의 체표면에 부착한 진흙, 집 등의 오물을 물로 5회잘 세척하여 씻어낸다. 다음에 이 산지렁이를 담수 2. 5ℓ중에 온도 15℃에서 18시간 방치하여 소화관내의 분토를 배설시켰다. 다음에 산지렁이를 가볍게 씻은후, 울트라 호모믹서로 습식 분쇄하였다. 수득된 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣어 -40℃에서 24시간 동결하였다. 다음에 품온을 -40℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 5시간 동결 건조시키고, 다음에 25℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 8시간 건조시킨후, 다음에 45℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 12시간 건조시키고, 다음에 80℃에서 0. 1mmHg의 진공하에서 7시간 건조시킴으로써 지렁이 건조분말제품(M-5)을 240g 수득하였다.Earthworms (Red Earthworms) Wash dirt and dirt on the body surface of 1kg by washing it well five times with water. Next, the mountain worms were allowed to stand for 18 hours at a temperature of 15 ° C. in 2.5 L of fresh water to excrete the soil in the digestive tract. Next, the mountain worms were washed lightly, and then wet crushed with an ultra homomixer. The suspension of the earthworms obtained was put in a tray and frozen at -40 ° C for 24 hours. The product temperature was then lyophilized for 5 hours under vacuum of 0.1 mmHg at −40 ° C., then for 8 hours under vacuum of 0.1 mmHg at 25 ° C., and then for 12 hours under vacuum of 0.1 mmHg at 45 ° C. After drying, the resultant was dried at 80 ° C. under vacuum of 0.1 mmHg for 7 hours to obtain 240 g of an earthworm dry powder product (M-5).

[실시예 22]Example 22

산지렁이(붉은 지렁이) 1kg의 체표면의 부착한 진흙, 분 등의 오물을 물로 4회 잘 세척하여 씻어낸다. 다음에 이 산지렁이를 사과산과 젖산 1 : 1의 혼합물을 용해시킨 pH 5. 7의 산성 수용액 2. 5ℓ중에 온도15℃에서 2. 5시간 방치하여 소화관 내의 분토를 배설시켰다. 다음에 산지렁이를 가볍게 세척한 후, 믹서로 습식 분쇄하였다. 수득된 지렁이의 현탁액을 트레이에 넣어 -35℃에서 24시간 동결하였다. 다음에 품온 -35℃에서 0. 1mmHg의 진공하, 7시간 동결 건조시키고, 다음에 트레이가 실려있는 선반의 온도를 22℃로 올려 0. 1mmHg의 진공하, 10시간 진공 건조시킨후, 다음에 선반의 온도는 42℃로 올려 0. 2mmHg의 진공하 15시간 건조시키고, 최후로 선반의 온도를 78℃로 올려서 0. 1mmHg의 진공하에서 7시간 건조시킴으로서 지렁이의 건조 분말제품(M-6) 265g을 수득하였다.Earthworms (Red Earthworms) Wash dirt and dirt on the surface of 1 kg of body by washing it four times with water. Next, the earthworms were allowed to stand for 2 hours at a temperature of 15 ° C. in 5 l of an acidic aqueous solution of pH 5. 7 in which a mixture of malic acid and lactic acid 1: 1 was dissolved, to excrete the soil in the digestive tract. Next, the mountain worms were lightly washed and then wet crushed with a mixer. The suspension of the earthworms obtained was put in a tray and frozen at -35 ° C for 24 hours. Next, the product was freeze-dried for 7 hours under vacuum of 0.1 mmHg at a temperature of −35 ° C., and then the temperature of the shelf on which the tray was loaded was increased to 22 ° C. and vacuum-dried for 10 hours under vacuum of 0.1 mmHg. The temperature of the shelf was raised to 42 ° C and dried for 15 hours under vacuum of 0.2 mmHg, and finally the temperature of the shelf was increased to 78 ° C for 7 hours under vacuum of 0.1 mmHg, thereby drying worms (M-6) 265g Obtained.

[실시예 23]Example 23

시트르산을 용해한 pH 6. 0의 산성수용액 2. 5ℓ에 인산 이수소칼륨 1. 5g을 용해하고 이것에 물로 가법게 세정한 산지렁이(굵은 지렁이) 1kg을 넣고, 10℃에서 2시간 방치하여 소화관내의 분토를 배설시켰다. 다음에 산지렁이를 물로 2회 세척시키고 산지렁이의 체표면에 부착한 진흙, 분, 짚등의 오물을 씻어낸다. 다음에 믹서로 습식 분쇄하였다. 그후는 수득된 지렁이의 현탁액을 실시예 21에 기재와 같은 방법으로 동결, 진공 건조시킴으로써 지렁이의 건조분말 280g을 수득하였다.Dissolve citric acid in acidic aqueous solution of pH 6.0 2. Dissolve 1.5 g of potassium dihydrogen phosphate in 5 liters, add 1 kg of mountain worms (coarse worms) washed with water, and leave it at 10 ° C for 2 hours. Excreta were excreted. Next, the mountain earthworms are washed twice with water, and the dirt, dust and straw attached to the body surface of the mountain earthworms are washed away. Then it was wet milled with a mixer. Thereafter, 280 g of a dry powder of the earthworm was obtained by freezing and vacuum drying the suspension of the earthworm obtained in the same manner as described in Example 21.

[실시예 24]Example 24

산지렁이(낚시 지렁이) 1kg의 체표면에 부착한 진흙, 분, 짚등의 오물을 물로 5회 잘 세척하여 씻어낸다. 다음에 이 산지렁이를 숙신산을 용해한 pH 5. 7의 산성 수용액 3(이중에 초산나트륨 1g과 황산나트륨 0. 5g을 용존한다)중에 13℃에서 2. 5시간 방치하여 소화관내의 분토를 배설시켰다.Earthworms (fishing earthworms) Wash dirt and dirt on the body surface of 1kg by washing it well with water five times. Next, the earthworms were excreted in an acidic aqueous solution 3 of pH 5. 7 (in which 1 g of sodium acetate and 0.5 g of sodium sulfate were dissolved) for 2.5 hours at 13 ° C. to excrete soil in the digestive tract.

다음에 산지렁이를 물로 가볍게 세정한후, 호모지나이저로 습식 분쇄하였다. 그후는 수득된 지렁이의 현탁액을 실시예 22에 기대와 같은 방법으로 동결, 진공 건조시킴으로써 지렁이 건조분말 275g을 수득하였다.The earthworms were then lightly washed with water and then wet crushed with a homogenizer. Thereafter, 275 g of the earthworm dry powder was obtained by freezing and vacuum drying the suspension of the earthworm obtained in the same manner as expected in Example 22.

[실시예 25]Example 25

산지렁이(굵은 지렁이) 1kg의 체표면에 부착하는 진흙, 분, 짚 등의 오물을 물로 5회 잘 세척하여 씻어낸다. 다음에 이 산지렁이를 시트르산과 타르타르산 1 : 1의 혼합산을 용해한 pH 5. 9의 산성 수용액 2. 5ℓ(이중에 스트르산 칼륨 0. 7g을 용존한다)중에 15℃에서 2시간 방치하여 소화관내의 분토를 배설시켰다. 다음에 산지렁이를 물로 가볍게 세정한 후, 블렌더로 습식 분쇄하였다. 그후는 수득된 지렁이의 현탁액을 실시예 22에 기재와 같은 방법으로 동결, 진공건조시킴으로써 지렁이 건조분말 283g을 수득하였다.Earthworms (coarse earthworms) Wash dirt and dirt that adhere to 1kg of body surface 5 times with water and wash well. Next, the acid worms were left in an alimentary canal for 2 hours at 15 ° C. in an acidic aqueous solution of pH 5.9, in which a mixed acid of citric acid and tartaric acid 1: 1 was dissolved in 2.5 L (dissolved 0.7 g of potassium strate). Excreta were excreted. The earthworms were then washed lightly with water and then wet ground with a blender. Thereafter, 283 g of the earthworm dry powder was obtained by freezing and vacuum drying the suspension of the earthworm obtained in the same manner as described in Example 22.

상기에서 설명한 것처럼 본 발명은 지렁이 건조분말 또는 지렁이의 추출물을 유효 성분으로 하는 항고지혈중제에 관한 것이다. 본 발명품의 지렁이 건조분말 또는 지렁이의 추출물을 혼화한 고콜레스테롤식으로 쥐를 1주간 및 4주간 사육한 실험에 의해 본 발명품은 우수한 항고지혈중 효과를 갖는 것을 알았다.As described above, the present invention relates to an antihyperlipidemic agent comprising an earthworm dry powder or an earthworm extract as an active ingredient. It was found that the present invention had an excellent antihyperlipidemic effect by experiments in which rats were bred for 1 week and 4 weeks in a high cholesterol formula mixed with the earthworm dry powder or the extract of the earthworm of the present invention.

지렁이 건조분말 또는 지렁이 추출물의 1주간의 혼사 실험에서는 콜레스테롤 식군에 비하여, 혈청중의 TC, FC, LDL-C 및 AI은 유의로 저하하지만, HDL-C는 유의한 변화가 없었다. 지렁이 건조 분말의 4주간 혼사 실험에서는 콜레스테롤 식군에 비하여 혈청중의 TC, FC, PL 및 NEFA를 유의로 저하시켰다.In the week-long mixed experiment of earthworm dry powder or earthworm extract, TC, FC, LDL-C and AI in serum were significantly lowered compared to cholesterol group, but HDL-C was not significantly changed. In the four-week mixed experiment of the earthworm dry powder, TC, FC, PL and NEFA in serum were significantly lowered compared to the cholesterol group.

또한 동맥 경화 개선 인자로 되어 있는 HDL-C를 유의로 상승시킴과 동시에, AI을 유의로 저하시키는 것이 확인되었다. TG는 저하경향을 나타내지만 유의한 저하이지는 않았다. 또 GOT 및 GPT를 유의로 저하시켰다.It was also confirmed that HDL-C, which is an atherosclerosis improving factor, was significantly increased and AI was significantly lowered. TG showed a tendency to fall but not a significant fall. In addition, GOT and GPT were significantly lowered.

간장의 중량 및 간장 지질중의 TC와 PL은 유의로 저하시키지만, TG는 거의 변화가 없었다. 또 랫트의 체중은 순조롭게 중량하고, 유의한 변동은 보이지 않았다.The weight of liver and TC and PL in hepatic lipids were significantly lowered, but the TG was little changed. In addition, the rats weighed smoothly and showed no significant fluctuation.

지렁이의 건조 분말의 캅셀제(150mg 함유)를 1회 1제 1일 3일, 4인의 지원자에게 6 내지 7개월간, 식후경구투여하고, 혈청중의 TC, TG, HDL-C와 AI을 측정하였다. 이 결과에서는 3 내지 4개월후 이후부터 TC 및 AI이 명확하게 저하하였다. 한편, HDL-C는 변화가 부족하지만, 6 내지 7개읠후에 명확한 저하가 보였다.An earthworm capsule (containing 150 mg) of dry powder of earthworms was administered to four volunteers once a day, 3 days a day, for 6-7 months, and then, TC, TG, HDL-C and AI in serum were measured. In this result, TC and AI clearly fell after 3-4 months. HDL-C, on the other hand, lacked the change, but showed a clear decline after 6-7 dogs.

동물 실험 및 사람에의 경구 투여 실험에 의해, 지렁이의 건조분말 또는 지렁이의 추출물은 안전하고 고지혈증의 우수한 치료·예방제, 홀륭한 혈청 지질 대사 개선제 : 훌륭한 동맥 경화치료·예방재로서 매우 유용하다는 사실을 알았다.Animal testing and oral administration to humans have shown that dry powder of earthworms or extracts of earthworms are safe and excellent in treating and preventing hyperlipidemia, and excellent serum lipid metabolism improving agents: good atherosclerosis and prevention agents. okay.

Claims (12)

산지렁이를 유기산, 무기산, 유기산나트륨염, 무기산나트륨염, 유기산칼륨염 및 무기산칼륨염으로 구성되는 군에서 선택된 적어도 1종류의 화합물을 0. 3(중량)%이하 함유하는 수용액중에 방치, 또는 온도4∼28℃의 담수중에 10∼30시간 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 배설시키고, 이 단계 전(前) 및/또는 후(後)에 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거하고 다음에 분쇄한 후 동결 건조 진공 건조시켜서 수득된 지렁이 건조분말을 유효성분으로서 함유하는 항고지혈증제.The mountain earthworm is left in an aqueous solution containing not less than 0.3% by weight of at least one compound selected from the group consisting of organic acid, inorganic acid, organic acid salt, inorganic acid salt, organic acid potassium salt and potassium salt of inorganic acid. Leave the soil in the digestive tract of mountain worms for 10 to 30 hours in fresh water at 4 to 28 ° C, and wash the dirt attached to the body surface of the mountain worms before and / or after this step with water. An antihyperlipidemic agent comprising earthworm dry powder obtained by removal, followed by pulverization and freeze drying in vacuum drying as an active ingredient. 산지렁이를 유기산, 무기산, 유기산나트륨, 무기산나트륨염, 유기산칼륨염 및 무기산칼륨염으로 구성되는 군에서 선택된 적어도 1종류의 화합물을 0. 3(중량)%이하 함유하는 수용액중에 방치, 또는 온도4∼28℃의 담수중에 10∼30시간 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 배설시킨 다음, 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거하여 얻은 지렁이를 그대로 분쇄를 하거나, 또는 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거한 후의 산지렁이를 상기 수용액중 또는 상기 담수중에 방치하여, 산지렁이의 소화기관내의 분토를 배설시킨후, 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 처리하여 얻은 지렁이를 그대로 분쇄하고, 얻어진 현탁액을 -10∼-60℃에서 동결시킨 다음, -60∼80℃의 범위내에서 온도를 단계적으로 높이면서 10mmHg이하의 진공도에서 10∼100시간 동결건조·진공건조를 시키고, 이중, 최종 공정인 진공 건조를 70∼80℃에서 0. 01∼0. 5mmHg의 진공하에서 5∼10시간 건조시키는 것을 특징으로 하는 지렁이 건조분말을 유효성분으로서 함유하는 항고지혈증제.The mountain earthworm is left in an aqueous solution containing not less than 0.3% by weight of at least one compound selected from the group consisting of organic acid, inorganic acid, sodium organic acid, sodium inorganic salt, organic potassium salt and potassium inorganic salt. After 10-30 hours in fresh water at -28 ℃, excrete the soil in the digestive tract of mountain worms, and then crush the earthworms obtained by washing and removing dirt attached to the body surface of mountain worms with water, or After washing and removing dirt attached to the body surface with water, the mountain earthworms are left in the aqueous solution or the fresh water to excrete the soil in the digestive tract of the mountain earthworms, and the soil attached to the body surface of the mountain earthworms is washed with water. The obtained earthworm is pulverized as it is, and the obtained suspension is frozen at -10 to -60 ° C, and then stepped up within a range of -60 to 80 ° C while the temperature is 10 mmHg or less. Freeze-drying and vacuum drying were carried out at a vacuum degree of 10 to 100 hours, and vacuum drying as a final step was carried out at 70 to 80 ° C at 0.01 to 0. 0. An antihyperlipidemic agent comprising an earthworm dry powder as an active ingredient, which is dried for 5 to 10 hours under a vacuum of 5 mmHg. 제2항에 있어서, 산지렁이를 상기 수용액중 또는 상기 담수중에 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 배설시킨다음, 산지렁의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거하여 얻은 지렁이를 그대로 분쇄하고, 분쇄이후의 상기 공정을 행하는 항고지혈증제.According to claim 2, the earthworms are left in the aqueous solution or in the fresh water to excrete the soil in the digestive tract of the mountain earthworms, and the earthworms obtained by washing and removing dirt attached to the body surface of the mountain earthworms are crushed as it is. Antihyperlipidemic agent which performs the said process after grinding | pulverization. 제3항에 있어서, 상기 수용액중 또는 상기 담수중에 방치되기전의 산지렁이가 오물의 일부를 물로 세척한 산지렁인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to claim 3, wherein the mountain earthworm before being left in the aqueous solution or the fresh water is a mountain earthworm in which a part of the soil is washed with water. 제2항에 있어서, 산지렁이의 체표면에 부착한 오물을 물로 세척 제거한 다음, 산지렁이를 상기 수용액 또는 상기 담수중에 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 배설시키고, 얻은 지렁이를 그대로 분쇄하고, 분쇄 이후의 상기 공정을 행하는 항고지혈증제.According to claim 2, the dirt attached to the body surface of the mountain earthworms are washed with water, and then the mountain earthworms are left in the aqueous solution or the fresh water to excrete the soil in the digestive tract of the mountain earthworms, and the obtained earthworms are ground as it is, Antihyperlipidemic agent which performs the said process after grinding | pulverization. 제5항에 있어서, 산지렁이의 체표면에 부착하는 오물을 물로 세척 제거한 다음, 산지렁이를 상기 수용액 또는 상기 담수중에 방치하여 산지렁이의 소화관내의 분토를 배설시키고, 다시 물로 세척한 다음, 얻은 지렁이를 그대로 분쇄하여 분쇄 이후의 상기 공정을 행하는 항고지혈중제.The soil of claim 5, wherein the soil adhering to the body surface of the mountain earthworm is washed away with water, and the earthworm is left in the aqueous solution or the fresh water to excrete the soil in the digestive tract of the mountain earthworm, and then washed with water. Antihyperlipidemic agent which grinds an earthworm as it is, and performs the said process after grinding | pulverization. 제2 내지 6항중의 어느 하나에 있어서, 유기산의 초산, 구연산, 호박산, 사과산, 주석산 또는 젖산인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to any one of claims 2 to 6, which is acetic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, tartaric acid, or lactic acid of an organic acid. 제2 내지 6항중의 어느 하나에 있어서, 무기산이 인산, 황산 또는 염산인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to any one of claims 2 to 6, wherein the inorganic acid is phosphoric acid, sulfuric acid or hydrochloric acid. 지렁이를 수성용매, 수혼화성 유기용매 및 수비혼화성 유기용매로서 구성되는 군에서 선택되는 적어도 1종류의 추출제에 의해서 추출 처리하여 얻은 추출물을 유효 성분으로서 함유하는 항고지혈증제.An antihyperlipidemic agent comprising as an active ingredient an extract obtained by extracting the earthworm with at least one extractant selected from the group consisting of an aqueous solvent, a water miscible organic solvent, and a water-immiscible organic solvent. 제9항에 있어서, 상기 수성용매가 담수, 증류수, 생리식염수, pH 5∼10의 완충액 또는 pH 5∼10의 조제수인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to claim 9, wherein the aqueous solvent is fresh water, distilled water, saline solution, a pH 5-10 buffer solution or a pH 5-10 preparation water. 제9항에 있어서 상기 수혼화성의 유기 용매가 탄소수 1∼4의 알코올류, 케톤류, 에테르류 또는 에스테르류인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to claim 9, wherein the water-miscible organic solvent is an alcohol, ketone, ether or ester having 1 to 4 carbon atoms. 제9항에 있어서, 상기 수비혼화성의 유기 용매가 탄소수 6∼10의 탄화수소류, 알코올류, 케톤류, 에스테르류 또는 탄소수 1∼5의 할로겐화 탄화수소인 항고지혈증제.The antihyperlipidemic agent according to claim 9, wherein the water-immiscible organic solvent is a hydrocarbon having 6 to 10 carbon atoms, an alcohol, a ketone, an ester, or a halogenated hydrocarbon having 1 to 5 carbon atoms.