KR920005685B1 - 유산균을 이용한 항 종양제 - Google Patents

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Abstract

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Description

유산균을 이용한 항 종양제
본 발명은 유산균을 이용해서 만든 항 종양제, 상술하면 공지균주 락로바실러스 스포토제네스(Lactobacillus sporogenes)IL-101의 균체를 유효성분으로 하는 후술하는바의 특성을 갖는 신규의 항종양 물질에 관한 것이다. 근래에 이르러, 여러가지 유형의 암 환자에 대한 면역 기능을 향상시키고 이에 수반하여 항암효과를 얻을 수 있을 약재에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있으며, 그 결과 세균의 균체 혹은 균체 추출물을 항 종양제로 사용하는 예가 많아졌다.
세균을 이용할 경우에는 균체 추출물을 이용하는 경우와 비교해서 제조상 추출, 분리, 정제 등의 복잡한 처리가 필요치 않은 이점이 있으며, 인체에 유익한 유산균을 이용하게 되면 균체에 의한 부작용도 일어나지 않게 된다. 일본특공소 62-34727은 유산균의 항종양 효과에 대하여 언급하고 있으며, 그중 가장 우수한 균주인 락토바실러스 카제이 YIT-9018(L.casei YIT-9018)와의 비교시험결과, 본 발명에서 제조된 균주의 효과가 보다 좋은 결과를 나타냈으며, 또한 시판 용연균 제제보다도 좋은 결과를 얻을 수 있었다. 따라서 본 발명의 목적은 항종양 효과가 탁월한 신규의 항종양제를 제공하는 것이다.
본 발명에 사용하는 미생물로는 락토바실러스속에 속하는 미생물 특히 공지미생물로 락토바실러스 스포로제네스을 사용하며, 그 세균학적 특성은 후술하는 바와 같다.
(Ⅰ) 형태
(1) 세포의 형태 : 막대형, (2) 세포의 다형 : 없음, (3) 운동성 : 없음, (4) 포자 : 있음, (5) 그람염색 : 그람양성
(Ⅱ) 배양 매질의 증식 상태
(1) 한천 평판 및 사면 배양 매질
외형 : 원형, 크기 : 약 1㎜, 표면 : 매끈함, 색 : 유백색
(2) 액체 배양 매질
증식도 : 활발, 탁도 : 흐림, 침전 : 있음, 기체 : 있음.
(Ⅲ) 생리학적 특성
카탈라아제 : +, 산소에 대한 동향 : 호기성, 인돌생성 : -, 젖산생성 : +, 전분가수분해 : +, 포도당으로부터 가스생성 : -, 증식범위 : 온도 30∼55℃, PH 4.0∼8.0항종양 물질을 제조하는 과정은 다음과 같다.
Figure kpo00001
(1) 균의 배양
호기성균 배양에 대한 통상적인 방법으로 배양한다. 비프추출물, 여러가지 펩톤 등 같은 질소원, 이스트 추출물등 같은 비타민원, 염화나트륨 등 같은 무기염, 포도당, 유당같은 탄소원, 기타 버터 등을 첨가한 배양 매질에 수산화나트륨 수용액을 가해 pH를 4내지 8로, 바람직하게는 5.5내지 7.0으로 조절하고 균을 접종한후 호기성 조건하에서 35℃ 내지 55℃ 바람직하게는 42℃ 내지 47℃로 1내지 4일간 바람직하게는, 1내지 4일간 교반 배양시키거나 정치 배양시켜 생성을 억제시켜 간균 상태에서 배양을 중지시킨다. 특히 표1에 기술된 배양매질을 사용함이 바람직하다.
[표 1]
Figure kpo00002
(Ⅱ) 배양물로부터 균의 수득
전술한 바와 같이 상청액을 제거한다. 상청액의 제거 공정은 원심분리, 여과 보조제를 사용하는 여과법 등 통상적인 방법으로 수행할 수 있다. 또한 수득한 균은 생리 식염수 혹은 증류수로 3회 이상 세척한다.
(Ⅲ) 항종양 물질 제조
세척하여 얻은 균체를 증류수에 적당히 현탁시킨 후 100℃ 수욕열탕에서 60분정도 열처리하여 균을 사멸시킨 후 동결 건조시켜 항종양 물질을 제조한다.
다음에 실시예로서 더욱 상세히 본 발명을 설명한다.
[실시예 1]
증류수 리터당 5g의 프로테오즈 펩톤, 5ｇ의 이스트추출물과 포도당, 2ｇ의 인산수소칼륨, 0.5ｇ의 인산이 수소나트륨과 염화나트륨, 0.3ｇ의 황산망간, 각 0.01ｇ의 황산마그네슘, 황산철, 황산코발트, 황산동, 황산아연을 함유하는 배지를 500ml들이 삼각프라스크에 200ml씩 넣는다. 배지를 120℃에서 30분간 멸균한다. 배지를 냉각한 후 상술한 바와 같은 조성을 갖는 배지중에서 배양하여 미리 제조한 락토바실러스 스포로제네스 1L-101 전배양용액 10ml를 접종한후 45℃에서 2일간 진탕하면서(140회/분)배양한 후에 배양물을 수거하여 원심분리하여(8,000rpm, 10분)균체를 얻는다.
수득된 균체에 멸균 증류수를 가해 현탁시킨 후 원심분리하여(8,000rpm, 10분)세척한다. 상술한 세척과정을 3회 실시한 후 균체를 500ml의 증류수에 현탁시켜 100℃에서 60분간 수욕열탕시켜 균을 사멸시킨 다음 균현탁액을 동결건조시켰다(0.05 Torr이하).
[실시예 2]
육종-180세포(sarcoma-180 cel1)에 대한 함암작용.
ICR종 마우수(수컷 무게 20±2ｇ)의 겨드랑이에 1마리당 0.1m1(1×106개)의 육종 180세포를 피하에 이식한다.
다음에 수득한 항종양 물질과 용연균 제제를 멸균 생리식염수에 적당 농도로 현탁시키고 현탁액 0.1ml를 암세포를 이식한 다음날부터 5일동안 1일 1회씩 정맥주사 혹은 암이식부위에 피하주사한다. 대조군에는 종양물질 현탁액대신 멸균 생리 식염수를 전술한 방법으로 투여한다. 이에 대한 결과는 다음 표 2에 제시되어 있다. 실험결과는 다음 방정식에서 얻어지는 저지율로 계산된다.
Figure kpo00003
[표 2]
Figure kpo00004
[실시예 3]
면역 자극 작용
ICR종 마우스 (수컷무게 20±2ｇ)에 본 발명의 향종양물질을 생리 식염수에 현탁시켜 복강 투여한 3일후에 마크로파지를 분리시켜 미리 항체로 옵소나이즈시킨 양피 적혈구를 가해 5% CO2배양기중에서 37℃ 1시간 배양시키고, 식균되지 않은 적혈구를 염화암몬으로 용혈 제거시킨 후 현미경으로 관찰하여 마크로파지 100개당 식균된 양피 적혈구의 수를 측정한다. 이에 대한 결과는 표 3에 제시되어 있다.
[표 3]
Figure kpo00005
* 대조군은 항종양물질대신 생리식염수를 복강 투여하였음.
상기 실험사실로부터 본 발명의 항암제가 공지 항암제에 비하여 우수한 효능을 갖고 있음을 알 수 있다.
[실시예 4]
급성 독성
본 발명에 의해 얻어진 항종양 물질의 마우스(ICR종 수컷무게 20±2ｇ정맥투여)에 대한 LD50은 50㎎/㎏이상이다.
전술한 바의 약물학 실험에서 명백한 바와 같이, 본 발명의 수득 물질이 항종양제로 유용하고 다양한 암질환에 대한 효과를 다양한 제형으로 제형화할 수 있으며, 주사제로 사용할 경우 피하주사, 근육주사, 정맥주사로 투여할 수 있다.
본 발명의 항암제는 통상으로 약학적제제의 제조에 사용되는 부형제, 담체, 희석제, 보존제, 산화방지제, 현탁화제, 용제 등과 혼합하여 주사제, 정제, 캡슐제, 산제 및 기타 통상의 제형으로 제제화할 수 있다. 이들 보조제들은 이 분야에 통상의 지식을 가진자들에게는 잘 알려져 있다.
[실시예 5]
실시예 1에서 얻어진 균체 50㎎을 0.5%포도당 수용액에 현탁시켜 주사제를 제조한다.
[실시예 6]
실시예 1의 방법으로 제조된 균체 10ｇ을 탈지분유 90ｇ과 혼합한 후 경질캡슐에 500㎎씩 충진하여 캡술제로 제조한다.
[실시예 7]
실시예 1의 방법으로 제조된 균체 10ｇ을 락토스 45ｇ 및 옥수수전분 45ｇ과 혼합한 후 스테아린산 마그네슘 소량을 가하여 혼합한 다음 500㎎으로 타정하여 정제를 제조한다.
[실시예 8]
실시예 1의 방법으로 제조된 균체 20㎎을 바이알에 충진하고 멸균 생리식염수 1ml를 충진하여 현탁시켜 주사제를 제조한다.

Claims (2)

  1. 락토바실러스 스포로제네스 1L-101의 미생물을 배양하고 배양액으로부터 균체를 분리하여 세척하고 멸균시켜서 얻어진 항암제.
  2. 제1항에서, 미생물이 포자를 형성하기전 사멸된 간균체를 사용하는 항암제.
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