KR910016930A - 박테리아 벡터 - Google Patents
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 플라스미드 pUC838의 제한지도이다. 제2도는 플라스미드 pSC12의 제한 지도이다. 제3도는 플라스미드 pSC18의 제한지도이다.
Claims (42)
- a)플라스미드 pUCRS의 약 3.5kbp EcoRI/Sal I 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis)삽입체, 또는 이의 작용성 단편, 또는 b)a)의 삽입체 또는 이의 작용성 단편과 하이브리드화 되거나 이러한 하이브리드화 DNA 서열과 본래 작동적으로 연결된 프로모터 영역으로 함유하는 DNA 서열 또는 c)a) 또는 b)에 해당되고 시그날 펩티드를 암호화하는 DNA 서열의 축퇴성 서열, 또는 d)a), b) 또는 c)에 해당된 DNA 분자의 유도체 및/또는 e)(I)락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md 플라스미드 또는 (Ⅱ) 락토코커스 락티스 LL712의 5.2Md 플라스미드 또는 (Ⅲ)락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md 플라스미드 또는 5.2Md 플라스미드로서 동일한 비양존성 그룹 플라스미드의 복제기원을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, 플라스미드 pUCRS의 약 3.5kbp EcoRI/SalI 락토코커스 락티스 삽입체 또는 이의 작용성 단편을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, 작용성 단편이 프로모터, 시그날 및/또는 구조 작용을 보유하는 하이브리드 벡터.
- 제3항에 있어서, 작용성 단편이 MSP 프로모터 작용을 보유하는 하이브리드 벡터.
- 제4항에 있어서, 프로모터 작용을 보유한 작용성 단편이 전-MSP 서열의 출발코돈으로부터 MSP 유전자의 약-1500 위치내의 염기에 까지 뻗쳐있는 하이브리드 벡터.
- 제5항에 있어서, 프로모터 작용을 보유한 작용성 단편이 전-MSP 서열의 출발코돈으로부터 MSP 유전자의 약-100 내지 -1000 미만 위치내의 염기에 까지 뻗쳐있는 하이브리드 벡터.
- 제3항에 있어서, 작용성 단편이 MSP 시그날 서열의 작용을 보유하는 하이브리드 벡터.
- 제7항에 있어서, MSP 시그날 작용을 보유한 작용성 단편이 27개 아미노산 길이의 MSP 시그날 서열을 암호화하는 하이브리드 벡터.
- 제7항에 있어서, MSP 시그날 작용을 보유한 작용성 단편이 SEQ ID No. 1 DNA 서열의 약 411 위치내의 염기로부터 약 491위치에 까지 뻗쳐있는 하이브리드 벡터.
- 제3항에 있어서, 작용성 단편이 MSP 프로모터 작용 및 MSP 시그날 서열의 작용을 보유하는 하이브리드 벡터.
- 제10항에 있어서, MSP 프로모터 작용 및 MSP 시그날 서열의 작용 모두를 보유한 작용성 단편이 플라스미드 pUCRS의 약 3.5kbp EcoRI/SalI 락토코커스 락티스 삽입체의 EcoRI 절단말단과 SEQ ID No.1 DNA 서열의 1위치에 상응하는 염기 상부에서 상기 삽입체 내에 위치한 제1 Hind Ⅲ 제한 부위간의 특정염기로부터 대략 서열 SEQ ID No.1 DNA 서열의 491위치에 상응하는 염기에 까지 뻗쳐있는 단편 그룹중에서 선택된 하이브리드 벡터.
- 제3항에 있어서, 작용성 단편이 MSP 구조 유전자의 작용을 보유하는 하이브리드 벡터.
- 제12항에 있어서, MSP 구조 유전자의 작용을 보유한 작용성 단편이 SEQ ID No.1 DNA 서열의 약 492의 위치의 염기로부터 약 1793위치에 까지 뻗쳐있는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, 플라스미드 pUCRS의 약 3.5kbp EcoRI/SalI 락토코커스 락티스 삽입체 또는 이의 작용성 단편과 하이브리드화되거나, 이러한 하이브리드화 DNA 서열과 본래 작동적으로 연결된 프로모터 영역을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제14항에 있어서, MSP 유전자와 관련된 유전자 이외 작용성 단편 또는 MSP 유전자와 관련된 유전자의 프로모터 영역을 암호화하는 DNA 서열을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, MSP의 시그날 펩티드 또는 관련 펩티드를 암호화하고 유전자 코드의 의미에 따라 제1항의 a) 또는 b)에 따른 DNA 서열로 축퇴된 DNA 서열을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, 제1항의 a), b) 또는 c)에 따른 DNA 분자의 유도체를 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, (I)락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md플라스미드, 또는 (Ⅱ) 락토코커스 락티스 LL712의 5.2Md 플라스미드, 또는 (Ⅲ) 락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md플라스미드, 또는 5.2Md 플라스미드로서 동일한 비양존성 그룹 플라스미드의 복제 오리진을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제18항에 있어서, 락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md플라스미드의 약 1.8Kbp길이 NdeI/SphI 단편상에 위치한 복제 오리진을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제18항에 있어서, 락토코커스 락티스 LL712의 5.2Md 플라스미드의 1.0kbp NdeI/HindIII 단편상에 위치한 복제 오리진을 함유하는 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, pSC12, pSC12△P, pSC12△N, pSC12△NP, pSC18, pSC18△P, or pSC18△N, pSC12HIR, pSC12HIR-1, pSC12HIRTerm, pUCRS, M13mp18RS, M13mp19H, pVAHIR-1 및 pVAHIR로 이루어진 벡터 그룹중에서 선택된 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, pSC12HIRTerm인 하이브리드 벡터.
- 제1항에 있어서, MSP 시그날 펩티드 암호화 DNA 서열 및 MSP 프로모터 또는 이종 프로모터에 적당한 판독 프레임중 작동적으로 연결된 상동 또는 이중 구조유전자를 함유하는 하이브리드 벡터.
- a)플라스미드 pUCRS의 약 3.5kbp EcoRI/Sal I 락토코커스 락티스 삽입체 또는 이의 작용성 단편이거나, b)a)의 삽입체 또는 이의 작용성 단편과 하이브리드화 되거나, 이러한 하이브리드화 DNA 서열과 본래 작동적으로 연결된 프로모터 영역을 함유하거나, c)a) 또는 b)에 해당되고 시그날 펩티드를 암호화하는 DNA서열의 축퇴성 서열이거나, d)a),b) 또는 c)에 해당되는 DNA 분자의 유도체이고/이거나, e)(I)락토코커스 락티스 LL712의 약 2.5Md 플라스미드 (Ⅱ) 락토코커스 락티스 LL712의 5.2Md 플라스미드 또는 (Ⅲ) 락토코커스 락티스 LL712의 2.5Md 플라스미드 또는 5.2Md 플라스미드로서 동일한 비양존성 그룹의 플라스미드의 복제 오리진을 함유하는 DNA 분자.
- A) 하이브리드 벡터 또는 DNA 분자를 함유하는 숙주를 배양하고 배양된 숙주로부터 이러한 하이브리드 벡터 또는 DNA 분자를 분리해내거나, B) 하이브리드 벡터 또는 DNA 분자를 시험관내 합성에 의해 제조함을 특징으로 하여, 제1항에 따른 하이브리드 벡터 또는 제24항에 따른 DNA 분자를 제조하는 방법.
- 제1항에 있어서, 따른 하이브리드 벡터로 형질전환된 숙주.
- 제26항에 있어서, 플라스미드 pUCRS, pSC12, pSC12△P, pSC12△N, pSC12△NP, pSC18, pSC18△N, pSC18△P, pSC12HIR, pSC12HIR-1, 또는 pSC12HIRTerm으로 형질전환된 이.콜라이 균주 TGI, C600 및 HB101 및 pUCRS, pSC12, pSC12△P, pSC12△N, pSC12△NP, pSC18, pSC18△N, pSC18△P, pVAHIR, pVAHIR-1, pSC12HIR, pSC12HIR-1, pSC12HIRTerm로 형질전환된 락토코커스 크레모리스(L.cremoris), 플라스미드-비함유 락토코커스 및 바실러스(Bacillus)균주로 이루어진 형질전환된 숙주 그룹중에서 선택된 형질전환된 숙주.
- 제26항에 있어서, pUCRS로 형질전환된 이.콜라이 TG1, pUCRS, pSC12HIRTerm, pSC12 또는 pSC18로 형질전환된 락토코커스 락티스 및 pVAHIR-1 또는 pVAHIR로 형질전환된 바실러스 투린지엔시 △(B.thuringiensis)로 이루어진 형질전환된 숙주 그룹중에서 선택된 형질전환된 숙주.
- (a)숙주를 형질전환 조건하에서 임의로는 선별 마아커 유전자와 함께, 제1항에 따른 하이브리드 벡터로 철하고, (b) 형질전환체를 선별하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여, 제26항에 따른 형질전환된 숙주를 제조하는 방법.
- (a) 상동 또는 상이 구조유전자를 MSP 시그날 펩티드-암호화 DNA 서열과 적당한 판독 프레임내에서 융합시키고, (b) 적합한 숙주를 (a)에서 제조한 융합 유전자를 함유하는 하이브리드 벡터로 형질전환시키며, (c) 융합유전자에 의해 암호화된 폴리펩티드를 숙주세포로부터 분리시킨 다음, 필요할 경우 (d) 통상적인 방법에 따라 상동액으로부터 폴리펩티드를 분리해내는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여, 폴리펩티드를 제조하는 방법.
- 제30항에 있어서, 락토코커스 종 및 바실러스 종으로 이루어진 그룹중에서 선택된 숙주가 사용되는 방법.
- 제30항에 있어서, 배양배지에 발현 단백질을 분해하는 프로테아제를 분비하지 않는 세균 숙주가 사용되는 방법.
- 제30항에 있어서, 디설파토히루딘이 생성되는 방법.
- 제33항에 있어서, pSC12HIR, pSC12HIR-1 또는 pSC12HIRTerm로 형질전환된 락토코커스 락티스 LM0230 세포가 사용되는 방법.
- 제33항에 있어서, pSC12HIRTerm으로 형질전환된 락토코커스 락티스 LM0230 세포가 사용되는 방법.
- 제33항에 있어서, pVAHIR 또는 pVAHIR-1으로 형질전환된 바실러스 투린지엔시스 세포가 사용되는 방법.
- 제30항에 있어서, (a)형질전환된 세포를 영양배지로부터 배양물의 대수기 또는 정체기상태에서 수집하고, (b)이들을 소용적의 새로운 영양배지 또는 적합한 완충용액에 재현탁시킨 다음, (c)이들을 상충액으로부터 목적생성물을 분리하기 전에 추가 인큐베이트하는 방법.
- 제37항에 있어서, 형질전환된 세포를 원 배양 용적의 약 1 내지 20%이하로 재현탁시키는 방법.
- 제38항에 있어서, pSC12HIR로 형질전환된 락토코커스 락티스 LM0230 세포를 새로운 영양배지의 약 1/10용적으로 재현탁시키고 약 30℃에서 약 30분간 배양시키는 방법.
- 제30항에 있어서, MSP가 생성된 방법.
- 순수한 형태의 MSP.
- (a)락토코커스 락티스 LM0230 상충액으로부터의 단백질을 트리클로로아세트산으로 침전시키고, (b)침전된 단백질을 SDS 폴리아클리아마이드 겔 상에서 전기영동하며, (c)영역을 주 단백질 밴드로 절단한 다음 (d)겔로부터 MSP를 전기용출시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여, 순수한 MSP를 제조하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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